DE10061279A1 - Verfahren und Diagnose-Kit zur Bestimmung der Prädisposition für Herz-Kreislauf-Krankheiten und Arteriosklerose - Google Patents

Verfahren und Diagnose-Kit zur Bestimmung der Prädisposition für Herz-Kreislauf-Krankheiten und Arteriosklerose

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DE10061279A1
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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung des Risikos und/oder der Prädisposition für Arteriosklerose und/oder Herz-Kreislauf-Krankheiten wie der koronaren Herzerkrankung eines Menschen, dadurch gekennzeichnet, daß die allelische Variation des CD32-Gens (FCGR2A-Gen) oder die Variation der Aminosäuresequenz des SD32-Proteins dieses Menschen erfaßt wird.

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Ver­ fahren, Primer sowie ein Diagnose-Kit zur Bestimmung des Risikos und/oder der Prädisposition für Arterio­ sklerose und/oder Herz-Kreislauf-Krankheiten. Herz- Kreislauf-Krankheiten stellen eine der größten ge­ sundheitlichen Risiken dar, insbesondere die koronare Herzerkrankung. Es ist daher von größtem Interesse, das individuelle Risiko für derartige Krankheiten zu ermitteln, um bereits vorbeugend tätig werden zu kön­ nen.
Es ist bekannt, daß das C-reaktive Protein (CRP) ei­ nen wesentlichen Risikofaktor für Herz-Kreislauf- Krankheiten darstellt. Dieses Molekül lagert sich be­ reits in frühen Stadien der Arteriosklerose in der Gefäßwand ab, siehe beispielsweise Torzewski J. et al. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2000: 18; 1386-1389. Zudem lockt es Monozyten/Makrophagen an und ak­ tiviert das Komplementsystem, siehe beispielsweise Torzewski et al. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2000: 20; 2094-2099. Die Erhöhung des Serumspiegels für das C-reaktive Protein wurde in mehreren großen Studien als Risikomarker für die Entstehung von Arterioskle­ rose identifiziert.
Das Protein CD32 stellt einen Rezeptor für das C- reaktive Protein dar. Für dieses ist ein genetischer Polymorphismus bekannt, der das Nukleotid 494 der ko­ dierenden Region des Exons 4 betrifft. Das Nukleotid 494 kann Guanin oder Adenin sein. Entsprechend ko­ diert die Sequenz entweder für die Aminosäure Arginin oder Histidin in Position 131 der zweiten extrazellu­ lären Domäne (EC2) des CD32(FCγRIIA). Dieser Polymor­ phismus ist beispielsweise aus Stein et al. "J Clin Invest. 2000: 105; 369-376".
Die biologische Relevanz dieses Polymorphismus ist bis jetzt vollständig unbekannt.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, ein Ver­ fahren, einen Primer sowie ein Diagnose-Kit zur Ver­ fügung zu stellen, mit dem Risikofaktoren bzw. die Prädisposition für Arteriosklerose und/oder Herz- Kreislauf-Krankheiten erfaßt werden können.
Die vorliegende Erfindung macht sich die bisher nicht bekannte Tatsache zunutze, daß zwischen dem geneti­ schen Polymorphismus von CD32, der oben beschrieben und bereits aus dem Stand der Technik bekannt ist, und dem Risiko für eine Arteriosklerose bzw. für Herz-Kreislauf-Krankheiten, wie beispielsweise der koronaren Herzerkrankung ein Zusammenhang besteht.
Insbesondere wurde festgestellt, daß die Wahrschein­ lichkeit für Arteriosklerose und koronare Herzerkran­ kungen in derjenigen Bevölkerungsgruppe erhöht ist, die an Position 131 des CD32-Proteins ein Arginin aufweist. Dies entspricht einem Guanin als Nukleotid 494 der kodierten Region von Exon 4. Demgegenüber führt ein CD32-Protein mit Histidin an Position 131 der Aminosäuresequenz, d. h. mit einem Adenin in Posi­ tion 494 der kodierten Region von Exon 4 des Gens zu einer verringerten Wahrscheinlichkeit für Arterios­ klerose und Herz-Kreislauf-Krankheiten. Damit ist erstmals die Möglichkeit geschaffen, einen Risikofak­ tor für Arteriosklerose und Herz-Kreislauf- Krankheiten auf Protein-Ebene bzw. auf molekularbio­ logischer Ebene zu bestimmen und so die Prädispositi­ on eines Menschen für diese Krankheiten zu ermitteln.
