DE10011530A1 - Hochwirksame Antisense-Oligodesoxynucleotide gegen Polio-like Kinasel - Google Patents
Hochwirksame Antisense-Oligodesoxynucleotide gegen Polio-like KinaselInfo
- Publication number
- DE10011530A1 DE10011530A1 DE10011530A DE10011530A DE10011530A1 DE 10011530 A1 DE10011530 A1 DE 10011530A1 DE 10011530 A DE10011530 A DE 10011530A DE 10011530 A DE10011530 A DE 10011530A DE 10011530 A1 DE10011530 A1 DE 10011530A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- cells
- kinase
- antisense oligodeoxynucleotide
- antisense
- jwg2000
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Im Stand der Technik war es bisher nicht gelungen, Antisense-ODNs aufzufinden, mit denen sich das Wachstum von mit Plk1-Überexpressionen assoziierten Tumorzellen effektiv, d. h. bis wesentlich über 50%, hemmen läßt. Es sollten daher verbesserte ODNs zur Verfügung gestellt werden, welche über eine wesentlich wirksamere Inhibitionseffizienz der Pkl1-Expression in Tumorzellen verfügen. DOLLAR A Mit Antisense-ODNs der Formeln DOLLAR A 5'-CCT GAC CAG CCC ACG CTC CG-3' (JWG 2000) DOLLAR A und DOLLAR A 5'-CCC AAA AAG CGG CCC C-3' (JWG 160) DOLLAR A stehen wirksame Inhibitoren der Expression von Poli-like Kinasel zur Verfügung, mit welcher sich der Anteil an lebensfähigen Tumorzellen bis auf 20% senken läßt. DOLLAR A Oligodesoxynucleotide zur Hemmung des Tumorwachstums mittels der Antisense-Strategie.
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft zwei Oligodesoxynucleotide (ODNs), mit welchen sich
wirksam das Wachstum von mit Polo-like-Kinase (Plk)-Überexpression assoziierten
Tumorzellen hemmen läßt. Insbesondere betrifft die Erfindung zwei hochwirksame
Antisensedesoxynucleotide, mit welchen die Translation von Plk1-mRNA in Tumoren
inhibiert werden kann.
Es ist bekannt, daß die Polo-like Kinasen in verschieden eukaryotischen Organismen eine
wichtige Rolle in der Zellteilung und Proliferation spielen. Insbesondere ist von der
hochkonservativen Serin/Threonin-Kinase Plk1 bekannt, daß ihre Expression besonders hoch
in der G2/M-Anfangsphase der Mitose ist und sie auch über die Anaphase, Metaphase und
Telophase hinweg eine hohe Aktivität beibehält. Wegen der wichtigen Rolle, die Plk1 im
Cdc25C-Amplification-loop spielt, insbesondere für die Organisation beim Aufbau der
bipolaren Spindel sowie bei der Aktivierung des Anaphase-Promotions-Komplexes, ist Plk1
besonders gut geeignet, um als diagnostischer und prognostischer Marker für die Entwicklung
eines Tumors oder als Ziel einer Anti-Krebstherapie zu dienen.
Bereits seit längerem ist es bekannt, die Translation von mRNA durch komplementär zur
Sequenz einer mRNA ausgerichteter antisense-ODNs zu inhibieren. Neueren Datums ist der
Einsatz einzelsträngiger Nucleinsäuren für die selektive Blockade der Genexpression von
Transkriptionsfaktoren. Damit derartige ODNs aber selektiver eingesetzt werden können,
müssen sie zuvor modifiziert werde, um gegenüber enzymatischem Abbau stabiler zu sein.
Geeignete Modifikationen stellen der Einbau von Phosphotriester-, Phosphoramid-,
Methylphosphonat-, Phosphorothioat und Peptidnucleinsäurebindungen in die Struktur des
Oligonucleotids dar. Wegen seiner erhöhten Stabilität und der Fähigkeit, RNase H Aktivität
auszulösen, sind Phosphorothioat-modifizierte ODNs bevorzugte Kandidaten für eine
spezifische Inhibition der Genexpression.
