CZ419697A3

CZ419697A3 - Somatostatinové peptidy, způsob jejich přípravy a farmaceutický prostředek, který je obsahuje

Info

Publication number: CZ419697A3
Application number: CZ974196A
Authority: CZ
Inventors: Rainer Albert; Wilfried Bauer; Christian Bruns; Nagarajan Chandramouli; Ian Lewis; Gisbert Weckbecker
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 1995-06-29
Filing date: 1996-06-28
Publication date: 1998-05-13
Also published as: WO1997001579A3; HU228984B1; BR9609335B8; BR9609335B1; CZ297381B6; JPH11506108A; JP3445796B2; CA2222524A1; JP2003104998A; IL122243A; SK177097A3; NZ313147A; DE69617687D1; NO317867B1; WO1997001579A2; NO976064L; US6225284B1; DE69617687T2; HUP9901455A2; KR19990028480A

Description

Somatostatinové peptidy, způsob jejich přípravy a farmaceutický prostředek, který je obsahuje

Oblast techniky

Vynález se týká somatostatinových peptidů, způsobu jejich přípravy a farmaceutických prostředků, které je obsahují.

Dosavadní sta.v techniky

Somatostatin je tetradekapeptid, který má strukturu:

H-A!a-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH

2 3 4 5 6 7 8 0 10 11 12 13 14

Po izolaci a charakteri zac i somatostat i nu bylo pokračováno v Usilovném hledání aktivnějších á stabilnějších analogů.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je zejména analog'somatostatinu obsahující sekvenci aminokyselin obecného vzorce I

-(D/L)Trp-Lys-Xi-X2kde X1 je zbytek obecného vzorce (a) nebo (b)

-nh-ch-co-

(I), nebo

-NH-CH-COI ch₂

I r₂ (b), kde

Ri je popřípadě substituovaná fenylová skupina,

R₂ je -Z1-CH2-R1, -CHž-CO-O-CH2-R1 ,

CH.-R, kde Z1 znamená atom kyslíku nebo atom síry, a

X2 je alfa-aminokyselina, obsahující aromatický zbytek na postranním řetězci na alfa-uhlíku, nebo jednotka aminokyseliny zvolená ze skupiny zahrnující Dab, Dpr, Dpm, His, (Bzl)HyPro, thienyl-Ala, cyklohexyl-Ala a terč.buty1-Ala, přičemž zbytek Lys uvedené sekvence odpovídá zbytku Lys⁹ nativního somatostatinu-14.

Á

Tyto sloučeniny jsou zde nadále uváděny jako sloučeniny podle vynálezu. ’ '

Zde používaným výrazem analog somatostatinu je míněn peptid s přímým řetězcem nebo cyklický peptid odvozený od somatostatinu-14 vyskytujícího se v přírodě, který obsahuje sekvenci Obecného vzorce I a kde jedna nebo více jednotek *

£>

aminokyselin byly dodatečně vypuštěny nebo/a nahrazeny jedním nebo více zbytky jiných aminokyselin nebo/a kde jedna nebo více funkčních skupin bylo nahrazeno jednou nebo více jinými funkčními skupinami nebo/a jedna nebo více skupin bylo nahraženo jednou nebo několika isosterickými skupinami. Obecně zahrnuje tento výraz všechny modifikované deriváty nativního somatostatinu-14, obsahujícího shora uvedenou sekvenci obecného vzorce I, která má vazebnou afinitu v rozmezí nM nejméně k jednomu somatostatinovému receptoru shora definovaného subtypu.

Podle výhodného provedení je předmětem vynálezu analog somatostati nu, ve kterém zbytky v polohách 8 až 11 somatostatinu-14 představuje sekvenci shora definovaného vzorce I.

Výhodněji je předmětem vynálezu shora popsaný analog somatostatinu obsahující hexapeptidovou jednotku, přičemž zbytky v polohách 3 až 6 uvedené hexapeptidové jednotky obsahují sekvenci obecného vzorce I. Zejména výhodný je somatostatinový hexapeptid, ve kterém zbytky v polohách 1 a 2 hexapeptidové jednotky mohou být kterékoliv známé v oboru, například jak popsáno A.S.Duttou v Smáli Peptides, sv.19 , 292 až 354, ElS’evier, 1993, nebo jako substituenty pro Phe⁶ nebo/a Ph.e⁷somatostatinu-14.

Zejména je předmětem vynálezu analog somatostatinu, ve kterém hexapeptidová jednotka je cyklická, například taková, která má přímou peptidovou vazbu mezi alfa-karbonylovou skupinou zbytku v poloze 6 a alfa-aminoskupinou zbytku v poloze

1.

Zatímco Lys, Xi a X2 v sekvenci obecného vzorce I mají „konf i.gur.ac.i. L., Trp může. mít., konfigurací. D...neb.o.......L . ,.S„ výhodou, má Trp konfiguraci D.

Xi je s výhodou zbytek obecného vzorce (a) nebo (b), přičemž R2 znamená s výhodou

-Z^CHj-R, ^0Γ -^ζ^-O-CHfRv

Když X2 obsahuje aromatický zbytek na postranním řetězci na alfa-uhlíku, může to být účelně přírodní nebo uměle připravená alfa-aminokyselina, například Phe, Tyr, Trp, Nal, Pal, benzothienyl-Ala, Tic a thyronin, s výhodou Phe nebo Nal, výhodněji Phe. X₂ je s výhodou alfa-aminokyselina obsahující aromatický zbytek na postranním řetězci na alfa-uhlíku.

Když znamená R1 substituovanou fenylovou skupinu, může být účelně substituovaná atomem halogenu, methylovou skupinou, ethylovou skupinou, methoxyskupinou nebo ethoxyskupinou např. v ortho- nebo/a para-poloze. Výhodněji je Ri nesubstituovaná fenylová skupina.

Z1 znamená s výhodou atom kyslíku.

Představitelem sloučenin podle vynálezu je například sloučenina obecnho vzorce II cyklo(A - ZZ - (D/L)Trp - Lys - X - X ]

12 (II),

3 4 5 5 kde

X1 a Xz mají shora uvedený význam, je dvojmocný zbytek zvolený ze skupiny zahrnující

Pro, (R₃-NH-CO-O)Pro-, R₅-N-R₇-Pro-, HO-R₇-Pro-,

kde Ra je NRbR9-C2-ealkylen, guanidino-C2-ealkylen nebo C2-ealkylen-COOH,

R3a je atoD) vodíku, alkylová skupina obsahující až 4 atomy uhlíku nebo má nezávisle na sobě některý z významů uvedených pro R3 ,·

R₃b je atom vodíku nebo alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku,

Ra je hydroxylová skupina nebo NRsRe,

Rb je -(CH2 )1-3- nebo -CH(CH₃)-,

R4 je atom vodíku nebo methylová skupina,

Rda je popřípadě v kruhu substituovaná benzylová skupina, jak Rs, tak Re znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, omega-aminoalkylenovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, omega-hydroxyalkylenovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo acylovou skupinu, R7 je přímá vazba nebo alkylenová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, jak Rb, tak Rg znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, omega-hydroxyalkylenovou sku. skupinu obsahující 2 až 4 atomy uhlíku, acy-kovou ’ 'skupinu' n^bo^^ CHz OH-ÝCHOHJč-CH2·; kde^ c představuje celé číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4, nebo Rs a Rg tvoří dohromady s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, heterocyklickou skupinu, která může obsahovat další heteroatom, a

ZZa

Ri1 je benzylová skupina, která je popřípadě substituovaná v kruhu, ~(CH2)i- 3-OH, CH₃-CH(OH)- nebo -(CH2)1 - 5-NRsRe a je jednotka přírodní nebo uměle připravené alfa-aminokyseliny.

ZZ_a může mít D- nebo L-konfiguraci. Když ZZa je jednotka může to

Ser, Ala, Val, Ile, Leu, Nle, His, Arg, Trp, popřípadě v kruhu substituovaný Phe jeho benzenový kruh může meuměle připravené alfa-amino-kyseliny,

Thr,

Tyr, přírodní nebo být například

Lys, Nal, Pal, nebo ří^-benzyl-Gly. Když ZZa je Phe, být substituován například aminoskupinou, nitroskupinou, thylovou skupinou, methoxyskupinou nebo atomem halogenu, s výhodou v para-poloze. Když ZZa je Phe, jeho benzenový kruh je s výhodou nesubstituovaný.

Když A obsahuje zbytek aminokyseliny Pro, kterýkoliv substituent přítomný na prolinovém kruhu, např. R3-NH-CO-Oatd., je s výhodou v poloze -4. Takový zbytek substituovaného prolinu může být v cis-formě, např.

jakož i v trans formě. Přítomný vynález zahrnuje všechny geometrické izomery jednotlivě jakož i jejich směsi.

Když A je (NRqR9-C2-ealkylen-NH-CO-OjPro-, kde NRsRg tvoří heterocyklickou skupinu, tato skupina muže být aromatická nebo nasycená a může obsahovat jeden atom dusíku nebo jeden atom dusíku a druhý heteroatom zvolený z atomu dusíku a atomu kyslíku. S výhodou je heterocyklická skupina například pyridylová skupina nebo morfolinová skupina. Alkylenová « ·

Λ skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku v tomto zbytku je s výhodou -CH2-CH2-.

Kterákoliv acylová skupina jako Rs , Re, Re a R9 v A může být například R12CO-, kde R12 je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku nebo benzylová skupina, s výhodou methylová skupina nebo ethylová skupina. Když R4a nebo Ri 1 v A je benzylová skupina substituovaná v kruhu, může být benzenový kruh substituovaný, jak naznačeno shora pro ZZa .

lad

Výhodnou skupinou sloučenin podle vynálezu jsou napříksloučeniny obecného vzorce II, kde A je bez postranní skupiny -NH-CO-O-.,

Další skupinou výhodných sloučenin podle vynálezu jsou například sloučeniny obecného vzorce II, kde

A obsahuje -základní postranní zbytek, například skupinu

R3-NH-CO-O- nebo R5-N-R7-.

