DE102009047562A1 - Peptidverbindungen zum Einfangen oder Inhibieren von aviärem Influenzavirus und Verwendung derselben - Google Patents

Peptidverbindungen zum Einfangen oder Inhibieren von aviärem Influenzavirus und Verwendung derselben Download PDF

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Abstract

Hierin offenbart sind Peptide, insbesondere Dipeptidverbindungen, und die Anwendung derselben zum Nachweis oder zur Inhibierung des AI-Virus. Die Peptidverbindungen sind stabiler und leichter zu synthetisieren und zu lagern als Antikörper. Die Peptidverbindungen, die starke Bindungskräfte für das H5-Protein des AI-Virus aufweisen, sind ferner als Einfangmittel oder Inhibitoren des AI-Virus geeignet.

Description

  • VERWANDTE ANMELDUNGEN
  • Die vorliegende Anmeldung beansprucht die Priorität der koreanischen Patentanmeldung mit der fortlaufenden Nummer 10-2008-0124130 , eingereicht am 8. Dezember 2008 und der koreanischen Patentanmeldung mit der fortlaufenden Nummer 10-2009-095680 , eingereicht am 8. Oktober 2009, die in vollem Umfang durch Bezugnahme hierin aufgenommen sind.
  • HINTERGRUND DER ERFINDUNG
  • 1. Gebiet der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung betrifft eine Peptidverbindung zum Einfangen oder Inhibieren von aviärem Influenzavirus und die Verwendung derselben.
  • 2. Beschreibung des Standes der Technik
  • Aviäres Influenza(nachfolgend als ”AI” bezeichnet)-Virus hat in letzter Zeit der Hausgeflügelindustrie infolge des zugenommenen Ausmaßes von Schäden und der erhöhten Anzahl von Ausbrüchen großen Schaden zugefügt. Obwohl in Korea bislang über keine Fälle einer humanen AI-Infektion berichtet wurde, kann diese zu einem verheerenden Schaden führen und hat in der Tat zu 93 Infektionsfällen und 50~60% der Mortalitätsrate von hochpathogenem H5N1 in Vietnam geführt. Aus diesem Grund schenken internationale Organisationen, wie die WHO, der AI große Aufmerksamkeit.
  • Herkömmliche Techniken, welche das AI-Virus betreffen, umfassen einen ein AI-Antigen tragenden rekombinanten Adenovirusvektor, eine Immunzusammensetzung, welche den rekombinanten Vektor und Adenovirus umfasst, und eine Immunisierung gegen AI oder eine epidemische Influenza durch Inokulieren mit der Immunzusammensetzung, etc. Zusätzlich gibt es Verfahren zum Herstellen eines peptidbasierten Antiinfluenzavakzins gegen Influenza A und B, und PDMS-basierte antivirale Frühwarnsysteme zum Nachweisen von hochpathogener AI. Diese Techniken beziehen sich nur auf pharmazeutische Verwendungen, wie ein Vakzin, ohne dass Instruktionen bezüglich der Verwendungen davon bei der Entwicklung von AI-Virus einfangenden Materialien oder Biosensoren bereitgestellt werden.
  • Obwohl bereits mehrere Therapeutika (z. B. Tamiflu) oder Vakzine gegen AI entwickelt wurden, gibt es keine besonderen Präventionsmaßnahmen bei einer AI-Infektion von Geflügel, mit Ausnahme des Schließens einer Region, in der ein Ausbruch erfolgte, oder des Schlachtens von infiziertem Geflügel. Folglich ist gegenwärtig die beste Lösung für AI-Virusprobleme, eine AI-Virusinfektion so früh wie möglich nachzuweisen, um schnell Gegenmaßnahmen zu ergreifen.
  • Beispiele für grundlegende Techniken, die mit dem Nachweis oder der Messung von AI verbunden sind, umfassen 1) ein einfaches Diagnostik-Kit, 2) Ei-Inokulation und 3) RT-PCR (Echtzeit-Polymerasekettenreaktion). Was das einfache Diagnostik-Kit anbelangt, ist die Herstellung eines spezifischen Antikörpers eine grundlegende Technik. Im Falle der Ei-Inokulation oder der RT-PCR, macht die Proliferation spezifischer Gene des AI-Virus die grundlegende Technik aus. Die Entwicklung von Liganden, die spezifisch für das AI-Virus sind, konzentrierte sich bislang auf Virusinhibitoren (Therapeutika), während die meisten Biosensoren auf Antikörper gerichtet sind. Einfache Diagnostik-Kits, die üblicherweise auf ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) beruhen, sind für den Gebrauch durch durchschnittliche Viehbauern zu teuer. Ferner ist es bei Antikörpern, welche bei einfachen Diagnostik-Kits üblicherweise eine Schlüsselrolle spielen, erforderlich, dass sehr komplizierte Lagerbedingungen oder Einsatzbedingungen eingehalten werden. Des Weiteren neigen auch die Antikörper selbst zur Denaturierung, wodurch der Verwendung der einfachen Diagnostik-Kits im praktischen Einsatz Einschränkungen auferlegt werden, wobei dies üblicherweise Bedingungen sind, die härter sind als Laborbedingungen.
  • ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
  • Demgemäß wurde die vorliegende Erfindung unter Berüchsichtigung der obigen im Stand der Technik auftretenden Probleme gemacht und eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht darin, eine Einfangverbindung bereitzustellen, welche anstelle von Antikörpern verwendet werden kann, um ein AI-Virus nachzuweisen, welche, verglichen mit Antikörpern, wirtschaftlich vorteilhaft ist und für einen langen Zeitraum gelagert werden kann.
  • Es ist eine andere Aufgabe der vorliegenden Erfindung, eine Inhibierungsverbindung bereitzustellen, die an Proteine des AI-Virus stark binden kann, um die Aktivität des AI-Virus zu supprimieren.
  • Es ist eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Mittel zum Einfangen oder Inhibieren eines AI-Virus bereitzustellen, umfassend die Verbindung als Wirkstoff.
  • Es ist ferner eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren zum Nachweisen des AI-Virus bereitzustellen, umfassend die Verwendung der Einfangverbindung.
  • Es ist ferner eine andere Aufgabe der vorliegenden Erfindung, einen Biosensor zum Diagnostizieren einer AI-Infektion bereitzustellen, welcher die Einfangverbindung als Wirkstoff umfasst.
