DE102004034008A1 - Verfahren zur Herstellung von Albumin-Corticoid-Konjugaten - Google Patents

Verfahren zur Herstellung von Albumin-Corticoid-Konjugaten Download PDF

Info

Publication number
DE102004034008A1
DE102004034008A1 DE102004034008A DE102004034008A DE102004034008A1 DE 102004034008 A1 DE102004034008 A1 DE 102004034008A1 DE 102004034008 A DE102004034008 A DE 102004034008A DE 102004034008 A DE102004034008 A DE 102004034008A DE 102004034008 A1 DE102004034008 A1 DE 102004034008A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
corticoid
transport protein
protein conjugate
linker
conjugate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
DE102004034008A
Other languages
English (en)
Inventor
Hannsjörg Dr. Sinn
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Albupharm Heidelberg & Co Kg 69120 Heid De GmbH
Original Assignee
Roesner Res & Co KG GmbH
Rosner Research & Cokg GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Roesner Res & Co KG GmbH, Rosner Research & Cokg GmbH filed Critical Roesner Res & Co KG GmbH
Priority to DE102004034008A priority Critical patent/DE102004034008A1/de
Priority to CA002573605A priority patent/CA2573605A1/en
Priority to US11/632,443 priority patent/US20080051376A1/en
Priority to PCT/EP2005/007679 priority patent/WO2006005621A2/de
Priority to EP05763576A priority patent/EP1765410A2/de
Publication of DE102004034008A1 publication Critical patent/DE102004034008A1/de
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft Corticoid-Transportprotein-Konjugate, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihrer Verwendung in der Medizin, insbesondere zur Therapie von Tumoren von entzündlichen Prozessen und zur Immunsuppression.

