CZ300368B6

CZ300368B6 - Zpusob výroby rapamycinového derivátu

Info

Publication number: CZ300368B6
Application number: CZ20021136A
Authority: CZ
Inventors: Shaw@Chia-Cheng; Hamilton Sellstedt@John; Noureldin@Razzak; Karen Cheal@Gloria; Fortier@Genevieve
Original assignee: Wyeth
Priority date: 1999-09-29
Filing date: 2000-09-27
Publication date: 2009-05-06
Also published as: IL148542A; CA2385461A1; BR0014433A; CN1176925C; HUP0202609A2; NO20021360L; KR20020029796A; DK1216251T3; KR100754236B1; PL354461A1; JP2003510329A; JP4289813B2; NO20021360D0; TWI256395B; EA200200412A1; WO2001023395A3; AU782234B2; EP1216251A2; CN1402731A; DE60001510T2

Abstract

Regioselektivní zpusob výroby 42-esteru nebo 42-etheru rapamycinu a 31-silyletherových meziproduktu.

Description

Způsob výroby rapamycinového derivátu

Oblast techniky

Vynález se týká regioselektivní (jeden směr vytvářené vazby je upřednostňován) syntézy derivátů rapamycinu v poloze 42, které se hodí k indukci imunosuprese a k léčbě odvržení po transplantaci, reakce štěpu vůči hostiteli, k léčbě autoimunitních chorob, zánětlivých chorob, T-buněčné leukemie/lymfomu u dospělých, masivních tumorů, plísňových onemocnění a prolyferativních io cévních poruch. Konkrétněji se tento vynález týká v podstatě selektivního způsobu výroby 31silylových chráněných etherů rapamycinu, použitelných jako meziprodukty k výrobě 42—esterů a etherů rapamycinu.

Rapamycin je makrocyklické trienové antibiotikum, produkované Streptomyces hydroscopicus, u něhož byla ověřena antifungální aktivita, zejména vůči Candida albicans, a to jak v podmínkách in vitro, tak i in vivo (C. Vezina a spol., J. Antibiot. 28, 721, 1975; S. N. Sehgal a spol., J. Antibiot. 28., 727, 1975; H. A. Baker a spol,, J. Antibiot. 31, 539, 1978; patent US 3 929 992; patent US 3 993 749).

U rapamycinu samotného (patent US 4 885 171) nebo v kombinaci s picibanilem (patent US 4 401 653) byla prokázána protinádorová aktivita. R. Martel a spol. (Can. J. Physiol. Pharmacol. 55, 48, 1977) prokázali, že rapamycin je účinný u experimentálního modelu alergické encefalomyelitidy, u modelu roztroušené sklerózy, u modelu adjuvantní artritidy, revmatoidní arthritidy a účinně inhibuje vytváření protilátek podobných IgE.

Imunosupresivní účinky rapamycinu byly předloženy ve FASEB 3, 3411, 1989. Jako účinná imunosupresivní činidla, vhodná k prevenci odvržení transplantátu, byly prokázány také cyklosporin A a FK-506, jiné makrocyklické molekuly (FASEB 3, 3411, 1989; FASEB 3, 5256, 1989; R.Y. Calne a spol., Lancet 1183, 1978; a patent US 5 100 899).

Bylo také prokázáno, že rapamycin je vhodný k prevenci nebo léčbě systémového lupus erythematodes (patent US 5 078 999), zánětu plic (patent US 5 080 899), na inzulínu závislého diabetes mellitus (patent US 5 321 009), buněčné proliferace hladkých svalů a intimálního ztluštění po cévním poškození (patent US 5 516 781), T-buněčné leukemie/lymfomu dospělých (evropská patentová přihláška EP 25 960 Al) a očních zánětů (patent US 5 387 589).

Rapamycinových derivátů, substituovaných v poloze 42, je známo větší množství. Typicky se jedná o estery (na bázi uhlíku a síry) nebo ethery hydroxy lové skupiny rapamycinu v poloze 42, které jsou vyráběny esterifikací nebo etherifikací polohy 42. Esterifíkace rapamycinu v poloze 42 byla běžně prováděna přímou reakcí rapamycinu s acylačními činidly k získání požadovaného produktu. Chemicky se jedná o spíše jednoduchý děj. Ovšem vzhledem k tomu, že rapamycin obsahuje dvě sekundární hydroxylové skupiny v polohách 31 a 42, pokusy rozlišovat mezi těmito dvěma funkčními centry k dosažení selektivní syntézy 42-monoacylováného produktu, představovaly obtížnou výzvu. Tento typ neregioselektivní reakce rovněž vytvářel 31,42-bisacylovaný vedlejší produkt a v reakční směsi zbývalo také určité množství nezreagovaného rapamycinu. Konečným výsledkem byl nižší výsledek, který vyžadoval rozsáhlé čištění k zisku čistého 42monoacylovaného produktu. Problémy mohou být ozřejměny vzhledem k syntéze 42-monoesteru, jako je rapamycinový 42-ester s 2,2-bis(hydroxymethyl)propionovou kyselinou (uváděnou zde jako sloučenina [C]). Například syntéza rapamycinového 42-esteru s 2,2-bis(hydroxy50 methyOpropionovou kyselinou, popsaná v patentu US 5 362 718, příkladu 10, byla neregioselektivní; současně vznikl 31,42-bisesterový vedlejší produkt. Výsledkem bylo, že surový produkt [B] po zpracování obsahoval požadovaný produkt [B], 31,42-bisesterový vedlejší produkt a nezreagovaný rapamycin. Ve snaze spotřebovat zbývající výchozí rapamycin byla reakce ponechána probíhat po delší dobu, ovšem se zápornými výsledky, množství 31,42-bisesteru význam55 ně vzrostlo. Výsledný surový produkt [B] byl kontaminován nezreagovaným rapamycinem

- 1 CZ 300368 B6 a 31,42-bisesterem a bylo ověřeno, že následné čištění kolonovou chromatografií je obtížné, neboť 31,42-bisester má retenční čas velmi podobný jako produkt [B]. Celkově je hlavní překážkou výroby sloučeniny [B] ve velkém měřítku neregiospecifická reakce, kterou dále komplikují obtíže při vyčištění produktu.

Existuje tedy potřeba regioselektivní syntézy 42-esterů či etherů rapamycinu.

Existuje také potřeba způsobu selektivní výroby 42-esterů či etherů rapamycinu, který by se hodil pro obchodní výrobu nebo výrobu ve velkém měřítku a mohl být efektivně prováděn.

Podstata vynálezu

V prvním ohledu tento vynález poskytuje regioselektivní způsob výroby 31-silyletheru rapamy15 činu, například sloučeniny o vzorci IA

(IA) kde každý R', R a R' jsou organické skupiny, jako jsou alkylové skupiny, s výhodou obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, například 1 až 4 uhlíkové atomy, nej výhodněj i methyl, ethyl a propyl, který zahrnuje:

a) reagování rapamycinu se sily lačním činidlem k vytvoření 31,42-bis-s i ly letheru; a

b) hydrolyzování 42-silyletherové skupiny ve studené zředěné kyselině k poskytnutí 31-silyletheru rapamycinu, například sloučeniny o výše uvedeném vzorci (I).

