CZ299053B6 - Polymerní konjugáty doxorubicinu s pH-rízeným uvolnováním léciva a zpusob jejich prípravy - Google Patents
Polymerní konjugáty doxorubicinu s pH-rízeným uvolnováním léciva a zpusob jejich prípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ299053B6 CZ299053B6 CZ20060505A CZ2006505A CZ299053B6 CZ 299053 B6 CZ299053 B6 CZ 299053B6 CZ 20060505 A CZ20060505 A CZ 20060505A CZ 2006505 A CZ2006505 A CZ 2006505A CZ 299053 B6 CZ299053 B6 CZ 299053B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- doxorubicin
- hpma
- reaction
- process according
- polymer
- Prior art date
Links
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 title claims abstract description 133
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 title claims abstract description 72
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 15
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 title description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 36
- VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropyl methacrylate Chemical compound CC(O)COC(=O)C(C)=C VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims abstract description 17
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 125000000266 alpha-aminoacyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 67
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- -1 glycylglycyl Chemical group 0.000 claims description 29
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 28
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 21
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 15
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 9
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 claims description 7
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N Doxorubicin hydrochloride Chemical compound Cl.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003999 initiator Substances 0.000 claims description 4
- RGBXDEHYFWDBKD-UHFFFAOYSA-N propan-2-yl propan-2-yloxy carbonate Chemical compound CC(C)OOC(=O)OC(C)C RGBXDEHYFWDBKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WEZDRVHTDXTVLT-GJZGRUSLSA-N 2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 WEZDRVHTDXTVLT-GJZGRUSLSA-N 0.000 claims description 3
- CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N Gly-Leu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 3
- 108010009504 Gly-Phe-Leu-Gly Proteins 0.000 claims description 3
- 229960002918 doxorubicin hydrochloride Drugs 0.000 claims description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 108010077435 glycyl-phenylalanyl-glycine Proteins 0.000 claims description 3
- 150000002429 hydrazines Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000007870 radical polymerization initiator Substances 0.000 claims description 3
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OZAIFHULBGXAKX-VAWYXSNFSA-N AIBN Substances N#CC(C)(C)\N=N\C(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-VAWYXSNFSA-N 0.000 claims 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims 2
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 claims 2
- 230000003327 cancerostatic effect Effects 0.000 abstract description 8
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 abstract description 3
- OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxypropyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical compound CC(O)CNC(=O)C(C)=C OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 abstract 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 abstract 2
- 108010079923 lambda Spi-1 Proteins 0.000 abstract 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 18
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 8
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 8
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 8
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- HPZOOQSXPMEJBV-ODCFVKFUSA-N Tirilazad mesylate Chemical compound CS(O)(=O)=O.O=C([C@@H]1[C@@]2(C)CC=C3[C@@]4(C)C=CC(=O)C=C4CC[C@H]3[C@@H]2C[C@H]1C)CN(CC1)CCN1C(N=1)=CC(N2CCCC2)=NC=1N1CCCC1 HPZOOQSXPMEJBV-ODCFVKFUSA-N 0.000 description 5
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 5
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 5
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000663001 Mus musculus TNFAIP3-interacting protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- XRNVIFDBCJXAPN-UHFFFAOYSA-N 2-isocyanopentanoic acid Chemical compound CCCC([N+]#[C-])C(O)=O XRNVIFDBCJXAPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000013267 controlled drug release Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006698 hydrazinolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- VHRYZQNGTZXDNX-UHFFFAOYSA-N methacryloyl chloride Chemical compound CC(=C)C(Cl)=O VHRYZQNGTZXDNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- LYUQWAGPWZUFNV-UHFFFAOYSA-N n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical compound CC(=C)C(=O)NCCCCCC(=O)NN LYUQWAGPWZUFNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 125000000864 peroxy group Chemical group O(O*)* 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000012704 polymeric precursor Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Polymerní kancerostatické lécivo, které je ve forme konjugátu kopolymeru N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu (HPMA) s doxorubicinem, vázaným na polymerprostrednictvím spojek obsahujících hydrolyticky štepitelné hydrazonové vazby vzorce I, kde SP.sub.1.n. predstavuje aminoacylovou spojku, x = 40 až 335, y = 1 až 25, sestávající z 90 až 99,5 % mol. jednotek HPMA a 10 až 0,5 % mol. komonomerních jednotek obsahujících doxorubicin. Konjugát se pripravuje prímou kopolymerací monomeru obsahujícího doxorubicin vzorce II s HPMA.
