DE102006016014A1 - Vorrichtung und Verfahren zur Detektion von biologischen Molekülen - Google Patents

Vorrichtung und Verfahren zur Detektion von biologischen Molekülen Download PDF

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Abstract

Ein Detektionssystem (100) und ein Verfahren zur Detektion einer Vielzahl von Substanzen (140a, 140b) sind offenbart. Das Detektionssystem (100) hat eine Vielzahl von Detektionsproben (20; 150a, 150b), wobei jede der Detektionsproben (20; 150a, 150b) einen upconversionfluoreszierenden Kern (30; 160a, 160b) der Dimension von weniger als 200 nm aufweist und an einen Affinitätsrest (40; 130a, 130b) gebunden ist. Der Affinitätsrest (40; 130a, 130b) bindet zu einer der Vielzahl der Substanzen (140a, 140b).

Description

  • Gebiet der Erfindung:
  • Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren und auf eine Vorrichtung zur Detektion von biologischen Molekülen.
  • Bestehende Verfahren zur Detektion von biologischen Molekülen – auch Biomoleküle genannt – in vivo und in vitro bedürfen der Verwendung von radioaktiven Markern als Label. Diese Labels sind auf Grund der hohen Empfindlichkeit der Detektion von Radioaktivität effizient. Es bestehen allerdings Schwierigkeiten bei der Verwendung von Radioisotopen und radioaktiven Markern. Diese Schwierigkeiten beinhalten die Notwendigkeit Personal in ihrer Verwendung auszubilden sowie die generelle Sicherheit verbunden mit der Verwendung von Radioisotopen. Zudem haben viele Radioisotope inhärent kurze Halbwertszeiten.
  • Daher haben sich die augenblicklichen Anstrengungen auf die Verwendung von chemofluoreszierenden Molekülen als Tags verlagert. Fluoreszenz ist das Aussenden von Licht resultierend aus der Absorption von Strahlung bei einer Wellenlänge (Anregung/Exitation) gefolgt von der beinahe unmittelbar folgenden Strahlung bei einer unterschiedlichen Wellenlänge (Emission). Chemofluoreszente Verfahren haben den Nachteil von Fotobleaching, geringer Fluoreszenz-Intensität, kurzen Halbwertszeiten, weiten spektralen Linienverteilungen und nicht-gausschen asymmetrischen Emissionsspektren mit langen Ausläufen.
  • Eine andere Lösung zur Detektion von biologischen Molekülen ist aus dem US Patent Nr. 6,326,144 (Bawendi et al., MIT) bekannt. Diese Patentschrift lehrt eine Zusammensetzung aus fluoreszierenden Halbleiter-Nanokristallen zur Detektion von biologischen Molekülen. In Gebrauch wird die Komposition zu einer Umgebung, die das biologische Ziel enthält gegeben, und die fluoreszierende Nanokristallzusammensetzung verbindet sich mit dem biologischen Ziel. Der Zusammensetzungs-Zielkomplex kann Mittels Bestrahlung des Zusammensetzung-Zielkomplexes mit einer Anregungslichtquelle spektroskopisch beobachtet werden. Die fluoreszierende Nanokristallzusammensetzung initiiert ein charakteristisches Emissionsspektrum, welches Spektrophotometrisch beobachtet und gemessen werden kann.
  • Allerdings sind die in dieser Patentanmeldung beschriebenen Halbleiter-Nanokristalle in ihrer Anwendung begrenzt. Sie weisen steigende Photolumineszenzintensität unter kontinuierlicher Anregung auf, welche bis zu einem Maximalwert ansteigt. Dies erfolgt auf Grund der Anwesenheit von Traps in den Nanokristallen, die schrittweise saturiert werden. Dies kann quantitative Messungen beeinflussen. Die Größe von Nanokristallen von 3–10 nm ist vergleichbar zu der Größe von einigen biologischen Molekülen, wie Proteine, an die sie binden, und folglich kann die biologische Funktion des zu studierende Prozesses beeinflusst werden.
  • Ein weiterer Nachteil der Verwendung von solchen Molekülen ist Thermoquenching, wobei die Lumineszenz des Halbleiter-Nanokristalls mit steigender Temperatur ansteigt. Während dies kein Problem darstellt, solange die Experimente bei Raumtemperatur ausgeführt werden, kann dies zu Schwierigkeiten führen, wenn die Experimente bei erhöhten Temperaturen wie zum Beispiel während eines PCRs durchgeführt werden.