Wegen ihrer Sekundär- und Tertiärstruktur sind jedoch nicht alle mRNA-Sequenzen
gleichermaßen einer effektiven Wechselwirkung mit Antisense-ODNs zugänglich. So hängt
beispielsweise die Wirksamkeit einer Expressionsinhibition nicht nur von der jeweiligen
Größe und einer geeigneten Komplementärsequenz der jeweiligen Antisense-ODNs ab,
sondern auch davon, ob sie keine Sequenzen aufweisen, mit denen sie sich gegenseitig durch
Hybridisierung, etwa durch Ausbildung zu vieler Basenpaarbindungen untereinander, in ihrer
Wirksamkeit einschränken oder gar neutralisierten können.
Vor dem Hintergrund dieser Schwierigkeiten, war es im bisherigen Stand der Technik nicht
gelungen, Antisense-ODNs aufzufinden, mit denen sich das Wachstum von mit Plk1-
Überexpression assoziierten Tumorzellen effektiv, d. h. bis wesentlich über 50%, hemmen
ließ.
Der vorliegenden Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, verbesserte ODNs zur
Verfügung zu stellen, welche über eine wesentlich wirksamere Inhibitionseffizienz der Plk1-
Expression in Tumorzellen verfügen.
Erfindungsgemäß wird die Aufgabe durch die in den folgenden Formeln wiedergebenen
modifizierten Oligodesoxynucleotide aus 20 (JWG2000) bzw. 16 (JWG 160)
Nucleotideinheiten (20-mer bzw. 16-mer) gelöst:
5'-CCT GAC CAG CCC ACG CTC CG-3' (JWG 2000)
5'-CCC AAA AAG CGG CCC C-3' (JWG 160)
5'-CCT GAC CAG CCC ACG CTC CG-3' (JWG 2000)
5'-CCC AAA AAG CGG CCC C-3' (JWG 160)
Als Modifikation gegen enzymatischen Abbau kommen prinzipiell die im Stand der Technik
bekannten Substituenten, entweder einzeln oder in Kombination, in Frage. Bevorzugt
kommen die oben benannten Substituenten zum Einsatz. Die ganz bevorzugte Modifikation
ist der Einbau von Phosphorothioat. In den folgenden Untersuchungen wurden die
Antisense-ONDs in Form ihrer Phosphorthioate eingesetzt.
Die Herstellung der Phosphorothioat-modifizierten JWG 2000 bzw. JWG 160 erfolgte mit
einem automatischen DNA-Synthesizer (Perspective 8909; BioSpring GmbH; Frankfurt) nach
im Stand der Technik bekannten Verfahren. Die Deprotektion der Oligonucleotide wurde mit
konzentriertem Ammoniak über einen Zeitraum von 16 Stunden bei Raumtemperatur
durchgeführt.
Die in Zellkultur verwendeten menschlichen Krebszelllinien A549 und Detroit 562 sowie das
A549 Xenotranplantat in nackte Mäusen wurden von der American Type Culture Collection
(ATCC) bzw. der Deutschen Sammlung von Mokroorganismen und Zellkulturen erworben.
2,5 . 105 in DMEM (Dulbecco's modifiziertes Eagle Medium) suspendierte, mit 10%
hitzeinaktiviertem Kälberserum (FCS), Antibiotika und 2 mM L-Glutamin versetzte Zellen
wurden in T25 Kulturflaschen ausgesät und bei 37°C in 5% CO2/95% Luft-Atmosphäre in
einem Brutschrank unter Feuchtigkeit wachsen gelassen. Anderntags wurden die Zellen (mit
einer Konfluenz von 50-60%) mit den jeweiligen, in sterilem entionisierten Wasser für
Zellkulturen gelösten ODNs in Gegnwart des monokationischen Lipids N-[1-(2,3-
Dioleoyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammoniummethylsulfat, Dotap (Roche Diagnostics) in
20 mM HEPES-Puffer (pH 7,4 mit NaOH) und OptiMem-Medium (Gibco BRL) behandelt.