I

Re

Ještě další skupinu výhodných sloučenin podle vynálezu tvoří skupina sloučenin, kde N-koncová aminokyselina obsahuje substituovaný Pro, zejména 4-substituovaný Pro, např. sloučeniny obecného vzorce II, ke A je 4-substituovaný Pro.

A je s výhodou 4-(R3-NH-CO-O)Pro.

Dalšími reprezentanty sloučenin podle .vynálezu jsou takové sloučeniny, které obsahují aminoskupinu nesoucí chelatační skupinu, zejména sloučenina obecného vzorce II, kde —A. „obsahu, je. .aminoskupinu.„v. -postranním-řetězc.i.,.-.k.terá~.nese che-,„ latační skupinu ve volné formě, ve formě soli nebo v komplexu s detektovatelným prvkem. Tyto sloučeniny jsou zde uváděny jako chelatované sloučeniny podle vynálezu.

• φ φφ «· · · φφ φ' φ φ φ φ · φ · φ « · · φ φ φ φ φ «φφ φφ*

Φ Φ Φ · · ΦΦ Φ Φ Φ Φ Φ · ΦΦ

Vhodné chelatační skupiny jsou fyziologicky přijatelné chelatační skupiny schopné vytvořit komplex s detektovatelným prvkem. ;Chelatační skupina má s výhodou značně hydrofilní charakter. Jako příklady chelatačních skupin je možno uvést například ty, které jsou odvozeny od pólyaminopolykarboxylových kyselin nebo anhydridů, například ty, které jsou odvozeny od necyklických ligandů, například ethylendiamintetraoctové kyseliny (EDTA), diethylentriaminpentaoctové kyseliny (DTPA), ethylenglýko1-0,0'-bis(2-aminoethyl)-N,N,N',N'-tetraoctové kyseliny (EGTA), N,N'-bis(hydroxybenzy1)ethylendiamin-N,N'-dioctové kyseliny (HBED) a triethylentetraminhexaoctové kyseliny (TTHA), ty, které jsou odvozeny od substituované EDTA nebo DTPA, například p-i sothiokyanátobenzyl-EDTA nebo -DTPA, ty, které jsou odvozeny od makrocyklických ligandů, například 1,4,7,10-tetraazacyklododekan-N,N',N'',N'''- tetraoctové kyseliny (DOTA) a 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan-N,N',N'',N'''-tetraoctové kyseliny (TETA) nebo 1,4,7,10-tetraazacyklotridekan-N,N',N'',N'''-tetraoctové kyseliny (TITRA).

Chelatační skupina může být připojena k aminoskupině sloučeniny podle vynálezu buď přímo nebo přes spacer. Vhodné spacery jsou ty, které jsou známé z literatury, například, jaké jsou popsány v GB-A-2,225.579, například dvoumocně zbytky aminokarboxylové kyseliny, například beta-Ala nebo dvoumocný zbytek odvozený cd 5-aminokapronové kyseliny.

Výhodné chelatační skupiny jsou ty, které jsou odvozeny od DTPA, DOTA, TETA nebo substituované EDTA nebo DTPA. Chelatační skupiny odvozené od DŤPA nebo DOTA jsou nejvýhodnější.

Pod pojmem detektovatelný prvek je míněn libovolný pr.... . . . vek, s ..výhodou ion kovu, který se vyznačuje schopností být detektován při terapeutických metodách nebo při diagnostických metodách in vivo, například ion kovu, který vysílá detektovatelné záření, nebo ionu kovu, který je schopen ovlivňovat relaxační vlastnosti jaderné magnetické rezonance.

»·

K vhodným detektovatelným iontům kovů patří například těžké prvky nebo ionty vzácných zemin, například jaké se používají při snímání počítačovou axiální tomografií (CAT), paramagnetické ionty, např. Gd³⁺, Fe³⁺, Mn²⁺ a Cr^{2 +} , fluorescentní ionty kovů, např. Eu³*, a radioaktivní nuklidy, např. radioaktivní lanthanid, zejména radioaktivní nuklidy vysílající gama-záření, radioaktivní nuklidy vysílající beta-záření, radioaktivní nuklidy vysílající alfa-záření, radioaktivní nuklidy vysílající Augerovy elektrony, radioaktivní nuklidy vysílající pozitrony, např. ^6SGa.

K vhodným radioaktivním nuklidům vysílajícím gama-záření patří ty, které jsou použitelné v diagnostických metodách. Radioaktivní nuklidy vysílající gama-záření mají s výhodou poločas od 1 hodiny do 40 dní, s výhodou od 5 hodin do 4 dnů, výhodněji od 12 hodin do 3 dnů. Jako příklady je možno uvést radioaktivní nuklidy odvozené od gallia, india, technecia, ytterbia, rhenia, terbia, thallia a samaria, např.

⁶⁷Ga, ¹¹	¹ In, ^99lTc,	¹61Tb, ^{1 69}Yb a	^{1 86}Re.
K	vhodným	radioaktivní m	nukli dům	vysílajícím

beta-záření patří ty, které jsou použitelné při terapeutických aplikacích, například ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ¹⁹⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁶⁹Er, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ¹⁰⁹Pd, ¹⁶⁵Dy, ³²P, ¹⁴²Pr a ¹⁵⁶Sm.

Vhodné radioaktivní nuklidy vysílající alfa-záření jsou ty, které se používají k léčení, např. ²¹¹At, ²¹²Bi nebo ^{2 01} TI.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být např. ve volné formě nebo ve formě solí. Soli zahrnují adiční soli s kyselinami, např. s organickými kyselinami, polymerními kyselinami nebo s.anorganickými, kyselinami,. např.. hydroc.hlor.idy a. acetáty .a formy solí, které je možno získat se skupinami karboxylových kyselin, když jsou přítomné např. v chelatační skupině, např. soli alkalických kovů jako sodíku nebo draslíku, nebo substituované nebo nesubstituované amoniové soli.

Předmětem vynálezu je také způsob přípravy sloučenin podle vynálezu· Mohou být připraveny analogicky se známými metodami.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být připraveny například

1' následovně:

a) odstraněním nejméně jedné chránící skupiny, která je přítomna v somatostatinovém peptidu, obsahujícím zbytek obecného vzorce I, přičemž somatostatinový peptid je v chráněné formě, nebo

b) spojením dvou peptiďových jednotek, z nichž každá obsahuje nejméně jednu aminokyselinu v chráněné nebo nechráněné formě, amidovou vazbou, přičemž amidová vazba je taková, že se dosáhne požadovaná sekvence aminokyselin, a popřípadě se provede stupeň a) procesu nebo

c) odstraněním funkční skupiny nechráněného nebo chráněného somastatinového peptidu nebo jeho převedením na jinou funkční skupinu tak, že se získá jiný nechráněný nebo chráněný peptid a v posledním případě se provede stupeň

a) procesu nebo

d) pro přípravu chelatované sloučeniny podle.vynálezu spojením chelatačního činidla a nechelatované sloučeniny podle vynálezu v chráněné nebo nechráněné formě a začleněním volné aminoskupiny tak, že se chelatační skupina fixuje na žádanou aminoskupinu sloučeniny podle vynálezu, a popřípadě následujícím provedením stupně a) a izolací takto získaných sloučenin podle vynálezu ve volné formě nebo_popřipádě v_e formě komplexu__.s .detektovatelným prvkem.

Stupeň b) procesu vede k přípravě lineárního peptidu, ale zahrnuje také cyklizaci lineárního peptidu amidovou vazbou na cyklický peptid s žádoucí sekvencí aminokyselin. Po stranní řetězec přítomný v A může být popřípadě zaveden na aminokyselinu před kondenzací peptidů podle stupně b) nebo na finální lineární nebo cyklický peptid podle stupně c). V posledním, případě může tedy být sloučenina obecného vzorce II, kde A je hydroxy-Pro, převedena na sloučeninu obecného vzorce II, kde A je R3-NH-CO-O-Pro,

Cyklizace může účelně být též peptid na aminokyselina výhradou pouze, odpovídá sekvenci v

Když se připraví lineární rozhoduj ící v C-koncové poloze s v lineárním peptidu , která provedena přes hydrazi. pryskyřici, není obvykle se zvolí, aby byla že sekvence aminokyselin požadovaném analogu somatostatinu. Jakmile byl lineární peptid cyklizován, není již možno určit, která aminokyselina byla na C-konci lineárního peptidu. Zatímco obvykle volba první aminokyseliny, kte rá má zahájit řetězec, peptid bude cyklizován, mohou zvýhodňovat jednu není rozhodující, protože lineární mohou existovat jiné faktory, které počáteční aminokyselinu před druhou.

Lineární peptidse s výhodou cyklizuje tak, aby se vytvořila vazba od Trp v poloze 3 k ZZ_a v poloze 2 nebo od X2 v poloze k X1 vpoloze 5.

Tvorba komplexu sloučeniny podle vynálezu obsahující aminoskupinu substituovanou chelatační skupinou může být provedena reakcí chelatované sloučeniny s odpovídajícím detektovatelným prvkem, čímž se získá sloučenina, např. sůl kovu, s výhodou děna analogicky rin, Organic

Press (1982), ve vodě rozpustná.sůl se známými metodami, Ligand, Chemical Data v Krejcarit a Tucker,

Reakce může být provenapř. popsanými v PerSeries 22. NY Pergamon Biophys. Biochem. Res.

Com. 77,

581 (1977) a ve Wagner a Welch, J.

Nucl. Med. 20,

428 (1979).

Pokud příprava výchozích materiálů není zvláště popsána, sloučeniny jsou známé nebo mohou být připraveny analogicky s metodami známými z literatury a používanými'.

··	•	• ·	*·	·♦	• »
• ·	•	•	•	• ·	• ·	•		•
•	• »	•	•	•	• ·		• ·
•	···· ·	•	*	9 ·	···	•		•
	•	•	•	•		•		«
	•		··		• *		•

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady ilustrují vynález. Všechny uvedené teploty jsou ve °C.

i.

