JPS59130848A - 免疫原、抗体、プロカインアミド又はＮ−アセチルプロカインアミドを測定する免疫分析法、試薬系、試験キツト及び試験具、プロカインアミド誘導体並びにβ−ガラクトシル−ウンベリフエ - Google Patents
免疫原、抗体、プロカインアミド又はＮ−アセチルプロカインアミドを測定する免疫分析法、試薬系、試験キツト及び試験具、プロカインアミド誘導体並びにβ−ガラクトシル−ウンベリフエInfo
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- JPS59130848A JPS59130848A JP58245602A JP24560283A JPS59130848A JP S59130848 A JPS59130848 A JP S59130848A JP 58245602 A JP58245602 A JP 58245602A JP 24560283 A JP24560283 A JP 24560283A JP S59130848 A JPS59130848 A JP S59130848A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、液体媒体、１夕１１えば生物学的液体中のプ
ロ力インアミド及びＮ−アセチルプロ力インアミド（Ｎ
ＡＰＡ）誘導体を測定する免疫分析法に適する新規プロ
力インアミド及びＮ−アセチルプロ力インアミド誘導体
に関する。これらの誘導体は通常の技術で宿主動物にお
いてこれらの薬剤に対する抗体の産生を刺激するため使
用される免疫原を含む。また、特に好ましい免疫分析法
で、抗体と一緒に、試薬として使用される標識接合体も
提供される。前記の免疫原及び標識接合体を合成する際
の中間体も提供される。
ロ力インアミド及びＮ−アセチルプロ力インアミド（Ｎ
ＡＰＡ）誘導体を測定する免疫分析法に適する新規プロ
力インアミド及びＮ−アセチルプロ力インアミド誘導体
に関する。これらの誘導体は通常の技術で宿主動物にお
いてこれらの薬剤に対する抗体の産生を刺激するため使
用される免疫原を含む。また、特に好ましい免疫分析法
で、抗体と一緒に、試薬として使用される標識接合体も
提供される。前記の免疫原及び標識接合体を合成する際
の中間体も提供される。
心臓機能抑制剤であるプロ力・インアミド及びＮ−アセ
チルプロ力インアミドは、心臓性不整脈の治療又は予防
に臨床的に使用される〔′：１ノシフーウエジ°−（，
１，Ｋｏｓｈ−Ｗｅｓｅｒ ） ら著、Ｎｅｗ ｌ
ｉｎｇＩａｎｄＪ、 Ｍｃｄ、 ２８１ ： １２５３
（１９６９） 、コノポーウェザ−（Ｊ、 Ｋｏｃｈ
−Ｗｅｓ、ｅｒ ）及びクライン（Ｓ、 Ｗ。
チルプロ力インアミドは、心臓性不整脈の治療又は予防
に臨床的に使用される〔′：１ノシフーウエジ°−（，
１，Ｋｏｓｈ−Ｗｅｓｅｒ ） ら著、Ｎｅｗ ｌ
ｉｎｇＩａｎｄＪ、 Ｍｃｄ、 ２８１ ： １２５３
（１９６９） 、コノポーウェザ−（Ｊ、 Ｋｏｃｈ
−Ｗｅｓ、ｅｒ ）及びクライン（Ｓ、 Ｗ。
Ｋｌｅｉｎ ） 、Ｊ、６ｍ、 Ｍｅｄ、＾５ｓｏｃ’
、 ２１ ’Ｓ ： ｌ ４５４（１，９７１））。Ｎ
−アセチルプロ力インアミド（ＮＡＰＡと略記され、ア
セカイニドとしても知られている）は人におけるプロ力
インアミドの主たる代謝産物である。プロ力インアミド
の投与を受けている患者の血漿中のこの代謝産物の濃度
はしばしば出発薬剤自体の濃度を越える。代謝は生体内
アセデル化によるものであり、個々の患者がこの薬剤を
その代謝産物に変換する速度には、著しく遺伝に基づく
変動が観察されたＣドレイート一（Ｄ、 Ｉ）ｒａｙｅ
ｒ ）ら著、叶ｕｇ Ｍｅｔａｂ、 Ｒｅｖ、、１０：
２３９ （１（１７９））。この現象は、ＮＡＰＡに
関連する副作用の発生が少ないので、薬剤の臨床的使用
において重要である。薬剤の治療的有用性及び毒性は、
その投与量とよりも、その血中濃度と良く相関する。薬
剤の投与量と血中濃度との関係は極めて変動する。これ
は吸収の完全さ、分布特性並びに代謝及び排泄の速度に
よって影響される。
、 ２１ ’Ｓ ： ｌ ４５４（１，９７１））。Ｎ
−アセチルプロ力インアミド（ＮＡＰＡと略記され、ア
セカイニドとしても知られている）は人におけるプロ力
インアミドの主たる代謝産物である。プロ力インアミド
の投与を受けている患者の血漿中のこの代謝産物の濃度
はしばしば出発薬剤自体の濃度を越える。代謝は生体内
アセデル化によるものであり、個々の患者がこの薬剤を
その代謝産物に変換する速度には、著しく遺伝に基づく
変動が観察されたＣドレイート一（Ｄ、 Ｉ）ｒａｙｅ
ｒ ）ら著、叶ｕｇ Ｍｅｔａｂ、 Ｒｅｖ、、１０：
２３９ （１（１７９））。この現象は、ＮＡＰＡに
関連する副作用の発生が少ないので、薬剤の臨床的使用
において重要である。薬剤の治療的有用性及び毒性は、
その投与量とよりも、その血中濃度と良く相関する。薬
剤の投与量と血中濃度との関係は極めて変動する。これ
は吸収の完全さ、分布特性並びに代謝及び排泄の速度に
よって影響される。
これらの考慮事項のため、これらの薬剤の血中濃度を測
定するため高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
Ｃ’、ｉユクス（Ｌ、 Ｒ，５ｈｕｋｕｓ）ら著、Ｃ
ｌ１ｎ、Ｃｈｅｍ、 ２３ニア０５ （１９７７））
、均一系酵素免疫分析法〔ワルベルク（Ｃ，Ｂ、 Ｗａ
ｌｂｅｒｇ）著＼ｒＰｒｏ、 Ｉｎｔｌ、 Ｓｙｍ、
Ｅｎｚｙｍｅ Ｌａｂｅｌｅｄ ｌｌｏｒｍｏｎｅｓａ
ｎｄ Ｄｒｕｇｓ Ｊ 、パル（Ｓ、 Ｂ、 Ｐａｌ
） ｌ＆ｉ集、トグルイタ−・アンド・カンバニイ （
Ｗ、 ｄｅＧｒｕｙｔｅｒ ＆Ｃｏ、）（ベルリン、
１９７Ｂ） 、４２９頁〕、及び定量的薄層クロマトグ
ラフィー（ＴＬｃ） （ウニスリイーハシ＋ （Ｂ、
Ｗｅｓｌｅｙ−１１ａｄｚｙａ）及び７１−７クス（＾
、 Ｍ、 Ｍａｔｔｏｃｋｓ＞著、Ｊ、 Ｃｈｒｏｍａ
ｔ、 １４３ ：３０７ （１９７７））を含めて多
数の分析法が開発された。
定するため高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
Ｃ’、ｉユクス（Ｌ、 Ｒ，５ｈｕｋｕｓ）ら著、Ｃ
ｌ１ｎ、Ｃｈｅｍ、 ２３ニア０５ （１９７７））
、均一系酵素免疫分析法〔ワルベルク（Ｃ，Ｂ、 Ｗａ
ｌｂｅｒｇ）著＼ｒＰｒｏ、 Ｉｎｔｌ、 Ｓｙｍ、
Ｅｎｚｙｍｅ Ｌａｂｅｌｅｄ ｌｌｏｒｍｏｎｅｓａ
ｎｄ Ｄｒｕｇｓ Ｊ 、パル（Ｓ、 Ｂ、 Ｐａｌ
） ｌ＆ｉ集、トグルイタ−・アンド・カンバニイ （
Ｗ、 ｄｅＧｒｕｙｔｅｒ ＆Ｃｏ、）（ベルリン、
１９７Ｂ） 、４２９頁〕、及び定量的薄層クロマトグ
ラフィー（ＴＬｃ） （ウニスリイーハシ＋ （Ｂ、
Ｗｅｓｌｅｙ−１１ａｄｚｙａ）及び７１−７クス（＾
、 Ｍ、 Ｍａｔｔｏｃｋｓ＞著、Ｊ、 Ｃｈｒｏｍａ
ｔ、 １４３ ：３０７ （１９７７））を含めて多
数の分析法が開発された。
薬剤を測定する免疫分析法に使用するプロ力インアミト
及びＮＡＰＡに対する抗体の製造は、従来、２つの本質
的に異なるアプローチで達成された。一つのアプローチ
は、プロ力インアミドをジアゾ化し、その後、アルブミ
ン担体に縮合させるごとによって環アミノ基を介して結
合させることであった〔ラッセル（＾、 Ｓ、 Ｒｕ５
ｓｅｌ）ら著、Ｃｌ１ｎ。
及びＮＡＰＡに対する抗体の製造は、従来、２つの本質
的に異なるアプローチで達成された。一つのアプローチ
は、プロ力インアミドをジアゾ化し、その後、アルブミ
ン担体に縮合させるごとによって環アミノ基を介して結
合させることであった〔ラッセル（＾、 Ｓ、 Ｒｕ５
ｓｅｌ）ら著、Ｃｌ１ｎ。
Ｅｘｐ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 ３ ： ９０１ （
１９６Ｂ）及びモジャヘリアン（Ｍｏｊａｖｅｒｉａｎ
） ら著、Ｊ、 Ｐｈａｒｍ、 Ｓｃｉ。
１９６Ｂ）及びモジャヘリアン（Ｍｏｊａｖｅｒｉａｎ
） ら著、Ｊ、 Ｐｈａｒｍ、 Ｓｃｉ。
６９ニア２１ （１９８０）３゜生成した抗体はＮＡ
ＰＡと高い交差反応性を示し、従って、一方又は他方の
薬剤に対して特異的な免疫分析法に使用するには適当で
ない。
ＰＡと高い交差反応性を示し、従って、一方又は他方の
薬剤に対して特異的な免疫分析法に使用するには適当で
ない。
第二のアプローチは、後に担体に結合させるためにエチ
ル置換基の一つを変性させることによって、構造体の全
く反対の末端、即ちＮ−ジエチルアミノ基のところで薬
剤を結合さ−Ｕるものである（米国時Ｗ（第４，２３５
．９６９号明細￥ｆ）。その結果、担体に結合させるた
めに薬剤の主官能基が変性された免疫原に対する抗体が
生じる。
ル置換基の一つを変性させることによって、構造体の全
く反対の末端、即ちＮ−ジエチルアミノ基のところで薬
剤を結合さ−Ｕるものである（米国時Ｗ（第４，２３５
．９６９号明細￥ｆ）。その結果、担体に結合させるた
めに薬剤の主官能基が変性された免疫原に対する抗体が
生じる。
薬剤のようなハブテンに対する抗体の製造に関する従来
の技術水準は、ワインリブ（Ｗｅｉｎｒｙｈ ）ら著、
ドラッグ・メタボリズム・レビュウ（ＤｒｕｇＭｅｔａ
ｂｏｌｉｓｍ Ｒｅｖｉｅｗｓ） １０ ： ２７１
（１９７９）、プレイフェア（Ｐｌａｙｆａｉｒ）
ら著、Ｂｒ、 Ｍｅｄ、 Ｂｕｌｌ。
の技術水準は、ワインリブ（Ｗｅｉｎｒｙｈ ）ら著、
ドラッグ・メタボリズム・レビュウ（ＤｒｕｇＭｅｔａ
ｂｏｌｉｓｍ Ｒｅｖｉｅｗｓ） １０ ： ２７１
（１９７９）、プレイフェア（Ｐｌａｙｆａｉｒ）
ら著、Ｂｒ、 Ｍｅｄ、 Ｂｕｌｌ。
３０ ： ２４ （１！Ｊ７４） 、ブロウトン（Ｂｒ
ｏｕｇｈｔｏｎ ）ら著Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ、 ２
２ ： ７２６ （１９７６）及びパｌ−ラー（Ｂｕ
ｔｌｅｒ） ”４、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、 Ｍｅｔｈ、
７ ： １（１９７５）及びＰｈａｒｍａｃｏｌ、
Ｒｅｖ、 ２９’（２） ：１０３ （１９７８）
によって示される。
ｏｕｇｈｔｏｎ ）ら著Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ、 ２
２ ： ７２６ （１９７６）及びパｌ−ラー（Ｂｕ
ｔｌｅｒ） ”４、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、 Ｍｅｔｈ、
７ ： １（１９７５）及びＰｈａｒｍａｃｏｌ、
Ｒｅｖ、 ２９’（２） ：１０３ （１９７８）
によって示される。
標識物質に結合される、被分析物又はその誘導体或いは
他の類縁体を含む標識接合体は、文献、例えば米国特許
第４，２７９，９９２列、同第４，１８２，８５６号、
同第４，２５９，２３３号及び同第４，２９２．４２５
号明細書に種々記載されており、これらにおいて標識は
螢光酵素基質であるβ−ガラクトシル−ウンベリフェロ
ンである。
他の類縁体を含む標識接合体は、文献、例えば米国特許
第４，２７９，９９２列、同第４，１８２，８５６号、
同第４，２５９，２３３号及び同第４，２９２．４２５
号明細書に種々記載されており、これらにおいて標識は
螢光酵素基質であるβ−ガラクトシル−ウンベリフェロ
ンである。
本発明は、アミド”側鎖」二のα−位で薬剤に結合する
か、又は薬剤の誘導体を形成することを含むプロ力イン