Nach 4 Stunden Inkubation bei 37°C wurde das ODN-haltige Medium durch ein eine normale
Zellkultur in 10% FCS enthaltendes Medium ersetzt und für weitere 24 oder 28 Stunden
inkubiert. Genügende Zeit nach der Transfektion wurde die Lebensfähigkeit der Zellen durch
Anfärben mit Trypan Blau bestimmt und die Zellzahl mit einer Zählkammer ermittelt.
Transfizierte und nur mit Dotap behandelte Zellen wiesen nach der Transfektion eine 95 bis
100% Lebensfähigkeit auf.
Von herausgeschnittenen Tumorxenotransplantaten wurden Portionen von 0,5 bis 1,5 g in
einer Guanidiniumisothiocyanat-Lösung homogenisiert. Die RNA wurde mittels
Ultrazentrifugation bei 125000 g in einem 5,7 M CsCl-Gradienten erhalten. Zur Bestimmung
des mRNA-Gehalts in den transfizierten Zellen wurde die gesamte RNA aus den Zellen
gewonnen, indem der RNeasy mini kit (Qiagen, Hilten) 24 und 48 Stunden nach der
Transfektion oder an den angegebenen Zeiten für eine in vivo Antisense-mRNA-Analyse
eingesetzt wurde. 20 µg Gesamt-RNA wurden mittels Elektrophorese in einem
denaturierenden 1% Agarose/Formaldehyd-Gel abgetrennt, auf eine Nylon-Membran
übertragen und mit einem radioaktiven, mittels PCR gewonnenem Plk1-Fragment als Sonde
durchsucht. Mit einem 380A DNA-Synthesizervon Applied Biosynthesis wurden Primer
hergestellt. Die radioaktive Markierung der Sonde zur Aufnahme von Northern Blots erfolgte
nach einem Standard-PCR-Verfahren unter Verwendung von 150 µCi α-32P dCTP (6000 Ci/mmol,
Amersham Pharmacia Biotech). Die radioaktive Markierung der Antisense-Stränge
wurde mit den folgenden Primern durchgeführt: Plk1AS: 5'-GAT GTT GGC ACC CTT TCA
GC-3', G3PDH: GAPAS: 5'-ATG GTT CAC ACC ATG ACG-3'.
Die Hybridisierung erfolgte in QuickHyb-Lösung (Stratagene) während 1 Stunde bei 68°C.
Die Membranen wurden zwei- oder dreimal unter hoch stringenten Bedingungen in 0,1 ×
SSC, 1% SDS bei 65°C für 60 Minuten gewaschen und über Nacht autoradiographiert.
Sodann wurden die Membranen von den Gensonden befreit und mit einer anderen radioaktiv
markierten Sonde zur Kontrolle der Qualität und Einheitlichkeit der mRNA-Beladung unter
identischen Bedingungen (z. B. GPDH) rehybridisiert.
Für die Western Blot-Analyse wurden zelluläre Proteine unter Verwendung von 250 µl RIPA-
Puffer (1 × PBS, 1% Nonidet P-0, 0,5% Natriumdesoxycholat, 0,1% SDS) pro T25
Zellkulturflasche extrahiert. 25 µg Protein wurden elektrophoretisch in 12% SDS-
Polyacrylamidgel aufgetrennt und auf Nitrocellulose-Membranen übertragen. Unter Einsatz
von Anti-Plk1- (Transduction Laboratories) und Anti-Actin-Antikörpern (Sigma) wurden
Plk1 und Actin nachgewiesen. Durch Einsatz von geeigneten mit Merrettich-Peroxidase
konjugierten sekundären IgG (Jackson Immuno Research) und dem Chemolumineszenz-
System (Amersham-Pharmacia Biotech) wurden die Immunkomplexe sichtbar gemacht.
Gegen eine Proliferation gerichtete Effekte wurden täglich durch Bestimmung der Zellzahl
und Lebensfähigkeit durch direktes Auszählen unter Einsatz des Trypanblau-Verfahrens
ermittelt. Die Lebensfähigkeit der Zellen wurde täglich für 4 Tage nach Behandlung mit dem
jeweiligen Antisense-ODN, Sense-ODN und einem beliebigen Kontroll-ODN ermittelt. Die
Zellen wurden in 0,1% Trypanblau suspendiert und ausgezählt. Zu jedem Zeitpunkt wurde der
Mittelwert aus drei Zählungen genommen und der Prozentsatz der lebensfähigen Zellen
berechnet.