31-silylether rapamycinu může být acylován nebo etherifíkován na 42-hydroxyskupině s následujícím odstraněním 31-silylové chránící skupiny a jakékoliv jiné chránící skupiny, která může být přítomna, k poskytnutí požadovaných 42-esterů nebo etherů rapamycinu.

Ve druhém ohledu tento vynález poskytuje regioselektivní způsob výroby 42-esteru nebo etheru rapamycinu o struktuře (I)

-2 CZ 300368 B6

kde R je esterová nebo etherová skupina, která zahrnuje:

a) reagování rapamycinu se silylačním činidlem k vytvoření 31,42-bis-silyletheru rapamycinu;

b) hydrolyzování 31,42-silyletheru ve studené zředěné kyselině k poskytnutí 31-silyletheru rapamycinu;

c) působení vhodným esterifikačním nebo etherifikačním činidlem na 31—silylether rapamyciio nu k vytvoření 3 1-silylether, 42-silylesteru nebo etheru rapamycinu;

d) hydrolyzování 31-silyletheru ve studené zředěné kyselině a pokud je to žádoucí, odstranění jakékoliv chránící skupiny na substituentu R, souběžně nebo následně, k poskytnutí požadovaného 42-esteru nebo etheru rapamycinu.

Upřednostňované 42-estery a ethery rapamycinu, které lze připravit způsobem poskytovaným tímto vynálezem, jsou uvedeny v následujících patentech, které jsou zde všechny začleněny jako odkazy: alkylestery (patent US 4 316 885); aminoalkylestery (patent US 4 650 803); fluorované estery (patent US 5 100 883); amidové estery (patent US 5 118 677); karbamátové estery (patent

US 5 118 678); silylové ethery (patent US 5 120 840); aminoestery (patent US 5 130 307); acetály (patent US 5 51 413); aminodiestery (patent US 5 162 333); sulfonátové a sulfátové estery (patent US 5 177 203); estery (patent US 5 221 670); alkoxyestery (patent US 5 233 036); Oarylové, -alkylové, -alkenylové a-alkynylové ethery (patent US 5 258 389); karbonátové estery (patent US 5 260 300); arylkarbonylové a alkoxykarbonylové karbamáty (patent US 5 262 423);

karbamáty (patent US 5 302 584); hydroxyestery (patent US 5 362 718; WO 95/28406); blokované estery (patent US 5 385 908); hydrocyklické esteiy (patent US 5 385 909); gemdisubstituované estery (patent US 5 385 910); aminoalkanoové estery (patent US 5 389 639); fosfory lkarbamátové estery (patent US 5 391 730); karbamátové estery (patent US 5 411 967); karbamátové estery (patent US 5 434 260); amidinokarbamátové estery (patent US 5 463 048);

karbamátové estery (patent US 5 480 988), karbamátové estery (patent US 5 480 989); karbamátové estery (patent US 5 489 680), blokované M-oxidové estery (patent US 5 491 231); biotinové estery (patent US 5 504 091) a O-alkylové ethery (patent US 5 665 772). Tyto patenty rovněž předkládají různé hodnoty pro ekvivalent substituentu R ve výše uvedeném vzorci (I) a způsoby esterifikace či etherifíkace, použité ve výše uvedeném kroku (c).

Zvláště upřednostňované hodnoty pro R ve výše uvedeném vzorci (I) jsou:

a) -O-C=O.CR⁷R⁸R⁹; (tj. estery), kde:

R⁷ je vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, atkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, -(CR³R⁴)fOR¹⁰, -CF₃, -F, nebo -CO₂R’ *;

-3QZ 300368 B6

R⁸ a R⁹ jsou každý nezávisle vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, nebo -(CR³R⁴)fOR¹⁰; nebo R⁸ a R⁹ mohou být brány dohromady k vytvoření X;

R¹⁰ je vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, tri feny Imethy 1, benzyl, alkoxymethyl o 2 až 7 atomech uhlíku, chlorethyl nebo tetrahydropyranyl;

X je 5—(2,2—di—(alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku))[l,3]dioxanyl;

5-(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[l,3]dioxanyl;

io 4—(2,2—di—(alky 1 o 1 až 6 atomech uhlíku))[l,3]dioxanyl;

4-(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[l,3]dioxanyl;

4-(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[l,3]dioxalanyl; nebo 4-(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[l,3]dioxalanyl;

R³ a R⁴ jsou každý nezávisle vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, -CF₃, nebo -F; a f - 0 až 6 ; za podmínky, že R obsahuje alespoň jednu skupinu -(CR³R⁴)fOR¹⁰ nebo skupinu X; a

b) -OR¹ (tj. ethery), kde R¹ je alkyl, thioalkyl, arylalkyl, hydroxyalkyl, dihydroxyalkyl, hydroxyalkylarylaiky 1, dihydroxyalkylaryl alkyl, alkoxyalkyl, acyloxyalkyl, aminoalkyl, alkylaminoalkyl, alkoxykarbonylaminoalkyl, acyl aminoalkyl, arylsulfonamidoalkyl, allyl, dihydroxyalkylallyl a dioxolanylallyl, karbalkoxyalkyl, kde „alk-„ nebo „alkyl“ představují Cj^alkyl, rozvětvený nebo rovný, s výhodou C₁₃alkyl, u něhož může být uhlíkový řetězec volitelně přerušen etherovou (-O-) vazbou; „acyl“ představuje alkylkarbonyl a „aryl“ má 6-10 uhlíkových atomů a zahrnuje fenyl, naftyl a podobně.

R¹ se nej výhodněji zvolí z hydroxyalkylu, hydroxyalkoxyalkylu, acylaminoalkylu a aminoalkylu; zejména 40-0-(2-hydroxy)-ethylrapamycinu, 4O-0-(3-hydroxy)propyl rapamycinu, 4030 0-[2-(2-hydroxy)ethoxy]ethylrapamycinu a 4O-0-(2-acetaminoethyl)rapamycinu.

R ve vzorci I je nej výhodněji 2,2-bis(hydroxymethyl)propiony loxyskupina nebo 2,2,5-trimethy I [ 1,3]-dioxan-5-karbonyloxyskupina.