アミＦ及びＮΔＰＡ免疫分析法に使用する試薬を提供す
る点で特異である。本発明の免疫原は、ハプテン性薬剤
を免疫原性担体物質にα−位で共有結合して含み、それ
ぞれの薬剤に対する抗体の産生を刺激する。出発薬剤に
は置換基が存在しないα−位に薬剤を結合することによ
っ′ζ、薬剤」二の官能基又は特性爪を変性することな
く免疫原接合体を製造することができる。
か、又は薬剤の誘導体を形成することを含むプロ力イン
アミＦ及びＮΔＰＡ免疫分析法に使用する試薬を提供す
る点で特異である。本発明の免疫原は、ハプテン性薬剤
を免疫原性担体物質にα−位で共有結合して含み、それ
ぞれの薬剤に対する抗体の産生を刺激する。出発薬剤に
は置換基が存在しないα−位に薬剤を結合することによ
っ′ζ、薬剤」二の官能基又は特性爪を変性することな
く免疫原接合体を製造することができる。
本発明は、好ましい実施態様において、α−置換薬剤−
担体免疫原の製造時の新規中間体を提供する。また、本
発明の新規抗体を使用して薬剤を測定する、改良された
免疫分析法及び試薬手段を提供する。本発明ば又このよ
うな免疫分析法の特に好ましい実施態様のための標識接
合体をも提供する。
担体免疫原の製造時の新規中間体を提供する。また、本
発明の新規抗体を使用して薬剤を測定する、改良された
免疫分析法及び試薬手段を提供する。本発明ば又このよ
うな免疫分析法の特に好ましい実施態様のための標識接
合体をも提供する。
本発明は、関係するすべての実施態様において常用の担
体物質に結合させることにより免疫原を形成するため使
用することができ、更に抗体を得るため使用でき、或い
はブロカインアミド及びＮＡＰＡの免疫分析におりる検
出試薬として役立つ標識接合体の形成に使用することが
できるα−置換薬剤誘導体の製造に焦点を合わせて説明
する。
体物質に結合させることにより免疫原を形成するため使
用することができ、更に抗体を得るため使用でき、或い
はブロカインアミド及びＮＡＰＡの免疫分析におりる検
出試薬として役立つ標識接合体の形成に使用することが
できるα−置換薬剤誘導体の製造に焦点を合わせて説明
する。
薬剤の化学構造ば、アミド側鎖のα−位及びβ−位を示
して、式（Ａ）： 〔式中Ｘはプ１コカインアミドに関しては水素を表し、
ＮＡＰＡに関してはアセチル基を表す〕で示される。α
−誘導体の合成は、出発薬剤の公知合成法を変化させて
達成することができる。
して、式（Ａ）： 〔式中Ｘはプ１コカインアミドに関しては水素を表し、
ＮＡＰＡに関してはアセチル基を表す〕で示される。α
−誘導体の合成は、出発薬剤の公知合成法を変化させて
達成することができる。
α−誘導体
第１図において、適切な官能基（Ｚで示す）を有するＮ
、Ｎ−ジエチルエチレンジアミン誘導体（１）を４−ニ
トロベンゾイルクロリドとの反応によりベンゾイル化し
てニトロ−置換中間体（２）を生じる。二１・四基を還
元すると、α−置置換プロカイテアミド誘導体３）が生
成し、これをアセチル化すると、α−置換ＮＡＰＡ誘導
体（４）が生じる〔ヤマゾヒ（Ｍ、 Ｙａｍａｚｏｈｉ
）ら著、Ｊ。
、Ｎ−ジエチルエチレンジアミン誘導体（１）を４−ニ
トロベンゾイルクロリドとの反応によりベンゾイル化し
てニトロ−置換中間体（２）を生じる。二１・四基を還
元すると、α−置置換プロカイテアミド誘導体３）が生
成し、これをアセチル化すると、α−置換ＮＡＰＡ誘導
体（４）が生じる〔ヤマゾヒ（Ｍ、 Ｙａｍａｚｏｈｉ
）ら著、Ｊ。
Ｐｂａｒｍ、Ｓｏｃ、Ｊａｐａｎ 、 ７ ３ ：
２９４ （１９５３’） 、ハル゛ンリイ（Ｒ，
Ｂ、ａｌｔｚｌｙ） ら著、Ｊ、八ｍ、ｃｈｅｍ、
’Ｓｏｃ。
２９４ （１９５３’） 、ハル゛ンリイ（Ｒ，
Ｂ、ａｌｔｚｌｙ） ら著、Ｊ、八ｍ、ｃｈｅｍ、
’Ｓｏｃ。
６４ ：２２３１ （１９４１）及びドレイヤー（Ｄ
。
。
Ｕｙ Ｄｒａｙｅｒ） ら著、Ｐｒｏｃ、 Ｓｏｃ
、ＩＥｘｐ、’ Ｂｉｏｌ、 Ｍｅｄ。
、ＩＥｘｐ、’ Ｂｉｏｌ、 Ｍｅｄ。
１４’６：’３５８ （１９７４））。また、カルボキ
シル−活性化試薬、例えばアミド結合−形成反応に使用
される試薬〔［ヂ・ペプタイヅ（Ｔｈｅ１’ｅｐｔｉｄ
ｅｓ） Ｊ、１巻、グロス（ｐ、 Ｇｒｏｓｓ）及びマ
イエンボーフ７ （Ｊ、 Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ ）
編築、アカデミツク゛プレス（＾ｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ） −（二５．−ヨーク、１９７９年発行）６
６頁以下参照〕で活性化された４−アセトアミド安息香
酸との反応によって（１）から直接ＮＡＰＡ誘導体（４
）を製造することもできる。
シル−活性化試薬、例えばアミド結合−形成反応に使用
される試薬〔［ヂ・ペプタイヅ（Ｔｈｅ１’ｅｐｔｉｄ
ｅｓ） Ｊ、１巻、グロス（ｐ、 Ｇｒｏｓｓ）及びマ
イエンボーフ７ （Ｊ、 Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ ）
編築、アカデミツク゛プレス（＾ｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ） −（二５．−ヨーク、１９７９年発行）６
６頁以下参照〕で活性化された４−アセトアミド安息香
酸との反応によって（１）から直接ＮＡＰＡ誘導体（４
）を製造することもできる。
α−置換誘導体の製造における主中間体は第一級アミン
（１）である。この中間体の合成法を末酩１１オレフィ
ン（５） 、ｎ＝１〜１０から出発して第２図に基づい
て説明する。プロカインアミド及びＮへｒ）Ａ（Δ）の
α及びβ炭素原子に対する前駆物質は（５）の二重結合
の炭素原子である。この二重結合を３−クロル過安息香
酸でエポキシ化してオキシラン（６）を生成させ、これ
をジエチルアミンと反応させてアミノアルコール（７）
を生成させる。（７）をフタルイミド及びジェチルアゾ
ジカルボキシレ−１・と反応させ、フタルイミド誘導体
（８）を生成させ、これをヒドラジンで処理すると、主
第−級アミン試薬（１）が生成する〔ミ゛ンノフ゛（０
，Ｍｊｔｓｕｎｏｂｕ） ら著、Ｊ、八ｍ。
（１）である。この中間体の合成法を末酩１１オレフィ
ン（５） 、ｎ＝１〜１０から出発して第２図に基づい
て説明する。プロカインアミド及びＮへｒ）Ａ（Δ）の
α及びβ炭素原子に対する前駆物質は（５）の二重結合
の炭素原子である。この二重結合を３−クロル過安息香
酸でエポキシ化してオキシラン（６）を生成させ、これ
をジエチルアミンと反応させてアミノアルコール（７）
を生成させる。（７）をフタルイミド及びジェチルアゾ
ジカルボキシレ−１・と反応させ、フタルイミド誘導体
（８）を生成させ、これをヒドラジンで処理すると、主
第−級アミン試薬（１）が生成する〔ミ゛ンノフ゛（０
，Ｍｊｔｓｕｎｏｂｕ） ら著、Ｊ、八ｍ。
Ｃｈｅｍ、 Ｓｏｃ、 ９４ ： ６７９ （１９
７２）：）。
７２）：）。
生成するα−置換ププロイン゛ｒミド及びＮＡＰΔ誘導
体は式（Ｂ）； ＣＨ２Ｎ（Ｃ２Ｈ，）２ ｃ式中Ｘは前記のものを表し、ｎば１〜１０．打ましく
は１〜６の整数を表し、Ｚは免疫原性担体物質又は標識
試薬と結合しうる官能基を表す〕を有する。官能基Ｚは
、一般に、アミノ基、カルボ □キシル栽
、チオール基、ヒドロキシル基又はマレイミド基である
。このようなα−官能基置換誘導体は適切な官能基を有
するオレフィン（５）から製造される。Ｚ−ヒドロキシ
ル基の場合、ω−ヒ１、°１コキシオレフィンは、ω−
オレフィンエステルの全屈水素化物還元に基づい′ζ〔
スカルボロフ（１１，Ｍ、 Ｓｃａｒｂｏｒｏｕｇｈ
） ら著Ｊ、へｍ、 ＣＩ＋ｅｍ、 Ｓｏｃ。
体は式（Ｂ）； ＣＨ２Ｎ（Ｃ２Ｈ，）２ ｃ式中Ｘは前記のものを表し、ｎば１〜１０．打ましく
は１〜６の整数を表し、Ｚは免疫原性担体物質又は標識
試薬と結合しうる官能基を表す〕を有する。官能基Ｚは
、一般に、アミノ基、カルボ □キシル栽
、チオール基、ヒドロキシル基又はマレイミド基である
。このようなα−官能基置換誘導体は適切な官能基を有
するオレフィン（５）から製造される。Ｚ−ヒドロキシ
ル基の場合、ω−ヒ１、°１コキシオレフィンは、ω−
オレフィンエステルの全屈水素化物還元に基づい′ζ〔
スカルボロフ（１１，Ｍ、 Ｓｃａｒｂｏｒｏｕｇｈ
） ら著Ｊ、へｍ、 ＣＩ＋ｅｍ、 Ｓｏｃ。
ｔｏ２：３ｑｏ４’ｕ９ａｏ）〕又は対応するＯ）〜ヒ
ドロキシアセチレンの部分的還元によって」二業的に入
手することができる。Ｚ−アミノ基の場合、フタルイミ
ド及びジエチルアゾジ力ルポキシレ−１・と反応さ−Ｕ
、次いでヒドラジンと反応さ赳る（ミツノブの前掲文献
）ことによって対応する０ン−オレフィンを得ることが
できる。Ｚ−カルボキシル基である誘導体は、対応する
ω−オレフィンエステルからｆ”Ｉられる（スカルボロ
フの前掲文献）。Ｚ−マレイミド基である誘導体は、α
−アミン化誘導体をＮ−スクシンイミジルｍ−マレ・イ
ミドヘンシェードと反応させることによって得られる（
”ｒ−乳用ら著、Ｊ、 Ｂｉｏｃｌ＋ｅｍ、 ７９
： ２３３（１９７Ｅｉ））。最後に、Ｚ−チオ基であ
る誘導体は、第一級アミノ誘導体をＳ Ａ、Ｍ Ｓ Ａ
試薬と反応させることによって製造することができる〔
クロソツ（１１Ｍ、 Ｋｌｏｔｚ ）ら著、Ａｒｃｈ、
Ｂｉｏｃｈｅｍ。
ドロキシアセチレンの部分的還元によって」二業的に入
手することができる。Ｚ−アミノ基の場合、フタルイミ
ド及びジエチルアゾジ力ルポキシレ−１・と反応さ−Ｕ
、次いでヒドラジンと反応さ赳る（ミツノブの前掲文献
）ことによって対応する０ン−オレフィンを得ることが
できる。Ｚ−カルボキシル基である誘導体は、対応する
ω−オレフィンエステルからｆ”Ｉられる（スカルボロ
フの前掲文献）。Ｚ−マレイミド基である誘導体は、α
−アミン化誘導体をＮ−スクシンイミジルｍ−マレ・イ
ミドヘンシェードと反応させることによって得られる（
”ｒ−乳用ら著、Ｊ、 Ｂｉｏｃｌ＋ｅｍ、 ７９
： ２３３（１９７Ｅｉ））。最後に、Ｚ−チオ基であ
る誘導体は、第一級アミノ誘導体をＳ Ａ、Ｍ Ｓ Ａ
試薬と反応させることによって製造することができる〔
クロソツ（１１Ｍ、 Ｋｌｏｔｚ ）ら著、Ａｒｃｈ、
Ｂｉｏｃｈｅｍ。
Ｂｉｏｐｈｙｓ、 ９５ ： ６０５ （１’９６２
） ）。
） ）。
プロ力インアミド及びＮＡＰＡと同じアミド側鎖を有す
る他の分子、特に薬剤の誘導体形成に前記の合成経路又
はその簡単な変更を、本発明思想を逸脱することなく、
通用することができる。生じるα−置換誘導体は、勿論
、以下に更に詳述するように１１体分子又は標識試薬に
結合させるため使用することができる。本発明を均等に
適用しうろこのような他の分子は、例えばメトクロプラ
ミド〔メルク・インデックス（Ｍｅｒｋ Ｉｎｄｅｘ）
、第９版（１９７６） 、８０１頁〕及びジブカイン
（同上文献３９９頁）である。
る他の分子、特に薬剤の誘導体形成に前記の合成経路又
はその簡単な変更を、本発明思想を逸脱することなく、
通用することができる。生じるα−置換誘導体は、勿論
、以下に更に詳述するように１１体分子又は標識試薬に
結合させるため使用することができる。本発明を均等に
適用しうろこのような他の分子は、例えばメトクロプラ
ミド〔メルク・インデックス（Ｍｅｒｋ Ｉｎｄｅｘ）
、第９版（１９７６） 、８０１頁〕及びジブカイン
（同上文献３９９頁）である。
免疫原
前記のα−官能基置換誘導体を任意の常用の技術で免疫
原性担体物質に共有結合させて、式：Ｃｌ−１２Ｎ（Ｃ