Die Tierstudien erfolgten an Gruppen mit 5 nackten, acht bis zehn Wochen alten Athymie-
Mäusen (nu/nu) NMRI (Harlan Winkelmann). 2 . 106 A549- oder Detroit562-Zellen wurden
subkutan injiziert und vor Beginn der Antisense-Behandlung nacheinander durch mindestens
drei aufeinanderfolgende Transplantationen einer Passage unterworfen. Unter Betäubung mit
Urethan wurden Tumorfragmente von ca. 20 bis 25 mg subkutan in die linke und rechte Seite
des Tieres implantiert. Die Antisense-ODN-Behandlungen begannen, wenn die Tumoren ein
durchschnittliches Volumen von 60 bis 80 mm3 erreicht hatten (7 bis 14 Tage nach der
Transplantation). In Saline-Lösung gelöste ODNs wurden täglich als Bolusinjektion (200 µl)
in die Schwanzvene in einer Dosis von 15 mg/kg Körpergewicht verabreicht. Die Tumorgröße
wurde mit einem Greifzirkel ermittelt und das Tumorvolumen mit der Formel V = π/6 .
großer Durchmesser . kleiner Durchmesser2 berechnet. Zur Bestimmung von Plk1-mRNA in
Tumorxenotransplantaten wurde aus herausgeschnittenen Tumoren die Gesamt-DNA isoliert
und, wie oben beschrieben, mittels Northern-Blot-Analyse ermittelt.
Da das mit der Proliferation assoziierte Plk1-Gen in neoplastischen Zellen hoch exprimiert
wird, wurde die Antisense-Strategie dazu verwendet, die Plk1-Expression in Zellkulturen
abzusenken. Die Aufnahme der ODNs durch die Zellen wurde durch Bildaufnahmen der
jeweiligen fluorescein-markierten ODNs überwacht. Die erfindungsgemäßen ODNs wiesen in
Zellkulturen von A549 und Detroit 562 eine hohe Transfektionseffizienz (< 90%) auf. Die
Aufnahme der ODNs durch A549 Tumorzellxenotransplantate wurde mittels Injektion der
fluoresceinmarkierten erfindungsgemäßen ODNs an Athymie-Mäusen ermittelt.
Zusätzlich zu den Plk1 Antisense-Phosphorothioat-ODNs wurden die folgenden Kontrollen
durchgeführt: a) eine Zufallssequenz aus dem Herpes simplex Virus und b) eine Sense-
JWG2000-Sequenz.
Das dosisabhängige Verhalten für die Wirkung von JWG2000 bzw. JWG106 zeigte, daß sich
schon nach einmaliger Anwendung der ODNs die mRNA von Pkl1 in A549-Zellen auf unter
10% der Kontrolle absenken ließ. Die entsprechende Wirkung für JWG2000 ist in Fig. 1A
gezeigt. Der IC50-Wert für JWG2000 zur Unterdrückung der Plk1-Expression betrug 1 µM.
Fig. 1B zeigt die entsprechende Wirkung von Sense-JWG2000. Eine ähnliche Wirkung auf
JWG2000 wurde für Detroit 562-Zellen gefunden (nicht gezeigt).
Wie in Fig. 2 wiedergegeben, ergab sich bei Behandlung von A 549-Zellen mit 2 µM
JWG2000 eine signifikante Verminderung von Plk1 auf Proteinniveau, während Pikl bei nur
einer Lipofektion unterzogenen Zellen oder nach Transfektion mit 2 µM Sense-JWG2000
unverändert blieb. Der gleiche Blot wurde auch mit Anti-Actin-Antikörpern als Kontrolle für
den Proteingehalt in jeder Bande erhalten.