  • Gemäß einem Aspekt davon, stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung zum Einfangen oder Inhibieren eines AI-Virus bereit, die durch die folgende chemische Formel 1 dargestellt ist: [Chemische Formel 1]
    Figure 00040001
    wobei
    X und X' unabhängig voneinander H; eine aus der Gruppe bestehend aus Biotin, Streptavidin und Avidin ausgewählte funktionelle Gruppe; oder ein funktioneller Anteil, bestehend aus einer aus der Gruppe bestehend aus Biotin, Streptavidin und Avidin ausgewählten funktionellen Gruppe und einem Linker, welcher die funktionelle Gruppe mit dem Grundgerüst der Verbindung der chemischen Formel 1 verbindet, sind;
    m eine ganze Zahl von 2~10 ist;
    n 0 oder 1 ist; und
    R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus -H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CHCH3CH2CH3, -CH2OH, -CHOHCH3, -CH2SH, -(CH2)2SCH3, -CH2COOH, -CH2CONH2, -(CH2)2COOH, -(CH2)2CONH2, -(CH2)3CH2NH2, -(CH2)3NHCNHNH2,
    Figure 00050001
    -CH2CH2CH2- (Prolin) und -CH2SSCH2- (Cystin).
  • Gemäß einem anderen Aspekt davon, stellt die vorliegende Erfindung ein Mittel zum Einfangen und Inhibieren eines AI-Virus bereit, umfassend die Verbindung der chemischen Formel 1.
  • Gemäß einem weiteren Aspekt davon, stellt die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Nachweisen eines AI-Virus bereit, umfassend das Inkontaktbringen der Verbindung der chemischen Formel 1 mit einer zu untersuchenden Probe.
  • Gemäß einem weiteren Aspekt davon, stellt die vorliegende Erfindung einen Biosensor bereit, umfassend die Verbindung der chemischen Formel 1 als Einfangmittel für das AI-Virus.
  • KURZBESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
  • Die obigen und anderen Aufgaben, Merkmale und andere Vorteile der vorliegenden Erfindung werden besser verständlich anhand der folgenden ausführlichen Beschreibung in Verbindung mit den begleitenden Zeichnungen, in denen:
  • 1 eine Ansicht ist, welche eine Molekülstruktur einer Verbindung zum Einfangen oder Inhibieren eines AI-Virus gemäß der vorliegenden Erfindung zeigt;
  • 2 eine schematische Darstellung ist, die ein Streptavidin-beschichtetes Kügelchen zeigt, wobei die Oberfläche desselben modifiziert ist durch Konjugation mit einer Verbindung zum Einfangen oder Inhibieren eines AI-Virus gemäß der vorliegenden Erfindung;
  • 3 eine schematische Darstellung ist, die auf schrittweise Art die Herstellung eines Biosensors unter Verwendung einer Verbindung zum Einfangen und Inhibieren eines AI-Virus gemäß der vorliegenden Erfindung zeigt;
  • 4 die Affinitäten von 29 in Beispiel 1 ausgewählten Aminosäuredimeren für das H5-Protein des AI-Virus bezogen auf die mittels Flexx-p (BiosolveIT, Deutschland) gemessene freie Energie zeigt;
  • 5 eine Aufnahme ist, welche die Ergebnisse von 4 zeigt;
  • 6A und 6B die Ergebnisse des Vergleichsversuchs der Bindungseigenschaften mit einem Antikörper, der kommerziell erhältlich ist [Ab: Antikörper, NR1: Sialinsäure, NR2: 3- Sialinlactose (engl. 3-silaiic-lactose), NR3: 6'-Sialinlactose (engl. 6'-sialic lactose), SM1: VA (Aminosäuredimer als Einbuchstabencode), SM2: QH, SM3: IL];
  • 7A und 7B die Ergebnisse eines Versuchs unter Verwendung von echtem Hühnerblut zeigen (Ag: Probe des roten Hühnerserums mit Antigen, Konzentration: 6,7 pM, SE: Probe von rotem Hühnerserum);
  • 8 eine graphische Darstellung ist, welche die in Beispiel 2 erhaltenen Analyseergebnisse zeigt.
  • BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORMEN
  • Gemäß einem Aspekt davon, betrifft die vorliegende Erfindung eine Verbindung zum Einfangen oder Inhibieren eines AI-Virus, die durch die folgende chemische Formel 1 dargestellt ist: [Chemische Formel 1]
    Figure 00070001
    wobei
    X und X' unabhängig voneinander H; eine aus der Gruppe bestehend aus Biotin, Streptavidin und Avidin ausgewählte funktionelle Gruppe; oder ein funktioneller Anteil, bestehend aus einer aus der Gruppe bestehend aus Biotin, Streptavidin und Avidin ausgewählten funktionellen Gruppe und einem Linker, welcher die funktionelle Gruppe mit dem Grundgerüst der Verbindung der chemischen Formel 1 verbindet, sind;
    m eine ganze Zahl von 2~10 ist;
    n 0 oder 1 ist; und
    R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus -H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CHCH3CH2CH3, -CH2OH, -CHOHCH3, -CH2SH, -(CH2)2SCH3, -CH2COOH, -CH2CONH2, -(CH2)2COOH, -(CH2)2CONH2, -(CH2)3CH2NH2, -(CH2)3NHCNHNH2,
    Figure 00080001
    -CH2CH2CH2- (Prolin) und -CH2SSCH2- (Cystin).
  • Beispiele für in der vorliegenden Erfindung nützliche Linker umfassen Polyethylenglycole (PEGs), DNA, ein Alkylen von C1C2O, 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid (EDC), Carbonyldiimidazol (CDI), Sulfo-NHS (Sulfosuccinimidyl), Isocyanatderivate, Acylazidderivate, N-Hydroxysuccinimid (NHS), Sulfonylchloridderivate, Aldehydderivate, Epoxyderivate, etc.
  • Genauer gesagt kann der für X' geeignete Linker 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid (EDC), Carbonyldiimidazol (CDI) und Sulfo-NHS (Sulfosuccinimidyl) umfassen, wobei Isocyanatderivate, die Isothioharnstoffbindungen bilden können, Acylazidderivate, die Amidbindungen bilden können, N-Hydroxysuccinimid (NHS), Sulfonylchloridderivate, die Sulfonamidbindungen bilden können, oder Aldehydderivate oder Epoxyderiva te, die sekundäre Amidbindungen bilden können, als Linker für X verwendet werden können.
  • Die Verbindung der chemischen Formel 1 kann strukturell verändert werden durch Modifizieren der Amingruppe des Linkers oder des Peptids mit einem arylierenden Agens, einem Imidoester, EDC, einem Anhydrid, einem Fluorphenylester, etc.