Jsou použity následující zkratky:

Bzl = benzyl (Bzl) = -CH2-fenyl připojený ke kyslíku nebo k síře podle (a) nebo (b)

DMF = dímethylformamíd

BOC = terč.butyloxykarbonyl

Fmoc = 9-fluorenylmethoxykarbonyl

TFA = trifluoroctová kyselina

DIPCI = diisopropylkarbodiimid

DCCI^ - dicyklohexylkarbodiimid

HOBt = hydroxybenzotriazol

Dab = 2,4-diaminomáselná kyselina

Dpr = 2, 3-diaminopropanová kyselina

Dpm = 2,6-diaminoheptandiová kyselina

Dde = 4,4-dimethyl-2,6-dioxocyklo-l-hexylidenethy1

RT = teplota místnosti

HyPro = 4-hydroxy-Pro (trans, neničil jinak uvedeno)

Tic = tetrahydroisochinolinkarboxylová kyselina

FAB = bombardování rychlými atomy

E.S. = ionizace elektrostatickým rozprašováním

Tris = amino-tris(hydroxymethyl)methanHEPES = N-2-hydroxyethylpiperazin-2-ethansulfonová kyselina

GH = růstový hormon

BSA - N,0-bis(trimethylsilyl)acetamid

Příklad 1

Cyklo(HyPro-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe)

Pryskyřice Fmoc-Phe-SASRIN^R (1,00 g, 0,65. mmol) se vede procesy syntézy Fmoc v pevné fázi, až se vytvoří požadovaná peptidová pryskyřice SASRIN^R Fmoc-(D)Trp-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)13

• 444 · » · B • · · · 444 • · · · ♦ «4··4

4 · 4 4 44

44 444« 4*44 • 4 • 4 4·'

-Phe-Pro(y-t-OH)-Phe. Použitím piperidinu se sejme z Fmoc chránící skupina. Použitím hydrazinolýzy se provede rozštěpení peptidové pryskyřice. K 1,00 g peptidové pryskyřice se přidá 8,3 ml DMF a 1,24 ml hydrazinhydrátu (přibližně 15 se hydrazinhydrátu v DMF). Směs se míchá 15 hodin při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se pryskyřice odfiltruje a promyje dobře s DMF. Filtrát se odebere a odpaří ve vysokém vakuu, čímž se získá olejovitý hydrazidový produkt jako zbytek. Zbytek se rozpustí ve vodě a lyofilizuje se, čímž se-získá 480 mg lineárního hydrazidového produktu H-(D)Trp-Lys(Boc)Tyr(Bzl)-Phe-HyPro-Phe-NH-NH2. Tento hydrazid se rozpustí v 16 ml DMF, ochladí se na -20 °C a působí se na něj 4N HC1 v etheru (2,4 ml, 11,6 mmol) a poté terč.butylnitritem (41,3 μΐ, 0,348 mmol). Reakce probíhá za míchání po dobu 20 minut. Přidá se diisopropylethylamin (11,6 mmol, 2 ml) a reakce pokračuje za míchání po dobu 72 hodin při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se odstraní DMF ve vysokém vakuu. K olejovitému zbytku se přidá voda, což vede k vysrážení. Provede se extrakce mezi ethylacetátem a vodou. Organické fáze se vysuší nad síranem sodným a produkt se izoluje. Sejmutí chránící skupiny se provede použitím směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 95 : 5 a produkt se izoluje za použití vysokoúčinné kapalinové chromatografie s obrácenými fázemi. Provede se iontová výměna frakcí obsahujících produkt a lyofilizace poskytne produkt uvedený v nadpisu ve formě bílého prášku, MH*(FAB) 975, F = 1,24 (alfa)°22 = -39,0° (95 % AcOH, c = 0,1)

Příklad 2

Cyklo((4-(NH2-02H4-NH-C0-0-)Pro)-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe)

Do roztoku trifosgenu ,C0,6 ekvivalentu), v tetrahydrofuranu se přidá po kapkách Fmoc-HyPro-OMe. Po jedné hodině se přidá dimethylaminopyridin (1,0 ekvivalentu) a N-Boc-diaminoethan (6,0 ekvivalentu) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti. Po chromatografií na tenké vrstvě se rozpouštědlo odstraní ve vakuu a Fmoc-4-(N-BOC-aminoethylaminokarbonyl14

	* 4	« ·	'«4'	4 ·
* · «	·	·' 9	• ·	4	«
• 4 4	•	9	« ·		4 ·
• 44 ··	V 4 ·	9	« · <♦ ·	4	«
• 9	• ·	•	4	4	•
4	4«		• 9		* ·

oxy)-Pro-OMe se extrahuje z dvoufázového systému ethylacetát/ 0,1 M HC1, čímž se získá surový produkt (MH⁺ = 554). Shora izolovaný surový methylester se pak rozštěpí na volnou kyselinu působením 1N NaOH ve směsi dioxanu s vodou a produkt Fmoc-4-(aminoethylaminokarbonyloxy)-Pro-0H se vyčistí na silikagelu) (MNa)⁺ = 562.

Pryskyřice Fmoc-Phe-SASRIN^R (1,00 g, 0,65 mmol) se vede procesy syntézy Fmoc v pevné fázi, až se vytvoří požadovaná peptidová pryskyřice SASRIN^R Fmoc-(D)Trp(.BOC)-Lys(Boc)Tyr(Bzl)-Phe-Pro(y-t-N-Bocdiaminoethankarbamoyl)Phe. Z Fmoc se sejme chránící skupina použitím piperidinu. Rozštěpení peptidové pyskyřice se provede působením 2% TFA v CH2CI2 na peptidovou pryskyřici ve skleněné koloně. Neutralizace se provede 1M roztokem hydrogenuhličitanu -sodného. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a chráněný lineární peptid se lyofilizuje (MH ⁺ = 1379,8). Chráněný lineární peptid se cyklizuje působením DCCI (6,0 ekvivalentu) a HOBt (6,0 ekvivalentu) po dobu 5 dní ,

Sejmutí chránící skupiny se pak provede pomocí 'směsi TFA a vody v poměru 95 : 5 a cyklický peptid se vyčistí preparativní vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií a · provede, se výměna iontů na formu acetátové soli iontoměničovou pryskyřicí AG4-X4, čímž se získá v nadpisu uvedená sloučenina (FAB-MH⁺ = 1061,7).

Příklad 3

Cyklo((4-(morfolinoethylaminokarbonyloxy)Pro)-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe)

.....Syntéza hydroxyprolinové extenze je násl.edu,j_ící.l „FmocHyPro-OMe se přidá po kapkách do roztoku trisfosgenu (0,6 ekvivalentu) v tetrahydrofuranu. Po 1 hodině se přidá dimethylaminopyridin (1,0 ekvivalentu) a N-ethylaminomorfolin (6,0 ekvivalentu) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti. Po chromatografi i na tenké vrstvě se rozpouštědlo odstraní ve > · • · ·· ·· vakuu a Fmoc-4-(morfolinoethylaminokarbonyloxy)Pro-PMe se vyčistí na silikagelu, (MH⁺ 524). Methylester se pak rozštěpí působením IN NaOH ve směsi dioxanu s vodou a produkt Fmoc-4-(morfolinoethylaminokarbonyloxy)Pro-0H se vyčistí na silikagelu, (MH+ 510).

Fmoc-Phe-SASRIN se vede procesy syntézy Fmoc v pevné fázi analogickým způsobem jako v předcházejícím příkladu, až se vytvoří pryskyřice SASRIN Fmoc-(D)Trp-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)-Phe(morfolinoethylaminokarbamát)HyPro-Phe. Sejme se chránící skupina z Fmoc použitím piperidinu. Rozštěpení peptidové pryskyřice se provede působením 2% TFA v CH2CI2 na peptidovou pryskyřici ve skleněné koloně. Neutralizace se provede 1M roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a chráněný lineární peptid se lyofilizuje. Chráněný lineární peptid se cyklizuje působením DCCI (6,0 ekvivalentu) a HOBt (6,0 ekvivalentu) po dobu 5 dnů. Sejmutí chránící skupiny se pak provede směsí TFA a vody v poměru 95 : 5 a cyklický peptid se vyčisti preparativní vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií a provede se iontová výměna na formu acetátové soli pomocí ionexové pryskyřice AG4-X4, čímž se získá v nadpisu uvedená sloučenina.

MH⁺(FAB): 1131 (alfa)°22 = -55,o° (95 % AcOH, c = 0,1)'

Opakováním shora popsaných postupů ale použitím odpovídajících výchozích materiálů mohou být získány sloučeniny obecného vzorce cyklo(X-Y-DTrp-Lys-Z-Phe), kde X, Y a Z mají význam definovaný v níže uvedené tabulce 1.

		•		Π		··	»9		·»
•	•	*	•		«	Φ I	• «	•		•
	4	• ·	•		«	•	«		··
•		««			•	•	II ·	«		•
•			•		•	•	*	•		*
% ·« «	•		♦ ·		·««»	«9		··

Tabulka 1

Příkl.