Description

  • Die vorliegende Erfindung betrifft Corticoid-Transportprotein-Konjugate, Verfahren zur ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung in der Medizin, insbesondere zur Therapie von Tumoren, von entzündlichen Prozessen und zur Immunsuppression.
  • Corticoide, auch Corticosteroide genannt, sind Steroidhormone der Nebennierenrinde, die unter dem Einfluss des Hormons ACTH (Corticotropin) gebildet werden. Glukocorticosteroide wie z.B. Cortison, Corticosteron und Dexamethason steuern den Eiweiß- und Zucker-Stoffwechsel. Mineralcorticoide, wie etwa Cortexolon, Cortexon und Aldosteron regeln den Mineralstoffwechsel.
  • Es ist seit langem bekannt, daß Corticoide zahlreiche krankhafte Vorgänge im Körper beeinflussen können. Corticoide werden deshalb als Medikament bei ganz verschiedenen Krankheiten eingesetzt, beispielsweise um Entzündungen zu unterdrücken oder immunologische Reaktionen zu dämpfen. Corticoide können beispielweise therapeutisch eingesetzt werden als Antirheumatika, bei Arthritis, bei Allergien sowie bei Stress- oder Schockzuständen.
  • Bisher wurden verschiedene Corticoide oder deren besser wasserlösliche Derivate wie beispielsweise Acetate, Hemisuccinate, etc. zum Einsatz gebracht zur Behandlung entzündlicher Prozesse (Belgi G. und Friedmann P.S. (2002): Traditionelle Therapien: Glukocorticoide, Azathioprin, Methotrexat, Hydroxy-Harnstoff; H+G. Hautkrankheiten, Vol. 77, Issue 12, 624) sowie zur Immunsuppression bei Transplantatabstoßungen.
  • Ein Nachteil der direkten Verabreichung der Corticoide ist, daß nur ein sehr geringer Anteil des applizierten Wirkstoffs, insbesondere bei systemischer Verabreichung, aufgrund der ubiquitären Ganzkörperverteilung den Zielort erreicht. Dadurch wird eine höhere Dosierung erforderlich, was vor allem bei längeren Anwendungen zu zahlreichen unerwünschten Nebenwirkungen wie z.B. Hypertonie, Osteoporose, genereller Immunsuppression, induziertem Diabetes-Mellitus, Gewichtszunahme, Muskelschwund, Hautveränderungen wie Akne und Reduktion des Sehvermögens führt.
  • Durch Kopplung von Wirkstoffen an körpereigene Proteine ist es möglich, Wirkstoffe an bestimmte Orte im Körper zu transportieren, damit diese dort ihre Wirkung entfalten. Die kovalente Bindung niedermolekularer Wirkstoffe wie z.B. Methotrexat an das Makromolekül wird beispielsweise in DE 4122210 A1 oder in WO 96/32133 beschrieben, wobei dort die gebildeten Konjugate zur Behandlung von Tumorerkrankungen bzw. zur Behandlung von Entzündungen, Infektionen und/oder Hauterkrankungen eingesetzt werden. Bei der Verwendung solcher Konjugate zur Behandlung von Tumorerkrankungen kann so eine tumoraktive Verbindung in Tumorzellen angereichert werden, während in gesundem Gewebe keine vermehrte Aufnahme des an Proteinen gebundenen Wirkstoffs erfolgt.
    •
  • Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es, Corticoid-Zusammensetzungen bereitzustellen, bei denen die im Stand der Technik beobachteten Nachteile zumindest teilweise überwunden sind. Insbesondere sollten Corticoid-Zusammensetzungen bereitgestellt werden, die nach Verabreichung eine hohe Halbwertszeit im Körper aufweisen und die auch bei systemischer Gabe zu keinen oder nur geringen Nebenwirkungen führen.
  • Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß gelöst durch Corticoid-Transportprotein-Konjugate, bei denen ein Corticoid kovalent an ein Trägerprotein gebunden ist.
  • Durch Kopplung an Trägerproteine werden die Corticoide, welche an sich schnell aus dem Körper entfernt werden, vor den Ausscheidungs- bzw.