  • Die durch die chemische Formel 1 dargestellte Verbindung bindet an das H5-Protein des AI-Virus, um das AI-Virus einzufangen oder zu inhibieren.
  • Vorzugsweise kann die Verbindung zum Einfangen der Epitope von H5N1 HA oder zum Inhibieren des AI-Virus, die durch die chemische Formel 1 dargestellt ist, auf einer Dipeptidverbindung (m = 2) beruhen, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus ALA-ALA, ARG-ARG, ARG-ASN, ASN-TYR, CYS-VAL, GLN-HIS, GLN-ILE, GLU-HIS, GLU-LYS, GLY-GLU, ILE-THR, LEU-ALA, LYS-LYS, MET-ALA, MET-ASP, PHE-ASN, PRO-ALA, SER-ARG, SER-CYS, SER-LYS, SER-VAL, THR-GLN, THR-GLU, THR-LYS, TRP-ARG, TYR-ALA, VAL-ALA, VAL-HIS und GLU-HIS.
  • Insbesondere kann die Verbindung zum Einfangen der Epitope von H5N1 HA oder zum Inhibieren des AI-Virus, die durch die chemische Formel 1 dargestellt ist, auf einer Dipeptidverbindung beruhen, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus GLN-HIS, TYR-ALA, ALA-ALA, CYS-VAL, SER-LYS, VAL-ALA, GLU-HIS, LEU-ALA, ARG-ARG, SER-VAL, TRP-ARG, ASN-TYR, SER-CYS; vorzugsweise GLN-HIS oder TYR-ALA, wenn das Epitop die Sequenz RNSPQRERRRKKRG aufweist.
  • Insbesondere kann die Verbindung zum Einfangen der Epitope von H5N1 HA oder zum Inhibieren des AI-Virus, die durch die chemische Formel 1 dargestellt ist, auf einer Dipeptidverbindung beruhen, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus ILE-THR, ASN-TYR, TYR-ALA, THR-LYS, TRP-ARG, GLU-LYS, ALA-ALA, PHE-ASN, GLN-ILE, LYS-LYS, SER-CYS, SER-LYS, LEU-ALA; vorzugsweise ILE-THR oder ASN-TYR, wenn das Epitop die Sequenz CYPGDFNDYEELKHL aufweist.
  • Die durch die chemische Formel 1 dargestellte Verbindung bindet an das H5-Protein des AI-Virus, um das AI-Virus einzufangen oder zu inhibieren.
  • In der Verbindung der chemischen Formel 1 ist m vorzugsweise eine ganze Zahl von 2~5, bevorzugter eine ganze Zahl von 2 oder 3, und besonders bevorzugt eine ganze Zahl von 2.
  • Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein AI-Virus einfangendes oder inhibierendes Mittel, umfassend die Verbindung der chemischen Formel 1 als Wirkstoff.
  • Das AI-Virus einfangende oder inhibierende Mittel kann ferner einen pharmazeutisch verträglichen Träger umfassen. Wie hierin verwendet, soll der Ausdruck ”pharmazeutisch verträglicher Träger” ein Medium bezeichnen, das zur Verabreichung geeignet ist, wie beispielsweise Lösungsmittel, Dispersionsmittel, isotonische Lösungen, Absorptionsverzögerungsmittel, etc. Die Medien, die für die Verabreichung von medizinischen Wirkstoffen geeignet sind, sind auf dem Fachgebiet gut bekannt. Hilfswirkstoffe können in dem Inhibitor enthalten sein.
  • Die vorliegende Erfindung betrifft auch einen Komplex zum Einfangen des AI-Virus, umfassend ein AI-Virus einfangendes oder inhibierendes Mittel, das die Verbindung der chemischen Formel 1 umfasst; einen Träger; und ein Immobilisierungsmit tel zum Fixieren des AI-Virus einfangenden oder inhibierenden Mittels auf dem Träger.
  • Als Träger können ein Substrat, wie ein Silicium-Wafer, Metall, Glas, Quarz, etc., oder magnetische Kügelchen in Nano- oder Mikrogröße verwendet werden. Zusätzlich kann ein Kohlenstoffnanoröhrchen als Träger verwendbar sein.
  • Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein Verfahren zum Nachweisen des AI-Virus, umfassend das Inkontaktbringen der Verbindung der chemischen Formel 1 mit einer Probe aus einem Subjekt.
  • In dem Verfahren umfasst der Schritt des Inkontaktbringens das Fixieren entweder der Verbindung der chemischen Formel 1 oder der Probe auf einem Substrat und das Inkontaktbringen der Verbindung der chemischen Formel 1 mit der Probe, wenn diese auf dem Substrat fixiert ist, und umgekehrt.
  • In diesem Fall kann der Schritt des Inkontaktbringens ferner das Zugeben eines mit einer Markierung konjugierten sekundären Einfangmaterials zu dem Substrat umfassen, wenn die Probe in Kontakt mit der Verbindung der chemischen Formel 1 gebracht wird, nachdem die Verbindung der chemischen Formel 1 auf dem Substrat fixiert worden ist. Dieses Verfahren ist eine Abänderung des schematisch in 3 dargestellten Sandwich-Immunoassays.
  • Solange es im Fachgebiet typischerweise üblich ist, kann jedes Substrat ohne jegliche Einschränkung verwendet werden. Beispiele umfassen einen Silicium-Wafer, Metall, Glas, Quarz, etc., sind jedoch nicht darauf beschränkt. In der vorliegenden Erfindung soll das sekundäre Einfangmaterial ein Materi al, wie einen polyklonalen Antikörper, bedeuten, das an das durch die Verbindung der chemischen Formel 1 eingefangene AI-Virus binden kann.
  • In dem Verfahren kann der Schritt des Inkontaktbringens das Fixieren der Verbindung der chemischen Formel 1 auf Nano- oder Mikrokügelchen und das Inkontaktbringen der Probe mit der fixierten Verbindung der chemischen Formel 1 umfassen.
  • In dem Verfahren kann der Schritt des Inkontaktbringens ferner das Zugeben eines mit einer Markierung konjugierten sekundären Einfangmaterials zu den Nano- oder Mikrokügelchen, nachdem die Probe in Kontakt mit der fixierten Verbindung der chemischen Formel 1 gebracht worden ist, umfassen.