２１１，）２ ｃ式中Ｘは前記のものを表す〕の基を１個以上含む免疫
原を生成することができる。
原性担体物質に共有結合させて、式：Ｃｌ−１２Ｎ（Ｃ
２１１，）２ ｃ式中Ｘは前記のものを表す〕の基を１個以上含む免疫
原を生成することができる。
更に６を述ずれば、このような免疫原は式（Ｃ）〔式中
ｎは前記のものを表し、Ｚ“は結舎反応後に残る官能基
Ｚからの残基を表し、Ｒｏは結合又は適切な結合基を表
し、担体は免疫原性担体物質を表し、ｐは担体に接合す
るハブテン基の数を表ず〕を有する。ｐの数はしばしば
免疫原のエビ１へ一プ密度と言われ、担体分子上の利用
可能の結合部位の数によってのみ限定される。しかしな
がら、担体が蛋白質、例えばアルブミンである通當の状
態では、ｐは平均１〜約５０、更に通雷には１〜約２５
であろう。このような通雷の場合の最適エピトープ密度
は、免疫原合成の容易さ及び再現性並びに抗体の応答を
考慮すると、約２〜約２０、更に哲通には５〜１５であ
る。
ｎは前記のものを表し、Ｚ“は結舎反応後に残る官能基
Ｚからの残基を表し、Ｒｏは結合又は適切な結合基を表
し、担体は免疫原性担体物質を表し、ｐは担体に接合す
るハブテン基の数を表ず〕を有する。ｐの数はしばしば
免疫原のエビ１へ一プ密度と言われ、担体分子上の利用
可能の結合部位の数によってのみ限定される。しかしな
がら、担体が蛋白質、例えばアルブミンである通當の状
態では、ｐは平均１〜約５０、更に通雷には１〜約２５
であろう。このような通雷の場合の最適エピトープ密度
は、免疫原合成の容易さ及び再現性並びに抗体の応答を
考慮すると、約２〜約２０、更に哲通には５〜１５であ
る。
免疫原性担体物質は、従来公知の任意の担体物質から選
択することができる。多くの場合に、担体ば蛋白質又は
ポリペプチドであるが、炭水化物、０多糖類、リボ多糖
類、核酸並びに十分な大きさ及び免疫原性を有する同様
のものも同様に使用することができる。免疫原性蛋白質
及びポリペプチドは、大部分５，０００〜１０ 、００
０ 、０００の分子量、好ましくは１５；０００より大
きい、更に普通には５０ 、０００より大きい分子量を
有する。一般に、１種の動物から採取される蛋白質は、
別の種の血液流中に導入されると、免疫原性である。特
に有用な蛋白質はアルブミン、グロブリン、酵素、ヘモ
シアニン、グルテリン、重要な非蛋白質成分を有する蛋
白質、例えば糖蛋白等である。ａｏ、 ｏｏｏ〜２００
，０００の分子量のアルブミン及びグロブリンは特に好
ましい。
択することができる。多くの場合に、担体ば蛋白質又は
ポリペプチドであるが、炭水化物、０多糖類、リボ多糖
類、核酸並びに十分な大きさ及び免疫原性を有する同様
のものも同様に使用することができる。免疫原性蛋白質
及びポリペプチドは、大部分５，０００〜１０ 、００
０ 、０００の分子量、好ましくは１５；０００より大
きい、更に普通には５０ 、０００より大きい分子量を
有する。一般に、１種の動物から採取される蛋白質は、
別の種の血液流中に導入されると、免疫原性である。特
に有用な蛋白質はアルブミン、グロブリン、酵素、ヘモ
シアニン、グルテリン、重要な非蛋白質成分を有する蛋
白質、例えば糖蛋白等である。ａｏ、 ｏｏｏ〜２００
，０００の分子量のアルブミン及びグロブリンは特に好
ましい。
常用な免疫原性担体物質及びこれに／”％ブテンを結合
させる技術に関する従来の技術水準については、更に、
パーカー（Ｐａｒｋｅｒ）著、ラデイオイムノア７セイ
・オブ・バイオロジカリイ・アクティブ・コンパウンド
（Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｏｒ Ｂｉｏｌ
ｏ８ｉｃａｌｌｙ八ｃ’Ｌｉｖｅ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ
） 、プレンティス−＞ｉ−ル（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−
１１ａｌｌ ） （アメリカ合衆国ニュージ４・−ジ
イ州エングルウッド・クリフス、１９７６年発行）、ハ
トカー（Ｂｕｔｌｅｒ）著、Ｊ、 １ｍｍｕｎｏｌ。
させる技術に関する従来の技術水準については、更に、
パーカー（Ｐａｒｋｅｒ）著、ラデイオイムノア７セイ
・オブ・バイオロジカリイ・アクティブ・コンパウンド
（Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｏｒ Ｂｉｏｌ
ｏ８ｉｃａｌｌｙ八ｃ’Ｌｉｖｅ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ
） 、プレンティス−＞ｉ−ル（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−
１１ａｌｌ ） （アメリカ合衆国ニュージ４・−ジ
イ州エングルウッド・クリフス、１９７６年発行）、ハ
トカー（Ｂｕｔｌｅｒ）著、Ｊ、 １ｍｍｕｎｏｌ。
Ｍｅｔｈ、 ７ ： 、１〜２４ （１９７５） 、
ワインリブ（Ｗｅｉｎｒｙｂ ）及びシコ、ロフ（Ｓｈ
ｒｏｆｆ）著、叶＋１ｇＭｅｔａｂ、 １ｉｅｖ、
１ ０ ： ２ ７ １ 〜２ ８ ３ ’（
１９７５） 、 フ゛ロウトン（Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ
）及びストロング（Ｓｔｒｏｎｇ）著、Ｃｌ１ｎ、
ＣＩ＋ｅｍ、 ２２ ： ７２６〜７３２ （１９７
６）及びプレイフェア（Ｐｌａｙｆａｉｒ）ら著、Ｂｒ
、 Ｍｅｄ。
ワインリブ（Ｗｅｉｎｒｙｂ ）及びシコ、ロフ（Ｓｈ
ｒｏｆｆ）著、叶＋１ｇＭｅｔａｂ、 １ｉｅｖ、
１ ０ ： ２ ７ １ 〜２ ８ ３ ’（
１９７５） 、 フ゛ロウトン（Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ
）及びストロング（Ｓｔｒｏｎｇ）著、Ｃｌ１ｎ、
ＣＩ＋ｅｍ、 ２２ ： ７２６〜７３２ （１９７
６）及びプレイフェア（Ｐｌａｙｆａｉｒ）ら著、Ｂｒ
、 Ｍｅｄ。
Ｂｕｌｌ、３０ ： ２４〜３１ （１９７４）を参
照することができる。
照することができる。
基Ｚ°は使用するα−誘導体（Ｂ）における官能１２１
Ｉ＞Ｚに応して変動し、イミノ基、カルボキシル基、ス
ルホ基又はオキシ基であるのが好ましい。
Ｉ＞Ｚに応して変動し、イミノ基、カルボキシル基、ス
ルホ基又はオキシ基であるのが好ましい。
基Ｒ“は担体物質中の適切な官能基への結合であるのが
好ましい。適切なα−置換薬剤誘導体は周知の技術によ
り免疫原性担体物質に結合することができる。例えば、
アミノ誘導体は下記の手段により担体に直接結合するこ
とができる。薬剤部分のアミノ基をアミノ基含有担体（
例えば蛋白質又はポリペプチド担体）に、トルエン−２
，４−ジイソシアネート〔シック（八、 Ｆ、 ５ｃｈ
ｉｃｋ）及びシンガー（３，Ｊ、 Ｓｉｎｇｅｒ）著、
Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ。
好ましい。適切なα−置換薬剤誘導体は周知の技術によ
り免疫原性担体物質に結合することができる。例えば、
アミノ誘導体は下記の手段により担体に直接結合するこ
とができる。薬剤部分のアミノ基をアミノ基含有担体（
例えば蛋白質又はポリペプチド担体）に、トルエン−２
，４−ジイソシアネート〔シック（八、 Ｆ、 ５ｃｈ
ｉｃｋ）及びシンガー（３，Ｊ、 Ｓｉｎｇｅｒ）著、
Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ。
２３６：２４１１ （１９６１））、４．’４’−ジフ
ルオロー３，３′−ジニトロジフェニルスルホン〔キュ
アトレカサス（Ｐ、 Ｓ、 Ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ
）ら著、 Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ２
４ ４ ： ４ ０ ６ （１９６９＞ 〕
、グルタルアルデヒド ら著、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． ８ ７ ： １ ０
５ ５ （１９７０） ）、ビス−イミデート類〔
ダソトン（＾， Ｄｕｔｔｏｎ ）ら著、Ｂｉｏｃｈｅ
＋ｎ．Ｂｉｏｐｈｙｓ． ｌｌｅｓ． Ｃｏｍｍ． ２
３ ： ７ ３ ０（１９６６Ｌ）及びクロロ１−リ
アジン〔ラング（Ｔ． Ｌａｎｇ ） ら著Ｊ． Ｃ
． Ｓ． ｒ’ｅｒｋｉｎ ４ ： ２ １ ８ ９
（１９７７））によって結合させることができる。
ルオロー３，３′−ジニトロジフェニルスルホン〔キュ
アトレカサス（Ｐ、 Ｓ、 Ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ
）ら著、 Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ２
４ ４ ： ４ ０ ６ （１９６９＞ 〕
、グルタルアルデヒド ら著、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． ８ ７ ： １ ０
５ ５ （１９７０） ）、ビス−イミデート類〔
ダソトン（＾， Ｄｕｔｔｏｎ ）ら著、Ｂｉｏｃｈｅ
＋ｎ．Ｂｉｏｐｈｙｓ． ｌｌｅｓ． Ｃｏｍｍ． ２
３ ： ７ ３ ０（１９６６Ｌ）及びクロロ１−リ
アジン〔ラング（Ｔ． Ｌａｎｇ ） ら著Ｊ． Ｃ
． Ｓ． ｒ’ｅｒｋｉｎ ４ ： ２ １ ８ ９
（１９７７））によって結合させることができる。
７１′だ、アミノ誘導体を、混成無水物、活性化エステ
ル、アシルアシド形成、カルボジイミド等を用いて通電
のペプチド結合形成反応によってカルボキシル基を有す
る担体（例えば、蛋白質又はポリペプチド担体）に結合
させることができる〔ベブタイヅ（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）
、グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ ）及びマインボーフ
ァ （Ｍｅｉｎｈｏｆｅｒ ）編集、ジョン・ウィリイ
・アン）′・サンス（Ｊｏｂｎ Ｗｉｌｅｙ ＆５ｏ
ｎｓ）、 にューヨーク、１９７７） 、６頁以下及
びザ・ペプタイヅ、アナリシス、シンセシス、バイオＩ
：１シイ（Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、 Ａｎａｌｙ
ｓｉｓ、 ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ。
ル、アシルアシド形成、カルボジイミド等を用いて通電
のペプチド結合形成反応によってカルボキシル基を有す
る担体（例えば、蛋白質又はポリペプチド担体）に結合
させることができる〔ベブタイヅ（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）
、グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ ）及びマインボーフ
ァ （Ｍｅｉｎｈｏｆｅｒ ）編集、ジョン・ウィリイ
・アン）′・サンス（Ｊｏｂｎ Ｗｉｌｅｙ ＆５ｏ
ｎｓ）、 にューヨーク、１９７７） 、６頁以下及
びザ・ペプタイヅ、アナリシス、シンセシス、バイオＩ
：１シイ（Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、 Ａｎａｌｙ