  • Abfangmechanismen des Körpers verborgen und es wird eine lange Verweilzeit im Organismus erreicht. Durch diese verlängerte Halbwertszeit im Körper ist es möglich, die erforderliche Menge an Corticoid zu verringern und somit ggf. auftretende Nebenwirkungen zurückzudrängen. Zudem kann die toxische Wirkung auf gesundes Gewebe oder auf Organe praktisch vermieden werden, da normale Zellen keine Veranlassung zur Proteinaufnahme haben. Vorteilhafterweise wird das Corticoid erst am Zielort aus dem erfindungsgemäßen Konjugat freigesetzt, so daß oftmals geringere Dosen pro kg Körpergewicht ausreichend sind. Damit wird die Belastung der Leber und der übrigen gesunden Organe weiter reduziert.
  • Ein Trägerprotein ist erfindungsgemäß ein Protein, das als Trägermolekül für den Corticoid-Wirkstoff fungiert. Beispiele solcher Proteine sind jene Proteine mit einem Molekulargewicht von ≥ 18 000 Da, mehr bevorzugt ≥ 50 000 Da, insbesondere ≥ 100 000 Da. Vorteilhafterweise kann durch das Trägerprotein der Corticoid-Wirkstoff gezielt an bestimmte Orte im Körper gebracht werden. Auf diese Weise wird erreicht, daß geringere Corticoid-Dosierungen ausreichend sind, um eine gewünschte Wirkung zu erzielen und die üblichen Nebenwirkungen, die bei einer systemischen Gabe von Corticoiden in hoher Dosis auftreten können, somit zurückgedrängt werden.
  • Gemäß der Erfindung werden bevorzugt Proteine in nativer Form als Träger verwendet, die als nicht körperfremd angesehen werden. Günstigerweise wird je nach Patient, dem das Konjugat verabreicht werden soll, ein entsprechendes natives Protein ausgewählt, also beispielsweise für die Verabreichung am Menschen ein humanes Protein.
  • Geeignete Proteine sind beispielsweise Transferrin und bevorzugt Albumin, weiter bevorzugt Serum-Albumin und am meisten bevorzugt humanes Albumin (HSA; humanes Serumalbumin). Albumin stellt mit einem Molekulargewicht von etwa 68 kDa das kleinste der im Plasma vorkommenden Proteine dar. Es macht jedoch ungefähr 60% der gesamten Plasma-Eiweißmenge aus. Als körpereigenes, ubiquitär verteiltes nicht immunogenes Protein erfüllt Albumin im gesunden Organismus unter anderem für viele Stoffe Transportfunktionen und dient im akuten Notfall als Reserveenergieträger, der überall und jederzeit verfügbar ist. Da Albumin von gesunden Zellen nicht aufgenommen wird, ist seine Verwendung in den erfindungsgemäßen Corticoid-Transportprotein-Konjugaten von Vorteil.
  • Durch die erfindungsgemäße kovalente Kopplung des Corticoids an das Trägermolekül wird erreicht, dass keine Einschränkung des nativen Charakters des Proteins erfolgt. So wird das erfindungsgemäße Konjugat nicht als körperfremd angesehen, und kann für längere Zeit im Organismus verbleiben.
  • Die Konjugate der Erfindung enthalten bevorzugt ein Corticoid und ein Transportprotein im Molverhältnis von 2:1 bis 0,5:1, weiter bevorzugt beträgt das Molverhältnis von Corticoid zu Transportprotein 1,1:1 bis 0,9:1. Insbesondere ist ein Molverhältnis von ungefähr 1:1 vorteilhaft. Dabei kann die Bindung entweder direkt, linkerfrei oder über einen Linker an das Transportprotein erfolgen.
  • Eine linkerfreie Bindung des Corticoids an den Träger bedeutet, dass das Corticoid durch direkte chemische Bindung an das Transportprotein gebunden ist. Beispielsweise kann das Corticoid über eine Estergruppe, die aus einer OH-Gruppe des Corticoids und einer Säuregruppe des Proteins gebildet ist, kovalent an das Protein gebunden sein.
  • Gemäß einem Aspekt der vorliegenden Erfindung wird eine Bindung über einen Linker bevorzugt. Linker im Sinn der Erfindung bedeutet eine Struktureinheit, über die ein Corticoid an ein Transportprotein gebunden ist. Besonders geeignete Linker-Moleküle enthalten beispielsweise 2 Säuregruppen oder 2 aktivierte Säuregruppen über die eine Kopplung zum einen an das Corticoid und zum anderen an das Protein erfolgen kann. Ein Beispiel für einen besonders geeigneten Linker ist Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA).
