CZ297381B6

CZ297381B6 - Somatostatinové peptidy a farmaceutické prostredky s jejich obsahem

Info

Publication number: CZ297381B6
Application number: CZ0419697A
Authority: CZ
Inventors: Albert@Rainer; Bauer@Wilfried; Bruns@Christian; Chandramouli@Nagarajan; Lewis@Ian; Weckbecker@Gisbert
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 1995-06-29
Filing date: 1996-06-28
Publication date: 2006-11-15
Also published as: JP3445796B2; TR199701718T1; KR19990028480A; NZ313147A; NO976064D0; HU228984B1; EP0835263B1; AU6515096A; TW491854B; PL184947B1; US6225284B1; AU714447B2; WO1997001579A2; SK284087B6; NO976064L; JP2003104998A; SK177097A3; ATE210152T1; IL122243A; CZ419697A3

Abstract

Cyklické somatostatinové hexapeptidy obsahující hexapeptidovou jednotku císlovanou od 1 do 6, pricemz zbytky v polohách 3 az 6 uvedené hexapeptidové jednotky obsahují sekvenci aminokyselin obecného vzorce I, ve kterém mají X.sub.1.n. a X.sub.2.n. významy uvedené v patentových nárocích, ve volné forme nebo ve forme soli nebo komplexu a farmaceutické prostredky s jejich obsahem, které lze napr. pouzít k lécení poruch spojených s nadmernou sekrecí rustového hormonu.

Description

Vynález se týká somatostatinových peptidů, způsobu jejich přípravy a farmaceutických prostředků, které je obsahují.

Dosavadní stav techniky

Somatostatin je tetradekapeptid, který má strukturu:

H-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH

2 3 4 5 B 7 Β B 10 11 12 13 14

Pro izolaci a charakterizaci somatostatinu bylo pokračováno v usilovném hledání aktivnějších a stabilnějších analogů.

Dokumenty WO-A-9500553, WO-A-9400489, EP-A-0029310 a EP-A-03891890 popisují cyklické somatostatinové peptidy, které neobsahují sekvenci aminokyselin charakteristickou pro sloučeniny podle předkládaného vynálezu. Dokument EP-A-0395417 popisuje lineární oktapeptidy, které neobsahují sekvenci aminokyselin podle předkládaného vynálezu. Nyní byly nalezeny nové cyklické somatostatinové hexapeptidy se zajímavým vazebným profilem k somatostatinovým receptorům.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je zejména cyklický somatostatinový hexapeptid obsahující hexapeptidovou jednotku číslovanou od 1 do 6, přičemž zbytky v polohách 3 až 6 uvedené hexapeptidové jednotky obsahují sekvenci aminokyselin obecného vzorce I

-(D/L)Trp-Lys-X₁-X₂ (I), ve kterém

Xi znamená zbytek obecného vzorce (a) nebo (b)

-NH-CH-COI

CH-O-CH2-R1 (a)

I ch₃ nebo

-NH-CH-COI ch₂ (b),

I r₂

- 1 kde

Ri

R₂ znamená fenylovou skupinu popřípadě substituovanou atomem halogenu, methylovou skupinou, ethylovou skupinou, methoxyskupinou nebo ethoxyskupinou, znamená skupinu -Z1-CH2-R1, -CH₂-CO-O-CH₂-Ri,

«1 nebo

Z] znamená atom kyslíku nebo atom síry, a

X₂ znamená α-aminokyselinu obsahující po postranním řetězci na α-uhlíku aromatický zbytek nebo aminokyselinovou jednotku zvolenou ze skupiny zahrnující Dab, Dpr, Dpm, His, (benzyl)HyPro, thienyl-Ala, cyklohexyl-Ala a /erc-butyl-Ala, ve volné formě nebo ve formě soli nebo komplexu.

Tyto sloučeniny jsou zde nadále uváděny jako sloučeniny podle vynálezu.

Zde používaný výraz analog somatostatinu je míněn cyklický hexapeptid odvozený do somatostatinu-14 vyskytujícího se v přírodě, který obsahuje sekvenci obecného vzorce I a kde jedna nebo více jednotek aminokyselin byly dodatečně vypuštěny nebo/a nahrazeny jedním nebo více zbytky jiných aminokyselin nebo/a kde jedna nebo více funkčních skupin bylo nahrazeno jednou nebo více jinými funkčními skupinami nebo/a jedna nebo více skupin bylo nahrazeno jednou nebo několika izosterickýmí skupinami. Obecně zahrnuje tento výraz všechny modifikované deriváty nativního somatostatinu-14, obsahujícího shora uvedenou sekvenci obecného vzorce I, která má vazebnou afinitu v rozmezí nM nejméně k jednomu somatostatinovému receptoru shora definovaného subtypu.

Podle výhodného provedení je předmětem vynálezu výše uvedený cyklický somatostatinový hexapeptid, ve kterém zbytky v polohách 1 a 2 hexapeptidové jednotky mohou být kterékoliv známé v oboru, například jak popsáno A. S. Duttou ve Smáli Peptides, sv. 19, 292 až 354, Elsevier, 1993, nebo jako substituenty pro Phe⁶ nebo/a Phe⁷ somatostatinu-14.

Zejména je předmětem vynálezu výše uvedený cyklický somatostatinový hexapeptid, e kterém je cyklická hexapeptidová jednotka s přímou peptidovou vazbou mezi alfa-karbonylovou skupinou zbytku v poloze 6 a alfa-aminoskupinou zbytku v poloze 1.

Zatímco Lys, X) a X₂ v sekvenci obecného vzorce I mají konfiguraci L, Trp může mít konfiguraci D nebo L. S výhodou má Trp konfiguraci D.

Xi je s výhodou zbytek obecného vzorce (a) nebo (b), přičemž R₂ znamená s výhodou -Z₁-CH2-R] nebo

Když X₂ obsahuje aromatický zbytek na postranním řetězci na alfa-uhlíku, může to být účelně přírodní nebo uměle připravená alfa-aminokyselina, například Phe, Tyr, Trp, Nal, Pal, benzo

-2CZ 297381 B6 thienyl-Ala, Tic a thyronin, s výhodou Phe nebo Nal, výhodněji Phe. X₂ je s výhodou alfaaminokyselina obsahující na postranním řetězci na alfa-uhlíku aromatický zbytek.

Když znamená R| substituovanou fenylovou skupinu, může být účelně substituovaná atomem halogenu, methylovou skupinou, ethylovou skupinou, methoxyskupinou nebo ethoxyskupinou, např. v ortho- nebo/a para-poloze. Výhodněji je Rj nesubstituovaná fenylová skupina.

Z] znamená s výhodou atom kyslíku.

Představitelem sloučenin podle vynálezu je například sloučenina obecného vzorce II cyklo[A-ZZ_a-(D/DTrp-Lys-Xi-Xsl (II) ,

3 4 5 6 ve kterém

X] a X₂ mají význam uvedený výše,

A znamená dvojvazný zbytek zvolený ze skupiny zahrnující

Pro, (R₃-NH-CO-O) Pro-, R₅-N-R₇-Pro-, HO-R₇-Pro-, III I

Re coVCH₂)_irN-N

I , R_3aR_3bN-(CH₂)i-6-CO-NH-Pro-,

I

R_3aR_3bN- (CH,) :__s-S-Pro-, R₃-NH-CO-O-R_b-CH (NR₄) -CO-,

Ri;-CH(NR₄)-CO- a -NR_4a-CH₂-CO-, kde

R₃ znamená NR₈R₉-alkylovou skupinu obsahující 2 a 6 uhlíkových atomů v alkylenové skupině, guanidinoalkylenovou skupinu obsahující 2 až 6 uhlíkových atomů v alkylenové skupině nebo karboxyalkylenovou skupinu obsahující 2 až 6 uhlíkových atomů v alkylenové skupině,

R_3a znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy nebo má nezávisle na sobě jeden z významů uvedených pro R₃,

R_3b znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy,

R_a znamená hydroxylovou skupinu nebo skupinu NR^Rf,,

R_b znamená skupinu -(CH₂)i ₃- nebo -CH(CH₃)~,

R₄ znamená atom vodíku nebo methylovou skupinu,

R_4a znaená popřípadě v kruhu substituovanou benzylovou skupinu, každý ze symbolů R₅ a R₉ nezávisle jeden na druhém znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, ω-aminoalkylenovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, ω-hydroxyalkylenovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy nebo acylovou skupinu,

R₇ znamená přímou vazbu nebo alkylenovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, každý ze symbolů Rg a Rg nezávisle jeden na druhém znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, ω-hydroxyalkylenovou skupinu obsahující 2 až 4 uhlíkové atomy, acylovou skupinu nebo skupinu CH₂OH-(CHOH)_c-CH2-, kde c znamená 0, 1, 2, 3 nebo 4, nebo

Rg a Rg tvoří dohromady s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, heterocyklickou skupinu, která může obsahovat další heteroatom, a

Ri i je benzylová skupina, která je popřípadě substituovaná v kruhu, -(CH₂)i _₃OH, CH₃-CH(OH)- nebo -CCH₂)₁_₅-NR₅R₆ a

ZZ_a je jednotka přírodní nebo uměle připravené alfa-aminokyseliny.

