CZ307994A3 - Novel biologically active derivatives of eburnamenin, pharmaceutical compositions containing thereof and process of their preparation - Google Patents

Description

Nové biologicky přípravky^, yer je

Oblast techniky aktivní obsahují

Předkládaný vynález se týká nových derivátů eburnameninu obecného vzorce I biologicky aktivních

kde .

R.¹ a. R^z podobně jako R³ a R⁴ jsou nezávisle na sobě vodík,, alkylová skupina Cz-6, aikenylové skupina C2-6; nebo alicyklická skupina C3-10 s jedním až třemi kruhy, která je případně ještě substituována alkylovou skupinou ^:C2-e nebo alkenylovou skupinou Cz-β; nebo p

R¹ a R^z a/nebo R³ , a R⁴ spolu se sousedním dusíkovým atomem a případně 5 dalším, kyslíkovým nebo dusíkovým atomem vytvářejí čtyř- až šestičlenný nasycený nebo nenasycený kruh, případně substituovaný .alkylovou skupinou Ci-β nebo alkenylovou skupinou Cí-b; £ .

dva ze symbolů X, Y a Z znamenají dusík, zatímco třetí je methinová skupina;

n je 1 nebo 2;

W znamená kyslík nebo dva atomy vodíku; a vlnovková čárka představuje sterické polohy α-/α-, α-/β-, β-/α-;

pod uvedenou strukturu spadají rovněž adiční soli těchto látek kyselinami, solváty a farmaceutické přípravky obsahující látky uvedené struktury. Dále se vynález týká způsobu přípravy výše uvedených sloučenin a způsobu inhibice peroxidace tuků u savců. .

Dosavadní stav techniky

V následujících vzorcích bude eburnamenin-14-ylová skupina nadále označována symbolem EBU; každý odkaz na význam vlnovkových čárek se tedy . vztahuje k těmto čárkám přítomným v části vzorce EBU..

Sloučeniny obecného vzorce I 'předkládaného vynálezu jsou nové a vykazují výrazný antioxidační účinek (inhibují

-peroxidaci tuků).· Proto.'nalézají terapeutické využití.

Existuje řada patologických, procesů k nimž dochází vlivem výrazné akumulace reaktivních * volných kyslíkových radikálů (Oz^-). ‘ Tyto 'volné 'radikály vedou k oxidaci' nenasycených mastných kyselin (peroxidace tuků), důležitých složek buněčných membrán. Jde o málo specifický proces, 'narušování buněk, pří'němž dochází ke změnám něho ‘poškozování biomolekul. Zasahuje buněčné funkce na různých úrovních, může poškozovat orgány i celý' organismus. . ' ·‘ ' Reakce volných radikálů mají pravděpodobně zásadní význam v patogenezi vad vyvolaných ischemií, jako jsou např. ischemická střevní onemocnění, ischemie myokardu, heraoragícký šok, poruchy ceřebrovaskulární funkce provázené ischemií a renální ischemií [R. J. Korthuis a kol.: ”Phýs-iology of

Oxygen Radicals, kap. 17, str. 217-249 (1986)],

Antioxidační sloučeniny, díky inhibičním účinkům na peroxidaci tuků, zajišťují ochranu proti poškozením vyvolaným volnými radikály u ischemických hypoxií. Proto lze antioxidační činidla, jako jsou antiischemické a antihypoxické látky, použít při léčbě uvedených klinických obrazů.

Lze považovat za . dokázané, že reakce volných radikálů mají určitý význam při rozvoji příznaků chorob pojivových tkání a primární etiolbgický význam při revmatoidní artritidě (J. Lunec a kol.:“Cellular Antioxidant Defence Mechanisns kap. 33, str,' 143-159 (1988) (CRC Press lne., Boča Raton, Florida, 1988)}.

Je známo několik hepatotoxických sloučenin, za jejichž účinek”¹“ vedouc i™'^'k” 'poškození jater, jsou pravděpodobně

Zodpovědně'-'“patolog'1cké^reakce volných radikálů. Antioxidační sloučeniny poskytují ochranu před .akutními a chronickými jaterními chorobami’ (J. Fehér a A. Vereckei:“The Importance of Free Radical Reactions in the Medicine (in Hungarian), str. 99-104 (Editory Medicína, Budapest, 1985)].

Bylo dokázáno, že reakce volných radikálů hrají určitou úlohu v několika hematologických klinických, obrazech, např. pří srpkovité anemii a beta-talasemii (Mediterranean anaemia)·.

Vzhledem -.ke ·-snížené obranyschopnosti, mohou kyslíková

- ._:.'₁£.-J:e_;rapie_^resp.ekti.ve ototeřápieh- dále zvyšovat \ riziko : ; oxídativních Změn u novorozených nebo nezralých kojencůProto * > lze -.·, při .··_ léčbě /těchto .klinických obrazů antioxidační laťky . úspěšně použít. -.>

. Peroxidace tuků jako .následek poškozování je sekundárním .{:.u^procesem., .-Některé._;;-buňky ,/jsou poškozením „okamžitě zničeny ·,.-,. .a_;·,.během následu jících několiká hodin se poškození rozšíří i na okolní buňky. Tento jev způsobují rovněž volné kyslíkové radikály, . které napadají lipidickou vrstvu buněčné membrány _; a jejím porušením a uvolňováním peroxidu vodíku buňku , usmrcují. Sloučeniny inhibující peroxidaci tuků jsou schopné „tomuto .sekundárnímu efektu předejít. Lze je tedy . využít k zastavení degenerativního procesu, k němuž dochází následkem cefalických and spinálních poškození. Sloučeniny s těmito tt účinky lze dále využít při léčbě Alzheimerovy choroby, svalové dystrofie a pod.

Význam sloučenin s inhibičním účinkem na peroxidaci tuků potvrzuje velké množství nedávno publikovaných prací, patentových žádostí a vědeckých článků. .

Publikovaná patentová žádost WO 87/01706 se hlavně zabývá přípravou aminosteroidů, v nichž je aminoskupina navázána na koncový uhlíkový atom postranního řetězce tvořeného 17 uhlíkovými atomy. V polohách 4 nebo . 1 a 4 kruhu Á steroidního skeletu se.nacházejí dvojné vazby, y poloze 3 je oxo- nebo hydroxylová skupina^-, v poloze 6. a-, nebo β-alkylová skupina *

nebo halogenová skupina, v poloze 11 je převážně a-hydroxyl, v poloze 16 a- nebo ,β-methyi a v po.loze 9(11). dvojná vazba.

Kruh Á steroidního skeletu může být nasycený nebo aromatický.

Bylo popsáno také několik 21-amínosteroidů s dvojnou vazbou * v poloze 17(20). Ú sloučenin předkládaného vynálezu je ,« nejčastěji disubstituovaný pýrimidinový, triazinový nebo . $ pyridinový kruh navázán přes piperazinylovou skupinu k poloze 21. V současné době je z publikovaných sloučenin v druhém stadiu klinických _; testů látka íl6a-methyl-2l-{4-[2,4-

-bis(pyrrolidino)-6-pyrimidinyl ]-l-piperazinyl}-pre.gna- * 4

-1,4,9( 11 )~tri.en^3,2.0-dion methansulfonát (tirilazad mesylaťe)

Dále je syntéza sloučenin se steroidním skeletem, které inhibují peroxidaci tuků, popsána v publikované PCT patentové žádosti WO 87/07895. Tato práce se zabývá zejména přípravou steroidních aminoesterů a kortikoidních amihoesterů, zvláště 17-aminoester.ů, 11,17-bis(amino)esterů, 3,17-bis(amino)esterů, 11-aminoesterů a 3-aminoěsterů. Tyto deriváty lze /podle uvedené patentové žádosti použít jako inhibitory peroxidace tuků k níž dochází následkem spinální, cefalické . nebo jiné nedostatečnosti. Strukturně se aminosubstituenty podobají substituentúm uvedeným v předcházející práci.

V PCT patentové žádosti WO 88/07527 je popsána příprava nových amino-9,lQ-sekosteroidů. Aroinosubstituent je. připo jen r k uhlíkovému atomu v poloze 17 postranního řetězce sekósteroidu. Strukturně se aminosubstituenty podobají substituentům uvedeným v předcházejících pracech.

Syntézou inhibitorů peroxidace tuků se dále zabývají publikované evropské patentové žádosti 0 389 368, 0 389 369 a 0 389 370.

Příprava kortikoidních 21-aminosteroidů je popsána v žádosti 0.389 368. Například. 4-[2,5-bis(diethylamino)-6-pyridinyllpiperazinylová skupina může být navázána na uhlíkový atom v poloze 21,. Steroidní skelet obsahuje jednu nebo dvě dvojné vazby v kruhu A a charakteristické kortikoidní substituenty bývají v polohách 6, 9, 11, 16 a 17. Dvojná vazba se může vyskytnout i v poloze 9(11).

Syntéza aminoderivátů ..3-oxo-19-norsteroidů je popsána ^patentově__žádosti .10-389- 370. — Tato··-práce “jmenovitě' uvádr'

P ř i pr;a y u_; n á s 1 e d u i. í c £ c hIá t é k: 1-7 β - h y d r ox y -11 β = í 4=d i methy 1 a a i no fenyl)-17a-£3-[4-(2,6-bis-(pyrrolidíno)-4-pyrimidiny1)-1piperazinyl]-l-propinyl}-estra-4,9-dien-3-on, 170-hydroxy-113-(4-dimethylaminofenyl)-17a-{3-[4-(5,6-bis-(diethylamino)-2-pyridyl )“l-piperazi'nyl ]-l-propinyTJ-estřa-4,9-dien-3-on,

17β-hydroxy-110-(4-dimethylaminofěnyl)-17a-{3-[4-(3,6-bis-(diethylamino)-2-pyridyl)-l-piperasinyl]-l-propinyl}-estra-4,9-dien-3-on,

170-hydroxy-ll3-(4-dimethylaminofenyl)-17a-{3-[4-<2,6-bis-(1-pyrrolidinyl)-4-pyrimidinyl)-l-piperazinyl]-1-propeny1}-estra-4,9-ďien-3-onla .· '

17B-hýdroxy-lÍ3-(4-dimethylaminofenyl)-l7a-{3-(4-(2,6-bis~(pyrrolidino)-4-pyrimidinyl)-l-piperazinylJ-l-propyl}-estra-4,9-dien-3-Ton..

Patentová žádost Ó 389 369 uvádí syntézu aminosteroidních derivátů š androstahovým skeletem, jež mají podobný inhibiční účinek na peroxidaci tuků. Jsou to například

11β, 170-d ihydroxy-17a-{3- [ 4-'( 2,6-bis-(pyrrolidino)-4-pyrímidinyl)-l-piperazinyl]-l-propinyl)-androsta-4,6-dien-3-on, US, 17B-dihydroxy-6-methyl-17a-{3-(4-(2,6-bis-(pyrrolidino)- ‘ -4-pyřimidinyl)-l-piperazinylJ-l-propinyl)-androsta-l,4,6-tríen-3-on,

113,17β-dihydroxy-6-methy1-17a-{3-[4-[5,6-bis-(diethylamino)6

-2-pyridyl]-1-piperazinyl]-1-propinyl)-androsta-1,4,6-trien-3-on a 11β,17B-dihydroxy-6-methyl-17a-{3-[4-[3,6-bis-(diethylamino)-2-pyridyl]-1-piperazinyl]-l-propinyl}-androsta-1,4,6-trien-3-on.

Evropská patentová žádost 0 156 643 .uvádí přípravu kortíkosteroídních derivátů rozpustných ve vodě, vyznačujících se tím, že. jejich hydroxylová nebo ešterifikovaná hydroxylová skupina je v α-poloze nebo dvojná vazba se nachází v poloze 9(11). Z diskutovaných sloučenin je nejúčinnějším inhibitorem peroxidace tuků sodná sůl [17a-hydroxy-lla-(2,2-áimethyl“ propy 1 karbony 1 óxy )-pregna-l, 4-d i en-3., 20-dion--21-y 1 suke inátů.

V publikované PCT patentové, žádosti KO 91/114'53 jsou popsány bis(amino“)pyrimidinyl-piperazinylové deriváty nesoucí kyslíkatou funkcí skupinu v poloze 5, v případě steroidní molekuly nebo 3,4-dihydro-6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethyl-2H-lbenzopyran-yl-methylové. „skupiny nebo jejich derivátů může být kyslíkatá funkce navázána na dusíkový atom v poloze 1 piperazinové skupiny. Tato patentová, žádost dále uvádí alky1-substituované 5-hydroxypyrimidinové deriváty.

. Je zřejmé, že výzkum na poli inhibitorů peroxidace tuků byl též rozšířen na aminoderiváty bez šteroidního skelé.tu. V publikované PCT patentové žádosti WO 88/08424 je uvedena příprava . nových . derivátů aromatických - a alifatických bicyklických aminů, cykloalkylaminů, chinon-aminů, aininoetherů a bicyklických aminoetherů, které lze použít při léčbě cefalických a spinálních nedostatečností. Z těchto derivátů byla věnována podrobná pozornost ' 2-{[4-[2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidinylk]-1-piperazinylJ-methyl)-3,4-dihydro-2,5,7,8-tetramethyl-2H-l-lbenzopyran-6-ol _ dihydrochloridu. ' ‘ · - * ;

Podstata vynálezu

Cílem předkládaného vynálezu je vývoj nových sloučenin * · s vyšší biologickou účinností a/nebo nižší toxicitou než mají sloučeniny známé z dosavadního stavu techniky. Zmiňované vlastnosti směřují k výhodnějšímu terapeutickému využití, ve srovnání s výsledky jichž bylo dosahováno pomocí dosud známých léčiv.

S překvapením bylo pozorováno, že deriváty eburnaroeninu obecného vzorce I vykazují vynikající inhibiční účinky peroxidace tuků.

Příprava nových derivátů eburnameninu obecného vzorce I zahrnuje; .

a) reakci eburnameninkarbonyl chloridu vzorce V

EBU-CO-C1 (V) nebo příslušného hydrochloridu s derivátem piperazinu vzorce X

reakci vzniklého l-(eburnameninkarbonylJpiperazinu vzorce IV

s 2,4,6-trichlorpyrimidinem, separaci takto získané směsi izomerů obsahující 1 ^_eburnaneninkarbonyl-4-( 4,6-dichlorpyr imid in-2-yl) piperazin vzorce .lila ί - .

