CZ301736B6 - Prostredek pro lécbu arthritidy - Google Patents

Prostredek pro lécbu arthritidy Download PDF

Info

Publication number
CZ301736B6
CZ301736B6 CZ20013110A CZ20013110A CZ301736B6 CZ 301736 B6 CZ301736 B6 CZ 301736B6 CZ 20013110 A CZ20013110 A CZ 20013110A CZ 20013110 A CZ20013110 A CZ 20013110A CZ 301736 B6 CZ301736 B6 CZ 301736B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
hyaluronic acid
zinc
complex
synovial
mmp
Prior art date
Application number
CZ20013110A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20013110A3 (cs
Inventor
Serizawa@Isao
Maekawa@Keisei
Illes@Janos
Neszmeli@Erzsebet
Original Assignee
Takata Seiyaku Co., Ltd.
Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Rt.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Takata Seiyaku Co., Ltd., Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Rt. filed Critical Takata Seiyaku Co., Ltd.
Publication of CZ20013110A3 publication Critical patent/CZ20013110A3/cs
Publication of CZ301736B6 publication Critical patent/CZ301736B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/728—Hyaluronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Vynález poskytuje prostredek pro lécbu arthritických onemocnení, jako je revmatoidní arthrits, který má jako úcinnou složku komplex kyseliny hyaluronové a zinku. Tento komplex synergicky inhibuje proliferaci synoviálních bunek a potlacuje matricovou metaloproteinázu MMP-9, která je produkována synoviálními bunkami, ve srovnání se svými složkami, kyselinou hyaluronovou a zinkem, samotnými.