ZZ_a může mít D- nebo L-konfiguraci. Když ZZ_a je jednotka přírodní nebo uměle připravené alfa-amino-kyseliny, může to být například Thr, Ser, Ala, Val, Ile, Leu, Nle, His, Arg, Lys, Nal, Pal, Tyr, Trp, popřípadě v kruhu substituovaný Phe nebo N“-benzyl-Gly. Když ZZ_a je Phe, jeho benzylový kruh může být substituován například aminoskupinou, nitroskupinou, methylovou skupinou, methoxyskupinou nebo atomem halogenu, s výhodou v para-poloze. Když ZZ_a je Phe, jeho benzylový kruh je s výhodou nesubstituovaný.

Když A obsahuje zbytek aminokyseliny Pro, kterýkoliv substituent přítomný na prolinovém kruhu, např. R₃-NH-CO-O-atd., je s výhodou v poloze 4. Takový zbytek substituovaného prolinu může být v cis-formě, např.

jakož i v trans-formě. Přítomný vynález zahrnuje všechny geometrické izomery jednotlivě jakož i jejich směsi.

Když A je (NRgRg-C^alkylen-NH-CO-OjPro-, kde NRgRg tvoří heterocyklickou skupinu, tato skupina může být aromatická nebo nasycená a může obsahovat jeden atom dusíku nebo jeden atom dusíku a druhý heteroatom zvolený z atomu dusíku a atomu kyslíku. S výhodou je heterocyklická skupina například pyridylová skupina nebo morfolinová skupina. Alkylenová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku v tomto zbytku je s výhodou CH₂-CH₂.

Kterákoliv acylová skupina je R₅, R<„ Rg a R₉ v A může být například Ri₂CO-, kde R₁₂ je atom vodíku, alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku nebo benzylová skupina,

-4CZ 297381 B6 s výhodou methylová skupina nebo ethylová skupina. Když R4_a nebo Rn v A je benzylová skupina substituovaná v kruhu, může být benzenový kruh substituovaný, jak naznačeno shora pro ZZ_a.

Výhodnou skupinou sloučenin podle vynálezu jsou například sloučeniny obecného vzorce II, kde A je bez postranní skupiny -NH-CO-O-. Další skupinou výhodných sloučenin podle vynálezu jsou například sloučeniny obecného vzorce II, kde A obsahuje základní postranní zbytek, například skupinu R3-NH-CO-O nebo R5-N-R7-.

Ré

Ještě další skupinu výhodných sloučenin podle vynálezu tvoří skupina sloučenin, kde N-koncová aminokyselina obsahuje substituovaný Pro, zejména 4-substituovaný Pro, např. sloučeniny obecného vzorce II, kde A je 4-substituovaný Pro.

A je s výhodou 4-(R₃-NH-CO-O)Pro.

Dalšími reprezentanty sloučenin podle vynálezu jsou takové sloučeniny, které obsahují aminoskupinu nesoucí chelatační skupinu, zejména sloučenina obecného vzorce II, kde A obsahuje aminoskupinu v postranním řetězci, která nese chelatační skupinu ve volné formě, ve formě soli nebo v komplexu s detekovatelným prvkem. Tyto sloučeniny jsou zde uváděny jako chelatované sloučeniny podle vynálezu.

Vhodné chelatační skupiny jsou fyziologicky přijatelné chelatační skupiny schopné vytvořit komplex s detekovatelným prvkem. Chelatační skupina má s výhodou značně hydrofílní charakter. Jako příklady chelatačních skupin je možno uvést například ty, které jsou odvozeny od polyaminopolykarboxylových skupin nebo anhydridů, například ty, které jsou odvozeny od necyklických ligandů, například ethylendiamintetraoctové kyseliny (EDTA), diethylentriaminpentaoctové kyseliny (DTPA), ethylenglykol-O,O'-bis(2-aminoethyl)-N,N,N',N'-tetraoctové kyseliny (EGTA), N,N'-bis(hydroxybenzyl)ethylendiamin-N,N'-dioctové kyseliny (HBED) a triethylentetraminhexaoctové kyseliny (TTHA), ty, které jsou odvozeny od substituované EDTA nebo DTPA, například p-izothiokyanátobenzyl-EDTA nebo -DTPA, ty, které jsou odvozeny od makrocyklických ligandů, například l,4,7,10-tetraazacyklododekan-N,N',N,N'-tetraoctové kyseliny (DOTA) a 1,4,8,1 l-tetraazacyklotetradekan-N,N',N,N'-tetraoctové kyseliny (TETA) nebo l,4,7,10-tetraazacyklotridekan-N,N',N,N'-tetraoctové kyseliny (TITRA).

Chelatační skupina může být připojena k aminoskupině sloučenina podle vynálezu buď přímo nebo přes spacer. Vhodné spacery jsou ty, které jsou známé z literatury, například, jaké jsou popsány v GB-A-2,225.579, například dvoumocné zbytky aminokarboxylové kyseliny, například beta-Ala nebo dvoumocný zbytek odvozený od 6-aminokapronové kyseliny.

Výhodné chelatační skupiny jsou ty, které jsou odvozeny od DTPA, DOTA, TETA nebo substituované EDTA nebo DTPA. Chelatační skupiny odvozené od DTPA nebo DOTA jsou nejvýhodnější.

Pod pojmem detekovatelný prvek je míněn libovolný prvek, s výhodou ion kovu, který se vyznačuje schopností být detekován při terapeutických metodách nebo při diagnostických metodách in vivo, například ion kovu, který vysílá detekovatelné záření, nebo ion kovu, který je schopen ovlivňovat relaxační vlastnosti jaderné magnetické rezonance.

K vhodným detekovatelným iontům kovů patří například těžké prvky nebo ionty vzácných zemin, například jaké se používají při snímání počítačovou axiální tomografií (CAT), paramagnetické ionty, např. Gd³⁺, Fe³⁺, Mn²⁺ a Cr²⁺, fluorescentní ionty kovů, např. Eu³⁺, a radioaktivní nuklidy, např. radioaktivní lanthanid, zejména radioaktivní nuklidy vysílající gama-záře

-5CZ 297381 B6 ní, radioaktivní nuklidy vysílající beta-záření, radioaktivní nuklidy vysílající alfa-záření, radioaktivní nuklidy vysílající Augerovy elektrony, radioaktivní nuklidy vysílající pozitrony, např.

⁶⁸Ga.

K vhodným radioaktivním nuklidům vysílajícím gama-záření patří ty, které jsou použitelné v diagnostických metodách. Radioaktivní nuklidy vysílající gama-záření mají s výhodou poločas od 1 hodiny do 40 dní, s výhodou od 5 hodin do 4 dnů, výhodněji od 12 hodin do 3 dnů. Jako příklady je možno uvést radioaktivní nuklidy odvozené do gallia, india, technecia, ytterbia, rhenia, terbia, thallia a samaria, např. ⁶⁷Ga, ^luIn, ^99mTc, ¹⁶¹Tb, ¹⁶⁹Yb a ¹⁸⁶Re.

K vhodným radioaktivním nuklidům vysílajícím beta-záření patří ty, které jsou použitelné při terapeutických aplikacích, například ⁹⁰Y, ⁶⁷Cu, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁶⁹Er, ¹²¹Sn, ¹²⁷Te, ¹⁴³Pr, ¹⁹⁸Au, ^,09Pd, ¹⁶⁵Dy, ³²P, ¹⁴²Pr a ¹⁵⁶Sm.

Vhodné radioaktivní nuklidy vysílající alfa-záření jsou ty, které se používají k léčení, např. ²¹¹At, ²¹²Bi nebo ^2O1T1.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být např. ve volné formě nebo ve formě solí. Soli zahrnují adiční soli s kyselinami, např. s organickými kyselinami, polymemími kyselinami nebo s anorganickými kyselinami, např. hydrochloridy a acetáty a formy solí, které je možno získat se skupinami karboxylových kyselin, když jsou přítomné např. v chelatační skupině, např. soli alkalických kovů jako sodíku nebo draslíku, nebo substituované nebo nesubstituované amoniové soli.

Vynález se také týká způsobů přípravy sloučenin podle vynález. Mohou být připraveny analogy ke známým metodám.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být připraveny například následně:

a) odstraněním nejméně jedné chránící skupiny, která je přítomna v somatostatinovém peptidů, obsahujícím zbytek obecného vzorce I, přičemž somatostatinový peptid je v chráněné formě, nebo

b) spojením dvou peptidových jednotek, z nichž každá obsahuje nejméně jednu aminokyselinu v chráněné nebo nechráněné formě, amidovou vazbou, přičemž amidová vazba je taková, že se dosáhne požadovaná sekvence aminokyselin, a popřípadě se provede stupeň a) procesu, nebo

c) odstranění funkční skupiny nechráněného nebo chráněného somatostatinového peptidů nebo jeho převedením na jinou funkční skupinu tak, že se získá jiný nechráněný nebo chráněný peptid a v posledním případě se provede stupeň a) procesu, nebo

d) pro přípravu chelatované sloučeniny podle vynálezu spojením chelatačního činidla a nechelatované sloučeniny podle vynálezu v chráněné nebo nechráněné formě a začleněním volné aminokyseliny tak, že se chelatační skupina fixuje na žádanou aminoskupinu sloučeniny podle vynálezu, a popřípadě následujícím provedením stupně a) a izolací takto získaných sloučenin podle vynálezu ve volné formě nebo popřípadě ve formě komplexu s detekovatelným prvkem.