ｓｉｓ、 ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ。
Ｂ＋ｏＩｏＢｙ ） 、１巻、アカデミツク・プレス（
八ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ） （ユーヨーク、１
９７９）参照〕。アミノ基を有する担体にカルボキシル
化誘導体を結合させるため、同じ方法を同様に適用する
。
八ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ） （ユーヨーク、１
９７９）参照〕。アミノ基を有する担体にカルボキシル
化誘導体を結合させるため、同じ方法を同様に適用する
。
ジスルフィド交換操作〔マーチン（Ｊ、 Ｍａｒｔｉｎ
）ら著、Ｂｉｏｃｂｅｍ、 ２０ ： ４２２９ （
１９８１） ）によりチオール化誘導体をチオール基含
有ポリマー（１，Ｇ又はヂオ〜ル化蛋白質）に結合さ一
ヒることができる。また、乳用及び相用によりＪ、 Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ。
）ら著、Ｂｉｏｃｂｅｍ、 ２０ ： ４２２９ （
１９８１） ）によりチオール化誘導体をチオール基含
有ポリマー（１，Ｇ又はヂオ〜ル化蛋白質）に結合さ一
ヒることができる。また、乳用及び相用によりＪ、 Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ。
７９：２’３３ （１９７６）に記載された方法によ
って、アミノ基含有ポリマーを試薬ＭＢＳと反応させ、
生成物をチオール含有誘導体と結合させることもできる
。マレイミド誘導体を同様にチオール含有担体に結合さ
せることができる（前掲文献参照）。トリクロロトリア
ジンを使用して担体にヒドロキシ誘導体を結合させるこ
とができる〔カイ （Ｇ、 Ｍａｙ）及びクルーク（Ｉ
Ｅ、 Ｍ、 Ｃｒｏｏｋ）著ネイチャ（Ｎａｔｕｒｅ）
２１６ ： ５１４ （１９ｆ３７） ）。
って、アミノ基含有ポリマーを試薬ＭＢＳと反応させ、
生成物をチオール含有誘導体と結合させることもできる
。マレイミド誘導体を同様にチオール含有担体に結合さ
せることができる（前掲文献参照）。トリクロロトリア
ジンを使用して担体にヒドロキシ誘導体を結合させるこ
とができる〔カイ （Ｇ、 Ｍａｙ）及びクルーク（Ｉ
Ｅ、 Ｍ、 Ｃｒｏｏｋ）著ネイチャ（Ｎａｔｕｒｅ）
２１６ ： ５１４ （１９ｆ３７） ）。
本発明の種々のα−置換誘導体を常用の免疫原性担体物
質と結合させるため当業者は多数の他の結合技術を利用
することができる。例えば、当業者は適切なα−置換誘
導体（Ｂ）を二官能性試薬と、その一方の末端が誘導体
と共有結合し、他方の末端が前記のような担体に結合す
る官能基（例えば、アミノ基、カルボキシル基、チオー
ル基、ヒドロキシル基及びマレイミド基）を有するよう
に反応させることができる。例えば、アミノ誘導体をビ
ス−イミデート類、ビス−イソシアネート類及びグルタ
ルアルデヒドを含めて、アミツノに含有高分子（例えば
、蛋白質又はポリペプチド）に結合させるための二官能
性結合試薬は周知である（Ｉｍｍｕｎｏｃｌ＋ｅｍ、
６ ： ５３ （１９６９） 〕。他の有用な結合反
応は文献に十分論じられている〔コツプル（Ｋｏｐｐｌ
ｅ） 、ペブタイヅ・アンド・アミノ・アシノ゛ゾ（ｒ
’ｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｍ１ｎｏ Ａｃ１ｄｓ）
、ベンジャミン社（Ｗ、八、 Ｂｅｎｊａｍｉｎ、
Ｉｎｃ、） Ｌ−ニーヨーク、１９６６年発行）、ロ
ウェ（Ｌｏ匈ｅ）及びディーン（Ｄｅａｎ）著、アフィ
ニティ・クロマトグラフィー（八［１ｎｉｔｙ Ｃｈｒ
ｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ） ：ジョン・ウィリイ・ア
ンド・サンズにューヨーク、１９７４年発行）、ミーン
ズ（Ｍｅａｎｓ ）及びフィーニイ（Ｆｅｅｎｅｙ）
著、ケミカル・モディフィケイション・オブ・プロテイ
ンズ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏ
ｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ） 、ホールデンーデイ （Ｉ
ｌｏｌｄｅｎ−ｆｌａｙ）（ザンフランシスコ、１９７
１年発行）、及びグレイザー（Ｇｌａｚｅｒ）ら著、ケ
ミカル・モディフィゲイション・オブ・プロテインズ（
ＣｈｅｍｉｃａｌＭｏｄｉｆｉｃ、ａＬｉｏｎ ｏｆ
ｒ’ｒｏＬｅｉｎｓ） 、エルスフィーア（ｌＥｌｓｅ
ｖｉｅｒ） （ニューヨーク、１９７５年発行）参照
〕。
質と結合させるため当業者は多数の他の結合技術を利用
することができる。例えば、当業者は適切なα−置換誘
導体（Ｂ）を二官能性試薬と、その一方の末端が誘導体
と共有結合し、他方の末端が前記のような担体に結合す
る官能基（例えば、アミノ基、カルボキシル基、チオー
ル基、ヒドロキシル基及びマレイミド基）を有するよう
に反応させることができる。例えば、アミノ誘導体をビ
ス−イミデート類、ビス−イソシアネート類及びグルタ
ルアルデヒドを含めて、アミツノに含有高分子（例えば
、蛋白質又はポリペプチド）に結合させるための二官能
性結合試薬は周知である（Ｉｍｍｕｎｏｃｌ＋ｅｍ、
６ ： ５３ （１９６９） 〕。他の有用な結合反
応は文献に十分論じられている〔コツプル（Ｋｏｐｐｌ
ｅ） 、ペブタイヅ・アンド・アミノ・アシノ゛ゾ（ｒ
’ｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｍ１ｎｏ Ａｃ１ｄｓ）
、ベンジャミン社（Ｗ、八、 Ｂｅｎｊａｍｉｎ、
Ｉｎｃ、） Ｌ−ニーヨーク、１９６６年発行）、ロ
ウェ（Ｌｏ匈ｅ）及びディーン（Ｄｅａｎ）著、アフィ
ニティ・クロマトグラフィー（八［１ｎｉｔｙ Ｃｈｒ
ｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ） ：ジョン・ウィリイ・ア
ンド・サンズにューヨーク、１９７４年発行）、ミーン
ズ（Ｍｅａｎｓ ）及びフィーニイ（Ｆｅｅｎｅｙ）
著、ケミカル・モディフィケイション・オブ・プロテイ
ンズ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏ
ｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ） 、ホールデンーデイ （Ｉ
ｌｏｌｄｅｎ−ｆｌａｙ）（ザンフランシスコ、１９７
１年発行）、及びグレイザー（Ｇｌａｚｅｒ）ら著、ケ
ミカル・モディフィゲイション・オブ・プロテインズ（
ＣｈｅｍｉｃａｌＭｏｄｉｆｉｃ、ａＬｉｏｎ ｏｆ
ｒ’ｒｏＬｅｉｎｓ） 、エルスフィーア（ｌＥｌｓｅ
ｖｉｅｒ） （ニューヨーク、１９７５年発行）参照
〕。
その結果、結合基Ｒ′及び残基Ｚ′は唯一の架橋基Ｒと
考えられ、従って免疫原は一般式（Ｄ）〔式中Ｒは残基
−Ｚ’−Ｒ“−を含め、広く変動しうるが、その正確な
化学構造は、それが生成する免疫原の免疫原特性を妨害
せずにハプテン残基を結合する目的に役立つ限り、限定
的なものではない〕を有する。例えば、Ｒは１〜１５個
程度、更に一般には１０個以下、通ｔπ６個未満の炭素
原子を含む直鎮又は分枝鎖アルキレン基（例えば、メチ
レン基、エチレン基、ｎ−プロピレン基、イソプロピレ
ン基、ｎ−ブチレン基等）であってよい。更に、このよ
うなアルキレン基は他の置換基、例えばシアノ基、アミ
ノ基（置換アミノ基を含めて）、アシルアミノ基、ハロ
ゲン、チオール基、ヒドロキシル基、カルボニル基、カ
ルボキシル基（置換カルボキシル基、例えばエステル、
アミド及び置換アミドを含めて）を含んでいてよい。架
橋基Ｒは置換又は非置換アリール基、アラ、ルキル基又
はヘテロアリール基（例えばフェニレン基、フェニレン
基等）を含むが、又はこれらから成ることもできる。更
に、このような結合基は、窒素、硫黄及び酸素から選択
された１個以上のへテロ原子をエーテル、エステル、ア
ミード、アミン、チオエーテル、アミジノ、スルポン、
又はスルホキシドの形で含んでい“Ｃよい。Ｒは連鎖で
あって、通常、水素を除いて１〜約２０個の原子、更に
普通には１〜ｌＯ°個の原子を有し、そのうら０〜５個
が窒素、酸素及び硫黄から選択されるヘテロ原子である
脂肪族連鎖であるのが好ましい。従って、架橋基Ｒの選
択は本発明には限定的なものではなく、当業者〇こまっ
て広（変動されうる。
考えられ、従って免疫原は一般式（Ｄ）〔式中Ｒは残基
−Ｚ’−Ｒ“−を含め、広く変動しうるが、その正確な
化学構造は、それが生成する免疫原の免疫原特性を妨害
せずにハプテン残基を結合する目的に役立つ限り、限定
的なものではない〕を有する。例えば、Ｒは１〜１５個
程度、更に一般には１０個以下、通ｔπ６個未満の炭素
原子を含む直鎮又は分枝鎖アルキレン基（例えば、メチ
レン基、エチレン基、ｎ−プロピレン基、イソプロピレ
ン基、ｎ−ブチレン基等）であってよい。更に、このよ
うなアルキレン基は他の置換基、例えばシアノ基、アミ
ノ基（置換アミノ基を含めて）、アシルアミノ基、ハロ
ゲン、チオール基、ヒドロキシル基、カルボニル基、カ
ルボキシル基（置換カルボキシル基、例えばエステル、
アミド及び置換アミドを含めて）を含んでいてよい。架
橋基Ｒは置換又は非置換アリール基、アラ、ルキル基又
はヘテロアリール基（例えばフェニレン基、フェニレン
基等）を含むが、又はこれらから成ることもできる。更
に、このような結合基は、窒素、硫黄及び酸素から選択
された１個以上のへテロ原子をエーテル、エステル、ア
ミード、アミン、チオエーテル、アミジノ、スルポン、
又はスルホキシドの形で含んでい“Ｃよい。Ｒは連鎖で
あって、通常、水素を除いて１〜約２０個の原子、更に
普通には１〜ｌＯ°個の原子を有し、そのうら０〜５個
が窒素、酸素及び硫黄から選択されるヘテロ原子である
脂肪族連鎖であるのが好ましい。従って、架橋基Ｒの選
択は本発明には限定的なものではなく、当業者〇こまっ
て広（変動されうる。
式ｒ［釣：
Ｃ４，中Ｘは前記のものを表し、Ｙはアミド基、即ち、
〜Ｎ ＨＣＯ−を表し、担体は免疫原性蛋白質又はポリ
ペプチドを表し、ｎは１〜１ｏ、好ましくは１〜６の整
数を表し、ｐは平均１〜担体物質上の利用可能のアミド
結合部位の数、好ましくは前記の数を表す〕の免疫原が
特に好ましい。アミド結合基は、２つの方法のいずれが
で配向され、アミド基中の窒素原子が担体のアミノ基に
由来するもので、炭素原子が適切なα−置換誘導体（例
えば、カルボン酸）に由来するもので、ｐは担体中の結
合されたアミノ基の平均数（好ましくは前記の数）を表
すか、又は窒素原子が適切なα−置換誘導体（例えば、
アミノ誘導体）に由来し、炭素原子が担体のカルボキシ
ル基に山来し、ｐが担体中の結合されたカルボキシル基
の平均数（打ましくは前記の数）を表す。
〜Ｎ ＨＣＯ−を表し、担体は免疫原性蛋白質又はポリ
ペプチドを表し、ｎは１〜１ｏ、好ましくは１〜６の整
数を表し、ｐは平均１〜担体物質上の利用可能のアミド
結合部位の数、好ましくは前記の数を表す〕の免疫原が
特に好ましい。アミド結合基は、２つの方法のいずれが
で配向され、アミド基中の窒素原子が担体のアミノ基に
由来するもので、炭素原子が適切なα−置換誘導体（例
えば、カルボン酸）に由来するもので、ｐは担体中の結