Gl

a l-eburnameninkarbonyl-4-(2-,4-dichlorpyriraidin-6-yl )piperazin vzorce Illb

(lllb) na jednotlivé izomery, dále reakci 1 molu l-eburnameninkarbonyl-4-(4,ó-dichlorpyrimidin-2-yÍJpiperazinu vzorce Ilias' 2 moly aminu obecného vzorce HNR¹ R² v jednom nebo. dvou stupních za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde R¹ a R² jsou stejné jako R³ á R⁴ , - X a Z.představují dusík, ,Y je methinová skupina a-n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo.

reakci 1 molu l-eburnaraeninkarbonyl-4-(4,6-dichlorpyrimidin-2-y1)piperazinu. vzorce Ilias 2 moly aminu obecného ' vzorce- HNR¹R² : a následnou reakci vzniklého l-eburnameninkarbonyl-4-(4-amino-6-chlorpy.riinidin-2-yl)piperazinu obecného vzorce Ila

s aminem obecného vzorce HNR³R⁴> za vzniku eburnameninových - derivátů obecného .vzorce' I, kde še R¹ a Ř² liší od R³ a R⁴ .,

X a Z představují dusík, , Y je methinová skupina a na vlnovková.Čárka mají výše uvedený význam; nebo reakci· 1 molu l-eburnameninkarbonyl-4-(2,4-dichlorpyrimidin-6-yl)piperazinu vzorce Illb s 2 moly aminu obecného vzorce HNR¹R² v jednom riebo dvou stupních, za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde R¹ a R² jsou stejné jako R³ a R⁴ , X a Y představují dusík, Z je methinová “—9~ _ skupina a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo reakci 1 molu l-eburnameninkarbonyl-4-(2,4-dichlorpyrimidín-6-ylJpiperazinu vzorce Illb s 1 molem aminu obecného vzorce HNR¹R² , separaci jednotlivých izomerů z izomerní směsi obsahující l-eburnameninkarbonyl-4-(2-amino-4-chlorpyrimidin-6-yl)piperazin obecného vzorce libá

a l-eburnameninkarbonyl-4-(4-amino-2-chlorp.yrimidin-6-yl )-

piperazin obecného	vzorce Ilbb	MR1R2
EBU-CO-h	CHS	W (Ilbb)
		Cl
	/,;
a reakci 1	molu ’ každého.	z izomerů s aminem obecného
vzorce HHR3R*, kde	. R3 a* R4 se	liší od;	R1 a R2, za vzniku

eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde se R¹ a R² liší od R³ a R⁴ , X a Y představují dusík, 2 je methínová skupina a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo . al) reakci l-(eburnaoeninkarbonyl)pip.erazinu hvzorce IV, kde a & vlnovková čárka mají výše uvedený význam s 2,4,6-trichlorpyrimidinem, separaci - jednotlivých ·' izomerů z izomerní směsi obsahující l-eburnameninkarbonyl-4-(4,6-dichlorpyrimidin-2-yllpiperazin vzorce lila. a l-eburnameninkarbonyl-4-(2,4-dichlorpyriffiidin-6-ýl)piperazinu ‘ vzorce Illb, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, následnou reakci l molu připraveného 1-eburnameninkarbony1-4-(4,6-dichlorpyrimidin-2-y1)piperazinu vzorce lila s 2 moly aminu obecného vzorce HMR¹R², kde R¹ a R² jsou stejné jako R³ a R⁴, v jednom nebo dvou stupních za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde R¹ a R² jsou stejné jako R³ a R⁴ , X a Z představují dusík, Y je· methinová skupina a n a .vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo reakci 1 molu l-eburnameninkarbonyl-4-(4,6-dichlorpyrimidin-2-yl )piperaz.inu vzorce lila s 1 molem aminu obecného vzorce HNR¹ R², kde R¹ a R² se liší od R³ 'a R⁴... za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde se R¹ a R² liší od R³ a R⁴ , X a Z představují dusík, Y je methinová skupina a. n a vlnovková čárka mají' výše,uvedený význam, následnou '' t- ... '' - reakci připraveného l-eburname.ninkarboný.l-4-{4-amino-6-chlorpyrimídin-2-yl)piperazinu obecného vzorce Ha, kde R¹, R², n a vlnovková čárka mají stejný význam jak bylo uvedeno výše, s aminem obecného vzorce HNR³R⁴, kde R³ á R⁴ se liší od R¹ a Ř², za^:vzniku'eburnameninových derivátů obecného . vzorce I, kde se R¹ a. R² liší od R³ a R⁴ , X. a Z představují dusík, Y je methinová skupina a na vlnovková čárka.mají výše uvedený význam, nebo

-reakci 1. molu l-eburnameninkarbonyl-4-(2,4-dichlorpýrimidin-6r-yl)pipeřazinu vzorce Illb s ' 2 moly aminu obecného E vzorce HNRíŘ²', kde R¹ á; R² jsou . stejné jako R³ a R⁴ , v jednom. ( nebo’^: dvou stupních za vzniku eburnameninových derivátů 'obecného vzorce I, kde R’^: a R² jsou stejné jako R³ a R⁴ , X a Y představují 'dusík, Z je methinová skupina

j. .a.n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo . íreakci Γ“ molu l-ebúrnámé'ni'nkařbonyl-4-(2,4-dichlor¹ pyrimidin-6-yl)piperazinu vzorce Illb s 1 molem aminu obecného vzorce HNR¹R², kde R¹ a R² se liší od‘r³ a R⁴, dále

·.. separaci jednotlivých izomerů z izomerní směsi obsahuj ící l-eburnamenÍnkarbonyl-4-(2“amino-4-chlorpyrimidin-6-yl ipiperazin obecného vzorce Ilba a ..1-eb.urnameninkarbonyl-4-(4-amino-2-chlorpyrimidín-6-yl)-piperazin obecného vzorce Ilbb, kde R¹ a- R², \n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, následnou reakci 1 molu připraveného izomeru s 1 molem aminu obecného vzorce HNR³R⁴, kde R³ a R⁴ se liší od R¹ a R² , za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde R¹ a R² se liší odR³ a R⁴ , X a Y představují dusík, 2 je methínová skupina a. na vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo a2a) reakci 1. molu l-eburnameninkarbonyl-4-(4,6-dichlorpyrimidin-2-ylJpiperazinu vzorce IIIa, kde n a vlnovková čárka máji výše uvedený význam, s 2 moly aminu obecného vzorce HNR¹R², kde R¹ .a R^z jsou stejné, jako R³ a R⁴, v jednom nebo dvou .stupních za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce '1, kde ^R¹ . a. _{= 1} R²;y. jsou ste jné .jako. -a. R'⁴s - - ~ ~ X ^a skupina^=· ’ a na vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo

,.a2b) reakci 1 molu 1-eburnameninkarbony1-4-(4,6-dichlorpyrimidin-2-yl)piperazinu vzorce IIIa, kde na vlnovková čárka , .mají výše ” uvedený význam s 1 molem aminu obecného vzorce , HHRl R² , kdě R¹ a R² se liší od R³ a R⁴ , dále reakci připraveného l-eburnameninkarbonyl-4-(4-amino-6-chlorpyrimidin-2-yl)piperazinu obecného vzorce Ha, kde R¹ , R², n a vlnovková čárka.mají. výše uvedený význam, s aminem obecného vzorce . HKR³ R⁴ , kde R³ a R⁴ se . liší od R¹ a R² , z.a

...vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde se R¹ . a,.R*. liší od R³ a R⁴ , X a Z představují dusík, Y je methínová skupina a na vlnovková čárka mají výše uvedený význam, nebo a2c) reakci 1 molu l-eburnameninkarbonyl-4-(2,4-dichlorpyrimidin-6-yl)piperazinu vzorce Illb, kde n a vlnovková čárka

.... mají . výše ^uvedený/ význam s 2 moly aminu obecného vzorce HNR¹R², kde R¹ a R² jsou stejné jako R³ a R⁴, v jednom nebo dvou stupních za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde R¹ a R² jsou stejné jako R³ a R⁴ ,

X a . Y představují dusík, Z je methínová skupina a n a vlnovková čárka mají mají výše uvedený význam; nebo a2d) reakci 1 molu l-eburnameninkarbonyl-4-(2,4-dichlorpyrimidin-6-yl)piperazinu vzorce Illb, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam s 1 molem aminu obecného vzorce

HNR’R² , kde R’ a R² se liší od R³ a R⁴, separaci jednotlivých izomerů z izomerní směsí obsahující l-eburnameninkarbonyl-4-(2-amíno-4-chlorpyrimidin-ů-y1)piperazin obecného vzorce Ilba a l-eburnameninkarbony 1-4-( 4-am i no-2-chlorpyr i mi din-6-yl )-piperazi n obecného vzorce Ilbb, kde R¹ a R^z, na vlnovková čárka.mají výše uvedený význam, následnou reakci 1 molu připraveného izomeru s 1 molem aminu obecného vzorce HNR³R⁴ , kde R³. a R⁴ se liší od R¹ a R² , ža vzniku aburnameninových derivátů obecného vzorce I, kdé a R² se liší od R³ a R⁴ , X a Y představují, .dusík, Z je methinová skupina, nebo Za Y představují dusík, X je methinová skupina a na vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo a3a) . reakci připraveného l-eburnameninkarbony1-4-(4-amino“6-.chlořpyrímidin-2-yi )piperazinu obecného vzorce Ha, kde R¹, R², n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s aminem obecného vzorce HNR³R⁴, kde R³ a R⁴ mají výše uvedený význam, za vzniku éburnameňinových derivátů obecného vzorce I, kde X a Z představují dusík, Y·.je methinová skupina a R¹ R² , R³R⁴ , na vlnovková čárka mají výše uvedený význam, nebo a3b) reakci připraveného l-eburnameninkarbony1-4r(2- , -amino-4-chlorpyrimidÍn-6-yl)piperazi.nu obecného vzorce Ilba, kde R¹, R², na. vlnovková čárka mají výše uvedený význam, •š aminem; obecného vzorce HNR³.R⁴ , kde R³ a. R* mají výše uvedený “význam, za vzniků'eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde X a Y představují dusík, Z je methinová’ skupina aR¹, R² , R³, R⁴ , n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam,’nebo a3c) reakci připraveného l-eburnameninkarbonyl-4-(4-.

'-amiho-2-chlórpyrimidiň-6-yl)piperazinu obecného vzorce Ilbb, kde Ř¹, R², n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s aminem obecného vzorce HNR³R⁴, kde R³ a R⁴ mají výše uvedený význam, za vzniku eburnamehinových derivátů obecného vzorce. I, kde Z a Y představují dusík, X je methinová skupina a R¹, R² , R³ , R⁴ , n aí vlnovková čárka mají stejný význam jak bylo uvedeno výše, nebo ba)· reakci 1-(eburnameninkarbonylj.piperazinu vzorce IV.

s 2-amino-4,6-dichlorpyrimidinem obecného vzorce VIb

dále reakci připraveného l-eburnameninkarbonyl-4-(2-amino-4-chlorpyrimidin-6-yl)piperazinu obecného vzorce libá s aminem obecného, vzorce HNR³R⁴; nebo bb) reakci 1-(eburnameninkarbony.1 Jpiperazinu-^-vzorce-IV ·

f. , s 2-am_ino-*4,6“dichlorpyrimidineiB._Lpbecného._Ý.vz.orce V-I-a-s· ·-· -

dále , . separaci jednotlivých izomerů z izomerní směsi obsahuj.ící ¹l-eburnameninkařbohýr-4- (4-amino-6-chlorpyrimidin-.2-yl )piperazín , .obecného vzorce. Ila a lmeburname.ninkarbonyl-4-(4-amino-:2-chlorpyrimi.din-6-yl)-piperazin obecného vzorce Ilbb a reakci 1 molu připraveného izomeru s 1 molem aminu obecného vzorce HNR³R⁴; nebo h .-.ca) reakci l-(eburnameninkarbonyl)piperazinu vzorce IV s 2,4-diamÍno-6-chlorpyrimidinem obecného vzorce Vila

tt nebo cb) reakci l-ťeburnameninkarbonyl)piperazinu vzorce IV s 2,4-diamino-6~chlorpyrimidine® obecného vzorce Vllb

(V!tb, nebo ' da) reakci .eburnameriinkarbonylchloridu vzorce V nebo příslušného hydrochloridu s 4-(4-amino-6-chlorpyriniidi,n-2-yl)-piperaziné® obecného vzorce Vlila

(Vídá) dále reakci;.. . l-eburnameninkarbony.l-4-(4-aniino-6-chlorpyrimidin-2-yl)píperazinu obecného vzorce Ila s aminem obecného vzorce HNR³ R⁴ ; nebo db) reakci eburnameninkarbonyichiÓridu vzorce V nebo příslušného hydrochloridu s 4-(4-amino-2-chlorpyrimidin-6-yl)-piperazinem obecného vzorce VlII.bb

4*.

dále reakci 1-eburnameninkarbonyl-4-(4-amino-2-chlorpyrimidin-6-y1)piperazinu obecného vzorce irbb s aminem obecného vzorce HHR³R⁴; nebo dc) reakci eburnameninkarbonylchloridu vzorce v nebo příslušného hydrochloridu s 4-(2-amino-4-chlorpyrÍmidin-6-yl)-piperazinem obecného vzorce Vlllba

reakci l-ěbuřnamehinkarbonyl-4-{2-amíno-4-chlorpyrimidín-6-ylJpiperazínu obecného vzorce libá s aminem obecného vzorce HNR³R⁴; nebo

e) reakci eburnameninkarbonylchloridu . vzorce V nebo příslušného hydrochloridu s 4-(diamino-pyrimidinyl )piperazinem obecného vzorce IX

a pokud je to žádoucí redukci takto vzniklého derivátu eburnameninu obecného vzorce I, který obsahuje’v’poloze W oxo skupinu a/nebo převedení- vzniklé volné báze derivátu eburnameninu obecného vzorce I reakcí s kyselinou na adiční sul a/nebo uvolnění volné báze derivátu eburnameninu obecného vzorce I z připravené soli a/nebo převedení získaného derivátu eburnameninu obecného vzorce I na příslušný šolvát.

Vhodný reakční postup pro reakci eburnameninkarbonyl16 chloridu vzorce V nebo příslušného hydrochloridu 5 piperazinovým derivátem vzorce X: bylo rozpuštěno 16 molů piperazinového derivátu (vypočteno pro 1 mol acylchloridu) v methylenchloridu a přikapán roztok acylchloridu k výše uvedenému roztoku při -50 °C. Po přidání celého množství bylo chlazení reakční směsi přerušeno, teplota směsí Vystoupila na teplotu — okolí, byl přidán roztok hydrogenuhličitanu sodného a směs míchána 10 minut. Po oddělení fází byla organická fáze důkladně promyta vodou, sušena a chromatografována na sloupci _t silikagelu. Získaný produkt byl rekrystalizován.

Vhodný reakční postup pro reakci l-(eburnamenin-Í4-karbonyl)piperazinu . vzorce IV s 2,4,6-tríchlorpyrimidinem. K roztoku derivát piperazinu v tetrahydrofuranu byl přikapán

2,4,6-trichlorpyrimidin zředěný tetráhydrořuranem při 0 °C. Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě 12 hodin a odpařena do sucha. Suchý odparek byl roztřepán mezi chloroform a vodný roztok hydroxidu sodného., organická fáze. promyta vodou, vysušena a .odpařena. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu a’’ odděleny izomery obecných vzorců lila a IHb.

Reakce izomerhích derivátů 1-eburnamen i.n-14-karbony 1-4-(dichlorpyrimídinyl)piperazinu obecného vzorce lila resp·.

. IHb s aminy obecného vzorce pyrrolidin, lvaminoadamantan, l-amino-2,2-dimethylpropan,. cyklopentylamin a pod. , probíhaly při, /. teplotách . závislých / ..n-a ,. reaktivitě aminů. Reakce š pyrrolid in.em proběhla např. při teplotě nižší.'.než' 10 °C, zatímco pro reakce, s 1-aminoadaman.tanem vyžadovala teplotu 8.0 , .až . 100.°C. ,Odparek byl roztřepán mezi halogenované rozpouštědlo, výhodně chloroform, a vodný roztok hydroxidu . sodného. Po oddělení fází byla organická fázě promyta vodou, vysušena a odpařena. Vzniklá izomerní směs 1-eburnamenin-14-karbonyl-4-(aminochlorpyrimidinýlJpiperazinu _f byla . rozdělena' chromatografií na sloupci silikagelu a jednotlivé izomery rekrystalizovány.

