CZ30698A3 - Farmaceutický prostředek 1H-1,2,4-triazolových derivátů pro inhibici růstu rakovin - Google Patents

Description

Tento vynález se týká farmaceut ické ho užitečný pro léčení rakovin, leukemie a prostředku, který je tumorů zejména u lidí a teplokrevných zvířat. Tento farmaceutický prostředek obsahuje

C'

1H-1,2,4-tr i azolové der i váty.

Může být použi tý v kombinaci s j i ným i chemoterapeut i ckým i prostředek může být použitý pro činidly.

léčení

Stejný farmaceutický virových infekcí.

Dosavadní stav techniky

Rakov i ny zahrnu j ící leukemi i j sou hlavní příčinou smrti u zvířat a u lidí. Přesná příčina leukemie nen 1 známa, ale vazby mezi určitými aktivitami jako jsou například kouření nebo inhalace karcinogenů a výskyt určitých byla ukázána mnohými výzkumníky.

typů leukemie a tumorů

Mnoho typu chemoterapeutických činidel se ukázalo být úč i nnými proti rakovinám, leukémiím a tumorům, ale ne všechny buňky rakoviny a tumorů odpovídají na tyto činidla. Na neštěstí mnoho těchto činidel ničí také normální buňky. Přesný mechan ismus působení těchto chemoterapeutických činidel není ještě stále znám.

íř

í.

Přes pokroky na poli léčení rakoviny této doby radiace a kostní dřeně, Chemoterapeutické a leukemie, jsou hlavními terapiemi do rakovi nám zvláště agresivní, cytostatické činidla působí na chemoterapie a transplantace kroky = jsou při boj i pro t i

Taková rakoviny cytocidální nebo ně jlépe ve ve1kých jejichž buňky se rychle dělí.

růstových faktorech tj. takových

Až do dnešního dne se hormony zejména estrogen, progesteron a testosteron a některá antibiotika vyrábějí pomocí různých • · množstvί terapií dostupných onkologům. Bylo by však ve1m i žádoucί ,

1eukemi i , aby cytotoxičká činidla, která maj í spécifi tu pro rakovinu a tumorové buňky v ideálním případě nebyla účinná na normální zdravé buňky. Na neštěstí nalezena a místo toho jsou používána nebyla žádná dosud činidla, která se zaměřují především na rychle se dělící buňky.

Samozřejmě, vývoj materiálu, které by se zaměř i 1y na buňky

1eukemie nebo rakov i ny vzhledem k některým spec i f i t ám, by byl pro ně prudkým pokrokem.

j ednoznačným

Ve výhodném provedení by cytotoxické na bylo žádouc í na1ézt materiály, které by byly m írné úči nky buňky rakoviny nebo na normální buňky.

1eukem i e, zatímco by měly vynálezu poskytnutí farmaceutického

Proto je prostředku.

předmětem tohoto který je účinný při léčení 1eukemie s mírnými nebo žádnými účinky na normální krevní buňky.

By l o objeveno, že a j eho der i váty j sou specificky účinné na potlačení růstu nebo bakteri í.

rakovi η, t úmorů... v i r usů

Použití těchto 1H-1,2,4-triazolových derivátů v komb i nac i j i nými chemoterapeut i ckým i činidly, které jsou úč i nné n i čen í tumoru, je novou metodou

1éčen í rakov i n tumorů.

Ještě výhodně j i je předmětem tohoto vynálezu poskytnutí proti-virového prostředku, který a 1H-1,2,4-triazolové deriváty obsahuje farmaceutický nosič spolu s chemoterapeutickými činidly, které mohou být také použité k léčení rakovin. Potenciátory mohou také zvyšovat účinnosti tohoto prostředku. Tyto a další předměty vynálezu budou evidentní z následujete!ho podrobného popisu tohoto vynálezu.