Der erwähnte Zusammenhang zwischen der allelischen Ausstattung eines Menschen bezüglich des Gens FCGR2A und Arteriosklerose bzw. Herz-Kreislauf-Krankheiten wurde beispielsweise, wie im folgenden beschrieben, festgestellt.
Hierzu wurde die Verteilung der FCGR2A-Genotypen (494 G/G, 494 A/G und 494 A/A) in Patienten mit angiogra­ phisch bestätigter koronarer Herzkrankheit als auch in gesunden Probanden in einer Fall-/Kontrollstudie verglichen.
Für diese Studie wurden insgesamt 301 Patienten im Alter zwischen 40 und 68 Jahren mit einer klinisch stabilen, angiographisch bestätigten koronaren Herzerkrankung innerhalb der vorangehenden zwei Jah­ ren untersucht. Die Kontrollgruppe bestand aus 464 Probanden, die keine Herz-Kreislauf-Krankheiten auf­ wiesen. In diesen Gruppen wurde von allen 301 Patienten (259 Männer und 42 Frauen) und 464 Kontrollpro­ banden (353 Männer und 111 Frauen) die DNS isoliert. Die demographischen und klinischen Eigenschaften die­ ser Studie werden in der folgenden Tabelle 1 darge­ stellt.
Tabelle 1
Die Isolierung der DNS zur Analyse des FCγRIIA-Gens erfolgte aus Leukozyten mit Standardverfahren. Die isolierte DNS wurde anschließend einer Polymeraseket­ tenreaktion (PCR) mit den nachfolgenden Primern unterworfen:
sense 5'-TTGGATAGTACCTCTGAGACTG-3'4
antisense 5'-ACGTGAGGGCTCCAAGCTCT-3'.
Die amplifizierte DNS wurde anschließend in jedem Falle einzeln durchsequenziert. Fig. 1 zeigt die Er­ gebnisse dieser Studie. Mit den 6 Balken des Balken­ diagramms sind die Wahrscheinlichkeiten für das Auf­ treten der Genotypen in der Patientengruppe (Balken 1, 3, 5) und der Kontrollprobandengruppe (Balken 2, 4, 6) dargestellt. In 20,3% der Patienten (Balken 5) verglichen mit 30,6% der Kontrollgruppe (Balken 6) wurde ein homozygoter Genotyp mit Adenin an Position 494 gefunden. Ein heterozygoter Genotyp mit einem Gen mit Adenin und einem Gen mit Guanin an Position 494 des CD32-Gens wurde in der Patientengruppe zu 63,5% (Balken 3) und in der Kontrollprobandengruppe zu 53,5% (Balken 4) gefunden. Ein homozygoter Genotyp mit Guanin an Position 494 wurde in der Patientengruppe zu 16,3% (Balken 1) und in der Kontrollprobanden­ gruppe zu 16,0% (Balken 2) gefunden. Die Häufigkeit für 494G betrug 0,45 und die Häufigkeit für 494A 0,55 und entsprach daher der Hardy-Weinberg-Verteilung. Es wurde folglich ein signifikanter Unterschied zwischen den FCGR2A-Genotypen 494 G/G und 494 A/G und 494 A/A in den zwei Gruppen (3 × 2 Kontingenztafel; χ2 = 10,6, p = 0,005) gefunden. Um das Ergebnis zu bestätigen, wurde die Häufigkeit des homozygoten 494 G und des he­ terozygoten Typus mit dem homozygoten 494A-Typus in Patienten und Kontrollprobanden verglichen. Auch in diesem Falle wurde der χ2-Test verwendet (2 × 2 Mög­ lichkeitentabelle 494 A/A gegen 494 G/A und 494 G/G). Es ergaben sich auch hier signifikante Unterschiede (2 × 2 Möglichkeitentabelle; χ2 = 10,0, p = 0,002; Wahrscheinlichkeitenverhältnis 1,74, Vertrauensintervall 1,23-2,44).
Durch diese Daten ist erstmals nachgewiesen, daß das Allel 494 G signifikant mit koronaren Herzerkrankungen und Arteriosklerose verknüpft ist und daher einen neuen Risikofaktor für diese Krankheit darstellt.
Im folgenden wird nun das genaue Protokoll gegeben, mit dem für jeden Probanden und für jeden Patienten dessen allelischer Typus bestimmt wurde.