Vzhledem ke kroku (a) může být sily láce prováděna v inertním rozpouštědle, například ethylacetátu; s výhodou přítomnosti vhodné báze, například imidazolu. Reakce může být prováděna při nízké teplotě, například při teplotě místnosti nebo nižší, například při 0 °C s výhodou při teplotě v rozmezí 0 až 5 °C. Přednost se dává tomu, aby 31 - a 42—hydroxylové skupiny byly chráněny jako trialkylsilylethery. 42-silylem chráněná hydroxylová skupina 31,42-bis-silylovaného rapamycinu může být selektivně odštěpena v mírně kyselém prostředí k poskytnutí 31-silyl rapamycinu. Sily lační činidla, používaná pro tuto transformaci, jsou známé, obchodně dostupné chloralkylsilany, jako chlortrimethylsilan, chlortrí ethyl si lan nebo chlortripropylsilan. Ovšem čím objemnější je trialkylsilan, tím více časuje potřeba k odstranění chránící skupiny v kyselém prostředí během předposledního chemického kroku k regeneraci 31-hydroxylové skupiny. Delší reakční doba v kyselém prostředí také poskytuje více degradačních vedlejších produktů. I když k výrobě 31-O-trialkylsilyletherů rapamycinu mohou být použity chlortrimethylsilan, chlortriethylsilan nebo chlortripropylsilan, upřednostňovaným silylačním činidlem je chlortrimethylsilan. Trimethylsilylová skupina je v kyselým prostředí labilnější a snadněji se proto odstraňuje během transformace, což minimalizuje vytváření degradačních produktů. V upřednostňovaném způsobu se rapamycin ovlivňuje nadbytkem chlortrimethylsilanu v ethylacetátu při teplotě 0 až 5 °C a v přítomnosti organické báze. 42- a 31-hydroxylové skupiny rapamycinu se silylují k vytvoření 31,42-bis-O-trimethylsilyIetheru rapamycinu s kvantitativním výtěžkem. K obecné silylační reakci se mohou použít běžné organické báze, jako imidazol 1-methylimidazol, triethyl-4CZ 300368 B6 amin a Ν,Ν-diisopropylethylamin. Bylo však zjištěno, že nejvýhodnější bází pro silylaci rapamycinu je imidazol, neboť reakce může být dokončena během 30 minut.

Pokud se týká kroku (b), autoři překvapivě zjistili, že zbavení ochrany k odstranění 42-silyl5 etherové skupiny 31,42-bis-O-silyletheru rapamycinu k vytvoření 3 l-O-silyletheru rapamycinu může být prováděno v studené zředěné kyselině v podstatě kvantitativně za vzniku pouze velmi malých množství vedlejších produktů, jako je rapamycin (tj. produkt úplného zbavení ochrany), a například menších než 20 %, ale obecně menších než 10 %, pokud se týká 3 l-silyletheru. Jak je zde ukázáno, produkt odstranění ochranné skupiny v kroku (b) může obsahovat až přibližně 80 % io nebo více 31-silyletherem chráněného rapamycinu a méně než přibližně 10 % rapamycinu, přičemž existuje možnost snížení hladiny rapamycinu přibližně až na 1 %. Toto selektivní zbavení ochrany se výhodně provádí za použití zředěné organické nebo anorganické kyseliny, zvláště anorganických kyselin, jako je kyselina sírová, chlorovodíková nebo fosforečná, například < 2,5 N, s výhodou 0,8 N až 2,5 N, nejvýhodněji 0,1 N až 1 N roztoku. Zvláštní přednost se dává kyselině sírové. Reakce se výhodně provádí ve dvoufázovém systému vodné kyseliny/organického rozpouštědla, například za použití ethylacetátu jako druhé fáze, zejména tam, kde se jako chránící skupina používá trimethylsilyl, který lze selektivně odstranit například během 2 až 3 hodin. Používají se dostatečně nízké teploty reakce, například přibližně 25 °C nebo nižší, s výhodou přibližně 15 °C nebo nižší, jako přibližně -5 až 10 °C, nejlépe od 0 do 5 °C. Odstraně20 ní ochranné skupiny se nejlépe provádí po sily lační reakci in šitu, při 0 až 5 °C, s ethanolem, směsmi ethanolu a vody, vodou a zředěnými anorganickými nebo organickými kyselinami. Zvláště se upřednostňuje kyselina sírová (0,5 N), neboť reakce je čistá a může být dokončena v průběhu 2 až 5 hodin, což je výhodné pro komerční výrobu. Ovšem jako nezbytné mohou být shledány i delší reakční doby, pokud jsou použity méně reaktivní silylové chránící skupiny, například triethylsilyl ěi tripropylsilyl a v takových případech lze použít k selektivnímu odstranění ochranné skupiny jednofázový systém rozpouštědla, například kyselina/aceton.

Pro silylaci lze použít množství organických rozpouštědel a v literatuře je často zmiňován zejména DMF (dimethylformamid). V tomto vynálezu je však upřednostňovaným rozpouštědlem v kroku (a) ethylacetát, neboť pro následující krok (b) odstranění ochranné skupiny se používá dvoufázové reakční prostředí.

Pokud se týká kroku (c), esterifikace nebo etherifikace 31-chráněného rapamycinu se může provádět za podmínek, které jsou uvedeny ve výše zmíněných patentech. Například, ve schématu

I uvedeném dále, byla acylace 31-trimethylsilyletheru rapamycinu uskutečněna za použití 2,4,6trichlorbenzoylového směsného anhydridu kyseliny 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylové v přítomnosti 4-dimethylaminopyridinu nebo podobného reakěního činidla. Nadto bylo zjištěno, že účinným acylačním činidlem je v tomto vynálezu chlorid 2,2,5-trimethyl[l ,3-dioxan]-5karboxylové kyseliny v přítomnosti 4-dimethylaminopyridinu nebo podobného reakěního činid40 la. Pro podmínky acylace se spíše než tetrahydrofuran, který byl popsán v dosavadním stavu techniky, jako rozpouštědlo upřednostňuje methylenchlorid. Reakce se může provádět při teplotě přibližně od -50 do +25 °C. Ovšem teploty reakce nižší než 0 °C, s výhodou od -20 do -15 °C, poskytují lepší výsledky než acylace při teplotě místnosti, popsaná v patentu US 5 362 718.

Pokud se týká kroku (d), odstranění 31-silylové chránící skupiny z 42-esterifí kovaného nebo etherifíkovaného-31-silylrapamycinu může být prováděno hydrolýzou, například za použití zředěné kyseliny, jak bylo popsáno výše, s výhodou zředěné anorganické kyseliny jako kyseliny sírové, chlorovodíkové nebo fosforečné. V závislosti na tom, zdaje žádoucí odstranit současně další chránící skupiny, může být roztok kyseliny přibližně 0,1 N až 3 N; s výhodou přibližně od

0,2 N do 2 N a nejlépe přibližně 0,5 N. Krok (d) se s výhodou provádí v jednofázovém systému vodné kyseliny/organického rozpouštědla, kde organickým rozpouštědlem je například aceton. Reakce se může provádět při teplotě 25 °C nebo nižší, například přibližně od -5 do 10°C a s výhodou přibližně od 0 do 5 °C.