Stupeň b) procesu vede k přípravě lineárního peptidů, ale zahrnuje také cyklizaci lineárního peptidu amidovou vazbou na cyklický peptid s žádoucí sekvencí aminokyselin. Postranní řetězec přítomný v A může být popřípadě zaveden na aminokyselinu před kondenzací peptidů podle stupně b) nebo na finální lineární nebo cyklický peptid podle stupně c). V posledním případě může tedy být sloučenina obecného vzorce II, kde A je hydroxy-Pro, převedena na sloučeninu obecného vzorce II, kde A je R₃-NH-CO-O-Pro.

-6CZ 297381 B6

Cyklizace může účelně být též provedena přes hydrazin. Když se připraví lineární peptid na pryskyřici, není obvykle rozhodující, která aminokyselina se zvolí, aby byla v C-koncové poloze s výhradou pouze, že sekvence aminokyselin v lineárním peptidů odpovídá sekvenci v požadovaném analogu somatostatinu. Jakmile byl lineární peptid cyklizován, není již možno určit, která aminokyselina byla na C-konci lineárního peptidů. Zatímco obvykle volba první aminokyseliny, která má zahájit řetězec, není rozhodující, protože lineární peptid bude cyklizován, mohou existovat jiné faktory, které mohou zvýhodňovat jednu počáteční aminokyselinu před druhou. Lineární peptid se s výhodou cyklizuje tak, aby se vytvořila vazba od Trp v poloze 3 k ZZ_a v poloze 2 nebo od X₂ v poloze 6 k X] v poloze 5.

Tvorba komplexu sloučeniny podle vynálezu obsahující aminoskupinu substituovanou chelatační skupinou může být provedena reakcí chelatované sloučeniny s odpovídajícím detekovatelným prvkem, čímž se získá sloučenina, např. sůl kovu, s výhodou ve vodě rozpustná sůl. Reakce může být provedena analogicky se známými metodami, např. popsanými v Perrin, Organic Ligand, Chemical Data Series 22. NY Pergamon Press (1982), v Krejcarit a Tucker, Biophys. Biochem. Res. Com. 77, 581 (1977) a ve Wagner a Welch, J. Nucl. Med. 20, 428 (1979).

Pokud příprava výchozích materiálů není zvláště popsána, sloučeniny jsou známé nebo mohou být připraveny analogicky s metodami známými z literatury a používanými.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady ilustrují vynález. Všechny uvedené teploty jsou ve °C.

Jsou použity následující zkratky:

Bzl	= benzyl (Bzl) = -CH₂-fenyl připojený ke kyslíku nebo k síře podle (a) nebo (b),
DMF	= dimethylformamid,
BOC	= terc-butyloxykarbonyl,
Fmoc	= 9-fluorenylmethoxykarbonyl,
TFA	= trifluoroctová kyselina,
DIPCI	= diizopropylkarbodiimid,
DCII	= dicyklohexylkarbodiimid,
HOBt	= hydroxybenzotriazol,
Dab	= 2,4-diaminomáselná kyselina,
Dpr	= 2,3-diaminopropanová kyselina,
Dpm	= 2,6-diaminoheptandiová kyselina,
Dde	= 4,4-dimethyl-2,6-dioxocyklo-l-hexylidenethyl,
RT	= pokojová teplota,
HyPro	= 4-hydroxy-pro (trans, není-li jinak uvedeno),
Tic	= tetrahydroizochinolinkarboxylová kyselina,
FAB	= bombardování rychlými atomy,
E.S.	= ionizace elektrostatickým rozprašováním,
Tris	= amino-tris(hydroxymethyl)methan,
HEPES	= N-2-hydroxyethylpiperazin-2-ethansulfonová kyselina,
GH	= růstový hormon,
BSA	= N,O-bis(trimethylsilyl)acetamid,
Nal	= beta-(2-nafiyl)alanin,
Pal	= beta-(3-pyridyl)alanin.

Příklad 1

Cyklo(HyPro-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe)

Pryskyřice Fmoc-Phe-SASRINR (1,00 g, 0,65 mmol) se vede procesy syntézy Fmoc v pevné fázi, až se vytvoří požadovaná peptidová pryskyřice SASRINR Fmoc-(D)Trp-Lys(Bos)Tyr(Bzl)-Phe-Pro(y-t-OH)-Phe. Použitím piperidinu se sejme z Fmoc chránící skupina. Použitím hydrazinolýzy se provede rozštěpením peptidové pryskyřice. K 1,00 g peptidové pryskyřice se přidá 8,3 ml DMF a 1,24 ml hydrazinhydrátu (přibližně 15 % hydrazinhydrátu v DMF). Směs se míchá 15 hodin při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se pryskyřice odfiltruje a promyje dobře s DMF. Filtrát se odebere a odpaří ve vysokém vakuu, čímž se získá olejovitý hydrazidový produkt jako zbytek. Zbytek se rozpustí ve vodě a lyofílizuje se, čímž se získá 480 mg lineárního hydrazidového produktu H-(D)Trp-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)-Phe-HyPro-Phe-NH-NH2. Tento hydrazid se rozpustí v 16 ml DMF, ochladí se na -20 °C a působí se na něj 4N HC1 v etheru (2,4 ml, 11,6 mmol) a poté terc.butylnitritem (41,3 μΐ, 0,348 mmol). Reakce probíhá za míchání po dobu 20 minut. Přidá se diizopropylethylamin (11,6 mmol, 2 ml) a reakce pokračuje za míchání po dobu 72 hodin při teplotě místnosti. Po ukončení reakce se odstraní DMF ve vysokém vakuu. K olej ovitému zbytku se přidá voda, což vede k vysrážení. Provede se extrakce mezi ethylacetátem a vodou. Organické fáze se vysuší nad síranem sodným a produkt se izoluje. Sejmutí chránící skupiny se provede použitím směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 95 : 5 a produkt se izoluje za použití vysokoúčinné kapalinové chromatografie s obrácenými fázemi. Provede se iontová výměna frakcí obsahujících produkt a lyofilizace poskytne produkt uvedený v nadpisu ve formě bílého prášku, MH (FAB) 975, F = 1,24 (alfa)^D ₂₂ = -39,0° (95 % AcOH, c = 0,1).

Příklad 2

Cyklo((4-(NH₂-C₂H4-NH-CO-O-)Pro)-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe)

Do roztoku trifosgenu (0,6 ekvivalentu) v tetrahydrofuranu se přidá po kapkách Fmoc-HyProOMe. Po jedné hodině se přidá dimethylaminopyridin (1,0 ekvivalentu) a N-Boc-Diaminoethan (6,0ekvivalentů) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti. Po chromatografií na tenké vrstvě se rozpouštědlo odstraní ve vakuu a Fmoc-4-(N-BOC-aminoethylaminokarbonyloxy)-ProOMe se extrahuje z dvojfázového systému ethylacetát/0,1 M HC1, čímž se získá surový produkt (MH⁺ = 554). Shora izolovaný surový methylester se pak rozštěpí na volnou kyselinu působením IN NaOH ve směsi dioxanu s vodou a produkt Fmoc-4-(aminoethylaminokarbonyloxy)-ProOH se vyčistí na silikagelu, (MNa)⁺ = 562.

Pryskyřice Fmoc-Phe-SASRIN^R (1,00 g, 0,65 mmol) se vede procesy syntéze Fmoc v pevné fázi, až se vytvoří požadovaná peptidová pryskyřice SASRIN^r Fmoc-(D)Trp(BOC)-Lys(Boc)Ty(Brz)-Phe-Pro(y-t-N-Boc-diaminoethanokarbamoyl)Phe. Z Fmoc se sejme chránící skupina použitím piperidinu. Rozštěpení peptidové pryskyřice se provede působením 2% TFA v CH₂C1₂ na peptidovou pryskyřici ve skleněné koloně. Neutralizace se provede 1M roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a chráněný lineární peptid se lyofilizuje (MH⁺ = 1379,8). Chráněný lineární peptid se cyklizuje působením DCCI (6,0 ekvivalentů) a HOBt (6,0 ekvivalentů) po dobu 5 dní.

Sejmutí chránící skupiny se pak provede pomocí směsi TFA a vody v poměru 95 : 5 a cyklický peptid se vyčistí preparativní vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií a provede se výměna iontů na formu acetátové soli iontoměničovou pryskyřicí AG4-X4, čímž se získá v nadpisu uvedená sloučenina (Fab-MH⁺ = 1061,7).

-8CZ 297381 B6

Příklad 3

Cyklo((4-(morfolinoeethylaminokarbonyloxy)Pro)-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe)

Syntéza hydroxyprolinové extenze je následující: Fmoc-HyPro-OMe se přidá po kapkách do roztoku trisfosgenu (0,6 ekvivalentu) v tetrahydrofuranu. Po 1 hodině se přidá dimethylaminopyridin (1,0 ekvivalent) a N-ethylaminomorfolin (6,0 ekvivalentů) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti. Po chromatografii na tenké vrstvě se rozpouštědlo odstraní ve vakuu a Fmoc-4-(morfolinoethylaminokarbonyloxy)Pro-OH se vyčistí na silikagelu, (MH⁺ 510).

