CZ95296A3

CZ95296A3 - Virus inactivation method in the presence of polyalkylene glycol, as well as obtained pharmaceutical preparation

Info

Publication number: CZ95296A3
Application number: CZ96952A
Authority: CZ
Inventors: Johann Eibl; Friedrich Dorner; Noel Barrett
Original assignee: Immuno Ag
Priority date: 1993-10-06
Filing date: 1994-10-06
Publication date: 1996-09-11
Also published as: FI961536L; EP0722344B1; WO1995009657A1; HUT75310A; FI961536A7; CA2173625A1; JPH09503218A; ATE211927T1; ES2173923T3; US5770199A; HU9600906D0; DK0722344T3; HU218490B; HRP940645A2; EP0722344A1; FI961536A0

Description

Oblast techniky i ‘ ' 2

Vynález se týká farmaceutického protředku obsahujícího plazmové proteiny, jež lze získat vysoce účinným způsobem, pro inaktivaci infekčních látek, při zachování biologické aktivity.

Vynález též zahrnuje způsob přípravy uvedeného farmaceutického prostředku, který inaktivuje stanovitelné, potenciálně přítomné viry.

Dosavadní stav techniky

Plazmové proteiny jsou proteiny, které lze získat z lidské nebo zvířecí krve a/nebo plazmy. Plazmové proteiny jsou určené pro farmaceutické prostředky k terapeutickému, profylaktickému nebo diagnostickému použití. Tyto preparáty mohou obsahovat enzymy, proenzymy obsahující koagulační faktory, enzymové kofaktory, enzymové inhibitory, immunoglobuliny, albumin, plasminogen, fibrinogen, fibronectin, t-PA, urokinázu, prourokinázu nebo plazmu. Za plazmové proteiny se pokládají též rekombinantní polypeptidy, které jsou ekvivalentní uvedeným plazmovým proteinům vzhledem ke svým základním vlastnostem.

Farmaceuticky aplikovatelné prostředky, které jsou biologického původu, tj. jsou získány z přírodních zdrojů nebo z buněčných kultur a/nebo jsou produkovány rekombinantně, se pokládají za biologické prostředky.

Nicméně také immunoglobulinové přípravky, monoklonální protilátky nebo jejich fragmenty, supernatany z buněčných kultur a ascitové tekutiny z myší se počítají mezi biologické přípravky.

Při podávání biologických preparátů, zejména těch, jež obsahují plazmové proteiny, však existuje určité riziko infekce z potenciálně přítomných látek jako viry hepatitidy nebo AIDS. Proto je nutné, aby způsob přípravy těchto preparátů zahrnoval též vhodné měření inaktivace.

Patogenní činidla, která mohou být převedena z jednoho organismu do druhého, například viry nebo priony se také pokládají za infekční látky.

Z odborné literatury je známo, že ve farmaceutických preparátech dochází k inaktivaci infekčních látek.

Jedním z nejúčinnějších způsobů inaktivace virů je zahřívání plazmových proteinů v roztoku. Je známo, že preparát obsahující albumin, bezpečný z hlediska virů, lze připravit zahříváním vodného roztoku albuminu na teplotu 60 °C po dobu 10 hodin. Přitom nedochází k nepříznivému ovlivnění biologické aktivity tohoto albuminu, přičemž albumin je relativně stabilní plazmový protein.

V dané oblasti techniky (EP 124 506) je známo zvýšení schopnosti inaktivace virů tepelným zpracováním krevních produktů v roztoku za přidání síranu amonného. Problém simultánní inaktivace plazmového proteinu je tedy známý a z toho důvodu se nabízí možnost přidávat k proteinu stabilizující substance jako je glycin. Nicméně však při žádané stabilizaci plazmových proteinů současně též dochází k nežádoucí stabilizaci infekčních látek. Proto se zkouší vylučovat neinfekční látky z preparátů a současně dosahovat pokud možno vysoké biologické aktivity.

Přidávání stabilizátorů k plazmovému proteinu obsahujícímu roztoky je známo například z EP 292 003. Jako stabilizátory se přidávají sacharidy nebo alkoholy cukrů a neutrální soli, jako jsou acetaty, fosfáty a sulfáty. Tyto soli mají stabilizující účinek.