  • Wichtig bei der Art der Kopplung ist, daß die kovalente Bindung in der Zielzelle wieder spaltbar ist, damit dort das Corticoid wieder freigesetzt werden kann und seine biologische Wirksamkeit entfalten kann. Die Spaltung erfolgt durch eine chemische Veränderung an der Verbindungsstelle zum Linker. Bei einer Bindung des Corticoids und des Trägerproteins an den Linker über Estergruppen kann die Esterbindung beispielsweise durch enzymatische Esterspaltung in der Zielzelle wieder gespalten werden.
  • Gemäß der Erfindung können beliebige Corticoide an ein Trägerprotein gebunden sein. Die Bezeichnung „Corticoid" im Sinne der Erfindung umfasst neben natürlich auftretenden und synthetisch hergestellten Steroidhormone der Nebennierenrinde auch Verbindungen mit corticoider Struktur, insbesondere Steroidantibiotika. Bevorzugt werden erfindungsgemäß Verbindungen, die sich von dem tetrazyklischen Kohlenwaserstoff Perhydro-1H-Cyclo-Penta[A]-Phenanthren (Steran) ableiten. Bevorzugt eingesetzte Verbindungen besitzen die Formel I
    Figure 00050001
    wobei diese gegebenenfalls in 1, 2 und/oder 4, 5 Position ungesättigt sind, wobei ein oder mehrere der Positionen 1, 2, 4-10 und 12-15 jeweils unabhängig mit einem oder zwei Resten R9 substituiert sein können, und worin
    R1 und R2 zusammen O bedeuten können oder R1 OH ist und R2 H ist;
    R7 und R8 zusammen O bedeuten können oder R7 OH ist und R8 H ist;
    R3-R6 und R9 jeweils unabhängig ausgewählt sind aus H, OH, Halogen, C1-4 Alkyl, und einem einwertigen Rest der Heteroatome, insbesondere N, O, P und S, enthalten kann;
    R5 und R6 zusammen einen zweiwertigen Rest bilden können der ein- oder mehrfach ungesättigt sein kann und/oder Heteroatome, insbesondere N, O, P und S enthalten kann;
    und wobei mindestens einer der Reste R1-R9 eine funktionelle Gruppe wie z.B. -OH oder Amin darstellt und/oder enthält.
  • Bevorzugte Reste R3 sind H, OH, Cl, F und/oder CH3 und/oder sie können bevorzugt die Formel (II) aufweisen
    Figure 00060001
    worin n eine ganze Zahl von 0-4 ist. Am meisten bevorzugt ist n=1. Bevorzugte Reste R5 sind H, OH, Cl, F und/oder CH3 und/oder sie können bevorzugt die Formel (III) aufweisen
    Figure 00060002
    worin m eine ganze Zahl von 0-4 ist.
  • Am meisten bevorzugt ist m=1.
  • Bevorzugte Reste R4, R6 und R9 sind H, OH, CH3, Cl und/oder F und/oder sie können bevorzugt die Formel (IV) aufweisen
    Figure 00060003
    worin p und q jeweils unabhängig eine ganze Zahl von 0-4 sein können. Bevorzugt sind p und q jeweils 0.
  • Wenn R5 und R6 zusammen einen zweiwertigen Rest bilden weist dieser bevorzugt die Formel (V) auf,
    Figure 00070001
    worin r eine ganze Zahl von 0-4 sein kann und R10 und R11 jeweils unabhängig ausgewählt sind aus H und C1-4-Alkyl.
  • Am meisten bevorzugt ist r=2.
    R10 ist bevorzugt H und
    R11 ist bevorzugt CH3.
  • Bevorzugt wird ein humanes Corticoid verwendet. Beispiele für vorteilhafterweise eingesetzte Corticoide sind Hydrocortison, Cortison, Triamcinolon, Cortisonacetat, Cloprednol, Aldosteron, Prednisol, Prednisolon, Fluocortolon, Triamcinolon, Methylprednisolon, Betamethason, Desoximetason, Clobetasonbutyrat, Hydrocortisonbutyrat, Fluocinolonacetonid, Prednicarbat, Triamcinolonacetonid, Halcinoid, Betamethasondipropionat, Betamethasonvalerat, Diflorasondiacetat, Diflucortolonvalerat, Clobetasolpropionat, Corticosteron und ganz besonders bevorzugt wird Dexamethason eingesetzt. Besonders in neuerer Zeit wird synthetisch hergestelltes Dexamethason bevorzugt verwendet. Eine weitere bevorzugte Verbindung der Formel I ist der corticoidale Entzündungshemmer Fusidinsäure.
