DE102007044100A1

DE102007044100A1 - Verfahren zur Reduktion der Viren- und Mikroorganismen-Belastung feststoffhaltiger biologischer Extrakte

Info

Publication number: DE102007044100A1
Application number: DE200710044100
Authority: DE
Inventors: Christian Dr. Rämsch; Thomas Dr. Schräder; Thomas Dr. Moest; Manfred Dr. Kurfürst
Original assignee: Nordmark Arzneimittel GmbH and Co KG
Current assignee: Nordmark Arzneimittel GmbH and Co KG
Priority date: 2007-09-14
Filing date: 2007-09-14
Publication date: 2009-03-19

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Reduktion der Viren- und Mikroorganismen-Belastung feststoffhaltiger biologischer Extrakte. Dabei ist vorgesehen, daß das Verfahren die Schritte (a) Bereitstellen eines feststoffhaltigen biologischen Extraktes in Form einer Suspension, die aus einer flüssigen Phase und darin dispergierten Feststoffteilchen besteht, wobei der Extrakt in Schritt (a) ein Gemisch aus Enzymen, Proteinen und Peptiden umfasst, das zu einem Teil in der flüssigen Phase gelöst und zu einem anderen Teil an die Feststoffteilchen gebunden sein kann oder in pulverförmiger fester Form vorliegt; und (b) Bestrahlen des in Schritt (a) bereitgestellten biologischen Extraktes; umfasst, wobei - die zur Bestrahlung verwendete Strahlung aus der Gruppe ausgewählt ist, die ultraviolette Strahlung, Röntgenstrahlung, beta-Strahlung und gamma-Strahlung umfasst und - die enzymatische Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung zumindest 50% der enzymatischen Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes vor der Bestrahlung beträgt.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Reduktion der Viren- und Mikroorganismen-Belastung feststoffhaltiger biologischer Extrakte, ein mittels dieses Verfahrens hergestelltes feststoffhaltiges biologisches Extrakt, sowie Verwendungen des Produktes.
Viren sind Nukleinsäuren, die von einer Proteinhülle umgeben sind. Bei behüllten Viren kommt noch eine äußere Lipidhülle hinzu. Da sich Viren nicht eigenständig replizieren können, sind sie auf Wirte angewiesen. Dem entsprechend kommen sie in praktisch allen Lebewesen der Erde vor. Extrakte, die aus biologischem Ausgangsmaterial gewonnen werden, können u. U. eine hohe Virenbelastung aufweisen. Die wenigsten der bekannten Viren sind für den Menschen pathogen, da sie eine hohe Wirtsspezifität besitzen. Um eine Gefährdung der Konsumenten von vorn herein auszuschließen, sollten Extrakte, die für den menschlichen Verzehr bestimmt sind oder die als Wirkstoff in Arzneimitteln eingesetzt werden, grundsätzlich eine möglichst geringe bzw. keine Virenbelastung aufweisen. Nicht immer führt das eigentliche Produktionsverfahren zu einer signifikanten Inaktivierung oder Entfernung der vorhandenen Viren, so dass, insbesondere bei der Herstellung pharmazeutischer Wirkstoffe, zusätzliche Abreicherungs- oder Inaktivierungsschritte in das Verfahren integriert werden müssen.
Für die Abreicherung oder Inaktivierung von Viren und Mikroorganismen sind zahlreiche Methoden beschrieben [K.H. Wallhäuser, Praxis der Sterilisation Desinfektion-Konservierung, Thieme Verlag, Stuttgart 1995]. Neben der mechanischen Entfernung durch z. B. Chromatographie oder Filtration können diese Kontaminationen durch Zusatz chemischer Verbindungen selektiv inaktiviert werden. Letzteres Verfahren ist aber in sofern problematisch, als diese Verbindungen wieder vollständig entfernt werden müssen, damit sie im Endprodukt keine toxischen Effekte hervorrufen. Physikalische Methoden, wie z. B. Hitzebehandlung oder Bestrahlung sind ebenfalls gängige Verfahren zur Inaktivierung von Viren oder Mikroorganismen.
Eine besondere Herausforderung ist die Inaktivierung oder Entfernung von Viren aus komplexen biologischen Extrakten, deren Wirksubstanz Enzymgemische sind, ohne dabei die enzymatische Aktivität der Proteine zu zerstören oder zu verändern.
Die Inaktivierung von Mikroorganismen oder Viren in wässrigen Lösungen durch Bestrahlung ist eine gängige und vielfach beschriebene Methode (Oye AK und Rimstad E. 2001; Hirayama et at. 1998; Henderson et at. 1992; Chin et at. 1997). Neben β- und γ-Strahlung kommt hier auch Röntgen- oder UV-Strahlung zum Einsatz.