Fyzikálně chemické údaje MH*

4 5	4-HyPro N*-Bzl-Gly	Tyr(Bzl) Tyr(Bzl)	E.S. FAB	975,7 959
Pro	Phe
6	4- (NH₂-C₂H₄-NH-CO-O-) Pro	His	Tyr(Bzl)	E.S.	1051,5
7	id.	Tyr	Tyr(Bzl)	FAB	1077
8	id.	Arg .	Tyr(Bzl)	E.S.	1070,4
9	4-(NH₂-C₃H_ť-NH-CO-O-) Pro	His	Tyr(Bžl)	E.S.	1065,4
10	id.	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	1075
11	id.	Tyr	Tyr(Bzl)	E.S.	1091,7
12	4 - (NH₂-C₂H₄ -NH-CO-O-) Pro	Phe	Ser(pClBzl) E.S.	1019,6
13	id.	Ala	Thr(Bzl)	E.S.	924,2
14	id.	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	1047
15	id.	Trp	Tyr(Bzl)	FAB	1100
16	id.	Phe	Thr(Bzl)	E.S.	999,6
17	id.	Phe	Glu(Bzl)	E.S.	1027,7
18	4- (N[CHj]₂-C₂H₄-NH-CO-O-) Pro	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	1089
19	4-(NH-C₂H₄-NH-CO-O-)Pro COCH₃	Phe	Tyr(BZl)	E.S.	1103,6
20	NH₂-C₂H₄-CO-O-NCH₃Ser	Tyr	Tyr(Bzl)	E.S.	1065_;6
21	MeSer	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	963
22	4- (pyridyl-C₂H₄-NH-CO-O) Pro	Phe	Tyr(Bzl)	FÁB	1123
23	4- (NH₂-C₅H₁₀-NH-CO-O-) Pro	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	1118
24	4-HyPro	His	Tyr(Bzl)	E.S.	965,7
25	id.	Tyr	Glu(Bzl)	FAB	941
26	id.	Phe	Thr(Bzl)	FAB	913
27	4-NH₂-Pro	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	974

I)

2)

3)

4)

• 9	9	• V	9 9	w	vv
9 9	•	9	9	9 9	9	9		9
9	* 9	9	9	9	9 9		• 1
•	• 9 99	9 9	9	9 9	99 9	9		9
	9	9	9	9	9	9		9
99« 9	9		99	*999	99		99

Tabulka 1 (pokračování)

Příkl.

Y Z Fyzikálně chemické údaje

MÍT

W-Me-Lys

29^x 4-(NH₂-C-NH-C₂H₄~NH-CO-O) Pro I

NH

4- (NH₂-C₂H₄-NH-CO-O-) Pro

4-(NH₂-C₂H₄-NH-CO-O) Pro

4-(NHj“C₂H₄-tól-C0-0)Pro (cis)

4-(NH₂-C₂H_t-NH-CO-O) Pro

4-(NH₂-C₂H_Í-NH-CO-O) Pro

4-NH₂-Pro-

4-[N(CH₃)₂-C₂H₄-NH-C0-O]Pro

4-(NH₂-C₂H₄-NH-CO-O) Pro

4-NH₂-Pró (cis)

4- (NH₂-C_sH₄-NH-CO-O) Pro

4-(NH₂-C₂H₄-NH-C0-0) Pro

Phe	Tyr(Bzl)	FAB	967
Tyr	Tyr(Bzl)	E.S.	1118_r7
Tyr	Thr(Bzl)	E.S.	1015,5
Phe	Ser(Bzl)	E.S.	985,1
Phe	Ser(Bzl)	E.S.	985,1
Ser	Thr(Bzl)	E.S.	939,0
Thr	Thr(Bzl)	E.S.	953,1
Phe	Ser(BZ1)	E.S.	898,0
Phe	Ser(Bzl)	E.S.	1013,2
Tyr	Ser(Bzl)
Phe	Ser(Bzl)	E.S.	898
Ile	Thr(Bzl)
Phe	Cys(Bzl)

1) [a)^D _2í = -47,0°

2) [a]^D ₂₂ = -54,0°

3) [«]°₂₂ = -54,0°

4) [a]^D ₂₂ = -99° id. = totéž (95 % AcOH; c = 0,1) (95 % AcOH; c - 0,1) (95 % ACOH; c = 0,1) (95 % AcOH; c = 0,1) ^xPeptid z příkladu 29 může být připraven následovně:

Chráněný peptid cykloí(NH2-C(=NHj-NH-CsΗλ-NH-CO-O))Pro-Tyr-DTrp-Lys(Dde)-Tyr(Bzl)-Phe se připraví na pryskyřici za použití.....postupu syntézy - Fmoc- —v-—pevné fázi popsaného, v příkladu 2,. Místo N^-Boc-Lys se použije N^ř-Dde-Lys, aby se přednostně zavedla guanidinová funkce na základní postranní řetězec zbytku HyPro. Po sestavení peptidu se odstraní koncová skupina Fmoc a peptid se cyklizuje a nakonec se z něj sejme chránící skupina jako v příkladu 2. Tento peptid se roz·· · ··*4 *· *·» · · · ····· • · · · · ····· • *··»»* v * · ··*«* • f · · ···· »··« 4 »· ······ ·♦ pustí v DMF a přidá se diisopropylamin (3 ekvivalenty) a HOBt (4 ekvivalenty), načež se přidá 3,5-dimethylpyrazolylformamidiniumnitrát (4 ekvivalenty) a roztok se míchá 72 hodin při teplotě-místnosti. Reakční směs se odpaří ve vakuu a pak se na ni nechá působit bezvodým hydrazinem (2% v DMF) po dobu 30 minut, aby se odstranila skupina Dde na Lys. Surový peptid z příkladu 29 se pak vyčistí pomocí, vysokoúčinné kapalinové chromatografie v systému acetonitrilu a vodného triethylamóniumfosfátu.

Příklad 41

Cyklo(4-(NH2-C2H4-NH-CO-O-)Pro-Ά1a-DTrp-Lys-Tyr(3-Bz1)-Phe)'

MH⁺(E.S): 984,5

Příklad 42

Cyklo((4-(NH2-C2H4-NH-CO-O-)Pro)-(p-NH2)-Phe-DTrp-Lys-Tyr(3-Bzl)-Phe)

MH⁺(E.S.): 1076,6

Příklad 43

Cyklo(4-HyPro-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-betaNal)

MH⁺(E.S.): 1025-,5

Příklad 44

Cyklo(4-HyPro-Phe~DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Tyr)

MH⁺(E.S.): 991,6

Příklad 45

Cyklo(MePhe-His-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Dab)

• ·	4	4 ·	4 *	4 4	4 4
* , 4	4*		4	4	4 4	4 4	4		4
4	4	4	4	4*	4	• ·		44
4	444»	4 4	♦	4	4 «»·	4		4
4			4	•	4	4	4		•
44 44		•		»4	4 444	44		4 4

MH⁺(FAB): 1005

a) Cyklo(4-(NH2-C₂H4-NH-CO-O)Pro-Phe-DTrp-Lys(e-Boc)-Tyr(Bzl)-Phe) mg cyklo(4-NH₂-C₂H4-NH-CO-O)Pro-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe), 12 mg hydrogenuhl i č i tanu sodného a 12', mg (B0C)20 se rozpustí v 10 ml směsi DMF a vody v poměru’ 7:3 a reakční roztok se udržuje přes noc při teplotě místnosti za současného míchání. Po odpaření rozpouštědla se produkt uvedený v nadpisu izoluje chromatografií na silikagelu za použití směsi methylenchloridu, methanolu a 50%ní kyseliny octové v poměru 8:2: 0,25 jako mobilní- fáze.

b) Cyklo(4-(DTPA-NH-C2H4-NH-CO-O)Pro-Phe-DTrp-Lys(e-Boc)-

Tyr(Bzl)-Phe)

120 mg DŤPA-hydrazidu se rozpustí v 5 ml DMF a přikapáním směsi diethyletheru a 3N HCI se pH upraví na hodnotu

3. Po ochlazení na -15 ⁰ se přidají 4 μΐ terč, butylnitritu a roztok 15 mg sloučeniny získané shora ad a) v 3 ml DMF obsahujících 15 μΐ Hiinigovy báze. Po 4 hodinách

Φ · · * *·ΦΦ Φ φ * V Φ ··· φ φ • · ·*< e « Φ «··· I J· ΦΦΦΦ «· ·« se rozpouštědlo odstraní odpařením a zbývající odparek se zbaví chránící skupiny bez dalšího čištění

c) Cyklo(4-(DTPA-NH-C₂ Ha-NH-CO-O-)Pro-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bz1)-

-Phe)

Na surový produkt ze stupně b) se působí 10 minut při 0 ⁰ 5 ml směsi TFA a vody v poměru 95 : 5 . Po zředění 50 ml vody se roztok přímo převede na vysokoúčinnou kalinovou chromatografickou kolonu RP18 a eluuje se gradientem voda/acetonitri1/TFAo, 1 %. Čisté frakce se spojí a lyofi 1izují se. FAB-MS: 1436,6

Příklad 47 ^{1 1 1} In značená sloučenina z příkladu 46c) mg sloučeniny z příkladu 46c) se rozpustí v 5 ml 0,01 M octové kyseliny. Výsledný roztok se vede přes 0,22 μ filtr Millex^R-GV (zapsaná ochranná známka) a rozdělí se na 0,1 ml podíly a uskladní při -20 °. ¹¹¹InC13 (Amersham, 1 mCi/100 μΐ) se předem zředí ve stejném objemu 0,5 M octanu sodného a značení se provede smíšením ligandu- s roztokem InC13 a mírnou homogenizací při teplotě místnosti.

Pak se přidá pufr HEPES, pH 7,4, aby se roztok stal

10-^e M.

Příklad 48

Cyklo-(4-(DOTA-NH-C2H4-NH-CO-O)Pro-Phe-DTrp-Lys-Ser(Bzl)-Phe)

M.S., 1371,57 ....

Tato sloučenina se označkuje s ⁹⁰Y následovně: 20 μΐ ⁹⁰Y (1,2 mCi, 0,04 N HC1) na 20 μΐ 50 μΜ shora uvedené sloučeniny (0,15 M NH4=Ac, 0,3¾ BSA, pH 4,5). Tento roztok se inkubuje 15 minut při 100 °. Odstraní se alikvotní podíl a zře21 a · • ♦* ♦· ·· ·· • · · · · · · ·«*· • ♦ * ♦ W · ··

A ··*· « 4 * 4 * «»· ·« • q · * *· · b ···» , V ·· ····*· dí se 4mM DTPA (pH 4,5), dříve než se analyzuje vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii s obrácenými fázemi C18, aby se zjistilo množství volného nechelatovaného ⁹⁰Y v reakční směsi (jak se prokáže přítomností (⁹⁰YDTPA)^2_.