Inaktivační účinek na viry u solí je také popsán v VO

90/07524. Protilátky vůči proteinu C jsou stabilní při teplotě 22 °C po dobu alespoň 2 hodiny za přítomnosti alespoň 2,6-M quanidinu nebo 2M-thiokyanatu vápenatého. Takové zpracování je také vhodné k tomu, aby inaktivovalo potenciálně přítomné viry. Vzhledem k jejich chaotropnímu chování mají tyto sloučeniny inaktivační účinek nejen vůči virům, ale také vůči proteinům. Proto je důležité, že mohou být tyto protilátky inkubovány s těmito sloučeninami po určitou dobu za teploty místnosti, aniž by došlo ke ztrátě jejich afinity k proteinu C.

Způsob inaktivace virů přidáním thiokyanatu sodného k roztokům, obsahujícím plazmový protein, je znám z VO 90/15613. Aby nedocházelo k denaturování plazmového proteinu, provádí se zpracování při teplotě 4 °C během krátké doby.

Dále se thiokyanáty používají jako eluční činidla při immunafinitni chromatografií. Po eluování ihned následuje odstranění thiokyanátu, aby se zabránilo poškození purifikovaných proteinů (viz US 5,055,557).

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je příprava farmaceutického prostředku obsahujícího plazmový protein, který lze získat uvedeným způsobem přípravy, přičemž neobsahuje infekční látky i, jak se vyžaduje, též neobsahuje produkty denaturace.

Výše uvedený předmět zájmu se řeší podle tohoto vynálezu farmaceutickým prostředkem obsahujícím plazmový protein, který lze získat způsobem v němž jsou zahrnuty tyto kroky:

a) přídavek polyetheru k roztoku obsahujícímu plazmový protein, popřípadě lyofilizace roztoku,

b) inaktivace infekční látky za přítomnosti polyetheru fyzikálně chemickým nebo chemickým zpracováním, a

c) odstranění polyetheru.

Podle tohoto vynálezu zahrnují polyethery také polyhydroxyethery jako je polyalkylenglykol a zvláště polyethylenglykol a polypropylenglykol.

Výhodné provedení tohoto vynálezu je charakterizováno tím, že se inaktivace infekčních látek v kroku (b) provádí za přítomnosti polyetheru a chaotropního činidla a polyether a chaotropní činidlo se odstraňují v kroku (c).

Další výhodné provedení vynálezu je charakterizováno tím, že v kroku:

(a) polymer je nízkomolekulární polyethylenglykol, vybraný ze skupiny, která sestává z PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 900 a PEG 1000 (b) inaktivace infekční látky se provádí za přítomnosti polyethylenglykolu, a (c) polyethylenglykol se odstraňuje.

Při jiném výhodném provedení se inaktivace infekčních látek v kroku (b) provádí za přítomnosti polyetheru fyzikálním, fyzikálně chemickým nebo chemickým zpracováním s podmínkou, že se vyloučí působení detergentu.

Předmětem vynálezu je tedy farmaceutický prostředek podle dále uvedeného nároku 1. Výhodná provedení tohoto prostředku jsou uvedena v nároku 2 až 10, 28 až 33 a 49.

Dalším předmětem tohoto vynálezu je způsob podle nároku 11 nebo 34 pro přípravu farmaceutických prostředků podle tohoto vynálezu.

Výhodná provedení těchto způsobů jsou uvedena v nárocích 12 až 27, 35 až 48 a 50.

Překvapivě bylo nalezeno, že přídavek polyetheru, jako je například polyethylenglykol, při koncentraci 5 až 30 % hmotnostních, má nečekaně pozitivní účinek na inaktivační zpracování vzhledem k eliminaci infekčních možností. Lze tedy vybrat takové podmínky inaktivace, aby byla zachována žádaná biologická aktivita plazmových proteinů.

Koncentrace polyetheru se volí tak, aby nedocházelo ke srážecím reakcím. Je třeba tedy postupovat tak, aby přidávání chaotropních činidel i zpracování s výhodou probíhalo tak, aby nedocházelo ke srážení proteinů. Zejména srážení proteinů může

Zpracování zpracování znamenat riziko v tom, že ve sraženině mohou být také obsaženy infekční částice. Tvoření infekčních částic je závislé na způsobu zpracování při inaktivaci. Tak pokud se netvoří usazenina, nedochází k žádné opožděné tvorbě infekčních látek. Je také možné snížit teplotu při tepelném zpracování, přičemž účinek je stejný.