Podstata vynálezu

Farmaceut i cký prostředek pro léčení savců a zejména teplokrevných zvířat který obsahuje obsahuj e f armace ut i cký nos i č a účinné množství chemoterapeutického činidla a bezpečné a účinné množství proti-rakovinové

V • · · ·

sloučeniny vybrané ze skupiny skládající se z =

kde Z je alkylen vybraný ze skupiny zahrnující

CHz - CHz - , - CHzCHz CHz , CH( CHa ) - CH(CH₃) - a - CHz - CH( a 1 ky 1) , kde alkyl má od 1 do 10 atomů uhlíku a Ar je vybraný ze skupiny obsahující fenyl, substituovaný fenyl, thienyl, halothienylu, naftylu a fluorenylu, kde substituovaný fenyl znamená fenylový radikál, který má na to od 1 do 3 substituentů vybrané nezávisle ze skupiny obsahující halo, nižší alkyly, nižší alkoxy, kyano a nitro skupiny. Terapeuticky aktivní přídavek solí kyselin sloučeniny (I) je také zahrnut do rozsahu tohoto vynálezu.

Jak bylo použito v předcházející definici Z, výraz alkyl zahrnuje přímé a rozvětvené řetězce uhlovodíkových radikálu, které mají od 1 do 10 atomů uhlíku jako jsou například methyl, ethyl, 1-methylethy1, propyl, 1,1-dimethylethyl, butyl, pentyl, hexyl, heptal, oktyl, decyl a podobně. Zde použitý výraz halo” je obecně použitelný halogenový atom o atomové váze menší než 127 například fluor, chlor, brom a jod.

Tyto prostředky mohou být použité k inhibici růstu buněk leukemie, tumorů a rakoviny u lidí nebo u zvířat pomocí podávání účinného množství bud ústy, rektálně, lokálně nebo parenterálně nebo intravenozně. Tyto prostředky nepůsobí významně na zdravé buňky jak je porovnáno s adriamycinem, který má škodlivé účinky na zdraví buňky.

Potenciátory mohou být také použité v kombinaci s 1H-1,2, 4-triazolovými deriváty k léčení virusů. Kombinace s ostatními fungicidy jsou také účinné.

A. Definice

Zde používaný výraz obsahující znamená, že různé komponenty mohou být využívány společně ve farmaceutickém prostředku tohoto vynálezu. Podle toho tedy výrazy sestávající

Λ • · · • · • · ta, která j e vhodná pro použ i t í u idí ···· · · · · φ C Φ • · · · · • · · · a/nebo u zví řat bez nevhodných nepříznivých vedlejších účinků (jako jsou toxicita, podráždění alergické odpovědi) které jsou úměrné odpov í daj í c í mu poměru prospěch/r i sk.

vzhledem k množství požadované komponent, které jsou dostačující pro bez nevhodných z í skán í vedlejších terapeut i cké odpovědi účinků (jako nepří zn i vých jsou toxicita, podráždění a alergické odpovědi ) které jsou úměrné odpovídajícímu poměru prospěch/r isk, když j e používán ve způsobu tohoto vynálezu.

účinné množství bude obvykle různé v závislosti na takových faktorech, které jsou specifickými podmínkami používanými při léčení, jako například tělesné podmínky pacienta, typ léčeného savce, doba trvání léčení, druh souběžné terapie (jeli nějaká) a specifické používané složení látek a struktura sloučenin nebo jejich derivátů.

Zde používaný výraz farmaceutický přídavek solí jsou soli proti-rakovinových sloučenin s organickými nebo anorganickými kyše1 i nam i.

Preferovanmi solemi přidávaných kyselin jsou chloridy, brom i dy, sul fáty, ni tráty, fosfáty, sulfonáty, formiáty, tartráty, maleáty, ma1áty, citráty.

benzoáty, sali cyláty, askorbáty a podobně.

Zde použ í váný výraz činidlo nebo přijatelné rozpouštědlo, které suspenduje vehikulum pro dodávání činidla proti leukémii zvířatům nebo

Nosič může být kapalný nebo pevný nebo 1iposomy a je

Zde použ í váný výraz rakovina se vztahuje ke všem typů rakoviny nebo novotvaru nebo zhoubné nemoci, které napadají normální zdravé buňky nebo kostní dřeň, buňky, které se nacházejí v savcích.

která produkuje krevní

1H - 1,2,4-triazolové deriváty a jejich soli.

Přesné ·

• ♦ ·

999 • · ·

99 9

1H-1,2,4-triazolové deriváty jsou popsány detailně dole. Preferovanými materiálůy jsou produkty, které jsou prodávány pod jménem “propioconazol” od Janssen Pharmaceutical NV (Be1 g ium).

Zde používaný výraz viry zahrnují viry, které způsobují nemoci teplokrevných zvířat zahrnující HIV, chřipku, rhi nov i rus, opar a podobně.