Description
Polymemí konjugáty doxorubicinu s pH-řízeným uvolňováním léčiva a způsob jejich přípravy
Oblast techniky
Vynález se týká nového způsobu přípravy vodorozpustných polymemích kancerostatik umožňujících cílený transport a řízené uvolňování cytostatik v organizmu, preferenčně v nádorové tkáni a nádorových buňkách. Polymemí kancerostatika jsou připravována přímo kopolymerizací s mono10 merem obsahujících ve své struktuře kancerostatikum. Použití polymemích konjugátů je zaměřeno na cílenou terapii nádorových onemocnění v humánní medicíně.
Dosavadní stav techniky
U nových farmakologicky účinných látek, nevyjímaje kancerostatika, se jejich vývoj stále více zaměřuje na nové formy, které umožňují specifické působení aktivního léčiva pouze v určité tkáni a nebo dokonce jen v určitém typu buněk. Cíleně působící léčiva nalézají uplatnění především v oblastech, kdy vedlejší účinky aktivní složky mohou vést k poškození zdravých částí orga20 nizmu. Při přípravě cíleně působících látek se stále více uplatňuje použití makromolekul - polymerů, a to přírodních nebo syntetických. V minulosti bylo připraveno a studováno velké množství polymemích konjugátů kancerostatik a bylo prokázáno, že ve většině případů je nezbytné pro dosažení farmakologické účinnosti polymemí formy léčiva zajistit uvolnění původní nízkomolekulámí cytotoxické látky z její polymemí formy. Připojení cytostatika k vodorozpust25 němu polymeru chemickou vazbou umožňuje ovšem také zásadním způsobem zvýšit rozpustnost nerozpustných nebo málo rozpustných léčiv a výrazně snížit jejich toxicitu. V neposlední řadě vyšší molekulová hmotnost polymerů zabraňuje rychlému vyloučení léčiva z organizmu glomerulámí filtrací, a tím zajišťuje prodlouženou dobu cirkulace v krvi a setrvání v organizmu a tím i větší biologickou využitelnost léčiva. Uvolnění cytostatika z polymemího nosiče může být s výhodou vyřešeno prostřednictvím biodegradovatelné spojky, použité k napojení léčiva na polymer, jejíž degradace v cílové tkáni vede k cílenému a řízenému uvolnění léčiva v této tkáni. Významnou skupinu výše popsaných léčiv tvoří polymemí léčiva připravená na bázi kopolymerů ÍV-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu (HPMA). Přehled doposud dosažených výsledků v této oblasti je velmi dobře zpracován v publikaci G. S. Kwona a práci J. Kopečka a spol. [Kopeček a kol. 2000, Kwon 2005]. V poslední době byly publikovány práce o přípravě a působení polymemích léčiv, ve kterých bylo kancerostatikum doxorubicin navázáno na polymemí nosič, připravený na bázi kopolymerů HPMA, prostřednictvím hydrolyticky nestálé hydrazonové vazby [Etrych a kol. 2001 a 2002, Říhová a kol. 2001, Ulbrich a kol. 2003, 2004a, 2004b] a tyto látky byly patentovány [Ulbrich a kol.]. Popsaná léčiva vykazovala podstatné snížení vedlejších, především toxických účinků na organizmus za současného výrazného zvýšení protinádorového účinku ve srovnání s běžně užívanými nízkomolekulámími cytostatiky [Říhová a kol. 2001, Kovář a kol. 2004, Hovorka a kol. 2002],
Syntéza takovýchto konjugátů byla prováděna nejdříve polymeranalogickou reakcí polymemích
4-nitrofenylových esterů (ONp) s hydrazinem a později kopolymerizací HPMA sA-Boc (tercbutyloxykarbonyl) skupinou chráněnými methakryloylovanými hydrazidy. V pozdější době byla vyvinuta nová metoda přípravy polymemích konjugátů spočívající v přípravě monomeru 6_(methakryloylamino)hexanoylhydrazinu a jeho kopolymerizací s HPMA. Tato metoda znamenala významný pokrok v syntéze a poskytla možnost přesně řídit molekulové hmotnosti poly50 memích prekurzorů a konečného produktu [Etrych patent]. Ve všech zmíněných postupech bylo léčivo navázáno na polymemí prekurzor obsahující volné hydrazidové skupiny polymeranalogickou reakcí.