Nepředpokládá se, že by se zlepšilo inaktivační zpracování za přítomnosti polyetheru. Nejprve bylo též zjištěno, že se viry inaktivují za přítomnosti samotného polyetheru, například polyethethylenglykolu.

Zpracování k inaktivaci infekčních látek v sobě s výhodou obsahuje tepelné zpracování, zvláště při teplotě od 20 do 60 °C, přičemž je výhodné rozmezí od 25 do 45 °C.

Vhodný polyether je s výhodou polyethylenglykol a zejména nízkomolekulární polyethylenglykol. Zvláště výhodné jsou polyethylenglykoly, vybrané ze skupiny sestávající z PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 900 a PEG 1000. K odstraňování tohoto polyetheru je známo mnoho způsobů. Plazmový protein se odděluje ze zpracovávaného roztoku s výhodou srážením nebo adsorpcí, přičemž je výhodná chromatografie. Zbylý polyether, který zůstává v roztoku, se pak odděluje od plazmového proteinu. Polyether se odstraní úplně a/nebo se jeho obsah sníží na fyziologicky přijatelné množství v prostředku, připraveném k podávání.

Podle tohoto vynálezu může být roztok, obsahující plazmový protein, lyofilizován po přidání polyetheru a následném zpracování plazmového proteinu k inaktivaci infekčních látek, přičemž se provádí za přítomnosti polyetheru v pevném stavu.

spočívá ve fyzikálně chemickém nebo chemickém Pro tento účel se zpracování za přítomnosti virucidních substancí popřípadě kombinuje s ozařováním nebo s tepelným zpracováním, což bývá též žádoucí.

Podle výhodného provedení je inaktivace infekčních látek ovlivněna zpracováním v roztoku nebo lyofilizátu prostředku za přítomnosti některého přídavného chaotropního činidla. Bylo zjištěno, že dochází k synergismu u inaktivace virů při kombinování chaotropně účinné soli, jako je například thiokyanat, s polyetherem, jako je například polyethylenglykol, přičemž se v podstatě udržuje biologická aktivita prostředku. Rezistentní viry, jako je vaccinia virus nebo parvovirus, jsou také podstatně inaktivovány rychleji a při menších koncentracích thiokyanatu v porovnání se samotným thiokyanatem. Snížení koncentrace thiokyanatu a průběh zpracování vedou k výhodnému výsledku, pokud se týká biologické aktivity prostředku.

Jako chaotropní činidlo lze použít například thiokyanat, močovinu nebo quanidin ve formě soli. Zvláště jsou vhodné sodné, amonné nebo vápenaté thiokyanaty. Jako sůl quanidinu je nejvýhodnější quanidinhydrochlorid.

Tato chaotropní činidla se používají v koncentracích od

0,1-M do	2-M.	Také zde,	jak již bylo	uvedeno, se	zpracování
provádí	za	přítomnosti	přídavných	chaotropních	solí za
podmínek,	při	nichž nedochází ke srážení	proteinů.

Způsobem podle tohoto vynálezu je možné především zpracovávat labilní proteiny, tj. proteiny, které se snadno denaturuji, za přítomnosti chaotropních solí v roztoku, přičemž se v zásadě udržuje biologická aktivita plazmových proteinů.

Přídavek polyetheru během inaktivace viru dovoluje přípravu faramaceutického prostředku, který obsahuje plazmové proteiny, od nichž se požaduje, aby neobsahovaly denaturační produkty.

Odstraňování chaotropního činidla tak, aby se dosáhlo takového množství, jež nemá nepříznivý snášenlivost prostředku, lze provádět výhodné, jestliže je toto množství

K odstranění chaotropně účinných solí obsahující plazmový protein, dialyzovat ultrafialovému záření. Během tohoto fyzikálního zpracování se oddělují potenciálně přítomné infekční částice. Jinak lze oddělovat plazmový protein od chaotropního činidla srážecími vliv na fyziologickou známými způsoby. Je pod hranicí detekce, se může roztok, a/nebo podrobit detergenty v kombinaci v EP-A-479597 a/nebo adsorpčními způsoby, s výhodou chromatograficky.