  • Es ist besonders vorteilhaft verschiedene biologische Moleküle in demselben Experiment markieren zu können, so dass die Interaktion zwischen mehr als einem biologischen Molekül beobachtet werden kann. Dies wird Multiplexing genannt. Es ist fast unmöglich Multiplexing mit der Verwendung von organischen Farbstoffen zu erreichen, da die diskreten Anregungsenergien der individuellen Farbstoffe die Anregung mit einer einzigen Lichtquelle unmöglich machen. Zudem macht die weit ins Rot auslaufende Emissionscharakteristik die Unterscheidung zwischen verschiedenen Farbstoffen mehr oder weniger unmöglich.
  • Ein weiteres Problem der Systeme des Standes der Technik ist die Autofluoreszenz der meisten Proteine und anderer biologischer Moleküle. Soweit diese „Background/Hintergrund" Fluoreszenz nicht von den Ergebnissen entfernt wird, kann sie Probleme in der Interpretation der Ergebnisse verursachen.
  • Die Verwendung von upconversion-fluoreszierenden Materialien zur Detektion von Zellen- und Gewebeoberflächen-Antigenen wurde in einem Artikel von Auzel diskutiert, „Upconversion and Anti-Stokes Processes with f and d ions in solids", Chem. Rev. 2004, 104, 139–172 (siehe im Speziellen Seite 169). Auzel gibt an, dass die Verwendung von IR-upconverting Phosphoren darin besteht, dass diese natürliche biologische Materialien nicht anregen können und somit einen guten Detektionskontrast in Bezug auf die Autofluoreszenz im Vergleich zu Systemen des Standes der Technik bereitstellen.
  • Ein praktisches Verfahren zur Verwendung von up-converting Phosphoren zur Detektion von Antigenen wird in „Detection of Cell and Tissues Surface Antigens using up-converting phosphors: a new reporter technology" von Zijlmans et al, Analytical Biochemistry, 267, 30–36(1999), gelehrt. Die hergestellten up-converting Phosphore, welche die Verfahren verwenden, die in diesem Artikel offenbart sind, haben Dimensionen in der Größenordnung von 0,2–0,4 μm. Solch große Partikel haben den Nachteil, dass sie selbst mit einem Analyt interagieren können und somit die Sensitivität und die Spezifizität des Detektionssystems verringern können.
    •
  • Zusammenfassung der Erfindung:
  • Es ist daher eine Aufgabe der Erfindung ein System zur Detektion von einer Vielzahl von biologischen Molekülen bereitzustellen.
  • Diese und andere Aufgaben der Erfindung werden durch die Bereitstellung eines Detektionssystems zur Detektion von eine Vielzahl von Substanzen, umfassend eine Vielzahl von Detektionsproben, gelöst, wobei jede der Detektionsproben einen upconversion-fluoreszierenden Kern von weniger als 200 nm Größe aufweisen, der an einen Affinitätsrest gebunden ist. Der Affinitätsrest oder Affinitätsteil bindet zu einer der Vielzahl von Substanzen. Das Detektionssystem ermöglicht dem Experimentator eine Anzahl von verschiedenen Substanzen, die bevorzugter Weise biologische Moleküle sind, auf Grund einer Anzahl von verschiedenen Proben zu detektieren. Jede der Proben weist einen unterschiedlichen upconversionfluoreszierenden Kern und einen unterschiedlichen Affinitätsrest auf. Als Ergebnis kann der Experimentator das Vorhandensein oder die Abwesenheit von einer bestimmten Substanz detektieren, indem er die Emissionsspektren untersucht: Die Verwendung von einem upconversion-fluoreszierenden Kern eliminiert die Autofluoreszenz von jedem der biologischen Moleküle.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist der upconversion-fluoreszierenden Kern von einer Hülle umgeben, die bevorzugterweise aus einem funktionalisierten Quarz/Silika besteht. Diese Hülle erlaubt das Anhängen von biologischen Molekülen entweder direkt an die Oberfläche der Hülle oder mittels eines Linkers. Verwendete funktionelle Gruppen beinhalten, sind aber nicht beschränkt auf Thiol-Gruppen.
  • Ein Beispiel des Detektionssystems der Erfindung hat weitere Proben angehängt an eine Oberfläche von zum Beispiel einer Mikroplatte. Die Substanzen binden zuerst an die weiteren Proben mittels des Affinitätsrests, dann binden die Detektionsproben an die Substanzen.