Description

Prostředek pro léčbu arthritidy
Oblast techniky
Vynález se týká prostředku pro léčbu arthritických onemocnění, jako je revmatoidní arthritida.
Dosavadní stav techniky io Arthritická onemocnění, včetně nemocí jako je revmatoidní arthritis, osteoarthritis a traumatická arthritis Jsou zánětlivá onemocnění, která způsobují destrukci chrupavky a kosti, zprostředkovanou zánětem synoviální blány kloubu. V zanícené synoviální bláně je pozorována vaskulámí neogenese, invaze a proliferace lymfocytů a aktivace synoviálních buněk. Aktivované synoviální buňky produkují chemické mediátory, jako jsou cytokiny, prostaglandiny a matricové metalo15 proteinázy, a považují se za původce destrukce chrupavky a kosti (Harris, E.D., New England Journal of Medicine, sv. 322, str. 1277—1289 (1990) a Cash, J.M. a spol., New England Journal of Medicine, sv, 330, str. 1368-1375 (1994)).
Je známo, že kyselina hyaluronová ve formě sodné soli je účinná při léčbě arthritických onemoc20 není (viz Yamamoto, M. a spol., „Clinical Evaluation of High Molecular Sodium Hyaluronate (NRD) on Osteoarthritis of the Knee“, Jpn.Pharmacol.Ther sv. 21, ě. 3 (1993)). Dále je známo, že je při léčbě arthritidy účinný zinek (A. Frigo a spol., „Copper and Zinc in Inflammation“ Inflammation and drug therapy seríes, sv. IV, Kluwer Academie Publishers, str. 133—142 (1989)).
Avšak ačkoli je kyselina hyaluronová (typicky ve formě sodné soli) do určité míry známa pro léčbu arthritických onemocnění, protože je výhodná z hlediska biokompatibilíty a tokových vlastností, nemá v podstatě žádný účinek proti proliferaci a aktivaci synoviálních buněk. Uspokojivého terapeutického efektu nelze navíc dosáhnout ani použitím zinku.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je farmaceutický přípravek, výroba a použití takového přípravku, který je schopen účinně léčit arthritická onemocnění prostřednictvím inhibice proliferace a aktivace synoviálních buněk, které tvoří etiologii arthritických onemocnění, jako je revmatoidní arthritis, a zejména suprese matricové metaloproteinázy.
Jako výsledek rozsáhlých studií za účelem vyřešení výše uvedených problémů původci tohoto vynálezu zjistili, že zatímco kyselina hyaluronová (sodná sůl) nemá v podstatě žádný inhibiční účinek na proliferaci a aktivaci synoviálních buněk a inhibiční účinek zinku na proliferaci a aktivaci synoviálních buněk a zejména na matricové metaloproteinázy, je extrémně nízký, sloučenina kyseliny hyaluronové a zinku překvapivě má velmi silné inhibiční účinky na proliferaci synoviálních buněk a supresi matricových metaloproteináz v důsledku synergického efektu, totiž potencující synergické interakce obou složek, což vedlo k vytvoření tohoto vynálezu.
Předmětem vynálezu tedy je prostředek pro léčbu arthritických onemocnění, obsahující komplex kyseliny hyaluronové a zinku.
Vynález rovněž poskytuje supresor matricové metaloproteinázy MMP-9, obsahující komplex kyseliny hyaluronové a zinku.
Vynález se rovněž týká použití komplexu kyseliny hyaluronové a zinku pro výrobu prostředku pro léčbu arthritických onemocnění.
Vynález se dále týká použití komplexu kyseliny hyaluronové a zinku pro výrobu supresoru matricové metaloproteinázy MMP-9.
Dále vynález zahrnuje způsob léčby arthritických onemocnění, zahrnující podávání komplexu kyseliny hyaluronové a zinku pacientovi s arthritickým onemocněním.
Konečně vynález zahrnuje způsob potlačování zrychlené produkce matricové metaloproteinazy MMP-9, zahrnující podávání komplexu kyseliny hyaluronové a zinku pacientovi majícímu zrychlenou produkci matricové metaloproteinázy MMP-9.
Účinnou složkou podle vynálezu je komplex kyseliny hyaluronové a zinku. Kyselina hyaluronová normálně existuje ve formě sodné soli a jedná se o makromolekulu popsanou v Meyer a spol. (J.Biol.Chem., sv. 107, str. 629 (1934)). Kyselina hyaluronová je vysoce viskózní glukosaminoglykan se střídajícími se složkami pl,3-glukuronové kyseliny a pl,4~glukosaminu a její mole15 kulová hmotnost se pohybuje od 50 kD do několika milionů D. Kyselina hyaluronová se nachází v pojivové tkáni všech savců a ve velkém množství je přítomna v kůži, sklivcí, synoviální tekutině, pupeční šňůře a chrupavkové tkáni. Protože je kyselina hyaluronová stěžejní složkou pojivové tkáně, je biokompatibilní, bioadsorbovatelná a neimunogenní. V důsledku toho vykazuje kyselina hyaluronová četné biologické funkce při lubrikaci a ochraně kloubových chrupavek.