Při jednom z výše uvedených výhodných provedení podle tohoto vynálezu se vynechává působení detergentu v kroku (b). Takovým působením detergentu se rozumí zpracování za působení detergentu obvykle používaného v dané oblasti techniky pro inaktivaci viru, tj. tenzidů, jako jsou povrchově aktivní činidla používaná k takovým účelům, zvláště například polyoxyethylenové deriváty sorbitanových esterů (polysorbat) jež jsou dostupné pod obchodním názvem Tween. Takové ve spojení s inaktivaci virů nebo alespoň s jinými možnostmi, jsou popsány např.

(kde se speciálně používá Tween 80),

US-A-4764369 (kde se provádí inaktivace viru s dialkylfosfatem nebo trialkylfosfatem v kombinaci s detergenty) a EP-B-0050061 (kde k inaktivaci viru a redukci, eliminaci, odstranění nebo oddělování substancí, které mají nežádoucí účinky, např. to může být pyrogenicita, dochází pomocí přídavku amfifilního činidla, jímž je sůl kyseliny cholové, např. vybraná z natrium-cholatu nebo natrium-deoxycholatu nebo neiontový tenzid, vybraný z polyoxyethylovaných derivátů parciálních esterů ^mastných kyselin a anhydridů) .

Mezi detergenty, jež zejména nejsou vhodné podle tohoto vynálezu, patří zvláště:

neiontové detergenty, polyoxyethylenové deriváty mastných kyselin, parciální estery anhydridů sorbit(ol)u jako Tween 80, Tween 20 a Polysorbat 80 a neiontové v oleji rozpustné detergenty prodávané pod obchodním názvem Triton X-100 (oxyethylatovaný alkylfenol) i natrium-deoxycholat a tzv. obojetná činidla tj. syntetické detergenty s obojetnými ionty (zwitterionty) kde je znám Sulfobetain

N-dodecyl-N,N-dimethyl-2-ammonio-l-ethan sulfonat a podobné látky nebo neiontové detergenty jako oktyl-beta-D-glukopyranosid.

Obecně lze uvést, že tyto detergenty jsou neiontové povrchově aktivní oxyethylatované alkylfenoly, estery mastných kyselin a polyoxyethylensorbitanu, kyseliny polyoxyethylenu a mastné kyseliny polyoxyethylenu oxypropylenu. Z nich lze jako příklady uvést:

alkylfenoxypolyethoxy (30) ethanol polyoxyethylen (2) sorbitan monolaurat polyoxyethylen (20) sorbitan monopalmitat polyoxyethylen (20) sorbitan monostearat polyoxyethylen (20) sorbitan tristearat polyoxyethylen (20) sorbitan monooleat polyoxyethylen (20) sorbitan trioleat polyoxyethylen (20) palmitat polyoxyethylen (20) laurylether polyoxyethylen (20) cetylether polyoxyethylen (20) stearylether polyoxyethylen (20) oleylether polyoxyethylen (20) hydratovaný ricinový olej polyoxyethylen (20) oxypropylen monostearat

Amfifilní povrchově aktivní činidla, obsahující hydrofilní ve vodě rozpustné i hydrofobní ve vodě nerozpustné skupiny, se obvykle uvádí v aniontových, kationtových, amfolytických a neiontových povrchově aktivních činidlech, amfifilní detergenty, jež nelze připustit vynálezu, patří například:

aniontové činidlo:

D sulfatovaný oxyethylatovaný alkylfenol (Triton V-30 ), sulfatovaný laurylether alkohol, natrium-dodecylbenzol sulfonat (Nacconol NR^), p

natrium-2-sulfoethyloleat (Igepon A ), n

natrium-N-methyl-N-oleylethanol sulfonat (Igepon T ), natrium-dodecyl sulfát, natrium-cholat, natrium-deoxycholat, natrium-dodecyl sulfonat, natrium-dodecy1-N-sarkonisat kationtové činidlo:

pncemz mezi podle tohoto dodecyldimethylbenzylamminium chlorid (Triton K-60^R), oxyethylatované aminy (Ethomeen^R), cetyltrimethylamminium bromid, tetradecylammonium bromid, dodecylpyrimidinium chlorid, hexadecyltrimethylammonium chlorid amfolytické činidlo:

dodecyl beta-alanin,

N-dodecylaminoethansulfonová kyselina, palmitoyllysolecitin, dodecyl-N-betain.