  • Die Nano- oder Mikrokügelchen unterliegen keinen besonderen Einschränkungen, solange diese in auf dem Fachgebiet üblicher Weise verwendet werden. Bevorzugt sind magnetische Partikel oder Kohlenstoffnanoröhrchen.
  • Zur ausführlicheren Beschreibung der vorliegenden Erfindung soll nun auf die Zeichnungen Bezug genommen werden.
  • Bezugnehmend auf 1 ist eine Verbindung, welche ein Beispiel der chemischen Formel 1 ist und für das Einfangen oder das Inhibieren des AI-Virus verwendet wird, zusammen mit der analysierten Molekülstruktur derselben gezeigt. Wie aus der Molekülstruktur ersichtlich ist, besteht die Verbindung aus AsnArg als Einfangteil(-NH2AA), PEG als Linker-Teil und Biotin als Immobilisierungsteil. Es wurde gefunden, dass das Aminosäuredimer AsnArg die höchste Affinität für das AI-Virus aufweist, wenn theoretisch und durch einen Af finitätsassay gemessen. Anstelle von PEG und Biotin können andere Strukturen als Linker-Teil bzw. Immobilisierungsteil verwendet werden. Beispielsweise können Alkylstrukturen mit unterschiedlichen Längen oder DNA den Linker-Teil ausmachen, während eine bestimmte funktionelle Gruppe, wie -NH2, -COOH oder -OH, für den Immobilisierungsteil zuständig sein kann.
  • Bezugnehmend auf 2 ist ein Streptavidin-beschichtetes Kügelchen, modifiziert mit einem Biotin-konjugierten Aminosäuredimer, das zum Trennen des H5-Antigens eines AI-Virus aus einer Probe verwendet wird, gezeigt.
  • In der 3 ist die schrittweise Herstellung eines Biosensors mit einer Verbindung zum Einfangen oder Inhibieren eines AI-Virus gemäß der vorliegenden Erfindung dargestellt.
  • Bezugnehmend auf 4 und 5, zeigt 4 die Affinitäten von 29 in Beispiel 1 ausgewählten Aminosäuredimeren für das H5-Protein des AI-Virus bezogen auf die mittels Flexx-p (BiosolveIT, Deutschland) gemessene freie Energie. 5 ist eine Aufnahme, welche die Ergebnisse von 4 zeigt. Wie aus den Daten der Tabelle der 4 ersichtlich, sind die aus den 29 ausgewählten Aminosäuredimeren hergestellten Einfangverbindungen unterschiedlich in ihren Bindungseigenschaften, was darauf hinweist, dass die Peptide, obwohl sie eine sehr kurze Länge aufweisen, unterschiedliche Bindungseigenschaften bezüglich Antigenen zeigen.
  • Bezugnehmend auf 6A und 6B, zeigen 6A und 6B die Ergebnisse eines Vergleichsversuchs bezüglich der Bindungseigenschaften mit einem Antikörper, der kommerziell erhältlich ist. In diesem Versuch wurden zwei Typen von NT und IT als Antikörper verwendet und 3 Linien in der Mitte derselben (welche nicht aktiv sind) sind Sialinsäure (NR1), 3-Sialinlactose (NR2; engl. 3-silaiic-lactose) und 6'-Sialinlactose (NR3; engl. 6'-sialic lactose), die als Rezeptor des in der Natur vorkommenden H5-Proteins bekannt sind. Diese experimentellen Ergebnisse zeigen, dass die neu entwickelten Aminosäuredimere im Vergleich zu dem in der Natur vorkommenden Rezeptor (von dem allgemein bekannt ist, dass er bei der AI-Virusinfiltration der Zelloberfläche beteiligt ist; J. Gen. Virol., 2004, 85: 100 1–5) starke Bindungseigenschaften aufweisen.
  • Bezugnehmend auf 7A und 7B, zeigen 7A und 7B die experimentellen Ergebnisse unter Verwendung von echtem Hühnerblut. In dem Versuch, der QH (Einbuchstabencode) als Aminosäuredimer als Einfangmaterial verwendet, reagierte das Blut von gesunden Hühnern (SE: Probe von rotem Hühnerserum) nicht mit QH, die AI-Virus enthaltende Probe (Ag: Probe von rotem Hühnerserum mit Antigen, Konzentration: 6,7 pM) reagierte jedoch mit QH. Anhand dieses Ergebnisses haben wir gefunden, dass die Aminosäuredimere der vorliegenden Erfindung selektiv mit dem Antigen des AI-Virus reagieren.
  • Ein besseres Verständnis der vorliegenden Erfindung wird durch die folgenden Beispiele erreicht, welche zur Veranschaulichung wiedergegeben sind, die vorliegende Erfindung jedoch nicht einschränken sollen.
  • BEISPIEL 1: Herstellung von Dipeptiden
  • Zur Verwendung beim Einfangen von AI-Virus-Proteinen oder -Peptiden wurde die erfindungsgemäße Verbindung durch die folgenden Schritte hergestellt:
  • Schritt 1: Strukturanalyse von AI-Virus-Zielproteinen oder -Zielpeptiden;
  • Schritt 2: Basierend auf der analysierten Struktur wurde Computerchemie verwendet, um eine Vielzahl von Liganden zu modellieren, die voraussichtlich an die Zielproteine oder -peptide binden, und um thermodynamisch stabile Verbindungen, nach dem virtuellen Binden der Liganden an die Zielproteine oder -peptide, vorzuschlagen;
  • Schritt 3: Aus den Vorschlägen des Schritts 2 werden geeignete Verbindungen ausgewählt und synthetisiert mit Ausnahme von Verbindungen, die in der Praxis nicht synthetisiert werden können oder bereits bekannt sind;
  • Schritt 4: Das Binden der synthetischen Verbindungen des Schritts 3 an AI-Virus-Proteine wird untersucht und sie werden derart remodelliert, dass sie für Sensoren einsetzbar sind; und
  • Schritt 5: Das Binden der remodellierten Verbindungen an die AI-Virus-Proteine (3425P und 3427P, kommerziell erhältlich von ProSci, Inc., U.S.A.) wird untersucht, um zu bestimmen, ob diese als Nachweismittel des AI-Virus verwendet werden können.
  • In Schritt 1 wird ein Peptidteil anstelle des gesamten Proteins der kommerziell erhältlichen Peptide als Antigen verwendet. Ferner nehmen die Fälle zu, in welchen ein Peptidteil als Antikörper verwendet wird.