V komplexu kyseliny hyaluronové a zinku podle vynálezu je poměr kyseliny hyaluronové a zinku v rozmezí, ve kterém tyto složky vykazují synergické účinky s ohledem na inhibici proliferace synoviálních buněk a supresi matricové metaloproteinázy MMP-9. Pokud jde o hmotnostní poměr, jsou kyselina hyaluronová a zinek v poměru 5:1 až 20:1 a výhodně 10:1. Molekulová hmotnost komplexu kyseliny hyaluronové a zinku používaného podle vynálezu je výhodně 100 kD až 2000 kD a výhodná je molekulová hmotnost asi 1000 kD. Komplex kyseliny hyaluronové a zinku podle vynálezu je možno vyrobit například smícháním vodného roztoku hyaluronátu sodného a vodného roztoku soli zinku, jako je chlorid zinečnatý (evropská patentová přihláška EP 0413 016).
Má se za to, že četná zánětlivá arthritická onemocnění jsou důsledkem proliferace a aktivace synoviálních buněk, vyvolávané někteiým faktorem. Aktivované synoviální buňky produkují chemické mediátory, jako jsou cytokiny, prostaglandiny a matricové metaloproteinázy, a způsobují destrukci kosti a chrupavky vedoucí k zánětu kloubu. Matricové metaloproteinázy (MMP) zahrnují MMP-1, která rozkládá kolagen typu I a typu II, MMP-3, která kromě uvedených kolagenů rozkládá chrupavkový kolagen, a MMP-9, která rozkládá želatinované formy kolagenu typu I a typu II na kolageny o nižší molekulové hmotnosti a rozkládá kolagen typu IV, kolagen typu V, kolagen typu IX a chrupavkový proteoglykan (Sapata, I. a spol., Biochem.Biophys.Acta, sv. 370, str. 510-523, 1974, Murphy, G. a spol., Biochem.J., sv. 203, str. 209-221, 1982, Morel,
F. a spol., Biochem.Biophys.Res.Commun., sv. 191, str. 269-274, 1993, Hibbs, M.S., Matrix Supple., sv. 1, str. 51-57, 1992, Murphy, G. a spol., Biochem.J,, sv. 277, str. 277-279, 1991, Hibbs, M.S. a spol,, J. Biol.Chem., sv. 260, str. 2493-2500, 1995). Ty, jak se soudí, se účastní destrukce kloubů.
Ačkoli je možno synoviální buňky od pacientů s revmatoidní arthritidou, osteoarthritidou a traumatických pacientů pěstovat in vitro, je růst těchto buněk inhibován v koncentrační závislosti komplexem kyselina hyaluronová/zinek podle vynálezu v koncentraci 100 až 300 pg/ml. Komplex kyselina hyaluronová/zinek podle vynálezu je tedy použitelný pro léčbu arthritických onemocnění, jako je revmatoidní arthritis, osteoarthritis, traumatická arthritická onemocnění, hyd50 rarthrosis a rychle destruující onemocnění kyčelního kloubu. Má se za to, že schopnost inhibovat proliferaci synoviálních buněk umožňuje nosotropické ošetřování revmatoidní arthritidy (japonská patentová přihláška zveřejněná bez průzkumu č. 7-145062).
Při kultivaci synoviálních buněk od pacientů s revmatoidní arthritidou, osteoarthritidou a trauma55 tických pacientů in vitro je matricová metaloproteináza MMP-9 ze synoviálních buněk pocháze-2CZ 301736 B6 jících z revmatoidní arthritidy potlačována komplexem kyselina hyaluronová/zinek podle vynálezu v koncentraci 100 pg/ml nebo nižší. Komplex kyselina hyaluronová/zinek podle vynálezu je tedy použitelný jako supresor matricové metaloproteinázy MMP-9 ze synoviálních buněk při revmatoidní arthritidě. Zde je výše uvedeným supresorem matricové metaloproteinázy MMP-9 například prostředek pro léčbu proliferativní diabetické retinopatie se závislostí na insulinu nebo inhibitor invaze nebo metastázy maligních nádorů.
Jak je ukázáno v jednotlivých provedeních, hyaluronát sodný neinhibuje podstatně proliferaci synoviálních buněk ani podstatně nepotlaČuje matricovou metaloproteinázu MMP-9. Navíc, io přestože chlorid zinečnatý inhibuje proliferaci synoviálních buněk i potlačuje matricovou metaloproteinázu MMP-9, komplex kyselina hyaluronová/zinek podle vynálezu vykazuje účinnější inhibici proliferace synoviálních buněk a supresi matricové metaloproteinázy MMP-9 než chlorid zinečnatý.
Účinky komplexu kyselina hyaluronová/zinek podle vynálezu při inhibici proliferace synoviálních buněk a supresi matricové metaloproteinázy MMP-9 jsou tedy synergické vzhledem ke kyselině hyaluronové a zinku jako složkám výše uvedeného komplexu.
To znamená, že obě složky výše uvedeného komplexu vykazují v případě výše uvedeného účinku potencující synergismus.