Příklad 49 n-xa y° ζ\- Phe-DTrp i⁰

L Phe-Tyr(Bzl)-Lys

116 mg sloučeniny z příkladu 46a), 12 mg NaCNBH3 a 2 ekvivalenty příslušného aldehydu se rozpustí v 25 ml směsi DKF a HOACi% a udržuje se při 60 ° tak dlouho, až není možno prokázat chromatografii na tenké vrstvě žádný výchozí materiál. Po odstranění rozpouštědla se zbytek vyčistí chromatografií na silikagelu s použitím směsi methylenchloridu, methanolu a HOAc5o% v poměru 9:1: 0,125 až 8:2: 0,25, aby se oddělil monoalkylovaný a dvojnásobně alkylovaný konečný produkt .

i) Aldehyd: (D)-glukosa

Xi = H0CH2-(CHOH)4-CH2 - X2 = H

E.S.-MH* =1225,4 li ) ·''Aldehyd: · (D)-glukosa — -- —. .. .

Xl = X2 = HOCHž-(CHOH)4-CH2E.S.-MH⁺ = 1389,6 iii) Aldehyd: 2,3-0-isopropyliden-(D)-glyceraldehyd

Xl = HOCH2-CH0H-CH2- X2 =

• ·	•	♦ · 9*
• ·	•	9 · · 9
	9 9	9 9 9
*	9 9 9 9	9 9 9 9
•	•	• ♦ 9
···»		99 »99»

iv) Aldehyd: 2,3-0-isopropy1 i den-(D)-glyceraldehyd

X1 = X₂ = HOCHz-CHOH-CH2 E.S.-MH* = 1209,4

v) Aldehyd: hydroxyacetaldehyd

X1 = X2 = HOCH2-CH2E.S.-MH* = 1149,4

Sloučeniny podle vynálezu ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelných solí a komplexů mají cenné farmaceutické vlastnosti, jak ukazují testy in vitro a in vivo a jsou proto indikovány pro terapeutické účely.

Zejména se sloučeniny podle vynálezu váží nejméně na jeden podtyp receptoru somatostatinu. 5 podtypů receptorů somatostatinu, a to SST-1, SST-2, .SST-3, SST-4 a SST-5 bylo klonováno a charakterizováno. .

hSST-Ι, hSST-2 a hSST-3 a jejich sekvence byly popsány Y. Yamadou a spol. v Proč. Nat. Acad. Scí., 89, 251 až 255 (1992). hSST-4 a jeho sekvence byly popsány L. Rohrerem a spol. v Proč. Acad. Sci., 90, 4196 až 4200 (1993). hSST.-5 a jeho sekvence byly popsány R. Panettou a spol. v Mol. Pharmacol. 45, 417 až 427, 1993.

Testy na vázání mohou být provedeny, jak popsáno níže, za použití membrán připravených ze selektivních buněčných linií hSST-1, hSST-2, hSST-3, hSŠT-4 nebo hSST-5, např. CHO buněk, stabilně exprimujících hSST-1, hSST-2, hSST-3, hSST~4 nebo hSST-5.

Použije se mozková tkáň nebo tkáň z hypofýzy, ve které jsou hSST zviditelněny např. in šitu hybridizací nebo/a receptorovou autoradiografi i. Membrány se připraví známými metodami, např. jak popsáno JC. Reubiro a spol., v J. Clin. Endocrinol. Metab. 1987, 65, 1127 až 1137. Membrány připravené z hSST selektivních buněčných linií, např. CHO buněk stabilně

i ·· 4

4 4

999» «4 t* * í * « l4

44*4 4 exprimujících hSST-1 nebo hSST-2 nebo hSST-3 nebo hSST-4 nebo hSST-5 jsou inkubovány trojnásobně v celkovém objemu 300 μΐ při 22 °C po dobu 30 minut se zvyšujícími se koncentracemi (i²⁵I-Tyr³)-oktreotidu v 10 mmol/1 pufru HEPES (pH 7,6) obsahujícím 0,5 % BSA. Inkubace se ukončí rychlou filtrací přes filtry ze skleněných vláken Whatman GF/B, které se pak promyjí každý čtyřikrát 5 ml ledově studenými 10 mmol/1 Tris/150 mmol/1 NaCl. Filtry se změří v počítači LKB při 78¾ měřící účinnosti. Specifická vazba je celková vazba minus nespecifická vazba za přítomnosti 1 pmol/l somastatinu-14. Pokusy se provádějí trojnásobně. Afinitní konstanta (Kd) a počet vazebních míst se vypočte ze Scatchardových grafických znázornění hodnot.

Sloučeniny podle vynálezu, např. jak uvedeno shora, mají ve shora uvedených testech na vázání na hSST-1, hSST-2, hSST-3, hSST-4 nebo/a hSST-5 IC50 v nMolárním rozmezí, s výhodou IC50 od 0,1 do 10 nM (IC50 = koncentrace pro polomaximální inhibici v kompetičním testu na vázání za použití (i 25j-Ty_r3)-_oktreotidu, stejného radioaktivního ligandu, jak uvedeno shora).

Sloučenina	. hSSTR-1	ic₅₀ hSSTR-2	(nM) hSSTR-3	hSSTR-4	hSSTR-5
Příkl. 1	63,00	0,94	1,90	320,00	0,35
Příkl. 2	4,60	2,30	0,93	490,00	0,46
Příkl. 14	7,40	1,20	0,86	> 100	0,13
Příkl. 31	0,50	0,80	3,90	3,60	2,90
Příkl. 32	3,80	0,13	57,00	7,90	2,00
Příkl. 36	0,60	1,30	2,40	2,20	4,50

Sloučeniny podle vynálezu se vyznačují dále inhibiční aktivitou vůči sekreci růstového hormonu (GH), jak je prokázáno inhibicí sekrece GH in vitro z kultivovaných buněk hypofýzy. Hypofýzy z dospělých krysích samců se rozřeží na malé kousky a dispergují se za použití 0,1 % trypsinu v 20 mM pufru HEPES. Dispergované buňky se kultivují čtyři dny v MEM (Gibco) doplněném o 5 % fetálního telecího sera, 5 % koňského séra, 1 mM hydrogenuhličitanu sodného, 2,5 nM dexamethasonu,

2,5 mg/ml insulinu a 20 U/mi Pen/Strep. V den.pokusu se připojené buňky promyjí dvakrát Krebs-Ringerovým médiem pufrovaným 20 mM HEPES a doplněným 5 mM glukosy a 0,2 % ESA. Poté se buňky inkubují dvě až čtyři hodiny s testovanou sloučeninou za přítomnosti 3xlO^r1° M faktoru uvolňujícího růstový hormon. Množství růstového hormonu uvolněného do média se změří pomocí RIA. Sloučeniny podle vynálezu inhibují sekreci GH v závislosti na ' koncentraci od 10^-11 do ΙΟ^-6 M. Sloučenina z příkladu 2 má IC50 0,4 nM.

Sloučeniny podle vynálezu také inhibují sekreci inzulínu nebo/a glukagonu, jak prokázáno ve standardních testech s použitím krysích samců. Testovaná látka se aplikuje v různých, logaritmicky odstupňovaných dávkách použitím nejméně 5 krys na dávku. 1 hodinu po s.c. aplikaci testované látky se odebere krev. Stanovení hladin insulinu a glukagonu v krevním séru se provede radioimunologicky. Sloučeniny podle vynálezu jsou v tomto testu účinné při dávkování v rozmezí od 0,02 do 1000, např. do 10, pg/kg s.c.. Sloučenina z příkladu 9 má ECso 1,8 pg/kg s.c. vzhledem k sekreci inzulínu.

Sloučeniny podle vynálezu jsou tedy užitečné pro léčbu poruch s etiologií'zahrnující nebo spojenou s nadměrnou sekrecí růstového hormonu, např. při léčbě akromegálie jakož i při léčbě cukrovky, zejména jejích komplikací, např. angiopatie, proliferativní retinopatie, fenoménu úsvitu (dawnfenomenonu)a nefropatie a jiných metabolických poruch souvisejících se sekrecí insulinu nebo glukagonu.

«· « ·» *' * « ·· ♦ · • · · · i· • ··«· · ·b « • | »· ·

I ······

Sloučeniny podle vynálezu inhibují také vylučování žaludeční kyseliny, exokrinní a endokrinní sekreci pankreatu a sekreci různých peptidů gastreointestinálního traktu, jak prokázáno v standardních testech použitím např. krys se žaludeční nebo pankreatickou pištěli, přičemž jsou tyto sloučeniny účinné při dávce od 0,01 do 10 mg/kg.

Sloučeniny podle vynálezu jsou dále tedy užitečné pro léčbu gastrointestinálních poruch, například při léčbě dvanácterníkových vředů, enterokutánní a pankreatikokutánní píštěle, syndromu a onemocnění dráždivého tračníku, dumpingového syndromu, syndromu vodnatého průjmu, průjmu v souvislosti s AIDS, chemoterapií vyvolaného průjmu, akutní nebo chronické pankreatitidy, nádorů secernujících gastrointestinální hormony (např. vipornu, glukagonomu, i nzul i norou, karcinoidních nádorů a podobně), jakož i gastrointestinálního krvácení.

Sloučeniny podle vynálezu jsou také účinné při léčbě nádorů, které jsou pozitivní na receptor somatostatinu, zejména nádorů obsahujících hSST-1, hSST-2, hSST-3, hSST-4 nebo/a hSST-5, jak prokázáno proliferativními testy s různými rakovinovými buněčnými liniemi obsahujícími takové somatostati nové receptory.