Oxyethylatované alkylfenoly (Triton X-100^R), parciální estery ^-i.2~^22 mastných kyselin (např. laurové, palmitové, stearové a olejové kyseliny) a hexitových anhydridů (např.

hexitany a hexidy) (Spans) jsou posány v US patentech 2232820,

2232821 a 2303432, polyoxyethylatované deriváty těchto parciálních esterů, které lze získat adicí polyoxyethylenových řetězců na neesterifikované hydroxylové skupiny (Tveen , např. η n

Tween 80 nebo Polysorbate 80 ) jsou popsány v US patentu 2380166, parciální polyoxyethylatované mastné kyseliny (Myrj

D ) a ester polyoxyethylenu a alkoholu mastné kyseliny (Brij^R) .

Mezi ty oxyethylatované alkylfenoly (Triton X) jež nelze použít, patří zejména takové, jež mají obecný vzorec RCgH^(OC2H4)_n0H, kde R je oktyl nebo nonyl a n znamená alespoň 3, jako je oktylfenoxyethanol. Taková povrchově aktivní činidla se prodávají pod obchodním názvem Triton X, např. Triton X-100, Triton X-165, Triton X-205, Triton X-305, Triton X-405 a Triton N-100.

Dalšími detergenty, které nepatří mezi vhodné látky při výhodném provedení tohoto vynálezu, jsou amfifilní detergenty: soli kyseliny cholové jako je natrium-cholat a natrium-deoxycholat.

Farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu jsou překvapivě charakterizovány velmi nízkým stupněm denaturace.

inaktivací

Biologická aktivita plazmového proteinu po infekčních činidel dosahuje v porovnání s touto aktivitou před inaktivací alespoň 50 %, s výhodou alespoň 80 % a nejvýhodněji 90 %.

V případě faktoru koagulace, fibrinolýzy nebo trombolýzy nebo jejich modifikací se biologická aktivita prostředku podle tohoto vynálezu měří jako její účinek na enzymatickou reakci během koagulace krve. Biologická aktivita immunoglobulinu může být stanovena po separaci od preparátu pomocí HPLC chromatografie. Jakékoli možné denaturační produkty a/nebo shluky j sou tak separovány od immunoglubulinových monomerů a/nebo dimerů a lze je kvantitativně stanovit.

Pro zkušené odborníky v dané oblasti techniky byl překvapivý pozitivní účinek polyetherů na inaktivací infekčních látek, příkladem takového polyetherů může být polyethylenglykol. Obecně je známo, že látky, které stabilizují plazmové proteiny, mají též stabilizační účinek na viry. Lze zde odkázat na publikaci Horowitze a kol. v Transfusion, 25. 423-527 (1985), podle níž lze za přítomnosti polyetherů očekávat zhoršení kinetiky inaktivace.

Způsob podle tohoto vynálezu se provádí po dobu, která je třeba k tomu, aby potenciálně přítomné viry ze skupiny, sestávající z velké membrány s RNA viry, malé membrány s RNA viry a membrány s DNA viry byly úplně inaktivovány.. To lze potvrdit testy, při nichž se používají modelové viry. Podmínky, při nichž se způsob podle tohoto vynálezu provádí, se vybírají ze způsobů, kdy se k biologickému preparátu přidávají viry z každé skupiny a inaktivují se způsobem podle tohoto vynálezu až do stanovení přítomnosti virů pod hranici stanovitelnosti. Jako modelové viry jsou vhodné HIV, FSME a pseudorabies viry (PSR).

Způsob podle tohoto vynálezu je zvláště vhodný pro inaktivací virů hepatitidy, především hepatitidy B, hepatitidy C a non-A, non-B virů hepatitidy i retrovirů, především virů AIDS.