Pro komplex kyselina hyaluronová/zinek podle vynálezu je možno používat metody aplikace, běžně používané pro léčiva. Tento komplex může být zejména podáván orálně nebo parenterálně a zvláště výhodné je injekční podávání. Účinná dávka komplexu kyselina hyaluronová/zinek podle vynálezu je 0,01 až 1 mg, výhodně 0,03 až 0,5 mg na kloub na aplikaci na osobu. Nebylo pozorováno, že by komplex kyselina hyaluronová/zinek podle vynálezu vyvolával symptomy systémové toxicity, ani když byl podáván subkutánně krysám a myším při fyzicky možné maximální dávce 200 mg/kg.
Prostředek pro léčbu arthritických onemocnění a supresor matricové metaloproteinázy MMP-9 podle vynálezu může obsahovat 0,001 až 1 %, výhodně 0,01 až 0,5 % komplexu kyselina hyaluronová/zinek podle vynálezu s rutinně používaným farmaceutickým nosičem. Mezi rutinně používané farmaceutické nosiče patří báze, typicky používané v terapeutických aplikacích, jako je chitosan, škrob, pektin, HPMC a alginát sodný, pojivá jako tragant, arabská guma, kukuřičný škrob a želatina, vehikula jako krystalická celulóza a mannitol, desintegrační prostředky jako kukuřičný škrob, α-škrob a kyselina alginová, lubrikanty jako stearát horečnatý, sladidla jako sacharóza, laktóza a sacharin, ochucovadla jako peprmint, máta a třešňový extrakt a antiseptika.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 představuje graf znázorňující inhibiČní účinky HA/Zn, Na-HA a Zn na růst synoviálních buněk od pacientů s revmatoidní arthritidou (RASC).
Obr. 2 představuje graf znázorňující inhibiční účinky HA/Zn, Na-HA a Zn na růst synoviálních buněk od pacientů s osteoarthritidou (OASC),
Obr. 3 představuje graf znázorňující inhibiční účinky HA/Zn, Na-HA a Zn na růst synoviálních buněk od pacientů s traumatickou arthritidou (TASC).
-3CZ 301736 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Inhibiční účinek na prolíferaci synoviálních buněk
Účinky komplexu kyseliny hyaluronové a zinku (HA/Zn) podle vynálezu a účinky hyaluronátu sodného (Na-HA) a zinku (Zn) jako srovnávacích kontrol byly testovány na synoviálních buňio kách (RASC) od pacientů s revmatoidní arthritidou (RA), synoviálních buňkách (OASC) od pacientů s osteoarthritidou (OA) a synoviálních buňkách (TASC) od pacientů s traumatickou arthritidou (TA).
Jako zkušební látky byly použity HA/Zn (šarže ě. A65242, 1% roztok, Gedeon Richter, Ltd.), hyaluronát sodný (Na-HA, šarže č. KK4001, Q.P. Corp.) a chlorid zineěnatý (Zn, šarže č. ESH1413, Wako Pure Chemical Ind., Ltd.), Předem byly stanoveny kvantitativní hodnoty obsahu kyseliny hyaluronové a zinku ve výše uvedeném roztoku HA/Zn (specifická hmotnost; d 20 = 1,0134). Protože množství kyseliny hyaluronové bylo 99 % (105,0%, počítáno jako hyaluronát sodný) a množství zinku bylo 1,07 mg/ml, jestliže se výše uvedenému 1 % přiřadí hodnota 100, byl hmotnostní poměr kyseliny hyaluronové k zinku v uvedeném HA/Zn považován za rovný 10:1 (Na-HA : Zn). Zkušební látky byly testovány v koncentracích 10 pg/ml, 30 pg/ml, 100 gg/ml, 150 pg/ml, 200 pg/ml, 250 pg/ml a 300 pg/ml pro HA/Zn, ve stejných koncentracích jako HA/Zn pro Na-HA a v desetinových koncentracích HA/Zn pro Zn.
Tkáň synoviální blány byla odebrána z kolenního kloubu pacientů s revmatoidní arthritidou (RA; 5 případů, stáří 65,6 ± 10,6 let) a pacientů s osteoarthritidou (OA; 6 případů, stáří 73,4 ± 8,9 let) během chirurgické náhrady umělým kloubem a z kolenního kloubu pacientů s traumatickou arthritidou (TA; 6 případů, stáří 25,6 ± 6,7 let) během arthroskopického chirurgického zákroku. Po odebrání byly vzorky ihned umístěny do zkumavek (centrifugaění zkumavky o objemu 50 ml,
Iwaki) obsahujících DMEM (Dulbeccovo modifikované Eaglovo médium) a uchovávány při 4 °C. Později byla tkáň synoviální blány promyta v Čistém zařízení, ostatní tkáň byla odstraněna, synoviální blána byla rozřezána na tenké plátky a pro testování rozdělena na jednotlivé synoviální buňky (SC) působením enzymů (kolagenáza a trypsin, Wako Pure Chemical Ind., Ltd.).
Veškerá kultivace SC se prováděla s použitím DMEM obsahujícího 10 % teplem desaktivovaného (56 °C, 30 min) totálního telecího síra (FCS, Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) a smíšeného roztoku protilátek (penicilín lOOjednotek/ml, streptomycin 100 pg/ml, fungizon 25 pg/ml).
Synoviální buňky (SC) byly ínokulovány na mikroplotnu (96 jamek, Iwaki) v koncentraci