Von besonderem wirtschaftlichem Interesse ist der pharmazeutische Wirkstoff Pankreatin, der als Extrakt aus der Schweinepankreas gewonnen wird und in getrockneter Form als orales Therapeutikum Anwendung findet, wie in DE-A-3248588 beschrieben. Die Wirksubstanzen im Pankreatin sind u. a. verschiedene polymerabbauende Enzyme, wie Lipasen, Amylasen und Proteasen. Eine Voraussetzung für die Wirksamkeit des Therapeutikums ist, dass alle Enzyme in einem bestimmten Verhältnis und in aktiver Form im Wirkstoff vorhanden sind. Eine Besonderheit des Pankreatins ist, dass die enthaltenen Enzyme teilweise in Lösung und teilweise an Partikel gebunden vorliegen und es sich somit um eine Suspension handelt.
Untersuchungen zur Virusbelastung von Pankreatin haben gezeigt, dass porcines Parvovirus (PPV) als einziges Virus im Pankreatin als infektiöses Partikel nachweisbar ist. Die zoonotischen Viren EMCV, PEV9 und HEV sowie Rota- und Reovirus konnten weder als infektiöse Partikel noch auf Genomebene nachgewiesen werden. Grundsätzlich sollten pharmazeutische Wirkstoffe keine infektiösen Viren enthalten. Obwohl PPV nach derzeitigem Kenntnisstand für den Menschen nicht pathogen ist, sollte das Ziel deshalb ein PPV-freies Pankreatin sein. Da der aktuelle Produktionsprozess offenbar nicht in der Lage ist, die vorhandene PPV-Belastung vollständig zu entfernen (Titer im Pankreatin bis maximal 2,8 log/g), müssen zusätzliche virenreduzierende Schritte implementiert werden.
Klassische vireninaktivierende Methoden wie z. B. trockene oder feuchte Hitze oder virenabreichernde Methoden wie z. B. Filtration oder Chromatographie lassen sich bei Extrakten aus biologischem Ausgangsmaterial und insbesondere bei Organextrakten ohne Veränderung der Zusammensetzung und/oder hohe Produktverluste in den meisten Fällen nicht anwenden. Ein besonderes Problem dieser Extrakte sind häufig nicht gelöste Bestandteile, die ihnen eine suspensionsartige Eigenschaft verleihen. Dadurch kommt es zur Verblockung von Filtern oder Chromatographiesäulen. Weiterhin sind die wirksamen Substanzen oft sowohl in der gelösten als auch in der partikulären Fraktion verteilt und werden somit durch mechanische Abtrennverfahren teilweise entfernt.
Pankreatin stellt aufgrund seiner natürlichen Virusbelastung und seines Suspensionscharakters ein beispielhaftes feststoffhaltiges biologisches Extrakt dar. PPV ist ein häufig verwendetes Modelvirus, da es sich durch eine sehr hohe Resistenz gegenüber verschiedensten Inaktivierungsverfahren auszeichnet. Ein Verfahren, das in der Lage ist, PPV signifikant zu inaktivieren, führt in der Regel auch zu hohen Abreicherungsfaktoren für andere Viren. Bei klassischen Spiking-Experimenten wird die entsprechende Substanz mit PPV-Laborstämmen gespikt. Diese verhalten sich u. U. anders als die im Pankreatin vorhandenen Wildtypstämme.
Aus US-A-2007/0003430 ist ein Verfahren zur Inaktivierung von Mikroorganismen und Viren bekannt, bei dem die Bestrahlung einer biologischen Flüssigkeit mit UV-Strahlung vorgesehen ist. Das Verfahren sieht den Einsatz eines speziellen Reaktors vor, durch den die biologische Flüssigkeit geführt wird. Das Verfahren erfordert die Anwendung einer primären Strömung und einer sekundären Strömung.
Aus EP 1 464 342 ist ein weiteres Verfahren zur Sterilisation flüssiger Medien mittels UV-Bestrahlung bekannt. Auch dieses Verfahren ist auf die Bestrahlung flüssiger Medien gerichtet.
Es besteht darüber hinaus ein Bedarf an Verfahren, bei denen die in einem feststoffhaltigen biologischen Extrakt enthaltenen viralen und bakteriellen Belastungen vollständig oder auf ein Minimum reduziert werden. Das Verfahren muss gleichermaßen für Feststoffe und Suspensionen geeignet sein. Das Verfahren soll insbesondere die Inaktivierung von PPV-Stämmen in Pankreatin ermöglichen.
Aufgabe der Erfindung ist es, die Nachteile nach dem Stand der Technik zu beseitigen. Es soll insbesondere ein Verfahren zur Reduktion der Viren- und Mikroorganismen-Belastung in feststoffhaltigen biologischen Extrakten angegeben werden, das für Feststoffe und Suspensionen geeignet ist, die Aktivität der in dem biologischen Extrakt enthaltenen Enzyme nicht wesentlich verringert, die pharmakologisch beabsichtigten Eigenschaften nicht verschlechtert und keine toxischen chemischen Verbindungen erzeugt. Ferner sollen mittels des Verfahrens hergestellte Erzeugnisse und Verwendungen der Erzeugnisse angegeben werden.
Diese Aufgabe wird durch die Merkmale der Ansprüche 1, 14 und 16 gelöst. Zweckmäßige Ausgestaltungen der Erfindung ergeben sich aus den Merkmalen der Ansprüche 2 bis 13, 15 sowie 17 bis 19.
Nach Maßgabe der Erfindung ist ein Verfahren zur Reduktion der Viren- und Mikroorganismen-Belastung feststoffhaltiger biologischer Extrakte vorgesehen, umfassend