Fmoc-Phe-SASRIN se vede procesy syntézy Fmoc v pevné fázi analogickým způsobem jako v předcházejícím příkladu, až se vytvoří pryskyřice SASRIN Fmoc-(D)Trp-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)Phe (morfolinoethylaminokarbamát)HyPro-Phe. Sejme se chránící skupina z Fmoc použitím piperidinu. Rozštěpení peptidové pryskyřice se provede působením 2% TFA v CH₂C1₂ na peptidovou pryskyřici ve skleněné koloně. Neutralizace se provede 1M roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a chráněný lineární peptid se lyofilizuje. Chráněný lineární peptid se cyklizuje působení DCCI (6,0 ekvivalentů) a HOBt (6,0 ekvivalentů) po dobu 5 dnů. Sejmutí chránící skupiny se pak provede směsí TFA a vody v poměru 95 : 5 a cyklický peptid se vyčistí preparativní vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií a provede se iontová výměna na formu acetátové soli pomocí ionexové pryskyřice AG4-X4, čímž se získá v nadpisu uvedená sloučenina.

MH⁺(FAB): 1131.

(alfa)^D ₂₂ = -55,0° (95 % AcOH, c = 0,1).

Opakováním shora popsaných postupů ale použitím odpovídajících výchozích materiálů mohou být získány sloučeniny obecného vzorce cyklo(X-Y-DTrp-Lys-Z-Phe), kde X, Y a Z mají význam definovaný v níže uvedené tabulce 1.

-9CZ 297381 B6

Tabulka 1

Příkl. X

Z Fyzikálně chemické údaje mít

4	4-HyPro IT-Bzl-Gly	Tyr (Bzl)	E.S.	975,7
5	Pro	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	959
6	4- (NHj-CjHi-NH-CO-O-) Pro	His	Tyr(Bzl)	E.S.	1051,5
7	id.	Tyr	Tyr(Bzl)	FAB	1077
8	id.	Arg	Tyr(Bzl)	E.S.	1070,4
9	4- (NH₂-C₃H₆-NH-CO-O-) Pro	His	Tyr(Bzl)	E.S.	1065,4
10	id.	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	1075
11	id.	Tyr	Tyr(Bzl)	E.S.	1091,7
12	4- (NHj-CjHj-NH-CO-O-) Pro	Phe	Ser(pClBzl) E.S.	1019,6
13	id.	Ala	Thr(Bzl)	E.S.	924,2
14	id.	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	1047
15	id.	Trp	Tyr(Bzl)	FAB	1100
16	id.	Phe	Thr(Bzl)	E.S.	999,6
17	id.	Phe	Glu(Bzl)	E.S.	1027,7
18	4-(N(CH₃]₂-CjH₄~NH-C0-0-)Pro	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	1089
19	4-(NH-C₂H₄-NH-C0-O-)Pro COCH₃	Phe	Tyr(BZl)	E.S.	1103,6
20	NH₂-C₂H₄-CO-O-NCH₂Ser	Tyr	Tyr(Bzl)	E.S.	1065,6
21	MeSer	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	963	1)
22	4-(pyridyl-C₂H₄-NH-CO-O)Pro	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	1123	2)
23	4-(NH₂-C_sH₁₀-NH-CO-O~) Pro	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	1118	3)
24	4-HyPro	His	Tyr(Bzl)	E.S.	965,7
25	id.	Tyr	Glu(Bzl)	FAB	941
26	id.	Phe	Thr(Bzl)	FAB	913
27	4-NH₂-Pro	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	974	4)

- 10CZ 297381 B6

Tabulka 1 (pokračování)

Příkl. X	Y	Z	Fyzikálně chemické údaje MH*
28	N*-Me-Lys	Phe	Tyr(Bzl)	FAB	967
29	4- (NH₂-C-NH-C₂H₄-NH-CO-O) Pro 1 NH	Tyr	Tyr(Bzl)	E.S.	1118,7
30	4- (NH₂-C₂H₄-NH-CO-O-) Pro	Tyr	Thr(Bzl)	E.S.	1015,5
31	4- (NH₂-C₂H₄-NH-CO-O) Pro	Phe	Ser(Bzl)	E.S.	985,1
32	4-(NH₂-CjH₄-NH-CO-O) Pro (cis)	Phe	Ser(Bzl)	E.S.	985,1
33	4- (NH₂-C₂H₄-NH-CO-O) Pro	Ser	Thr(Bzl)	E.S.	939,0
34	4- (NH₂-C₂H₄-NH-CO-O) Pro	Thr	Thr(Bzl)	E.S.	953,1
35	4-NH₂-Pro-	Phe	Ser(Bzl)	E.S.	898,0
36	4- [N (CHj) j-C₂H₄-NH-CO-O] Pro	Phe	Ser(Bzl)	E.S.	1013,2
37	4- (NH₂-C₂H₄-NH-CO-O) Pro	Tyr	Ser(Bzl)
38	4-NHj-Pro (cis)	Phe	Ser(Bzl)	E.S.	898
39	4- (NH₂-C₂H₄-NH-CO-O) Pro	Ile	Thr(Bzl)
40	4- (NH₂-C₂H₄-NH-CO-O) Pro	Phe	Cys(Bzl)
	1) (a)°_2a = -47,0°	(95 % AcOH; c = Oj	1)
	2) [al°₂₂ = -54,0°	(95 % AcOH; c = 0,	1)
	3) (a]^D ₂₂ = -54,0⁶	(95 % AcOH; c = 0,	1)
	4) [a]^D ₂₂ = -99°	(95 % AcOH; c = 0,	1)
	id. = totéž

* Peptid z příkladu 29 může být připraven následovně:

Chráněný peptid cyklo((NH₂-C(=NH)-NH-C₂H4-NH-CO-O))-Pr(t-Tyr-DTrp-Lys(Dde}Tyr(Bzl)-Phe se připraví na pryskyřici za použití postupu syntézy Fmoc v pevné fázi popsaného v příkladu 2. Místo N^£-Boc-Lys se použije N^£-Dde-Lys, aby se přednostně zavedla guanidinová funkce na základní postranní řetězec zbytku HyPro. Po sestavení peptidů se odstraní koncová skupina Fmoc a peptid se cyklizuje a nakonec se z něj sejme chránící skupina jako v příkladu 2. Tento peptid se rozpustí v DMF a přidá se diizopropylamin (3 ekvivalenty) a HOBt (4 ekvivalenty), načež se přidá 3,5-dimethylpyrazolylformamidiniumnitrát (4 ekvivalenty) a roztok se míchá 72 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se odpaří ve vakuu a pak se na ni nechá působit bezvodým hydrazinem (2% v DMF) po dobu 30 minut, aby se odstranila skupina Dde na Lys. Surový peptid z příkladu 29 se pak vyčistí pomocí vysokoůčinné kapalinové chromatografie v systému acetonitrilu a vodného triethylamoniumfosfátu.

Příklad 41

Cyklo(4-(NH₂-C₂H₄-NH-CO-O-)Pro-Ala-DTrp-Lys-Tyr(3-Bzl)-Phe)

MH⁺(E.S.): 984,5.

-11 CZ 297381 B6

Příklad 42

Cyklo((4-NH₂-C₂H₄-NH-CO-O-)Pro)-(p-NH₂)-Phe-DTrp-Lys-Tyr-(3-Bzl)-Phe) MH⁺ (E.S.): 1076,6.

Příklad 43

Cyklo(4-HyPro-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-betaNal)

MH⁺(E.S): 1025,5.

Příklad 44

Cyklo(4-HyPro-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Tyr)

MH⁺(E.S.): 991,6.

Příklad 45

Cyklo(MePhe-His-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Dab)

MH⁺(FAB): 1005.

Příklad 46

a) Cyklo(4-(NH₂-C₂H₄-NH-CO-O)pro-Phe-DTrp-Lys(s-Boc)-Tyro-(Bzl)-Phe) mg cyklo(4-NH₂-C₂H₄-NH-CO-O)Pro-Phe-DTrp-Lys-Tyr-(Bzl)-Phe), 12 mg hydrogenuhličitanu sodného a 12 mg (BOC)₂O se rozpustí v 10 ml směsi DMF a vody v poměru 7:3a reakční roztok se udržuje přes noc při teplotě místnosti za současného míchání. Po odpaření rozpouštědla se produkt uvedený v nadpisu izoluje chromatografií na silikagelu za použití směsi methylenchloridu, methanolu a 50% kyseliny octové v poměru 8:2: 0,25 jako mobilní fáze.

b) Cyklo(4-(DTPA-NH-C₂H₄-N H-CO-O)Pr^Phe-DTrifaLys(s-Boc)Tyr(Bzl )-Phe)

120 mg DTPA-hydrazidu se rozpustí v 5 ml DMF a přikapáním směsi diethyletheru a 3N HC1 se pH upraví na hodnotu 3. Po ochlazení na -15° se přidají 4 μΐ terc.butylnitritu a roz- 12CZ 297381 B6 tok 15 mg sloučeniny získané shora ad a) v 3 ml DMF obsahujících 15 μΐ Hůnigovy báze.

Po 4 hodinách se rozpouštědlo odstraní odpařením a zbývající odparek se zbaví chránící skupiny bez dalšího čištění.

c) Cyklo(4(DTPA-NH-C₂H₄-NH-CO-O-)Pro-Phe-DTrp-Lys-Tyr(Bzl)-Phe)

Na surový produkt ze stupně b) se působí 10 minut při 0 °C 5 ml směsi TFA a vody v poměru 95 : 5. Po zředění 50 ml vody se roztok přímo převede na vysokoúčinnou kapalinovou chromatografíckou kolonu RP18 a eluuje se gradientem voda/acetonitril/TFA_0;i%. Čisté frakce se spojí a lyofílizují se. FAB-MS: 1436,6.