  • Die weiteren Proben können auch an „Beads" gebunden werden, wie zum Beispiel magnetische Beads, die die Separation der detektierten Substanzen in der Verwendung einer Eigenschaft der Beads ermöglichen. Zum Beispiel kann ein magnetisches Feld an das Detektionssystem angelegt werden und, wenn magnetische Beads an den weiteren Proben verwendet werden, werden diese von dem magnetischen Pol angezogen werden. Alternativ können die Beads auch vergleichsweise groß sein und die Separation könnte in einem Strömungskanal/flow channel ausgeführt werden.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist der upconversion-fluoreszierenden Kern aus einem dotierten Natrium-Yttriumfluorid. Andere Verbindungen können verwendet werden.
  • Die Aufgabe wird auch von einem Verfahren zur Detektion von einer Vielzahl von Substanzen gelöst, welche umfasst:
    • • einen ersten Schritt der Bereitstellung einer Vielzahl von Detektionsproben, die einen up-conversions Fluoreszenzkern gebunden an einen Affinitätsrest aufweisen;
    • • einen zweiten Schritt des Inkontaktbringens der Vielzahl von Detektionsproben mit einer eine oder mehrere Substanzen enthaltenden Flüssigkeit;
    • • einen dritten Schritt des Belichtens der Proben mit Licht einer ersten Energie; und
    • • einen vierten Schritt des Detektierens von Licht einer zweiten Energie emittiert/ausgesandt von einer oder mehreren der Proben.
  • Es werden zumindest zwei Detektionsproben verwendet, um Multiplexing zu ermöglichen.
  • In einer Ausführungsform beinhaltet das Verfahren auch einen Waschschritt, um die Flüssigkeit wegzuwaschen. Somit werden ungebundene Substanzen von dem Detektionssystem entfernt. Das reduziert das Risiko fehlerhafter Resultate auf Grund von Emissionsspektren anderen Substanzen, die nicht mit den fraglichen Substanzen in Beziehung stehen.
    •
  • Beschreibung der Zeichnungen:
  • Es zeigen:
  • 1 eine Detektorprobe gemäß der Erfindung,
  • 2 einen Beispiel der Erfindung in einem Immunoassay,
  • 3 ein Flussdiagramm zur Darstellung des Verfahrens der Erfindung, und
  • 4 ein weiteres Beispiel der Erfindung in einer Flüssigkeit.
  • Detaillierte Beschreibungen der Erfindung:
  • 1 zeigt das Funktionsprinzip des Verfahrens zur Detektion von biologischen Molekülen 10. Die biologischen Moleküle 10 umfassen, sind aber nicht begrenzt auf, Proteine, Nukleinsäuren, Zellen und subzellulare Organellen. Eine Probe 20 weist ein Nanopartikel 30 auf, welches mit einem Affinitätsrest 40, mittels eines Linkers 50, verbunden ist. Der Affinitätsrest/Affinitätsteil 40 ist der Rest, der an das zu detektierende biologische Molekül 10 gekoppelt ist. Der Affinitätsrest 40 könnte zum Beispiel ein Antikörper oder ein anderer Ligand sein. Das Nanopartikel 30 umfasst einen upconversion-fluoreszierenden Kern 32 umgeben von einer Hülle 34. Die Hülle 34 ist bevorzugterweise eine Quarz/Silika Hülle, könnte aber auch ein anderer Polymer oder ein inorganisches Netzwerk sein.
  • Ein Nanopartikel ist im Zusammenhang mit dieser Erfindung ein Partikel mit einer maximalen Größe von 200 nm.
  • Der upconversion-fluoreszierenden Kern 32 kann mit einer Vielzahl von Verfahren hergestellt werden. Dies beinhalten das Herstellen eines Mikropartikels und darauf folgendem Mahlen des Mikropartikels bis das daraus resultierende Partikel eine Größe im Nanometerbereich aufweist. Ein weiteres Verfahren ist das Synthetisieren des Nanopartikels.
  • Yi et al. beschreiben solch ein Verfahren in dem Papier „Synthesis, Characterization, and Biological Application of Size-Controlled Nanocrystalline NaYF4:Yb, Er Infrared-to-Visible Up-Converions Phosphors" veröffentlicht in Nano Letters, Vol 4, No 11, 2191-2196, 2004. Das Verfahren verwendet eine Stammlösung aus Yttriumoxid, Ytterbiumoxid und Erbiumoxid, welche in bei erhöhter Temperatur und auf pH 2 eingestellter Salzsäure aufgelöst wird.
