CZ300915B6 - Zpusob sušení proteinových krystalu - Google Patents

Abstract

Zpusob sušení proteinových krystalu prítomných ve vodné suspenzi proteinových krystalu, jehož podstata spocívá v tom, že zpusob zahrnuje tyto po sobe následující kroky: (a) suspenze proteinových krystalu se zfiltruje v odstredivé sušicce, (b) získaný filtracní kolác proteinových krystalu se v odstredivé sušicce uvede do styku se sušicím prostredím sestávajícím ze smesi vody a nevodného rozpouštedla, které je mísitelné s vodou ve všech pomerech a které má tenzi par vyšší než je tenze par vody, (c) filtracní kolác se v odstredivé sušicce prevede do fluidního lože a (d) filtracní kolác se ve fluidním loži vysuší sušicím plynem zvlhceným vodou.

Description

(57) Anotace:

Způsob sušení proteinových krystalů přítomných ve vodné suspenzi proteinových krystalů, jehož podstata spočívá v tom, že způsob zahrnuje tyto po sobě následující kroky:

(a) suspenze proteinových krystalů se ztiltruje v odstředivé sušičce, (b) získaný filtrační koláč proteinových krystalů se v odstředivé sušičce uvede do styku se sušicím prostředím sestávajícím ze směsi vody a nevod ného rozpouštědla, které je mísíte Iné s vodou ve všech poměrech a které má tenzi par vyšší než je tenze par vody, (c) filtrační koláč se v odstředivé sušičce převede do tluidního lože a(d) filtrační koláč se ve íluídním loži vysuší sušicím plynem zvlhčeným vodou.

Způsob sušení proteinových krystalů

Oblast techniky ? Vynález se týká způsobu sušení proteinových krystalů přítomných v suspenzi proteinových krystalů.

Dosavadní stav techniky

Proteiny jsou obsaženy v mnoha formách komerčně dostupných přípravků. Proteiny, zejména io jako účinné složky, jsou obsaženy v některých farmaceutických léčivech. Pro výrobu těchto forem přípravků je účelné, když se proteiny používají v krystalické formě. Kromě lepší manipulace jsou proteiny, především ve formě suchých krystalizátů, stabilnější než například v rozpuštěné formě.

Tak například pro výrobu farmaceutických přípravků s hormonem inzulínem jako účinnou látkou, se používá protein inzulín v krystalické formě. Krystalický inzulín je například při teplotě -20 °C stálý po dobu více let.

Jsou známé krystalické formy proteinů s molekulovou hmotností až mnoha statisíců daltonů, ale také peptidů s nižší molekulovou hmotností. Sekvence aminokyselin v proteinech může být buď identická se sekvencí vyskytující se v přírodě, nebo může být proti přírodní formě změněna. Kromě řetězců aminokyselin mohou proteiny obsahovat zbytky cukrů nebo jiné ligandy jako postranní řetězce. Proteiny se mohou izolovat z přírodních zdrojů nebo se mohou připravovat genetickou technikou nebo synteticky, popřípadě je lze získat kombinací zmíněných způsobů,

Proteiny tvoří ve vodném roztoku více nebo méně komplikovanou trojdimenzionální strukturu, která spočívá ve specifickém prostorovém uspořádání řetězců aminokyselin. Intaktní struktura proteinu je pro jeho biologickou účinnost podstatná. Při krystalizaci proteinů z vodných roztoků zůstává tato struktura dalekosáhle zachována. Struktura krystalů proteinu je především determinována sekvencí jeho aminokyselin, kromě toho také připojením nízkomolekulámích substancí, například solí iontů kovů a molekul vody. Především přítomnost určitého množství molekul vody v krystalech /krystalové vody/je nezbytná pro stabilitu struktury krystalů proteinů.

Tak například potřebují krystaly inzulínu optimální zbytkový obsah vody /v rozmezí asi od 1 do 7 %/. Pokud při přesušení krystalů zůstává příliš nízký obsah vlhkosti, tak se zároveň krystalům odejme krystalová voda. Tím se poruší chemická stabilita inzulínu, takže se například mohou tvořit výšemolekulámí sloučeniny. Předpokládá se, že výšemolekulámí podíly v inzulínu jsou odpovědné za imunologické reakce nesnášenlivosti. V extrémním případě může být inzulín tak dalece denaturován, že se krystaly ve vodných médiích již nerozpouštějí. Pokud se naproti tomu získá při sušení krystalizát s příliš vysokým obsahem vlhkosti, tak mezi jednotlivými krystaly zůstává příliš mnoho vody. V této mezikrystalové vodě je inzulín částečně rozpuštěn. Stabilita rozpuštěného inzulínu je ale podstatně nižší než stabilita pevných forem.