合されたアミノ基の平均数（好ましくは前記の数）を表
すか、又は窒素原子が適切なα−置換誘導体（例えば、
アミノ誘導体）に由来し、炭素原子が担体のカルボキシ
ル基に山来し、ｐが担体中の結合されたカルボキシル基
の平均数（打ましくは前記の数）を表す。
抗体
本発明の免疫原接合体を用いる特異的抗体の製造は任忘
の雷用の技術に従う。抗体の形成を誘発する基本的状況
を記載した多数のテキストを利用することができ、例え
ば、バーカー（Ｐａｒｋｃｒ）著うディオイムノアソセ
イ・オブ・バイオロジカリイ・アクティブ・コンパウン
ド、ブレンティスルポール（アメリカ合衆国ニュージャ
ーシイ用エングルウッド・クリマス、１９７６年発行）
を参照することができる。通常の場合、宿主動物、例え
ばつν°ギ、ヤギ、マウス、モルモソ１−又は馬に１（
１１１以上の種々の部位で、通常アジュバントと混合し
て、免疫原接合体を注射する。その後、規則的又は不規
則な間隔で同じ又は異なる部位で更に注射し、最適な力
価に達するまで抗体力価を評価するため採＋１＋目゛る
。宿主動物から採血し、特異的抗血清の適量を得る。抗
血清が現実の分析の実施に使用するのに好適と考えられ
る前に、不所望な物質、例えば非特異的抗体を除去する
ため、必要に応じて精製工程を実施することができる。
の雷用の技術に従う。抗体の形成を誘発する基本的状況
を記載した多数のテキストを利用することができ、例え
ば、バーカー（Ｐａｒｋｃｒ）著うディオイムノアソセ
イ・オブ・バイオロジカリイ・アクティブ・コンパウン
ド、ブレンティスルポール（アメリカ合衆国ニュージャ
ーシイ用エングルウッド・クリマス、１９７６年発行）
を参照することができる。通常の場合、宿主動物、例え
ばつν°ギ、ヤギ、マウス、モルモソ１−又は馬に１（
１１１以上の種々の部位で、通常アジュバントと混合し
て、免疫原接合体を注射する。その後、規則的又は不規
則な間隔で同じ又は異なる部位で更に注射し、最適な力
価に達するまで抗体力価を評価するため採＋１＋目゛る
。宿主動物から採血し、特異的抗血清の適量を得る。抗
血清が現実の分析の実施に使用するのに好適と考えられ
る前に、不所望な物質、例えば非特異的抗体を除去する
ため、必要に応じて精製工程を実施することができる。
体細胞ハイブリッド形成技術によって抗体を得ることも
でき、このような抗体は一般に単クローン性抗体と言わ
れる。このような単クローン性抗体技術の概要は、リン
フオサイド・バイブリド−マス（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ
ｌｌｙｂｒｉｄｏｍａｓ ） 、メルヒャース（Ｍｅ
ｌｃｈｅｒｓ）ら編集、シュプリンガーーフェルラーク
（Ｓｐｒｉｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ） （−１−ニーヨ
ーク、１９７８年発行）、ネイチャー （Ｎａｔｕｒｅ
） 、２６６ ： ４９５（１９７７）、ザイエンス（
Ｓｃｉｅｎｃｅ ）’、２０８：６９２ （１９Ｂ（１
） 、及びメソッズ・イン・エンツイモロジイ（Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ） ７３（
Ｂ部）：３〜４６ （１９８１）に見られる。
でき、このような抗体は一般に単クローン性抗体と言わ
れる。このような単クローン性抗体技術の概要は、リン
フオサイド・バイブリド−マス（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ
ｌｌｙｂｒｉｄｏｍａｓ ） 、メルヒャース（Ｍｅ
ｌｃｈｅｒｓ）ら編集、シュプリンガーーフェルラーク
（Ｓｐｒｉｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ） （−１−ニーヨ
ーク、１９７８年発行）、ネイチャー （Ｎａｔｕｒｅ
） 、２６６ ： ４９５（１９７７）、ザイエンス（
Ｓｃｉｅｎｃｅ ）’、２０８：６９２ （１９Ｂ（１
） 、及びメソッズ・イン・エンツイモロジイ（Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ） ７３（
Ｂ部）：３〜４６ （１９８１）に見られる。
免疫分析技術
本発明の免疫原から製造される抗体は凝集法、ラジオイ
ムノアッセイ、不均一系酵素免疫分析法（米国特許第３
，６５４，０９０号明細書参照）、不均一系螢光免疫分
析法（米国特許第４．２０１，７６３号、同第４，１７
１，３１１号、同第４．１３３．６３９号及び同第３．
９９２．６３１号明細書参照）及び均−系（分離なし）
免疫分ｖｊ法を含めて、任意の免疫分析法及び対応する
試薬系に、ブし１カインアミド及びＮ Ａ Ｉ） Ａを
測定するため使用するごとがてきる。均一・系免疫分析
法は特に好ましく、螢光消光又は増強（米国特許第４，
１６０，０１６号明細Ｐ１．参照）、螢光偏光〔Ｊ。
ムノアッセイ、不均一系酵素免疫分析法（米国特許第３
，６５４，０９０号明細書参照）、不均一系螢光免疫分
析法（米国特許第４．２０１，７６３号、同第４，１７
１，３１１号、同第４．１３３．６３９号及び同第３．
９９２．６３１号明細書参照）及び均−系（分離なし）
免疫分ｖｊ法を含めて、任意の免疫分析法及び対応する
試薬系に、ブし１カインアミド及びＮ Ａ Ｉ） Ａを
測定するため使用するごとがてきる。均一・系免疫分析
法は特に好ましく、螢光消光又は増強（米国特許第４，
１６０，０１６号明細Ｐ１．参照）、螢光偏光〔Ｊ。
ＥｘｐｏＭｅｄ、 ｌ ２２ ： １０２９ （１９
Ｃｉ５）参照〕、酵素、！ル質−標織免疫分析法（米国
特許第４，２７９，９９２号及び英国特許第Ｌ５５２．
６０７号明細書参照〕、補欠分子団−標識免疫分析法（
米国特Ｂ′Ｉ第４＋ ２３８．５６５号明細書参照）、
例えば抑制剤標識を使用する酵素変調剤−標識免疫分析
法（米国特許第４．１３４ 、７Ｑ２号及び同第４，２
７３，８６６号明細書参照）、酵素−標識免疫分析法（
米国特許第３．８１７．８３７ ＝明細■１参照〕、エ
ネルギー移動免疫分析法（米国特許第３．９９６，３４
５号明細書参照）、及び二重抗体立体障害免疫分析法（
米国特許第３，９３５，０７４号及び同第３．９９８．
９４３ 男明細書参照）のような技術を含む。
Ｃｉ５）参照〕、酵素、！ル質−標織免疫分析法（米国
特許第４，２７９，９９２号及び英国特許第Ｌ５５２．
６０７号明細書参照〕、補欠分子団−標識免疫分析法（
米国特Ｂ′Ｉ第４＋ ２３８．５６５号明細書参照）、
例えば抑制剤標識を使用する酵素変調剤−標識免疫分析
法（米国特許第４．１３４ 、７Ｑ２号及び同第４，２
７３，８６６号明細書参照）、酵素−標識免疫分析法（
米国特許第３．８１７．８３７ ＝明細■１参照〕、エ
ネルギー移動免疫分析法（米国特許第３．９９６，３４
５号明細書参照）、及び二重抗体立体障害免疫分析法（
米国特許第３，９３５，０７４号及び同第３．９９８．
９４３ 男明細書参照）のような技術を含む。
均一系免疫分析法は一般に、被分析物と薬剤の標識接合
体とを抗体への結合につい’Ｃｆｌｆｔ合させることに
よって行われ、検出可能の標識の性質が、標識接合体が
抗体によって結合されたときに変化することを特徴とす
る。
体とを抗体への結合につい’Ｃｆｌｆｔ合させることに
よって行われ、検出可能の標識の性質が、標識接合体が
抗体によって結合されたときに変化することを特徴とす
る。
更に、本発明のα−置換誘導体は前記の種々の免疫分析
法を実施するのに必要な標識接合体を製造するため使用
することができる。適切な誘導体は標準的方法で放射性
同位元素で標識されるか、又は螢光性部分で標識されて
いてよい。同様に、好ましい均−系技術用の適切な標識
部分、例えば酵素基質、補欠分子団、酵素変調剤又は酵
素（これは蛋白質であり、同様に前記の免疫原性担体に
結合しうる）は、α−置換誘導体と結合して標識接合体
を生じる。
法を実施するのに必要な標識接合体を製造するため使用
することができる。適切な誘導体は標準的方法で放射性
同位元素で標識されるか、又は螢光性部分で標識されて
いてよい。同様に、好ましい均−系技術用の適切な標識
部分、例えば酵素基質、補欠分子団、酵素変調剤又は酵
素（これは蛋白質であり、同様に前記の免疫原性担体に
結合しうる）は、α−置換誘導体と結合して標識接合体
を生じる。
特に好ましい標識接合体は式：
〔式中−（ＣＯ）βＧＵば
を表し、ｎは１〜１０の整数を表す〕のβ−ガラクトシ
ル−ウンベリフエロン−プロ力インアミド／ＮΔＰＡ接
合体である。このような接合体は、β−ガラクトシル−
ウンベリフェロンカルボン酸く米国ｑｈ詐第４，２２６
，９７８号明細書）と適切なα−アミノ誘導体との標準
縮合によって製造される。
ル−ウンベリフエロン−プロ力インアミド／ＮΔＰＡ接
合体である。このような接合体は、β−ガラクトシル−
ウンベリフェロンカルボン酸く米国ｑｈ詐第４，２２６
，９７８号明細書）と適切なα−アミノ誘導体との標準
縮合によって製造される。
本発明の試薬系又は手段は、本発明によって包含される
所望のプじ１カインアミド又はＮへＰＡ免疫分析法を実
施するため必要な必須化学成分をすべて含む。試薬系は
、工業的に包装された形で、試薬が相溶性である場合に
は組成物又は混合物として、試験具構造体として、又は
試験キラ１〜、即ら必要な試薬を保有する１個以」二の
容器の組合・Ｕ包装物として提供される。所望の結合反
応系に適切な試薬、例えば、本発明の抗体及び標識接合
物を試薬系に含める。勿論、試薬系はこの分野に公知で
、商業的及び使用者の観点で望ましい他の物質、例えば
緩衝剤、希釈剤、標準品等を含んでいζよい。（ａ）本
発明の抗体及び（ｂ）抗体と結合したときに変化する、
検出可能の性質を有する標識接合体を含む均一系競合結
合免疫分析法用の試験キットが特に好ましい。また、本
発明の抗体及び抗体と結合したときに変化する、検出可
能の性質を有する標識接合体を含む試薬組成物と試薬組
成物と組み合わされる固体担体材がら成る試験具も好ま
しい。このような試験具の種々の形のものが１９８０年
１０月３０日に出願された米国特許出願第２０２．３７
８号明細書・（ヨーロッパ特許出願第５１，２１３号明
細書として公告されている）に記載されており、これを
参考のため本明細書に含める。
所望のプじ１カインアミド又はＮへＰＡ免疫分析法を実
施するため必要な必須化学成分をすべて含む。試薬系は
、工業的に包装された形で、試薬が相溶性である場合に
は組成物又は混合物として、試験具構造体として、又は
試験キラ１〜、即ら必要な試薬を保有する１個以」二の
容器の組合・Ｕ包装物として提供される。所望の結合反
応系に適切な試薬、例えば、本発明の抗体及び標識接合
物を試薬系に含める。勿論、試薬系はこの分野に公知で
、商業的及び使用者の観点で望ましい他の物質、例えば
緩衝剤、希釈剤、標準品等を含んでいζよい。（ａ）本
発明の抗体及び（ｂ）抗体と結合したときに変化する、
検出可能の性質を有する標識接合体を含む均一系競合結
合免疫分析法用の試験キットが特に好ましい。また、本
発明の抗体及び抗体と結合したときに変化する、検出可
能の性質を有する標識接合体を含む試薬組成物と試薬組
成物と組み合わされる固体担体材がら成る試験具も好ま
しい。このような試験具の種々の形のものが１９８０年
１０月３０日に出願された米国特許出願第２０２．３７
８号明細書・（ヨーロッパ特許出願第５１，２１３号明
細書として公告されている）に記載されており、これを
参考のため本明細書に含める。
好ましい試験キラｌ−及び試験具に使用される特異性標