Nádorové buněčné linie AR42J z krysího pankreatu jsou odvozeny od azaserinem vyvolaného exokrinního pankreatického nádoru (Jessop a Hay, 1980). Nepřítomnost mykoplasmy se pravidelně kontroluje použitím barvení bisbenzímidem a hybridizačním testem GenProbe (San Diego, Ca). Kultury se rozmnožují v médiu DMEM (Dulbeccos Modified Eagles Medium) doplněném 10 % fetálního telecího séra (FCS) při 5 % COž. Buňky se kultivují v nepřítomnosti antibiotik nebo antifungálních prostředků. Buňky AR42J téměř v souvislé vrstvě se trypsinizují, zředí v DMEM + 2,5 % fetálního telecího séra a naočkují se do nepovlečených destiček s 96 jamkami. Po 48 hodinové inkubační době (den 0) se stanoví počet buněk v oddělené kontrolní destičce jak spočítáním buněk v Coulterově počítači, tak kolorimetrickou zkouškou SRB. Buňky se pak vystaví půso26

4» • 4 « ··44 *44 4 4 * 4 4 4 44

4 4 4 4' ·' 4 W 4 · ··♦· 4 4 4 4 * >·4 v · · Β 4 4 44 <«4· « 44 ·44* ·*4* bení testované sloučeniny po dobu 2 až 5 dnů při různých koncentracích a pak se spočítají. Za těchto podmínek sloučeniny podle vynálezu inhibují proliferaci nádorových buněk při koncentraci od 10-’2 jq ίο*⁶ M. Sloučenina z příkladu 2 má ICso 0,7 ± 0,3 (standardní chyba) nM.

Studie růstu nádoru in vivo

Holé samice myší (nu/nu Balbc-A z IFFA Credo, Lyon, Francie), vážící 19 až 22 g, se chovají ve skupinách po 5 zvířatech v makrolonových klecích (typu III, 16x22x11 cm). Klece se umístí do provzdušňovaných skříní (Iffa Credo), které se udržují při 24 í 1 °C. Zvířata mají volný přístup k vodě na pití a potravě pro hlodavce prosté patogenů (Diet A, Kliba, Bazilej, Švýcarsko). K vyvolání nádorů z kultivovaných buněk se buňky AR42J trypsinizují a 5 až 10xl0⁶ nádorovýchbuněk v 0,2 ml se aplikuje subkutánní injekcí (s.c.) do obou boků holých myší. Léčba začíná 2 až 4 dny po inokulaci nádorových buněk, přičemž testovaná sloučenina se s výhodou aplikuje ve formě kontinuální infuze, např. rychlostí 10 až 50 HgVkg/h. Velikost nádorů se zjistí posuvným měřítkem. Pro vypočtení objemu nádoru se použije rovnice objem (elipsoid) = délka x hloubka x výška x 0,52. Pro statistické výpočty se použije Studentův t-test. Při tomto pokusu inhibuje sloučenina z příkladu 2 růst nádoru 11. den o 51 % oproti kontrole s fyziologickým roztokem.

Sloučeniny podle vynálezu jsou tedy vhodné pro ' léčbu maligních onemocnění s proliferaci buněk, např. rakovinových nádorů, zejména nádorů obsahujících typy receptorů somatostatinu, na které jsou zaměřeny sloučeniny podle vynálezu, např. jak popsáno níže pro chelatované sloučeniny.

Sloučeniny podle vynálezu mají také inhíbiční účinek na angiogenezi, jak prokázáno v standardních testech, např. u holých myší, jak níže popsáno.

4 ·		··	• a	4 a
· *	• · ♦ · • v *	• · • ·	• · « a
•		♦ · b «	* ·	• *
« ·	* · · ·· ···>	♦ • ·	a v

Myši jsou anestezovány i.p. pomocí 400 mg/kg chloralhydrátu (Sigma). Nádorové buňky (0,1 až 10 x 10⁶ v 0,1 ml) (buňky SiHa a buňky MDA-MB-231 připravené, jak popsáno v Angiogenesis, vyd. R.Steinerem, P.B. Weiszem a R. Langerem, 1992, Švýcarsko) se inokulují intrakutánně. Obvykle se aplikují injekce na dvě místa v břišní stěně/myš, která jsou vzdálená od hlavních břišních kožních cév tak, aby počet cév v okolí byl nízký. Kontrolní skupiny obdrží 0,1 ml 0,02¾ tryptanové modři v PBS. 10 dní po injekci se anestezované myši usmrtí inhalací oxidu uhličitého. Kůže se napne na plastický prstenec (40 mm v průměru) pro vyhodnocení invertovaným mikroskopem (Zeiss IM) při 12,5- a 25-násobném zvětšení. Jako měřítko angiogeneze se vyfotografují cévy a spočítají se ty, které jsou přímo spojené s nádorem. U kontrolních zvířat se spočítají ty cévy, které jsou připojené k určené ploše kolem místa injekce. Tato plocha odpovídá střední ploše kožních nádorů. Tato se stanoví použitím posuvného měřítka podle rovnice 3,14 x r². Testované sloučeniny se aplikují s.c. buď v den inokulace nádoru nebo po 3 dnech. Kontrolním zvířatům se aplikuje nosič. V tomto pokusu inhibují sloučeniny podle, vynálezu tvorbu cév, když jsou aplikovány v dávce např. 0,01 až 1000 μ/kg s.c.

Sloučeniny podle vynálezu jsou dále tedy použitelné pro prevenci nebo léčbu angiogeneze, zánětlivých poruch a retinůpatie,

Sloučeniny podle vynálezu mají také inhibiční účinek na proliferaci a migraci buněk hladkého svalstva, jak prokázáno v následujících testech.

Chronické odhojování allotransplantátů

Sloučeniny podle vynálezu inhibu.jí chronické odhojování allotransplantátů krysí ledviny. Ledvina samce krysy DA (RTl^a) se transplantuje orthotopicky do samce Lewis (RT1¹), který je příjemcem. Celkem je transplantováno 24 zvířat. Všechna zvířata jsou léčena cyklosporinem A v dávce 7,5 rog/kg/den per os 14 dní počínaje dnem po transplantaci, aby

« *	*			b·	··
• ·	*		« ·	9	• ·		•	9
- 9	•	•	9 ·		• ·	•		9 9
•	♦ ♦	'· ·	9 9 9	9	* · ·		•	•
		•	9 *	•		•	•	9
·«·»		•	• ·	···	• ··			99

se zabránilo akutnímu celulárnímu odhojení. Kontralaterální nefrektomie se neprovede. Každá pokusná skupina léčená určitou dávkou sloučeniny podle vynálezu nebo placebem zahrnuje šest zvířat.

léčí

Počínaje 53. až 64. dnem po dalších 69 až 72 dní infuzí dostáváj í až 72 placebo. 14. den pomocí MRI. To se na konci pokusu.

transplantaci se sloučeniny podle po transplantaci zopakuje 53 až 64. Zvířata např.

v tomto příjemci vynálezu se změří den po jsou pak pitvána, sloučeniny z příkmodelu allotranspTaké nebo perfuze orgánu transplantaci a

Aplikace sloučeniny podle vynálezu, ladu 31, v dávce 1 až 10 yg/kg/h lantátu krysí ledviny zajistí zlepšenou perfuzi orgánu, byl zaznamenán prudký pokles hladin IGF-1,

Angioplast i ka

Studie týkající se angioplastiky se provádějí na modelu poškození balónkovým katétrem: Katetrizace pomocí balónkového katétru se provádí v den 0, zejména, jak popsáno Powellem a spol. (1989). Při anestezii Isofluoranem se zavede katétr Fogarty 2F do levé společné karotidy cestou zevní karotidy a nafoukne se (roztažení = 10 yl HžO). Nafouknutý balónek se povytáhne třikrát v rozsahu délky společné karotidy, poslední dvě povytažení za mírného kroucení katétrem, aby se dosáhlo stejnoměrné deendothelializace. Katétr se pak odstraní, zevní karotida se podváže, aby se zamezilo krvácení, a zvířata se nechají nabýt vědomí.

Pro studii se použijí 2 skupiny po 12 krysách RoRo (400 g, přibližně 24 týdny staré): jedna kontrolní skupina a jedna skupina, která dostává sloučeninu podle vynálezu. Krysy jsou ... zcela, ran.domizov.ané během celého pokusu a.analýzy.

Testovaná sloučenina se podává kontinuální infuzí za použití infuzních pumpiček rychlostí 10 až 50 yg/kg/h počínaje 3 dny před poškozením zavedeným balónkem (den -3) až do konce studie, 14 dní po poškození zavedeným balónkem (den

• b		»·			fcb
	•	*	•	• *	• ·	•		•
	• *	•	b'	b	b *		bb
•	b···	« ·			• b · ·	•		V
	•	•		b	b	«		•
	•			····			··

+14). Krysy se udržují v jednotlivých klecích a ponechá se jim potrava a voda podle libosti.

Krysy se pak aneštetizují Isofluoranem, levou srdeční komorou se zavede perfuzní katétr, který se zajistí v aortálním oblouku, a do pravé srdeční komory se zavede aspirační kanyla. Zvířata se perfundují pod perfuzním tlakem 20 kPa, nejdříve po dobu 1 minuty 0,1 M fosfátem pufrovaným fyziologickým roztokem (PBS, pH 7,4) a pak 15 minut 2,5% glutaraldehydem ve fosfátovém pufru (pH 7,4). Karotidy se pak excidují, oddělí se od okolní tkáně a ponoří do 0,1 M kakodylátového pufru (pH 7,4) obsahujícího 7 % sacharosy a inkubují se přes noc při 4 °C. Následující den se karotidy ponoří za současného třepání na 1 hodinu při teplotě místnosti do 0,05% manganistanu draselnho v 0,1 M kakodylátu. Tkáně se pak dehydratují v odstupňovaných ethanolových sériích: 2 x 10 minut v 75%, 2 x 10 minut v 85%, -3 x 1.0 minut- v 95% a 3 x 10 minut v 100% ethanolu. Dehydratované karotidy se pak uloží do Technovitu 7100 podle doporučení výrobce. Médium, ve kterém jsou karotidy uloženy, se nechá přes noc polymerovat v eksikátoru pod argonem.

Ze střední části každé karotidy se tvrdým kovovým nožem na otočném mikrotomu odříznou části 4 pm tlusté a barví se 2 minuty Giemsovým barvivém. Připraví se tak asi 5 částí z každé karotidy a vyhodnotí se' morfometricky průřezová plocha media, neointimy a lumina pomocí systému obrazové analýzy (MCID, Toronto, Kanada).