-5CZ 300368 B6

V následujícím schématu I mohou být acylační produkty. 31-O-TMS, 42-(chráněné hydroxy)esteiy (tj. sloučenina [E]; TMS = trimethylsilyl), dále ovlivněny zředěnou kyselinou kjejich přeměně na 42—(chráněné hydroxy)estery (sloučeninu [B]), nebo být přímo použity k vytvoření konečného produktu, 42-hydroxyesterů (konečný produkt [C]). Tato metodika může být použita k výrobě jiných esterů nebo etherů rapamycinu pouhou změnou použitého esterifikačního nebo etherifikačního činidla.

Následující schéma rovněž znázorňuje regioselektivní výrobu rapamyc i nového 42—esteru s 2,2bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou jako reprezentativního 42-esteru rapamycinu, který io lze vyrobit způsobem poskytnutým v tomto vynálezu. Původní syntéza rapamycinového 42-esteru s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou je poskytnuta v patentu US 5 362 718.

-6CZ 300368 B6

Konverze sloučeniny [B] na rapamycinový 42-ester s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propÍonovou kyselinou [C] může být ve schématu I uskutečněna za mírně kyselých podmínek. Upřednostňuje se použití vodné kyseliny sírové, neboť minimalizuje vytváření nečistot, vznikajících, pokud se použije kyselina chlorovodíková, jak je popsáno v patentu US 5 362 718. Bylo uvedeno, že tetraenové znečištění, vznikající za použití kyseliny chlorovodíkové, je kolonovou chromatografií obtížně oddělitelné od požadovaného produktu (Caufield a spol.. Tetrahedron Lett. 37, 6835, 1994). Rovněž se upřednostňuje provádění hydrolýzy spíše při 0 až 5 °C než při teplotě místnosti, jak je popsáno v patentu US 5 362 718.

-7CZ 300368 B6

Tento vynález rovněž poskytuje způsob výroby sloučeniny o vzorci C

který zahrnuje hydrolýzu sloučeniny o vzorci B

u níž R₂ je vodík nebo -SiR'R”R', kde R , R a R jsou stejné nebo odlišné, zvolené z alkylu o 1 až 6 atomech uhlíku, fenylu a benzylu; za použití zředěné kyseliny sírové, například za použití 1 N až 3 N kyseliny sírové. Reakce se s výhodou provádí při teplotě -5 až +10 °C a jako rozpouštědlo se s výhodou používá tetrahydrofuran.

io Způsob syntézy, předložený v tomto vynálezu, poskytuje několik určitých výhod oproti způsobu syntézy, zveřejněnému k výrobě rapamycinových esterů či etherů; zejména se týkajících výtěžku a snadnosti čištění požadovaných 42-esterů nebo etherů. Vzhledem k tomu, že se jedná o regioselektivní syntézu, celkové výtěžky požadovaných 42-esterů nebo etherů jsou dramaticky zvýšené. Syntetická metoda, poskytnutá v patentu US 5 362 718 například poskytuje sloučeninu [B] s 35% výtěžkem, zatímco za použití metodiky uvedené v tomto vynálezu je syntéza [B] uskutečňována s 85% výtěžkem. Nadto je konverze na rapamycinový 42-ester s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou z [B] uskutečňována s přibližně 75% výtěžkem, zatímco za použití metodiky podle patentu US 5 362 718 se získá pouze 20% konverze.

-8CZ 300368 B6

Za použití stejné metodiky mohou být 42-ethery rapamycinu vyráběny regioselektivním způsobem. Jako příklad, patent US 5 665 772 předkládá výrobu 40-<3-alkyletherů rapamycinu neregioselektivním způsobem. Vzhledem k nomenklaturním rozdílům je poloha 42 rapamycinu (jak je označována v tomto vynálezu) v patentu US 5 665 772 označována jako poloha 40. Tyto polohy jsou identické. Za použití zde předkládané metodiky může být 31-O-trimethylsilylový ether rapamycinu ovlivněn například 2-(t-butyIdimethylsilyl)oxyethyltriflátem) k poskytnutí 31-0trimethylsilyl, 42-0-[2-(t-butyldimethylsilyl)oxy]ethylrapamycinu.

Odstranění silylových chránících skupin z 31-hydroxylové skupiny rapamycinu z 42-hydroxyio ethylu může být prováděno za mírně kyselých podmínek, jako za použití zředěné kyseliny sírové, k poskytnutí 42-O-(2-hydroxy)ethylrapamycinu. Neregioselektivní formování jiných 42-etherů rapamycinu je popsáno v patentu US 5 665 772. Mohou být rovněž připraveny regioselektivně prostřednictvím 31-O-trimethylsilyletheru rapamycinu.

Tento vynález také zahrnuje 31-silylethery rapamycinu a 31-silyletheiy 42-esterifíkovaných ěi etherifikovaných derivátů rapamycinu. které jsou vhodné k přípravě 42-esterů a etherů rapamycinu, jak je zde popsáno. Silikonová částice, představovaná -SiR'RR', obsahuje 3 skupiny, jež mohou být stejné nebo rozdílné. Typické silylové ethery podle tohoto vynálezu obsahují částice R', R, nebo R , kterými jsou alkylové skupiny o 1 až 6 atomech uhlíku, fenylové nebo benzy20 love skupiny. Alkylové skupiny mohou mít rozvětvený nebo rovný řetězec. Upřednostňuje se, aby R', R a R byly alkylové skupiny a více se upřednostňuje, aby R', R a R byly methyl nebo ethyl. Ještě více se upřednostňuje, aby 31-silylether byl 3 l-O-trimethylsilylether rapamycinu.

Tento vynález tedy poskytuje 31-silylethery o vzorci IA a IB:

-9CZ 300368 B6

(IB), kde R je esterová nebo etherová skupina, jak byly popsány výše a R', R” a R jsou stejné nebo odlišné, zvolené z alkylu o 1 až 6 atomech uhlíku, fenylu a benzylu.

Následující příklady dokreslují výrobu 3I-silyletherů rapamycinu a 42-esterů rapamycinu, jež představují sloučeniny, které lze vyrobit způsobem podle tohoto vynálezu.

Příklady provedení vynálezu io

Příklad 1

31-CMrimethyl sily lether rapamycinu

Roztok rapamycinu (92,4%, 25,0 g, 25,28 mmol) v 750 ml ethylaeetátu, byl ochlazen na 0 až 5 °C, poté bylo přidáno 110,20 mmol imidazolu a mícháno k vytvoření roztoku, K tomuto studenému roztoku bylo v průběhu 30 minut po kapkách přidáno 11,0 g (101,25 mmol) chlortrimethylsilanu a mícháno dalších 30 minut při teplotě 0až5 °C k dokončení vzniku 31,42-bis-O~tri20 methylsilyletheru rapamycinu. V průběhu 10 minut bylo po kapkách přidáno 50 ml 0,5 N roztoku kyseliny sírové a směs byla míchána 2,5 hodiny při teplotě 0 až 5 °C. Reakční směs byla převedena do dělicí nálevky a vodná vrstva byla oddělena a extrahována 125 ml ethylaeetátu. Organické vrstvy byly spojeny a následně promyty solným roztokem (125 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou (2x125 ml) a nakonec solným roztokem k získání pH o hodnotě 6 až 7. Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku k poskytnutí bezového pěnového produktu v množství 28,5 g (teoreticky 24,94 g). Analýza pomocí HPLC prokázala, že obsahuje 86 % (procenta plochy píku), 31-0-trimethylsilyletheru rapamycinu a 7 % rapamycinu. Produkt byl přímo použit pro následující reakci.