Zur Ermittlung der antiproliferierenden Wirkungen von JWG2000 und/oder JWG160 wurden
A549- und Detroit 562-Zellen entweder mit JWG2000 bzw. JWG160, den entsprechenden
Sense-JWG2000 bzw. -JWG160 oder einer zufälligen Kontrolle oder nur mit Dotap
behandelt. Behandlung mit Dotap allein oder den entprechenden Sense-ODNs oder dem
Kontroll-ODN zeigten gegenüber den Zellen keine Wirkung. Im Vergleich zu den nur mit
Dotap behandelten Zellen verminderte eine Behandlung mit JWG2000 bzw. JWG160 die Zahl
lebensfähiger Zellen bis zu einem Totzellanteil von 80%. In Fig. 3 sind die entsprechenden
Werte für die JWG2000-Wirkung wiedergegeben. Eine Behandlung mit der gleichen
Konzentration von Kontroll(Zufalls)sequenz-ODN (aus Herpes simplex, nicht gezeigt) oder
mit den entsprechenden Sense-JWG2000 bew. -JWG160 blieb ohne jegliche Wirkung. Somit
ging die Unterdrückung der Plk1-Expression durch JWG2000 bew. JWG160 Hand in Hand
mit der Abnahme von Proliferation und Lebensdauer der Krebszellen.
Demgegenüber wurde das Wachstum von primären menschlichen Mesangiumzellen und von
menschlichen Amnion-Fibroblasten durch eine JWG2000- bzw. JWG160-Behandlung nicht
signifikant beeinträchtigt (Daten nicht gezeigt), was zeigt, daß die wachstumshemmende
Wirkung von JWG2000 bew. JWG160 selektiv für Krebszellen mit einer Überexpression von
Plk1 ist.
Zur Untersuchung einer möglichen Antitumoraktivität von JWG2000 bew. JWG160 unter in
vivo Bedingungen wurden A549-Zellen subkutan in Nacktmäuse injiziert, d. h. sie dienten als
Mausmodell für ein menschliche Tumorxenotransplantat. Die Behandlung mit ODN begann
nach mindestens drei Passagen entwickelter Tumore mit einem Minimaltumorvolumen von 60
bis 80 mm3. Die Tiere erhielten über 28 Tage eine tägliche ODN-Dosis von 15 mg/kg
Körpergewicht. Das Volumen der Tumore wurde wöchentlich gemessen und das
Tumorgewicht nach dem Töten der Tiere. In zwei unabhängigen in vivo-Experimenten war
das Tumorgewicht während der ersten zwei Wochen nicht signifikant beeinflußt worden.
Nach Fortsetzung der ODN-Gaben jedoch war eine signifikante Hemmung sowohl der Größe
als auch des Gewichts im Vergleich mit den Kontrolltieren zu beobachten. Die
entsprechenden Daten sind für JWG2000 in Fig. 4 wiedergegeben.
Claims (6)
1. Antisense-Oligodesoxynucleotid zur Hemmung der Expression der Polo-like Kinasel
in Tumorzellen, dadurch gekennzeichnet, daß es
die Sequenz 5'-CCT GAC CAG CCC ACG CTC CG-3'
oder die Sequenz 5'-CCC AAA AAG CGG CCC C-3'
gegebenenfalls gegen Enzymabbau modifiziert, aufweist.
die Sequenz 5'-CCT GAC CAG CCC ACG CTC CG-3'
oder die Sequenz 5'-CCC AAA AAG CGG CCC C-3'
gegebenenfalls gegen Enzymabbau modifiziert, aufweist.
2. Antisense-Oligodesoxynucleotid nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es
durch Einbau von Phosphotriester- und/oder Phosphoramid und/oder Methylphosphonat- und/
oder Phosphorothioat und/oder Peptidnucleinsäuregruppen modifiziert ist.
3. Antisense-Oligodesoxynucleotid nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß es
ausschließlich mit Phosphorothioatgruppen modifiziert ist.
4. Antisense-Oligodesoxynucleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch
gekennzeichnet, daß es in Zellkulturen der menschlichen Krebszelllinien A549 und Detroit
562 eine Transfektionseffizient von über 90% aufweist.
5. Antisense-Oligodesoxynucleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch
gekennzeichnet, daß sich nach seiner einmaligen Anwendung an A549-Zellen die mRNA-
Konzentration auf unter 10% einer Kontrolle senken läßt.