  • In Schritt 2 wurden die Bindungseigenschaften verschiedener mit einem Computer virtuell synthetisierter Verbindungen bestätigt und in Schritt 3 wurden die Peptide, die in der Praxis synthetisierbar sind und mit geringen Kosten erhältlich sind, ausgewählt und synthetisiert.
  • In dem Remodellieren des Schritts 4 können der Linker und die Ankergruppe, die beide verwendet werden, um die entworfenen Dipeptide auf einen Sensor aufzubringen, die Bindungseigenschaften der entworfenen Peptide verändern. Die Bindungseigenschaften der remodellierten Verbindungen wurden deshalb in Schritt 5 unter Verwendung von geeigneten AI-Virus-Antigenen analysiert.
  • Da das AI-Virus-Protein wegen seiner Stabilität und rechtlicher Aspekte nicht verwendet werden kann, wurden von einem weltweit autorisierten Unternehmen erhältliche antigene Materialien, wie diejenigen, die als ProSci 3425P und 3427P bezeichnet sind und durch ProSci, Inc., U.S.A. angeboten werden, untersucht, um die Bindungseigenschaften der Einfangverbindungen zu untersuchen.
  • In dem Bindungsversuch des Schritts 5 ist es sehr wichtig, diejenigen remodellierten Verbindungen aufzufinden, die eine solche Selektivität zeigen, dass sie mit Zielantigenen reagieren, jedoch nicht an andere im Körper vorkommende Proteine binden. In diesem Beispiel wurden die Bindungseigenschaften der remodellierten Verbindungen folglich nicht nur gegenüber Zielantigenen sondern auch gegenüber dem roten Serum von gesunden Hühnern untersucht.
  • Die neuen Verbindungen zum Einfangen oder Inhibieren des AI-Virus, bereitgestellt durch das Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung, sind Peptidylhüllmaterialien mit niedrigen Molekulargewichten, die auf zwei bis zehn Aminosäuren, vorzugsweise zwei bis fünf, bevorzugter zwei oder drei und besonders bevorzugt zwei Aminosäuren, beruhen.
  • 1. Auswahl von Aminosäuredimeren
    • 1) Es wurde Bezug genommen auf die RCSB-Proteindatenbankdaten (PDB ID NO 1JSN, 1JSM, 3GBM, 3FKU, 2I8X, 2FKO, etc.) betreffend die Strukturen von Zielproteinen (Antigenen) und die Sequenzen von in der Praxis verwendeten Antigenen wurden bei ProSci, U.S.A. bestellt.
    • 2) Wassermoleküle wurden aus den erhaltenen Proteinen unter Verwendung eines als Vega ZZ bezeichneten Freeware-Programms (http://nova.colombo58.unimi.it) entfernt und die wasserfreien Zielproteine wurden einer virtuellen Assoziierung mit Wasserstoffmolekülen unterzogen. Einige Wassermoleküle wurden jedoch aufgrund ihrer wichtigen Rolle, wie beispielsweise bei der Stabilisierung der Ligand-Rezeptor-Wechselwirkung, nicht aus den Modellen entfernt.
    • 3) Die Affinität zwischen den bekannten 400 Aminosäuredimeren und dem H5-Protein wurde berechnet (je geringer der berechnete Wert ist, desto stabiler ist die Bindung zwischen dem Aminosäuredimer und dem H5-Protein, da es sich dabei um die freie Energie handelt).
    • 4) Ausgezeichnete virtuelle Bindungseigenschaften führten zur Auswahl von 36 unter den 400 Aminosäuredimeren und diese wurden mit einer Reinheit von 95 oder höher von SeouLin Bioscience, Inc., Korea (synthetisiert in Thermo Science) und/oder Peptorn, Inc., Korea bestellt.
  • 2. Herstellung von Einfangverbindungen
    • 1) Ausgewählte Aminosäuredimere wurden auf 1,0 mM in PBS verdünnt.
    • 2) Jede der Aminosäuredimerlösungen (1,0 mM) wurde mit einem Volumen einer 1,0 mM NHS-Sulfo-Biotin-Lösung (PBS) gemischt, um 0,5 mM Aminosäuredimerlösungen herzustellen.
    • 3) Die 0,5 mM Aminosäuredimerlösungen wurden für 30 min bei 30°C in einem Eppendorf-Schüttelreaktor inkubiert.
    • 4) Die 0,5 mM Lösungen wurden erneut 50-fach verdünnt, das heißt auf 10 μM, was festgelegt wurde angesichts der Tatsache, dass die von ProSci gelieferten Antikörper ungefähr 6,7 μM waren.
    • 5) Die so hergestellten Lösungen wurden bis zur Verwendung ohne Ionenentfernung in einem Kühlschrank gelagert.
  • Nachfolgend ist ”Einfangverbindungen” eine Bezeichnung, die verwendet wird, um Aminosäuredimere zu bezeichnen, die mit einem Linker+Ankergruppe-Komplex konjugiert sind (der Linker+Ankergruppe-Komplex ist von Pierce U.S.A. geliefertes Sulfo-NHS-Biotin).
  • 3. Beschichten von Antigen
    • 1) Die in diesem Versuch verwendeten Mikroplatten waren NUNC Maxisorp®-Mikroplatten. Die Mikroplatten wurden in ihrem ursprünglichen, ungebrauchten Zustand, ohne gewaschen worden zu sein, verwendet.
    • 2) Zur Verwendung wurden die Antigene 1/1000 in einem Beschichtungspuffer verdünnt (z. B. 10 μl der Antigenlösung wurde mit 10 ml Beschichtungspuffer gemischt).
    • 3) Rotes Hühnerserum (CRS) wurde 1/10 in einem Beschichtungspuffer verdünnt. Nach 3 Stunden wurde das geronnene Blut des extrahierten roten Hühnerserums unter Verwendung einer Separatorzentrifuge entfernt. Und nur Plasmabestandteile wurden verwendet. Und 0,02 Thimersol wird zugegeben, um eine lange Haltbarkeit sicherzustellen und gefroren aufbewahrt.
    • 4) Das rote Hühnerserum (CRS) wurde 1/10 in einem Beschichtungspuffer verdünnt, da die Gehalte von einzelnen Proteinen gering sind, wenn das CRS als Negativreferenz verwendet wird, obwohl die Konzentration des gesamten Proteins höher sein kann als diejenige von Antigen.