(a) das Bereitstellen eines feststoffhaltigen biologischen Extraktes in Form einer Suspension, die aus einer flüssigen Phase und darin dispergierten Feststoffteilchen besteht, wobei der Extrakt in Schritt (a) ein Gemisch aus Enzymen, Proteinen und Peptiden umfasst, das zum einen Teil in der flüssigen Phase gelöst und zu einem anderen Teil an die Feststoffteilchen gebunden sein kann, oder in pulverförmiger fester Form vorliegt; und
(b) das Bestrahlen des in Schritt (a) bereitgestellten biologischen Extraktes;

– die zur Bestrahlung verwendete Strahlung aus der Gruppe ausgewählt ist, die ultraviolette Strahlung, Röntgenstrahlung, β-Strahlung und γ-Strahlung umfasst; und
– die enzymatische Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung zumindest 50% der enzymatischen Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes vor der Bestrahlung beträgt.

Unter dem Begriff „feststoffhaltiges biologisches Extrakt" soll hier ein Extrakt verstanden werden, das (i) vorzugsweise ein Gemisch aus Enzymen, Proteinen und Peptiden enthält, die (ii) als alkoholischer oder wässriger Extrakt aus tierischen Organen (Pankreas, Leber, Magenschleimhaut) gewonnen wurden und iii) sowohl in Lösung als auch an Feststoffe gebunden vorliegen können. Eine solches feststoffhaltiges biologisches Extrakt ist ein komplexes Extrakt. Das Enzym-, Protein- und Peptidgemisch weist vorzugsweise pharmazeutische Aktivität auf.
Ein Beispiel eines derartigen Organextrakts ist das Pankreatin, das aus dem Pankreas gewonnen wird, insbesondere dem Pankreas des Schweins. Aus dem Pankreas wird Pankreatin als pharmazeutischer Wirkstoff gewonnen. Pankreatin enthält u. a. die Enzyme Lipase, Amylase und Protease. Pankreatin ist somit ein feststoffhaltiger biologischer Extrakt im Sinne der vorliegenden Erfindung. Pankreatin wird vorzugsweise als wässrig-alkoholischer Extrakt in Schritt (a) bereitgestellt.
Das erfindungsgemäße Verfahren ist auf alle Virusformen, insbesondere DNA- und RNA-Viren, behüllte und unbehüllte Viren, weiterhin auf Virionen und Prionen oder ähnliche biologische Systeme sowie Bakterien anwendbar. Das Verfahren wird bevorzugt zur Verringerung der PPV-Belastung im Pankreatin aus dem Schweine-Pankreas verwendet.
Das erfindungsgemäße Verfahren erlaubt die Reduktion der Viren- und Mikroorganismen-Belastung von feststoffhaltigen biologischen Extrakten, ohne dass sich deren enzymatische Aktivität wesentlich verringert, die pharmakologisch beabsichtigten Eigenschaften verschlechtern oder toxische chemische Verbindungen erzeugt werden. Ferner sollen mittels des Verfahrens hergestellte Erzeugnisse und Verwendungen der Erzeugnisse angegeben werden.
Die enzymatische Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung sollte zumindest 50% der enzymatischen Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes vor der Bestrahlung betragen, bevorzugt zumindest 80%, besonders bevorzugt zumindest 90%.