6. Antisense-Oligodesoxynucleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch
gekennzeichnet, daß nach Behandlung von A549- und Detroit 562-Zellen sich die Zahl
lebensfähiger Zellen bis auf 20% senken läßt.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE10011530A DE10011530A1 (de) | 2000-03-13 | 2000-03-13 | Hochwirksame Antisense-Oligodesoxynucleotide gegen Polio-like Kinasel |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE10011530A DE10011530A1 (de) | 2000-03-13 | 2000-03-13 | Hochwirksame Antisense-Oligodesoxynucleotide gegen Polio-like Kinasel |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE10011530A1 true DE10011530A1 (de) | 2001-09-27 |
Family
ID=7634119
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE10011530A Withdrawn DE10011530A1 (de) | 2000-03-13 | 2000-03-13 | Hochwirksame Antisense-Oligodesoxynucleotide gegen Polio-like Kinasel |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE10011530A1 (de) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004042061A1 (en) * | 2002-11-08 | 2004-05-21 | Klaus Strebhardt | Pharmaceutical composition for suppressing undesired gene expression |
WO2004087652A2 (en) * | 2003-04-01 | 2004-10-14 | Smithkline Beecham Corporation | Imidazotriazine compounds |
EP1546179A2 (de) * | 2002-07-30 | 2005-06-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense-modulierung der expression von polo-ähnlicher kinase |
DE102013003869A1 (de) * | 2013-02-27 | 2014-08-28 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Verfahren zur gezielten Abtötung von Zellen durch zur mRNA-Anbindung ausgerichtete Nukleotid-Moleküle sowie Nukleotid-Moleküle und Applikationskit für solche Verwendung |
Citations (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5650501A (en) * | 1994-06-02 | 1997-07-22 | Mount Sinai Hospital Corporation | Serine/threonine kinase and nucleic acids encoding same |
US5686412A (en) * | 1991-07-03 | 1997-11-11 | Salk Institute For Biological Studies | Protein kinases |
WO1998029552A1 (fr) * | 1996-12-27 | 1998-07-09 | Chugai Research Institute For Molecular Medicine, Inc. | Nouveau gene de serine-threonine kinase |
US5830648A (en) * | 1995-05-05 | 1998-11-03 | Sugen, Inc. | Assay and method for transcript imaging |
EP0894863A1 (de) * | 1997-07-28 | 1999-02-03 | Smithkline Beecham Corporation | YAK-1 verwandtes Serin/Threonin Protein Kinase HTLAR33 |
WO1999007854A2 (en) * | 1997-08-11 | 1999-02-18 | Ontogeny, Inc. | Serine/threonine kinase, and uses related thereto |
WO1999009160A1 (fr) * | 1997-08-15 | 1999-02-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Proteines de regulation de cycle cellulaire |
US5912160A (en) * | 1995-08-22 | 1999-06-15 | Thomas Jefferson University | Gab1, Grb2 binding protein, and compositions for making and methods of using the same |
US5962265A (en) * | 1997-12-19 | 1999-10-05 | Zeneca Limited | Human signal transduction serine/threonine kinase |
US5977442A (en) * | 1996-10-25 | 1999-11-02 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Salicylic acid induced map kinase and its use for enhanced disease resistance in plants |
US5985635A (en) * | 1996-11-15 | 1999-11-16 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acids encoding novel human serine/threonine protein kinases |
WO1999066051A2 (en) * | 1998-06-16 | 1999-12-23 | Sugen, Inc. | Nek-related and bub1-related protein kinases |
US6013500A (en) * | 1998-05-21 | 2000-01-11 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | PAK4, a novel gene encoding a serine/threonine kinase |
US6034228A (en) * | 1998-12-15 | 2000-03-07 | Zeneca Limited | Human signal transduction serine/threonine kinase |