    • 5) In Bezug auf die Spike-Lösung (engl. spiked solution; üblicherweise als SP auf Mikroplatten ausgedrückt), wurde sie hergestellt durch Mischen von 50 μl einer Antigenstammlösung mit 950 μl CRS in dem ersten Versuch. Für den Gebrauch in der Praxis wurde sie 1/10 in Beschichtungspuffer verdünnt. In dem Versuch vom 14. Januar wurden jedoch Beschichtungspuffer 1,8 ml, CRS 180 μl, Antigenlösung 20 μl unmittelbar vor dem Ver such zugegeben. Deshalb ist das Verhältnis auf selbiges festgelegt.
  • 4. Bindungstest mit Antigen
    • 1) Das hergestellte Antigen wurde in einer Menge von 100 μl pro Well auf Mikroplatten gegeben und über Nacht bei 2023°C (Raumtemperatur) in der Feuchtkammer inkubiert.
    • 2) Üblicherweise wurde jedes Well der antigenbeschichteten Platten zweimal oder dreimal mit autoklaviertem, entionisiertem Wasser gewaschen und für 2 h bei 20°C mit 200 μl Blockierungspuffer inkubiert. Dies wurde jedoch in dem CRS-Fall ausgelassen.
    • 3) Der in diesem Bindungsversuch verwendete Blockierungspuffer umfasste 0,1% BSA und 0,02% Thimersol in PBS, pH 7,2, und war nicht autoklaviert. Einen Blockierungsschritt, falls durchgeführt, folgten drei oder mehr Waschungen mit Waschpuffer und dann zwei oder mehr mit PBS.
    • 4) Nach Abschluss des Waschens wurden die Platten auf den Kopf gestellt und dreimal gegen Blotting-Papier geklopft, so dass kein Rückstand auf den Platten zurückblieb.
    • 5) Danach wurden die in Abschnitt 1 (Herstellung von biotinyliertem Dimer) hergestellten Lösungen in einer Menge von 100 μl verteilt. Zu diesem Zeitpunkt wurde als Positivreferenz, ein kommerziell erhältlicher Antikörper (aviärer Influenza A-Hämagglutinin-Antikörper CATALOGU Nr. 3425 & 3427, kommerziell erhältlich von ProSci, Inc.) in einer Menge von 100 μl zugeteilt. Und die Probe, zu der kein Antikörper oder neu entwickeltes Aminosäuredimer zugegeben worden war, wurde als Negativreferenz verwendet (die anderen Bedingungen sind die gleichen).
    • 6) Sie wurden bei Raumtemperatur für 1 h unter Schütteln bei 100 rpm inkubiert.
    • 7) Das Waschen erfolgte drei- bis fünfmal mit einem Waschpuffer und dann drei- bis viermal mit PBS.
    • 8) Schritt 5) wurde wiederholt.
    • 9) Streptavidin-HRP (Meerrettichperoxidase) wurde 1/10.000 in PBS verdünnt und in einer Menge von 100 μl in jedes Well verteilt.
    • 10) Das Waschen von Schritt 2) wurde wiederholt.
    • 11) Die Prozedur von Schritt 5) wurde wiederholt.
    • 12) 50 μl einer Mischung von 1:1 von TMB:Substratlösung wurde zur hergestellten Lösung gegeben.
    • 13) Die Inkubation wurde für 15 min bei 37°C durchgeführt. Hier ist es am wichtigsten, dass die Reaktionszeit genau eingehalten wird.
    • 14) Nach 15 min wurde eine Stopplösung (2N HCl) zugegeben und dann wurde binnen 10 min die Absorption bei 450 nm unter Verwendung eines Mikroplattenlesegeräts gemessen.
  • BEISPIEL 2: Bindung eines ausgewählten Aminosäuredimers (AA) an das H5-Protein
  • 2-1. Versuch mit Magnetkügelchen
  • In diesem Versuch dienten mit Aminosäuredimeren konjugierte Magnetkügelchen zur Abtrennung des H5-Proteins aus Proben.
    • 1) Das H5-Protein des AI-Virus wurde von Bioassay Systems (USA, CA) (Katalog: Birdflu (H5HA-EAB)) erworben.
    • 2) Zunächst wurde Biotin unter Verwendung von NHS-Sulfo-Biotin mit dem NH2 jedes der in Beispiel 1 ausgewählten 36 Aminosäuredimeren konjugiert.
    • 3) Das NHS-Sulfo-Biotin wurde in der gleichen Molmenge wie das Aminosäuredimer verwendet. Beispielsweise wurde, falls ein Aminosäuredimer in einer Menge von 0,1 Mikromol verwendet wurde, ein Mikromol NHS-Sulfo-Biotin eingesetzt.
    • 4) Nachdem die Lösung der Streptavidin-beschichteten Kügelchen, deren Größe 100 nm betrug, dreimal mit PBS gewaschen worden war, wurde das synthetisierte Aminosäuredimer-PEG-Biotin (36 Proben) zu der Lösung gegeben, so dass die Oberfläche der Streptavidin-beschichteten Kügelchen mit den Aminosäuredimeren beschichtet war (2).
    • 5) Die 100 nm Kügelchen wurden von Chemicell, Deutschland, erworben. Sie wurden dreimal mit PBS gewaschen, bevor sie mit demselben Volumen der Biotin-konjugierten Aminosäuredimerlösung gemischt wurden. In diesem Beispiel wurden die Lösungen in einer Menge von 50 Mikrolitern verwendet.
    • 6) Die so erhaltenen 36 Kügelchen-Lösungen (unterschiedlich in Bezug auf das Aminosäuredimer, das an die Oberfläche der Kügelchen konjugiert ist) wurden dreimal mit PBS gewaschen, um überschüssige Reagenzien zu entfernen.
    • 7) Das H5-Protein wurde 1/100 in PBS verdünnt und 100 μl der Verdünnung wurden zu den 36 Kügelchen-Lösungen gegeben.
    • 8) Die so hergestellten Proben wurden für 2 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert.
    • 9) Nach der Inkubation wurden die Kügelchen unter Verwendung eines Magneten abgetrennt und der Überstand wurde bezüglich der Proteinmenge analysiert.
  • 2-2. Versuch mit Substrat (dünne Siliciumoxidschicht, wie Silicium-Wafer, Glas und Quarz), auf welchem das AI-Virus einfangende Aminosäuredimer immobilisiert war
    • 1) Ein Silicium-Wafer (Nano Fab Center, Daejeon, Korea), auf welchem Siliciumoxid bis zu einer Länge von 10 nm gezüchtet worden war, wurde in Abmessungen von 6 mm Breite und 8 cm Länge geschnitten.