LC/MS elektrorozprašovací (+) uspořádání (Μ - H) = 985. 'H NMR (400 MHZ, d-6 DMSO) 64,60 (m, IH, (42C)OH), 4,10 (m, IH, C(31)H), 3,09(m, IH, (42)H), -0,027(s, 9H, 31-0TMS).

- 10CZ 300368 B6

Příklad 2

Chlorid 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]~5-karboxylové kyseliny

Roztok 2,2,5-trimethyI[1.3-dioxan]-5-karboxylové kyseliny (17,42 g, 0,1 mol) v 200 ml vysušeného toluenu byl zahříván na 40 °C, v průběhu 30 minut bylo po kapkách přidáno 26,0 ml oxalylchloridu (37,83 g, 0,3 mol) a vzniklý, roztok byl míchán 2,5 hodiny při 40 °C. Reakční směs byla odpařena za sníženého tlaku k odstranění rozpouštědla o nadbytku oxalylchloridu. Výsledný proío dukt byl dvojnásobně odpařen s vysušeným toluenem (200 ml), poté byl vysušen pod vysokým vakuem v průběhu 2 hodin při 40 °C k získání 19,75 g produktu ve formě oranžově zbarvené kapaliny. ^]H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 4,28 (2H, d, J - 10,5 Hz), 3,76 (2H, d, J = 10,5 Hz), 1,46 (3H, s), 1,29 (3H, s), ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃), δ, 176,43, 98,76, 66,06, 52,07, 25,82, 21,20, 18,10.

Příklad 3

Rapamycinový 3 l-O-trimethyl sily lether, 42-ester s kyselinou 2,2,5-tri methyl [1,3-dioxan]-520 karboxylovou

Metoda A:

K roztoku kyseliny 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylové (9,77 g, 56,08 mmol) a VýV-di25 isopropylethylaminu (12,00 g, 92,80 mmol) v 200 ml methylenchloridu byl při teplotě místnosti pod dusíkovou atmosférou přidán 2,4,6-trichlorbenzoylchlorid (13,35 g, 54,73 mmol) a výsledná směs byla míchána 5 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs byla ochlazena na -20 až -15 °C a přidán byl roztok 31-O-trimethylsilyletheru rapamycinu (28,50 g, surový, vyrobený z 25,28 mmol rapamycinu) ve 120 ml methylenchloridu. V průběhu 2 hodin byl po kapkách při30 dán roztok 4-dimethylaminopyridinu (11,68 g, 95,60 mmol) v 110 ml methylenchloridu. Reakční směs byla dále míchána 16 hodin při teplotě -15 až-16 °C. Reakce byla zastavena přídavkem 100 ml vody a organická vrstva byla oddělena a promývána 0,5 N roztokem kyseliny sírové (180 ml), následně solným roztokem (100 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou (2x100 ml) a solným roztokem (100 ml) až k pH 6 až 7. Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku k poskytnutí sloučeniny uvedené v nadpise (33,18 g) ve formě bezově zbarvené pěny.

LC/MS elektrorozprašovací (+) uspořádání (N+NN₄) =1 160. ’^1H NMR (400 MHZ, d-6 DMSO) δ 4,57 (m, IH, C(42)H), 4,10 (m, IH, C(31)H), 4,03 (d, 2H), 3,57 (d, 2H), 1,34 (s, 3H), 1,24 (s,

3H), 1,13 (s, 3H), -0,023 (s, 9H, 31-O-TMS).

Metoda B:

Roztok 31-O-trimethylsilyletheru rapamycinu (11,00 g; od 10,0 g rapamycinu; 11,15 mmol) v 120 ml methylenchloridu, obsahující 2 ml 7V,A-dimethylformamidu, byl míchán pod dusíkovou atmosférou a ochlazen na -15 °C. Poté byl přidán 4-dimethylaminopyridin (4,80 g, 39,29 mmol) a směs byla míchána k vytvoření roztoku. Do tohoto studeného roztoku byl v průběhu 2 hodin po kapkách přidán 7,5% roztok chloridu 2,2,5-trimethyl[1.3—dioxan]-5-karboxylové kyseliny (42,18 g; 16,42 mmol) v methylenchloridu. Roztok byl dále míchán 1 hodinu při teplotě -15 °C a v průběhu 30 minut byl přidán další 7,5% roztok kyselého chloridu (14,06g, 5,47 mmol) v methylenchloridu. Reakční směs byla dále míchána 16 hodin při teplotě -15 až -16 °C. Reakce byla zastavena přídavkem 100 ml solného roztoku, organická vrstva byla oddělena a promývána 0,5 N roztokem kyseliny sírové (100 ml), solným roztokem (100 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou (100 ml) a solným roztokem (100 ml) až k pH 6 až

- 11 CZ 300368 B6

Ί, Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku k poskytnutí produktu (12,15 g) ve formě žluté pěny.

Příklad 4

Rapamycinový 42-ester s 2,2,5-trimcthyl[l .3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou

Roztok rapamycinového 31-O-trimethylether,42-esteru s 2,2,5-tri-methyl[l,3-dioxan]-5io karboxylovou kyselinou (33,18 g; z příkladu 3, metody A) ve 100 ml acetonu byl míchán a ochlazen na 0 až 5 °C. K tomuto studenému roztoku bylo během 10 minut po kapkách přidáno 17 ml

0,5 N roztoku kyseliny sírové a směs byla míchána 2,5 hodiny při teplotě 0 až 5 °C. V průběhu 20 minut byl přidán roztok hydrogenuhličitanu sodného (1,44 g) ve 20 ml vody a následně bylo v průběhu 30 minut přidáno 33 ml vody; produkt se začal srážet přibližně po 1 hodině míchání.

Směs byla míchána přes noc při teplotě 0 až 5 °C a po filtraci byl pevný produkt promyt 60 ml soustavy aceton-voda (1:1). Produkt byl vysušen ve vakuové peci při 30 °C k získání 28,85 g produktu (83,9 %, 89,3% celkový výtěžek z rapamycinu). 'H NMR spektrum produktu bylo stejné jako u produktu, popsaného v patentu US 5 362 718, v příkladu 10.