  • Gemäß einem weiteren Aspekt stellt die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung von Corticoid-Transportprotein-Konjugaten bereit. In dem erfindungsgemäßen Verfahren werden ein Corticoid und ein Transportprotein miteinander umgesetzt, und bei der Umsetzung erfolgt eine Verknüpfung über kovalente Bindungen.
  • Eine Möglichkeit zur Herstellung ist erfindungsgemäß die direkte Kopplung von Corticoid und Transportprotein. Beispielsweise kann durch Reaktion einer Carboxyl-Gruppe des Corticoids (z.B. Fusidinsäure) mit einer Aminogruppe einer Proteinseitenkette eine Verknüpfung unter Ausbildung einer Amidgruppe erfolgen. Bei einer direkten Kopplung ist die zeitaufwendige Herstellung und Aufarbeitung von Zwischenprodukten überflüssig.
  • In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens der vorliegenden Erfindung werden ein Corticoid und ein Transportprotein mit einem Linker umgesetzt, und bei der Umsetzung erfolgt eine Verknüpfung über kovalente Bindungen. In diesem Verfahren weist der Linker günstigerweise zwei funktionelle Gruppen auf, über die eine Bindung zum einen an das Corticoid und zum anderen an das Transportprotein erfolgen kann. Solche funktionellen Gruppen am Linkermolekül können beispielsweise aktivierte Carbonsäuregruppen wie Anhydridgruppen, Carbonsäurechloride und dergleichen sein. Ein besonders geeigneter Linker in dem erfindungsgemäßen Verfahren ist EDTA-Dianhydrid.
  • Bei der Verknüpfung des Corticoids an ein Trägerprotein über einen Linker kann als Nebenreaktion eine Crosslink-Reaktion stattfinden. Unter „Crosslink-Reaktion" wird im Sinn der Erfindung die Vernetzung mehrerer Cortikoide/Proteine über Linker verstanden. Solche größeren Konjugate sind für eine medizinische Verwendung weniger geeignet, da sie aus dem Kreislauf schneller eliminiert werden und zur Antikörperbildung führen. Gemäß der vorliegenden Erfindung kann Crosslinking vermieden werden, indem in einem weiteren Schritt eine Ammoniaklösung zugegeben wird.
  • Damit das in dem erfindungsgemäßen Konjugat enthaltene Corticoid seine volle Aktivität zeigt, muß in der Zielzelle eine Spaltung des Linkers und ggf. ein Abbau des noch am Linker gebundenen Proteins erfolgen. Als Linker werden daher bevorzugt solche Verbindungen ausgewählt, die in einer jeweiligen Zielzelle wieder abgespalten werden können. Dem Fachmann ist bekannt, durch welche Faktoren, z.B. Enzyme, in Zellen die Spaltung bestimmter chemischer Bindungen erfolgen kann. Beispielsweise können Estergruppen mittels enzymatischer Esterspaltung durch Esterasen gespalten werden. Säureamid-Bindungen können durch enzymatische Peptidspaltung gespalten werden.
  • Die erfindungsgemäßen Konjugate zeichnen sich dadurch aus, daß sie gezielt an bestimmte Orte im Körper transportiert werden können und so das Corticoid dort angereichert werden kann. Erst am Zielort kann dann das Corticoid freigesetzt werden und seine Aktivität entfalten. Es wurde festgestellt, daß die erfindungsgemäßen Konjugate vermehrt von Tumorzellen aufgenommen werden. Im Gegensatz dazu nehmen gesunde Zellen die Konjugate nicht oder nur in einem wesentlich geringeren Maß auf. Die erfindungsgemäßen Konjugate eignen sich daher hervorragend für therapeutische Zwecke, insbesondere zur Therapie von Tumorerkrankungen wie beispielsweise soliden Tumoren.