3,55.103 buněk/0,1 ml/jamku (1.104 buněk/cm2) a prekultívovány po dobu 2 dní při 37 °C v parní fázi tvořené 5 % CO2 a 95 % vzduchu. Později bylo médium nahrazeno médiem obsahujícím výše uvedené léky připravené v různých koncentracích s následnou kultivací při 37 °C v parní fázi tvořené 5 % CO2 a 95 % vzduchu do 12. dne po přidání léku. Během doby kultivace bylo médium nahrazováno médie obsahujícím lék každé 4 dny. Měření proliferace buněk se provádělo v den 4, 8 a 12 metodou MTT (New Biochemistry Experiments and Lectures 12, Molecular Immunology I - Immune cells and cytokines, 358, 1989). Výsledky byly vyjádřeny optickou absorbancí, která vykazovala pozitivní korelaci s počtem buněk.
Statistická analýza byla provedena zjišťováním rovnoměrné odchylky Barlettovou metodou na úrovni významnosti 5 %. Když byla odchylka rovnoměrná, byla data podrobena jednosměrné isovarianční úpravě (1-way ANOVA) a v případě, kdy byl pozorován významný rozdíl, byly průměrné hodnoty podrobeny vícenásobnému porovnávání metodou podle Dunnetta nebo Turkeye. V případě nerovnoměrné odchylky byla data podrobena Kruskal-Walisovu testu a řád byl zjišťován vícenásobným porovnáváním neparametrickou metodou podle Dunnetta nebo
Turkeye.
-4CZ 301736 B6
Výsledky získané pro RASC, OASC a TASC, jsou znázorněny na obr. 1, 2, resp. 3. Hvězdičky na těchto grafech označují významný rozdíl vzhledem ke skupině, které nebylo podáno léčivo, na úrovni p < 0,05, zatímco dvojité hvězdičky označují významný rozdíl na úrovni p < 0,01.
Jak je z těchto grafu zřejmé, ačkoli přídavkem Na-HA nebyla významně inhibována proliferace pro žádné synovíální buňky, byla v případě přídavku HA/Zn proliferace synoviálních buněk významně inhibována v závislosti na přidaném množství. Kromě toho byla významná inhibice synoviálních buněk pozorována také v případě přídavku Zn. Inhibice proliferace synoviálních buněk io však byla větší u HA/Zn než u Zn, a vezme-li se v úvahu, že v případě přídavku Na-HA nebyla proliferace inhibována, potvrzuje to, že HA/Zn má synergické účinky v porovnání s použitím samotného Na-HA nebo Zn.
Příklad 2
Supresní efekt na matricovou metoproteinazu MMP-9 v supematantu kultury synoviálních buněk
Synovíální buňky byly inkulovány na kultivační misky (průměr 35 mm, Iwaki) v koncentraci
1 0.104 buněk/2 ml/misku (1.104 buněk/cm2) a prekultivovány 2 dny při 37 °C v parní fázi tvořené % CO2 a 95 % vzduchu. Poté bylo médium nahrazeno médiem obsahujícím jednotlivá léčiva a po 8 dnech kultivace za stejných podmínek byly odebrány vzorky supematantu a před měřením skladovány při -80 °C. Přidávané koncentrace HA/Zn a Na-HA byly 100 pg/ml (konečná koncentrace), zatímco koncentrace Zn byla 10pg/ml (konečná koncentrace). Množství matricové metaioproteinázy MMP-9 v supematantu se měřilo pomocí EIA (enzymové imunoanalýzy). Aby bylo možno hodnotit výsledky vypočtené jako koncentrace v supematantu na buňku, byly výsledky převedeny na hodnoty dělené hodnotou optické absorbance synoviálních buněk krát MTT v tom čase. Navíc byl tato hodnota dále vyjádřena jako relativní hodnota ke kontrole jednotlivé hodnoty pro každou skupinu přidávaného léčiva, přičemž kontrolní skupině (bez přídavku léčiva) byla přiřazena hodnota 100 %.
Výsledkem bylo, že v případě přiřazení hodnoty 100 % kontrole (bez přidání léčiva) produkce MMP-9 při přídavku HA/Zn byla 0%, při přídavku Na-HA 100 % a při přídavku Zn 50 %. To tedy potvrzuje, že supresní efekt HA/Zn vůči MMP-9 je vůči samotným složkám, Na-HA nebo
Zn, synergický.
Jak bylo výše uvedeno, má komplex kyseliny hyaluronové a zinku podle vynálezu v porovnání se svými složkami, kyselinou hyaluronovou a zinkem, účinky, které synergický inhibují proliferaci synoviálních buněk a potlačují matricovou metaloproteinázu MMP-9, produkovanou synoviál40 nimi buňkami, takže je vhodný jako prostředek pro léčbu arthritických onemocnění, jako je revmatoidní arthritis.
Příklad 3 Formulace 45 kyselina hyaluronová zinek 0,2 g mannitol 5,0 g voda pro injekce příslušné množství celkem 100 ml
Postup přípravy:
Poté, co bylo 5 g mannitolu nebo glukózy rozpuštěno v 80 ml vody pro injekce, byl v malých podílech přidán komplex kyselina hyaluronová zinek, míchán a rozpuštěn. Roztok byl přefiltro-5CZ 301736 B6 ván a naplněn do ampule. Pro přípravu injekcí byla ampule 30 min sterilizována ve sprchovém sterilizátoru (asi 105 °C),
Podobný postup přípravy byl použit pro formulaci v příkladu 4.
Příklad 4 Formulace kyselina hyaluronová zinek glukóza voda pro injekce celkem
0,2 g 5,0 g příslušné množství 100 ml