Zde používaný výraz potenciátory jsou materiály jako jsou například triprolidin a jeho cis-isomer a procodazol, které jsou používány v kombinaci s chemoterapeutickými činidly a s 1H-1,2, 4-triazolem a jeho deriváty. Potenciátory mohou působit na imunní systém nebo mohou zvyšovat účinnost léčiv.

Zde používaný výraz chemoterapeutická činidla zahrnují DNA-interaktivní činidla, antimetaboli ty, tubulin-interaktivní činidla, hormonální činidla a ostatní jako jsou například asparagi nasa nebo hydroxymočovi nu.

B, Proti-rakoviné sloučeniny

Proti-rakovině sloučeniny jsou 1H-1,2,4-triazolové deriváty, které jsou známy pro jejich antifungální působení. Jsou to systémové sloučeniny, které jsou používané k ochraně a vykořenění hub. Sloučeniny mají následující strukturu:

O ( I) kde Z je alkylen vybraný zé skupiny zahrnující

CH2-CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH(CH3) CH(CH3)- a -CH2-CH(alkyl) , kde alkyl má od 1 do 10 atomu uhlíku a Ar je ’ vybraný ze skupiny obsahující fenyl, substituovaný fenyl, thienyl, halothienylu, naftylu a fluorenylu, kde substituovaný fenyl znamená fenylový radikál, který má na to od 1 do 3 substituentů vybrané nezávisle ze skupiny obsahující halo, nižší alkyly, nižší alkoxy, kyano a nitro skupiny. Terapeuticky aktivní přídavek solí kyselin sloučeniny (I) je také zahrnut do rozsahu tohoto • e

vynálezu.

Jak bylo použito v předcházející definici Z, výraz alkyl zahrnuje přímé a rozvětvené řetězce uhlovodíkových radikálů, které mají od 1 do 1O atomů uhlíku jako jsou například methyl, ethyl, 1 -methylethy1, propyl, 1, 1-dimethylethyl , butyl, pentyl, hexyl, heptal, oktyl, decyl a podobně. Zde použitý výraz halo je obecně použitelný halogenový atom o atomové váze menší než 127 například fluor, chlor, brom a jod.

Preferované deriváty zahrnují:

1( (2 -(2,4 dichlorofeny1) 1,3 dioxolan 2 yl)methyl)-1H-1,2, 4-triazol(propiconazol) ( -(2-( 2, 4-dichlorofenyl)-4-ethyl- 1,3-dioxolan-2-ylmethyl)- 1 Η- 1,2, 4-tr i azo1 ( - (2- ( 2, 4-dichlorofenyl)-4-propyl- 1,3-dioxolan-2-ylmethyl)

-1H-1,2,4-triazol ( -(2-(2, 4-dichlorofenyl)-4-methy1- 1,3-dioxolan-2-ylmethyl)

-1H-1,2,4-triazol ( - ( 2-( 2, 4-dichlorofeny11-4-pentyl-l,3-dioxolan-2-ylmethyl)-1H-1,2,4-triazol a jejich terapeuticky aktivní přídavky solí kyselin.

Tyto sloučeniny jsou připraveny podle metody popsané v dokumentu US 4079062 vydaném Van Reet a kol., 14 března,1978.

Je předpokládáno, že tyto jednotlivé materiály v kombinaci s chemoterapeutickými činidly a výhodně s potenciátory mají schopnost významně omezit tumory nebo významně snížit jejich růst vzhledem k jejich schopnosti inhibovat syntézu sterolů.

C. Chemoterapeutická činidla

Chemoterapeutická činidla jsou obecně seskupeny jako DNA-interaktivní činidla, antimetaboli ty, tubulin-interaktivní činidla, hormonální činidla a jiné jako například asparaginasa «ί a hydroxymočovina. Každá ze skupin chemoterapeutických činidel může být dále rozdělena podle typu akt ivi ty nebo sloučeniny.

Chemoterapeut i cká činidla užívaná kombinaci s 1H-1,2,4-triazolovými deriváty v tomto vynálezu zahrnuje členy všech těchto skup i n.

Pro podrobně j š í pop i s

chemoterapeutických činidel a jejich způsobu podávání lze porovnat zde začleněnou referenci Dorr a kol., Cancer Chemotherapy Handbook, druhé vydání, stránky 15-34, (Appleton a Lange, Connecticut, 1994).