Als erstes wurde eine DNS-Isolation mit dem QIAamp Blood Mini Kit™ der Firma Qiagen, Hilden, mit den folgenden Schritten durchgeführt:
  • - 20 µl Qiagen Protease in 1,5 ml Eppendorf-Gefäß vorlegen
  • - 200 µl Vollblut hinzugeben
  • - 200 µl AL-Puffer hinzugeben und vortexen
  • - bei 56°C für 10 min inkubieren
  • - 200 µl Ethanol 100% hinzugeben
  • - auf QIAamp™ Säule beladen und 1 min bei 6000 g zentrifugieren
  • - 500 µl AW1 auf die Säule beladen und 1 min bei 6000 g zentrifugieren
  • - 500 µl AW2 auf die Säule beladen und 3 min bei 20000 g zentrifugieren
  • - Die Säule in ein neues Eppendorf-Gefäß
  • - 200 µl AE-Puffer auf die Säule laden und 1 min. bei. 6000 g zentrifugieren
  • - Eluat bei -20°C lagern.
Anschließend wurde mittels des Kits Qiagen HotStar Ready Mix™, Firma Qiagen, Hilden, eine Polyme­ rasekettenreaktion (PCR) durchgeführt mit den folgenden Schritten:
  • - 5 µl DNS (isoliert wie oben beschrieben) in 0,2 ml Eppendorf-Gefäß vorlegen
  • - 25 µl Hot-Star-Ready-Mix™ hinzugeben
  • - 3 µl Primer 1 hinzugeben (Sequenz: 5'-TTG GAT AGT ACC TCT GAG ACT G-3'; Konz. 10 µmol/µl)
  • - 3 µl Primer 2 hinzugeben (Sequenz: 5'-ACG TGA GGG CTC CAA GCT CT-3'; Konz. 10 µmol/µl)
  • - 14 µl Aqua-Bidest hinzugeben
  • - in Thermocycler stellen (Thermocycler T3™, Fir­ ma Biometra)
  • - PCR-Programm:
    • 1. Schritt: 95°C 15 min.
    • 2. Schritt: 95°C 30 sec;
    • 3. Schritt: 55°C 30 sec;
    • 4. Schritt: 72°C 40 sec; 35 mal zu Schritt 2 zu rück;
    • 5. Schritt: 72°C 10 min.
Die Polymerasekettenreaktion wurde auch mit weiteren Primerkombinationen durchgeführt, nämlich dem Primer­ paar
5'-TTG GAT AGT ACC TCT GAG ACT G-3' (sense primer) und
5'-TTT GCT GCT ATG GGC TTT CT-3' (anti sense primer)
bzw. mit dem Primerpaar
5'-CTG GTC AAG GTC ACA TTC TTC-3' (sense primer) und
5'-GAC CTC CAT GTA GGC CCA TGT-3' (antisense primer)
bzw. mit dem Primerpaar
5'-GAA TGG AAG ATC CCA GAA AT-3' (sense primer) und
5'-CAC TCC TCT TTG CTC CAG TGC-3' (antisense primer).
Lediglich die Annealing-Temperatur bei der Polyme­ rasekettenreaktion wurde für das erste genannte Pri­ merpaar auf 52°C und für das zweitgenannte Primer­ paar auf 54°C eingestellt.
In beiden Fällen wurden sämtliche weiteren Schritte zur Bestimmung des Allelentyps der Kontrollprobanden und der Patienten identisch ausgeführt.
Die PCR-Produkte wurde mittels einer MicroSpin HR 300™ Säule der Firma Pharmacia aufgereinigt, wozu die folgenden Schritte durchgeführt wurden:
  • - Säule vorbereiten (Deckel abschrauben und Bolzen abbrechen)
  • - Säule in 1,5 ml Eppendorf-Gefäß stellen
  • - Zentrifugation der Säule bei 735 g für 1 min
  • - Säule in neues 1,5 ml Eppendorf-Gefäß stellen
  • - Zentrifugation der Säule bei 735 g für 2 min
  • - Eluat bei -20°C lagern oder direkt weiter ver­ wenden.