Claims (7)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    20 1. Použití komplexu kyseliny hyaluronové a zinku pro výrobu prostředku pro léčbu arthritického onemocnění.
  2. 2. Použití podle nároku 1, kde komplex kyseliny hyaluronové a zinku má molekulovou hmotnost asi 100 kD až asi 2000 kD.
  3. 3. Použití podle nároku 2, kde komplex kyseliny hyaluronové a zinku má molekulovou hmotnost asi 1000 kD.
  4. 4. Použití podle kteréhokoli z nároků 1 až 3, kde hmotnostní poměr kyseliny hyaluronové a 30 zinkuje 5:1 až 20:1.
  5. 5. Použití podle nároku 4, kde hmotnostní poměr kyseliny hyaluronové a zinku je 10:1.
  6. 6. Použití podle kteréhokoli z nároků 1 až 5, kde arthritickým onemocněním je revmatoidní 35 arthritis, osteoarthritis, hydrarthrosis nebo rychle destruující onemocnění kyčelního kloubu.
  7. 7. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kde arthritickým onemocněním je revmatoidní arthritis.
CZ20013110A 1999-03-10 2000-03-10 Prostredek pro lécbu arthritidy CZ301736B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP06371899A JP2003089647A (ja) 1999-03-10 1999-03-10 関節性疾患治療剤