DNA-interaktivní činidla zahrnují alkylační činidla jako jsou například cisplatina, cyklofosfamid, altretamin, DNA činidla se zlomovým řetězcem jako jsou například bleomycin, interkalační inhibitory topoisomerasy II (jako jsou například dactinomycin a doxorubicin), neinterkalační inhibitory topoisomerasy II jako jsou eloposid a teniposid a DNA s vnitřním žlábkovým pojivém Plcamydin.

Alkylační činidla tvoří kovalenlní chemické adukty s buněčnou DNA, RNA a molekulami proteinu a s menšími aminokyselinami, glutathionem a podobnými chemickými sloučeninami. Tato alkylační činidla obvykle reagují s nukleofi 1ickým atomem v buněčné složce jako napří klad aminokarboxyl, fosfát, sulfhydry1ová skupina v nukleových kyselinách, proteinech, aminokyselinách nebo glutathionu. Mechanismus a úloha těchto alkylačních činidel v terapii rakoviny nejsou dobře chápány. Typická alkylační činidla zahrnují

Yperity dusíku jako například chlorambuci1, cyklofosfamid, isofámid, mechloretamin, melfalon a uracilový yperit.

Aziridiny jako je například thiotepa.

Metansulfonátové estery jako je například busulfan.

Nitrosové močoviny jako jsou například carmustin, lomustin a streptozocin.

Platinové komplexy jako jsou například cisplatina a carbop lat i na.

Bioreduktivní alkylátor jako jsou například mitomycin, procarbazin, dacarbazin a altretamin.

DNA činidla zlomového řetězce zahrnující bleomycin.

DNA inhibitory topoisomerasy zahrnující následující·

Interkalátory jako jsou například amsacrin, dactinomycin, doxorubicin, idarubicin a mitoxantron. Neinterkalátory jako jsou etoposid a teniposid. DNA s vnitřním žlábkovým pojivém • · • ·

PÍcamydin.

Antimetaboli ty ruší produkci nukleových kyselin jedním nebo druhým ze dvou hlavních mechanismů. Některé z léků inhibují produkci deoxyribonukleosidpvých tri fosfátů, které jsou přímými prekursory pro syntézu DNA a tím inhibují replikaci DNA, Některé ze sloučenin jsou dostatečně schopné se substituovat anabolickými nukleotidovými cestami jako například puriny a pyrimidiny. Tyto analogy mohou být poté substituovány do DNA

zahrnují cytrabin a fludarabin. Inhibitory ribonukléotidové reduktasy zahrnují hydroxymočovinu.

Tubulinové interaktivní činidla reagují při vazbě na specifická místa tubulinu proteinu, který polymeruje a vytváří buněčné mikrotubulusy. Mikrotubulusy jsou kritickými jednotkami buněčných struktur Když se interaktivní činidla vážou na protein, buňka nemůže vytvářet mikrotubulusy.

Tubulinové interaktivní činidla zahrnují oba alkalo idy vinblastin a v i ncr i st i n a pac1 i taxe1.

Hormonální činidla jsou rovněž užitečná při léčbě rakovin a tumorů. Jsou používána u hormonálně náchylných tumorů a jsou obvykle odvozené z přírodních zdrojů. Tato hormonální činidla zahrnuj í ' Estrogeny, konjugované estrogeny a ethinyl estradiol a diethylstilbesterol, chlortrianisen a idenestrol. Progestiny jako jsou například hydroxyprogesteronový kapronát, medroxyprogesteron a megestrol. Androgeny jako jsou například testosteron, testosteronový propionát, f1uoxymesteron a mety1testosteron.

Adrenální kortikosteroidy jsou odvozeny z přírodního kortisolu a nebo hydrokortisonu. Jsou používány vzhledem k jejich • ·

protizánět1 ivému využití jakož i schopnosti některých z nich inhibovat mitotická dělení a zastavit syntézu DNA. Tyto sloučeniny zahrnují prednison, dexamethason, methylpřednísolon a prednisolon.

Leutinizjij ící hormony, které uvolňuj í hormonální činidla nebo gonadotropinový spouštěcí hormon antagonistů, jsou použ í vány přednostně při léčbě leuprolidové acetáty a rakoviny prostaty.

goserelinové acetáty.

Tyto zahrnují

Tyto zabraňují biosyntéze steroidů při testech.