  • NaYF4:Yb,Er Nanopartikel für den fluoreszierenden Kern 32 wurden hergestellt, indem NaF in de-ionisertem Wasser gelöst wurde. Eine weitere Lösung wurde präpariert, indem 16 ml von 0.2 M YCl3, 3.4 ml von 0.2 M YbCl3, 0.6 ml von 0.2 M ErCl3 uns 20 ml von 0.2 M ED-TA Stammlösungen gemischt wurden, um den Metall-EDTA-Komplex zu formen. Die Komplex-Lösung wurde dann schnell zur NaF Lösung gegeben und die Mischung für eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Der Niederschlag der Reaktion wurde abzentrifugiert, dreimal unter Verwendung von de-ionisiertem Wasser und einmal unter Verwendung von wasserfreiem Ethanol gewaschen. Das Fällungsprodukt/Niederschlag von NaYF4:Yb,Er Nanopartikeln wurde dann unter Vakuum getrocknet und ein weißes Pulver erhalten.
  • Annealing/Härten der Nanopartikel wurde unter Wasserstoff/Sticksoff Atmosphäre durchgeführt, wobei diese zu der gewünschten Temperatur mit einer Rate von 20°C pro Minute erwärmt wurden und diese Temperatur für 5 Stunden beibehalten wurde. Nach dem Härten wurden Nanopartikel unter derselben Atmosphäre auf Raumtemperatur abgekühlt. Der fluoreszierenden Kern 32 wurde mit der Hülle 34 aus Quarz durch Hydrolyse von Tetraethyl Orthosilikat bedeckt.
  • Verschiedene Typen von Nanopartikeln mit verschiedenen Emissionsspektren können hergestellt werden, indem Nanopartikel von verschiedenen Größen erzeugt werden. Da die Spitzen der Emissionspektren ziemlich scharf sind (zwischen ungefähr 30 und 50 nm im Wellenlängenbereich), können schon relativ geringe Unterschiede in der Größe zu unterschiedlichen Emissionspektren führen, die ausreichend unterschiedlich sind, um detektierbar zu sein.
  • Nachdem die Hülle 34 aus Quarz/Silika geformt wurde, wird die Oberfläche funktionalisiert (zum Beispiel mit einer Thiol-Gruppe) und der Linker 50 wird an die Oberfläche gehängt. Der Affinitätsrest 40 wird an den Linker 50 angehängt. Beispiele für solche Linker 50 beinhalten, sind aber nicht begrenzt auf funktionalisierte Fettsäuren und aliphatische Linker.
  • Die Verwendung der Probe 20 wird nun mit Bezug auf 2 gezeigt, was ein Immunoassay, wie zum Beispiel ein Sandwich Assay sein könnte. 2 zeigt einen Assay 100 mit einer Anzahl von Oberflächenproben 110a, b, die an der Oberfläche einer Platte 120 immobilisiert sind. Die Platte 120 könnte zum Beispiel aus Polystyrene (Styropor) sein. Die Oberflächeproben 110a und 110b haben Affinitätsreste 130a und 130b, die mit diesen verbunden sind, was biologische Moleküle 140a und 140b anzieht. Die Affinitätsreste 130a und 130b sind von ihrer Natur her verschieden und ziehen daher verschiedene biologische Moleküle 140a und 140b an. Die Detektionsproben 150a und 150b haben fluoreszierende Nanopartikel 160a und 160b daran angehängt. Die fluoreszierenden Nanopartikel 160a und 160b fluoreszieren bei verschiedenen Wellenlängen und sind so voneinander unterscheidbar. Die Detektionsproben 150a und 150b werden zu verschiedenen der biologischen Moleküle 140a und 140b angezogen wie in 2 gezeigt. Ein Forscher muss daher den Assay 100 mit der gewünschten Wellenlänge beleuchten und die Anregungsspektren messen um zu unterscheiden, welche der Detektionsproben 150a und/oder 150b in den Assay 100 vorhanden sind, um herauszufinden, welches der biologischen Moleküle 140a und 140b vorhanden ist.