識は、前記のように、使用する技術に左右される。
識は、前記のように、使用する技術に左右される。
次に、実施例に基づいて本発明を詳述するが、本発明は
これに限定されるものではない。
これに限定されるものではない。
実施例
試薬
化学名の後の数字は本明細書及び図面に示した構造式に
関する。
関する。
Ａ、薬剤誘導体の製造
Ｎ〜（ｌ−ヘキセン−６−イル）フクルイミ１−′、（
５） 、Ｚ−フタルイミド、ｎ ＝ ４ 。
５） 、Ｚ−フタルイミド、ｎ ＝ ４ 。
トリエヂルアミン４０．５ ｇ Ｃ０，４′：Ｆニル）
を含むエーテルｌ ｌ、 中の１−・＼キャン−６−オ
ー／Ｉｚ（フィル（Ｒ，ＩＥ、 Ｌｙｌｅ）ら著、Ｊ、
ＯｒＢ、 Ｃｈｅｍ、 ２１ ：Ｇｌ （１９５
６））の攪拌溶液にエーテル１００ｍ１中のメタンスル
ホニルクロリド４５．８ｇ（０，４モル）の溶液を流加
した。室温で３時間後、混合物をｉ濾過し、蒸発させて
油を得た。これを乾燥ジメチルボルムアミド（ＤＭＦ）
６００ｍｌ及びカリウムフクルイミド７５ｇ（０，４モ
ル）と混合し、１００℃で１２時間加熱した。溶剤を真
空下に除去し、残渣を酢酸エチルと水との間に分配した
。
を含むエーテルｌ ｌ、 中の１−・＼キャン−６−オ
ー／Ｉｚ（フィル（Ｒ，ＩＥ、 Ｌｙｌｅ）ら著、Ｊ、
ＯｒＢ、 Ｃｈｅｍ、 ２１ ：Ｇｌ （１９５
６））の攪拌溶液にエーテル１００ｍ１中のメタンスル
ホニルクロリド４５．８ｇ（０，４モル）の溶液を流加
した。室温で３時間後、混合物をｉ濾過し、蒸発させて
油を得た。これを乾燥ジメチルボルムアミド（ＤＭＦ）
６００ｍｌ及びカリウムフクルイミド７５ｇ（０，４モ
ル）と混合し、１００℃で１２時間加熱した。溶剤を真
空下に除去し、残渣を酢酸エチルと水との間に分配した
。
有機相を無水硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）上で乾燥
し、ｉ濾過し、溶剤を蒸発させ、残留する油状固体８０
ｇをヘキサン中に採取し、シ戸遇し、ｒ液を分溜して、
Ｎ−（１−ヘキセン−６−イル）フタルイミド６５ｇ（
収率７５％）を澄明な油としてｉフた。沸点１２８〜１
３５℃（０，０１−１−ｍｍ１ｌ。
し、ｉ濾過し、溶剤を蒸発させ、残留する油状固体８０
ｇをヘキサン中に採取し、シ戸遇し、ｒ液を分溜して、
Ｎ−（１−ヘキセン−６−イル）フタルイミド６５ｇ（
収率７５％）を澄明な油としてｉフた。沸点１２８〜１
３５℃（０，０１−１−ｍｍ１ｌ。
ｔｌ−（５−エポキシヘキシル）フタルイミド、Ａ」）
、４二」−乙ルＡ二辷■ユｎ＝４゜塩化メチレン（ＣＩ
Ｉ２ Ｃｈ ） ５０ｍｌ中の前記フタルイミド２．３
ｇ’（１０ミリモル）の溶液を、２５ｍ１のＣ１１２Ｃ
１２中の３−クロロ過安息香酸２．６ｇ（１５ミリモル
）の溶液を添加しながら、重炭酸ナトリウム（Ｎａ１ｌ
ＣＯ３） １．２９ｇ （１５ミリモル）と共に攪拌し
た。室温で３時間攪拌した後、１０％亜硫酸す１〜リウ
ム（Ｎａ２５０３ ）溶液２０ｍ１を添加して、過剰の
過酸を分解した。有機相を分離し、飽和Ｎａ１ｌＣＯ３
溶液で洗浄し、飽和塩化ナトリウム（ＮａＣＩ）溶液で
洗浄し、無水Ｍｇ５Ｏ４Ｊ二で乾燥した。
、４二」−乙ルＡ二辷■ユｎ＝４゜塩化メチレン（ＣＩ
Ｉ２ Ｃｈ ） ５０ｍｌ中の前記フタルイミド２．３
ｇ’（１０ミリモル）の溶液を、２５ｍ１のＣ１１２Ｃ
１２中の３−クロロ過安息香酸２．６ｇ（１５ミリモル
）の溶液を添加しながら、重炭酸ナトリウム（Ｎａ１ｌ
ＣＯ３） １．２９ｇ （１５ミリモル）と共に攪拌し
た。室温で３時間攪拌した後、１０％亜硫酸す１〜リウ
ム（Ｎａ２５０３ ）溶液２０ｍ１を添加して、過剰の
過酸を分解した。有機相を分離し、飽和Ｎａ１ｌＣＯ３
溶液で洗浄し、飽和塩化ナトリウム（ＮａＣＩ）溶液で
洗浄し、無水Ｍｇ５Ｏ４Ｊ二で乾燥した。
シ戸遇し、蒸発し、残留する残渣を分溜して、沸点
□１５６〜１６０℃（０，０１ｍｍｍｍ１ｌの油
としてエポキシド１．６ｇ（収率６４％）を得た。
□１５６〜１６０℃（０，０１ｍｍｍｍ１ｌの油
としてエポキシド１．６ｇ（収率６４％）を得た。
分析： ＣＩ４１１＋ｓ Ｎ Ｏ３としてＣＨＮ
計算値 ６８．５５ ６．１６ ５．７１実測値
６８．８３ ６．２７ ５．７ＯＮ−（６−ジ
エチルアミノ−５−ヒドロキシヘキシル）フタイミド、
（７） 、Ｚ＝フタルイミド、ｎ＝４．
” 、 □−前記のエポキシド
”２４．５ｇ（０，１モル）、ジエチルアミン２２ｇ（
０，３モル）及びエタノール５０ｍ１の混合物を鋼製オ
ートクレーブ中で７時間１００°Ｃで加熱した。冷えた
ら、オートクレーブを開放し、内容物を取り出し、減圧
下に蒸発させた。残渣をエーテルと１０％塩酸との間に
分配さセた。水相を分離し、水酸化ナトリウム（Ｎａ（
ＩＩＩ）溶液で塩基性にし、エーテルで抽出した。エー
テルを除去し、残留する油状残渣を分溜して、フタルイ
ミド１３．６ｇ、（収率４３％）を沸点１８０〜１８５
℃（０，１ｍｍ！Ｉｇ）の澄明な油として得た。
６８．８３ ６．２７ ５．７ＯＮ−（６−ジ
エチルアミノ−５−ヒドロキシヘキシル）フタイミド、
（７） 、Ｚ＝フタルイミド、ｎ＝４．
” 、 □−前記のエポキシド
”２４．５ｇ（０，１モル）、ジエチルアミン２２ｇ（
０，３モル）及びエタノール５０ｍ１の混合物を鋼製オ
ートクレーブ中で７時間１００°Ｃで加熱した。冷えた
ら、オートクレーブを開放し、内容物を取り出し、減圧
下に蒸発させた。残渣をエーテルと１０％塩酸との間に
分配さセた。水相を分離し、水酸化ナトリウム（Ｎａ（
ＩＩＩ）溶液で塩基性にし、エーテルで抽出した。エー
テルを除去し、残留する油状残渣を分溜して、フタルイ
ミド１３．６ｇ、（収率４３％）を沸点１８０〜１８５
℃（０，１ｍｍ！Ｉｇ）の澄明な油として得た。
分析： Ｃｐｓ Ｈ２ａ Ｎ２０３ としてＣＩ（Ｎ
計算値 ６’？、８９ ８：２３ ｓ、ｓ 。
実測値 ６８．０９ ８．３０ ９．４２６−ア
ミノ−１−ジエチルアミノ−２−ヒドロキシヘキナン、
（７） 、Ｚ＝ニアミノｎ−４゜前記フタルイミド（９
，２１ｇ、 ２９．ｉリモル）をヒドラジン永和物１．
８ｇ（３６ミリモル）を含むメタノール１５０ｍ１に溶
かし、３時間還流させた。反応混合物を冷却し、−過し
、ｒ液を分溜して、沸点９２〜９６℃（０，０１ｍｍｍ
ｍ１ｌの澄明な油としてジアミン４．２４ｇ（収率７８
％）を得た。
ミノ−１−ジエチルアミノ−２−ヒドロキシヘキナン、
（７） 、Ｚ＝ニアミノｎ−４゜前記フタルイミド（９
，２１ｇ、 ２９．ｉリモル）をヒドラジン永和物１．
８ｇ（３６ミリモル）を含むメタノール１５０ｍ１に溶
かし、３時間還流させた。反応混合物を冷却し、−過し
、ｒ液を分溜して、沸点９２〜９６℃（０，０１ｍｍｍ
ｍ１ｌの澄明な油としてジアミン４．２４ｇ（収率７８
％）を得た。
分析： Ｃｔｏ Ｎ２４ Ｎ２０としてＣＨＮ
計算値 ６３．１８ １２．８５ １４．８’８実測
値 ６３．５７ １２．３４ １４．１５６ （
ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）−１−ジエ
チルアミノ−２−（Ｎ−フタルイミド）へ圭土ノエＡ玉
Ｙエヱニ侃豆血邪人１スソムーｎ＝１前記ジアミン４ｇ
（２１ミリモル）、ジーｔｅｒｔ−プチルジカーボネー
）４．’６ｇ（２１ミリモル）及び乾燥Ｃｌｈ Ｃ１２
１００＋１！１の混合物を室温で１２時間攪拌した。溶
剤及び揮発性副生成物を減圧下に蒸発させて除去し、６
−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）−１−
ジエチルアミノ−２−ヒドロキシヘキ“ザン６ｇ（収率
１００％）を油として得た。この油を更に精製しなかっ
た。これをフタルイミド３．２７ｇ（２２ミリモル）、
トリフエニルボスフィン５．７７ｇ（２２ミリモル）及
ヒジエチルアソ゛ジカルボキシレ−１−（ＤＥＡＤ）３
、８３ ｇ （’２２ミリモル）と−緒に乾燥テトラヒ
ドロフラン（′ＦＨＦ） １００ｍｌに熔かした。こ
の溶液を室温で１２時間攪拌し、この時点で、反応を完
結するため、更に１．６４ｇ（１１ミリモル）のフタル
イミド及び１．９２ｇ（１１ミリモル）のＤＥＡＤを添
加し、１■拌を１時間続りた。溶剤を除去し、残留する
油をエーテルと１％塩酸との間で分配させた。水相を分
離し、Ｎａ０１１溶液で塩基性にし、エーテルで抽出し
た。ニーデル抽出液を無水ＭＩＩＳＯ４Ｊ二で乾燥し、
ｊ濾過し、蒸発した。生じた淡黄色油を高真空下に乾燥
して、アミノ基が保護されているフタルイミド９．２ｇ
を淡黄色油として得た。
値 ６３．５７ １２．３４ １４．１５６ （
ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）−１−ジエ
チルアミノ−２−（Ｎ−フタルイミド）へ圭土ノエＡ玉
Ｙエヱニ侃豆血邪人１スソムーｎ＝１前記ジアミン４ｇ
（２１ミリモル）、ジーｔｅｒｔ−プチルジカーボネー
）４．’６ｇ（２１ミリモル）及び乾燥Ｃｌｈ Ｃ１２
１００＋１！１の混合物を室温で１２時間攪拌した。溶
剤及び揮発性副生成物を減圧下に蒸発させて除去し、６
−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）−１−
ジエチルアミノ−２−ヒドロキシヘキ“ザン６ｇ（収率
１００％）を油として得た。この油を更に精製しなかっ
た。これをフタルイミド３．２７ｇ（２２ミリモル）、
トリフエニルボスフィン５．７７ｇ（２２ミリモル）及
ヒジエチルアソ゛ジカルボキシレ−１−（ＤＥＡＤ）３
、８３ ｇ （’２２ミリモル）と−緒に乾燥テトラヒ
ドロフラン（′ＦＨＦ） １００ｍｌに熔かした。こ
の溶液を室温で１２時間攪拌し、この時点で、反応を完
結するため、更に１．６４ｇ（１１ミリモル）のフタル
イミド及び１．９２ｇ（１１ミリモル）のＤＥＡＤを添
加し、１■拌を１時間続りた。溶剤を除去し、残留する
油をエーテルと１％塩酸との間で分配させた。水相を分
離し、Ｎａ０１１溶液で塩基性にし、エーテルで抽出し
た。ニーデル抽出液を無水ＭＩＩＳＯ４Ｊ二で乾燥し、
ｊ濾過し、蒸発した。生じた淡黄色油を高真空下に乾燥
して、アミノ基が保護されているフタルイミド９．２ｇ
を淡黄色油として得た。
Ｎ −（１−（４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
アミノブチル）−２−（ジエチルアミノ）−エチル〕−
４−ニトロヘンズアミド、（２）、、ｚ−保設鷹１１に
ヱｚｙ二」＝４・ −−前記の油をヒ
ｌ′ラジン水和物１．２ｇ（２４ミリモル）を含むエタ
ノール２００ｍ１中で２時間還流することによって遊離
アミン〔（１）、Ｚ−アミノ、ｎ−４〕に変えた。溶液
を冷却し、コ戸遇し、溶剤を減圧下に除去し、得られた
油をエーテルと１０％Ｎａ０１１溶液との間で分配させ
た。有機相を分離し、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、無
水ＭｇＳＯ４上で乾燥した。シ戸遇し、シ戸液を蒸発し
て、−級アミン５、５３ ｇを澄明な油として得た。こ
の溶液を乾燥Ｔｌｌ Ｆ ２００ｍｌに溶かした。溶液
に無水に２Ｃ０３２０ｇ及び４−ニトロヘンジイルクロ
リド７．１４ｇ（３８ミリモル）を加えた。室温で１２
時間攪ｔｉ＝ シた後、溶剤を減圧下に除去し、残渣を
エーテルと１０％Ｎａ０１１溶液との間で分配した。有
機相を分離し、更に１０％Ｎａ０１１ｉ液で洗浄し、次
いで１％塩酸で抽出した。水性酸性相を分離し、Ｎａ０