Die so amplifizierte DNS wurde anschließend sequen­ ziert. Diese Sequenzierung besteht aus den Schritten Sequenzierungsreaktion, Fällung und Sequenzierung, die im folgenden dargestellt werden:
Sequenzierungsreaktion
  • - 8 µl Big-Dye Reaction Mix™ (ABI/Perkin Elmer) in 0,2 µl Eppendorf-Gefäß vorlegen
  • - 1 µl Primer 1 aus der PCR (10 µmol/µl) hinzuge­ ben
  • - 6 µl aufgereinigtes PCR-Produkt hinzugeben
  • - 5 µl HPLC-Wasser, d. h. hochaufgereinigts Wasser, alternativ Aqua bidest hinzugeben (Firma Merck)
  • - in Thermocycler stellen (Thermocycler T3™, Firma Biometra)
  • - PCR-Programm:
    • 1. Schritt: 95°C 5 sec,
    • 2. Schritt: 50°C 10 sec;
    • 3. Schritt: 72°C 4 min; 25 mal zu Schritt 1 zurück.
Fällung
  • - 80 µl HPLC-Wasser der Proben hinzugeben (Firma Merck) und in 1,5 ml Eppendorf-Gefäß überführen
  • - 10 µl NaAc (pH 5,8, 3M) hinzugeben
  • - 250 µl Ethanol (100%) hinzugeben
  • - Vortexen und Zentrifugation bei 20000 g für 30 min
  • - Überstand verwerfen
  • - Zugabe von 500 µl Ethanol (70%)
  • - Zentrifugation bei 20000 g für 30 min
  • - Überstand verwerfen und Eppendorf-Gefäß trocknen
  • - 20 µl Template Suppression Reagent™ (ABI/Perkin Elmer) hinzugeben.
Sequenzierung
  • - Probe bei 95°C für 5 min denaturieren und auf Eis abkühlen
  • - In ABI-Prism 310™ (ABI-Perkin Elmer) Automaten sequenzieren.
Alternativ zur Sequenzierung kann auch eine Dot-Plot- Hybridisierung erfolgen. Diese Hybridisierung besteht aus den Schritten Sondenmarkierung und Hybridisie­ rung, die im folgenden dargestellt sind:
Sondenmarkierung (Kit RediPrime™, Fa. Amershan)
  • - Sonde 1 und Sonde 2 (jeweils 10 ng) in 45 µl Aqua bidest lösen
    (Sonde 1: 5'-AAA TCC CAG AAA TTC TCC CG-3';
    Sonde 2:- 5'-AAA TCC CAG AAA TTC TCC CA-3')
  • - Bei 95°C denaturieren 5 min
  • - In Labeling-Tube geben (T4-Ligase-Kit™, Fa. Amershan)
  • - 5 µl P32dCTP (Aktivität 50 µCi hinzugeben)
  • - 37°C für 30 min inkubieren
  • - Bei 95°C denaturieren für 5 min.
Hybridisierung
  • - 5 µl PCR auf jeweils 2 Hybond N+™-Membranen (Fa. Amershan) bringen und eintrocknen lassen
  • - Membranen W-Crosslink™ (Fa. Biometra) 0,120 mJ/cm2
  • - 10 ml Hybridisierungslösung 30 min bei 80°C in­ kubieren
  • - 10 ml Hybridisierungslösung in 50 ml Falcon- Tuben und jeweils eine Membran hinzugeben
  • - 1 Stunde bei 42°C inkubieren
  • - Zugabe der 50 µl Sonde 1 zu der einen Membran und Sonde 2 zu der zweiten Membran
  • - 4 Stunden bei 42°C inkubieren
  • - Membran 3 mal mit 100 ml Kaltwaschlösung waschen
  • - Membran 1 mal bei 50°C mit Heißwaschlösung wa­ schen
  • - Autoradiographiefilm auflegen und 30 min expo­ nieren
  • - Film entwickeln und auswerten (beide Spots = he­ terozygot; nur bei Sonde 1 ein Spot = homozygot für G an Pos. 494; nur bei Sonde 2 ein Spot = homozygot für A an Pos. 494).
Die oben dargestellten Verfahren wurden unter Verwen­ dung der folgenden Lösungen durchgeführt.
20 × SSC
  • - 88,23 g Tri-Sodium Citrat
  • - 175,32 g NaCl
  • - 800 ml bidest Wasser
  • - pH 7,0.
Kaltwaschlösung
  • - 50 ml 20 × SSC
  • - 50 ml 10% SDS
  • - ad 1 l mit Aqua bidest.