Die virale Infektiosität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung sollte um einen Faktor von größer als 1 log₁₀ im Vergleich zur viralen Infektiosität vor der Bestrahlung verringert worden ist. Dies gilt insbesondere auch für die virale Infektiosität von porcinem Parvovirus (PPV). Beispielsweise sollte die PPV-Infektiosität im Pankreatin nach der Behandlung um einen Faktor von größer als 1 log₁₀, vorzugsweise größer 3 log₁₀, besonders bevorzugt größer 4 log₁₀, im Vergleich zu dessen Infektiosität vor der Behandlung verringert sein. Vorzugsweise beträgt die Keimbelastung nach der Bestrahlung nicht mehr als 500 KBE/g, bevorzugt nicht mehr als 100.
Bei der Bestrahlung des Extraktes werden keine chemischen Substanzen zugesetzt, so dass die Belastung mit toxischen Substanzen nach der Behandlung nicht höher als vor der Behandlung ist.
Schritt (b) wird vorzugsweise unter Anwendung von β- oder γ-Strahlung sowie Röntgen- oder UV-Strahlung (insbesondere auch UV-C-Strahlung) unterschiedlicher Wellenlänge bzw. Intensität durchgeführt. Erfindungsgemäß ist die Bestrahlung des festen pulverförmigen Extraktes, des in verschiedenen Lösungsmitteln suspendierten Extraktes oder Verdünnungen dieser Suspensionen vorgesehen. Demzufolge kann das in Schritt (a) bereitgestellte Extrakt vor Schritt (b) in einem Lösungsmittel suspendiert werden. Im Fall von Pankreatin ist das Lösungsmittel vorzugsweise ein Wasser-Alkohol-Gemisch, besonders bevorzugt ein Wasser-Isopropanol-Gemisch. Die Verdünnung erfolgt vorzugsweise im Verhältnis 1:1 (Extrakt:Lösungsmittel) bis 1:20, bevorzugt, 1:1 bis 1:10, besonderes bevorzugt 1:1 bis 1:5.
Die Bestrahlung kann im Durchflussverfahren oder im Batchverfahren in einem Behälter unter Rühren stattfinden. Eine gleichmäßige Bestrahlung des Extraktes kann bei feststoffhaltigen Flüssigkeiten durch Variation der Schichtdicke (Durchflussverfahren) oder der Rührergeschwindigkeit (Batchverfahren) erreicht werden. Bei festen Proben kann eine gleichmäßige Bestrahlung durch Variation der Schichtdicke oder geeignete Verwir belung erreicht werden. Die Einwirkzeit der Bestrahlung auf das in Schritt (a) bereitgestellte Extrakt beträgt vorzugsweise mehr als 15 min. Die Bestrahlung wird bevorzugt bei Temperaturen zwischen –10°C und 40°C, besonders bevorzugt zwischen 2°C und 30°C und noch stärker bevorzugt bei 20°C durchgeführt.
Nach Maßgabe der Erfindung ist ferner ein feststoffhaltiger biologischer Extrakt vorgesehen, der durch das erfindungsgemäße Verfahren erhalten wurde. Dieses Extrakt ist durch geringe virale und bakterielle Belastung gekennzeichnet. Trotz der vorherigen Bestrahlung ist seine enzymatische Aktivität nicht wesentlich verringert, sind seine pharmakologisch beabsichtigen Eigenschaften nicht verschlechtert und es weist keine toxischen chemischen Verbindungen auf, die durch die Bestrahlung entstanden sind.
Der erfindungsgemäße, durch Bestrahlung erhaltene Extrakt kann für die Herstellung von pharmazeutischen Therapeutika, insbesondere im Rahmen der oralen Enzymtherapie, sowie als Nahrungs- oder Lebensmittel oder Nahrungsergänzungsmittel verwendet werden. Diese Verwendungen sind insbesondere dadurch gekennzeichnet, dass das feststoffhaltige biologische Extrakt erhalten wurde durch