Příklad 47 ¹¹¹ In značená sloučenina z příkladu 46c) mg sloučeniny z příkladu 46c) se rozpustí v 5 ml 0,01 M octové kyseliny. Výsledný roztok se vede přes 0,22 μ filtr Millex^R-GV (zapsaná ochranná známka) a rozdělí se na 0,1 ml podíly a uskladní při -20 °C. ^1HlnCl₃ (Amersham, 1 mCi/100 μΐ) se předem zředí ve stejném objemu 0,5 M octanu sodného a značení se provede smíšením ligandu s roztokem lnCl₃ a mírnou homogenizací při teplotě místnosti.

Pak se přidá Pufr HEPES, pH 7,4, aby se roztok stal 10’⁶ M.

Příklad 48

Cyklo-(4-(DOTA-NH-C₂H₄-NH-CO-O)Pro-Phe-DTrp-Lys-Ser(Bzl)-Phe)

M.S. 1371,57.

Tato sloučenina se označuje s ⁹⁰Y následovně: 20 μΐ ⁹⁰Y (1,2 mCi, 0,04 M HC1) na 20 μΐ 50 μΜ shora uvedené sloučeniny (0,15 M NH₄=Ac, 0,3% BSA, pH 4,5). Tento roztok se inkubuje 15 minut při 100 °C. Odstraní se alikvotní podíl a zředí se 4mM DTPA (pH 4,5), dříve než se analyzuje vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi Cl8, aby se zjistilo množství volného nechalatovaného ⁹⁰Y v reakční směsi (jak se prokáže přítomnost (⁹⁰YDTPA)²-.

Příklad 49

116 mg sloučeniny z příkladu 46a, 12 mg NaCNBH₃ a 2 ekvivalenty příslušného aldehydu se rozpustí v 25 ml směsi DMF a HOACio_/o a udržuje se při 60 °C tak dlouho, až není možno prokázat chromatografíi na tenké vrstvě žádný výchozí materiál. Po odstranění rozpouštědla se zbytek vyčistí chromatografíi na silikagelu s použitím směsi methylenchloridu, methanolu a HOAc₅o% v poměru 9:1: 0,125 až 8 : 2 : 0,25, aby se oddělil monoalkylovaný a dvojnásobně alkylovaný konečný produkt.

- 13 CZ 297381 B6

i) Aldehyd: (D)-glukóza

X] = HOCH₂-(CHOH)4-CH₂- X₂ = H

E.S. - MH⁺= 1225,4 ii) Aldehyd: (D)-glukóza

Xi = X₂ = hoch₂-cchoh)₄-ch₂E.S.-MH⁺ = 1389,6 iii) Aldehyd: 2,3-O-izopropyliden-(D)-glyceraldehyd

X! = HOCH₂-CHOH-CH₂- X₂ = H iv) Aldehyd: 2,3-O-izopropyliden-(D)-glyceraldehyd

Xj = X₂ = HOCH₂-CHOH-CH₂E.S.-MH⁺ = 1209,4

v) Aldehyd: hydroxyacetaldehyd

X, = X₂ = HOCH₂-CH₂E.S.-MH⁺ = 1149,4

Sloučeniny podle vynálezu ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelných solí a komplexů mají cenné farmaceutické vlastnosti, jak ukazují testy in vitro a in vivo a jsou proto indikovány pro terapeutické účely.

Zejména se sloučeniny podle vynálezu váží nejméně na jeden podtyp receptoru somatostatinu. 5 podtypů receptorů somatostatinu, a to SST-1, SST-2, SST-3, SST-4 a SST-5 bylo klonováno a charakterizováno.

hSST-1, hSST-2 a hSST-3 a jejich sekvence byly popsány Y. Yamadou a spol. v Proč. Nati. Acad. Sci., 89, 251 až 255 (1992). hSST-4 a jeho sekvence byly popsány L. Rohrerem a spol. v Proč. Acad. Sci., 90, 4196 až 4200 (1993). hSST-5 a jeho sekvence byly popsány R. Panettou a spol. v Mol Pharmacol. 45, 417 až 427, 1993.

Testy na vázání mohou být provedeny jak popsáno níže za použití membrán připravených ze selektivních buněčných linií hSST-1, hSST-2, hSST-3, hSST-4 nebo hSST-5, např. CHO buněk stabilně exprimujících hSST-1, hSST-2, hSST-3, hSST-4 nebo hSST-5.

Použije se mozková tkáň nebo tkáň zhypofýzy, ve které jsou hSST zviditelněny např. in šitu hybridizaci nebo/a receptorovou autoradiografií. Membrány se připraví známými metodami, např. jak popsáno JC. Reubim a spol. v J. Clin. Endocrinol. Metab. 1987, 65, 1127 až 1137. Membrány připravené z hSST selektivních buněčných linií, např. CHO buněk stabilně exprimujících hSST-1 nebo hSST-2 nebo hSST-3 nebo hSST-A nebo hSST-5 jsou inkubovány trojnásobně v celkovém objemu 300 μΐ při 22 °C po dobu 30 minut se zvyšujícími se koncentracemi (^l25I-Tyr³)-oktreotidu v 10 mmol/1 pufru HEPES (pH 7,6) obsahujícím 0,5 % BSA. Inkubace se ukončí rychlou filtrací přes filtry ze skleněných vláken Whatman GF/B, které se pak promyjí každý čtyřikrát 5 ml ledově studenými 10 mmol/1 Tris/150 mmol/1 NaCl. Filtry se změří v počítači LKB při 78% měřicí účinnosti. Specifická vazba je celková vazba minus nespecifická vazba za přítomnosti 1 μιηοΙ/l somastatinu-14. Pokusy se provádějí trojnásobně. Afinitní konstanta (K_D) a počet vazebních míst se vypočte ze Scatcherdových grafických znázornění hodnot.

Sloučeniny podle vynálezu, např. jak uvedeno shora, mají ve shora uvedených testech na vázání na hSST-1, hSST-2, hSST-3, hSST-4 nebo/a hSST-5 IC₅o v Molámím rozmezí, s výhodou IC₅o od 0,1 do 10 nM (IC₅₀ = koncentrace pro polomaximální inhibici v kompetičním testu na vázání za použití (¹²⁵I-Tyr³)-oktreotidu, stejného radioaktivního ligandu, jak uvedeno shora).

-14CZ 297381 B6

		ic₅₀	(nM)
Sloučenina	. hSSTR-1	hSSTR-2	hSSTR-3	hSSTR-4	hSSTR-5
Příkl. 1	63,00	0,94	1,90	320,00	0,35
Příkl. 2	4,60	2,30	0,93	490,00	0,46
Příkl. 14	7,40	1,20	0,86	> 100	0,13
Příkl, 31	0,50	0,80	3,90	3,60	2,90
Příkl. 32	3,80	0,13	57,00	7,90	2,00
Příkl. 36	0,60	1,30	2,40	2,20	4,50

Sloučeniny podle vynálezu se vyznačují dále inhibiční aktivitou vůči sekreci růstového hormonu (GH), jak je prokázáno inhibicí sekrece GH in vitro z kultivovaných buněk hypofýzy. Hypofyzy z dospělých krysích samců se rozřeží na malé kousky a dispergují se za použití 0,1 % trypsinu v 20 mM pufru HEPES. Dispergované buňky se kultivují čtyři dny v MEM (Gibco) doplněném o 5 % fetálního telecího séra, 5 % koňského séra, 1 mM hydrogenuhličitanu sodného, 2,5 nM dexamethasonu, 2,5 mg/ml inzulínu a 20 U/ml Pen/Strep. V den pokusu se připojené buňky promyjí dvakrát Krebs-Ringerovým médiem pufrovaným 20 mM HEPES a doplněným 5 mM glukózy a 0,2 % BSA. Poté se buňky inkubují dvě až čtyři hodiny s testovanou sloučeninou za přítomnosti 3xl0'¹⁰ M faktoru uvolňujícího růstový hormon. Množství růstového hormonu uvolněného do média se změří pomocí RIA. Sloučeniny podle vynálezu inkubují sekreci GH v závislosti na koncentraci od 10 ¹¹ do 10‘⁶ M. sloučenina z příkladu 2 má IC₅₀ 0,4 nM.

Sloučeniny podle vynálezu také inhibují sekreci inzulínu nebo/a glukagonu, jak prokázáno ve standardních testech s použitím krysích samců. Testovaná látka se aplikuje v různých, logaritmicky odstupňovaných dávkách použitím nejméně 5 krys na dávku. 1 hodinu po s.c. aplikaci testované látky se odebere krev. Stanovení hladin inzulínu a glukagonu v krevním séru se provede radioimunologicky. Sloučeniny podle vynálezu jsou v tomto testu účinné při dávkování v rozmezí od 0,02 do 1000, např. do 10 pg/kg s.c.. Sloučenina z příkladu 9 má EC₅₀ 1,8 pg/kg s.c. vzhledem k sekreci inzulínu.

Sloučeniny podle vynálezu jsou tedy užitečné pro léčbu poruch s etiologií zahrnující nebo spojenou s nadměrnou sekrecí růstového hormonu, např. při léčbě akromegálie jakož i při léčbě cukrovky, zejména jejích komplikací, např. angiopatie, proliferativní retinopatie, fenoménu úsvitu (dawn fenomenonu) a nefropatie a jiných metabolických poruch souvisejících se sekrecí inzulínu nebo glukagonu.