Izomery / l-eburnamenin-14-karbonyl-4-(aminpchlorpyrimi-.

dinyUpiperazinu obecných vzorců Ilá, libá a. I.Ibb reagují

.. HN.R¹ R² . jako jsou např. .1-aminó-l,l-dimethylethan,

- 17 s aminem obecného vzorce HNR³R⁴, který je identický s aminem použitým v předcházejícím reakčním stupni, nebo se od něho liší. Doba a teplota této reakce se řídí reaktivitou aminu. V případě pyrrolidinu byl např. nutný var po dobu pěti hodin. Po skončení reakce byl nadbytek aminu oddestilován a zbytek roztřepán mezi chloroform a vodný roztok hydroxidu sodného. Po oddělení fází byla organická fáze promyta vodou, vysušena a odpařena. Získaný produkt, sloučenina obecného vzorce' I, byl rekrystalizován např. z acetonitrilu.

Podle alternativního postupu .předkládaného vynálezu lze provést reakci izomerních derivátů l-eburnamenin-14-karbonyl“ -4-(díchlorpyrimidinyl)piperazinu obecného vzorce lila resp. IHb s aminy obecného vzorce HNR¹R² nebo HNR³R⁴ v jednom stupni. Deriváty eburnameninu byly suspendovány nebo 'rozpuštěný.“ v “druhé reakční složce.,' t j '’ v ~^přimárním nebo sekundárním aminu, a reakční směs reagovala při teplotě varu. Takto .byla provedena reakce, např. s pyrrolidinem, var po dobu 5 hodin. Po skončení reakce byl nadbytek aminu, tj. pyrrolidinu, oddestilován a zbytek přečištěn výše uvedeným postupem.

Pokud .není '.- derivát l-eburhamenin-14-karbonyl-4-(dichlor~ pyrimidinyl)piperazinu rozpustný v aminu vzorce HNR¹R^z nebo HNŘ³R⁴ ani při teplotě varů reakční směsi,‘lze jako reakční prostředí použít výševróucí rozpouštědlo, . např. n-butanól.;

Podle alternativního postupu lze provést reakci Í-\(eburnamenin-Í4~karbonyl)piperazinu obecného vzorce IV s aminodichlorpyrimidinem obecného vzorce Via nebo Vlb a vzniklý derivát l-eburnamenin-14-karbonyl-4-(aminochlorpýrimidinyl)piperaziinr obecného vzorce “Ila, Ilba nebó Ilbb může - dále-reagovat 's aminem obecného vzorce “HNR³R⁴ .' Tento postup byl výhodně použit při reakci l-(éburnamenin-14obecnéhó vzorce 'IV s aminodichlorvzorce Via nebo Vlb. Obě reakční komponenty byly rozpuštěny v acetonitrilu a reakční směs byla zahřívána k varu v přítomnosti.uhličitanu draselného po dobu 40 hodin za účinného míchání. Po skončení reakce byla rozpouštědla odpařena a zbytek roztřepán mezi chloroform

-karbonyl)piperazinu pyrimidinem obecného at a vodu. Po oddělení fází byla organická fáze promyta vodou, vysušena a odpařena. Produkt byl chromatogreaficky přečištěn. Takto připravené deriváty l-eburnamenin-14-karbonyl-4-(aminochlorpyrimidinylJpiperazinu obecného vzorce Ha, Ilba nebo Ilbb dále reagovaly s, aminy obecného vzorce: HNR³ R⁴. za výše uvedených reakčních podmínek.

Podle alternativního postupu lze provést reakci l-(eburnamenin-14-karbonyl)piperazinu obecného vzorce IV s diaminochlorpyrimidiném obecného vzorce Vila nebo Vllb. Obě reakční komponenty, tj. derivát l-(eburnamenin-14-karbonyl )piperazinu a diaminochlorpyrimidin, např. 4-chlor-2,6-bis(pyrrolidino)pyrimidin byly rozpuštěny, v v N-ethylmorfolinu a reakční směs byla zahřívána k. varu v dusíkové atmosféře po dobu 40 hodin. Poté byla rozpouštědla odpařena za normálního tlaku, stopy N-ethylmorfolinu .odstraněny kodestilací s vodou. Odparek byl roztřepán mezi chloroform a vodu, fáze odděleny a organická fáze promyta vodou, vysušena > a odpařena. Produkt byí .chromatograf icky přečištěn. .. (,·

Dalším alternativním postupem byla reakce eburnamenin-14-karbonyl chloridu obecného vzorce V nebo příslušného . hydrochloridu s. derivátem l-(aoinochlorpyrimidinyl)piperazinu obecného v zorce Vlila, VlIIba nebo Vlílbb a následná, .'reakce připraveného l-eburnamériin-14/-karbonyl-4- (aminochlorpyrimid i nyl) piperazinu obecného vzorce Ila, Ilba nebo Ilbb š aminem obecného vzorce HNR³R⁴. .m?

Reakční postup výše zmiňované reakce: k eburnamenin-^: -14-karbonyl chloridu obecného vzorce V byl přidán'roztok l-(aminochlorpyrimidinylJpiperazínu obecného vzorce Vlila,

VlIIba nebo Vlílbb v methylenchloridu a uhličitan draselný při , *1* teplotě -15 °C, po malých dávkách. Chlazení reakční směsi bylo přerušeno, , teplota vystoupila na teplotu okolí a «.směs byla zředěna vodou.' Po 10 minutách míchání a oddělení fází byla organická fáze promyta . vodou, rozpouštědlo oddestilováno a zbytek rekrystálizován/ - Připravený l-eburnamenin-14-. -karbony 1-4-(aminochlorpyrimidinyl)piperaz.in obecného vzorce Ila, Ilba nebo Ilbb dále reagoval výše uvedeným postupem s aminem obecného vzorce HNR³R⁴.

Předkládaný vynález dále zahrnuje reakci eburnamenin-14-karbonyl chloridu obecného vzorce V nebo příslušného hydrochloridu s derivátem bis-(amino)-(1-piperazinyl)pyrimidinů obecného vzorce IX. K roztoku bis-(amino)-(l-piperazinyl)pyrimidinu obecného vzorce IX v halogenovaném rozpouštědle, např. methylenchloridu, byl přidán eburnamenin-14-karbonyi chlorid obecného vzorce V a uhličitan draselný v malých dávkách při teplotě -15 °C. Chlazení reakční směsi bylo přerušeno, teplota vystoupila na teplotu'okolí a směs byla zředěna vodou. Po 10 minutách míchání a oddělení fází byla organická fáze promyta vodou, rozpouštědlo oddestilováno a zbytek rekrystalizován.

• Pokud. je to žádoucí, lze derivát eburnameninu obecného vzorce'^I^připrivěny“ př*edcháze*jícím ^postupem a obsahující ²v^pouoze'^w^oxo^škuřinuT redukovat’ na derivát eburnameninu . \ -k .

obecného vzorce I, který má v poloze W dva vodíkové atomy. Dále lze derivát eburnameninu obecného’ vzorce I, získaný ve formě volné báze, . převést reakcí s .vhodnou kyselinou na příslušnou adiční sůl, a/nebo lze derivát eburnameninu připravený ve formě soli z.této soli uvolnit jako volnou bázi.

Výše uvedená reakce byla provedena následujícím postupem. Derivát obecného vzorce I obsahující v poloze W oxo skupinu byl '-'rozpuštěn -v bezvodém tetrahydrofuranu a přikápán k suspenzi . LiAlHí. .v. tetrahydrofuranu -v atmosféře inertního plynu, např. argonu, a reakční ’-směsibylá zahřívána 3 hodiny k varu. Po skončení reakce (podle-tenkovrstevné chromatografie - TLC) byl nadbytek hydridu i vzniklý komplex . rozložen přidáním vody a vodného roztoku hydroxidu sodného. Sraženina hydroxidu hlinitého a iitného’'byla odfiltrována a promyta tetrahydrofuranem. · Spojené · organické ' frakce bylý odpařený a odparek.chromatografován na sloupci silikagelu.

Adiční soli sloučenin obecného vzorce I s kyselinami byly připraveny ovbyklým postupem, tj. sloučenina obecného vzorce I byla rozpuštěna -.v* bezvodém ethanolu a přidány 1 až 2 ekvivalenty kyseliny,'- např. methansulfonové nebo ethansulfonové. Pokud se sul nevysrážela, byl k alkoholickému roztoku přidán . ether. Vzniklá sraženina produktu byla odfiltrována, vysušena, případně znovu přesrážena, nebo produkt převeden do odpovídající bazické formy.

V uvedeném popise a podobně v nárocích jsou zmiňované alkylové a alkenylové skupiny C2.-6 přímé nebo výhodně rozvětvené, jsou nasycené, nebo obsahují jednu nebo více dvojných vazeb C'=C. Jsou to například skupiny ethyl, vinyl, n-propyl, isopropyl, 1-propen-l-yl, , i-propen-2-yl, l-propen-3-yl, n-butyl, sec-butyl, a terc-butyl, butenyl, pentyl, pentenyl, hexyl a hexenyl a pod.

Cykloalkylové .skupiny skupiny C3-1 o, tvořené. jedním až třemi kruhy a. nesubstituované alkylem C1-3 jsou např.. cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, adamantyl a pod.. Uvedené skupiny jsou buď nesubstituované, nebo nesou jeden nebo více více substituentů,. např. methyl, ethyl nebo propyl.

Pokud R¹ a R² a/nebo R³ a R* spolu se sousedním ..atomem dusíku a případně dalším kyslíkovým nebo dusíkovým atomem tvoří nasycený nebo nenasycený čtyř- až šestičlenný kruh, případně dále substituovaný alkylovou skupinou. C1-4 ,' jedná se výhodně o skupiny pyrrolidino, piperidino, azepino, morfolino,

4,4-ethylendioxy-l-piperidinyl nebo. 2,2,6 ,.6-tetramethyl-l-piperidinyl.

Příprava , sloučenin obecných vzorců VI,. VII,. VIII a IX, nebo jejich intermediátů:

.Jako jvýchozí . látka při* přípravě^ různých derivátů monóamino-dičhlorpyrimidiňu VI byl použit 2,4,6—trichlorpyťimidin. Reakce . byla prováděna v etherovém, rozpouštědle, /1 · .'· '· ’ · např. y tetrahydrofuranu, za přítomnosti, primárního nebo . sekundárního, aminu při teplotě, 'v rozmezí·.. -20 až 40 °C, podle reaktivity aminu, . po dobu 3.0 minut... až několika hodin.

V případě stericky stíněného 2,2,4,4-tetramethylpiperídinu (který může sloužit též jako rozpouštědlo), probíhala reakce 50 hodin při teplotě varu reakční směsi. Po skončení reakce bylo rozpouštědlo (nebo nadbytek reakční jako rozpouštědlo). oddestilováno, v halogenovaném rozpouštědle, výhodně chloroformu a extrahován vodným roztokem hydroxidu sodného á vodou. Po oddělení fází komponenty sloužící zbytek rozpuštěn byla organická fáze vysušena, rozpouštědlo odpařeno a 4,6-dichlor-2-aminopyrimidin obecného vzorce Via oddělen od

2,6-dichlor-4-aminopyríroidinu obecného vzorce VIb chromatografií na sloupci silikagelu. Jednotlivé izomery byly rekrystalizovány.

Deriváty bis(amino)-chlorpyrímidinu obecného vzorce Vila a Vllb byly připraveny reakcí odpovídajícího derivátu monoaminodichlorpyrimidinu obecného vzorce VI s aminem obecného vzorce HNR¹R^z nebo HNR³R⁴. Analogicky jako při přípravě sloučenin obecného vzorce VI, musí reakční podmínky respektovat reaktivitu aminu vstupujícího do reakce, obecného vzorce HNR¹R² nebo HNR³R⁴ . S pyrrolidinem, jako aminovou reakční. složkou, probíhá například reakce při laboratorní *teplotěT^zaťímcoreakce s 1-amíno-l,1-dimethy1ethanem vyžaduje záhríváhr^^ňá ^_J13Ó’^ČC^_ 15 hodin. .Reakci s l-amino-2,2-dimethylpropanem lze provést v mírnějších podmínkách: var v isopropanolu 2.0 hodin. Pokud je aminovou složkou objemný 1-aminoadamant.an, reakce trvá 75 hodin za varu v n-butanolu. Reakční směsi byly zpracovány postupem uvedeným při přípravě sloučenin obecného ' vzorce VI..

Výchozími látkami pro přípravu -pyrimidiriových derivátů obecného odpovídající bis(amino)-chlorpyrimiďiny obecného vzorce VII. Derivát bis(amino)-chlorpyrimidinu obecného vzorce VII byl rozpuštěn^Λ ' v terciárním aminu, výhodně N-ethylmorfolinu, a zahříván k varu s- nadbytkem piperazinového derivátu obecného různých piperaz.inylvzorce VIII jsou vzorce X v dusíkové atmosféře 25 hodin. Po skončení reakce byly N-ethylmorfolin a větší část. piperazinu oddestilovány, 'zbytek kóděst ilován *s ' vodní párou. Odparek byl rozpuštěn v- -chloroformu,'roztók' promyt vodným hydroxidem sodným a vodou. Po oddělení fází byla organická fáze vysušena a chloroform odpařen. Produkt' byl přečištěn na sloupci silikagelu a rekrystalizován.

-Výchozími látkami pro přípravu derivátů bis(amino).-(l-piperázinyl)pyrimidinu obecného vzorce IX jsou deriváty bis(amino)-chl.orpyrimidinu obecného vzorce VII. Sloučeniny obecného vzorce VII se nechaly reagovat s pětinásobkem át mikrozómech

1952) a na 10438-10440, piperazinu obecného vzorce X za varu v ethanolu 1 hodinu. Po skončení reakce byl ethanol odpařen, zbytek rozpuštěn v chloroformu, roztok promyt vodným hydroxidem sodným a vodou. Po oddělení fází bylá organická fáze vysušena a chloroform odpařen. Produkt byl rekrystalizován.

Použití eburnameninkarbonylchlor.idů obecného vzorce V a jejich hyďrochloridů jako výchozích složek . v postupech předkládaného vynálezu, je známo z maďarské patentové žádosti .187 733. .

Další část předkládané práce se zabývá farmakologickými účinky derivátů eburnameninu obecného vzorce I. Antioxidační vlastnosti byly studovány na peroxidaci tuků indukované enzymy (peroxidace tuků indukovaná NADPH) i na neenzymoVě.indukované peroxidaci tuků (peroxidace tuků indukovaná Fe²⁺)

Antioxidační účinky byly studovány na z krysího mozku [J. Neurochem. 37, 422-426, homogenátu krysího mozku [J. ΒιοΛ Chem. 262,

1987] Z inhibice peroxidace tuků .indukované . NADPH v mozkových mikrozómech

Mikrozómy byly připraveny ze samců krys Hannove.r-Wí stár o tělesné hmotnosti ' 150-250 g. Po dekapitaci byly celé krysí mozky homogenizováný v desetinásobném objemu ledového roztoku 0,25 molární sacharózy. Homogenát -byl .centrifífgován na přístroji Hitachi CR 26H při 15 000 x g· při 4 °C10 minut, supernatant oddělen a znovu centrifugován na Hitachi SCP85H pří 78 000 χ g při 4 °C 60 minut. Precipitát byl suspendován v 0,15 moláriiím roztoku'? chloridu draselného, v -získaném roztoku stanoven óbsah ' bílkovin a . adjustován ná koncentraci 10 mg/ml. Takto získané mikrozómy byly zmraženy v lázni suchý led-aceton a uchovány při -70 °C až do použití. '

Inkubační směs obsahovala: 50 mM trisfhydroxymethyl)aroinomethán hydrochloridu (pH 6,8), 0,2 mM chloridu železitého, 1 mM dihydrogenfosforečnanu draselného, 0,5 mM adenosin-5’-difosfátu, 0,2 mg mlkrozómů . a testovanou sloučeninu. Inkubace probíhala při konečném objemu 1 ml 20 kyselinu v poměru

2:1.