  • Überraschenderweise wurde festgestellt, dass die erfindungsgemäßen Konjugate nicht nur in Tumorzellen sondern auch in für Immunreaktionen relevanten Zellen aufgenommen werden. Somit findet auch in diesen Zellen eine Wirkstoffanreicherung statt. Corticoide besitzen eine hemmende Wirkung auf die Expression einer sehr großen Bandbreite von proinflammatorischen und immunregulatorischen Zytokinen wie Interleukin (IL), Interferon, Tumornekrosefaktor TNF-α und von mehreren kostimulatorischen Faktoren. Die Konjugate der vorliegenden Erfindung eignen sich folglich auch für die Suppression von Immunreaktionen beispielsweise bei tranplantationsassoziierten Immunreaktionen. Diese Wirkung eröffnet ein breites Einsatzspektrum für die erfindungsgemäßen Konjugate zur Vermeidung immunologischer Komplikationen bei Tranplantationen, insbesondere bei allogenen oder autologen Knochenmarktransplantationen aber auch zur Vermeidung von empfängervermittelten Abstoßungsreaktionen bei Organtransplantationen, insbesondere bei Fremdspender-Organtransplantationen von beispielsweise Niere, Herz oder Leber. Die erfindungsgemäßen Konjugate können deshalb vorteilhafterweise zur Behandlung und/oder Prophylaxe von GVHD und insbesondere von akuter oder chronischer GVHD eingesetzt werden.
  • Ein besonderer Vorteil der erfindungsgemäßen Konjugate zur Verwendung im Zusammenhang mit unerwünschten Immunreaktionen ist, daß eine lokal begrenzte Immunsuppression ermöglicht wird, da im Wesentlichen keine Aufnahme der Konjugate durch gesunde Zellen erfolgt.
  • Ein Vorteil der Verwendung der erfindungsgemäßen Konjugate ist ihre lange Verweildauer im Organismus. Sie ist im allgemeinen ≥ 15 Tage und bevorzugt ≥ 19 Tage. Dadurch wird im Vergleich zur bisher üblichen direkten Verabreichung von Corticoiden eine Verringerung der erforderlichen Dosis ermöglicht, die notwendig ist, um eine gewünschte Wirkung zu erzielen. Die Menge an verabreichtem Corticoid, insbesondere Dexamethason, kann erfindungsgemäß z.B. von 0,1 μg/kg Körpergewicht bis 0,1 g/kg Körpergewicht, insbesondere von 10 μg/kg Körpergewicht bis 001 g/kg Körpergewicht betragen.
  • Figuren
  • 1 zeigt das Chromatogramm der HPLC-Untersuchung der Reaktionsprodukte des Erfindungsbeispiels. Freies Dexamethason wird nach einer Retensionszeit von 31,45 min detektiert.
  • 2 zeigt das Chromatogramm der HPLC-Untersuchung des Erfindungsbeispiels, wobei nach 7,07 min eine dimere Albuminfraktion detektiert wird und nach 8,27 min eine monomere Albuminfraktion.
    •
  • Erfindungsbeispiel
  • 20 mg Dexamethason (MG 392,5 g/mol) werden zusammen mit etwa 14 mg EDTA-dA (MG 256,22 g/mol) in einem Reagenzglas mit NS 14,5 Schliff und Stopfen vorgelegt. Nach der Zugabe von 2 ml Pyridin wird die Reaktionsmischung in ein auf 65 °C vorgeheiztes Wasserbad eingebracht. Nach einer Reaktionszeit von 6h liegt eine farblose, klare Lösung vor, die nach Abkühlung auf Raumtemperatur in eine Glasspritze aufgezogen und sehr langsam in eine 5%ige Albuminlösung eingetragen wird. An der Einlaufstelle bildet sich kurzzeitig eine Trübung, die sich jedoch schnell wieder auflöst. Kurz nach dem Ende der Wirkstoffzugabe fügt man zur Vermeidung eventuell möglicher Cross-Link-Reaktionen 0,5 ml einer 5% igen Ammoniak-Lösung hinzu.
  • Umsetzungskontrolle der Reaktion Dexamethason mit EDTA-Dianhydrid mittels Dünnschichtchromatographie (DC)
    1 μL der Originallösung wird auf eine DC-Alufolie 5 × 10 cm, Kieselgel 60, F254 (Fa. E. Merck) aufgetragen und mit einer 0,33%igen methanolischen Essigsäure in einer DC-Kammer entwickelt.
    Rf-Werte: Dexamethason 0,88-0,9
    Dexamethason-EDTA 0,48-0,5
  • Qualitätskontrolle (HPLC):
    Vorsäule: LiChrospher 100 DIOL 5 μ ( 25 × 10 mm) (Besta-Technik)
    Säule: LiChrospher 100 DIOL 5 μ (250 10 mm) (Besta-Technik)
    Laufmittel: 0,2 M Na-citrat, pH 7,4
    Fluss: 1,0 ml/min
    Druck: etwa 51 Bar
    UV-vis: 280 nm
  • Retensionszeiten:
    dimere Albumin-Fraktion: 7,07 min
    monomere Albumin-Fraktion: 8,27 min
    freies Dexamethason: 31,45 min
  • Der Anteil an dimerem Albumin liegt <5 %, was bedeutet, dass ein zu vernachlässigendes cross-Linking während der Beladung stattgefunden hat.
  • Dies ist von essentieller Bedeutung für die Vermeidung einer schnellen Elimination aus dem Kreislauf.