Sloučeniny podle vynálezu inhibují také vylučování žaludeční kyseliny, exokrinní a endokrinní sekreci pankreatu a sekreci různých peptidů gastrointestinálního traktu, jak prokázáno v standardních testech použitím např. krys se žaludeční nebo pankreatickou pištěli, přičemž jsou tyto sloučeniny účinné při dávce od 0,01 do 10 mg/kg.

Sloučeniny podle vynálezu jsou dále tedy užitečné pro léčbu gastrointestinálních poruch, například při léčbě dvanáctemíkových vředů, enterokutánní a pankreatikokutánní píštěle, syndromu a onemocnění dráždivého tračníku, dumpingového syndromu, syndromu vodnatého průjmu, průjmu v souvislosti s AIDS, chemoterapií vyvolaného průjmu, akutní nebo chronické pankreatitidy,

- 15CZ 297381 B6 nádorů secemující gastrointestinální hormony (např. vipomu, glukagonomu, inzulinomu, karcinoidních nádorů a podobně), jakož i gastrointestinálního krvácení.

Sloučeniny podle vynálezu jsou také účinné při léčbě nádorů, které jsou pozitivní na receptor somatostatinu, zejména nádorů obsahujících hSST-1, hSST-2, hSST-3, hSST-4 nebo/a hSST-5, jak prokázáno proliferativními testy s různými rakovinovými buněčnými liniemi obsahujícími takové somatostatinové receptory.

Nádorové buněčné linie AR42J z krysího pankreatu jsou odvozeny od azeserinem vyvolaného exokrinního pankreatického nádoru (Jessop a Hay, 1980). Nepřítomnost mykoplazmy se pravidelně kontroluje použitím barvení bisbenzimidem a hydridizačním testem GenProbe (San Diego, Ca). Kultury se rozmnožují v médiu DMEM (Dulbeccos Modified Eagles Medium) doplněném 10% fetálního telecího séra (FCS) při 5 % CO₂. Buňky se kultivují v nepřítomnosti antibiotik nebo antifungálních prostředků. Buňky AR42J téměř v souvislé vrstvě se trypsinizují, zředí v DMEM + 2,5 % fetálního telecího séra a naočkují se do nepovlečených destiček s 96 jamkami. Po 48 hodinové inkubační době (den 0) se stanoví počet buněk v oddělené kontrolní destičce jak spočítáním buněk v Coulterově počítači, tak kolorimetrickou zkouškou SRB. Buňky se pak vystaví působení testované sloučeniny po dobu 2 až 5 dnů při různých koncentracích a pak se spočítají. Za těchto podmínek sloučeniny podle vynálezu inhibují proliferaci nádorových buněk při koncentraci od 10”¹² do ΙΟ’⁶ M. Sloučeniny z příkladu 2 má 1C_5O 0,7 ± 0,3 (standardní chyba) nM.

Studie růstu nádoru in vivo

Holé samice myší (nu/nu Balbc-A z IFFA Credo, Lyon, Francie), vážící 19 až 22 g, se chovají ve skupinách po 5 zvířatech v makrolonových klecích (typu III, 16x22x11 cm). Klece se umístí do provzdušňovaných skříní (Iffa Credo), které se udržují při 24 ± 1 °C. Zvířata mají volný přístup kvodě na pitá a potravě pro hlodavce prosté patogenů (Diet A, Kliba, Bazilej, Švýcarsko). K vyvolání nádorů z kultivovaných buněk se buňky AR42J trypsinizují a 5 až 10x10⁶ nádorových buněk v 0,2 ml se aplikuje subkutánní injekcí (s.c.) do obou boků holých myší. Léčba začíná 2 až 4 dny po inokulaci nádorových buněk, přičemž testovaná sloučenina se s výhodou aplikuje ve formě kontinuální infuze, např. rychlostí 10 až 50 pg/kg/h. Velikost nádorů se zjistí posuvným měřítkem. Pro vypočtení objemu nádoru se použije rovnice „objem (elipsoid) = délka x hloubka x výška x 0,52“. Pro statistické výpočty se použije Studentům t-test. Při tomto pokusu inhibuje sloučenina z příkladu 2 růst nádoru 11. den o 51 % oproti kontrole s fyziologickým roztokem.

Sloučeniny podle vynálezu jsou tedy vhodné pro léčbu maligních onemocnění s proliferaci buněk, např. rakovinových nádorů, zejména nádorů obsahujících typy receptorů somatostatinu, na které jsou zaměřeny sloučeniny podle vynálezu, např. jak popsáno níže pro chelatované sloučeniny.

Sloučeniny podle vynálezu mají také inhibiční účinek na angiogenezi, jak prokázáno v standardních testech, např. u holých myší, jak níže popsáno.

Myši jsou anestezovány i.p. pomocí 400 mg/kg chloralhydrátu (Sigma). Nádorové buňky (0,1 až 10 x 10⁶ v 0,1 ml) (buňky SiHa a buňky MDAMB-231 připravené, jak popsáno v Angiogenesis, vyd. R. Steinerem. P.B. Weiszem a R. Langerem, 1992, Švýcarsko) se inokulují intrakutánně. Obvykle se aplikují injekce na dvě místa v břišní stěně/myš, která jsou vzdálená od hlavních břišních kožních cév tak, aby počet cév v okolí byl nízký. Kontrolní skupiny obdrží 0,1 ml 0,02% tryptanové modři v PBS. 10 dní po injekci se anestezované myši usmrtí inhalací oxidu uhličitého. Kůže se napne na plastický prstenec (40 mm v průměru) pro vyhodnocení invertovaným mikroskopem (Zeiss IM) při 12,5- a 25-násobném zvětšení. Jako měřítko angiogeneze se vyfotografují cévy a spočítají se ty, které jsou přímo spojené s nádorem. U kontrolních zvířat se spočítají ty cévy, které jsou připojené k určené ploše kolem místa injekce. Tato plocha odpovídá střední ploše kožních nádorů. Tato se stanoví použitím posuvného měřítka podle rovnice 3,14 x r². Tes

- 16CZ 297381 B6 tované sloučeniny se aplikují s.c. buď v den inokulace nádoru nebo po 3 dnech. Kontrolním zvířatům se aplikuje nosič. V tomto pokusu inhibují sloučeniny podle vynálezu tvorbu cév, když jsou aplikovány v dávce např. 0,01 až 1000 μ/kg s.c.

Sloučeniny podle vynálezu jsou dále tedy použitelné pro prevenci nebo léčbu angiogeneze, zánětlivých poruch a retinopatie.

Sloučeniny podle vynálezu mají také inhibiční účinek na proliferaci a migraci buněk hladkého svalstva, jak prokázáno v následujících testech.

Chronické odhojování allotransplantátů

Sloučeniny podle vynálezu inhibují chronické odhojování allotransplantátů krysí ledviny. Ledvina samce krysy DA (RTl^a) se transplantuje orthotopicky do samce Lewis (RT1¹), který je příjemcem. Celkem je transplantováno 24 zvířat. Všechna zvířata jsou léčena cyklosporinem A v dávce 7,5 mg/kg/den per os 14 dní počínaje dnem po transplantaci, aby se zabránilo akutnímu celulámímu odhojení. Kontralaterální nefrektomie se neprovede. Každá pokusná skupina léčená určitou dávkou sloučeniny podle vynálezu nebo placebem zahrnuje šest zvířat.

Počínaje 53. až 64. dnem po transplantaci se příjemci léčí dalších 69 až 72 dní infuzí sloučeniny podle vynálezu nebo dostávají placebo. 14. den po transplantaci se změří perfuze orgánu pomocí MRI. To se zopakuje 53 až 64. den po transplantaci a na konci pokusu. Zvířata jsou pak pitvána. Aplikace sloučeniny podle vynálezu, např. sloučeniny z příkladu 31, v dávce 1 až 10 pg/kg/h v tomto modelu allotransplantátů krysí ledviny zajistí zlepšenou perfuzi orgánu. Také byl zaznamenán prudký pokles hladin IGF-1.

Angioplastika

Studie týkající se angioplastiky se provádějí na modelu poškození balónkovým katétrem: Katetrizace pomocí balónkového katétru se provádí v den 0, zejména, jak popsáno Powellem a spol. (1989). Při anestezii Isofluoranem se zavede katétr Fogarty 2F do levé společné karotidy cestou zevní karotidy a nafoukne se (roztažení = 10 μΐ H₂O). Nafouknutý balónek se povytáhne třikrát v rozsahu délky společně karotidy, poslední dvě povytažení za mírného kroucení katétrem, aby se dosáhlo stejnoměrné endothelializace. Katétr se pak odstraní, zevní karotida se podváže, aby se zamezilo krvácení, a zvířata se nechají nabýt vědomí.

Pro studii se použijí 2 skupiny po 12 krysách RoRo (400 g, přibližně 24 týdny staré): jedna kontrolní skupina a jedna skupina, která dostává sloučeninu podle vynálezu. Krysy jsou zcela randomizované během celého pokusu a analýzy.

Testovaná sloučenina se podává kontinuální infuzí za použití infuzních pumpiček rychlostí 10 až 50 pg/kg/h počínaje 3 dny před poškozením zavedeným balónkem (den -3) až do konce stude, 14 dní po poškození zavedených balónkem (den +14). Krysy se udržují v jednotlivých klecích a ponechá se jim potrava a voda podle libosti.