１ｌで塩基性にし、エーテルで抽出した。エーテル相を
無水ＭｇＳＯ４上で乾燥し、−過し、蒸発した。油状残
渣をエーテルから結晶させ゛Ｃ１融点１０９〜１１１℃
の固体としてニトロヘンズアミＦ ４．６ ｇが得られ
た。
アミノブチル）−２−（ジエチルアミノ）−エチル〕−
４−ニトロヘンズアミド、（２）、、ｚ−保設鷹１１に
ヱｚｙ二」＝４・ −−前記の油をヒ
ｌ′ラジン水和物１．２ｇ（２４ミリモル）を含むエタ
ノール２００ｍ１中で２時間還流することによって遊離
アミン〔（１）、Ｚ−アミノ、ｎ−４〕に変えた。溶液
を冷却し、コ戸遇し、溶剤を減圧下に除去し、得られた
油をエーテルと１０％Ｎａ０１１溶液との間で分配させ
た。有機相を分離し、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、無
水ＭｇＳＯ４上で乾燥した。シ戸遇し、シ戸液を蒸発し
て、−級アミン５、５３ ｇを澄明な油として得た。こ
の溶液を乾燥Ｔｌｌ Ｆ ２００ｍｌに溶かした。溶液
に無水に２Ｃ０３２０ｇ及び４−ニトロヘンジイルクロ
リド７．１４ｇ（３８ミリモル）を加えた。室温で１２
時間攪ｔｉ＝ シた後、溶剤を減圧下に除去し、残渣を
エーテルと１０％Ｎａ０１１溶液との間で分配した。有
機相を分離し、更に１０％Ｎａ０１１ｉ液で洗浄し、次
いで１％塩酸で抽出した。水性酸性相を分離し、Ｎａ０
１ｌで塩基性にし、エーテルで抽出した。エーテル相を
無水ＭｇＳＯ４上で乾燥し、−過し、蒸発した。油状残
渣をエーテルから結晶させ゛Ｃ１融点１０９〜１１１℃
の固体としてニトロヘンズアミＦ ４．６ ｇが得られ
た。
分析：Ｃ２゜１■、６Ｎ４０５として
ＣＨＮ
旧算値 ６０．５３ ８．３１１２．８４実測埴
６’０．５０ ８．４４ １２．５６Ｎ−（１’−
（４−アミツブデル）−１１ジエチルアミノ）エチル〕
−４−アミノベンズアミド、（３） 、Ｚ−アミノ、ｎ
＝ ４ 。
６’０．５０ ８．４４ １２．５６Ｎ−（１’−
（４−アミツブデル）−１１ジエチルアミノ）エチル〕
−４−アミノベンズアミド、（３） 、Ｚ−アミノ、ｎ
＝ ４ 。
エタノール１（１０ｍｌ中の前記の二トロヘンスアミｔ
”４．５ ｇ （１０ミリモル）の溶液を１０％パラジ
ウム付活性炭（Ｐｄ／Ｃ） ５００ｎｖ上テ５０ｐｓｉ
の水素で水素添加した。これをう戸遇し、蒸発して芳香
族アミン３．４５ ｇを油として得た。これを無水トリ
フルオロ酢酸５０ｍ１に溶かし、０ ”ｃで１時間放置
した。過剰のトリフルオロ酢酸を減圧下に除去し、残渣
を水中に取った。これをプ濾過し、ｊＦ液をに、ＣＩで
飽和し、Ｎａ０１１で塩基性にした。溶液をＣｌＩＣｌ
３で抽出し、抽出液を乾燥し、ｊ濾過し、蒸発した。ア
ミノ−官能基を自するプロヵインアミド誘導体（３）（
Ｚ＝ＮＩ（２、ｎ＝４）１．４ｇを澄明な油として得た
。
”４．５ ｇ （１０ミリモル）の溶液を１０％パラジ
ウム付活性炭（Ｐｄ／Ｃ） ５００ｎｖ上テ５０ｐｓｉ
の水素で水素添加した。これをう戸遇し、蒸発して芳香
族アミン３．４５ ｇを油として得た。これを無水トリ
フルオロ酢酸５０ｍ１に溶かし、０ ”ｃで１時間放置
した。過剰のトリフルオロ酢酸を減圧下に除去し、残渣
を水中に取った。これをプ濾過し、ｊＦ液をに、ＣＩで
飽和し、Ｎａ０１１で塩基性にした。溶液をＣｌＩＣｌ
３で抽出し、抽出液を乾燥し、ｊ濾過し、蒸発した。ア
ミノ−官能基を自するプロヵインアミド誘導体（３）（
Ｚ＝ＮＩ（２、ｎ＝４）１．４ｇを澄明な油として得た
。
Ｂ、免疫原の製造
先に製造したアミノ−官能基を有するプロカインアミド
誘導体（９，５ＩＩＩｇ’ （３５マイクロモル）〕を
試験管中で蒸留水０．５ｍｌに溶かした。小さい磁気撹
拌棒をイ」番」、溶液のｐＨを０． Ｉ Ｎ ｌｌＣｌ
でｐＨ４，０に調節した。溶液を水浴中で冷却し、■−
エチルー３ （３−−ジメヂルアミノプロピル）カル
ボジイミド９−６ｍｇ（５０マイクロモル）を加え、溶
かした。蒸留水０．５ｍｌに溶解し７たウシ血清アルブ
ミン（２５ｍｇ、３５マイクロモル）をプロ力インアミ
ド誘導体及びカルボジイミドを含む溶液に徐々に添加し
た。反応混合物を４℃で２４時間静置し、次いで１βの
蒸留水に対して透析し、蒸留水を３回変えた。ナトリウ
ムアジドを０．１％の最終濃度に添加した。免疫原の蛋
白質濃度を食塩水（０，８５％ＮａＣ１）でｌｎｗ／ｍ
ｌの濃度に調節した。
誘導体（９，５ＩＩＩｇ’ （３５マイクロモル）〕を
試験管中で蒸留水０．５ｍｌに溶かした。小さい磁気撹
拌棒をイ」番」、溶液のｐＨを０． Ｉ Ｎ ｌｌＣｌ
でｐＨ４，０に調節した。溶液を水浴中で冷却し、■−
エチルー３ （３−−ジメヂルアミノプロピル）カル
ボジイミド９−６ｍｇ（５０マイクロモル）を加え、溶
かした。蒸留水０．５ｍｌに溶解し７たウシ血清アルブ
ミン（２５ｍｇ、３５マイクロモル）をプロ力インアミ
ド誘導体及びカルボジイミドを含む溶液に徐々に添加し
た。反応混合物を４℃で２４時間静置し、次いで１βの
蒸留水に対して透析し、蒸留水を３回変えた。ナトリウ
ムアジドを０．１％の最終濃度に添加した。免疫原の蛋
白質濃度を食塩水（０，８５％ＮａＣ１）でｌｎｗ／ｍ
ｌの濃度に調節した。
免疫原（１ｎｗ／ｍｌ） ６ ｍｌをフロイントの完全
アジュバント１２ｍ１及び食塩水６ｍｌと合した。ウザ
ギを毎回この混合物２ｍｌで同時に免疫処理した。
アジュバント１２ｍ１及び食塩水６ｍｌと合した。ウザ
ギを毎回この混合物２ｍｌで同時に免疫処理した。
４週間後、不完全フロインドアジュバントで製造した同
じ混合物で再免疫処理した。２週間毎に、ブースター免
疫を繰り返した。ブースター（＆１週間で試験採血を行
った。初回免疫後４カ月で適当な力価を有する抗血清が
得られた。
じ混合物で再免疫処理した。２週間毎に、ブースター免
疫を繰り返した。ブースター（＆１週間で試験採血を行
った。初回免疫後４カ月で適当な力価を有する抗血清が
得られた。
Ｃ０標識接合体の製造
Ｎ−（４’−（４−アミノベンズアミド）−４−（２−
ジエチルアミノエチル）ブチル〕−７−β−カラクトシ
ルクマリン−３−カルボキシアミ上乾燥ＤＭＦ４０ｍｌ
中の７−β−ガラクトシルクマリン−３−カルボン酸〔
ハードＣＪ、 Ｐ、 １３ｕｒｄ）ら著Ｃｌ１ｎ、 Ｃ
ｈｅｍ、 ２３ ：１４０２ （１９７７） ）１
．４ｇ（３，Ｅｔミリモル）の攪拌懸濁液にトリエチル
アミン４００ｍｇ（４ミリモル）を加えた。混合物を均
一になるまで攪拌し、アルゴン下に一１０℃に冷却し、
クロルギ酸イソブチル５１０■（４ミリモル）と混合し
た。反応混合物をこの温度で３０分攪拌して混成無水物
の形成を完成さ・ｌた。
ジエチルアミノエチル）ブチル〕−７−β−カラクトシ
ルクマリン−３−カルボキシアミ上乾燥ＤＭＦ４０ｍｌ
中の７−β−ガラクトシルクマリン−３−カルボン酸〔
ハードＣＪ、 Ｐ、 １３ｕｒｄ）ら著Ｃｌ１ｎ、 Ｃ
ｈｅｍ、 ２３ ：１４０２ （１９７７） ）１
．４ｇ（３，Ｅｔミリモル）の攪拌懸濁液にトリエチル
アミン４００ｍｇ（４ミリモル）を加えた。混合物を均
一になるまで攪拌し、アルゴン下に一１０℃に冷却し、
クロルギ酸イソブチル５１０■（４ミリモル）と混合し
た。反応混合物をこの温度で３０分攪拌して混成無水物
の形成を完成さ・ｌた。
ＤＭＦ２５ｍｌ中の前記のアミン（３） 、Ｚ−アミノ
、ｒ＋＝４（１，１５ｇ、３．８ミリモル）のｌ客演を
添加し、反応混合物を０℃で１２時間放置した。
、ｒ＋＝４（１，１５ｇ、３．８ミリモル）のｌ客演を
添加し、反応混合物を０℃で１２時間放置した。
真空ポンプに１１けた回転蒸発器で濃縮し、ガラス状残
渣を水に取り、ｉｒ＝過した。シ戸液のｐＨをＮａ１ｌ
ＣＯ３溶液で８．０に調節し、シリカゲル２０ｇを加え
、溶剤を減圧下で除去した。含浸した吸着剤を酢酸エチ
ル中で調整したシリカゲル１００ｇのカラムの上に置い
た。カラムを酢酸エチル１１で洗浄しく捨てた）、次に
エタノールで溶離した。２０ｍ１のフラクションを集め
た。フラクション５０〜２２１をプールし、蒸発させて
、３３０■（収率１３％）の標識プロ力インアミド接合
体が融点１７５〜１７７℃の白色固体として得られた。
渣を水に取り、ｉｒ＝過した。シ戸液のｐＨをＮａ１ｌ
ＣＯ３溶液で８．０に調節し、シリカゲル２０ｇを加え
、溶剤を減圧下で除去した。含浸した吸着剤を酢酸エチ
ル中で調整したシリカゲル１００ｇのカラムの上に置い
た。カラムを酢酸エチル１１で洗浄しく捨てた）、次に
エタノールで溶離した。２０ｍ１のフラクションを集め
た。フラクション５０〜２２１をプールし、蒸発させて
、３３０■（収率１３％）の標識プロ力インアミド接合
体が融点１７５〜１７７℃の白色固体として得られた。
免疫分析法
プロ力インアミドに関する均−系基質一標識螢光免疫分
析法（ＳＬＦ１＾−米国特許第４，２７９，９９２号明
細書）を下記のように設定した。
析法（ＳＬＦ１＾−米国特許第４，２７９，９９２号明
細書）を下記のように設定した。
Δ、試薬
１、抗体／酵素試薬−β−ガラクトシダーゼ０．００！
５単位／ｍｌ、抗血清の不存在での螢光の２２％に螢光
を減少させるのに十分な、プロ力インアミド免疫原に対
する抗血清及びす１−リウＪいアシド川５．’４ｎＭを
含む５０ｍＭビンン♀妥ｔ＋ｉン（１（Ｎ、 Ｎ−ビ
ス−（２−ヒドロキシエチル）グリシン〕、〔カリフＡ
ルニア州うジョラのカルビオヘムーベーリング社（Ｃａ
ｌｂｉｏｃｂｅｍ−Ｂｅｌ＋ｒｉｎｇ Ｃｏｒｐ、）
） ％ ｐＨ８，３。
５単位／ｍｌ、抗血清の不存在での螢光の２２％に螢光
を減少させるのに十分な、プロ力インアミド免疫原に対
する抗血清及びす１−リウＪいアシド川５．’４ｎＭを
含む５０ｍＭビンン♀妥ｔ＋ｉン（１（Ｎ、 Ｎ−ビ
ス−（２−ヒドロキシエチル）グリシン〕、〔カリフＡ
ルニア州うジョラのカルビオヘムーベーリング社（Ｃａ
ｌｂｉｏｃｂｅｍ−Ｂｅｌ＋ｒｉｎｇ Ｃｏｒｐ、）
） ％ ｐＨ８，３。
２、接合体試薬−ツイーン（Ｔｗｅｅｎ ） ２’０洗
浄剤〔アメリ合衆国ニュージャーシイ州フェアローンの
フィ、７シヤー・サイエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ
５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ） ） ０．０１％（Ｖ／■）
及びβ−ＧＵ−プロカプロアミド０．０２０八あ、単位
を含む３０ｍＭギ酸塩緩衝液、ｐｌ＋３．５゜ ３、プロ力インアミド標準品−正當ヒト血清に添加した
米国薬局方標準品プロ力インアミドを、ナ１−リウムア
ジド１５．４ ｒｎ Ｍを含む５０ｍＭヒシン緩衝液で
５０倍に希釈したもの。
浄剤〔アメリ合衆国ニュージャーシイ州フェアローンの
フィ、７シヤー・サイエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ
５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ） ） ０．０１％（Ｖ／■）
及びβ−ＧＵ−プロカプロアミド０．０２０八あ、単位
を含む３０ｍＭギ酸塩緩衝液、ｐｌ＋３．５゜ ３、プロ力インアミド標準品−正當ヒト血清に添加した
米国薬局方標準品プロ力インアミドを、ナ１−リウムア
ジド１５．４ ｒｎ Ｍを含む５０ｍＭヒシン緩衝液で
５０倍に希釈したもの。
Ｂ、プロカインアミドに対する抗血清によるβ−Ｇ ｔ
Ｊ−プロ力インアミドの加水分解の抑制。
Ｊ−プロ力インアミドの加水分解の抑制。
β−カラクトシダーゼ０．００１５単位／ｍｌを含むビ
シン緩衝液１．５ｍｌに抗血清を量を増加しながら添加