V následujících Příkladech bude detailněji ilustrován tento vynález, přičemž však tyto Příklady nijak neomezují obsah ani rozsah tohoto vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Inaktivace modelových virů v roztoku obsahujícím gammaglobulin s isokyanátem za přítomnosti polyethylenglykolu

Frakcionací plazmy podle Cohna se připraví 10%ní roztok obsahující gammaglobulin. Roztok se smíchá se suspenzí obsahující HIV-1, FSME viry nebo viry PSR. K tomuto roztoku se přidá tolik thiokyanátu amonného, aby jeho koncentrace dosáhla 0,3 M a tolik PEG 200, aby jeho koncentrace byla 10 % hmotnostních. Poté se roztok zahřeje na teplotu 30 °C a stanoví se titr virů po 0, 1, 3, 6 a 10 hodinách. Výsledky jsou udány v následující Tabulce 1. Titr virů v původní suspenzi virů slouží jako kontrolní (srovnávací) hodnota. Titr virů v čase 0 je tabelárně uveden zpracovaní případech.

Podle konstatovat, žádné agregaci. Tabulka 1 ve všech sledovaných výsledků, že během získaných pomocí HPLC, inaktivačního zpracování j e možno nedochází k

Čas (h)
	srovnávací hodnota	0	1	3	6	10
HIV-1	107.9	l₀2.1	<10° ·⁵	<10° ·⁵	<10° ·⁵	<10°·⁵
FSME	107.5	102·⁹	10°· ⁶	<10°	<10°	<10°
PSR	10⁷ ·⁹	10⁵· ⁶	<10°·⁵	<10°·⁵	<10° ·⁵	<10°·⁵

Příklad 2

Srovnávací příklad, kdy je přítomen pouze thiokyanát amonný nebo polyethylenglykol

K roztoku gammaglobulinu z Příkladu 1 se přidá thiokyanát amonný na koncentraci 0,3 M. Paralelně se k roztoku z Příkladu 1 obsahujícímu gammaglobulin přidává PEG 200 do množství 10 nebo 30 % hmotnostních. Roztoky se míchají se suspenzí obsahující HIV-1 a udržují se při teplotě 30 °C. Stanovuje se titr virů v čase 0, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 6 a 19 hodin. Výsledky udává následující Tabulka 2.

Tabulka 2

Titr virů - doba zpracování (h)
	srovnávací hodnot	0 3	1	1.5	2	3	6	10
PEG 10%	10⁷'⁴	io⁶·¹	io⁶·⁵	n.	Π.	₁₀6.2	io⁵·⁹	105.-7
PEG 30%	io⁷' ⁴	l₀5.9	io⁴ ·⁵	n.	n.	102.9	^ío¹·⁵	^10¹·⁵
NH«SCN 0.3 M	IO^7,4	ίο⁵ -⁵	io³·⁰	l₀2.6	<10° ·⁵	<10° ·⁵	n.	n.

n. = nestanoveno

Z Tabulky 2 vyplývá, že obě činidla samotná mají zřetelný menší účinek na inaktivaci virů u HIV-1 v porovnání s kombinací. Dále je patrné, že účinek kombinace je synergický, zvláště když kinetika inaktivace u kombinace polyetheru a chaotropního činidla probíhá rychleji než všechny kinetické pochody celkem, jež se týkají individuálních látek.

Průmyslová využitelnost

Prostředky podle farmaceutický průmysl.

tohoto vynálezu jsou významné

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutický prostředek obsahující plazmový protein vyznačující se tím, že uvedený prostředek neobsahuje infekční látky a také neobsahuje větší množství denaturačních produktů a lze jej získat způsobem, který v sobě zahrnuje následující kroky:

a) přidání polyetheru k roztoku obsahujícímu plazmový protein, popřípadě lyofilizaci tohoto roztoku,

b) inaktivaci infekčních látek za přítomnosti polyetheru pomocí fyzikálně chemického nebo chemického zpracování, a

c) odstranění polyetheru.
2. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačuj í cí se tím, že inaktivace infekčních látek v kroku (b) se provádí za přítomnosti polyetheru a chaotropního činidla a polyether a chaotropní činidlo se odstraní v kroku (c).
3. Farmaceutický prostředek podle nároku 2, vyznačuj í cí se tím, že polyetherem je polyhydroxyether.
4. Farmaceutický prostředek podle nároku 3, vyznačuj i cí se tím, že polyhydroxyetherem je polyalkylenglykol jako polyethylenglykol nebo polypropylenglykol.
5. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoli z nároků 2 až 4, vyznačující se tím, že polyether je nízkomolekulární polyethylenglykol.
6. Farmaceutický prostředek podle nároku 5, vyznačuj i cí se tím, že nízkomolekulární polyethylenglykol je vybrán ze skupiny, sestávající z PEG 200, PEG 300, PEG

400, PEG 600, PEG 900 a PEG 1000.