Předmětem tohoto vynálezu je nový způsob přípravy polymemích cytostatik na bázi kopolymerů
HPMA s doxorubicinem vázaným pH-labilní hydrazonovou vazbou k polymemímu nosiči. Námi
-1 CZ 299053 B6 navrhovaný postup přípravy umožňuje zabudování léčiva do struktury polymemího konjugátu přímo kopolymerizací HPMA s monomerem obsahujícím doxorubicin připojený k polymerizovatelné skupině hydrazonovou vazbou přes spojku (spacer), tedy bez nezbytnosti následné reakce vazby léčiva na polymemí prekurzor. Použití zmíněného monomem při syntéze umožňuje přípra5 vu polymemích konjugátů o přesně dané struktuře polymemího řetězce obsahujícího pouze monomemí jednotky HPMA a monomemí jednotky nesoucí hydrazonově navázané léčivo.
Literatura:
Etrych, T., Jelínková, M., Říhová, B. and Ulbrich K., New HPMA copolymers containing doxorubicin bound via pH sensitive linkage. Synthesis, in vitro and in vivo biological properties. J. Controlled Release 73, 89-102 (2001).
T. Etrych, P. Chytil, M. Jelínková, B. Říhová, K. Ulbrich, Synthesis of HPMA Copolymers
Conatining Doxorubicin Bound via a Hydrazone Linkage. Effect of Spacer on Drug Release and in vitro Cytotoxicity. Macromolecular Biosci. 2, 43-52 (2002)
Etrych T., Chytil P., Pechar M., Studenovský M., Říhová B., Ulbrich K.: Způsob přípravy polymemích konjugátů doxorubicinu s pH-řízeným uvolňováním léčiva, CZPV2005-558
O. Hovorka, T. Etrych, M. Šubr, J. Strohalm, K. Ulbrich, B. Říhová, Differences in the Intracellular Fate of Free and Polymer-Bound Doxorubicin. J. Controlled Release 80, 101-117 (2002)
J. Kopeček, P. Kopečková, T. Minko, Z. Lu, HPMA Copolymer-Anticancer Drug Conjugates:
Design, Activity, and Mechanism of Action. Europ. J. Pharm. Biopharm. 50, 61 - 81 (2000)
M. Kovář, L. Kovář, V. Šubr, T. Etrych, K. Ulbrich, T. Mrkvan, J. Loucká and B. Říhová, HPMA Copolymers Conatining Doxorubicin Bound by Proteolytically or Hydrolytically Cleavable Bond: Comparison of Biological Properties In Vitro. J. Controlled Release 99,
3 01-3 1 4 (2004)
G. S. Kwon, Polymeric Drug Delivery Systems, Series: Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol. 148, Dekker, Marcel Incorporated, 2005
B. Říhová, T. Etrych, M. Pechar, M. Jelínková, M. Šťastný, O. Hovorka, M. Kovář, K. Ulbrich; Doxorubicin Bound to a HPMA Copolymer Carrier Through Hydrazone Bond is Effective also in a Cancer Cell Line with a Limited Content of Lysosomes, J. Controlled Release 74, 225-232 (2001)
K. Ulbrich, V. Šubr, J. Strohalm, D. Plocová, M. Jelínková, B. Říhová, Polymeric Drugs Based on Conjugates of Synthetic and Natural Macromolecules I. Synthesis and Physico-chemical Characterisation, J. Controlled Rel. 64, 63-79 (2000)
K. Ulbrich, T. Etrych, P. Chytil, M. Jelínková, B. Říhová, HPMA Copolymers with pH-Controlled Release of Doxorubicin. In vivo Cytotoxicity and in vivo Antitumor Activity.
J. Controlled Release 87, 33—47 (2003)
K. Ulbrich, T. Etrych, P. Chytil, M. Jelínková, B. Říhová, Antibody-Targeted PolymerDoxorubicin Conjugates with pH-Controlled Activation, J. Drug. Targeting 12(8) (2004) 47750 489]. (A)
K. Ulbrich, V. Šubr, Polymeric Anticancer Drugs with pH-Controlled Activation, Adv. Drug Delivery Rev. 56/7, 1025-1052 (2004) (B)
-2CZ 299053 B6
K. Ulbrich, T. Etrych, B. Říhová, M. Jelínková, M. kovář: pH Senzitivní polymemí konjugáty antracyklinového kancerostatika pro cílenou terapii. CZ patenty č. 293 787, CZ 293886
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je postup přípravy polymemího konjugátu HPMA kopolymerů s doxorubicinem vázaným na polymer prostřednictvím různých spojek obsahujících hydrolyticky štěpitelné hydrazonové vazby. Postup přípravy vychází ze dvoustupňové syntézy sestávající ze syntézy io monomerů, a to HPMA a methakryloylovaných derivátů aminokyselin a oligopeptidů zakončených hydrazonovou vazbou připojeným doxorubicinem, a přímé syntézy polymemích konjugátů kopolymerizací s uvedeným monomerem obsahujícím kancerostatikum doxorubicin vázané kovalentní hydrazonovou vazbou.