Příklad 5

Rapamycinový 42-ester s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propÍonovou kyselinou

Metoda A:

Roztok rapamycinového 42-esteru s 2,2,5-trimethyl—[1.3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou (28,85 g; z příkladu 4) v 276 ml tetrahydrofuranu byl míchán a ochlazen na 0 až 5 °C. K tomuto studenému roztoku bylo v průběhu 30 minut přidáno 83 ml studeného 2 N roztoku kyseliny síro30 vé a směs byla míchána 60 hodin při teplotě 0 až 5 °C. Reakční směs byla zředěna 600 ml ethylacetátu a promyta 120 ml solného roztoku. Vodná vrstva byla jednou extrahována 120 ml ethylacetátu a organické extrakty byly spojeny a promyty nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (120 ml), vodou (2x200 ml) a solným roztokem (120 ml) až k pH 6 až 7. Organická fáze byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku při teplotě místnosti k získání produktu (28,42 g) ve formě bezově zbarvené pěny. Surový produkt byl chromatografován na koloně silíkagelu a eluován 30% acetonem v heptanu k poskytnutí 18,06 g čistého produktu ve formě bílé pevné látky (69,4% celkový výtěžek z rapamycinu). ’H NMR spektrum produktu bylo stejné jako u produktu, popsaného v patentu US 5 362 718, v příkladu 11.

Metoda B:

Roztok 31-O-trimethylether,42-esteru rapamycinu s 2,2,5-trimethyl-[l .3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou (23,25 g, připraveného z 20,06 g rapamycinu, 92,7%, 20,34 mmol) v 230 ml tetrahydrofuranu byl míchán a ochlazen na 0 až 5 °C. K tomuto studenému roztoku byl v průběhu

45 minut po kapkách přidán 2 N roztok kyseliny sírové (115 ml) a směs byla míchána 88 hodin při teplotě 0 až 5 °C. Reakční směs byla zředěna 500 ml ethylaeetátu a promyta 100 ml solného roztoku. Vodná vrstva byla jednou extrahována 100 ml ethylaeetátu a organické extrakty byly spojeny a promývány nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (80 ml), vodou (2x80 ml) a solným roztokem (100 ml) až k pH 6 až 7. Organická fáze byla vysušena nad bezvo50 dým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku při teplotě místnosti k poskytnutí produktu (22,48 g) ve formě bezově zbarvené pěny. Surový produkt byl chromatografován na koloně silikagelu a eluován 30% acetonem v heptanu k poskytnutí 16,50 g surového produktu ve formě bílé pevné látky (78,4% celkový výtěžek z rapamycinu). ’H NMR spektrum produktu bylo stejné jako u produktu, popsaného v patentu US 5 362 718, v příkladu 11.

- 12CZ 300368 B6

Příklad 6

31,42-bis-O-trimethylsilylether rapamycinu

Roztok rapamycinu (94,3%; 10,0 g, 10,3 mmol) v 150 ml ethylacetátu byl ochlazen na 0 až 5 °C a 3,0 g (44 mmol) imidazolu bylo přidáno a mícháno k vytvoření roztoku. K tomuto studenému roztoku byly v průběhu 20 minut přidány 4,4 g (40,5 mmol) chlortrimethylsilanu a poté byl roztok míchán pří teplotě 0 až 5 °C dalších 30 minut. Reakční směs byla zfiltrována k odstranění ío imidazol-HCl a filtrát byl odpařen za sníženého tlaku k získání žluté pěny. Poté byl přidán heptan (200 ml) a směs byla při teplotě místnosti míchána 20 minut; následně byla zfiltrována.

Filtrát byl promýt 40 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného vodou (2x80 ml) a solným roztokem (50 ml). Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena k získání produktu ve formě žluté pěny (11,42 g; 98,6 %).

LC/MS elektrorozprašovací (+) uspořádání (Μ - H) = 1 057. ‘H NMR (400 MHZ, d-6 DMSO) δ4,10 (m, IH, C(31) H), 3,31 (tn, IH, C(42) H), 0,057 (s, 9H, 42-O-TMS), -0,027 (s, 9H, 31O-TMS).

Příklad 7

31-O-triethylsilylether rapamycinu

Roztok rapamycinu (92,7%, 5,00 g, 5,07 mmol) v 75 ml ethylacetátu byl ochlazen na 0 až 5 °C; pak bylo přidáno 1,50 g (22,03 mmol) imidazolu a mícháno k vytvořeni roztoku. K tomuto studenému roztoku bylo v průběhu 10 minut přidáno 3,05 g (20,23 mmol) chlortriethylsilanu. Směs byla míchána 30 minut při teplotě 0 až 5 °C a poté byla míchána při teplotě místnosti přes noc k dokončení formace 31,42-bis-O-triethylsilyletheru rapamycinu. Po zfiltrování reakční směsí byl filtrát odpařen za sníženého tlaku při teplotě místnosti k odstranění většiny rozpouštědla. Zbytkový roztok (přibližně 10 ml) byl rozpuštěn v 60 ml acetonu a 15 ml 0,15 N roztoku kyseliny sírové bylo přidáno před tím, než byla směs míchána 25 hodin při teplotě 0 až 5 °C. V tomto stupni vymizel 31,42-bis-O-triethyl sily lether rapamycinu. Reakční směs byla zředěna 80 ml ethylacetátu a následně byla promývána solným roztokem (2x60 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (40 ml), vodou (2x60 ml) a solným roztokem (60 ml) až k pH 6 až

7. Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku k získání produktu ve formě světle žluté gumy (6,92 g, teoreticky 5,21 g). Analýza pomocí HPLC prokázala, že produkt obsahoval 95,2 % (procenta plochy píku) 3 l-O-triethylsilyletheru rapamycinu a 0,9 % rapamycinu.

Příklad 8 —69—tri propy Isí ly lether rapamycinu

Roztok rapamycinu ( 92,7%; 5,00 g, 5,07 mmol) v 75 ml ethylacetátu byl ochlazen na teplotu 0až5°C poté bylo přidáno 1,5 g (22,03 mmol) imidazolu a mícháno k vytvoření roztoku. K tomuto studenému roztoku byl v průběhu 10 minut po kapkách přidán chlortripropylsilan (3,91 g, 20,3 mmol). Směs byla míchána 30 minut při teplotě 0 až 5 °C a poté 21 hodin při teplotě místnosti k dokončení formace 31,42-bÍs-O-tripropylsilyletheru rapamycinu. Po filtraci reakční směsi byl filtrát odpařen za sníženého tlaku při teplotě místnosti k odstranění většiny rozpouštědla a zbylý roztok byl rozpuštěn v 60 ml acetonu. Poté bylo přidáno 15 ml 0,25 N roztoku kyseliny sírové a směs byla míchána 45 hodin při teplotě 0 až 5 °C; v tomto kroku vymizel 31,42bis-O-tripropylsilylether rapamycinu. Reakční směs byla zředěna 100 ml ethylacetátu a následně promývána solným roztokem (2x40 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného

-13CZ 300368 B6 (40 ml), vodou (2x40 ml) a solným roztokem (50 ml) až k pH 6 až 7. Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku k získání produktu ve formě světle žluté gumy (8,07 g, teoreticky 5,43 g). Analýza pomocí HPLC prokázala, že produkt obsahoval 96,7 % (procenta plochy píku) 3 l-O-tripropy 1 sily letheru rapamycinu a 1 % rapamy5 činu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob výroby 31-silyletheru rapamycinu, vyznačující se tím, že zahrnuje kroky, v nichž se:

a) ponechá reagovat rapamycin se silylačním činidlem k vytvoření 31,42-bis-silyletheru rapamycinu; a

b) hydrolyzuje 31,42—bis—sily lether se studenou zředěnou kyselinou k poskytnutí 31-silyl20 etheru rapamycinu.
2. Způsob výroby 42-esteru nebo 42-etheru rapamycinu o struktuře 1 kde R je esterová nebo etherová skupina, vyznačující se tím, že zahrnuje kroky, v nichž se:

a) ponechá reagovat rapamycin se silylačním činidlem k vytvoření 31,42-bis-silyletheru rapamycinu;

b) hydrolyzuje 31,42-bis-s i ly lether ve studené zředěné kyselině k poskytnutí 31-silyletheru rapamycinu;

c) ponechá reagovat 31-silylether rapamycinu s vhodným esterifíkačním nebo etherifikačním 35 činidlem k vytvoření 31-silyletheru 42-esteru nebo 42-etheru rapamycinu; a

d) hydrolyzuje 3 l-silylether ve studené zředěné kyselině k poskytnutí požadovaného 42-esteru nebo 42-etheru rapamycinu, přičemž se, pokud je to žádoucí, následně nebo současně odstraní jakékoliv jiné přítomné chránící skupiny.

- 14CZ 300368 B6
3. Způsob výroby podle nároku 2, vyznačující se tím, žeRve sloučenině vzorce (I) se zvolí buď z (i) -O-C=O.CR⁷R⁸R⁹; tj. esterů, kde

R⁷ je vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, -(CRVjfOR¹⁰, -CF₃ -F nebo -CO₂R^H;

R⁸ a R⁹ jsou každý nezávisle vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, nebo -(CR³R⁴)fOR¹⁰; io nebo R⁸ a R⁹ mohou být brány dohromady k vytvoření X;

R’° je vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, tri feny Imethyl, benzyl, alkoxy methyl o 2 až 7 atomech uhlíku, chlorethyl nebo tetrahydropyranyl; X je 5 - (2,2 - di - (alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku))[l,3]dioxanyl;

15 5 - (2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[l,3]dioxanyl; 4-(2,2-di-(alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku))[l,3]dioxanyl; 4-(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[l,3]dioxanyl; 4(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[1.3]dioxalanyl; nebo 4-(2,2-di(alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku)-[l,3]dioxalanyl;

20 R³ a R⁴ jsou každý nezávisle vodíkový atom. alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, --CF₃, nebo -F; a f = 0 až 6; za podmínky, že R obsahuje alespoň jednu skupinu -(CR³R⁴)fOR¹⁰ nebo skupinu X;

nebo z ii) -OR¹ tj. etherů,

30 kde R’ je alkyl, thioalkyl, arylalkyl, hydroxyalkyl, dihydroxyalkyl, hydroxyalkylarylalkyl, dihydroxyalkylarylalkyl, alkoxyalkyl, acyloxyalkyl, aminoalkyl, alkylaminoalkyl, alkoxykarbonylaminoalkyl, acylaminoalkyl, arylsulfonamidoalkyl, allyl, dihydroxyalkylallyl a dioxolanylallyl, karbalkoxyalkyl, kde „alk-,, nebo „alkyl“ představují Ci^alkyl, rozvětvený nebo rovný, s výhodou Ci_₃alkyl, u něhož může být uhlíkový řetězec volitelně přerušen etherovou (-O-) vaz35 bou; „acyl“ představuje alkylkarbonyl a „aryl“ má 6-10 uhlíkových atomů.
4. Způsob výroby podle nároku 3, vyznačující se tím, že R¹ se zvolí z hydroxyalkylu, hydroxyalkoxyalkylu, acylaminoalkylu a aminoalkylu.

40 5. Způsob výroby podle nároku 4, vyznačující se tím, že R¹ se zvolí z 2-hydroxyethylu; 3-hydroxypropylu; 2-[(2-hydroxy)ethoxy]ethylu a 2-acetaminoethylu.

6. Způsob výroby podle nároku 2, vyznačující se tím, že jako R ve sloučenině o vzorci (I) se používá 2,2-bis(hydroxymethyl)propionyloxyskupina nebo 2,2,5-trimethyl-[l .345 dioxan]-5-karbony loxy skupina.

7. Způsob výroby podle nároku 6, vyznačující se tím, že krok (c) esterifikace se provádí za použití chloridu 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxyIové kyseliny nebo 2,4,6-trichlorbenzoylového směsného anhydridu 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylové kyseliny.

8. Způsob výroby podle nároku 7, vyznačující se tím, že se provádí v rozpouštědle zahrnujícím methylenchlorid.

9. Způsob výroby podle nároku 7 nebo 8, vyznačující se tím, že se provádí při tep55 lotě od -50 do 25 °C.

- 15CZ 300368 B6

10. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 2 až 9, vyznačující se tím, že jako kyselina v kroku (d) se použije zředěná anorganická kyselina.

11. Způsob výroby podle nároku 10, vyznačující se tím, že jako kyselina se použije kyselina sírová, chlorovodíková nebo fosforečná.

12. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 2ažll, vyznačující se tím, že jako kyselina v kroku (d) se používá 0,1 normální až 3 normální roztok kyseliny.

13. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 2ažll, vyznačující se tím, že jako kyselina v kroku (d) se používá 0,2 normální až 2 normální roztok kyseliny.

14. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 2ažll, vyznačující se tím, že jako kyselina v kroku (d) se používá 0,5 normální roztok kyseliny.

15. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 2 až 14, vyznačující se tím, že krok (d) se provádí v jednofázovém systému vodná kysel ina/organickč rozpouštědlo.

16. Způsob výroby podle nároku 15, vyznačující se tím, že jako organické rozpouštědlo se používá aceton.

17. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 2ažl6, vyznačující se tím, že krok (d) se provádí při teplotě 25 °C nebo nižší.

18. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 2ažl6, vyznačující se tím, že krok (d) se provádí při teplotě od -5 do 10 °C.

19. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 2ažl6, vyznačující se tím, že krok (d) se provádí při teplotě od 0 do 5 °C,

20. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků laž!9, vyznačující se tím, že 31stlylether připravený v kroku (b) má vzorec IA:

kde R', R a R ” jsou stejné nebo rozdílné a zvolí se z alkylu o 1 až 6 atomech uhlíku, fenylu a benzylu.

21. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků laž20, vyznačující se tím, že jako silylační činidlo v kroku (a) se používá tri—(C i až C₆) alkylsilylhalogenid.

22. Způsob výroby podle nároku 21, vyznačující se tím, že jako silylační činidlo v kroku (a) se používá trimethylsilylchlorid.

- 16CZ 300368 B6

23. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 1 až 22, vyznačující se tím, že silylační krok (a) se provádí v inertním rozpouštědle v přítomnosti vhodné báze.