  • Der Assay 100 kann einerseits von oben her beleuchtet werden. In diesem Fall muss der Assay 100 vorher gewaschen werden, um sicher zu stellen, dass keine ungebundenen Proben 150a und 150b an der Oberfläche des Assays 100 verbleiben und so die Messungen beeinträchtigen. Alternativ kann die Beleuchtung auch entlang der Oberfläche des Assays 100 erfolgen wie mit einem Pfeil 170 dargestellt. Das Licht wandert im Wesentlichen entlang der Oberfläche der Platte 120 und regt nur die fluoreszierenden Partikel 160a und 160b an, die an die Oberflächenproben 110a und 110b gebunden sind an. Ein Detektor 180 detektiert und nimmt die Emissionsspektren auf. In einer Ausführungsform der Erfindung beinhaltet der Detektor einen Akusto-optischen-Transferfilter.
  • Ein Experiment zur Detektion von biologischen Molekülen 140a und 140b in einer Flüssigkeit wird nun mit Bezug auf 3 beschrieben. In einem ersten Schritt 300 wird die experimentelle Flüssigkeit in Kontakt mit der Oberfläche des Assays 100 gebracht. Die biologischen Moleküle 140a und 140b kommen in Kontakt mit den Affinitätsresten 130a und 130b und eine Anzahl biologischen Molekülen 140a und 140b werden kovalent an die Oberflächenproben 110a und 110b gebunden. Die experimentelle Flüssigkeit wird dann in Schritt 310 weggewaschen und eine Probenlösung, welche die Detektionsproben 150a und 150b beinhaltet, wird in Schritt 320 in Kontakt mit dem Assay 100 gebracht. Diese Detektionsproben 150a und 150b, die an die biologischen Moleküle 140a und 140b binden können, sind an Oberflächenproben 110a und 110b gebunden, beispielsweise mittels einer kovalenten Bindung oder einem Biotin-Streptavidin System. Jede weitere komplementäre Probe 150a und 150b mit keinem entsprechenden biologischen Molekül 140a und 140b wird nicht an die Oberflächenproben 110a und 110b gebunden und kann in Schritt 340 weggewaschen werden (wenn gewünscht). Die Oberfläche des Assays 100 wird dann wie oben beschrieben beleuchtet und das Vorhandensein oder Nichtvorhandensein von biologischen Molekülen 140a und 140b wird bestimmt, basierend darauf, ob das imitierte Fluoreszenzspektrum in Schritt 350 detektiert wird.
  • In einer anderen Ausführungsform des Experimentes, gezeigt in 4, ist die Probe 210a nicht an die Oberfläche der Platte 120 gebunden (wie in 2), sondern weist ein Polystyren-Bead oder ein Magnetpartikel 220a mit ihr verbunden auf, wie in 4 gezeigt. Die übrigen Merkmale von 4 sind die Gleichen wie die in 2 gezeigten und die gleichen Referenzzeichen sind verwendet. Die Probe 210a mit dem daran gebundenen biologischen Molekül 140a kann von dem ungebundenen biologischen Molekül durch die Verwendung von magnetischen Feldern und/oder Strömungs- oder Flussvorrichtungen separiert werden.
  • Die oben beschriebenen Beispiele sind bezüglich zweier individueller unterschiedlicher biologischen Moleküle 140a und 140b beschrieben. Diese Prinzipien sind allerdings ebenfalls für eine große Anzahl von biologischen Molekülen 140a und 140b anwendbar. Es ist lediglich notwendig, dass eine ausreichende Anzahl von fluoreszierenden Nanopartikeln 160a und 160b verfügbar ist, um eine klare Identifikation der biologischen Moleküle 140a und 140b anhand der Analyse des Emissionsspektrums zu ermöglichen.
  • Die oben stehende Beschreibung ist lediglich Beispielhaft für das Prinzip der Erfindung und da der Fachmann eine große Anzahl von Modifikationen erkennen wird, ist es nicht beabsichtigt, die Erfindung auf das beschriebene Konstrukt und Funktion zu begrenzen. Alle geeigneten Modifikationen und Equivalente fallen in den Bereich der Ansprüche.

Claims (16)

  1. Detektionsystem (100) zur Detektion einer Vielzahl von Substanzen (140a, 140b) umfassend: – eine Vielzahl von Detektionsproben (20; 150a, 150b), wobei jede der Detektionsproben (20; 150a, 150b) einen upconversion-fluoreszierenden Kern (30; 160a, 160b) von einer Dimension von weniger als 200nm, verbunden mit einem Affinitätsrest (40; 130a, 130b) hat, wobei der Affintätsrest (40; 130a, 130b) zu einer der Vielzahl von Substanzen (140a, 140b) bindet.
  2. Detektionssystem (100) gemäß Anspruch 1, wobei es eine Lichtquelle (170) zur Anregung des upconversion-fluoreszierenden Kerns (30; 160a, 160b) aufweist.