Tvorba thiobarbiturovou kyselinou.

minut při 37 °C. Peroxidace tuků byla indukována přidáním 0,4 mM HADPH (nikotin adenin dinukleotid fosfát v redukované formě). (Slepé vzorky neobsahovaly NADPH.) Reakce byla zastavena přidáním 0,375 ml stoprroztoku obsahujícího 40 % trichloroctovou a 5 M kyselinu chlorovodíkovou malondialdehydu byla stanovena Po zastavení reakce byl ke každému vzorku přidán. 1 ml 1 % roztoku kyseliny thiobarbiturové a vzorky zahřívány ve vodní lázni při 100 °C 10 minut. Poté byly centrifugovány při 2 000 x g na přístroji Janetzki K70 při 4 °C 10 minut. Absorbance zbarveného supernatantu byla měřena při 535 nm 'na spektrofotometru -Hitachi 150-20. Jako referenční vzorek byl · použit malondialdehyď bis(diethylacetal) . ;

Účinek na peroxidaci .tuků indukovanou Fe^z+ v mozkových homogenátech . , ? .

Mozkové homogenáty byly. připraveny z krys Hannovere-Wistár' o . hmotnosti 150-220 g homogenizací celých mozků v devítinásobném objemu ledového Krebs-Ringerova pufru (který obsahoval. 15 mM 4-(2l-hydroxyethyl)-l—(piperazinylethansulfonové kyseliny (zkráceně HEPES) o pH7,4, 140 mM chloridu sodného,>3,6 mM -chloridu.draselného, 1,5 mM chloridu vápenatého, :-· -- -/37 mM. ._s. chloridu.. ...horečnatého, -^:--l , 4 -mM .., dihydrofenfosforečnanu.draselného a 10 mM glukózy].. Poté byl . stanoven -obsah bílkovin- a .roztok; adjustován ha koncentraci mg/ml. . . .. · . - .

K 0,2 ml homogenátu bylo přidáno testované inhibíční .činidlo v objemu-.iS ml a směs byla inkubována 20 minut při ..³⁷°^c· PeroxidaČní reakce_; bylá indukována ionty Fe^z+, tj. přidáním 5 ul8 mM roztoku síranu amonno-železnatého (Fe(NH4)2(S04)2]. Po inkubační době byla reakce zastavena stop roztokem (0,8 M roztok chlorovodíku v 12,5 % kyselině . trichloroctové), vzorky byly centrifugovány při 2 000 x g na přístroji Janetzki při 4 °C 10 minut.

K 0,5 ml množstvím supernatantu byl přidán 1 ml'1 % kys. thiobarbiturové a vzorky byly zahřívány ve vroucí vodní lázni minut. Intenzita zabarvení byla stanovena při . 535 nm na spektrofotometru .Hitachi 150-20 . Jako referenční vzorek byl použit raalondialdehyd bis(diethylacetal) .

Stanovení hodnot IC50 pro testované sloučeniny vycházelo z korelace mezi koncentrací a příslušnou účinností inhibitoru, jak je uvedeno v tabulce 1,

Tabulka 1

Inhibice peroxidace tuků

Sloučenina č. '	Inhibice peroxidace tuků indukované NADPH ICsq (/UM)	Inhibice peroxidace tuků indukované Fe2+ ÍC50 (uM)
1	24,2	124,0 .
2	6,2	112,0
3	2,4	11,4
4	'3,1	10,3
DL-Q-Toko-.
férol	NiI	10,5
Kys. ella-
gová	47,2 ..	. 51,0
Silymarin	197,0	. 33,2
Tirizalad		S -4 _ - .
mesýlát	121, 0	135,0 ' i· :

Zkratky použité v tabulce 1: , ._

N.I.: nulová inhibice

1: l-( (3a, 16a)-eb.urnamenin-14-fcarbonyl J-4-[2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidinýllpiperazin

2: l.-{ [ (3a,16a)-eburnamenin-14-yl]methyl}-4-[2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidinyllpiperazin trihydrobrocid

3: . l-[ (l6α).-eburπamenin-14-karbonyli-4-[2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimídinyl lpiperazin

4: l-[(3a)-eburnamenin-14-karbony1]-4-[2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidinylJpiperazin

Kys. ellagová :4,4',5, 5',6,6¹-hexahydrodikarbolová kyselina, 2,6': 2',6-dilakton

Silymarín: 2- [ trans-2-(4-hydroxy-3-methoxy’f eny1-3-hydroxy* methyl-1,4-benzodioxan~6-yl]-3, 5,7-trihydroxychroman-4-on

Tirilazad mesylát; 16a-methyl-21-{4-[2,4~bís(pyrrolidino)-6-pyrimidinyl]-l-piperazinyl}-pregna-l,4,9(ll)-trien-3,20-dion methansulfonát (sloučenina publikovaná v PCT patentové žádosti W 0 87/01706).

Z údajů, uvedených v tabulce 1 vyplývá, že všechny sloučeniny, připravené v. různých příkladech výkazují.-velmi silný' antioxidační účinek (inhibujíoiJperoxidaci.„tuků:)... ₌

Inhibiční účinky sloučenin testované v systému peroxidace tuků indukované NADPH .(enzymatická indukce) jsou výrazně silnější než u referenčních sloučenin. Je právděpodobné, že inhibice zasahuje v místě působení reduktázy NADPHúčinky sloučenin tuků indukované a Fe² ♦ testované (neenz.ymově s účinky

-cytochrom C. Inhibiční v systému peroxidace indukovaná peroxidace) jsou srovnatelné.DL-a-tokoferolu, ale vyšší než . u hepatoprotektivního silymarinu nebo' antíkancerogenní kyseliny ellagové. Navíc. ' antioxidační účinky sloučenin'1 a 2 vedou k podobné nebo vyšší inhibici peroxidace tuků při porovnání s účinky tirizalad mesylátu, který byl též klinicky testován.

Nové ebúrnameninové deriváty obecného vzorce 1 se pro. farmaceutické účely používají volné, nebo ve formě svých solí, jako složky obvykle používaných terapeutických přípravků. Tyto přípravky mohou být pevné, kapalné nebo polopevné; při jejich přípravě lze ' použít obecně používaná’ aditiva, např. plnidla, í

* ředidla, stabilizátory,, látky ovivňující pH a osmotický tlak, příchutě a látky napomáhající tvorbě přípravků.

Pevné farmaceutické přípravky mohou být ve formě tablet, dražé, kapslí, tobolek (tobolky s práškovým obsahem) nebo práškových ampulí (pro přípravu injekčních roztoků). Kapalné přípravky mohou mít formu pro injekční nebo infúzní aplikaci, nebo kapalných léků, případně kapek. Polopevné přípravky jsou např. masti, balzámy, krémy, směsi k protřepání nebo čípky.

Vhodné podávané množství farmaceutického přípravku musí být takové, aby obsahovalo dávku účinné složky dostatečnou k dosažení požadovaného.účinku. Tato dávka závisí na stupni onemocnění, vážnosti léčeného patologického stavu, hmotnosti pac-iehta, -jeho citlivosti vůči účinné složce, způsobu podávání léčiva a počtu denních dávek. Předepsanou dávku účinné látky může bezpečně stanovit ošetřující lékař.

Pro pohodlné dávkování je vhodné, aby .farmaceutické přípravky obsahovaly dávkové jednotky účinné složky určené k jednomu podání, nebo jejich násobky, či díly. Tuto formu mají např.. tablety s rýhami podporujícími, dělení na poloviny, případně čtvrtiny, což usnadňuje dosažení požadovaného množství účinné složky.

Tablety mohou být potažené acidostabilni vrstvou, která zajišťuje uvolnění, léčiva až.pro průchodu žaludkem. Jde o tzv. enterosolventní obal. Podobné vlastnosti mají i kapsle plněné účinnou složkou.

.Farmaceutické přípravky obsahující účinnou složku podle předkládaného vynálezu obvykle obsahují 1 až 100 mg této účinné složky v jedné dávkové jednotce. Některé přípravky obsahují i vyšší množství..

Předkládaný vynález se též. týká způsobu inhibice peroxidace tuků v organismů. Uvedený způsob zahrnuje podávání terapeuticky .účinného množství účinné složky obecného vzorce I nebo farmaceutický přijatelné příslušné adiční soli s kyselinou nebo solvátu.

:Vynálěz je podrobněji ilustrován následujícími příklady, které, však nemají nijak omezit jeho rozsah.

«

Příklady provedeni vynálezu

Příklad 1

Příprava 1~[ (3a, 16a)-eburnam.enin-14-karbonyllpiperazinu .

Roztok (3q, 16a)-eburnámenin-14-karbonylchlOrid hydrochloridu (20,0 g, 53 mM) v methylenchloridu (200 ml) byl přikapán při -50 °C k roztoku piperazinu (66,8 g, 796 mM) v methylenchloridu (300 ml). Chlazení reakční směsi bylo přerušeno a teplota směsi vystoupila na teplotu okolí. Byl přidán nasycený roztok uhličitanu sodného (100 ml) a směs míchána 10 minut. Po oddělení fází byla organická fáze promyta vodou (2 x 150 ml), vysušena a odpařena. Odparek byl chromatografován na sloupci silikagelu v eluční směsi chloroform/methanol gradientem (98:2 -> 80:20). Získaný produkt byl překrystalizován s výtěžkem 15,82 g (78,8 %) titulní sloučeniny o b.t.: 185-198 °C.

Příklad 2

Příprava l-[ (3a, lGaJ-eburnameninAl^-karbonyl

-dichlor-2-pyrímidinyl ]piperazinu___a ^.llL.C^a^^óQ j-eburna-^. , menin-il4-karbonyl ] -4-[2,6-dichlór-4-pyrimidinyl ]piperazinu

Roztok 2,4,6-trichlorpyrimidinu (0,56 ml, 4,87 mM), v tetrahydrofuranu (20 ml) byl přikapán k . roztoku l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-kařbonyllpiperazinu (2,0 g,

5,12 mM) v tetrahydrofuranu (50 ml) při 0°C. Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě 12 hodin a odpařena. Zbytek byl roztřepán mezi chloroform (100 ml) a 5 % roztok hydroxidu sodného (25 ml). Po oddělení fázi byla organická fáze vysušena a odpařena. Odparek byl chromatografován na sloupci silikagelu v eluční · směsi chloroform/methanol gradientem (100:0 ->

99:1). Jako první . byl získán méně. polární l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[4,6-dichlor-2-pyrimidinyllpiperazin' s výtěžkem 0,325 g (12,7%), b.t.: 100-107 °C . (po rekrýstalizaci z etheru). Další elucí byl získán polárnější l-{(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[2,4-dichlor-6-pyrimiidinyl ipiperazin s výtěžkem 2,26 g (88,3.%), b.t.: 165-175 °C (po rekrýstalizaci z etheru).

Příklad 3 *·

Příprava 4,6-dichlor-2-pyrrolidinopyrimidinu a 2,4-dich1or-6-pyrrol idinopyrimidinu

Pyrrolidin (23,7 ml, 286,6 mM).byl přidán po kapkách při -20 °C do směsi , 2,4,6-trichlorpyrimidinu a tetrahydrofuranu •r (200' ml) během 30 minut. Chlazení bylo přerušeno, směs míchána dalších 30 minut a odpařena. Zbytek byl roztřepán mezi chloroform (500 ml) a 10 % hydroxid sodný (50 ml). Po oddělení fází byla organická fáze promyta vodou (4 x 150 ml), vysušena a odpařena. Odparek byl chromatografován na sloupci silikagelu v eluční směsi hexan/octan ethylnatý 19:1. Jako první byl získán méně polární 4,6-dichlor-2-pyrrolidínopyrimidin, po rekrystalizací z hexanu s výtěžkem 7,51g (25,27 %), b.t.:

95-98 °C, ¹H-NMR (60 MHz, CDCI3) δ ppm: 6,51 (s, 1H, 5-H)

Další . elucí byl získán polárnější 2,4-dichlor-6-pyrrolidinopyrimidin po rekrystalizací z hexanu s výtěžkem 20,22 g (6.8,03 %), b.t.: 100,5-103,5 °C.

¹ H-NMR (60 MHz, CDCI3) 6 ppm: 6,18 (s, 1H, 5-H)

Příklad 4.

Příprava 4-chTor-6-(l-piperazinyl)-2-pyrrolidinopyrimidinu Roztok 4,6-dichÍor-2-pyrrolidinópyrimidinu (2,0 g,

9,17 mM) a piperazinu (3,95 g, 45,9 mM) v ethanolu byl zahříván k varu pod zpětným chladičem. 1 hodinu a odpařen. Odparek byl roztřepán mezi chloroform (100 ml) a 1 % hydroxid sodný (100 ml). Po oddělení fázi byla organická fáze promyta vodou (2 x 5.0 ml), vysušena a odpařena. Titulní produkt byl po rekrystalizací z hexanu získán s výtěžkem 2,25 g (91,6·fc), b.t89-100 °C. ' .... ...... .. . . .<·. .

Příklad 5

Příprava 4-chlor-2-(l-piperazinyl)-6-pyrrolidinopyrimidÍnu „.·. Roztok , 2,4-dichlor-6-pyrrolidinopyrimidinu (2,0 g, .9,17 mM). a- piperazinu (3,95 g, ,45,9 mM) v -ethanolu byl zahříván k varu pod zpětným chladičem 1 hodinu a odpařen. Odparek byl roztřepán mezi chloroform (100 ml) a 1 % hydroxid sodný (100 ml). Po oddělení fází byla organická fáze promyta vodou (2 x 50 ml), vysušena a odpařena. Odparek byl chromatografován na sloupci silikagelu v elučni směsi chloroform/methanol 9:1. Titulní produkt byl po rekrystalizací z hexanu získán s výtěžkem 1,66 g (67,6 %), b.-.: 77-92 °C. ,

Příklad 6

Příprava l-[(3α,16a)-eburnamenin-14-karbony1]-4- [4-chlor-2-pyrrolidino-6-pyrimidinyl]piperazinu a ΐ-[(3α,16α)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-(2-chlor-4-pyrrolidíno-6-pyriroidínyljpiperazinu

- 1-f(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[2,4-dichlor-6-pyriiniáinyl jpiperazin (2,00 g, 3,81 mM) byl po malých částech přidán k pyrrolidinu (20 ml) při teplotě nižší než 10 °C, Reakční směs byla.míchána při laboratorní teplotě 1 hodinu a odpařena. Zbytek byl roztřepán mezi chloroform (40 ml) a 1 % hydroxid sodný (10 ml). Po oddělení fází byla organická fáze vysušena a odpařena. Odparek byl chromatografovan na sloupci silikagelu v elucn.i, smes^ --chlorOíórm/m'ethanól⁼''9'9: i“ Jako první byl získán méně.jp.plární l-'[ (3a, 16a)-eburnamenin-14-karbonyl ]-4- [4-chlor-2-pyrro1 idino-6-pyrimidi'nyl jpiper.azin, po rekrystalizaci ze směsi ether-hexan :s výtěžkem 2,01 g- (88,2 *), b:t.: °C.