Ant ihormonální činidla zahrnuj í = Antiestrogenická činidla jako například tamosifen, antiandrogenní činidla jako jsou například flutamid a antiadrenální činidla jako jsou například mitotan a aminoglutethimid.

Hydroxymočovina se zdá být, že působí přednostně zkrze inhibici enzymu r i bonuk1eot idové reduktasy.

Asparaginasa je enzym, který konvertuje asparagin na aspartovou kyselinu a tudíž blokuje proteinovou syntézu v tumoru.

D. Potenc i átory

Potenciátory mohou být jakýmkoliv materiálem, který zlepšuje nebo zvyšuje účinnost farmaceutické kompozice. Zahrnují imunosupresory nebo materiály, které působí na imunitní systém. Jedním takovým potenciátorem je triprolidin a jeho cis-isomer, který je používán v kombinaci s chemoterapeutickými činidly a s 1H-1,2,4-triazolovými deriváty. Triprolidin je popsán v dokumentu US 5114951, 1992.

Dalším potenciátorem je procodazol, 1H-benzimi dazo1 -2-propanová kyše1 i na (beta-(2-beňzi m i dazo1) propionová kyselina a 2-(2-karboxyetyl) benzimidazol, propazol). Procodazol je nespif ické akt ivní imunoochranné činidlo proti virovým a bakteriálním infekcím a může být použité s kompoz i cem i zde nárokovanými.

Je účinné samotnými s 1H-1,2,4-triazolovými deriváty buď rakovin, tumorů, leukemie a virových infekcí při nebo

1éčen í spo 1 u s chemoterapeutickými činidly

Propionová kyselina a její soli a estery mohou rovněž být

použité v kombinaci s farmaceutickými prostředky, které jsou zde nárokované.

Antioxidační vitaminy jako jsou například vitaminy A,

C a E a beta-karoten, mohou být přidávány k těmto prostředkům.

E. Dávkování

Jakékoliv vhodné dávkování může být zavedeno metodou podle tohoto vynálezu. Druh choroby (rakovina, leukemie nebo virus), sloučenina, nosič a množství se bude široce odlišovat v závislosti na druzích teplokrevných živočichů nebo lidí.

jejich tělesné váze a druhu tumoru, který je léčen. Dávkování je obvykle mezi asi 2 miligramem (mg) na kilogram (kg) tělesné váhy a asi 400 mg na kg tělesné váhy. Převážně je používáno dávkování od asi 15 mg do asi 150 mg/kg tělesné váhy. Pro chemoterapeutická činidla může být výhodné nižší dávkování například od O, 5 mg/kg tělesné váhy do asi 400 mg/kg tělesné váhy. Dávkování u člověka je obvykle nižší než u malých teplokrevných savců jako například u myší. Dávkovači jednotka může také zahrnovat jednotíivé složky nebo jejich směsi s j i ným i s1oučen i nam i rakovinu. Dávkovači nebo jinými sloučeninami inhibujícími jednotka může také obsahovat ředící roztoky, plnidla, nosiče, liposomy a podobně- Jednotka může být v pevné nebo gelové formě jako například v pilulkách, tabletách, kapslích a podobně nebo v tekuté formě vhodné pro ústní, rektální, topické, intravenozní injekce nebo parenterální podávání nebo injekce do nebo kolem kostní dřeně. Rozsah a poměr chemoterapeutického činidla k proti-rakovinové sloučenině bude záviset na druhu rakoviny nebo tumoru, které jsou léčené a na typu chemoterapeutického činidla.

F. Dodací formy dávkování

Próti-rakovinové sloučeniny a chemoterapeutická činidla jsou podle typu smíchána s farmaceuticky vhodným nosičem. Tento nosič může být pevný nebo kapalný a jeho typ je obvykle vybírán ha základě typu používané aplikace podávání.

Liposomy mohou být také použité k doručení prostředku. Aktivní činidlo může být ko-aplikováno ve formě tablety nebo kapsle.

·· ····

liposomu jako aglomerovaný prášek nebo v tekuté formě. Příklady vhodných pevných nosičů laktozu, sacharosu, želatinu a agar.