  3. Detektionssystem (100) gemäß einem der vorangehenden Ansprüche, wobei es zumindest einen Detektor (180) zum Messen der von dem upconversionfluoreszierenden Kern (30; 160a, 160b) ausgesandten Strahlung aufweist.
  4. Detektionssystem (100) gemäß einem der vorangehenden Ansprüche, wobei der upconversion-fluoreszierende Kern (30; 160a, 160b) von einer Hülle (34) umgeben ist.
  5. Detektionssystem (100) gemäß Anspruch 4, wobei die Hülle (34) eine funktionalisierte Quarzhülle ist.
  6. Detektionssystem (100) gemäß einem der vorangehenden Ansprüche, welches einen ersten Linker (50) zwischen dem fluoreszierenden Kern (30; 160a, 160b) und dem Affinitätsrest (40; 130a, 130b) aufweist.
  7. Detektionssystem (100) gemäß einem der vorangehenden Ansprüche, wobei es zusätzlich eine weitere Probe (110a, 110b; 210a) umfasst, die einen weiteren Affinitätsrest (130a, 130b) gebunden an eine der Vielzahl von Substanzen (140a, 140b) hat.
  8. Detektionssystem (100) gemäß Anspruch 7, wobei die weitere Probe (110a, 110b) an eine Fläche (120) angehängt ist.
  9. Detektionssystem (100) gemäß Anspruch 7, wobei die weitere Probe (210a) an ein Bead (220a) angehängt ist.
  10. Detektionssystem (100) gemäß einem der vorangehenden Ansprüche, wobei der upconversion-fluoreszierende Kern (30; 160a, 160b) aus einer dotierten Natrium Yttrium Fluorid oder einem anderen Seltenerdeelement enthaltenen Verbindung. ist.
  11. Verfahren zur Detektion von einer Vielzahl von Substanzen (140a, 140b) umfassend: – einen ersten Schritt der Bereitstellung einer Vielzahl von Detektionsproben ( 20; 150a, 150b), die einen upconversion-fluoreszierenden Kern (30; 160a, 160b) verbunden mit einem Affinitätsrest (40; 130a, 130b) aufweisen; – einen zweiten Schritt (300) des Inkontaktbringens der Vielzahl von Detektionsproben (20; 150a, 150b) mit einer Flüssigkeit mit einer oder mehreren Substanzen (140a, 140b); – einen dritten Schritt des Aussetzens der Vielzahl von Detektionsproben (20; 150a, 150b) mit Licht einer ersten Energie; – einen vierten Schritt des Detektierens von Licht einer zweiten Energie ausgesandt von der einen oder mehreren der Vielzahl von Detektorproben (20; 150a, 150b)
  12. Verfahren gemäß Anspruch 11, wobei zumindest zwei der Vielzahl von Detektionsproben (20; 150a, 150b) mit verschiedenen Affinitätsresten (40; 130a, 130b) vorhanden sind.
  13. Verfahren gemäß Anspruch 11 oder 12, wobei der fünfte Schritt (350) des Detektierens von Licht einer zweiten Energie unter Verwendung eines Fotodetektors (180) mite einem Akusto-optischen-Transferfilter ausgeführt ist.
  14. Verfahren gemäß einen der Ansprüche 11 bis 13 zudem umfassend zumindest einen Waschschritt (310, 340) um die Flüssigkeit wegzuwaschen.
  15. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 11 bis 13, wobei dem zweiten Schritt (300) ein Schritt des in Kontaktbringens der Flüssigkeit mit einer Vielzahl von weiteren Proben (110a, 110b; 210a) voran geht, wobei die weiteren Proben (110a, 110b; 210a) einen weiteren Affinitätsrest (130a, 130b) zur Bindung mit einem der Vielzahl von Substanzen (140a, 140b) haben.
  16. Verfahren gemäß Anspruch 15, wobei die weiteren Proben an ein Bead (220a) angehängt sind, und die Detektorproben (20; 150a, 150b) unter Verwendung einer Eigenschaft eines Beads (220a) innerhalb der Flüssigkeit separiert werden.
DE102006016014A 2005-04-05 2006-04-05 Vorrichtung und Verfahren zur Detektion von biologischen Molekülen Withdrawn DE102006016014A1 (de)

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GB0506880A GB2424946A (en) 2005-04-05 2005-04-05 A detection system for substance binding using up-converting fluorescent probes

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