Další 'elucí byl získán polárnější 1-((3a, 16q)-ebuřh-araenin-14-karbonyl]-4-[2-chlor-4-pyrrolidino-6-pyrimidinyl]piperazin po rekrystalizaci ze směsi ether-hexan s výtěžkem 0,13 g (5,7%), b.t.: 169-200 °C. . '

Příklad 7 - --;///\

Příprava 1-f (3a, 16a)-eburnamenin-14-karbony.T:i-4-[4.' · . ‘3v·

-chlor-6-pyrrolidino-2-pyrimidiny1]piperazinu l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[4,6-dichlor-2-pyrimidinyljpiperazin (2,00 g, 3,81 mM) byl po malých částech, přidán k pyrrolidinu (20 ml) při teplotě nižší než 1.0 ®C . . Reakční směs byla míchána pří laboratorní teplotě 1 hodinu a odpařena. Zbytek byl roztřepán mezi chloroform (40 ml) a 10 fc hydroxid sodný (10 ml): Po oddělení fází byla organická fáze. vysušena a odpařena. Získaný produkt byl rekrysatlizován ze směsi ether-hexan· s výtěžkem 2,10 g (92,2 .*)· titulní sloučeniny, b.t.: 176-181 °C.

Příklad 8 . ..

Příprava l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]“4-[4-chlor-2-pyrrolid ino-6-pyrimidinylJpiperazinu l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl)piperazin (5,0 g,

12,8 mM) a 4,6-dichlor-2-pyrrolidinopyrimidín (2,5 g, 11,5 mM) byly rozpuštěny v acetonitrilu (100 ml), přidán uhličitan draselný (5,0 g). Reakční směs. byla zahřívána k varu pod zpětným chladičem 40 hodin a Odpařena, mezi chloroform (100 ml) a vodu (40 ml).

vysušena a odpařena, ze směsi ether-hexan

Zbytek byl roztřepán Po oddělení fází byla Získaný produkt byl s výtěžkem 5,87 g organická fáze rekrysatlizován (85,3 «) titulní sloučeniny, b.t.: 210-220 ⁰C,

Příklad 9

Příprava l-((3a,16ď)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[4-chlor-.6-pyrrolidíno-2-pyrimidinyl ]piperazinu a 1- [(3ά,16α)-eburnámenin-14-karbonyl3-4-[2-chlor-4-pyrrolid ino-6-pyrimidinyl]piperaz inu

T-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonylJpiperasin (5,0 g,

12,8 mM) a- 2,4-dichlor-.6-pyrrolidinopyrimidÍn (2,5 g, 11,5 mM) byly rozpuštěny v acetonitrilu (ICO ml)., přidán uhličitan draselný (5,0 g). Reakční směs byla zahřívána k varu pod zpětným chladičem. .40 hodin a odpařena. Zbytek byl roztřepán mezi chloroform (100 ml) a vodu (40 ml). Po oddělení fází byla organická fáze vysušena a odpařenaOdparek byl chromatografován na sloupci silikagelu v eluční směsi chloroform/methanól 99:1. _: Jako první byl* získán méně polární l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[4-chlor-6-pyrrolidiho-2-pyrimidinyl]piperazin, po. rekrystalizací ze směsi ether-hexan^: s * výtěžkem 5,16 g (75,2 «), b.t£: 176-181 °C.

Dalšr eluci byl získán polárnější l-[(3a,16a)—eburnamenin-14-karbonyl]-4-[ 2-chlór-4-pyrroliáino-6-pyrimidinylJpiperazin po rekrystalizací ze směsi ether-hexan s výtěžkem 0,475 g (6,92«), b.t.: 169-200 «O.

Příklad ío

Příprava . 1-[(3α,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[4

-chlor-2-pyrrolidino-6-pyrimidinyl Jpiperazinu

K roztoku čerstvě připraveného 4-chlor-6-(1-piperazinyl)-2-pyrrolidinopyrimidinu (2,0 g, . 7,47 mM) v methylenchloridu (20 ml) byl přidán po malých dávkách (3a,16a)-eburnamenin-14-karbonylchlorid hydrochlorid (2,96 g,

7,84 mM) a uhličitan draselný (1,08 g) při -15 °C. Chlazení reakční směsi bylo přerušeno a její teplota vystoupila na teplotu okolí. Poté byla přidána voda (10 ml.) a směs míchána 10 minut. Po oddělení fází byla organická fáze dvakrát promyta vodou, sušena a odpařena. Odparek byl rekrystalizován ze směsi ether-hexan. s výtěžkem 4,03 g (90,3 %) titulní sloučeniny, b.t. : 210-220 °C.

_______- -4«.i-*'*- -—·-·** ····.-**

Příklad 11 ____ ...... ...____

Příprava . 1-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[4-. -chlor-6-pyrrolid.ino-2-pyrimidinyl ]piperazinu

Čerstvě připravený 4-chlor-6-(l-piperazinyl)-2-pyrrolidinopyrimiďin a (3a,16a)-eburnamenin-14-karbonylchlorid hydrochlorid se nechaly reagovat v podmínkách uvedených, v příkladu 10 s výtěžkem 88,1 $ titulní sloučeniny, ϊ *

b.t.: 176-181 °C.

Příklad 12 ·_ .

- Přípravh; ./.4-chlor-2,6-bis(pyřřoÍidíno)pyriniidinú a 2. -chlor-4>6-bi5(pyrrolidÍno)pyrimidinu . . .... ...... ,

2,4-dichlor-6-pyrrolidÍnopyriinidin (10 g) byl. po malých dávkách přidán k pyrrolidinu (40 ml) při teplotě do 10 °C za stálého míchání. Směs byla míchána 1 hodinu při laboratorní . .. teplotě aodpařena. Zbytek byl roztřepán mezi chloroform (150 ml) a 10 % hydroxid sodný (30 ml). Po oddělení fází byla organická fáze promyta vodou (4 x 50 ml), vysušena a odpařena, ¥ , ·

Odparek byl chromatografován na sloupci silikagelu v eluční směsi hexan/octan ethylnatý 19:1. Jako první byl získán 4-chlor-2,6-bis(pyrrolidino)pyrimidin, po rekrystalizací z hexanů s výtěžkem 11,07 g (83,74 %), b.t.: 78-81 °C.

¹H-HMR (60 MHz,. CDC13) δ ppm: 5,67 (s\ 1H, 5-H)

Další . eluci směsí 9:1 byl získán polárnější

2-chlor-4,6-bis(pyrrolidino)pyrimidin, po rekrystalizaci z hexanu s výtěžkem 1,38 g (10,46 $), b. t. : 92-94 °C.

’H-NHR (60 MHz, CDCI3 ) δ ppm: 4,91 (s, 1H, 5-H)

Příklad 13

Příprava 1-((3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl)-4-(2,4-bis(pyrrplidino)-6-pyrimidinylJpiperazinu

Roztok l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[4-chlor-2-pyrrolidino-6-pyrimidinyljpiperazinu (1,00 g) v pyrroiídinu (10.ml) .byl zahříván k varu pod zpětným chladičem 5 hodin a odpařen. Zbytek byl roztřepán mezi chloroform (20 ml) a 10 % hydroxid sodný (5 mi). Po oddělení fází byla organická fáze-dvakrát promyta vodou, vysušena a odpařena. Odparek byl rekrystalizován z acetonitrilu s výtěžkem 0,,93 g (91,7 %y titulní sloučeniny, b.t267-369 °C, [q]o^2l= -50,9° (c=2, 1 M

HCl) .

Příklad 14 iPřípravá . l-[(3a,16a)-eburnamenin.'-14-karbonyl]-4-[2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidinylJpiperazinu

1-[ (3a, 16a)-eburnameniri-14-karbonyl)-4-(2-chlor-6-pyrrolidino-4-pyrimidinylJpiperazin se nechal reagovat v podmínkách uvedených v příkladu.13 s výtěžkem 89,6.^titulní sloučeniny,, b.t.: 267-269 °C.

Příklad 15 . .; ?>:' ¹ - ^; ' k

Příprava l-[ (3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl)-4-(2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidinylJpiperazinu. *

Roztok l-[(3a,16d)-eburnamehin-14-karbonylJpiperazinu (2,0 g, 5,12 mM) a 4-chlor-2,6-bis(pyrrolidino)pyrimidinu (3i88 g, 15,36 mM) v N-ethýlmorfolinu (30 ml.) byl zahříván k varu pod zpětným chladičem v dusíkové atmosféře 40 hodin.

Poté byla reakční směs odpařena za normálního tlaku, zbytek po '1 přidání vody (30 ml) kodestilován s vodní parou, dokud teplota páry nedosáhla 100 °C. Po ochlazení byl odparek roztřepán mezi chloroform (50 ml) a 10 % hydroxid sodný (10 ml). Po oddělení »

- 33 fází byla organická fáze vysušena a chloroform ^odpařen. Produkt byl přečištěn na sloupci silikagelu v eluční směsi chloroform-methanol (99:1 -> 95:5) a rekrystalizován z ethanolu s výtěžkem 2,84 g (91,3 $) titulní sloučeniny, b.t.: 267-269 °C.

Příklad 16

Příprava l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidinylJpiperazinu

1-[(3α,16q)-eburnamenin-14-karbonylJ-4-(2,4-dichlor-6-pyrimidinylJpiperazin . se nechal reagovat s pyrrolidinem v podmínkách uvedených v příkladu 13 s výtěžkem 89,3 % titulní sloučeniny, b.t.: 267-269 °C.

Pí ϊ k Ι'Ηά <17 '.....

Příprava 2-(l-piperazinyl)-4,6-bis(pyrrolidÍno)pyrimidínu Směs 2-chlor-2,6-bis(pyrrolidino)pyrimidinu (10,0 g,

34,7 mM), piperazinu (11,95 g, 138 mM) -.a N-ethylmorfolinu (150 ml), byla zahříván k varu pod zpětným chladičem v dusíkové atmosféře. 25 hodin. Poté·byla rozpouštědla oddestilována za normálního tlaku, zbytek po přidání vody (100 ml) kodestilován . s vodní parou, dokud teplota páry nedosáhla 100 °C. Po „ochlazení; byl: odparek -roztřepán mezi chloroform (200 ml) a 10 % hydroxid sodný (30 ml). Pó odděleni;fází byla organická' fáze promyta vodou (4x50 ml) vysušena a chloroform odpařen. Produkt byl přečištěn na sloupci silikagelu v eluční směsi chloroform-methanol 9:1a rekrystalizován z hexanu s výtěžkem 8,54 g. (81,4 4) titulní sloučeniny, b.t. : 152-160 °C.

¹ H-NMR (.60 MHz, CDCI3 ) δ ppm: 4,83 (s, 1H, 5-H)

Přiklaď 18 '

Příprava l-[(3a,16a)-eburnamenÍn-14-karbonyl]-4-[4,6^f-bis(pyrrolidino)-2-pyrimidinyljpiperazinu .1 -((3a, 1.6a)-eburnamenin-14-karbonyl ]-4-[4-chlor-6-pyrrov lidino-2-pyriffiidinyljpiperazin . se nechal reagovat s pyrrolidinem v podmínkách uvedených v příkladu 13 s výtěžkem 90,2 % titulní sloučeniny, b.t.: 275-278 °C.

Příklad 19

Příprava l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl)-4-(4,6-bis(pyrrolidino)-2-pyrimidinylJpiperazinu

1-((3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]piperazin se nechal reagovat s 2-chlor-4,6-bis(pyrrolidino)pyrimidinem v podmínkách uvedených v příkladu 15 s výtěžkem 89,5 % titulní sloučeniny, b.t.: 274-277 °C. )

Příklad 20 . ‘

Příprava l-[ (3a, 16a)-eburnameniii-14-karbónyl )-4-( 4,6-bis(pyrrolidino)“2-pyrimidinyl jpiperažihu ^J

K ..roztoku '2-(l-:piperazinyÍ J-'4.,6-bis('pýrr'ol'idino.)pyrimidinu (1,0 g, 3,3.1 mM) v methylen Chloridu (10 ml) byl přidán po malých dávkách nejprve (3a,16a)-ebuřnamenin-14-karbonylchlorid hydrochlorid (1,31 g, ^ř3,47 mM) a uhličitan draselný (0,48 g) při -15 °C. Chlazení reakční směsi bylo přerušeno a její teplota vystoupila na.teplotu okolí. Poté byla přidána voda (5 ml) a směs’míchána 10 minut/ Po oddělení fází byla organická . fáze dvakrát přomýta vodou, sušena a odpařena. Odparek byl rekrystalizóván z acetonitrilu

s výtěžkem í,81 g	(90,3 %) titulní sloučeniny,	b.t.
275-278 .° C. ·'» v S c,. ® ň	, i.. ; .7 - ·.;·· .
Příklad 21	1 · t •j. ·* 1 ’

Příprava 1-((3a,16a)-eburnaffienín-Í4-karbomyl]r4-[4,6-bis(pyrrolidino)-2-pyrimidinyl]piperazinu

1-[(3a,16aj-eburnamenin-14-karbonyl)-4-(4,6-dichlor-2-pyrimidinylJpiperazin se nechal. reagovat . s pyrrolidinem v podmínkách uvedených v příkladu 13 s výtěžkem 89 ^.titulní sloučeniny, b.t.: 275-278 °C.

Příklad 22

Příprava 1-[(16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidinylJpiperazinu *(16a)-Eburnamenin-14-karbonylchlorid hydrochlorid se nechal reagovat s piperazinem v podmínkách uvedených v příkladu l a vzniklý produkt dále reagoval s 4-chlor-2,6-bis(pyrrolidino)- -pyrimidinem v podmínkách uvedených v příkladu 15 s výtěžkem 87 % titulní sloučeniny, b.t.: 235-238 °C, [a]D²⁵=+20° (c=l, 1 M HCl).

Příklad 23 '

Příprava l-((3a)-eburnawenin-14-karbonyl]-4-í2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidiny1Jpiperazinu . (3a)-Eburnamenin-14-karbonylchlorid hydrochlorid se nechal reagovat s piperazinem v podmínkách uvedených v příkladu 1 a vzniklý produkt dále reagoval s 4-chlor-2,6-bi.s;(pyrrolidino)pyrimidinem v podmínkách uvedených v. příkladu 1.5 s výtěžkem 8.9,4 Λ titulní sloučeniny, '•b.t'.: 24Ϊ-243C ,*^J[ a]n ^{2 5} =+19° (Č=l Γ 1’M’^HC19 . “ '' “ '

Příklad 24 - ' .

Příprava 4,6-dichlor-2-(l-adamantylaminoJpyrimídinu a 2₁6-dichlor~4-( l-adamahtylamino)pyrimidinu

K roztoku ’ 1-aráínoadamantanu (70,3 g, 465,6 mM) v tetrahydrofuranu (650 ml) byl přidán 2,4,6-trichlorpyrimidin (40,6 g, 225,6 mM) a reakční směs byla míchána 24 hodin. Poté byl krystalický .1-aminoadamantan hydrochlorid odfiltrován., filtrát odpařen, a odparek chromatografován na sloupci silikagelu v eluční soustavě hexan-aceton 49:1..Jako první byl získán 4,6-dichlor-2-(l-adamantylamino)pyrimidiii, po rěkřystaíizaci z hexanu/ s výtěžkem 28,74 g (43,5 %), b.t.: 151-155 °C. '-'γ“Ή-NMR (60 MHz, CDCls ) δ ppm: 6,55 (s, 1H, 5-H).

' * Další eluci směsí hexan-acetón 24:1 byl získán polárnější '^{ 2,6-dichlór-4-(l-adamantylámíno)pyrimidin, po rekrystalizací z hexanu, s výtěžkem 35,56 g (53,8 %), b.t.: 193-196 °C.