Je známo, že se krystaly proteinů, zejména krystaly inzulínu, mohou sušit také tak, že se suspenze krystalů zbaví krystalů filtrací a krystalový koláč se suší při teplotě nad 0 °C ve vakuu.

Je také známo, že se proces sušení může urychlit tak, že se před sušením mezikrystalová voda nahradí ethanolem. V průběhu sušení se krystal izáty rozmístí v tenké vrstvě na sušicí plechy nebo se s nimi na filtru pohybuje.

Při jiném způsobu se krystaly proteinů, například krystaly inzulínu, v podobě vodné suspenze zmrazí při teplotě pod 0 °C na sušicím plechu a potom se ve vakuu lyofilizují.

Při obou zmíněných způsobech není dostatečně zaručeno dosažení ani definované ani optimální zbytkové vlhkosti v sušených krystalech. Při obou způsobech se proces sušení až do konce kineticky kontroluje a musí se včas přerušit, aby se zabránilo přesušení. Zkušenost ukazuje, že je obtížné stanovit správnou dobu pro přerušení sušení. Zbývající obsah vlhkosti v krystalech nezávisí jen na tloušťce vrstvy na sušicím plechu, ale také na velikosti krystalů /resp. jejich povrchu/. Poněvadž se při krystal izačním procesu tvoří krystaly inzulínu ve větším nebo menším rozmezí velikostí, sestává při kineticky kontrolovaném procesu sušený krystalizát ze směsi sušších malých a vlhčích velkých krystalů.

Další nevýhoda těchto způsobů spočívá v tom, že je velmi obtížné u zařízení, používaných k sušení, automatizovat plnění a vyprazdňování. Také je pro plnění a vyprazdňování potřebná io ještě značná ruční práce, která s sebou nese riziko kontaminace zárodky a cizorodými částicemi.

Tak například lékopisy platné v současné době vyžadují, aby krystalický inzulín k přípravě farmaceutických přípravků obsahoval co nejméně zárodků, přičemž by ale nemusel být sterilní.

Dále je popsán způsob sušení, při kterém se všechny kritické stupně procesu postupně realizují v is aparatuře /odstředivé sušičce/:

1. odfiltrování krystalů z vodné suspenze,

2. promytí filtračního koláče,

3. náhrada promývací kapaliny sušicím médiem,

4. odstředění filtračního koláče do sucha,

5. odstranění filtračního koláče z filtru a jeho převedení do fluidního lože,

6. sušení krystalů ve fluidním loži proudem navlhčeného dusíku,

7. vyprázdnění vysušených krystalů tlakem dusíku do připojeného zásobníku.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je způsob sušení proteinových krystalů přítomných v suspenzi proteinových krystalů, jehož podstata spočívá v tom, že způsob zahrnuje tyto po sobě následující kroky: (a) suspenze proteinových krystalů se zfiltruje v odstředivé sušičce, (b) získaný filtrační koláč proteinových krystalů se v odstředivé sušičce uvede do styku se sušicím prostředím sestávajícím ze směsi vody a nevodného rozpouštědla, které je mísitelné s vodou ve všech poměrech a které má tenzi par vyšší než je tenze par vody, (c) filtrační koláč se převede do fluidního lože a (d) filtrační koláč se ve fluidním loži vysuší sušicím plynem zvlčeným vodou.

Výhodně podíl rozpouštědla v sušicím prostředí činí 10 až 80 %, výhodněji 15 až 60 %. Výhodně je rozpouštědlem alkohol nebo směs alkoholů, výhodněji methanol, ethanol, n-propanol nebo isopropanol. Výhodně je sušicím plynem dusík. Výhodně jsou proteinovými krystaly živočišného inzulínu, lidského inzulínu nebo jeho analogů.

Při popisovaném procesu sušení je mimořádně výhodné, když se oddělený filtrační koláč může převést do fluidního lože. Pokusy prokázaly, že bez náhrady mezi krystalové vody některým níže popsaným sušicím médiem, nemohlo být vytvořeno fluidní lože, takže vznikla směs větších nebo menších agregátů krystalů a rovnoměrné sušení bylo nemožné.