(a) das Bereitstellen eines feststoffhaltigen biologischen Extraktes; und
(b) das Bestrahlen des in Schritt (a) bereitgestellten biologischen Extraktes;

Die Erfindung wird nachfolgend anhand von Beispielen, die die Erfindung nicht beschränken sollen, unter Bezugnahme auf die Zeichnungen näher erläutert. Dabei zeigt
1 ein Diagramm, das die Abnahme des M2-Phagen-Titers während einer erfindungsgemäßen UV-C-Bestrahlung von unverdünntem und 1:10 verdünntem Extrakt zeigt;
2 ein Diagramm, das die relativen enzymatischen Aktivitäten nach Behandlung von Pankreatin mit unterschiedlichen Strahlendosen in Prozent, bezogen auf die Ausgangsaktivität der unbehandelten Probe, zeigt; und
3 ein Diagramm, das die relative enzymatische Aktivität und Keimzahl nach Behandlung von Pankreatin mit unterschiedlichen Strahlendosen zeigt. Die Enzymaktivitäten in Prozent beziehen sich auf die Ausgangsaktivitäten der unbehandelten Probe. Die Lipaseaktivität wurde zur Überprüfung der Stabilität nach drei und sechs Monaten bestimmt.
Beispiele
Beispiel 1: UV-Bestrahlung eines feststoffhaltigen biologischen Extraktes
Das folgende Beispiel beschreibt die Behandlung von Pankreatin als feststoffhaltigen biologischen Extrakt, das aus dem Schweine-Pankreas gewonnen wurde, mit UV-C-Strahlung.
(1) Durchführung
Die Untersuchungen wurden in einem kontinuierlichen Durchflussreaktor durchgeführt. Eine in 40%igem Isopropanol gelöste Zwischenstufe des Pankreatin-Produktionsprozesses wurde mit einer UV-C-Bestrahlung (254 nm) von 2 J/cm² behandelt. Diese Dosis reicht normalerweise für eine effektive Inaktivierung von Parvoviren aus. Als Modell für PPV wurde ein M2-Phage eingesetzt, der sich wie PPV durch ein sehr kleines Genom auszeichnet. Da die Inaktivierung durch UV-Bestrahlung auf einer Schädigung der Nukleinsäuren beruht, ist eine vergleichbare Genomgröße für die Übertragbarkeit der Ergebnisse besonders wichtig. Alternativ wurde das gleiche Ausgangsmaterial in einem Batch-Rührreaktor über einen Zeitraum von mehreren Stunden einer UV-C-Bestrahlung ausgesetzt und die Kinetik der Phageninaktivierung aufgenommen. Der gleiche Versuch wurde mit 1:10 verdünntem Material wiederholt.
(2) Ergebnisse
Die Abnahme des Phagentiters im Rührreaktor für unverdünntes und verdünntes Pankreatin in Abhängigkeit von der Inkubationsdauer ist in 1 dargestellt.
(3) Bewertung
Die dargestellten Ergebnisse zeigen, dass die mangelnde Inaktivierung von M2-Phagen in unverdünntem Ausgangsmaterial wahrscheinlich auf eine hohe Feststoffkonzentration zurückzuführen ist. Unter den gewählten Bedingungen (hoher Protein-, DNA-, und Fett- und Feststoffgehalt) wird das UV-Licht zum großen Teil von den vorhandenen Pankreatinbestandteilen absorbiert. Eine signifikante Abreicherungskinetik für den M2-Phagen durch Schädigung der DNA konnte erst bei einem Ansatz mit einer Verdünnung von 1:10 nachgewiesen werden.
Beispiel 2: γ-Bestrahlung eines feststoffhaltigen biologischen Extraktes
Das folgende Beispiel beschreibt die Behandlung von Pankreatin als festen biologischen Extrakt, der aus dem Schweine-Pankreas gewonnen wurde, mit γ-Strahlung.
(1) Durchführung
Pankreatin (Wirkstoff) wurde in Dosen von 1 bis 27 kGy bestrahlt und anschließend auf verbleibende enzymatische Aktivitäten überprüft. Nach einer Gabe von 5 kGy wurden zusätzliche Messungen der Enzymaktivität nach 10 Monaten (Stabilität) und eine Bestimmung der KBE/g (Keimbelastung) durchgeführt.
(2) Ergebnisse
Die relativen enzymatischen Aktivitäten nach Behandlung von Pankreatin mit unterschiedlichen Strahlendosen in Prozent bezogen auf die Ausgangsaktivität der unbehandelten Probe sind in 2 gezeigt. Die Stabilität der pankreatischen Enzyme und die Reduktion der Keimbelastung sind in Tabelle 1 dargestellt. Tabelle 1: Stabilität der pankreatischen Enzyme und Reduktion der Keimbelastung nach γ-Bestrahlung (5 kGy)