Heißwaschlösung
  • - 10 ml 20 × SSC
  • - 200 ml 10% SDS
  • - ad 1 l mit Aqua bidest.
Hybridisierungslösung
  • - 250 ml Formamid (deionisiert)
  • - 125 ml 20 × SSC
  • - 50 ml 10% SDS
  • - 20 ml Denhardt
  • - 25 ml Na-Phosphat
  • - 10 ml Heringssperma.
Na-Phosphat
  • - 13,8 g NaH2PO2 in 200 ml Aqua bidest (pH auf 4,0 stellen)
  • - 17,8 g Na2HPO9 in 200 ml Aqua bidest (pH auf 9,0 stellen)
  • - Na2HPO4-Lösung mit NaH2PO4 auf pH 7,0 stellen.
Heringssperma-DNS
  • - 10 g/l Heringssperma-DNS in Aqua bidest auflösen und durch Kanüle scheren.
Denhard's 50 ×
  • - 5 g Ficoll 400
  • - 5 g Polyvinylpyrrolidon
  • - 5 g Rinderserumalbumin (BSA) (Sigma Pentax Frac­ tion V)
  • - mit Aqua bidest auf 500 ml bringen, steril fil­ trieren und in Aliquots wegfrieren.
Alternativ zur Sequenzierung der amplifizierten DNS bzw. zur Dot-Blot Hybridisierung kann selbstverständ­ lich dieser Single-Site-Polymorphismus auch auf sämt­ liche anderen aus der Literatur bekannten Weisen nachgewiesen werden. Dies kann beispielsweise durch Hybridisierung mit geeigneten Oligonukleotiden an Mi­ kroarrays, über die LightCycler-Technik oder über ei­ ne Fragmentanalyse bei Verwendung geeigneter Restrik­ tionsendonukleasen erfolgen.
Zusammenfassend läßt sich feststellen, daß mit dem vorliegenden Verfahren und den vorliegendem Primern und Diagnose-Kits erstmals die Möglichkeit besteht, einen Risikofaktor für Herzkreislauf-Krankheiten und Arteriosklerose zu bestimmen.

Claims (27)

1. Verfahren zur Bestimmung des Risikos und/oder der Prädisposition für Arteriosklerose und/oder Herz-Kreislauf-Krankheiten wie der koronaren Herzerkrankung eines Menschen, dadurch gekennzeichnet, daß die allelische Variation des CD32-Gens (FCGR2A- Gen) oder die Variation der Aminosäuresequenz des CD32-Proteins dieses Menschen erfaßt wird.
2. Verfahren nach dem vorhergehenden Anspruch, da­ durch gekennzeichnet, daß die allelische Varia­ tion des Nukleotids 494 des CD32-Gens erfaßt wird.
3. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprü­ che, dadurch gekennzeichnet, daß erfaßt wird, ob das Nukleotid 494 des CD32-Gens ein Guanin oder ein Adenin ist.
4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprü­ che, dadurch gekennzeichnet, daß die Prädisposi­ tion für Arteriosklerose in der folgenden Rei­ henfolge zunimmt:
AA < AG < GG,
wobei AA einen homozygoten Typ mit Adenin an Po­ sition 494 beider menschlicher CD32-Gene, AG ei­ nen heterozygoten Typ mit jeweils Adenin bzw. Guanin an Position 494 je eines CD32-Genes und GG einen homozygoten Typ mit Guanin an Position 494 beider menschlicher CD32-Gene bezeichnet.
5. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprü­ che, dadurch gekennzeichnet, daß die allelische Variation an genomischer DNS erfaßt wird.
6. Verfahren nach dem vorhergehenden Anspruch, da­ durch gekennzeichnet, daß die genomische DNS aus Proben beliebiger Körperflüssigkeiten oder Gewe­ beproben in herkömmlicher Weise isoliert wird.
7. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeich­ net, daß die RNS aus Proben beliebiger Körper­ flüssigkeiten oder Gewebeproben in herkömmlicher Weise isoliert und anschließend in herkömmlicher Weise in cDNS revers transkribiert wird.
8. Verfahren nach einem der drei vorhergehenden An­ sprüche, dadurch gekennzeichnet, daß zumindest ein variabler Abschnitt der genomischen DNS oder der cDNS des CD32-Gens vervielfältigt wird.
9. Verfahren nach dem vorhergehenden Anspruch, da­ durch gekennzeichnet, daß der variable Abschnitt das Nukleotid 494 enthält.