Kapsle nebo tablety mohou být snadno vytvořeny a mohou být zhotoveny snadno k polykání nebo žvýkání. Jiné pevné formy zahrnují granule a objemné prášky. Tablety mohou obsahovat vhodné pojivá, maziva, ředící roztoky, dezintegrační činidla, barvící činidla, vonná činidla, tok vyvolávající činidla a změkčovací činidla. Příklady vhodných forem dávkování zahrnují roztoky nebo suspenze ve vodě, farmaceuticky při jatelných tucích a olejích, alkoholech.

nebo j i ných organických rozpouštědlech, které zarhnují estery, emulze s i rupy nebo e1 i x í ry, suspenze, roztoky a/nebo suspenze rekonstituované z nešumivých granulí a šumivé přípravky rekonstituované z šumivých granulí. Takové formy kapalných dávek mohou obsahovat například vhodná rozpouštědla, konzervační prostředky, emulzační činidla, suspendáční činidla, ředící roztoky, sladidla, zahušťovadla a změkčovací činidla. Formy ústního dávkování obsahují výhodně vonná činidla a barvící činidla. Parenterální a intravenozní formy by mohly rovněž zahrnovat minerály a jiné materiály, které by je učinily slučitelné s typem injekce nebo vybraného dodacího systému. Specifické příklady farmaceuticky přijatelných nosičů a masťových základů, které by mohly být použité k vytvoření forem ústních dávek forem pro ústní dávkování podle předloženého vynálezu, jsou popsány v dokumentu US patentu No, 3903297 od Roberta vydáno 2.9.1975. Techniky a kompozice pro vyhotovení forem dávkování používaných podle tohoto vynálezu jsou popsány v následujících odkazech; 7 Modern Pharmaceutics, Chapter 9 and 1O (Bankéř a Rhodes, Edi tors, 1979), Lieberman ét al. , (Pharmaceutical Dosage Formš, 1981) a Ansel, ( Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms 2nd Edit ion, 1976) .

G. Metoda léčení

Způsobem léčení může být jakákoliv vhodná metoda, která je efektivní při léčení zvláštních typů rakoviny nebo tumoru, které jsou léčeny. Léčení může být ústní, rektální, topické, • ·

parenterální nebo intravenosní aplikace nebo pomocí injekce do tumoru nebo rakoviny apód.. Způsob podávání účinného množství se rovněž odlišuje v závislosti na tumoru, který je léčený. Je známo, že parenterální léčení pomočí intravenozní, subkutánní nebo intramuskulární aplikace IH-1,2,4-triazolových sloučenin, které jsou vytvořeny s vhodným nosičem, přídavnou sloučeninou nebo sloučeninami inhibující rakovinu nebo s ředícím roztokem pro usnadnění aplikace, bude preferovaným způsobem podávání sloučenin teplokrevným zvířatům.

Metoda léčení virové infekce může být ústní, rektální, topické, parenterální nebo intravenozní aplikace nebo pomocí injekce do Preferovanou metodou léčení virové infekce je podávání procodazolu nebo propiconazo1u.

Kromě použití chemoterapeutických činidel a potenciátorů, může být 1 Η-1,2, 4-triazolový derivát kombinován s fungicidy, herbicidy nebo jinými antivirovými činidly. Preferované fungicidy zahrnují benzimidazolové deriváty například thiabendazol, carbendazim, glyphosat, benomyl,

N-fosfonoglyciny například glyphosat a preferovanými herbicidy jsou N-chlorofenyl karbamáty a N-chloro-thiokarbamáty například chloroprofam.

Pokud jsou používané pro léčení virových infekcí farmaceutické prostředky, mohou být kombinované s ostatními proti-virovými činidly. Může být také použitý griseofulvin.

Příklady provedení vynálezu

1. Proti-virové vyhodnocení pomocí lidského viru chřipky

Jsou používány samičí CD (mice Charles River Breeding Laboratořies, Portage, MI) myši ve stáří 5 až 7 týdnů v době Příjmu. Myši jsou přibližně 6 až 9 týdnů staré a váží 20 až 28 g v době začátku testu. Všechny myši použité ve studii se neliší ve věku více než o 1O dnů. Myši jsou chovány po šesti v jedné kleci s podestýlkou. Myši jsou krmeny podle libosti • ·

hlodavčí stravou 5002 (PMI, St. Louis Missouri). Čerstvá voda je myším dodávána též podle libosti.