WO2000037613A2 (en) * | 1998-12-22 | 2000-06-29 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Human akt-3 |
WO2000044941A1 (en) * | 1999-02-01 | 2000-08-03 | Smithkline Beecham Corporation | A method of treating anemia |
-
2000
- 2000-03-13 DE DE10011530A patent/DE10011530A1/de not_active Withdrawn
Patent Citations (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5686412A (en) * | 1991-07-03 | 1997-11-11 | Salk Institute For Biological Studies | Protein kinases |
US5650501A (en) * | 1994-06-02 | 1997-07-22 | Mount Sinai Hospital Corporation | Serine/threonine kinase and nucleic acids encoding same |
US5830648A (en) * | 1995-05-05 | 1998-11-03 | Sugen, Inc. | Assay and method for transcript imaging |
US5912160A (en) * | 1995-08-22 | 1999-06-15 | Thomas Jefferson University | Gab1, Grb2 binding protein, and compositions for making and methods of using the same |
US5977442A (en) * | 1996-10-25 | 1999-11-02 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Salicylic acid induced map kinase and its use for enhanced disease resistance in plants |
US5985635A (en) * | 1996-11-15 | 1999-11-16 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acids encoding novel human serine/threonine protein kinases |
WO1998029552A1 (fr) * | 1996-12-27 | 1998-07-09 | Chugai Research Institute For Molecular Medicine, Inc. | Nouveau gene de serine-threonine kinase |
EP0894863A1 (de) * | 1997-07-28 | 1999-02-03 | Smithkline Beecham Corporation | YAK-1 verwandtes Serin/Threonin Protein Kinase HTLAR33 |
WO1999007854A2 (en) * | 1997-08-11 | 1999-02-18 | Ontogeny, Inc. | Serine/threonine kinase, and uses related thereto |
WO1999009160A1 (fr) * | 1997-08-15 | 1999-02-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Proteines de regulation de cycle cellulaire |
US5962265A (en) * | 1997-12-19 | 1999-10-05 | Zeneca Limited | Human signal transduction serine/threonine kinase |
US6013500A (en) * | 1998-05-21 | 2000-01-11 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | PAK4, a novel gene encoding a serine/threonine kinase |
WO1999066051A2 (en) * | 1998-06-16 | 1999-12-23 | Sugen, Inc. | Nek-related and bub1-related protein kinases |
US6034228A (en) * | 1998-12-15 | 2000-03-07 | Zeneca Limited | Human signal transduction serine/threonine kinase |
WO2000037613A2 (en) * | 1998-12-22 | 2000-06-29 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Human akt-3 |
WO2000044941A1 (en) * | 1999-02-01 | 2000-08-03 | Smithkline Beecham Corporation | A method of treating anemia |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
Datenbank Biosis AN 1994:160882 (Oncogene 9 (1994)935-938) * |
Datenbank Biosis AN 1994:342239 (Blood 83 (1994) 3160-3169) * |
Datenbank Biosis AN 1997:342533 (J.Biol.Chem. 272 (1997) 16364-16373) * |
Datenbank Biosis AN 1999:281661 (Antisense & Nuc- leic Acid Drug Development 9 (1999) 191-201) * |
Datenbank Biosis AN 1999:425238 (Pharmacology & Therapeutics 82 (1999) 437-449) * |
Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90 (1993) 4882-4886 * |
Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91 (1994) 6388-6392 * |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1546179A2 (de) * | 2002-07-30 | 2005-06-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense-modulierung der expression von polo-ähnlicher kinase |
EP1546179A4 (de) * | 2002-07-30 | 2007-12-19 | Isis Pharmaceuticals Inc | Antisense-modulierung der expression von polo-ähnlicher kinase |
WO2004042061A1 (en) * | 2002-11-08 | 2004-05-21 | Klaus Strebhardt | Pharmaceutical composition for suppressing undesired gene expression |
WO2004087652A2 (en) * | 2003-04-01 | 2004-10-14 | Smithkline Beecham Corporation | Imidazotriazine compounds |
WO2004087652A3 (en) * | 2003-04-01 | 2005-02-10 | Smithkline Beecham Corp | Imidazotriazine compounds |