Další pokusy ukázaly, že po výměně mezi krystalové vody za čisté nevodné sušicí médium, například 100% ethanol nebo 100% propanol, přičemž v krystalech proteinů zůstávala pouze intrakristalinní voda /krystalová voda/, je vytvoření fluidního lože možné. V průběhu následujícího sušení nemohlo být sušicí médium ani po delší době odstraněno v dostatečné míře. Sušené produkty vykazovaly zbytkový obsah sušicího média vyšší než 5 %. Dále byla v průběhu doby sušení také částečně odstraněna krystalová voda.

Nyní bylo s překvapením zjištěno, že po výměně mezikiystalové vody za sušicí médium, které sestávalo ze směsi vody a nevodné substance, bylo možno odstranit zmíněné nevýhody, Po výměně mezikrystalové vody za sušicí médium popsané níže, bylo možno z odděleného filtračního koláče vytvořit fluidní lože a krystal izát dostatečně vysušit. Při použití navlhčeného sušicího _ 7 _

CZ JUW913 Bó plynu byly po době sušení asi 1 až 4 h získány produkty, které neobsahovaly agregáty krystalů a zbytkový obsah nevodných substancí byl nižší než 0,1 %.

Jak již bylo uvedeno, týká se tento vynález způsobu sušení krystalů proteinů, který vychází z vodné suspenze krystalů proteinů a především spočívá v tom, že se krystaly proteinů po odfiltrování ze suspenze krystalů proteinů převádějí do sušicího média, sestávajícího ze směsi vody s nevodným, s vodou v každém poměru mísitelným rozpouštědlem, které má vyšší tlak páry než voda. S výhodou se způsob sušení suspenze krystalů proteinů podle vynálezu provádí v odstředivé sušičce.

Nevodné substance jako součásti vhodných sušicích médií jsou charakteristické tím, že při teplotě kolem 40 °C mají vyšší tlak páry /tj. vyšší tlak páry než má voda/, že jsou mísitelné s vodou v každém poměru a za uvedených podmínek vůči proteinům chemicky netečné. Alkoholy, jako například methanol, ethanol, n-propanol a isopropanol, splňují tyto podmínky mimořádně dobře. Také směsi alkoholů jsou vhodné.

Podíl nevodných substancí ve vhodných směsích s vodou v sušicím médiu činí asi od 10 až asi do 80 %, s výhodou asi od 15 až asi do 60 %, dále s výhodou asi 20 až asi do 80 %.

U popsaného způsobu sušení s použitím bezvodého dusíku jako sušicího plynu je proces sušení až do konce kineticky kontrolován, takže se mohou vyskytnout výše popsané nevýhody.

Vlastní pokusy s použitím vlhkého dusíku jako sušicího plynu ukázaly, že odstraňování vody z krystalů se v průběhu fáze sušení zastavuje a dosažený zbytkový obsah vody v sušených krystalech je dán obsahem vody v sušicím plynu. To značí, že na konci fáze sušení nastane termodynamická rovnováha mezi obsahem vody v sušicím plynu a obsahem vody v krystalech. Zbytkový obsah vody v sušených krystalech je tedy nezávislý na jejich velikosti /resp. na velikosti jejich povrchu/.

Kromě toho ukázaly pokusy s použitím bezvodého dusíku jako sušicího plynu to, že nevodná součást sušicího média, i po delší době sušení, nemohla být dostatečně odstraněna. Sušené produkty měly zbytkový obsah nevodné součásti vyšší než asi 1 %.

S překvapením bylo zjištěno, že při způsobu sušení krystalů proteinů s použitím sušicího plynu mohl být zbytkový obsah nevodné součásti sušicího média snížen pod 0,1 , když se použil sušicí plyn obsahující vodu. Způsob sušení se s výhodou provádí v odstředivé sušičce, Obzvláště výhodné při způsobu sušení krystalů proteinů je to, že se krystaly proteinů po odfiltrování ze suspenze krystalů proteinů převádějí do sušicího média, které sestává ze směsi vody a nevodného, s vodou v jakémkoliv poměru mísitelného rozpouštědla, které má vyšší tlak páry než voda. Zejména výhodné je při tom to, že se krystaly proteinů po odfiltrování ze suspenze krystalů proteinů za účelem sušení převádějí do fluidního lože.