Lipaseaktivität % Amylaseaktivität % Proteaseaktivität % KBE/g %

vor Bestrahlung 100 100 100 47000

nach Bestrahlung 87 95 100 120

nach 10 Monaten 80 86 97 80
(3) Bewertung
Bei der maximalen für die Untersuchungen verwendeten Strahlendosis (27 kGy) ergibt sich eine maximale Aktivitätsabnahme (Lipase) von ca. 40%. Die Frage, ob diese Strahlendosis für eine effektive Inaktivierung von Par voviruen notwendig ist, kann momentan noch nicht beantwortet werden. Eine wesentlich geringere Dosis von 5 kGy reichte aber aus, um die Bakterienbelastung um mehr als 2,5 log₁₀-Stufen zu reduzieren. Der Verlust der enzymatischen Aktivität betrug unter diesen Bedingungen lediglich 13% (Lipase).
Beispiel 3: β-Bestrahlung eines feststoffhaltigen biologischen Extraktes
Das folgende Beispiel beschreibt die Behandlung von Pankreatin als feststoffhaltigen biologischen Extrakt, der aus dem Schweine-Pankreas gewonnen wurde, mit β-Strahlung.
(1) Durchführung
Pankreatin (Wirkstoff) wurde in Dosen von 4 bis 20 kGy bestrahlt und anschließend auf verbleibende enzymatische Aktivitäten überprüft. Die lipolytische Aktivität wurde nach 3 und 6 Monaten Lagerung nochmals überprüft.
(2) Ergebnisse
Die relative enzymatische Aktivität und Keimzahl nach Behandlung von Pankreatin mit unterschiedlichen Strahlendosen ist in 3 gezeigt. Die Enzymaktivitäten in Prozent beziehen sich auf die Ausgangsaktivitäten der unbehandelten Probe. Die Lipaseaktivität wurde zur Überprüfung der Stabilität nach drei und sechs Monaten bestimmt.
(3) Bewertung
Bei der Behandlung von Pankreatin mit β-Strahlung konnten auch bei einer Strahlendosis von 20 kGy noch Restaktivitäten von > 85% für alle untersuchten Enzyme gemessen werden. Gleichzeitig nahm die Keimzahl um ca. 1,5 log₁₀-Stufen ab. Trotz Stabilitätsverlusten ist die β-Strahlung somit ein geeignetes Verfahren, die Belastung an Mikroorganismen im Pankreatin zu reduzieren.
ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
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Zitierte Patentliteratur

- DE 3248588 A [0006]
- US 2007/0003430 A [0010]
- EP 1464342 [0011]

Zitierte Nicht-Patentliteratur

- K.H. Wallhäuser, Praxis der Sterilisation Desinfektion-Konservierung, Thieme Verlag, Stuttgart 1995 [0003]
- Oye AK und Rimstad E. 2001; Hirayama et at. 1998; Henderson et at. 1992; Chin et at. 1997 [0005]