US7462614B2 (en) | 2003-04-01 | 2008-12-09 | Smithkline Beecham Corporation | Imidazotriazine compounds |
DE102013003869A1 (de) * | 2013-02-27 | 2014-08-28 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Verfahren zur gezielten Abtötung von Zellen durch zur mRNA-Anbindung ausgerichtete Nukleotid-Moleküle sowie Nukleotid-Moleküle und Applikationskit für solche Verwendung |
WO2014131773A2 (de) | 2013-02-27 | 2014-09-04 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Verfahren zur gezielten abtötung von zellen durch zur mrna-anbindung ausgerichtete nukleotid-moleküle sowie nukleotid-moleküle und applikationskit für solche verwendung |
DE102013003869B4 (de) * | 2013-02-27 | 2016-11-24 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Verfahren zur gezielten Abtötung von Zellen durch zur mRNA-Anbindung ausgerichtete Nukleotid-Moleküle sowie Nukleotid-Moleküle und Applikationskit für solche Verwendung |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69028694T2 (de) | Verfahren und zubereitungen zur krebsbehandlung mit oligonukleotiden | |
DE69231739T2 (de) | Aus alternden zellen abgeleitete hemmer der dns-synthese | |
DE69636339T2 (de) | Wachstumsinhibitor gegen leukämische zellen, der antisense-oligonukleotidderivate gegen das wilms-tumorgen enthält | |
EP1349927B1 (de) | Verfahren zur hemmung der expression eines zielgens und medikament zur therapie einer tumorerkrankung | |
EP1409670B1 (de) | Synthetische doppelsträngige oligonucleotide zur gezielten hemmung der genexpression | |
KR101350837B1 (ko) | 코넥신에 표적화된 안티센스 화합물 및 그의 사용 방법 | |
US5866699A (en) | Oligonucleotides with anti-MDR-1 gene activity | |
DE69719785T2 (de) | Zusammensetzung aus brustkrebszellen, die mit einem gegen den rezeptor für insulin-ähnlichen wachstumsfaktor gerichteten antisens-oligonukleotidbehandelt worden sind. | |
DE10049549A1 (de) | Modulation der Transkription pro-inflammatorischer Genprodukte | |
CN114072501A (zh) | 抗c9orf72寡核苷酸及相关方法 | |
DE60038680T2 (de) | Antisense-therapie für hormonregulierte tumoren | |
WO1999025819A2 (de) | Antisense oligonukleotide gegen tenascin zur behandlung von vitiligo | |
DE10011530A1 (de) | Hochwirksame Antisense-Oligodesoxynucleotide gegen Polio-like Kinasel | |
US9381209B2 (en) | Treatment of squamous cell carcinoma with HSP27 antisense oligonucleotides and radiotherapy | |
DE10226702A1 (de) | Antisense Oligonukleotide gegen PIM1 | |
DE69836384T2 (de) | Antisense-oligonukleotide gegen thymidylatsynthase | |
WO2005033310A1 (de) | Pim-1-spezifische dsrna-verbindungen | |
EP1414961B1 (de) | Neue oligoribonucleotid-derivate zur gezielten hemmung der genexpression | |
DE10258677A1 (de) | Kombinations-antisense-Oligonukleotid-Krebstherapie | |
EP1427824B1 (de) | Verwendung von molekularbiologisch hergestellten, nicht-viralen wirkstoffen zur behandlung der akne | |
WO2004106519A2 (de) | Mrp8/mrp14 inhibitoren und ihre verwendung zur prävention und/oder behandlung von hypertrophen narben und keloiden | |
DE10200410A1 (de) | Antisense Oligodesoxynukleotid gegen das Pituitary-tumor transforming gene (PTTG) zur Hemmung der Translation in menschlichen Zellen | |
Von Sallmann et al. | The effect of triethylene melamine on DNA synthesis and mitosis in the lens epithelium | |
Morales et al. | 2 Inhibition of Gene Expression by Antisense Oligonucleotides in Chick Embryos in Vitro and in Vivo | |
WO2002026754A9 (de) | Oligonukleotide, diese enthaltende mittel und deren verwendung |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
OP8 | Request for examination as to paragraph 44 patent law | ||
8130 | Withdrawal | ||
8165 | Unexamined publication of following application revoked |