Krysy se pak anestetizují Isofluoranem, levou srdeční komorou se zavede perfuzní katétr, který se zajistí v aortálním oblouku, a do pravé srdeční komory se zavede aspirační kanyla. Zvířata se perfundují pod perfuzním tlakem 20 kPa, nejdříve po dobu 1 minuty 0,1 M fosfátem pufrovaným fyziologickým roztokem (PBS, pH 7,4) a pak 15 minut 2,5% glutaraldehydem ve fosfátovém pufru (pH 7,4). Karotidy se pak excidují, oddělí se od okolní tkáně a ponoří do 0,1 M kakodylátového pufru (pH 7,4) obsahujícího 7 % sacharózy a inkubují se přes noc při 4 °C. Následující den se karotidy ponoří za současného třepání na 1 hodinu při teplotě místnosti od 0,05% manganistanu draselného v 0,1 M kokadylátu. Tkáně se pak dehydratují v odstraňovaných ethanolových sériích: 2x10 minut v 75%, 2x10 minut v 85%, 3x10 minut v 95% a 3 x 10 minut v 100% ethanolu. Dehydratované karotidy se pak uloží do Technovitu 7100 podle doporučení výrobce.

- 17CZ 297381 B6

Médium ve kterém jsou karotidy uloženy, se nechá přes noc polymerovat v exsikátoru pod argonem.

Ze střední části každé karotidy se tvrdým kovovým nožem na otočném mikrotomu odříznou části 4 pm tlusté a barví se 2 minuty Giemsovým barvivém. Připraví se tak asi 5 částí z každé karotidy a vyhodnotí se morfometricky průřezová plocha média, neointimy a lumina pomocí systému obrazové analýzy (MCID, Toronto, Kanada).

Při tomto pokusu inhibují sloučeniny podle vynálezu myointimální proliferaci, když jsou aplikovány kontinuální infuzí při denní dávce od 0,2 do 10 mg/kg, s výhodou 0,05 až 5 mg/kg.

Sloučeniny podle vynálezu jsou také užitečné pro prevenci nebo léčbu vaskulámích změn v transplantátech, např. vaskulopatií allo- nebo xenotranplantátů, např. aterosklerózy cévního štěpu, např. v transplatnovaném srdci, plících, při kombinaci srdce-plíce, v játrech, ledvině nebo pankreatu, nebo pro provedení nebo léčbu restenózy nebo/a cévní okluze po poranění cévy, např. po angioplastice.

Pro všechny shora uvedené indikace bude samozřejmě zapotřebí různé dávkování v závislosti například na použité sloučenině podle vynálezu, na hostiteli, způsobu aplikace a závažnosti stavu, který má být léčen. Obvykle se však dosahují vyhovující výsledky po aplikaci řádově 1 pg až 0,5 mg/kg/den sloučeniny. Indikovaná denní dávka pro pacienty je v rozmezí asi od 2 pg asi do 20 mg, s výhodou asi 0,01 až asi 20 mg, např. asi 10 až asi 500 pg s.c. sloučeniny účelně podané v rozdělených dávkách až 3x za den ve formě jednotkového dávkování obsahujícího například asi od 0,5 pg asi do 10 mg, např. asi od 2 pg do 10 mg, sloučeniny nebo ve formě s protrahovaným uvolňováním.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být podávány ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné soli nebo komplexů. Tyto soli nebo komplexy mohou být připraveny obvyklým způsobem a vyznačují se řádově stejnou účinností jako volné sloučeniny. Předmětem vynálezu je také farmaceutický prostředek obsahující sloučeninu podle vynálezu, např. sloučeninu obecného vzorce II ve formě volné báze nebo ve formě farmaceuticky přijatelné soli nebo ve formě komplexu ve spojení s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem. Tyto prostředky mohou být zpracovány obvyklým způsobem. Sloučeniny podle vynálezu nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl nebo komplex mohou být podávány libovolnou obvyklou cestou, například parenterálně, např. ve formě roztoků nebo suspenzí pro injekce nebo ve formě nazální nebo čípku.

V souladu se shora uvedeným je předmětem vynálezu též:

a) sloučenina podle vynálezu např. sloučenina obecného vzorce II nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex pro použití jako farmaceutický prostředek,

b) způsob prevence nebo léčby shora uvedených poruch u subjektu, který potřebuje takovou léčbu, který spočívá v podávání účinného množství sloučeniny podle vynálezu, např. sloučeniny obecního vzorce II nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího komplexu tohoto subjektu, nebo

c) sloučenina podle vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo její komplex pro použití při přípravě farmaceutického prostředku pro použití v kterékoliv metodě definované pod b shora.

Chelatované sloučeniny podle vynálezu nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli jsou užitečné buď jako zobrazovací prostředek, např. zviditelnění tkání a buněk pozitivních na receptor somatostatinu, např. nádorů a metastáz pozitivních na receptor somatostatinu, zánětlivých nebo autoimunních poruch projevujícími se receptory somatostatinu, tuberkulózy nebo odhojení orgánů po transplantaci, když jsou v komplexu s nuklidem vysílajícím gama-záření nebo pozitrony např.

-18CZ 297381 B6 ^H1In, ¹⁶¹Tb nebo ⁸⁶Y, nebo jeho radiofarmaceutický prostředek pro léčbu in vivo nádorů a metastáz pozitivních na receptory somatostatinu, revmatoidní artritidy a závažných zánětlivých stavů, když jsou v komplexu s nuklidem vysílajícím alfa- nebo beta-záření nebo s nuklidem s Augerovými e -kaskádami, např. ⁹⁰Y, ⁶¹Tb, ²¹¹At, ^2l3Bi nebo ^2O1T1, jak prokázáno standardními testy.

Zejména je pozorováno, že chelatované sloučeniny podle vynálezu, např. ¹¹'in, ⁸⁸Y, ⁹⁰Y, ’⁵⁶Sm, ^l86Re nebo ¹⁶¹Tb chelatované sloučeniny podle vynálezu se váží s dobrou afinitou na receptory somatostatinu s hodnotami pKi asi od 8 do 10. Sloučenina z příkladu 47 má hodnotu IC50 1,2 nM vzhledem k hSST-2, 0,65 nM vzhledem k hSST-3 a 0,30 nM vzhledem k hSST-5.

Afinita chelatovaných sloučenin podle vynálezu a jejich komplexů k receptorům somatostatinu může být také prokázána testováním in vivo standardními testovacími metodami, např. jak popsáno v GB-A-2 225 579. Například sloučenina z příkladu 47 dává významnou akumulaci v nádoru 4 hodiny po injekci do myší nebo krys s exokrinním pankreatickým nádorem, který má receptory SST-2.

Po aplikaci chelatované sloučeniny podle vynálezu ve formě komplexu, např. ^1HIn, ⁸⁶Y nebo ^l61Tb chelatované sloučeniny při dávkování od 1 do 5 pg/kg značené 0,1 až 5 mCi radioaktivním nuklidem, s výhodou 0,1 až 2 mCi, se místo nádoru stane detekovatelné spolu s orgány, kde hlavně dochází k exkreci.

Chelatované sloučeniny podle vynálezu mají, když jsou radioaktivně značeny radioaktivním nuklidem vysílajícím alfa- nebo beta-záření nebo nuklidem s Augerovými-e -kaskádami, proliferativní nebo/a cytotoxický účinek na nádorové buňky s receptory somatostatinu, např. jak prokázáno testy s holými myšmi.

Holé myši se inokulují buňkami nádoru pankreatu krysy AR42J nebo lidským malobuněčným karcinomem plic NCI-H69, jak uvedeno shora. Když nádory dosáhly objemu 1 až 2 cm³, zvířata se randomizují do kontrolních a léčebných skupin. Kontrolní zvířata dostávají buď neznačenou sloučeninu nebo chelatovanou sloučeninu ve formě komplexu cestou i.p. nebo i.v. injekcemi v dávkách odpovídajících nejvyšší dávce pro léčebné skupiny. Podávají se dávky až do 40mCi/kg na myš. Velikost nádorů se stanoví posuvným měřítkem, jak uvedeno shora. Pro statistické výpočty se použijí Studentův t-test. Při tomto testuje pozorováno přechodné smrštění nádoru na 50 % původní velikosti po jednom týdnu a růst nádoru se oddálí o dva týdny po jediné aplikaci sloučeniny z příkladu 48. Naproti tomu v kontrolních skupinách docházelo ke kontinuálnímu růstu nádoru, přičemž se jeho objem zdvojnásobil asi během sedmi dnů.

Vynález tedy zahrnuje v řadě specifických nebo alternativních provedení dále:

1. Použití chelatované sloučeniny podle vynálezu, např. chelatované sloučeniny obecného vzorce II ve formě komplexu pro detekci in vivo buněk pozitivních na receptory somatostatinu a tkání v subjektu a registraci lokalizace receptorů zaměřených uvedeným chelátem.

Sloučeniny značené radioaktivním izotopem podle vynálezu pro použití jako zobrazovací prostředek mohou být aplikovány intraperitoneálně, s výhodou intravenózně, např. ve formě injekčních roztoků nebo suspenzí, s výhodou v jediné injekci. Radioaktivní značení může být s výhodou provedeno krátce před aplikací subjektu.

Chelatovaná sloučenina podle vynálezu může být s výhodou podána v dávce 0,2 až 20 mCi stabilně vytvořeného komplexu nuklidu, s výhodou 1 až 10 mCi.