24. Způsob výroby podle nároku 23, vyznačující se tím, že jako báze se používá 5 imidazol, 1-methy limidazol, triethylamin nebo 2V^V-diisopropylethylamin.

25. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků laž 24, vyznačující se tím,že jako kyselina v kroku (b) se používá zředěná anorganická kyselina.

io 26. Způsob výroby podle nároku 25, v y z n a č u j í c í se tím, že jako kyselina se používá kyselina sírová, chlorovodíková nebo fosforečná.

27. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků laž26, vyznačující se tím, že jako kyselina v kroku (b) se používá 0,08 normální až 2,5 normální roztok kyseliny,

28. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 26, vyznačující se tím, že jako kyselina v kroku (b) se používá 0,1 normální až 1 normální roztok kyseliny.

29. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 26, vyznačující se tím, že jako kyse20 lina v kroku (b) se používá 0,5 normální roztok kyseliny.

30. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 1 až 29, vyznačující se tím, že krok (b) se provádí ve dvoufázovém systému vodná kyselina/s vodou nemísitelné organické rozpouštědlo.

31. Způsob výroby podle nároku 30, vyznačující se tím, že jako organické rozpouštědlo nemísitelné s vodou se používá ethylacetát.

32. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků laž31, vyznačující se tím, že krok

30 (b) se provádí při teplotě 25 °C nebo nižší.

33. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků laž31, vyznačující se tím, že krok (b) se provádí při teplotě od -5 do 10 °C.

35 34. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků laž31, vyznačující se tím, že krok (b) se provádí při teplotě od 0 do 5 °C.

35. Způsob výroby rapamycinového 42-esteru s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou, v y z n a č uj í c í se t í m , že zahrnuje kroky v nichž se:

a) rapamycin ponechá reagovat se silylačním činidlem k vytvoření 31,42-bis-silyletheru rapamycinu;

b) selektivně se hydrolyzuje 31,42-silylether ve studené zředěné kyselině k poskytnutí 3145 silyletheru rapamycinu,

c) acyluje 31-silylether rapamycinu s chloridem 2,2,5-trimethyl-[l .3-dioxan]-5-karboxylové kyseliny nebo 2,4,6-trichlorbenzoylovým směsným anhydridem 2,2,5-trimethyl[].3-dioxan]-5karboxylové kyseliny k poskytnutí rapamycinového 3 l—O—tri methyl sily lether, 42-esteru s 2,2,550 tri-methyl[] .3-dioxan]~5-karboxylovou kyselinou; a

d) buď

i) se selektivně hydrolyzuje 31-silylether ve studené zředěné kyselině k poskytnutí rapa55 myči nového 42-esteru s 2,2,5-tri-methyl-[ 1.3-dioxan]-5-karboxy lovou kyselinou a následně se

- 17CZ 300368 B6 na rapamycinový 42-ester s 2,2,5-trimethyl-[l ,3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou působí zředěnou kyselinou k poskytnutí 42-esteru s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou; nebo ii) se na rapamycinový 31-O-trimethylsilylether, 42-ester s 2,2,5-trimethyl-[1.3-dioxan]-55 karboxylovou kyselinou působí zředěnou kyselinou k poskytnutí 42-esteru s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou.

36. Způsob výroby podle nároku 35, vyznačující se tím, že acylační krok (c) se provádí při teplotě nižší než 0 °C.

io

37. Způsob výroby 42-ť9-(2-hydroxy)ethylrapamycinu, vyznačující se tím, že zahrnuje kroky, v nichž se:

a) rapamycin ponechá reagovat se silylačním činidlem k vytvoření 31,42-bis-silyletheru rapa15 mycinu;

b) selektivně se hydrolyzuje 31,42-silylether ve studené zředěné kyselině k poskytnutí 31silyletheru rapamycinu,

20 c) 31 —silylether rapamycinu ponechá reagovat s ethylenglykolovým ekvivalentem, obsahujícím chránicí skupinu v kyselině labilního hydroxylu, chráněnou na jednom konci ethylenglykolového ekvivalentu a uvolnitelnou skupinu, vhodnou k alkylaci hydroxylové skupiny jako druhého konce ethylenglykolového ekvivalentu;

25 d) hydrolyzují chránicí skupiny v poloze 31 a na hydroxy ethylu v poloze 42 za mírně kyselých podmínek.

38. Způsob výroby podle nároku 37, vyznačující se tím, že jako si ly lační činidlo se používá trialkylsilylhalogenid.

39. Způsob výroby podle nároku 38, vyznačující se tím, že jako sily lační činidlo se používá chlortrimethylsilan.

40. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 37až39, vyznačující se tím, že

35 jako ethylenglykolový ekvivalent se používá 2-(t-butyldimethylsílyl)oxyethyltriflát:

41. Způsob výroby podle nároku 40, v y z n a č u j í c í se t í m , že jako kyselina se v krocích (b) a (d) používá kyselina sírová.

40 42. Sloučenina, kterou je 31-O-sily lether rapamycinu.

- 18CZ 300368 B6

43. Sloučenina podle nároku 42, mající vzorec IA nebo IB:

(IA) ¹ OB)
5 a v těchto vzorcích je

R esterová nebo etherová skupina, a R', R a R”' jsou stejné nebo odlišné, zvolené z alkylu o 1 až 6 uhlíkových atomech, fenylu io a benzylu.

44. Sloučenina podle nároku 43, kde R odpovídá definici, uvedené v nároku 3.

45. Sloučenina podle nároku 42 nebo 43, kde 31-O-silyletherem je tri—(Cj—C₆)alkylsilylether.

46. Sloučenina podle nároku 42, kterou je 31 -O-trimethyl silylether rapamycinu.

-19CZ 300368 B6

47. Sloučenina podle nároku 42, která má vzorec D [Dl z

kde R', R' a R 'jsou stejné nebo odlišné, zvolené z alkylu o 1 až 6 uhlíkových atomech, fenylu 5 a benzylu.

48. Sloučenina podle nároku 42, kterou je rapamycinový 31-O-trimethylsilylether, 42 ester s 2,2,5-trimethyl-[1.3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou io 49. Způsob výroby sloučeniny vzorce C:

vyznačující se tím, že zahrnuje krok, v němž se hydrolyzuje sloučenina vzorce B:

-20CZ 300368 B6 kde R2 je vodík nebo -SiR'RR, přičemž R', R” a R' jsou stejné nebo odlišné, zvolené z alkylu o 1 až 6 uhlíkových atomech, fenylu a benzylu; za použití zředěné kyseliny sírové.

5 50. Způsob výroby podle nároku49, vyznačující se tím, že se provádí za použití

1 normálního roztoku až 3 normálního roztoku kyseliny sírové.

51. Způsob výroby podle nároku 49nebo 50, vyznačující se tím, že se provádí za teploty -5 až + 10 °C.

o

52. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 49až51, vyznačující se tím, že se provádí v přítomnosti tetrahydrofuranového rozpouštědla.