Claims (27)

  1. Corticoid-Transportprotein-Konjugat, umfassend ein Corticoid kovalent gebunden an ein Trägerprotein.
  2. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Protein in nativer Form vorliegt.
  3. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Protein Albumin ist.
  4. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Molverhältnis Cortikoid:Transportprotein 2:1 bis 0,5:1 ist.
  5. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Molverhältnis Cortikoid:Transportprotein 1,1:1 bis 0,9:1 ist.
  6. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Corticoid linkerfrei an das Trägerprotein gebunden ist.
  7. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Corticoid über einen Linker an das Trägerprotein gebunden ist.
  8. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass das Corticoid über eine Ester-Gruppe an den Linker gebunden ist und der Linker über eine Amidbindung an das Trägerprotein gekoppelt ist.
  9. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Esterbindung durch enzymatische Esterspaltung spaltbar ist und/oder die Amidbindung über enzymatische Peptidspaltung spaltbar ist.
  10. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach einem der Ansprüche 7 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass der Linker EDTA ist.
  11. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass das Corticoid humanes Corticoid ist.
  12. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach einem der Ansprüche 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, dass das Corticoid Dexamethason ist.
  13. Corticoid-Transportprotein-Konjugat nach einem. der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass das Corticoid Fusidinsäure ist.
  14. Verfahren zur Herstellung eines Corticoid-Transportprotein-Konjugats nach einem der Ansprüche 1 bis 13, dadurch gekennzeichnet, dass ein Corticoid und ein Transportprotein miteinander umgesetzt werden, und bei der Umsetzung eine Verknüpfung über kovalente Bindungen erfolgt.
  15. Verfahren zur Herstellung eines Corticoid-Transportprotein-Konjugats nach einem der Ansprüche 5 bis 13, dadurch gekennzeichnet, dass ein Corticoid und ein Transportprotein mit einem Linker umgesetzt werden, und bei der Umsetzung eine Verknüpfung über kovalente Bindungen erfolgt.
  16. Verfahren nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, dass der Linker zwei aktivierte Carbonsäure-Gruppen aufweist.
  17. Verfahren nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass in einem ersten Schritt das Corticoid mit einer aktivierten Carbonsäure-Gruppe des Linkers umgesetzt wird und in einem zweiten Schritt Kopplung des Proteins an eine weitere aktivierte Carbonsäure-Gruppe des Linkers erfolgt.
  18. Verfahren nach Anspruch 16 oder 17, dadurch gekennzeichnet, dass die aktivierten Carbonsäure-Gruppen Anhydrid-Gruppen sind.
  19. Verfahren nach Anspruch 15 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass EDTA-Dianhydrid als Linker verwendet wird.
  20. Verfahren nach einem der Ansprüche 15 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass nach der Kopplung in einem weiteren Schritt eine Ammoniak-Lösung zugegeben wird.
  21. Verwendung eines Corticoid-Transportprotein-Konjugats nach einem der Ansprüche 1 bis 13 oder erhältlich nach einem der Ansprüche 14 bis 20 zur Therapie von Tumoren.
  22. Verwendung eines Corticoid-Transportprotein-Konjugats nach Anspruch 21 zur Therapie von soliden Tumoren.
  23. Verwendung eines Corticoid-Transportprotein-Konjugats nach einem der Ansprüche 1 bis 13 oder erhältlich nach einem der Ansprüche 14 bis 20 zur Behandlung von entzündlichen Prozessen.
  24. Verwendung eines Corticoid-Transportprotein-Konjugats nach einem der Ansprüche 1 bis 13 oder erhältlich nach einem der Ansprüche 14 bis 20 zur Immunsuppression, insbesondere bei Transplantatabstoßungen.
  25. Verwendung nach einem der Ansprüche 21 bis 24, dadurch gekennzeichnet, dass das Corticoid am Zielort aus dem Konjugat freigesetzt wird.
  26. Verwendung nach einem der Ansprüche 21 bis 25, dadurch gekennzeichnet, dass die biologische Halbwertszeit des Konjugats mehr als 15 Tage beträgt.
  27. Verwendung nach einem der Ansprüche 21 bis 26, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentration an Corticoid in gesundem Gewebe nicht erhöht wird.
DE102004034008A 2004-07-14 2004-07-14 Verfahren zur Herstellung von Albumin-Corticoid-Konjugaten Ceased DE102004034008A1 (de)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102004034008A DE102004034008A1 (de) 2004-07-14 2004-07-14 Verfahren zur Herstellung von Albumin-Corticoid-Konjugaten
CA002573605A CA2573605A1 (en) 2004-07-14 2005-07-14 Method for producing albumen/corticoid conjugates
US11/632,443 US20080051376A1 (en) 2004-07-14 2005-07-14 Method for Producing Albumin-Corticoid Conjugates
PCT/EP2005/007679 WO2006005621A2 (de) 2004-07-14 2005-07-14 Verfahren zur herstellung von albumin-corticoid-konjugaten
EP05763576A EP1765410A2 (de) 2004-07-14 2005-07-14 Verfahren zur herstellung von albumin-corticoid-konjugaten