Ή-NMR (60 MHz, CDCI3) δ ppm: 6,33 (s, 1H, 5-H)

Přiklaď 25 ' ·

Příprava 2,4-bis(l-adamantylamino)-6-chlorpyrimidinu ♦

Roztok 4,6-dichlor-2-’(l-adamantylamino)pyrimidinu (26,0 g, 87,25 mM) a l-aminoádamantanu (39,5 g, 261,6 mM) v n-butanolu (200 ml) byl zahříván k varu pod zpětným chladičem 75 hodin a odpařen. Odparek byl suspendován v etheru (400 ml), suspenze odfiltrována a produkt po. vysušení chromatograficky přečištěn na sloupci silikagelu v chloroformu jako elučním činidle. Po rekrystalizací z etheru bylo získáno 23,94 g (66,44 %) titulní sloučeniny, b.t.: 232-236 °C.

¹H-NMR (60 MHz, CDCI3) δ ppm: 5,64 (5. 1H, 5-H)

Příklad 26

Příprava 2,4-bis(l-ádamantylaminoj-6-(l-piperazinyij-pyrimidinu . .

2,4-Bis (1 -adamantylamino ).-6-chlorpyrimidin se nechal reagovat s piperazinem v podmínkách -uvedených v příkladu 17 s výtěžkem .83,36 % titulní sloučeniny, b.t.: 168-175 °C, ¹H-NMR (60 MHz, CDCI3) δ ppm: 4,97 (s, 1H, 5-H)

Příklad 27 . - . .

Příprava l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl)-4-(2,4-bis (l-adamantylamino)-6-pyrimidinyl ].piperazinu . .

(3a, 16a)b-Eburnamenin-14-karbonylchlorid· hydrochlorid se nechal reagovat s 2,4-bis(l-adamantylamino)-6-(l-piperazinyl.)pyr.imidinem v podmínkách uvedených v příkladu 20 s výtěžkem 84,6 % titulní sloučeniny, b.t.: 270-273 °C,. .

Příklad 28 ' ... ..

Příprava 2-(l-adamantylamino)-4-chlor_6-pyrrolidiňo-pyřimidinu '

K pyrrolídinu (40 ml) přidán po malých dávkách

4,6-di.chlor-2-(l-7adamantylamino)pyrimidin/(10 g, .33,53 mM) za stálého míchání a chlazení při teplotě do 10. °C. Reakční směs byla dále míchána 1 hodinu při laboratorní teplotě a odpařena. Odparek byl roztřepán mezi chloroform (150 ml) a 10 % hydroxid sodný (30 ml). Po oddělení fází byla organická fáze promyta vodou (4x50 ml) sušena a odpařena. Odparek byl rekrystalizován z ethylacetátu s výtěžkem 9,60 g (86 %) titulní sloučeniny, b.t.: 173-180 °C.

¹H-NMR (60 MHz, CDCI3 ) δ ppm:. 5,62 (s, 1H, 5~H)

Přiklad 29

Příprava 2-(1-adamantylamino )-4-(1-piperazinyl)-6-pyrrolidinopyrimidinu

2-(1-Adamantylam ino)-4-chlor-6-pyrrolid inopyrimid in se nechal reagovat s piperazinem v podmínkách uvedených v příkladu 17' s výtěžkem 69,7 % titulní sloučeniny, h.t.: 160-164 <>C.

¹H-NMR (60 -MHz, CDCla) δ ppm: 4,87 (s, 1H, 5-H)

Příklad 30

Příprava l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[2-(l-adamantylamino)-6-pyrrolidino-4-pyrimidinylJpiperazinu (3a,'16á)-Eburnamenin-14-karbonylchlorid hydrochlorid. se 'nechal·' reagovat s 2-(l-adamantylamino)-4-(l-piperazinyl), 1 ·

-6-pyrrolidinopyrímidinem v podmínkách uvedených v . příkladu 20 s výtěžkem 88,8 % titulní sloučeniny, b.t.: 242-246 °C.

Příklad 31

Příprava 4,6-dichlor-2-(1,l-dimethylethylamino)pyrimidinu a. 2,6-dichlor-4-(l,l-dimethylethylamino)pyrimidinu

2,4,6-Trichlorpyrimidin (25 g, 136,3 mM) byl přidán po kapkách · do směsi ' 1-aminó-l,1-dimethylethanu (31,52 ml, 300 mM) a. tetrahydrofuranu (200 ml) pří teplotě 10 až 15 °c za stálého míchání a chlazeni, Směs byla míchána při laboratorní teplotě dalších 5 hodin, á odpařena. Zbytek byl roztřepán mezi chloroform (500 ml) a. 1.0 % hydroxid sodný (50 ml). Po oddělení fází byla organická fáze promyta vodou (4 x 150 ml), vysušena a odpařena. Odparek býl chromatografován na sloupci silikagelu v eluční směsi' hexaní/octan ethylnatý 9:1. Jako první byl získán 4,6-dichlor-2-(l, l-dimethylethyla.mino)pyrimidin, po rekrystalizaci z hexanu s výtěžkem 11,35 g (37,84 %), b.t.: 70-74 °C.

¹H-NMR (60 MHz, THF-de) δ ppm: 6,63 (s,.lH, 5-H).

Další elucí směsí hexan/octan ethylnatý 4:1 byl získán polárnější 2,6-dichlor-4-(l,l-dimethylethylamíno)pýrimidin po rekrystalizaci z octanu ethylnatého s výtěžkem 13,31 g (44,35 %) , b.t. : 192-195 °C.

Ή-NMR (60 MHz, THF-de ) δ ppm: 6,32 (s, IH, 5-H)

Příklad 32

Příprava 4-chlor-2-(1,1-dimethylethylamino)-6-pyrrolidinopyrimidinu

4.6- Dichlor-2-(1,1-dimethylethylamino )p'yrimidin se nechal reagovat s pyrrolidinem v podmínkách uvedených v příkladu 28 s výtěžkem 93 $ titulní sloučeniny, b.t.; 153-157 °C.

¹H-NMR (60 MHz, CDC13) δ ppm:. 5,67 (s, IH, 5-H)

Příklad 33

Příprava 2-(1,1-dimethylethylamino)-4-(1-piperazinýl )6-pyrrolidinopyri midinu

4-Chlor-2-(1,1-d imethylethylamino)-6-pyrrolidinopyřimidin se nechal reagovat s piperazinem v podmínkách uvedených v příkladu 17. s. výtěžkem 7'8,1 % titulní sloučeniny, b.t.: 162-165 ’C. ...

¹H-NMR (60 MHz, CDČls ) δ ppm; 4,87 (s, IH, 5-H)

Příklad 34

Příprava 1-[(3α,16a)-eburnamenin-14-karbony1)-4-[2-(1., 1-dimethylethylamino)-6-pyrrol i dino-4-pyri midinyl.Jpiperazinu (3a,16a)-Eburnamenin-14-karbonylchlorid hydrochlorid se nechal reagovat. s 2-(l,l-dimethylethylamino)-4-(l-piperaŽinyl)-6-pyrrolidinopyrimídinem v podmínkách uvedených v příkladu 20 s výtěžkem .94,7 % titulní sloučeniny, b.t.: 225-228 °C. _ . ... ;; .Příklad 35

Příprava 4.,6-dichlor-2-(2,2-áimethylpropylamino)pyrimidÍnu a 2,6-dichlor-4-(2,2-dimethylpropylamino)pyrimxdinu.

2.4.6- Tričhlorpyrimidin (25 g, 136,3 mM) byl přidán po kapkách do směsi l-amino-2,2-dime.thy.lpropanu (.23,84 g, 273,5 mM) a tetrahydrofuranu (200 ml) při teplotě 10 až 15 ?C za stálého míchání a chlazení. Směs míchána dalších .30 minut

- 39 -_____________ a odpařena. Zbytek byl roztřepán mezi chloroform (300 ml) a 10 % hydroxid sodný (50 ml). Po oddělení fází byla organická fáze promyta vodou (4 x 100 ml), vysušena a odpařena. Odparek byl chromatografován na sloupci silikagelu v eluční směsi hexan/octan ethylnatý 19:1. Jako první byl získán

4,6-.dichlor-2-(2,2-dimethylpropylamino)pyrimidin, po rekrystalizaci ze směsi ether-hexan s výtěžkem . 13,60 g (42,6 %), b.t.: .63-66 °C.

¹H-NMR (60 KHz, CDCli ) δ ppm: 6,.60 (s, IH, 5-H) _β. í

Další eluci směsí .hexan/octan ethylnatý 6:1 byl získán polárnější 2,6-dichlor-4-(2,2-dimethylpropylamino)pyrimidin po rekrystalizaci z hexanu s výtěžkem 14,2-4 g (44,6 %) , b.t.,:

77-79 °C. ' ~.... ____l·™...—---Ή-NMR '(6<ΓκΗζ / CDC13 ) δ ppmg 6 ~ -

Příklad 36 ' .

Příprava 4-chlor-2-(2,2-dimethyl propyl amino j.-6-pyrrolidinopyrimidinu

4,6-dichlor-2-(2,2-dim'ethylpropylamino)pyrimidinu se nechal reagovat s pyrrolidinem v podmínkách uvedených v příkladu 28 s výtěžkem .96,7 % titulní sloučeniny, b.t.: 147-150 °C.

¹H-NMŘ(60 MHz,' CDCI3 ) δ ppm: 5,67 (s, IH, 5-H)

Příklad 3,7 '· i - příprava .·' 2-(2,2-dimethylpropylamino)-4-(l-piperazinyl)- -6-pyrrolidinopyrimidínu . 2-(2,2-Dimethylpropylamino)-4-chlor-6-pyrroiidinopyriinidin se nechal reagovat s piperazinem v podmínkách uvedených v příkladu· 17.....s výtěžkem 76 % titulní sloučeniny, b.t.:

.118-120 °C.

Ή-NMR· (60 MHz, CDCls) δ ppm: 4,83 (s, IH, 5-H)

Příklad 38

Příprava l-[(3a,16a)-éburnamenin-14-karbony1J-4-(2-(2,2-dimethylpropylamino)-6-pyrrolidino-4-pyrimidinylJpiperazinu (3a,16a)-Eburnamenin-14-karbonylchlorid hydrochloríd se ·# nechal reagovat s 2-(2,2-dimethylpropylamino)-4-(l-piperazinyl )-6-pyrrolidinopyrimidinem v podmínkách uvedených v příkladu 20 s výtěžkem 81,0 % titulní sloučeniny, b.t.: 266-272 °C.

Příklad 39

Příprava 1-[ (3a, 16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[2-(4-morfolinyl)-4-e thy lamino-6-pyr iínidinyl]piperazinu (3a,16a)-Eburnamenin-14-karbonylchlorid hydrochlorid se nechal reagovat s 2-(4-moríolinyr)-4-ethylaoino-6-(1-plperazinylIpyriraidinem (uvedeným v GB patentovém popise č. 1 345 640) v podmínkách příkladu 20 za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad 40

Příprava 1-[ ( 3α, 16a)-eb.urnaineni-n-14-karbony 1 ]-4-[ 2-amino-4-(1*, 1-d i methy lethy iamino-6-pyr imid inyl ] p ipefaz i nu l-[ (3a, 1.6ů)-Eburnaraenin-14-káfbónyl Jpiperazin se nechal reagovat s 2-amino-4-chlor-6-(l, 1-dimethy lethy lam i no )pyri.midinem (uvedeným v německém, patentovém popise č. 2 0.06 145) v podmínkách příkladu 15 za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad 41

Příprava 2-cyklopentylaniino-4,6-dichlorpyrimidinu a . < · ·> .

4-cyklopentylamino-2,6-dichlorpyrimidinu ' .2,4,6-Trichlorpyrimidin se nechal reagovat scykiopentylaminem v podmínkách uvedených v příkladu 35 za vzniku obou sloučenin. Méně' polární 2-cyklopentylamino-4,6-dichlorpyrimidin byl připraven s výtěžkem 35,2 %, b.t.:,48-52 °C. Ή-NMR (60 MHz, CDCI3).δ ppm: 6,52 (s, 1H., 5-H)

Polárnější olejovitý 4-cyklopentylamiňo-2,6-dichlorpyrímidin byl připraven s výtěžkem 57,2

Ή-NMR (60 MHz, CDC13) δ ppm: 6,30 (s, 1H, 5-H)

Příklad 42 . Příprava 2-cyklopentylamino-4-chlor-6-pyrrolidinopyrimidinu

- 41 --4Z- 2-Cyklopentýlamino-4,6-dichlorpyrimidin se nechal reagovat s pyrrolidinem v podmímkách uvedených v příkladu 13 5 výtěžkem 72,4 % olejovité titulní sloučeniny.

¹H-NMR (60 MHz, CDC1₃ ) δ ppm: 5,72 (s, 1H, 5-H)

Příklad 43 .

¹ ’ Příprava l-{(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-(2-cyklopentylamino-6-pyrrolidíno-4-pyrimidinyl)piperazinu

1-[(3d,16a)-Eburnamenin-14-karbonyl]píperazin se nechal reagovat s 2-cyklopehtylamino-4-chlor-6-pyrrolidinopyrimidinem v podmínkách příkladu- 15.

Příklad 44 i- iiř— .--..r____ί

r.t,.

Pnprava 4,6-Čichlor-2-(2,2,6,6-tetramethyl yl-pi per.i di.ny.1)

-'pýrimidinu’

Směs 2,4,6-trichlorpyrimidinu. (25 g, 136,3 mM) a

2,2,4,4-tetramethylpiperidinu (46,3 ml, 272,6 mM) byla zahřívána k varu pod. zpětným chladičem 50 hodin, ochlazena a suspendována v hexanu (250 ml). Nerozpustný podíl byl odfiltrován', filtrát odpařen á odparek roztřepán mezi chloroform (300 ml) a vodu 10 % hydroxid sodný (50 ml). Po oddělení fází byla organická fáze promyta vodou (4 x 100 ml), vysušena a .odpařena,. Odparek byl chromatograf ován na sloupci ;

·.; silikagelu-v- hexanu jako elučním činidle. Titulní sloučenina byla získána po rekrystalizaci s výtěžkem 8,04 g- (20,47 %}, b.t. : 89-90 °C. ' ·, . ' . .. .. _r-. .

¹H-NMR (60 MHz, CDCI3) δ ppm: 6,53 (s, 1H, 5-H)

Příklad 45 . . .. _;,.₄.

Příprava 4-chloř-2-('2^:12~,6,6-tetramethyl-l-piperidinyl)-6-pyrrol idínopyr.imidinu

4,6-Dichlor-2-(2,2,6,6-tetramethy1-1-piperidinyl)pyrimidin se nechal reagovat s .pyrrolidinem v podmínkách uvedených v příkladu 13 s výtěžkem 75,08 % titulní sloučeniny, b.t.: 130-135 °C.

¹H-NMR (60 MHz, CDCI3 j δ ppm:. 5,76 (s, 1H, 5-H)

Příklad 46

Příprava l-f(3a,i 6a)-eburnaroenin-14-karbonyl(-4-(2-(2,2,6,6-tetramethyl-1-pípeří dinyl)-6-pyrroli dino-4-pyrimidinyl)piperazinu l-[(3α,16a)-Eburnaroenin-14-karbonyljpiperazin se nechal reagovat s. 4-(2-(2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyl)-6-pyrro1idinopyrimidinem v podmínkách uvedených v příkladu 15.