10. Verfahren nach einem der beiden vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Ver­ vielfältigung mittels Polymerasekettenreaktion erfolgt.
11. Verfahren nach einem der drei vorhergehenden An­ sprüche, dadurch gekennzeichnet, daß für die Po­ lymerasekettenreaktion ein Paar aus jeweils ei­ nem Primer der folgenden zwei Primergruppen mit folgenden Sequenzen verwendet werden:
TTGGATAGTACCTCTGAGACTG, CTGGTCAAGGTCACATTCTTC oder GACCTCCATGTAGGCCCATGT in Gruppe 1 und
TTTGCTGCTATGGGCTTTCT, GAA TGG AAGATCCCAGAAAT, CACTCCTCTTTGCTCCAGTGC oder
5'-ACGTGAGGGCTCCAAGCTCT-3' in Gruppe 2.
12. Verfahren nach einem der Ansprüche 5 bis 11, da­ durch gekennzeichnet, daß die allelische Varia­ tion der genomischen DNS oder der cDNS mittels Sequenzierung, Dot-Blot-Hybridisierung, Restrik­ tionsverdau und Auftrennung der Fragmente und/oder mittels Analyse der Fehlpaarung mit Hy­ bridisierungsproben oder anderen herkömmlichen Verfahren erfolgt.
13. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprü­ che, dadurch gekennzeichnet, daß die Variation der Aminosäure 131 des CD32-Proteins erfaßt, wird.
14. Verfahren nach dem vorhergehenden Anspruch, da­ durch gekennzeichnet, daß erfaßt wird, ob die Aminosäure 131 des CD32-Proteins ein Histidin oder ein Arginin ist.
15. Verfahren nach einem der beiden vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Prädisposition für Arteriosklerose in der folgenden Reihenfolge zunimmt:
His,His < His,Arg < Arg,Arg
wobei His,His einen homozygoten Typ mit Histidin an Position 131 des CD32-Proteins, His,Arg einen heterozygoten Typ mit Histidin oder Arginin an Position 131 des CD32-Proteins und Arg,Arg einen homozygoten Typ mit Arginin an Position 131 des CD32-Proteins bezeichnet.
16. Primerpaar mit einem Paar Primer aus jeweils ei­ nem Primer der folgenden zwei Primergruppen mit folgenden Sequenzen:
TTGGATAGTACCTCTGAGACTG, CTGGTCAAGGTCACATTCTTC oder GACCTCCATGTAGGCCCATGT in Gruppe 1 und
TTTGCTGCTATGGGCTTTCT, GAA TGG AAGATCCCAGAAAT, CACTCCTCTTTGCTCCAGTGC oder
5'-ACGTGAGGGCTCCAAGCTCT-3' in Gruppe 2.
17. Diagnosekit zur Bestimmung des Risikos und/oder der Prädisposition für Arteriosklerose und/oder Herz-Kreislaufkrankheiten wie der koronaren Herzerkrankung eines Menschen mit
mindestens einem Paar Oligonukleotide (Reverse­ primer, Forwardprimer), wobei die beiden Oligo­ nukleotide eines Paares als Primer zur Amplifi­ kation mittels Polymerasekettenreaktion jeweils eines der beiden komplementären Stränge eines gesuchten DNS-Abschnittes des menschlichen Gens oder eines cDNS-Abschnittes der menschlichen RNS geeignet sind, und
wobei der gesuchte DNS-Abschnitt Teil der geno­ mischen DNS des CD32-Gens oder Teil der cDNS ist, die durch reverse Transkription der dem CD32-Gen bzw. dem CD32-Protein zugeordneten RNS erhaltbar ist.
18. Kit nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, daß der gesuchte DNS-Abschnitt das Nukleotid 494 der genomischen DNS des CD32- Gens bzw. dessen entsprechendes Nukleotid in der cDNS enthält.
19. Kit nach einem der beiden vorhergehenden Ansprü­ che, dadurch gekennzeichnet, daß es ein Paar aus jeweils einem Oligonukleotid-Primer der folgen­ den zwei Primergruppen enthält:
TTGGATAGTACCTCTGAGACTG, CTGGTCAAGGTCACATTCTTC oder GACCTCCATGTAGGCCCATGT in Gruppe 1 und
TTTGCTGCTATGGGCTTTCT, GAA TGG AAGATCCCAGAAAT, CACTCCTCTTTGCTCCAGTGC oder
5'-ACGTGAGGGCTCCAAGCTCT-3' in Gruppe 2.