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102004034008A DE102004034008A1 (de) 2004-07-14 2004-07-14 Verfahren zur Herstellung von Albumin-Corticoid-Konjugaten

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE102004034008A1 true DE102004034008A1 (de) 2006-02-09

Family

ID=35466082

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE102004034008A Ceased DE102004034008A1 (de) 2004-07-14 2004-07-14 Verfahren zur Herstellung von Albumin-Corticoid-Konjugaten

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20080051376A1 (de)
EP (1) EP1765410A2 (de)
CA (1) CA2573605A1 (de)
DE (1) DE102004034008A1 (de)
WO (1) WO2006005621A2 (de)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201122325D0 (en) 2011-12-23 2012-02-01 Cytoguide As Novel formulations
US11986536B2 (en) * 2019-03-23 2024-05-21 Ablevia Biotech Gmbh Compound for the sequestration of undesirable antibodies in a patient
EP3715374A1 (de) * 2019-03-23 2020-09-30 Ablevia biotech GmbH Verbindung zur sequestrierung von unerwünschten antikörpern in einem patienten

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0992512A2 (de) * 1998-10-02 2000-04-12 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Reduziertes Cortisolkonjugat
WO2004006966A1 (en) * 2002-07-16 2004-01-22 Medexis S.A. Steroid conjugates, preparation thereof and the use thereof

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1988006457A1 (en) * 1987-03-04 1988-09-07 Nippon Hypox Laboratories Incorporated Medicinal composition containing albumin as carrier and process for its preparation
IT8922275A0 (it) * 1990-10-25 1989-11-06 Baldacci Lab Spa Nuovi derivati di corticosteroidi, procedimento per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono.
DE19514087A1 (de) * 1995-04-13 1996-10-17 Deutsches Krebsforsch Konjugat aus einem Wirkstoff, einem Polyether und ggfs. einem nicht als körperfremd angesehenen, nativen Protein
US7238368B2 (en) * 1999-04-23 2007-07-03 Alza Corporation Releasable linkage and compositions containing same

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0992512A2 (de) * 1998-10-02 2000-04-12 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Reduziertes Cortisolkonjugat
WO2004006966A1 (en) * 2002-07-16 2004-01-22 Medexis S.A. Steroid conjugates, preparation thereof and the use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
WO2006005621A2 (de) 2006-01-19
EP1765410A2 (de) 2007-03-28
CA2573605A1 (en) 2006-01-19
US20080051376A1 (en) 2008-02-28
WO2006005621A3 (de) 2007-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69721377T2 (de) Arzneimittel zur transdermalen Verabreichung von einem Östrogen oder Progestin oder einer Mischung davon
DE69924740T2 (de) Klare wässrige lösungen enthaltend gallensäuren
DE69132048T2 (de) Verwendung von Steroiden zur Inhibierung von Angiogenesis
EP1581185B1 (de) Liposomale glucocorticoide
WO2006114115A1 (de) Kombination von antikörpern mit glukokortikoiden zur behandlung von krebs
DE2323216B2 (de) Verfahren zur auftrennung von stereoisomerengemischen von pregna-1,4- dien-11-ol-3,20-dionen
EP1993609A2 (de) Wirkstoffbeladene nanopartikel auf basis hydrophiler proteine
DE68913003T2 (de) An hormone gekoppelte liposome.
EP0504403A1 (de) Therapeutisches topisches präparat
DE4437604A1 (de) Konjugate aus einem Poly- oder Oligopeptid und einer niedermolekularen lipophilen Verbindung
EP1161456B1 (de) Gegen ccr5 gerichtete antikörperkonstrukte und ihre verwendung in der behandlung von autoimmunkrankheiten
DE69018799T2 (de) IGF-I zur Behandlung von Nebeneffekten der Steroidtherapie.
DD146296A5 (de) Verfahren zur herstellung von kortikoid-21-sulfopropionaten
DE4208527A1 (de) Liposomen mit negativer ueberschussladung
DE102004034008A1 (de) Verfahren zur Herstellung von Albumin-Corticoid-Konjugaten
WO2001014407A2 (de) Rückfaltung von membranproteinen durch verwendung zweifer unterschieldlichen detergentien
EP2217277A2 (de) Stabilisierung von hydrophoben proteintherapeutika
Täuber Pharmacokinetics and ‘bioactivation’of MPA
DE10251028A1 (de) Verwendung von Progesteron oder einem Progesteronrezeptor-Agonisten zur Hemmung der Steroidsynthese
DE102004016355A1 (de) Herstellung und Verwendung des Konjugats Methotrexat-Albumin als Mittel zur Immunosuppression bei GVHD
DE934665C (de) Verfahren zur Herstellung von Loesungen von Steroiden
DE2708666C3 (de) Arzneimittel mit immunoregulativer und antiphlogistischer Wirkung
EP1841792B1 (de) Verfahren zur herstellung von albumin-konjugaten mit gyrasehemmern
WO1997009067A1 (de) Kombination von 5-lipoxygenase- und leukotriensyntheseinhibitoren mit glucocorticosteroiden
EP1205218B1 (de) Topical-Antipsoriaticum mit Harnstoff, einem Corticoid und einem Desinfektionsmittel

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
8127 New person/name/address of the applicant

Owner name: SINN, HANNSJOERG, DR., 69168 WIESLOCH, DE

8127 New person/name/address of the applicant

Owner name: ALBUPHARM HEIDELBERG GMBH & CO. KG, 69120 HEID, DE

8131 Rejection