Příklad 47

Příprava l-((3a,16a)-eburnamenin-14-kárbonyl(-(hexahydro-1H-1,4-dÍazepin.u) (3a,16a)-Eburnamenin-14*karbonylchlorid: hydrochlorid se nechal reagovat s. homo.piperazinem v. podmínkách uvedených v příkladu 1 za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad' 48

Příprava l-((3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl)-4-[2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyr imidinyl ] - (hexahydro’-lH-l ,4-diazepinu)

Titulní sloučenina . byla připravena reakci l-[ (3a, I6a)-eburnamenin-14-karbonyl ]-(hexáftyd'ro-lH-l,4-diazepinu) s 4“chlor-2,6-bÍs'(pyrrolidino)pyrimidinem v podmínkách' uvedených v příkladu 15.

Příklad 49 . · . ,

Příprava l-f (3α, 16a)-eburnamenin-l4-yloéthyl ]-4-(2,.6- -bis (pyrrol idino)-4-pyrimidinyl Jpipgraziriů.' _f

Roztok l-[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl)-4-(2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidinyl]piperazinu (1,95 g, 3,2 mM) v tetrahydrofuranu (65 ml) byl přidán po kapkách během 10 minut k suspenzi LiAÍH< (1,3 g, 34 mM) v tetrahydrofuranu (65 ml) za stálého míchání v atmosféře argonu. Reakční směs byla. zahřívána k varu pod zpětným chladičem 3 hodiny. Po ochlazení byl nadbytek, redukčního činidla rozložen postupným přidáním směsi vody (1,3 ml) a 15 ΐ hydroxidu sodného (1,3 ml) a vody (5,2 ml).· Sraženina .. byla odfiltrována, promyta tetrahydrofuranem, spojené, filtráty odpařeny. Odparek byl chromatografován na .sloupci silikagelu v eluční směsi . - 43 . — **· · cyklohexan/diethylamin 9:1. Titulní sloučenina byla získána jako pěna výtěžkem 1,00 g [α]ο²³=-33° (jako trihydrobromid.

c = l, H₂0).

)

Příklad 50

Příprava 1-[(3α,16a)-eburnamenin-l4-ylmetbyl]-4-[2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidinyljpiperazin trihydrobromidu

1-E(30/16a)-eburnamenin-14-ylmethyl]-4-[2,6-bis(pyrrolidiho)-4-pyrimidinyljpiperazin (1,00 g, 1,69 mM.) byl suspendován v.isopropanolu (10 ml) a k suspenzi byl přidán .2,5 M roztok bromovodíku v isopropanolu (2,02 ml, 5,06 mM). Krystalický produkt byl Odfiltrován a sušen s výtěžkem 0,65 g .~(46_%)\soli titulní^slouřeniny. ~ j_____________. ----Příklad 5.1

Příprava roztoku pro. injekční.použití

V roztoku pyrosiřičitanu sodného (0,05 %. hmot.) v odkysličené vodě pro injekční použití byla rozpuštěná účinná složka. Současně byl v odkysličené vodě pro injekční použití rozpuštěn sorbát draselný (0,1 V hmot.) a chlorid sodný . (v množství požadovaném z hlediska isotonicity roztoku). Po spojení obou roztoků byl výsledný roztok doplněn odkysličenou vodou pro injekční použití, na určený objem.. Přípravek býl .přefiltrován přes membránový filtr o velikosti pórů 0,2 um kvůli odstranění, bakterií a cizorodých látek.. Filtrát býl

rozplněn do ampulí. pod dusíkem. Výhodné složení 1 ml injekčního roztoku:		.!?.
účinná složka	10 mg		A
/ pyrosiřičitan sodný	5 mg
chlorid sodný	7 mg
voda pro injekce	do 1 ml

Průmyslová využitelnost

Sloučeniny obecného vzorce I předkládaného vynálezu vykazují výrazný antioxidační účinek (mohou působit jako inhibitory peroxidace tuků u savců, včetně člověka). Nalézají terapeutické využití v řadě patologických procesů souvisejících s akumulací reaktivních volných kyslíkových radikálů (02).

PATENTSBRVÍS

Praha a.s.

Claims (13)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Nové deriváty eburnameninu obecného vzorce I kde '

   R¹ a R² podobně jako R³ a R* jsou nezávisle na .sobě vodík, alkylová skupina C2-6, alkenylová skupina 1

   C2-..6; nebo alicyklická skupina C3-10 s jedním až třemi kruhy, která je případně ještě substituována alkylovou skupinou C2-6 nebo alkenylovou skupinou C2 - β; nebo

   R'\₍; a R² . ·a/nebo:R³ a R⁴ spolu, se .sousedním dusíkovým atomem a případně š. dalším kyslíkovým nebo dusíkovým atomem vytvářejí čtyř- až šestičlenný nasycený nebo nenasycený kruh, případně substituovaný alkylovou skupinou C1-6 nebo alkenylovou skupinou C2-.e;

   dva ze symbolů X, -Y- a Z znamena j í dusík,-zatímco třetí je methinová skupina;:

   n je 1 nebo 2;

   V znamená kyslík nebo dva atomy vodíku; a vlnovková čárka představuje sterické polohy α-/α-, α-/β-, β-/α-; a ·.

   adiční soli těchto látek kyselinami a jejich solváty.
2. 2. sloučenina zvolená ze skupiny látek:

   1- [(3α,16a)-eburnamenin-l4-karbonyl]-4-[2,4-bis(pyrrolidino)-6-pyrimidinyl]piperazin

   1-((3α,16a)-eburnamenin-l4-karbonylJ-4-(2,6-bi s(pyrro1 i.d i no )-4-pyr imid i ny 1 ] piperazin l-((3a,16q)-eburnamenin-14-karbonyl]-4-[4,6-bis(pyrro1 idino)-2-pyri midinyl]piperazin.

   1- [ (16a)-.eburnamenin-14-karbonyl ] -4- ['2,6-bis(pyrro1idino)-4-pyrimidinyl]piperazin l-[(3a)-sburnamenin-14-karbonyl]-4-(2,6-bis(pyrrolidino)-4-pyrimidinyllpíperazin

   1-[ (3ů, 16a)-eburnamenin-14-kar.bonyl ]-4-[ 2,4-bis (1-adamantylamino)-6-pyrimidinyllpíperazin .

   l-[(3α,16α)-eburnamenin-14-karbonyll-4-t2-(l-adamantylaQino)-6-pyrrol·idíno)-4-pyrimidinyl 1 piperazin

   1-[ (3a, 16a.)ⁱ-eburnamenin-14-karbonyl J-4-f 2-( 1,1-d.imethylethylamino)-6-pyrrolidiňo)-4-pyrimidinyl piperazin l-[ (3a, 16a)-eburnamenin-14-karbonyl J-4-[2-(2,2-d.imethylpropylami.no)-6-pyrrolidino)-4-pyrimidinyl J, piperazin

   1 —[(3 a,16a)-eburnamenin-l4-karbonyl]-4-[2-(4-morfolinyl)-4-ethylamino-6-pyrimidinyllpíperazin /1-.( (3a, 16a)-éburnamehin-14-karhonyl ]-4-(2-amino-4-( 1,1dimethylethylamino)-6-pyrimidiny1lpíperazin l-[ (3α, 16a).-ebúrnamenin-1.4-karbonyl ]-4-(2-cyklopenty1 amino-6-pyrrolidino-4-pyrimidinyl)piperazin

   1 —[(3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl)/4-(27(2,2,6,6-tetramethy1-1-piperidiny1)-6-pyrrolidinq-4-pyrimidÍnyl ]piperazin - ' · ' l“((3a,16a)-eburnamenin-14-karbonyl3-4-[2,6-bis(pyrr.o1 idino)-4-pyrimi dinyl 1-(.hexahydro-lH-1,4-diazepin) . l-[(3a,I6a)-eburnamenin-14-karbonylJ-4-[2,6-bis(pyrro1idinó)-4-pyrimidinyllpíperazin , . .

   stejné jako adiční soli těchto látek s. kyselinami.

   -47---....... ·......*.....
3. 3. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, ze jako účinnou složku obsahuje terapeuticky účinné množství derivátu eburnameninu obecného vzorce I, kde R¹, R², R³, R⁴, χ, γ, Z, n, ff a vlnovková čárka mají stejný význam jako v nároku 1, nebo farmaceuticky přijatelné adiční soli těchto látek s kyselinami.
4. 4. Způsob přípravy nových derivátů eburnameninu obecného vzorce I .

   kde.

   R¹ a R² podobně jako R³ a R⁴ jsou nezávisle na sobe ··-· ‘- ^ΐ J '· · vodík, alkýlová skupina C2-6, alkenylová skupina ;Cz-β; nebo alicyklická skupina C3-1 o s jedním až třemi .kruhy, která* jé případně ještě substituována

   ..... - alkylovou skupinou Cz'-e ' nebo alkenylovou skupinou

   C2- 6; nebo

   R^A a R² a/nebo R³ a. R⁴ spolu se sousedním dusíkovým atomem ' á případně s dalším kyslíkovým .nebo dusíkovým atomem vytvářejí čtyř- až šestičlenný nasycený nebo nenasycený kruh, případně substituovaný alkylovou skupinou Ci-b nebo alkenylovou skupinou Cz-e;

   dva ze symbolů X, Y a Z znamenají dusík, zatímco třetí je methinová skupina;

   n je 1 nebo 2;

   W znamená kyslík nebo dva atomy vodíku; a vlnovková čárka představuje sterické polohy α-/α-, α-/β-, (3-/α-; a adiční soli těchto látek kyselinami a jejich solváty, vyznačující se tím, že zahrnuje

   a) reakci eburnamenínkařbonyl chloridu vzorce V,

   EBU-CO-C1 (V) kde vlnovková čárka má výše uvedený význam, s derivátem piperazinu vzorce X kde n má výše uvedený význam, ' réakci vzniklého 1-(eburnamenínkařbonyljpiperazinu vzorce IV

   EBU-CO-N \jH (IV) CH.) 2 n ; ' ' Ať <, Viír kde n a vlnovková . čárka máji výše .uvedený význam

   s 2,4,6-trichlorpyrimidinem, separaci takto získané směsi izomerů obsahující l-eburnameninkarbonyl-4-.(4,6-dichlorpyrimidin-2-yl Jpiperazin vzorce lila (lila) a l-eburnameninkarbonyl-4-(2,4-dichlorpyrimidin-6-yl)piperazin vzorce Illb kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam.na' jednotlivé ' izomery, dále „ reakci 1 molu získaného l-eburnameninkarbonyl-4- (4,6-d i chlorpyr i mid in-2-y 1.) p iperaz inu vzorce , lila s 2 moly aminu obecného vzorce HNR¹R² , kde Ř¹ a R² jsou stejné jako R³ a R⁴ , v jednom nebo dvou stupních, za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde R¹ a R² jsou stejné jako R³ aR⁴, X a Z představují

   - dusík, Y je methinová skupina a n a vlnovková čárka mají*, výše uvedený význam; nebo;

   reakci 1 molu l-eburnameninkarbonyl-4-(4,6-dichlorpyrimidin-2-yl)piperazinu. vzorce lila ?s 2 moly aminu obecného vzorce HNR¹R², kde R¹ a R² se liší od R³ ‘ ' á R⁴ ··' a -následně ' . ... ... reakci' 7 vzniklého ’l-ebůrnámeninkarbonyl-4-(4-amino-6-chlorpyr imidin--2-yl )piperazinu · obecného vzorce Ila at , kde R¹ , R², na vlnovková čárka malí výše uvedený význam

   A s aminem obecného vzorce HNR³R⁴, kde R³ a R⁴ mají výše uvedený význam, za vzniku eburnameninových derivátů . obecného vzorce I, kde se R¹ a R² liší od R³ a R⁴ , X a Z představují dusík, Y je methinová skupina a n a vlnovková čárka maj.í. výše uvedený význam; nebo reakci 1 molu l-eburnameninkarbo'nyl-4(2,4 -dichlorpyrimidin-6-yl)piperazinu vzorce Illb s 2 moly aminu obecného vzorce HNR¹R² v jednom nebo dvou stupních za vzniku eburnameninových. derivátů obecného . vzorce I, kde R¹ a R² jsou stejné jako R³ a R⁴, X a Y představují dusík, Z je methinová skupina a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo ' reakci . 1 molu l-eburnawenihkarbonyl~4-(2,4'“dichlorpyrimidin-6-yl)piperazinu vzorce Illb s 1 molem aminu obecného vzorce HNR¹R² , kde R¹ a R² se liší od R³ a R⁴., ža vzniků eburnameninových derivátů obecného vzorce . I, kde R¹ a R² se liší od R³ a R⁴ , X a Y představují ' dusík, Z je methinová skupina, nebó Z a Y představují »; -^; dusík,. X je methinová. skupina a n a vlnovková čárka mají . výše uvedený význam; .

   ř separaci jednotlivých izomerů z . izomerní, směsi . , . - ^f. . >' - '. g .· obsahující 1-eburnameninkarbony1-4-(2-amino-4-chlorpyrimidin-6-yl)piperazin obecného vzorce Ilba

   51 ti

   EBU-CO- (llba) a l-eburnameninkarbonyl-4-(4-amino-2-chlorpyrimidin-6- ”

   -yl)piperazin obecného vzorce Ilbb ' . '« kde R¹ , R², na vlnovková čárka mají výše uvedený význam reakci 1. molu každého z izomerů s aminem obecného vzorce HNR³R⁴, kde R^a R² se liší od R³ a R⁴ , za vzniku eburnamenlnových derivátů obecného, vzorce I, kde se R¹ a R² liší od R³ a R⁴ , X a. Y představují dusík, Z je methinová. skupina,’ nebo' Z a Y představují dusík, X je methinová skupina ana vlnovková čárka mají výše uvedený, význam; nebo . . .. .

   al) reakci l-(eburnameninkarbonyl)piperazinu vzorce IV, kde h a vlnovková Čárka mají výše uvedený význam s 2,4,6-trIchlorpyrimidinem, separaci jednotlivých izomerů z izomerní směsi obsahující l-eburnameninkarbonyl-4-(4/6-dichlorpyri- - - ^: . * -? ; \ ^; ' '· mídin-2-yl )piperazin .. vzorce - -lila a -1-eburnámenihkarbonyl-4-(2,4-dichlorpyrimi.din-6-yl )piperazin vzorce Illb, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, dále reakci 1 molů připraveného 1-ebuřnameninkarbonyl^-4-(4,6-dichlorpyrimidln-2-y1)plperazinu vzorce lila s 2 moly aminu obecného vzorce HNR¹R² , kde R¹ a R² jsou stejné jako R³ a R⁴ , v jednom nebo dvou stupních za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde R’ a R² jsou stejné jako R³ a R⁴ , X a Z představují dusík, Y je methinová skupina a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo reakci 1 molu l-eburnameninkarbonyl-4-(4,6-dichlorpyriraidin-2-yl)piperazinu vzorce lila s 1 molem aminu obecného vzorce . HHR¹R^Z, kde R¹ a R² se liší od R³ a R⁴, za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde se R¹ a R² liší od R³ a R⁴ , X a Z představují dusík, Y je methinová skupina a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, dále reakci připraveného l-ebuřnameninkarbonyl-4-(4-amino-6-chlořpyrimidin-2-ylJpiperazinu obecného vzorce Ha, kde R¹ , R^z , n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s aminem obecného vzorce HNR³ R⁴ , kde R³ a R⁴ se liší oa R¹ a R² , za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde se R¹ a R^z liší od R³ a R'⁴ , X a Z představují- dusík, Y je methinová skupina a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, nebo reakci 1 molu l-eburnameninkarbonyl-4-(2,4-dichlorpyrimidin-6-yl)piperazinu vzorce Illb s 2 moly aminu obecného vzorce HNR’R^Z, -kde R¹ a R² jsou stejné jako. R³'a R⁴, y jednom nebo dvou stupních za vzniku eburnameninových .derivátů obecného vzorce I,. kde R¹ a R² jsou stejné.jako. R³ a R⁴, X a Y . představují dusík, ..Z je methinová skupina a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo reakci 1 molu l-eburnameninkarbonyl-4·^ (.2,4-dÍchlorpyrimidin-6-ýl)piperazinu vzorce Illb s 1 molem; aminu obecného vzorce HNR¹R², kde R¹ a R² se, liší od R³ a R⁴ , dále.