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20013110A3 CZ20013110A3 (cs) 2002-01-16
CZ301736B6 true CZ301736B6 (cs) 2010-06-09

Family

ID=13237463

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20013110A CZ301736B6 (cs) 1999-03-10 2000-03-10 Prostredek pro lécbu arthritidy

Country Status (21)

Country Link
US (1) US6608043B1 (cs)
EP (1) EP1166788B8 (cs)
JP (1) JP2003089647A (cs)
KR (1) KR100728096B1 (cs)
CN (1) CN1165315C (cs)
AT (1) ATE466584T1 (cs)
AU (1) AU2942500A (cs)
BG (1) BG65681B1 (cs)
CA (1) CA2364451C (cs)
CY (1) CY1109773T1 (cs)
CZ (1) CZ301736B6 (cs)
DE (1) DE60044341D1 (cs)
DK (1) DK1166788T3 (cs)
EA (1) EA005010B1 (cs)
EE (1) EE04660B1 (cs)
ES (1) ES2344677T3 (cs)
PL (1) PL200848B1 (cs)
PT (1) PT1166788E (cs)
SK (1) SK287223B6 (cs)
UA (1) UA72913C2 (cs)
WO (1) WO2000053194A1 (cs)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUP0303779A2 (en) * 2003-11-20 2006-02-28 Richter Gedeon Vegyeszet Pharmaceutical compositions containing hyaluronan complex for the treatment of sclerosis multiplex
ITRM20030590A1 (it) * 2003-12-22 2005-06-23 Univ Siena Formulazione a base di polimetafosfati per la cura di artropatie microcristalline.
JPWO2005089800A1 (ja) * 2004-03-17 2008-01-31 株式会社ロコモジェン ｈｓＨＲＤ３を含む医薬組成物
US20070099867A1 (en) * 2005-05-24 2007-05-03 Glycoscience Laboratories, Inc. Pharmaceutical agent containing hyaluronan as an active ingredient
CA2560844C (en) * 2005-09-26 2011-05-17 Glycoscience Laboratories, Inc. Pharmaceutical agent containing hyaluronan as an active ingredient
JP2009091248A (ja) * 2006-01-17 2009-04-30 Toshitsu Kagaku Kenkyusho:Kk 外傷性神経障害および／または運動機能障害の治療薬
US8153614B2 (en) 2006-12-05 2012-04-10 Glycoscience Laboratories, Inc. Treatment of osteoarthritis
FR2927255B1 (fr) * 2008-02-07 2011-08-12 Keysan Consulting Produits injectables biocompatibles a liberation de zinc et/ou de sel de saccharide sous forme de zinc et leurs utilisations.
US8462765B2 (en) * 2008-08-20 2013-06-11 Qualcomm Incorporated Method and apparatus to perform ranging operations for wireless stations
JP5587637B2 (ja) * 2009-04-10 2014-09-10 生化学工業株式会社 マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤及びその用途
HUP0900717A3 (en) 2009-11-18 2012-02-28 Richter Gedeon Nyrt Pharmaceutical composition for urological use containing zinc hyaluronate
US8455436B2 (en) 2010-12-28 2013-06-04 Depuy Mitek, Llc Compositions and methods for treating joints
US8398611B2 (en) 2010-12-28 2013-03-19 Depuy Mitek, Inc. Compositions and methods for treating joints
US8524662B2 (en) 2010-12-28 2013-09-03 Depuy Mitek, Llc Compositions and methods for treating joints
US8623839B2 (en) 2011-06-30 2014-01-07 Depuy Mitek, Llc Compositions and methods for stabilized polysaccharide formulations
ES2665254T3 (es) * 2011-07-12 2018-04-25 Holy Stone Healthcare Co., Ltd. Composiciones que comprenden ácido hialurónico para tratamiento y prevención de enfermedades relacionadas con las mucosas
US9682099B2 (en) 2015-01-20 2017-06-20 DePuy Synthes Products, Inc. Compositions and methods for treating joints

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4746504A (en) * 1986-03-14 1988-05-24 Bio-Technology General Corp. Heavy metal salts of hyaluronic acid and their use as antimicrobial agents
WO1988007060A1 (en) * 1987-03-19 1988-09-22 Arthropharm Pty. Limited Anti-inflammatory compounds and compositions
GB2217602A (en) * 1988-04-22 1989-11-01 Medvet Science Pty Ltd Treatment of inflammatory disorders in humans
CZ202591A3 (cs) * 1991-07-02 1993-01-13 Hypro Vyzkum Prostředek pro prevenci dekubitft a topickou terapii kožních lézt
CZ281000B6 (cs) * 1989-02-24 1996-05-15 Richter Gedeon Vegyészeti Gyár R. T. Nové prostředky obsahující asociáty kyseliny hyaluronové a způsob jejich přípravy
WO1996035720A1 (en) * 1995-05-10 1996-11-14 Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. Heavy metal salts of succinic acid hemiesters with hyaluronic acid, or hyaluronic acid esters, a process for their preparation, and relative pharmaceutical compositions
WO1997049412A1 (en) * 1996-06-21 1997-12-31 Fidia S.P.A. Autocross-linked hyaluronic acid and related pharmaceutical compositions for the treatment of arthropathies

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1987005517A1 (en) * 1986-03-14 1987-09-24 Bio-Technology General Corp. Heavy metal salts of hyaluronic acid useful as antimicrobial agents
US5744442A (en) * 1992-08-26 1998-04-28 Bristol Meyers Squibb Company Regulation of cellular invasiveness
EP0834319A1 (en) * 1996-10-07 1998-04-08 Kartar Dr. Lalvani Mineral and vitamin combinations in arthritic pain