Vlastní pokusy s popsaným způsobem sušení prokázaly, že při použití sterilních a cizorodých částic prosté suspenze krystalů a sterilní filtrace promývací vody, sušicího média a sušicího plynu a po vhodném vyčištění a sterilizaci odstředivé sušičky, byl získán sušený produkt bez zárodků a bez cizorodých částic.

Způsob podle tohoto vynálezu je mimořádně vhodný k sušení krystalů živočišného inzulínu, humánního inzulínu ajeho analogů.

Jako analoga inzulínu se zde definují deriváty přirozeně se vyskytujících inzulínů, zejména humánního inzulínu nebo živočišných inzulínů, které se liší substitucí nejméně jednoho, přirozeně se vyskytujícího esteru aminokyseliny a/nebo adicí nejméně jednoho esteru aminokyseliny a/nebo organického zbytku z odpovídajícího, jinak stejného, přirozeně se vyskytujícího inzulínu. Konstrukce a funkce odstředivé sušičky:

-3CZ 300915 B6

Odstředivá sušička sestává z vodorovně uloženého bubnu odstředivky s kompaktním plástem.

V bubnuje umístěn válcový sítový koš, který je s bubnem pevně spojen. Prostor mezi dírkovanou plochou pláště sítového koše a kompaktní plochou pláště bubnu, je radiálně rozdělen do více komor. V zadní čelní ploše bubnu jsou otvoiy, takže při otáčení bubnu se může zvenčí přivádět do komor buď plyn /například sušicí plyn/, nebo z komor odvádět kapalina /například matečný louh ze suspenze krystalů/ mimo sušičku. Vpředu je buben uzavřen výtlačnou hlavou, která se s bubnem otáčí. Je-li buben v klidu, může se výtlačná hlava pohybovat axiálním směrem. Když se výtlačná hlava vrací, uvolní se pevná kruhová výpustná dráha, která je potom z vnitřku bubnu odstředivky přístupná. Po otevření se buben může opět pomalu otáčet /aby se vyprázdnil suchý io produkt/.

Odstředivá sušička, která se používala při pokusech, měla buben s průměrem 400 mm a s délkou pláště 200 mm, sítový koš měl filtrační plochu 0,25 m² a velikost ok 10 pm.

Odstředivka se plní produktem /suspenzí krystalů/ při otáčení bubnu /475 ot./min/ axiálně dutou hnací hřídelí, přičemž se tvoří filtrační koláč /krystal izát/jako vrstva na plášti síta a filtrát se tlačí pláštěm síta do komor a odtud dnem bubnu do nepohyblivého vnějšího prostoru. Filtrát /matečný louh z krystalizace/ odtéká z odstředivky výpustným hrdlem jako odpad. Nakonec se filtrační koláč stejnou cestou promyje vodou. Potom se promývací voda nahradí stejnou cestou některým sušicím médiem, uvedeným v příkladech. Poté, co se filtrační koláč při vyšších otáčkách /1200 ot./min/ odstředí do sucha, oddělí se při nižších otáčkách /6 ot./min/ tlakem uváděného dusíku od pláště síta a oddělený produkt se převede do fluidního lože a vysuší. K tomu se používá proud dusíku pulzující zvenčí /otvory ve dnu bubnu/ spodními komorami bubnu a spodní částí pláště síta do vnitřního prostoru bubnu. Sušicí plyn prochází rotujícím fluidním ložem a opouští buben horní částí pláště síta a homí komorou bubnu.

Po ukončení fáze sušení se výtlačná hlava vrátí zpět, takže se kruhová výpust uvolní. Při nízkých otáčkách a pulzujícím tlaku plynu /dusíku/ se usušený produkt vytlačí do výpustě. Na konci výpustě se dusík v cyklonu oddělí a suchý produkt se zachytí v zásobníku.

Sušicí plyn /dusík/ se před vstupem do odstředivé sušičky zvlhčuje ve zvláštním zařízení sterilní vodní parou a ohřívá na sušicí teplotu. Teplota a obsah vody v proudu dusíku se reguluje. Následující příklady provedení způsob podle vynálezu blíže objasňují, ale nijak neomezují.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

V krystalizačním kotli s míchadlem se krystalizuje 1000 g vepřového inzulínu z vodného roztoku při pH 5,5 a s přísadou iontů zinku. Po ukončení krystalizace obsahuje suspenze /asi 100 litrů/ romboedrické krystaly s průměrnou velikostí částic 25 pm. Jak je popsáno v obecné částí, míchaná suspenze krystalů se přemístí v průběhu asi 30 min do odstředivé sušičky. Krystalový koláč se promyje asi 50 litry vody a potom se promývací voda nahradí 70% vodným ethanolem /sušicí médium/. Po odstranění filtračního koláče z pláště síta se krystal izát suší ve fluidním loži.