した。各キュヘットに接合体試薬５ｏμＬを加えて攪拌
しながら反応を開始させた。２０分後、各キュベツトに
おいて螢光の強度を測定した（励起４００ｎｍ、発光４
５０ｎｍ）。結果を第１表に示す。
シン緩衝液１．５ｍｌに抗血清を量を増加しながら添加
した。各キュヘットに接合体試薬５ｏμＬを加えて攪拌
しながら反応を開始させた。２０分後、各キュベツトに
おいて螢光の強度を測定した（励起４００ｎｍ、発光４
５０ｎｍ）。結果を第１表に示す。
第１表
坑ｌＪＬ島１７Ｌ） 楚１−
〇２．７
４２．３
８ （１，６
１２０，４
１５０，３
Ｃ０分析法及び結果
キュベツト中の抗体／酵素試薬１．５ｍｌに希釈したプ
ロカインアミド標準品５０μＬ（マイクロリットル）を
添加した。次に、反応を開始させるため、各キュベツト
に混合しながら接合体試薬５゜μＬを添加した。２０分
後、各キュベツトにおける螢光の強度を測定した（励起
４０．０ ｎ ｍ、発光４５０ｎｍ） 。
ロカインアミド標準品５０μＬ（マイクロリットル）を
添加した。次に、反応を開始させるため、各キュベツト
に混合しながら接合体試薬５゜μＬを添加した。２０分
後、各キュベツトにおける螢光の強度を測定した（励起
４０．０ ｎ ｍ、発光４５０ｎｍ） 。
分）バを実施したところ、第２表に示す結果を生した。
第２表
プロ力インアミド 螢光
一工ｐ ｇＪ ｒｎユ、Ｊ−一
〇３，２
４５．１
８７．０
１２ ８．６
１６ ９．７
血清試料中のブロカインアミト濃度を測定するため免疫
分析法を使用することができた。
分析法を使用することができた。
第１図は、プロ力インアミド及びＮへＰΔのα誘導体の
製造経路図、第２図は薬剤のこのような誘導体の形成に
使用するのに特に有用な中間体の製造経路図である。 Ｈ２ＮＣＨ＋ＣＨ２ｉＺ ＣＨ２Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２ （引 ＦＩＧ、１ （１） Ｆ］Ｇ、２ 第１頁の続き ０発 明 者 フレデリック・ニドマント・ワード アメリカ合衆国インヂアナ４６５１ ６エルクハート・ネセダ・ドラ イブ５４３４２
製造経路図、第２図は薬剤のこのような誘導体の形成に
使用するのに特に有用な中間体の製造経路図である。 Ｈ２ＮＣＨ＋ＣＨ２ｉＺ ＣＨ２Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２ （引 ＦＩＧ、１ （１） Ｆ］Ｇ、２ 第１頁の続き ０発 明 者 フレデリック・ニドマント・ワード アメリカ合衆国インヂアナ４６５１ ６エルクハート・ネセダ・ドラ イブ５４３４２
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）式： 〔式中Ｘは水素又はアセチル基を表す〕の基の１個以上
を免疫原性担体物質に共有結合して含む免疫原。 （２）前記担体物質が蛋白質又はポリペプチドである特
許請求の範囲第１項記載の免疫原。 （３）前記の基の１個以上が、水素を除いて１〜２０個
の原子を含む連鎖によって前記担体物質に結合されてい
る特許請求の範囲第１項記載の免疫原。 （４）平均約５０個未満の前記基が前記担体物質に結合
している特許請求の範囲第１項記載の免疫原。 （５）式： 〔式中Ｘは水素又はアセチル基を表し、Ｙはアミド基を
表し、担体は免疫原性蛋白質又はポリペプチド担体物質
であり、ｎは１〜１０の整数を表し、ｐは平均１〜前記
担体物質上の利用しうるアミド結合部位の数を表す〕の
免疫原。 （６）アミド基Ｙ中の炭素原子が担体物質中のカルボキ
シル基に由来し、アミド基Ｙ中の窒素原子が式中のアル
キレン基に結合し、ｐが平均１〜前記担体物質中の利用
しうるカルボキシル基の数である特許請求の範囲第５項
記載の免疫原。 （７）ｎが４である特許請求の範囲第６項記載の免疫原
。 （８）式： 〔式中Ｘは水素又はアセデル基を表す〕の基の１個以」
二を免疫原性担体物質に共有結合して含む免疫原に対し
て製造された抗体。 （９）式： 〔式中×は水素又はアセチル基を表し、Ｙは゛ｒミ１゛
基を表し、担体は免疫原性蛋白質又はポリペプチド担体
物質であり、ｎは１〜１０の整数を表し、ｐば平均１〜
前記担体物質上の利用しうるアミＥ′結合部位の数を表
す〕の免疫原に対して製造された抗体。 （１０）プロ力インアミド又はＮ−アセチルプロ力イン
アミドを測定する免疫分析法において、式〔式中Ｘは水
素又はアセチル基を表す〕の基の１個以上を免疫原性担
体物質に共有結合して含む免疫原に対して製造された抗
体を使用することを特徴とする免疫分析法。 （１１）免疫分析法によりプロ力インアミド又はＮ−ア
セチルプロ力インアミドを測定する試薬系において、式
： 〔式中Ｘは水素又はアセチル基を表す〕の晶の１個以」
二を免疫原性担体物質に共有結合して含む免疫原に対し
て製造された抗体を使用することを特徴とする試薬系。 （１２）均一系免疫分析法によりプロ力インアミド又は
Ｎ−アセチルプロ力インアミドを測定する試験キットに
おいて、（ａ）式： 〔式中Ｘは水素又はアセチル基を表す〕の基の１個以上
を免疫原性担体物質に共有結合して含む免疫原に対して
製造された抗体及び（−ｂ）前記の抗体と結合したとき
に変化する検出可能の性質を有する標識接合体を含むこ
とを特徴とする試験キ、ノド。 （１３）均一系免疫分析法によりプロカインアミド又は
Ｎ−アセチルプロカインアミドを測定する試験具におい
て、（ａ ）式： 〔式中Ｘは水素又はアセチル基を表す〕の基の１個以上
を免疫原性担体物質に共有結合して含む免疫原に対して
製造された抗体及び前記の抗体と結合したときに変化す
る検出可能の性質を有する標識接合体を含む試薬組成物
並びに（ｂ）前記試薬と組合せられイそ固体担体を含む
ことを特徴とする試験具。 （１４）式： 〔式中Ｘは水素又はアセチル基を表し、ｎは１〜１０の
整数を表し、Ｚはカルボキシル基又はアミノ基を表す〕
の化合物。 （１５）Ｚがアミノ基である特許請求の範囲第１４項記
載の化合物。 （１６）ｎが４である特許請求の範囲第１５項記載の化
合物。 （Ｉ７）式： ％式％ ） 〔式中ｎは１〜６の整数を表し、Ｚはカルボキシル基又
はアミノ基を表す〕の化合物。 （Ｌ８）Ｚがアミノ基である特許請求の範囲第１７項記
載の化合物。 （１９）ｎが４である特許請求の範囲第１８項記載の化
合物。 （２０）式： 〔式中Ｘは水素又はアセチル基を表し、（ＣＯ）βＣＵ
は ヲ表シ、ｎは１〜ｌｏの整数を表す〕のβ−ガラクトシ
ルーウンへりフェロンー標識接合体。 （２１）ｎが４である特許請求の範囲第２０項記載の接
合体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US45522383A | 1983-01-03 | 1983-01-03 | |
| US455223 | 2003-06-04 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59130848A true JPS59130848A (ja) | 1984-07-27 |
Family
ID=23807921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58245602A Pending JPS59130848A (ja) | 1983-01-03 | 1983-12-28 | 免疫原、抗体、プロカインアミド又はＮ−アセチルプロカインアミドを測定する免疫分析法、試薬系、試験キツト及び試験具、プロカインアミド誘導体並びにβ−ガラクトシル−ウンベリフエ |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0113102A2 (ja) |
| JP (1) | JPS59130848A (ja) |
| AU (1) | AU546777B2 (ja) |
| ES (1) | ES8500456A1 (ja) |
| IL (1) | IL69997A0 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH653670A5 (de) * | 1983-03-03 | 1986-01-15 | Hoffmann La Roche | Benzamid-derivate. |
| US5837703A (en) * | 1993-03-31 | 1998-11-17 | Cell Therapeutics, Inc. | Amino-alcohol substituted cyclic compounds |
| US5641783A (en) * | 1993-11-12 | 1997-06-24 | Cell Therapeutics, Inc. | Substituted amino alcohol compounds |
| IL109161A0 (en) * | 1993-03-31 | 1994-06-24 | Cell Therapeutics Inc | Amino alcohol derivatives, methods for the preparation thereof, and pharmaceutical compositions containing the same |
| US5439798A (en) * | 1993-12-17 | 1995-08-08 | Boehringer Mannheim Corporation | Maleimide adduct conjugates of procainamide and NAPA |
| US5525474A (en) * | 1994-01-31 | 1996-06-11 | Boehringer Mannheim Corporation | Piperidine analogs and conjugates of procainamide and NAPA |
| CN113030463B (zh) * | 2021-02-04 | 2023-08-11 | 北京邦腾生物科技有限公司 | 一种检测疫苗中蛋白a等杂质的试纸条及其应用 |
-
1983
- 1983-10-18 IL IL69997A patent/IL69997A0/xx unknown
- 1983-10-26 AU AU20583/83A patent/AU546777B2/en not_active Ceased
- 1983-12-21 EP EP83112863A patent/EP0113102A2/en not_active Withdrawn
- 1983-12-28 JP JP58245602A patent/JPS59130848A/ja active Pending
-
1984
- 1984-01-03 ES ES528657A patent/ES8500456A1/es not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL69997A0 (en) | 1984-01-31 |
| AU546777B2 (en) | 1985-09-19 |
| ES528657A0 (es) | 1984-10-01 |
| ES8500456A1 (es) | 1984-10-01 |
| EP0113102A2 (en) | 1984-07-11 |
| AU2058383A (en) | 1984-07-05 |
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