U zvířat může být indikována dávka v rozmezí 0,01 až 1 pg/kg chelatované sloučeniny podle vynálezu v komplexu s 0,02 až 0,5 mCi radioaktivního nuklidu vysílajícího gamazáření. U větších savců, například lidí, může být indikována dávka v rozmezí od 1 do 20 pg chelatované sloučeniny v komplexu např. s 1 až 10 mCi ⁱⁿIn nebo ⁸⁶Y.

-19CZ 297381 B6

2. Použití chelatované sloučeniny podle vynálezu, např. chelatované sloučeniny obecného vzorce II ve formě komplexu pro léčbu nádorů a metastáz pozitivních na receptory somatstatinu in vivo.

Dávkování použité při radioaterapeutickém využitím vynálezu bude samozřejmě záviset např. na příslušném stavu, který má být léčen, například na známé radiotoxicitě vůči normálním orgánům exprimujícím SST-2 receptory, na objemu nádoru a požadované léčbě. Obecně se dávka vypočte na základě farmakokinetiky a rozdělení radioaktivity na zdravé orgány a na pozorovaném příjmu cíle. Komplex chelatované sloučeniny vysílající beta-záření může být aplikován opakovaně např. v průběhu 1 až 3 měsíců.

U zvířat může indikovaný rozsah dávkování být od 20 do 100 pg/kg chelatované sloučeniny v komplexu s 15 až 70 mCi ⁹⁰Y nebo ^l61Tb.

Chelatované sloučeniny podle vynálezu ve formě komplexu mohou být aplikovány libovolnou obvyklou cestou, zejména intraperitoneálně nebo intravenózně, např. ve formě injekčních roztoků nebo suspenzí. Mohou být také s výhodou podávány infuzí, např. infuzí po dobu 30 až 60 minut. V závislosti na místě nádoru mohou být aplikovány co možná nejblíže místa nádoru, např. pomocí katétru.

Chelatované sloučeniny podle vynálezu ve formě komplexu mohou být vhodné pro zobrazování nebo léčbu nádorů jako jsou nádory hypofýzy, gastroenteropankreatické nádory, karcinoidní nádory, nádory centrální nervové soustavy, nádory prsu, prostaty, vaječníků nebo tlustého střeva, malobuněčný karcinom plic, paragangliomy, karcinom ledvin, karcinom kůže, neuroblastomy, feochromocytomy, medulámí karcinomy štítné žlázy, myelomy, lymfomy, Hodgkinova choroba a nehodgkinské lymfomy, nádory kostí a jejich metastázy, jakož i revmatoidní artritida.

Podle dalšího význaku vynálezu je předmětem vynálezu farmaceutický prostředek obsahující chelatovanou sloučeninu podle vynálezu ve volné formě nebo ve formě komplexu společně s jedním nebo více jejich farmaceuticky přijatelnými nosiči nebo ředidly. Tyto prostředky mohou být připraveny obvyklým způsobem a mohou být prezentovány, např. pro zobrazování, ve formě soupravy obsahující dvě oddělená dávkování, přičemž jedním je radioaktivní nuklid a druhé chelátový komplex, s instrukcemi pro jejich smíchání. Pro účely radioterapie mohou být chelatované sloučeniny podle vynálezu ve volné formě nebo ve formě komplexu prezentovány jako horký kapalný prostředek.

Claims

1. Cyklický somatostatinový hexapeptid obsahující hexapeptidovou jednotku číslovanou od

1 do 6, přičemž zbytky v polohách 3 až 6 uvedené hexapeptidové jednotky obsahují sekvenci aminokyselin obecného vzorce I

-CD/L)Trp-Lys-X,-X₂ (I), ve kterém

Xi znamená zbytek obecného vzorce (a) nebo (b)

-NH-CH-COI

CH-O-CH2-R1 (a)

I ch₃

-20CZ 297381 B6 nebo

-NH-CH-COCH₂

R₂ kde

Ri znamená fenylovou skupinu popřípadě substituovanou atomem halogenu, methylovou skupinou, ethylovou skupinou, methoxyskupinou nebo ethoxyskupinou,

R₂ znamená skupinu -Zi-CH₂-R], -CH₂-CO-O-CH₂-R_b nebo

Zi znamená atom kyslíku nebo atom síry, a

X₂ znamená a-aminokyselinu obsahující na postranním řetězci na α-uhlíku aromatický zbytek nebo aminokyselinovou jednotku zvolenou ze skupiny zahrnující Dab, Dpr, Dpm, His, (benzyl)HyPro, thienyl-Ala, cyklohexyl-Ala a /erc-butyl-Ala, ve volné formě nebo ve formě soli nebo komplexu.

2. Somatostatinový hexapeptid podle nároku 1, ve kterém je cyklická hexapeptidová jednotka s přímou peptidovou vazbou mezi α-karbonylovou skupinou zbytku v poloze 6 a a-aminoskupinou zbytku v poloze 1, ve volné formě nebo ve formě soli nebo komplexu.

3. Somatostatinový hexapeptid podle nároku 1 nebo 2, kterým je sloučenina obecného vzorce II cyklo [A-ZZ_a- (D/L) Trp-Lys-Xi-X₂]

1 2 3 4 5 6 ve kterém

Xi a X₂ mají význam uvedený v nároku 1,

A znamená dvojvazný zbytek zvolený ze skupiny zahrnující

-21 CZ 297381 B6

Pro, (R₃-NH-CO-O)Pro-, R₅-N-R₇-Pro-, HO-R₇-Pro-, III I

Re

O~^C°VCH₂U-N-N ¹ , R_3aR_3bN-(CH₂> i-e-CO-NH-Pro-,

I

R_3aR_3bN- (CH₂) χ-6-S-Pro-, R₃-NH-CO-O-R_b-CH (NR₄) -CO-,

R1_L-CH(NR₄)“CO- a -NR_4a-CH₂-CO-, kde

R₃b znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy,

R_a znamená hydroxylovou skupinu nebo skupinu NR₅R₆,

R_b znamená skupinu -(CH₂)i_₃- nebo -CH(CH₃)-,

R4 znamená atom vodíku nebo methylovou skupinu,

Ria znamená popřípadě v kruhu substituovanou benzylovou skupinu, každý ze symbolů R₅ a R₆ nezávisle jeden na druhém znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, ω-aminoalkylenovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, ω-hydroxyalkylenovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy nebo acylovou skupinu,

R₇ znamená přímou vazbu nebo alkylenovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, každý ze symbolů R_g a R_s nezávisle jeden na druhém znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, ω-hydroxyalkylenovou skupinu obsahující 2 až 4 uhlíkové atomy, acylovou skupinu nebo skupinu CH₂OH-(CHOH)_c-CH₂-, kde c znamená 0, 1,2,3 nebo 4, nebo

Rs a R₉ tvoří dohromady s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, heterocyklickou skupinu, která může obsahovat další heteroatom, a

Ri 1 znamená popřípadě v kruhu substituovanou benzylovou skupinu, skupinu -(CH₂)i_₃OH, CH₃-CH(OH)- nebo -(CH₂)_{I 5}-NR₅R₆, a

ZZ_a znamená přirozenou či nepřirozenou α-aminokyselinovou jednotku,

-22CZ 297381 B6 ve volné formě nebo ve formě soli nebo komplexu.

4. Cyklický somatostatinový hexapeptid, který je sloučenina obecného vzorce cyklo[4-(NH2-C2H4-NH-CO-O-)Pro-Y-DTrp-Lys-Tyr(benzyl)-Phe], ve kterém symbol Y znamená přirozenou či nepřirozenou a-aminokyselinovou jednotku.

5. Cyklický somatostatinový hexapeptid, kterým je cyklo[{4-CNH₂-C2H4-NH-CO-0)Pro}-Phe-DTrp-Lys-Tyr(0-benzyl)-Phe], cyklo[{4-(NH₂-C₂H4-NH-CO-O)Pro}-Tyr-DTrp-Lys-Tyr(O-benzyl)-Phe], nebo cyklo[{4-CNH₂-C₂H4-NH-CO-0)Pro}-Phe-DTrp-Lys-Ser(0-benzyl)-Phe].

6. Somatostatinový hexapeptid podle libovolného z nároků 3 až 5 obsahující laterální aminoskupinu v poloze 1 nesoucí chelatační skupinu, ve volné formě, ve formě soli nebo v komplexu s detekovaným prvkem.

7. Somatostatinový analog podle libovolného z nároků 1 až 6 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl nebo komplex s detekovatelným prvkem pro použití jako farmaceutický prostředek.

8. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje somatostatinový analog podle libovolného z nároků 1 až 6 nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl nebo komplex s detekovatelným prvkem, společně s jedním nebo více jeho farmaceuticky přijatelnými nosiči nebo ředidly.

9. Použití cyklického somatostatinového hexapeptidu podle libovolného z nároků 1 až 6 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli k přípravě farmaceutické kompozice k léčení poruch s etiologií zahrnující nebo spojenou s nadměrnou sekrecí růstového hormonu, gastrointestinálních poruch, maligních onemocnění spojených s proliferací buněk, angiogeneze nebo k prevenci či léčení cévních transplantačních onemocnění, restenózy a cévní okluze po cévním poranění.

10. Použití cyklického somatostatinového hexapeptidu podle nároku 6 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, v komplexu s detekovatelným prvkem k přípravě farmaceutické kompozice k in vivo detekci buněk a tkání pozitivních na somatostatinový receptor nebo k léčení nádorů a metastáz pozitivních na somatostatinový receptor.