V průběhu doby sušení se sušicí plyn předehřeje na teplotu 40 °C a upraví na obsah vody 4 g na 1 kg dusíku. Po 120 min se sušení ukončí a produkt se převede do zásobníku. Analýza suchého krystalizátu vykazuje zbytkovou vlhkost obsahem vody 5 % a zbytkový obsah ethanolu nižší než 0,1 %.

Příklad 2

V krystalizačním kotli s míchadlem se za sterilních podmínek krystalizuje 1500 g humánního inzulínu z vodného roztoku pri pH 5,5 a s přísadou iontů zinku. Po ukončení krystalizace obsahuje suspenze /asi 150 litrů/ romboedrické krystaly s průměrnou velikostí částic 20 pm. Odstředivá . Λ _

CZ 3110915 B6 sušička se před použitím postupně promývá 10% louhem sodným, vodou bez pevných částic, 10% kyselinou octovou a opět vodou bez pevných částic. Nakonec se odstředivá sušička sterilizuje parou bez pevných částic. Jak je popsáno v obecné části, míchaná suspenze krystalů se přemístí v průběhu asi 45 min do odstředivé sušičky. Krystalový koláč se promyje asi 50 litry vody a potom se promývací voda nahradí 50% vodným roztokem ethanolu /sušicí médium/. Obě kapaliny se předem sterilně přefiltrují. Po odstranění filtračního koláče z pláště síta se krystalizát suší ve fluidním loži. V průběhu doby sušení se sterilně filtrovaný sušicí plyn předehřeje na teplotu 40 °C a upraví na obsah vody 3 g na l kg dusíku. Po 150 min se sušení ukončí a produkt se převede do zásobníku, jak je výše popsáno. Analýza suchého krystalizátu vykazuje zbytkovou io vlhkost obsahem vody 4 % a zbytkový obsah ethanolu nižší než 0,1 %. V produktu nebyly ani zárodky ani cizorodé částice.

Příklad 3

V krystalizačním kotli s tníchadlem se krystalizuje 1000 g humánního inzulínu z vodného rozto15 ku při pH 5,5 a s přísadou iontů zinku. Po ukončení krystalizace obsahuje suspenze /asi 100 litrů/ romboedrické krystaly s průměrnou velikostí částic 25 pm. Jak je popsáno v obecné části, míchaná suspenze krystalů se přemístí v průběhu asi 30 min do odstředivé sušičky. Krystalový koláč se promyje asi 50 litry vody a promývací voda se nahradí 30% vodným ethanolem /sušicí médium/. Po odstranění krystalového koláče z pláště síta se produkt suší ve fluidním loži. V průběhu doby sušení se sušicí plyn předehřeje na teplotu 40 °C a upraví na obsah vody 5 g na 1 kg dusíku. Po 120 min se sušení ukončí a produkt se převede do zásobníku. Analýza suchého krystalizátu vykazuje zbytkový obsah vody 6 % a zbytkový obsah ethanolu nižší než 0,1 %.

Příklad 4

V krystal izačním kotli s míchadlem se krystalizuje 1000 g vepřového inzulínu z vodného roztoku při pH 5,5 a s přísadou iontů zinku. Po ukončení krystalizace obsahuje suspenze /asi 100 litrů/ romboedrické krystaly s průměrnou velikostí částic 30 pm. Jak je popsáno v obecné části, míchaná suspenze krystalů se přemístí v průběhu asi 30 min od odstředivé sušičky. Krystalový koláč se promyje asi 50 litry vody a promývací voda se nahradí 72% vodným propanotem /sušicí médium/. Po odstranění krystalového koláče z pláště síta se produkt suší ve fluidním loži. V průběhu doby sušení se sušicí plyn předehřeje na teplotu 40 °C a upraví na obsah vody 4 g na 1 kg dusíku. Po 140 min se sušení ukončí a produkt se převede do zásobníku. Analýza suchého krystalizátu vykazuje zbytkový obsah vody 5 % a zbytkový obsah propanolu nižší než 0,1 %.