Claims

Verfahren zur Reduktion der Viren- und Mikroorganismen-Belastung feststoffhaltiger biologischer Extrakte, umfassend (a) das Bereitstellen eines feststoffhaltigen biologischen Extraktes in Form einer Suspension, die aus einer flüssigen Phase und darin dispergierten Feststoffteilchen besteht, wobei der Extrakt in Schritt (a) ein Gemisch aus Enzymen, Proteinen und Peptiden umfasst, das zu einem Teil in der flüssigen Phase gelöst und zu einem anderen Teil an die Feststoffteilchen gebunden ist, oder in fester pulverförmiger Form vorliegt; und (b) das Bestrahlen des in Schritt (a) bereitgestellten biologischen Extraktes; wobei – die zur Bestrahlung verwendete Strahlung aus der Gruppe ausgewählt ist, die ultraviolette Strahlung, Röntgenstrahlung, β-Strahlung und γ-Strahlung umfasst; und – die enzymatische Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung zumindest 50% der enzymatischen Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes vor der Bestrahlung beträgt.
Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der feststoffhaltige biologische Extrakt aus einem tierischen Organ gewonnen wurde.
Verfahren nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass der feststoffhaltige biologische Extrakt ein Extrakt aus dem Pankreas des Schweins ist.
Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die enzymatische Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung zumindest 50% der enzymatischen Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes vor der Bestrahlung beträgt.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die enzymatische Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung zumindest 80% der enzymatischen Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes vor der Bestrahlung beträgt.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die enzymatische Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung zumindest 90% der enzymatischen Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes vor der Bestrahlung beträgt.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die virale Infektiosität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung um einen Faktor von größer als 1 log₁₀ im Vergleich zur viralen Infektiosität vor der Bestrahlung verringert worden ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die virale Infektiosität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung um einen Faktor von größer als 3 log₁₀ im Vergleich zur viralen Infektiosität vor der Bestrahlung verringert worden ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die virale Infektiosität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung um einen Faktor von größer als 4 log₁₀ im Vergleich zur viralen Infektiosität vor der Bestrahlung verringert worden ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die virale Infektiosität an porcinem Parvovirus des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung um einen Faktor von größer als 1 log₁₀ im Vergleich zur viralen Infektiosität an porcinem Parvovirus vor der Bestrahlung verringert worden ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die virale Infektiosität an porcinem Parvovirus des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung um einen Faktor von größer als 3 log₁₀ im Vergleich zur viralen Infektiosität an porcinem Parvovirus vor der Bestrahlung verringert worden ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die virale Infektiosität an porcinem Parvovirus des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung um einen Faktor von größer als 4 log₁₀ im Vergleich zur viralen Infektiosität an porcinem Parvovirus vor der Bestrahlung verringert worden ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Belastung des feststoffhaltigen biologischen Extraktes mit toxischen Substanzen nach der Bestrahlung nicht höher als vor der Bestrahlung ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Keimbelastung nach der Bestrahlung kleiner als 500 KBE/g ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Keimbelastung nach der Bestrahlung kleiner als 100 KBE/g ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Prozesstemperatur in Schritt (b) zwischen –10 und 40°C liegt.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Prozesstemperatur in Schritt (b) zwischen 2 und 30°C liegt.
Verfahren nach einem der Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Prozesstemperatur in Schritt (b) bei 20°C liegt.
Feststoffhaltiger Viren- und Mikroorganismen-reduzierter biologischer Extrakt, erhalten durch das Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 12.
Feststoffhaltiger biologischer Extrakt nach Anspruch 13, wobei der Extrakt ein Extrakt aus dem Pankreas des Schweins ist.
Verwendung eines feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach Anspruch 13 oder Anspruch 14 zur Herstellung eines Arzneimittels oder als Nahrungs- oder Lebensmittel oder Nahrungsergänzungsmittel.
Verwendung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, dass der feststoffhaltige biologische Extrakt erhalten wurde durch (a) das Bereitstellen eines feststoffhaltigen biologischen Extraktes; und (b) das Bestrahlen des in Schritt (a) bereitgestellten biologischen Extraktes; wobei – die zur Bestrahlung verwendete Strahlung aus der Gruppe ausgewählt ist, die ultraviolette Strahlung, Röntgenstrahlung, β-Strahlung und γ-Strahlung umfasst; und – die enzymatische Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes nach der Bestrahlung zumindest 50% der enzymatischen Aktivität des feststoffhaltigen biologischen Extraktes vor der Bestrahlung beträgt.
Verwendung nach Anspruch 15 oder Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass der nach der Bestrahlung erhaltene feststoffhaltige biologische Extrakt zur Herstellung eines Arzneimittels verwendet wird.
Verwendung nach einem der Ansprüche 15 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass der nach der Bestrahlung erhaltene feststoffhaltige biologische Extrakt als Nahrungs- oder Lebensmittel oder Nahrungsergänzungsmittel verwendet wird.