Virus lidské chřipky kmen AT2/Taivan/1/64 je používán k vyvolání reakcí u myší. Organismus je skladován při teplotě přibližně minus 70 stupňů Celsia. Před infekční vyvolanou reakcí se nechá ampulka zmražené zásoby roztát a rozředit na vhodnou koncentraci v pufrovaném solném roztoku. Myši jsou znarkotizovány pomocí Halothanu a virusová vyvolávací reakce je aplikována intravenozně v objemu 50 mikrolitrů.

Testované výrobky jsou podávány v koncentraci a objemů jak je uvedeno níže. Ve dnech 1 až 14 obdrží skupina po deseti myších testované výrobky orálním výplachem. Solná kontrolní skupina zvířat (deset myší) obdržela srovnatelný objem solného roztoku, aby bylo srovnáno se skupinou myší, které byly testovány dávkovanými výrobky. Dávkování testovaných výrobků je ustáleno v přibližně 24 hodinových intervalech. Ve dni O přbližně 4 hodiny po druhém dávkování testovaných výrobků nebo solného roztoku, jsou všechny myši zkoumány na reakci intravenozně s injekční dávkou viru, se kterým se počítá, že vyprodukuje přibližně 90% úmrtnost. Zvířata jsou pozorována denně po dobu 21 dnů po vyvolání infekční reakce na úmrtnost nebo skomírání. Tetovaná zvířata jsou pozorována dvakrát první de po dávkování, třikrát počáteční den a potom dvakrát dvakrát denně.

2. Protivirové vyhodnocení pomocí rhinovirusu

Při vyšetření rhinovirusu v prostředí in vitro (typ A-l, buněčná linie WI-38, byl účinný propiconazol při 32 ug/ml . Poži t ivní ’ kOntro1á by1a provedena pomocí A-36683 od společnosti Abbot Company (S,S)- 1,2-bis(5-methoxy-2-benzimidazolyl)-1,2-ethandiol. A-36683 má terapeutický index 1000 až 3200. Propiconazol má terapeutický index 1 až 3 (viz Schleicher et al , Applied Microbiology, 23, NO. 1, 113-116, 1972),

3. Lidská in vitro tumorová kolonie tvořící testované jednotky • ·

Pevné tumory od pacientu jsou rozsekány na 2 až 5 mm fragmenty a okamžité umístěné do media McCoy s Medium 5A spolu s 10 % horkého inaktivovaného telecího séra spolu s 1 % pěnicilinu/streptomycinu. Během 4 hodin jsou tyto pevně tumory mechanicky rozděleny nůžkami, protlačené zkrze nerezavějící ocelovou síť číslo 100 pomocí cejchovaných jehel a potom jsou promyté pomocí media McCoy s jak je popsáno výše. Břišní, pohrudniční, osrdečníkové moky a kostní dřeň jsou získávány standardními technikami. Moky a kostní dřeň jsou umístněné do sterilní nádoby, která obsahuje deset jednotek konzervačního prostředku prostého heparinu na jeden ml. zhoubného moku nebo kostní dřeně. Po centrifugačním odstřed ování při 150g otáčkách po dobu 10 minut, jsou získané buňky promyté pomocí, media McCoy s spolu s 1O % horkého inaktivovaného telecího séra. Životaschopnost buněčných suspenzí je stanovena na hemocytometru s trypanovou modří.

Buňky určené ke klonování jsou suspendované v 0.3% agaru obohoceném CMRL, který je doplněný 15 % horkého inaktivovaného telecího séra, penicilinem ( 1OO jednotek/ml) , streptomycinem (2 mg/ml), glutaminem <2 mM), insulinem (3 jednotky/ml) , asparaginem (0,6 mg/ml) a pufrem HEPES (2 mM). Pro kontinuální expoziční test je každá sloučenina dodána do shora uvedené směsi. Buňky jsou umístněné v mm Petriho miskách v horní vrstvě agaru pod povrchem agaru pro zabráněn í růstu fibroblastů. Tři

Pe tr i ho m i sky j sou připraveny pro každé hledisko údajů. Misky jsou umístněné do inkubátoru při 35 stupních Celsia a jsou vybrány 14 den pro vypočítání počtu kolonií v každé misce. Počet kolonií (definováných jako 50 buněk), ustálených ve třech miskách, které jsou zpracovány sloučeninou, je srovnáno s počtem kolonií ustálených ve třech kontrolních miskách a může být stanoveno procento kolonií, které přežívají při koncentrací sloučeniny. Tři pozitivní kontrolní misky jsou použité k určení poměru přežití. Jako pozitivní kontrola je použit orthosodium vanadu v množství 200

9999

ug/ml. Jestliže se vyskytuje více než 30 % kolonií v pozitivní kontrole při srovnání s nezpracovanou kontrolou, je test vyhodnocen.