Příklad 5

V krystalizačním kotli s míchadlem se kiystalizuje 1500 g Di-Arg-inzulinu z vodného roztoku při pH 6,3 a s přísadou iontů zinku. Po ukončení krystalizace obsahuje suspenze /asi 100 litrů/ romboedrické krystaly s průměrnou velikostí Částic 20 pm. Jak je popsáno v obecné části, míchaná suspenze krystalů se přemístí v průběhu asi 30 min do odstředivé sušičky. Krystalový koláč se promyje asi 50 litry vody a promývací voda se nahradí 25% vodným propanolem /sušicí médium/. Po odstranění filtračního koláče z pláště síta se produkt suší ve fluidním loži. V průběhu doby sušení se sušicí plyn předehřeje na teplotu 40 °C a upraví na obsah vody 3 g na 1 kg dusíku. Po 160 min se sušení ukončí a produkt se převede do zásobníku. Analýza suchého krystalizátu vykazuje zbytkový obsah vody 6 % a zbytkový obsah propanolu nižší než 0,1 %.

Příklad 6

V krystalizačním kotli s míchadlem se krystalizuje 1000 g humánního inzulínu z vodného roztoku při pH 5,5 a s přísadou iontů zinku. Po ukončení krystalizace obsahuje suspenze /asi 100 litrů/ romboedrické krystaly s průměrnou velikostí částic 25 pm. Jak je popsáno v obecné části, so míchaná suspenze krystalů se přemístí v průběhu asi 30 min do odstředivé sušičky. Kiystalový

-5CZ 300915 B6 koláč se promyje asi 50 litry vody a promývací voda se nahradí 15% vodným n-propanolem /sušicí médium/. Po odstranění filtračního koláče z pláště síta se produkt suší ve fluidním loží. V průběhu doby sušení se sušicí plyn předehřeje na teplotu 40 °C. Obsah vody v sušicím plynu se na počátku doby sušení upraví na 15 % a v průběhu doby sušení se sníží na 8 %. Po 120 min se sušení ukončí a produkt se převede do zásobníku. Analýza suchého krystal i zátu vykazuje zbytkový obsah vody 6 % a zbytkový obsah propanolu nižší než OJ %.

Průmyslová využitelnost

Způsob podle vynálezu umožňuje získávat jednoduchými prostředky v běžném technickém zaří10 zení inzulín humánního i živočišného původu v krystalické formě, která má optimální fyzikální vlastnosti odpovídající požadavkům současných lékopisů.

Claims (10)

15 PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob sušení proteinových krystalů přítomných ve vodné suspenzí proteinových krystalů, vyznačený tím, že způsob zahrnuje tyto po sobě následující kroky: (a) suspenze pro20 teinových krystalů se zfiltruje v odstředivé sušičce, (b) získaný filtrační koláč proteinových krystalů se v odstředivé sušičce uvede do styku se sušicím prostředím sestávajícím ze směsi vody a nevodného rozpouštědla, které je mísitelné s vodou ve všech poměrech a které má tenzi par vyšší než je ten ze par vody, (c) filtrační koláč se v odstředivé sušičce převede do fluidní ho lože a (d) filtrační koláč se ve fluidním loži vysuší sušicím plynem zvlhčeným vodou.

2. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že podíl rozpouštědla v sušicím prostředí činí 10 až 80%.

3. Způsob podle nároku 2, vyznačený tím, že podíl rozpouštědla v sušicím prostředí

30 činí 15 až 60%.

4. Způsob podle některého z předcházejících nároků 1 až 3, vyznačený tím, že rozpouštědlem je alkohol nebo směs alkoholů.

35

5. Způsob podle nároku 4, vyznačený tím, že rozpouštědlem je methanol.

6. Způsob podle nároku 4, vyznačený tím, že rozpouštědlem je ethanol.

7. Způsob podle nároku 4, vyznačený tím, že rozpouštědlem je n-propanol.

8. Způsob podle nároku 4, vyznačený tím, že rozpouštědlem je isopropanol.

9. Způsob podle některého z nároků 1 až 8, vyznačený tím, že sušicím plynem je dusík.

10. Způsob podle některého z nároků 1 až 9, vyznačený tím, že proteinovými krystaly jsou krystaly živočišného inzulínu, lidského inzulínu nebo jeho analogů.