   * separaci jednotlivých izomerů z izomerní směsi obsahující l-eburnameninkarbonyl-4-(2-amíno-4-chlor• · . v .

   pyrimidin-6-yl)píperazin obecného· vzorce Ilba a 1-eburnameninkarbonyl-4-(4-amino-2-chlorpyrimidi n-6“yl.)-piperazin obecného vzorce Ilbb, kde R¹ a R² , ~ 53 n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, dále reakcí 1 molu připraveného izomeru s 1 molem aminu obecného vzorce HHR³R⁴ , kde R³ a R⁴ se liší od R¹ a R² , za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde R¹ a R² se liší od R³ a R⁴ , X a Y představují dusík, Z je methinová skupina, nebo X a Z představují dusík, X je methinová skupina a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo a2a) reakci 1 molu l-eburnaraeninkarbonyl-4-(4,6-dichlórpyrimidin-2-ylJpiperazinu vzorce lila, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam s 2 moly aminu obecného vzorce HNR’R², kde R¹ á R² jsou stejné jako Jí³ á R⁴ v jednom nebo .„.dvou^stupních -za vzniku eburriam e n i n ov ý c h.... d e £ i vá t ů._L o be c n é h o z n r c e=I —k d e=R¹« a R ² jsou stejné jako R³ a R⁴ , X a Z představují dusík, Y je methinová skupina a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo a2b) reakci 1 molu l-eburnameninkárbonyi-4-(4,6-dichlorpyrÍmidi.n-2-yl jpiperazinu vzorce lila, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, š 1 molem aminu obecného vzorce KER¹ R² , -kde· _:R¹ - a R²· se lišr od R? a R⁴, dále reakci připraveného, l-eburnameninkarbonyl-4-(4-amino-6-chlorpyrimidin-2-yljpiperazinu obecného vzorce Ila, kde R¹, R², a a vlnovková čárka mají výše uvedený význam,’ s aminem obecného vzorce HNR³R⁴, kde R³ a R⁴ se liší od R¹ a R², za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde se R¹ a R² 'liší odR³ a R⁴ , X á Z představují dusík, Y je methinová skupina, a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, nebo a2c) reakci 1 molu l-eburnamenÍnkarbony.l-4-(2,4-dichlorpyrimidin-6^yljpiperazinu vzorce Illb, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s 2 moly aminu obecného vzorce HNR¹R^z, kde R¹ a R^z jsou stejné jako R³ a R⁴, v jednom nebo dvou stupních, za.vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde R¹ a R² jsou stejné jako R³ a R⁴, X a Y představují dusík, Z je «r methinová skupina a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo a2d) reakci 1 molu l-eburnameninkarbonyl-4-(2,4-dichlorpyrimidin-6-ylJpiperazinu vzorce Illb, kde n a vlnovková čárka mají výše· uvedený význam s 1 molem aminu obecného vzorce HNR¹R², kde R¹ a R² se liší od R³ a R⁴, dále separaci jednotlivých izomerú z izomerní směsi obsahující 1-eburnameninkarbony1-4-(2-amíno-4-chlorpyrimidin-6-y1)piperazin obecného vzorce Ilba.

   i .

   a 1-eburnameninkarbony 1-4- (4-amino-2-chlorpyrimi.dÍn-6-yl)-piperazin obecného vzorce Ilbb, kde R¹ a R² , n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, následně . reakci 1 molu připraveného izomeru s 1 molem aminu obecného, vzorce KNR³R⁴, kde R³ a R⁴ se liší od R¹ a R²., za vzniku eburnaměninových derivátů obecného vzorce I, kde R¹ a R² se liší od R³ a R⁴ , X. a Y představují dusík,

   Z je methinová skupina,. nebo Z a Y představují dusík,

   X je methinová skupina a n. a .vlnovková čárka mají výše . uvedený význam; nebo a3a) reakci připraveného 1-eburnameninkarbonyl-4-('4-amino-6-chlorpyrimÍdin-2-yl )piperazinu obecného vzorce Ila, kde R¹, R², n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s aminem obecného vzorce ,HNR³R⁴, kde R³ a R⁴ mají výše uvedený, význam, za .vzniku eburnameni.nových derivátů obecného vzorce I, kde X á Z představují dusík,

   Y je methinová skupina a R¹, R²,:R³, R⁴, n a vlnovková čárka mají. výše uvedený význam, nebo a3b) reakci připraveného i-é.burnameninkárbonyl.,-'.'' ' ·;Λ ·> 4 ,J· τ · · . ' ’

   -4-(2-amino-4-chlorpyrimidin-6-yl)pipěrazinu obecného vzorce Ilba, kde R¹, R², na vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s aminem obecného'.vzorce HNR³R⁴, kde R³ a R⁴ mají výše uvedený význam, za vzniku eburnaměninových derivátů obecného vzorce I, kde X a Y představují dusík,

   Z jě methinová skupina a R¹ , R², R³ , R⁴, n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam,, nebo a3c) reakci l-eburnameninkarbonyl-4-(4-amino- 55 -2-chlorpyrimidin-6-ylJpiperazinu obecného vzorce Ilbb, kde R¹ , R² , na vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s aminem obecného vzorce HNR³R⁴, kde R³ a R⁴ mají výše uvedený význam, za vzniku eburnameninových .derivátů obecného vzorce I, kdě Z a Y představují dusík, X je methinová skupina a R¹ , R², R³, R⁴, n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, nebo . ba) reakci l-(eburnamenínkarbonylJpiperazinu -vzorce IV, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam s 2-amino-4,6-dichlorpyrimidinem obecného vzorce VIb kde R¹ a R² mají výše uvedený význam, dále ·>

   reakci připraveného l-eburnameninkarbony.í-4- (2-amino-4~chlorpyrimidin-6-y1)piperazinu obecného vzorce Ilba, kde R¹, R², n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s aminem obecného vzorce HKR³R⁴ , kde R³ a R⁴ mají výše uvedený význam, za vzniku eburnameninových derivátů . Á obecného ' vzorce- I kde; X ~a Ý představují dusík.,; 2' jě methinová skupina a R¹ , R² , R³ , R« , n a vlnovková, čárka mají výše uvedený význam; nebo bb)‘ reakcí l-(eburnameninkarbonyljpiperazinu vzorce IV, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam,

   -'~ _s/ 2-amihó-4,S-dichlorpyrimidinem' obecného vzorce Via

   Cl—/q\ (Via)

   Cl kde R¹a R² mají výše uvedený význam, dále separaci jednotlivých izomerů z izomerní směsi obsahující l-eburnameninkarbonyl-4-(4-amÍno-6-chlorpyrimidin-2-yl)piperazin obecného vzorce Ila a 1-eburnameninkarbony1-4-(4-amino-2-chlorpyrimidin-6-yí)piperazin obecného vzorce Ilbb, R¹ , R^z , n a vlnovková čárka.mají výše uvedený význam a reakci 1 molu připraveného izomeru s 1 molem aminu obecného vzorce HNR³R⁴, kde R³ a R⁴ mají výše uvedený význam, za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde 2 a Y představují dusík, X jemethinová skupina a. R¹ , R² , R³ , R⁴ , n a. vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo ca) reakci l.-(eburnaroeninkarbonyl )piperazinu vzorce IV, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s 4,6-diámino-2-chlorpyrimidinem obecného vzorce Vila kde R¹, R², R³ a R⁴ mají výše uvedený význam; za vzniku, ěburňameninoyýčh' derivátů obecného vzorce I, kde X a Z představují dusík, Y je methinová skupina a R¹ R² , R³ , R⁴., n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; neboob) reakci l-(eburnameninkarbohyl)piperazinu vzorce IV,. . kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s 2,4-diamin.o-’6-chlorpyrimi.dinem obecného vzorce Vllb (Vllb) kde R¹ , R² , R³ a R⁴ mají výše uvedený význam, za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde X a Y představují dusík, Z . je methinová skupina a R¹ , R², R³ , R⁴ , n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebó . .______ý ___^r_g.^a c 1 e bu r na ro e, n i n k a r b o n y 1 c .h .1 o r. i. q .u z o r c,e £1,, kde vlnovková čárka má výše uvedený význam, nebo příslušného hydrochloridu s 4-(4~amino-'6-chlorpyrimídin~ -2-yl)-piperazinem.obecného vzorce Vlila (Vlila) kde R¹ , R² á n mají výše uvedený význam, dále g reakci \ l-eburnameninkarbonyl-4-(4-amino-6-chlorpyrimidin-2-yljpiperazinu obecného vzorce Ila, kde R¹, R² a n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam s ' aminem ''obecného vzorce HNR³R⁴ kde R³a R⁴ mají výše uvedený . význam za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde X a Z představují dusík, Y je methinová skupina a R¹ , R², R³, R⁴, n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo db) reakci ebuřnameninkarbonylchloridu vzorce V, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, nebo příslušného hydrochloridu s 4-(4-amino-2-chlorpyrimidin-6-yl)-piperazinem obecného vzorce VlIIbb (Vltlbb) kde R¹ , R² a n mají výše uvedený význam, dále reakci 1-ebu marněn i nkar bony 1-4-(4-amino-2-chlorpyrimi.din-6-yl)piperazinu obecného-vzorce Ilbb, kde R¹ , R² , na vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s aminem obecného vzorce HNR³R⁴ , kde R³ a R⁴ mají výše uvedený význam za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce I, kde Y a 2 představují dusík, X je methinová skupina a R.¹,, R² , R³ , R⁴ , n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo dc) reakci eburnameninkarbonylchloridu vzorce V, kde vlnovková -čárka . má.. výše ' uvedený význam, nebo příslušného hydrochloridu “ s 4-{2-amino-4-chlorpyrimidin-6-yi)-piperazinem obecného vzorce VlIIbá (VI Ilba) kde R¹' Ř² a n mají výše Uvedený význam, dále reakci l-eburnameninkarbonyT“4-(2-amino-4-čhlorpyrimidin-6ryljpiperazinu obecného vzorce Ilba, kde R¹ , R², n a vlnovková čárka mají výše . uvedený význam, s aminem obecného vzorce HNR³R⁴, kde R³ a R⁴. mají výše uvedený význam za vzniku eburnameninových derivátů obecného vzorce i, kde Y a.X představují dusík, Z je methinová.skupina a· R¹, R², R³, R⁴, n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam; nebo

   59 . .e) reakcí eburnameninkarbonylchloridu vzorce V, kde vlnovková čárka má výše uvedený význam, nebo příslušného hydrochloridu s 4-(diaraino-pyrimidinyl)piperazinem obecného vzorce IX (IX) kde R¹ , R² , R³ , R⁴ , X,. Y, Z a.,a raají,výše.uvedený- význam;».rf*·,f. ·*-»- .·»►*** —t*** *- ¹ · ·* · *· ” a pokud^^ _____to. „_žádfiu_cí ..„-jredukci __tak^o.^v,2.ňíkléh·©derivátu eburnameninu obecného vzorce I, který obsahuje v poloze W oxo skupinu a R¹, R², R³, R*, X, Y, Z a n mají výše uvedený význam a/nebo převedení vzniklé volné báze derivátu eburnameninu obecného vzorce I, kde R¹ , R² , R³ , R⁴, X, Y, Z, η _r a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, reakcí š kyselinou na adiční sůl a/nebo uvolněním volné báze derivátu eburnameninu obecného vzorce I , kde R¹ , R² , R³, R⁴, X, Y, Z, n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, z připravené -soli a/nebo převedením ; získaného derivátu eburnameninu obecného vzorce I, kde R’ , R² , R³ , R⁴ , X,. Y, Z, n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, na příslušný solvát.
5. 5. .Postup přípravy podle postupu a) nároku 4, v y z n a č u-j í. c í s e t í m , že zahrnuje reakci .l-eburnameninkarbonylchloridu vzorce V, kde vlnovková čárka má výše uvedený význam, nebo jeho hydrochloridu s velkým nadbytkem derivátu piperazinu obecného vzorce X, kde n má výše uvedený-význam, při teplotě -70 až -20 °c.
6. 6. Postup přípravy . podle postupu a) nároku 4,

   v.yznač.ující se tím, že zahrnuje reakci l-(eburnameninkarbonyl)piperazinu vzorce XV, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s 2,4, 6-trichlorpyrimidinem, v rozpouštědle etherového typu, při teplotě -20 až +50 °C.
7. 7. Postup přípravy podle nároku 6, vyznačující se tím, že zahrnuje reakci 1-eburnameninkarbony1-4-(4,6-dichlorpyrimidin-2-y1)piperazinu vzorce lila, nebo l-eburnameninkarbonyl-4-(2,4-dichlorpyrimidin-6-ylJpiperazinu vzorce.Illb, kde n a vlnovková čárka mají výše uvedený význam, s aminem obecného vzorce KKR¹R², kde R¹ a’R² mají výše uvedený význam, při teplotě 0 až 150 °C.

   • p. . · ·
8. 8. Postup přípravy podle kteréhokoliv z. postupů da), db) a dc) nároku '4, vyznačující se tím, že zahrnuje reakci eburnameninkarbonylchloridu vzorce V, kde vlnovková čárka má. výše uvedený význam, nebo jeho hydrochloridu s l-(aminochlorpyri.midinyl ).piperazinem obecného vzorce Vlila, VlIIba nebo VlIIbb, kde R¹, R² a n mají výše uvedený význam, při teplotě 0 až- 150 °C, při teplotě -50 °C až teplotě laboratorní.
9. 9. Po.st-up přípravy . podle postupu e) nároku 4, vyznačující se t í m , že zahrnuje reakci eburnameninkarbonylchloridu vzorce .V, kde vlnovková čárka má výše uvedený význam, nebo jeho hydrochloridu s 4-(diaminopyrimidinyl)piperazinem obecného vzorce IX, kde R¹, R², R³, R⁴, X, Y, Z a n mají výše uvedenývýznam při teplotě -50 °C až . teplotě .laborator.hí.
10. 10. Postup přípravy podle nároku 4, v y z n a č u j í c í Se t í m , že zahrnuje redukci derivátu éburnameninu obecného vzorce I, který má v poloze W oxo skupinu a R¹, R² , R³ ,. R⁴., X, Y, Za n.mají výše uvedený význam působením. lithium aluminium hydridu v rozpouštědle etherového typu. .
11. 11. Postup přípravy podle nároku 6 nebo 10, vyznačující se tím, že zahrnuje použití tetrahydrofuranu jako rozpouštědla etherového typu.
12. 12. Postup přípravy podle nároku 6, vyznačující se t i m , že reakce .probíhá'při teplotě 0 °C.
13. 13. Postup přípravy podle kteréhokoliv z nároků 4 až 12, vyznačující se tím,že zahrnuje reakci derivátu eburnameninu obecného vzorce I, kde R¹ , R²., R³ R⁴ , X, Y,. Z a ji mají výše uvedený význam-, připraveného ve formě “ volné baze,~ š organickými nebo anorganickými 'kyselinami'v Ci-4 alkáhoTu“ výhodně ethanolu á pokud je to žádoucí,' vysrážení vzniklé adiční soli s kyselinou účinkem rozpouštědla etherového typu, výhodně diethyletherem.