Při koncentraci 0,5 a 5,0 ug/ml v jednotlivé zkušební dávce propiconazolu, nebylo účinných (0/1) proti tumorům v tomto testu. Při koncentraci 50 ug/ml v kontinuální zkušební expozici byl propiconazol účinný proti rakovinám tračníku plicního melanomu (ne-malá buňka) a zejména vaječníku. Z celkového množství osmi jich šest přežilo více než z 50 %.

Claims (10)

1 (-(2-( 2, 4-dichlorofenyl)-4-pentyl- 1,3-dioxolan-2-ylmethyl)-1H-1,2,4-triazol a jejich terapeuticky aktivní přídavky solí kyselin.

1 ( - ( 2~ ( 2, 4-dichlorofenýl)-4-methyl- 1,3-dioxolan2-ylmethyl)-1H-1,2,4-triazol

1 ( -(2-(2, 4-dichlorofenyl)-4-přopyl- 1,3-dioxolan-2-ylmethy1)-1H- 1,2,4-triazol

1 ( -(2-(2, 4-dichlorofenyl)-4-ethyl -1,3-dioxolan-2-ylmethyl)

-1H-1,2, 4-tr iazol

1 (-(2-(2, 4- dichlorofenyl)- 1,3-dioxo1an-2-y1)methyl)-1H-1,2,4-triazol

1, Farmaceutický prostředek obsahující farmaceuticky přijatelný nosič a od asi 0,5 mg/kg do asi 400 mg/kg tělesné váhy chemoterapeutické činidlo a od asi 2 mg/kg 400 mg/kg tělesné váhy

Lriazol vzorce (I) '· ( I) kde Z je alkylen vybraný ze skupiny zahrnující

CH2-CH2-, -CH2CH2CH2', CH(CH3)-CH(CH3)- a -CH2-CH(alkyl), kde alkyl má od 1 do

10 atomů uhlíku a Ar je vybraný ze skupiny obsahující fenyl, substituovaný naftylu a fluorenyl.

fenyl, thienyl, halothienylu,

2 nebo 3, kde jsou vybrané ze skupiny zahrnující chloridy, bromidy, sulfáty, nitráty, ·· ···· fosfáty, sulfonáty, formiáty, tartráty, maleáty, maláty, citráty, benzoáty, salicyláty, askorbáty a jejich směsi.

2. Farmaceut i cký prostředek podle nároku 1, kde

1H-1,2, 4-triazol je vybraný ze skupiny zahrnující:

3. Farmaceutický prostředek podle nároku 1 inhibování růstu tumorů.

4. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, uvedené př í dávky f armaceut i cky př i j até1ných solí nebo 2 pro

5. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, 2, 3 nebo 4, kde uvedené chemoterapeutické činidlo je vybrané že skupiny obsahující DNA-interaktivní činidla, antimetaboli ty, tubulin interaktivní činidla, hormonální činidla, asparaginasu nebo hydroxymočov inu.

^x 6. Farmaceutický prostředek podle nároku i, 2, 3, 4 nebo 5, kde uvedené chemoterapeutické činidlo je vybrané ze skupiny í obsahující asparaginasu, hydroxymočovinu, cisplatinu,

I cyklofosfamid, altretamin, bleomycin, dactinomycin, doxorubicin, etoposid, teniposid a plcamydin.

r . . ...

6-thioguanin, fludarabin, pentostatin, cyctrabin a fludarabin,

7, který dále obsahuje potenciátor.

7. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, 2, 3, 4 nebo 5, kde uvedené chemoterapeutické činidlo je vybrané ze skupiny i obsahující methotrexát, fluorouraci1, fluorodeoxyuridin,

CB3717, azacitidin, cytarabin, floxuridin, mercaptopurin,

8.Farmaceutický prostředek podle nároku 1, 2, 3, 4, 5, 6 nebo

9. Způsob léčení rakoviny teplokrevných savců vyznačený tím, že zahrnuje podávání bezpečného a účinného množství prostředku podle nároků 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 nebo 8.

10. Způsob léčení podávání bezpečného virové infekce vyznačený tím, že zahrnuje a účinného množství prostředku podle nároků