Při tomto pokusu inhibují sloučeniny podle vynálezu myointimální proliferaci, když jsou aplikovány kontinuální infuzí při denní dávce od 0/2 do 10 mg/kg, s výhodou 0,05 až 5 mg/kg.. . ........, . . ........

Sloučeniny podle vynálezu jsou také užitečné pro prevenci nebo léčbu vaskulárních změn v transplantátech, např. vaskulopatií allo- nebo xenotransplantátů, např. aterosklerózy cévního štěpu, např. v transplantovaném srdci, plících, při v* ·> · *♦ ·· * «* < · ♦ · · · v* t » · · b·! ·, * ·' 1 ·« • b··» '· · ♦ · *· ·· ·« « » · b ·'· « b • «Η · .*· ·*♦*· kombinaci srdce-plíce, v játrech, ledvině nebo pankreatu, nebo pro prevenci nebo léčbu restenózy nebo/a cévní okluze po poranění cévy, např. po angioplastice.

Pro všechny shora uvedené indikace bude samozřejmě zapotřebí různé dávkování v závislosti například na použité sloučenině podle vynálezu, na hostiteli, způsobu aplikace a závažnosti stavu, který má být léčen. Obvykle se však dosahuj í vyhovující výsledky po aplikaci řádově 1 pg až 0,5 mg/kg/den sloučeniny. Indikovaná denní dávka pro pacienty je v rozmezí asi od 2 pg asi do 20 mg, s výhodou asi 0,01 až asi 20 mg, např. asi 10 až asi 5000 pg s.c. sloučeniny účelně podané v rozdělených dávkách až 3 krát za den ve formě jednotkového dávkování obsahujícího například asi od 0,5 pg asi do 10 mg, např. asi od 2 pg do 10 mg, sloučeniny nebo ve formě s protrahovaným uvolňováním.

Sloučeniny podle vynálezu formě nebo ve formělexů. Tyto způsobem a sloučeniny. dek soli nebo vyznačuj í Předmětem mohou být podávány ve farmaceuticky přijatelné soli nebo komplexy mohouse řádově stejnou vynálezu je obsahující sloučeninu podle obecného vzorce II ve formě volné uticky přijatelné soli nebo ve volné kompbýt připraveny obvyklým Účinností jako volné také -farmaceutický prostřevynálezu, např. sloučeninu báze nebo ve formě farmaceformě komplexu ve spojení s farmaceuticky při jatelným ředidlem nebo nosičem. Tyto prostředky mohou být zpracovány obvyklým způsobem. Sloučeniny podle vynálezu nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl nebo komplex mohou být podávány libovolnou obvyklou cestou, například parenterálně např. ve formě roztoků nebo suspenzí pro injekce nebo ve formě nazální nebo čípku.

V..souladu se shora uvedeným je předmětem vynálezu též:

a) sloučenina podle vynálezu např. sloučenina obecného vzorce II nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex pro použití jako farmaceutický prostředek,

• A				··	1»
• ·	♦	* ·	« »	• ·	•	9
•	» ·	• *	*	• *	99
*	*···	• « ·	*	» ···	9 9
•	«	9 9	•	«	*	9
····	*	««	··♦·	··	«

b) způsob prevence nebo léčby shora uvedených poruch u subjektu, který potřebuje takovou léčbu, který spočívá v podávání účinného množství sloučeniny podle vynálezu, např. sloučeniny obecného vzorce II nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího komplexu tomuto subjektu nebo

c) sloučenina podle vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex pro použití při přípravě farmaceutického prostředku pro použití v kterékoliv metodě definované pod b shora.

Chelatované sloučeniny podle vynálezu nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli jsou užitečné buď jako zobrazovací prostředek, např. zviditelnění tkání a buněk pozitivních na receptor somatostatinu např. nádorů a metastáz pozitivních na receptor somatostatinu, zánětlivých nebo autoimunních poruch projevujícími se receptory somastostatinu, tuberkulózy nebo odhojení orgánů po transplantaci, když jsou v komplexu s nuklidem vysílajícím gama-zářen.í nebo pozitrony např. ¹¹¹In, ¹⁶¹Tb nebo ^eeY, nebo jako radiofarmaceutický prostředek pro léčbu in vivo nádorů a metastáz pozitivních na receptory somatostatinu, reumatoidní artritidy a závažných, zánětlivých stavů, když jsou v komplexu s nuklidem vysílajícím alfa- nebo beta- záření nebo s nuklidem s Augerovými e^--kaskádami, např. ⁹°Y, ⁶¹Tb, ^z11At, ²¹³Bi nebo ^2O1T1, jak prokázáno standardními testy.

Zejména je pozorováno, že chelatované sloučeniny podle vynálezu např. ¹¹¹In, ⁸⁸Y, ⁹⁰Y, ¹⁵³Sm, ¹⁸⁶Re nebo ¹⁶¹Tb chelatované sloučeniny podle vynálezu se váží s dobrou afinitou na receptory somatostatinu s hodnotami pKi asi od 8 do 10. Sloučenina .z příkladu 47 má hodnotu ICso 1,2 nM vzhledem k hSST-2, 0,65 nM vzhledem k hSST-3 a 0,30 nM vzhledem k hSST-5.

Afinita chelatovaných sloučenin podle vynálezu a jejich komplexů k receptorům somatostatinu může být také prokázána

	•			··	··
• *	•	« ·	• ·	« ·	b ♦
*	• ·	» ·'	«	« ·	*«
	···· ♦	• ·	*	♦»·	* «
•		• ·		•	• ·
····	•	·«		··	• ·

testováním in vivo standardními testovacími metodami, např. jak popsáno v GB-A-2,225.579. Například sloučenina z příkladu 47 dává významnou akumulaci v nádoru 4 hodiny po injekci do myší nebo krys s exokrinním pankreatickým nádorem, který má receptory SST-2.

Po aplikaci chelatované sloučeniny podle vynálezu ve formě komplexu, např. ¹¹¹In, ^eeY nebo ¹⁶¹Tb chelatované sloučeniny při dávkování od 1 do 5 Og/kg značené 0,1 až 5 mCi radioaktivním nuklidem, s výhodou 0,1 až 2 mCi, se místo nádoru stane detektovatelné spolu s orgány, kde hlavně dochází k exkrec i.

Chelatované sloučeniny podle vynálezu mají, když jsou radioaktivně značeny radioaktivním nuklidem vysílajícín alfanébo. beta-záření nebo, nuklidem s Augerovými-e^--kaskádami, mají proliferativní nebo/a cytotoxický účinek na nádorové buňky s receptory somatostatinu, např. jak prokázáno testy s holými myšmi;

Holé myši se ino.kuluj r . buňkami. . nádoru pankreatu .krysy AR42J nebo lidským malobuněčným karcinomem plic NCI-H69, jak uvedeno shora. Když nádory dosáhly objemu 1 až 2 cm³, zvířata se randomizují do kontrolních a léčebných skupin. Kontrolní zvířata dostávají buď neznačenou sloučeninu nebo chelatovanou sloučeninu ve formě komplexu cestou i.p. nebo i.v. injekcemi v dávkách odpovídajících nejvyšší dávce pro léčebné skupiny. Podávají se dávky až do 40mCi/kg na myš. Velikost nádorů se stanoví posuvným měřítkem, jak uvedeno shora. Pro statistické výpočty se použije Studentův t-test. Při tomto testu je pozorováno přechodné smrštění nádoru na 50 % původní velikosti po jednom týdnu a růst nádoru se oddálí o dva týdny po jediné .aplikaci sloučeniny.z příkladu 48. Naproti tomu v kontrolních skupinách docházelo ke kontinálnímu růstu nádoru, přičemž se jeho objem zdojnásobil asi během sedmi dnů.

Vynález tedy zahrnuje v řadě specifických nebo alternativních provedení dále:

«4	4	44 44		• 4.
• 4	*	* 4 4 4	4 4	4	4
4	♦ 4	• 4' 4	4 4
•	44 · ·	• · 4 4	4 »··	4	V
4		* * 4	4	•	4
····	4	44 4444	44		4 4

1. Použití chelatované sloučeniny podle vynálezu, např. chelatované sloučeniny obecného vzorce II ve formě komplexu pro detekci in vivo buněk pozitivních na receptory somatostatinu a tkání v subjektu a registraci lokalizace receptorů zaměřených uvedeným chelátem.

Sloučeniny značené radioaktivním izotopem podle vynálezu pro použití jako zobrazovací prostředek mohou být aplikovány intraperitoneálně, s výhodou intravenózně, např. ve formě injekčních roztoků nebo suspenzí, s výhodou v jediné injekci. Radioaktivní značení může být s výhodou provedeno krátce před aplikací subjektu.

Chelatovaná sloučenina podle vynálezu může být s výhodou podána v dávce 0,2 až 20 mCi stabilně vytvořeného komplexu nuklidu, s výhodou 1 až 10 mCi.

U zvířat může být indikovaná dávka v rozmezí 0,01 až 1 pg/kg chelatované sloučeniny podle vynálezu v komplexu s 0,02 až 0,5 mCi rad i oktivního nuklidu vysílajícího gama-záření. U větších savců, například lidí, může být indikovaná dávka v rozmezí od 1 do 20 pg chelatované sloučeniny v komplexu např. s 1 až 10 mCi ¹¹¹In nebo ^θβΥ

2. Použití chelatované sloučeniny podle vynálezu např. chelatované sloučeniny obecného vzorce II ve formě komplexu pro léčbu nádorů a metastáz pozitivních na receptory somatostatinu in vivo.

Dávkování použité při radioterapeutickém využití vynálezu bude samozřejmě záviset např. na příslušném stavu, který má být léčen, například na známé radiotoxicitě vůči normálním .orgánům exprim.ujícím SST-2 receptory, na objemu nádoru a požadované léčbě. Obecně se dávka vypočte na základě farmakokinetiky a rozdělení radioaktivity na zdravé orgány a na pozorovaném příjmu cíle. Komplex chelatované sloučeniny vysílající beta-záření může být aplikován opakovaně např. v průběhu 1 až 3 měsíců.