Ί. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoli z nároků 2 až 6, vyznačující se tím, že inaktivace infekčních látek se provádí při koncentraci polyetheru od 5 do 30 % hmotnostních, přičemž nedochází ke srážení proteinů.
8. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že obsahuje immunoglobulin.
9. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že obsahuje faktor koagulace, fibrinolýzy nebo trombózy nebo stejně inhibující látku.
10. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyzná čující se tím, že se dosahuje biologické aktivity plazmového proteinu alespoň 50 %, s výhodou alespoň 80 % a nej výhodněji alespoň 90 % po inaktivaci infekčních látek.
11. Způsob přípravy biologického prostředku inaktivaci virů ze skupiny z velké membrány s RNA viry, malé membrány s RNA viry a membrány s DNA viry, vyznačující se tím, že je v zásadě dosaženo biologické aktivity prostředku, přičemž je charakterizován zpracováním prostředku tak, aby se dosáhlo inaktivace infekčních látek, za přítomnosti polyetheru a popřípadě chaotropního činidla.
12. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároku 11, vyznačující se tím, že prostředek je zpracováván v roztoku.
13. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároku 11, vyznačující se tím, že se infekční látky inaktivují pomocí chemického zpracování.
14. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 13, vyznačující se tím, že je jako polyether použit polyhydroxyether.
15. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároku 14, vyznačující se tím, že je jako polyhydroxyether použit polyethylenglykol nebo polypropylenglykol.
16. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 15, vyznačující se tím, že se inaktivace infekčních látek provádí za přítomnosti nízkomolekulárního polyethylenglykolu, vybraného ze skupiny, sestávající z PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 900 a PEG 1000.
17. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 16, vyznačující se tím, že se inaktivace infekčních látek provádí za přítomnosti polyetheru v koncentraci od 5 do 30 % hmotnostních, přičemž nedochází ke srážení proteinů.
18. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 17, vyznačující se tím, že je chaotropní činidlo vybráno ze skupiny, sestávající ze solí thiokyanátů, močoviny a quanidinu.
19. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároku 18, vyznačující se tím, že je jako thiokyanát použit thiokyanát amonný, sodný nebo vápenatý.
20. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároku 18, vyznačující se tím, že je jako sůl quanidinu použije quanidinhydrochlorid.
21. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 20, vyznačující se tím, že je chaotropní činidlo použito v koncentraci od 0,1-M do 2-M.
22. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 19, vyznačující se tím, že je jako chaotropní činidlo použit thiokyanát v koncentraci od 0,1-M do 2-M.
23. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 22, vyznačující se tím, že se zpracování provádí při teplotě v rozmezí od 20 °C do 60 °C.
24. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 23, vyznačující se tím, že se zpracování provádí po dobu od 1 do 10 hodin.
25. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 24, vyznačující se tím, že plazmový protein obsahuje immunoglobulin.
26. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 24, vyznačující se tím, že jako plazmový protein je přítomen faktor koagulace, fibrinolýzy nebo trombolýzy nebo stejně inhibující složky.
27. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 26, vyznačující se tím, že se zpracování provádí za podmínek, kdy plazmový protein dosahuje biologické aktivity alespoň 50 %, výhodněji 80 % a nejvýhodnéji 90 %.
28. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačuj í cí se tím, že se nízkomolekulární polyethylenglykol, vybraný ze skupiny sestávající z PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 900 a PEG 1000, přidává v kroku (a) jako polyether, (b) inaktivace infekčních látek se provádí za přítomnosti polyethylenglykolu, a (c) polyethylenglykol se odstraňuj e.
29. Farmaceutický prostředek podle nároku 28, vyznačuj i c i se tím, že se pro inaktivaci infekčních látek dodatečně přidává chaotropní činidlo.
30. Farmaceutický prostředek podle nároku 38 nebo 29, vy značující se tím, že inaktivace infekčních látek se provádí při koncentraci polyethylenglykolu od 5 do 30 % hmotnostních, přičemž nedochází ke srážení proteinů.
31. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoli z nároků 28 až 30 vyznačující se tím, že obsahuj e immunoglobulin.
32. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoli z nároků 28 až 31, vyznačující se tím, že obsahuje faktor koagulace, fibrinolýzy nebo trombózy nebo stejně inhibující složku.
33. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoli z nároků 28 až 32, vyznačující se tím, že biologická aktivita plazmového proteinu je alespoň 50 %, výhodněji alespoň 80 % a nejvýhodněji 90 % a to po inaktivaci infekčních látek.
34. Způsob přípravy biologického prostředku inaktivaci virů ze skupiny z velké membrány s RNA viry, malé membrány s RNA viry a membrány s DNA viry, vyznačující se t i m, že je v zásadě dosaženo biologické aktivity prostředku, přičemž je charakterizován zpracováním prostředku tak, aby se dosáhlo inaktivace infekčních látek, za přítomnosti polyetheru , jímž je s výhodou nízkomolekulární polyether, vybraný ze skupiny, sestávající z PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 900 a PEG 1000.
35. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároku 34, vyznačující se tím, že se zpracovává prostředek v roztoku.
36. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároku 34 nebo