    • 2) Die Silicium-Waferstücke wurden durch eine RCA oder ein Plasmaverfahren gereinigt, um organische Substanzen davon zu entfernen.
    • 3) Eine Lösung von MeOH:HCl (1:1) wurde verwendet, um die Wafer-Oberfläche mit Silanolgruppen zu versehen.
    • 4) Der Wafer wurde weiter mit 10% PEI-Lösung (in 50 mM Calciumcarbonat, pH 8,0) behandelt, um freie Amine auf der Oberfläche zu bilden.
    • 5) NHS-Sulfo-Biotin, das von Pierce kommerziell erhältlich ist, oder eine entsprechende bifunktionelle Verbindung wurde selektiv auf eine solche Art und Weise auf dem Substrat immobilisiert, dass N-Hydroxysuccinimid an das freie Amin auf dem Substrat gebunden wurde, während der Biotinanteil frei war.
    • 6) Das beschichtete Substrat wurde mit einer Lösung von Streptavidin in PBS (pH 7,4) behandelt, gefolgt von einer Inkubation bei Raumtemperatur für 0,5~1 Stunde, um das Streptavidin zu fixieren.
    • 7) Eine Lösung des Aminosäure-Polyethylenglycol-Biotins (AA-PEG-Biotin), hergestellt in Beispiel 2-1, 1)-4), in PBS wurde auf den Silicium-Wafer aufgebracht, gefolgt von einer Inkubation bei Raumtemperatur für 30 min. Danach wurden die verbliebenen, nicht reagierten Verbindungen unter Verwendung von PBS (enthaltend 1% Tween 20) entfernt.
    • 8) Anschließend wurde eine Lösung des H5-Antigens auf den in 7) hergestellten Silicium-Wafer aufgebracht und bei Raumtemperatur für 2 Stunden inkubiert.
    • 9) Dann wurde das Substrat mit einem Biotin-konjugierten sekundären Antikörper (in PBS) behandelt, um eine Sandwich-Struktur für den ELISA zu bilden.
    • 10) Fluidmag-BC-Biotin (Größe: 100 nm, Konzentration: 10,0 mg/ml), kommerziell erhältlich von Chemicell, Deutschland, wurde in diesem Versuch vor der Verwendung als magnetische Nanokügelchen 1/100 in PBS verdünnt.
    • 11) Es wurde überprüft, ob die Streptavidin-beschichteten Kügelchen (magnetische Nanokügelchen) selektiv an das in 9) hergestellte Substrat banden (siehe 3). Zu diesem Zeitpunkt wiesen die Kügelchen die Rolle von HRP in ELISA nach.
    • 12) Verbleibende, nicht reagierte Verbindungen wurden unter Verwendung von PBS entfernt und danach wurden die Signale für markierte Kügelchen unter Verwendung eines magnetischen Lesegeräts gemessen.
  • Die Ergebnisse der Verwendung von NH2-AsnArg-COOH sind in 8 gezeigt.
  • Wie bislang beschrieben, zeigen die Peptidverbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung, welche die Fähigkeit besitzen, stark an das AI-Virus zu binden, eine ausgezeichnete Aktivität bezüglich des Einfangens oder Inhibierens von AI-Coronavirus und können zusätzlich aufgrund ihrer einfachen Synthese kostengünstig bereitgestellt werden. Die Peptidverbindungen sind auch so stabil, dass sie selbst nach einem Jahr Lagerung nicht abgebaut sind. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung beseitigen folglich die Schwierigkeiten, die sich durch die Immunanalyse unter Verwendung eines Antikörpers ergeben, wie eine geringe Aktivität oder ein Abbau von Antikörpern, Schwierigkeiten bei der Analyse durch schlecht ausgerüstete Labors, das Opfern einer Vielzahl oder zahlreicher Tiere zur Erzeugung von Antikörpern, etc. Im Gegensatz zu Antikörpern können die Peptidverbindungen zum Einfangen oder Inhibieren des AI-Virus gemäß der vorliegenden Erfindung ferner ohne Weiteres für Biosensoren angewendet werden.
  • Obwohl die bevorzugten Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung für erläuternde Zwecke offenbart worden sind, werden Fachleute erkennen, dass verschiedene Abwandlungen, Ergänzungen und Ersetzungen möglich sind, ohne von dem in den begleitenden Ansprüchen offenbarten Erfindungsumfang und Erfindungsgedanken abzuweichen.
  • Zusammenfassend werden hierin Peptide, insbesondere die Peptidverbindungen und die Verwendung derselben zum Nachweis oder zur Inhibierung des AI-Virus bereitgestellt. Die Peptidverbindungen sind stabiler und leichter zu synthetisieren und zu lagern als Antikörper. Die Peptidverbindungen, die starke Bindungskräfte für das H5-Protein des AI-Virus aufweisen, sind ferner als Einfangmittel oder Inhibitoren des AI-Virus geeignet.
  • ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
  • Diese Liste der vom Anmelder aufgeführten Dokumente wurde automatisiert erzeugt und ist ausschließlich zur besseren Information des Lesers aufgenommen. Die Liste ist nicht Bestandteil der deutschen Patent- bzw. Gebrauchsmusteranmeldung. Das DPMA übernimmt keinerlei Haftung für etwaige Fehler oder Auslassungen.
  • Zitierte Patentliteratur
    • - KR 10-2008-0124130 [0001]
    • - KR 10-2009-095680 [0001]
  • Zitierte Nicht-Patentliteratur
    • - J. Gen. Virol., 2004, 85: 100 1–5 [0051]
    • - http://nova.colombo58.unimi.it [0065]

Claims (13)

  1. Mittel zum Einfangen oder Inhibieren von aviärem Influenzavirus, umfassend eine durch die folgende chemische Formel 1 dargestellte Verbindung als Wirkstoff: [Chemische Formel 1]
    Figure 00270001
    wobei X und X' unabhängig voneinander sind: H; eine funktionelle Gruppe, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Biotin, Streptavidin und Avidin; oder ein funktioneller Anteil, bestehend aus einer funktionellen Gruppe, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Biotin, Streptavidin und Avidin, und einem Linker, welcher die funktionelle Gruppe mit dem Grundgerüst der Verbindung der chemischen Formel 1 verbindet; m eine ganze Zahl von 2~10 ist; n 0 oder 1 ist; und R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus -H, -CH3, -CH(CH3)2 , -CH2CH(CH3)2, -CHCH3CH2CH3, -CH2OH, -CHOHCH3, -CH2SH, -(CH2)2SCH3, -CH2COOH, -CH2CONH2, -(CH2)2COOH, -(CH2)2CONH2, -(CH2)3CH2NH2, -(CH2)3NHONHNH2,
    Figure 00270002
    Figure 00280001
    -CH2CH2CH2- und -CH2SSCH2-.