* ·	•	··		• v	v v
·. t	*	9	•	• ·	• *	«	•
•	♦ »	9	«1	*	♦ ·
•		* ·	*	» *	·* ·		•
v	•	•	*	•	•	•	«
			• ·				··!·

U zvířat může indikovaný rozsah dávkování být od 20 do 100 pg/Kg chelatované sloučeniny v komplexu s 15 až 70 mCi ^{9 0} Y nebo ¹⁶¹Tb.

V Chelatované sloučeniny podle vynálezu ve formě komplexu mohou být aplikovány libovolnou obvyklou cestou, zejména intraperitoneálně nebo intravenózně, napr. ve formě injekčních roztoků nebo suspenzí. Mohou být také s výhodou podávány infuzí, např. infuzí po dobu 30 až 60 minut.

V závislosti na místě nádoru mohou být aplikovány co možná nejblíže místa nádoru, např. pomocí katétru.

Chelatované sloučeniny podle vynálezu ve formě komplexu mohou být vhodné pro zobrazování nebo léčbu nádorů, jako jsou nádory hypofýzy, gastroenteropankreatické nádory, karcinoidní nádory, nádory centrální nervové soustavy, nádory prsu, prostaty, vaječníků nebo tlustého střeva, malobuněčný karcinom plic, paragangliomy, karcinom ledvin, karcinom kůže, neuroblastomy, feochromocytorny, medulární karcinomy štítné žlázy, myelomy, lymfomy, Hodgkinova choroba-a nehodgkinské lymfomy,. nádory kostí a jejich metastázy, jakož i revuiatoidní artritida .

Podle dalšího význaku vynálezu je předmětem vynálezu farmaceutický prostředek obsahující chelatovanou sloučeninu podle vynálezu ve volné formě nebo ve formě komplexu společně s jedním nebo více jejich farmaceuticky přijatelnými nosiči nebo ředidly. Tyto prostředky mohou být připraveny obvyklým způsobem a mohou být prezentovány, např. pro zobrazování, ve formě soupravy obsahující dvě oddělená dávkování, přičemž jedním je radioaktivní nuklid a druhé chelátový komplex, s instrukcemi pro jejich smíchání. Pro účely radioterapie mohou být chelatované sloučeniny podle vynálezu ve volné formě nebo ve formě komplexu prezentovány jako horký kapalný prostředek.

Claims

PATENTOVÉ

NÁROKY

1. Analog somatostatinu obsahující sekvenci aminokyselin obecného vzorce I

-(D/L)Trp-Lys-Xi -Xz- (I), kde Xi je zbytek obecného vzorce (a) nebo (b)

-NH-CH-COI CH-O-CH_a-R_tI

CH₃ (a) nebo

-NH-CH-CO-

I ch₂

I (b), kde Ri je popřípadě substituovaná fenylová skupina,

Rž je -Z1-CH2-R1, -CHz-CO-O-CH2-R1 ,

OVR, kde Zi znamená atom kyslíku nebo atom síry,

·· · ·· • · * • ·. · · • « • ♦ • · a ♦ ♦ · ·« • · · « · ·· · • ♦ • · • · · • • e *· ·»«· ·· •

X2 je alfa-aminokyselina obsahující na postranním řetězci na alfa-uhlíku aromatický zbytek nebo jednotka aminokyseliny zvolená ze skupiny zahrnující Dab, Dpr, Dpm, His, (Bzl)HyPro, thienyl-Ala, cyklohexyl-Ala J a terč.butyl-Ala, přičemž zbytek Lys uvedené sekvence odpovídá zbytku Lys⁹ naj tivního somatostatinu-14, ve volné formě nebo ve formě soli nebo komplexu.
2. Analog somastatinu podle nároku 1, . ve kterém zbytky v polohách 8 až 11 somatostatinu-14 představují sekvenci obecného vzorce I definovaného v nároku 1, ve volné formě nebo ve formě soli nebo komplexu.
3. Analog somatostatinu podle nároku 1 nebo 2, obsahují cí hexapeptidovou jednotku číslovanou ód 1 do 6, přičemž zbytky v polohách 3 až 6 uvedené hexapeptidové jednotky obsahují sekvenci obecného vzorce I definovanou v nároku 1, ve volné formě nebo-ve formě soli nebo komplexu.
4. Analog somatostatinu podle nároku 3, ve kterém je hexapeptidová jednotka cyklická s přímým spojením mezi alfa-karbonylovou skupinou zbytku v poloze 6 a alfa-aminoskupinou zbytku v poloze 1, ve volné formě nebo ve formě soli nebo komplexu.
5. Analog somatostatinu podle nároků 1 až 4, což je sloučenina obecného vzorce II

cyklofA - ZZ - (D/L)Trp - Lys - X · XI 3 12 (II), 1 2 3 4 5 6 kde Xi a X2 mají význam uvedený v nároku 1, A je dvojmocný zbytek zvolený ze skupiny zahrnující

Pro, «* · ·· ·· ·· ·· • 4 * 4 4, 4 4 · · ·4 • a ·' 4 a · ·♦· a ···· a · a a · «44 ·· « t · · ·a a » • «ti a t· 4444 44·· (Rj-NH-CO-O)Pro-, R_s-N-R₇-Pro-, HO-R₇-Pro-,

R₆ $ .

— COR_a-(CH₂)_ir ^N-^N

R₃₄R_3bN-(CHj) j_₍-CO-NH-Pro- , Rj.Rj^-ÍCHJ^-S-ProRj-NH-CO-O-R_b-CH(NRJ-CO-, R_U-CH(NR₄)-CO- a -NR₄₁-CH₂-COkde R3 je NReRg-C2-ealkylen , guanidino-C2-ealkylen nebo C2-6alkylen-C00H,

Ria je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo má nezávisle na sobě některý z významů uvedených pro R3 ,

R3b je atom vodíku nebo^: alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku,

Ra je hydroxylová skupina nebo NR5R6,

Rb je -(CH2 )1-3- nebo -CH(CH3)-,

R4 je atom· vodíku nebo methylová skupina,

R4a je popřípadě v kruhu substituovaná benzylová skupina, jak Rs, tak Re znamenají nezávisle na sobě atom vodíku,' alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, omega-aminoalkylenovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, omega-hydroxyalkylenovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo acylovou skupinu,

R7 je přímá vazba nebo alkylenová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, jak Rs, tak Rg znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až

·· 4 • 4 ♦ t • t • 4 • · 4 * 4 • « 9 · 9 • • * 4 • • • · * · • 44 »1 • » 4 » • 4 • • « « • • • • ···· 4 • · • a · · 1* 4 9

4 atomy uhlíku, omega-hydroxyalkyleno- vou skupinu obsahující 2 až 4 atomy uhlíku, acylovou skupinu nebo CH2OH-(CHOH)c-CH2, kde c představuje celé číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4, nebo Re a R9 tvoří dohromady s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, heterocyklickou skupinu, která může obsahovat další heteroatom, a

R1 1 je benzylová skupina, která je popřípadě substituovaná v kruhu, -(CH2)i- 3-OH, CH₃“CH(OH)~ nebo -(CH2)i-5-NRsRe a

ZZ_a je jednotka přírodní nebo uměle připravené alfa-aminokyseli ny, ve volné formě nebo ve formě soli nebo komplexu.
6. Analog somatostatinu podle nároku 5,ve kterém A obsahuje aminoskupinu s chelatační skupinou ve volné formě, ve formě soli nebo v komplexu s detektovatelným prvkem.
7. Způsob výroby analogu somatostatinu podle nároku 1, vyznačující se tím ,že

a) ·· se odstraní nejméně jedna chránící skupina, která je přítomna v somatostatinovém peptidu, obsahujícím zbytek, obecného vzorce I, přičemž somatostatinový peptid je v chráněné formě, nebo

b) se spojí vazbou dvě peptidové jednotky, z nichž každá obsahuje nejméně jednu aminokyselinu v chráněné nebo nechráněné formě, amidovou vazbou, přičemž amidová vazba je-taková, že se dosáhne požadovaná sekvence aminokyselin, a popřípadě se provede stupeň a) procesu nebo

c) se odstraní funkční skupina nechráněného nebo chráněného somatostatinového peptidu nebo se převede na jinou funkční skupinu tak, že se získá jiný nechráněný nebo chráněný peptid a v posledním.případě se provede stupeň a) procesu, nebo

9 9 • 9* • 9 9· 9 * 9 • * 9 9 ♦ • 9 9 • • • · 9 9 9 • · ·· • 9·9· 9 9 9 9 9 * 9« 9 • 9 i • 9 9 9 9 • · · 9 ♦ 9 9 ··· • 9 99

d) se pro přípravu chelatovaného analogu somatostatinu spojí chelatační činidlo a nechelatovaný analog somatostatinu v chráněné nebo nechráněné formě a začlení se volná aminoskupina tak, že se chelatační skupina fixuje na žádané aminoskupině analogu somatostatinu, a pak se popřípadě provede stupeň a) a takto získaný analog somatostatinu se izoluje ve volné for mě nebo popřípadě ve formě komplexu s detektovatelným prvkem.
8. Analog somatostatinu podle nároků 1 až 6 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl nebo komplex s detektovatelným prvkem pro použití jako farmaceutický prostředek.
9. Farmaceutický- prostředek, vyznačuj íc.í se tím , že obsahuje somatostatinový analog podle nároků 1 až 6 nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl nebo komplex s detektovatelným prvkem spolu s jedním nebo více jeho farmaceuticky přijatelnými nosiči nebo ředidly.
10. Způsob léčby poruch s etiologií zahrnující nebo spojenou s nadbytečnou sekrecí růstového hormonu, gastrointestinálních poruch, maligních onemocnění spojených s proliferací. buněk, angiogeneze nebo prevence nebo léčby chorob cévního štěpu, restenózy a cévní okluze po poranění cév, vyznačující se tím , že se uvedenému subjektu podá účinné množství 'analogu somatostastinu podle nároků 1 až 6 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli nebo komplexu s detektovatelným prvkem.