20. Kit nach einem Ansprüche 17 bis 19, dadurch ge­ kennzeichnet, daß zumindest eines der beiden Oligonukleotide mit einem Fluorophor markiert ist.
21. Kit nach einem der Ansprüche 17 bis 20, dadurch gekennzeichnet, daß es die zur Durchführung ei­ ner Polymerasekettenreaktion erforderlichen Sub­ stanzen enthält.
22. Kit nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, daß es als zur Durchführung ei­ ner Polymerasekettenreaktion erforderliche Sub­ stanzen eine Pufferlösung, Magnesiumchlorid, De­ soxynukleotid-Triphosphate, sowie eine hitzestabile Polymerase enthält.
23. Kit nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, daß es als hitzestabile Polyme­ rase eine Polymerase aus Thermus aquaticus (Taq- Polymerase) enthält.
24. Kit nach einem der Ansprüche 17 bis 23, dadurch gekennzeichnet, daß es als Positivkontrolle eine DNS-Probe mit dem gesuchten DNS-Abschnitt ent­ hält.
25. Kit nach einem der Ansprüche 17 bis 24, dadurch gekennzeichnet, daß er weiterhin eine Anleitung zur Durchführung der Polymerasekettenreaktion, eine Anleitung zur Durchführung einer Fragmen­ tanalyse enthält.
26. Kit nach einem der Ansprüche 17 bis 25, dadurch gekennzeichnet, daß er eine Anleitung zur Durch­ führung eines Restriktionsverdaus mit anschlie­ ßender Gelelektrophorese enthält.
27. Kit nach einem der Ansprüche 17 bis 26, dadurch gekennzeichnet, daß er ein Schema zur Auswertung der erhaltenen Meßergebnisse enthält.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005042776A1 (en) * 2003-10-23 2005-05-12 Forinnova As Method of determining predisposition towards atherosclerosis
WO2005056837A2 (en) * 2003-11-26 2005-06-23 Applera Corporation Genetic polymorphisms associated with cardiovascular disorders and drug response, methods of detection and uses thereof
WO2006002930A2 (en) * 2004-06-30 2006-01-12 Friedrich-Alexander- Universitaet Erlangen- Nuernberg FcϜRIIa POLYMORPHISM AND ITS USE IN DIAGNOSIS

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AN 1998193100 zu: Rapidtyping of the human Fc gamma receptor IIA poly- morphism by polymerase chain reaction amplifi- cation with allele-specific primers. FLESCH, B.K. u.a., TRANSFUSION, (1998 Feb) 38(2) 174-6 [rech. am 02.08.2001] *
AN 94321808 zu: Ethnic variation in frequency of an allelic polymorphism of human Fcgamma RIIA determined with allele specific oligonucleotide probes. OSBORNE, J.M. u.a., JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS, (1994 Aug 1) 173 (2) 207-17 [rech. am 02.08.2001] *
C-reactive protein binding to FCgammaRIIa on human monocytes and neutrophils is allele-specific. STEIN, M.-P: u.a., J. Clin. Invest. (February 00) 105 (3) 369-376 *
C-reactive protein, a sensitive marker of *
Datenbank MEDLINE bei STN *
Low grade inflammation and coronary heart disease:prospective study and updated meta-analyses. DANESH, J. u.a., BMJ (22 July 2000) 321, 199-204 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005042776A1 (en) * 2003-10-23 2005-05-12 Forinnova As Method of determining predisposition towards atherosclerosis
WO2005056837A2 (en) * 2003-11-26 2005-06-23 Applera Corporation Genetic polymorphisms associated with cardiovascular disorders and drug response, methods of detection and uses thereof
WO2005056837A3 (en) * 2003-11-26 2006-10-05 Applera Corp Genetic polymorphisms associated with cardiovascular disorders and drug response, methods of detection and uses thereof
WO2006002930A2 (en) * 2004-06-30 2006-01-12 Friedrich-Alexander- Universitaet Erlangen- Nuernberg FcϜRIIa POLYMORPHISM AND ITS USE IN DIAGNOSIS
WO2006002930A3 (en) * 2004-06-30 2006-04-06 Univ Friedrich Alexander Er FcϜRIIa POLYMORPHISM AND ITS USE IN DIAGNOSIS

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