35, vyznačuj ící se tím, že se pro inaktivaci infekčních látek provádí fyzikálně chemické nebo chemické zpracování.
37. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároku 34 až

36, vyznačuj ící se tím, že se inaktivace infekčních látek provádí za přítomnosti polyethylenglykolu při koncentraci od 5 do 30 % hmotnostních, přičemž nedochází ke srážení proteinů.
38. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 34 až 37,vyznačuj ící se tím, že se kromě polyethylenglykolu používá k inaktivaci infekčních látek chaotropní činidlo.
39. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároku 38, vyznačující se tím, že je chaotropní činidlo vybráno ze skupiny, sestávající ze solí thiokyanátů, močoviny a quanidinu.
40. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároku 39, vyznačující se tím, že se jako thiokyanát používá thiokyanát amonný, sodný nebo vápenatý.
41. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároku 39, vyznačující se tím, že se jako sůl quanidinu používá quanidinhydrochlorid.
42. Způsob přípravy biologického prostředku podle nároků 38 až 41,vyznačující se tím, že se chaotropní činidlo používá v koncentraci od 0,1-M do 2-M.
43. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 38 až 40,vyznačuj ící se tím, že se jako chaotropní činidlo použije thiokyanát při koncentraci od 0,1-M do 2-M.
44. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 34 až 43,vyznačuj ící se tím, že se zpracování provádí při teplotě v rozmezí od 20 °C do 60 °C.
45. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 34 až 44, vyznačující se tím, že se zpracování provádí po dobu od 1 do 10 hodin.
46. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 34 až 45, v y z n a č u j í c i se t í m, že plazmový protein obsahuje immunoglobulin. .
47. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 34 až 46, vyznačující se tím, že daný faktor koagulace, fibrinolýzy nebo trombolýzy nebo inhibující látky je stejný jako je u plazmového proteinu.
48. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 34 až 47,vyznačuj ící se tím, že se zpracování provádí za takových podmínek, za nichž se biologická aktivita plazmového proteinu udržuje alespoň 50 %, s výhodou alespoň 80 % a nej výhodněji alespoň 90 %.

Farmaceutický prostředek podle kteréhokoli z a 28 až 33, infekčních polyetheru vyznačující se ti látek v kroku (b) se provádí fyzikálním, fyzikálně chemickým zpracováním s výjimkou zpracování detergenty.

nároků 1 až 10 m, že inaktivace za přítomnosti nebo chemickým
50. Způsob přípravy biologického prostředku podle kteréhokoli z nároků 11 až 27 a 34 až 48, v y z n a č u j í c í se t i m, že inaktivace probíhá za přítomnosti polyetherů a popřípadě chaotropního činidla, pomocí fyzikálního, fyzikálně chemického nebo chemického zpracování s výj imkou zpracování detergenty.