  2. Mittel nach Anspruch 1, wobei der Linker ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Polyethylenglycolen, DNA, C1~C20-Alkylen, 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl-carbodiimid (EDC), Carbonyldiimidazol (CDI), Sulfo-NHS (Sulfosuccinimidyl), Isocyanatderivaten, Acylazidderivaten, N-Hydroxysuccinimid (NHS), Sulfonylchloridderivaten, Aldehydderivaten und Epoxyderivaten.
  3. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, wobei m 2 ist und der Aminosäureanteil ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus ALA-ALA, ARG-ARG, ARG-ASN, ASN-TYR, CYS-VAL, GLN-HIS, GLN-ILE, GLU-HIS, GLU-LYS, GLY-GLU, ILE-THR, LEU-ALA, LYS-LYS, MET-ALA, MET-ASP, PHE-ASN, PRO-ALA, SER-ARG, SER-CYS, SER-LYS, SER-VAL, THR-GLN, THR-GLU, THR-LYS, TRP-ARG, TYR-ALA, VAL-ALA, VAL-HIS und GLU-HIS.
  4. Mittel nach einem der Ansprüche 1 bis 3, das an das H5-Protein von aviärem Influenzavirus bindet.
  5. Verbindung zum Einfangen oder Inhibieren von aviärem Influenzavirus, dargestellt durch die folgende chemische Formel 1: [Chemische Formel 1]
    Figure 00290001
    wobei X und X' unabhängig voneinander H; eine funktionelle Gruppe, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Biotin, Streptavidin und Avidin; oder ein funktioneller Anteil, bestehend aus einer funktionellen Gruppe, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Biotin, Streptavidin und Avidin, und einem Linker, welcher die funktionelle Gruppe mit dem Grundgerüst der Verbindung der chemischen Formel 1 verbindet, sind, mit der Maßgabe, dass X und X' nicht gleichzeitig H sind; m eine ganze Zahl von 2~10 ist; n 0 oder 1 ist; und R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus -H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CHCH3CH2CH3, -CH2OH, -CHOHCH3, -CH2SH, -(CH2)2SCH3, -CH2COOH, -CH2CONH2, -(CH2)2COOH, -(CH2)2CONH2, -(CH2)3CH2NH2, -(CH2)3NHCNHNH2,
    Figure 00290002
    -CH2CH2CH2- und -CH2SSCH2-.
  6. Verbindung nach Anspruch 5, wobei der Linker ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Polyethylenglycolen, DNA, C1~C20-Alkylen, 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid (EDC), Carbonyldiimidazol (CDI), Sulfo-NHS (Sulfosuccinimidyl), Isocyanatderivaten, Acylazidderivaten, N-Hydroxysuccinimid (NHS), Sulfonylchloridderivaten, Aldehydderivaten und Epoxyderivaten.
  7. Verfahren zum Nachweisen von aviärem Influenzavirus, umfassend das Inkontaktbringen einer durch die folgende chemische Formel 1 dargestellten Verbindung mit einer zu untersuchenden Probe: [Chemische Formel 1]
    Figure 00300001
    wobei X und X' unabhängig voneinander sind: H; eine funktionelle Gruppe, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Biotin, Streptavidin und Avidin; oder ein funktioneller Anteil, bestehend aus einer funktionellen Gruppe, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Biotin, Streptavidin und Avidin, und einem Linker, welcher die funktionelle Gruppe mit dem Grundgerüst der Verbindung der chemischen Formel 1 verbindet; m eine ganze Zahl von 2~10 ist; n 0 oder 1 ist; und R ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus -H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CHCH3CH2CH3, -CH2OH, -CHOHCH3, -CH2SH, -(CH2)2SCH3, -CH2COOH, -CH2CONH2, -(CH2)2COOH, -(CH2)2CONH2, -(CH2)3CH2NH2, -(CH2)3NHCNHNH2,
    Figure 00310001
    -CH2CH2CH2- und -CH2SSCH2-.
  8. Verfahren nach Anspruch 7, wobei der Schritt des Inkontaktbringens umfasst: Fixieren entweder der Verbindung der chemischen Formel 1 oder der Probe auf einem Substrat; und Inkontaktbringen der Verbindung der chemischen Formel 1 mit der Probe, wenn diese auf dem Substrat fixiert ist, und umgekehrt.
  9. Verfahren nach Anspruch 8, wobei der Schritt des Inkontaktbringens ferner das Zugeben eines mit einer Markierung konjugierten sekundären Einfangmaterials zu dem Substrat umfasst, wenn die Probe mit der Verbindung der chemischen Formel 1 in Kontakt gebracht wird, nachdem die Verbindung der chemischen Formel 1 auf dem Substrat fixiert ist.
  10. Verfahren nach Anspruch 7, wobei der Schritt des Inkontaktbringens umfasst: Fixieren der Verbindung der chemischen Formel 1 auf Nano- oder Mikrokügelchen; und Inkontaktbringen der Probe mit der fixierten Verbindung der chemischen Formel 1.
  11. Verfahren nach Anspruch 10, wobei der Schritt des Inkontaktbringens ferner das Zugeben eines mit einer Markierung konjugierten sekundären Einfangmaterials zu den Nano- oder Mikrokügelchen, nachdem die Probe mit der fixierten Verbindung der chemischen Formel 1 in Kontakt gebracht ist, umfasst.
  12. Verfahren nach Anspruch 10 oder 11, wobei die Nano- oder Mikrokügelchen magnetische Partikel sind.
  13. Biosensor zum Diagnostizieren einer aviären Influenzainfektion, umfassend das Mittel nach einem der Ansprüche 1 bis 4 als Nachweismittel oder Einfangmittel von aviärem Influenzavirus.
DE102009047562A 2008-12-08 2009-12-07 Peptidverbindungen zum Einfangen oder Inhibieren von aviärem Influenzavirus und Verwendung derselben Withdrawn DE102009047562A1 (de)

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Patent Citations (1)

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KR20090095680A (ko) 2001-12-05 2009-09-09 어드밴스드 마이크로 디바이시즈, 인코포레이티드 장벽층 접착이 개선된 배선들

Non-Patent Citations (2)

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J. Gen. Virol., 2004, 85: 100 1-5

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