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4746504A (en) * 1986-03-14 1988-05-24 Bio-Technology General Corp. Heavy metal salts of hyaluronic acid and their use as antimicrobial agents
WO1988007060A1 (en) * 1987-03-19 1988-09-22 Arthropharm Pty. Limited Anti-inflammatory compounds and compositions
GB2217602A (en) * 1988-04-22 1989-11-01 Medvet Science Pty Ltd Treatment of inflammatory disorders in humans
CZ281000B6 (cs) * 1989-02-24 1996-05-15 Richter Gedeon Vegyészeti Gyár R. T. Nové prostředky obsahující asociáty kyseliny hyaluronové a způsob jejich přípravy
CZ202591A3 (cs) * 1991-07-02 1993-01-13 Hypro Vyzkum Prostředek pro prevenci dekubitft a topickou terapii kožních lézt
WO1996035720A1 (en) * 1995-05-10 1996-11-14 Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. Heavy metal salts of succinic acid hemiesters with hyaluronic acid, or hyaluronic acid esters, a process for their preparation, and relative pharmaceutical compositions
WO1997049412A1 (en) * 1996-06-21 1997-12-31 Fidia S.P.A. Autocross-linked hyaluronic acid and related pharmaceutical compositions for the treatment of arthropathies

Also Published As

Publication number Publication date
EA005010B1 (ru) 2004-10-28
PL350289A1 (en) 2002-12-02
EP1166788A1 (en) 2002-01-02
EE200100478A (et) 2003-02-17
SK12502001A3 (sk) 2002-02-05
EP1166788A4 (en) 2007-10-10
JP2003089647A (ja) 2003-03-28
CY1109773T1 (el) 2014-09-10
DE60044341D1 (de) 2010-06-17
CN1343122A (zh) 2002-04-03
PT1166788E (pt) 2010-06-25
EA200100963A1 (ru) 2002-02-28
BG105885A (en) 2002-06-28
ATE466584T1 (de) 2010-05-15
UA72913C2 (en) 2005-05-16
CA2364451A1 (en) 2000-09-14
US6608043B1 (en) 2003-08-19
EP1166788B1 (en) 2010-05-05
KR20010108343A (ko) 2001-12-07
CN1165315C (zh) 2004-09-08
ES2344677T3 (es) 2010-09-03
BG65681B1 (bg) 2009-06-30
CA2364451C (en) 2011-08-02
EP1166788B8 (en) 2010-06-16
PL200848B1 (pl) 2009-02-27
EE04660B1 (et) 2006-08-15
SK287223B6 (sk) 2010-03-08
KR100728096B1 (ko) 2007-06-14
AU2942500A (en) 2000-09-28
DK1166788T3 (da) 2010-08-23
WO2000053194A1 (fr) 2000-09-14
CZ20013110A3 (cs) 2002-01-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ301736B6 (cs) Prostredek pro lécbu arthritidy
KR100910246B1 (ko) 유착, 관절염 및 건선 치료에 있어서 푸칸의 용도
JP5047814B2 (ja) 骨関節症におけるヒアルロン酸のアミド誘導体
NZ514827A (en) A pharmaceutical formulation comprising a low molecular weight thrombin inhibitor and its prodrug
US20110288048A1 (en) Promoter for hard tissue formation
JP3751202B2 (ja) 関節性疾患治療剤
Yılmaz et al. Investigation of the efficacy of epidermal growth factor, boric acid and their combination in cartilage injury in rats: An experimental study
RU2827073C1 (ru) Средство для лечения артрологических заболеваний в лиофилизированной форме для инъекций
Hussein et al. HISTOLOGICAL AND HISTOMORPHOMETRIC EVALUATION OF THE SYSTEMIC METFORMIN ADMINISTRATION ON BONE HEALING IN RABBITS.
RU2827069C1 (ru) Комбинированное средство для лечения артрологических заболеваний
CN102159218B (zh) 用于医学用途的新型几丁低聚物组合物
JPH02256610A (ja) ポリアロマティック化合物を含有する医薬用組成物
JP2005068057A (ja) グリア瘢痕形成抑制剤
JP5756498B2 (ja) 変形性関節症予防治療薬
MXPA00005985A (en) Use of fucane for regulating the reconstruction of connective tissues

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20200310