Polymemí léčivo připravené podle vynálezu se vyznačuje tím, že je jeho stmktura tvořena hydrofilním ve vodě rozpustným kopolymerem obsahujícím jednotky HPMA a jednotky methakryloylovaného derivátu aminokyselin nebo oligopeptidů zakončeného doxorubicinem připojených k aminokyselinovým nebo oligopeptidovým zbytkům (spacerům) pH-senzitivní hydrolyticky štěpitelnou hydrazonovou vazbou. Spacery mohou být tvořeny jednotlivými aminokyselinami, oligopeptidy a nebo dalšími strukturami dovolujícími jejich zakončení hydrazidovou skupinou a k ní připojení doxorubicinu hydrazonovou vazbou. Obsah komonomemích (Dox obsahujících) jednotek v kopolymerů může být 0,5 až 10 % mol. Kopolymer neobsahuje žádné další málo definované jednotky, např. methakryloylované hydrazidy.
Polymer s chemicky vázaným cytostatikem je stabilní v průběhu cirkulace v krevním řečišti, hydrazonová vazba mezi doxorubicinem a polymerem je relativně stabilní za fyziologických podmínek krevního řečiště (pH 7,4). Po extravasaci a záchytu v nádorech dochází k průniku molekulárně rozpuštěného konjugátu do jednotlivých nádorových buněk pinocytózou a v důsledku poklesu pH z vnějšího pH 7,4 na intracelulámí pH 5 až 6 by mělo dojít k hydrolýze hydrazo30 nové vazby, uvolnění cytostatika v cílové buňce a tedy k aktivaci jeho cytotoxického efektu. Reálnost výše navrženého mechanizmu působení polymemích léčiv podle vynálezu je doložena experimenty modelového uvolňování doxorubicinu z polymemího nosiče. Výsledky těchto testů jsou uvedeny v příkladové části přihlášky.
Syntéza monomerů vychází ze syntézy HPMA monomeru již dříve popsaným způsobem [Ulbrich 2000], Syntéza methakryloyl(aminoacyl)hydrazidů lišících se strukturou acylové komponenty je velmi obdobná u všech připravených monomerů a provádí se již dříve popsaným způsobem [Ulbrich patenty, Etrych patent]. Tato syntéza vychází z methakryloylace methylesteru hydrochloridu příslušné aminokyseliny nebo oligopeptidu methakryloylchloridem prováděné v dichlor40 methanu v přítomnosti bezvodého uhličitanu sodného. Výsledný produkt se převede na methakryloylovaný aminoacylhydrazin hydrazinolýzou příslušného methylesteru hydrazin hydrátem prováděnou v methanolovém nebo 2-propanolovém roztoku. Jako aminoacyl v methakryloyl(aminoacyl)hydrazinech je možno s výhodou použít glycyl, glycylglycyl, β-alanyl, 6-aminohexanoyl, 4-aminobenzoyl a nebo složený acyl vycházející z oligopeptidů GlyPheGly,
GlyLeuGly nebo GlyPheLeuGly. Jako příklad syntézy methakryloyl(aminoacyl)hydrazinu je uvedena v příkladě 1 syntéza 6-methakroyl(aminohexanoyl)hydrazidu.
Příprava (methakryloylamino)acylhydrazid-doxorubicinů vychází z vazebné reakce doxorubicin hydrochloridu na methakryloyl(aminoacyl)hydraziny za vzniku hydrazonové vazby. Reakce se provádí s výhodou v methanolu za katalýzy definovaného množství kyseliny octové s přídavkem inhibitoru. Reakce může být prováděna i v dimethylsulfoxidu, dimethylformamidu, sušeném ethanolu nebo dimethylacetamidu. Při použití jiných rozpouštědel nežli methanol reakce probíhá dobře, její výtěžky jsou však nižší. Vliv struktury spojky na průběh vazebné reakce je minimální. Pro dosažení optimálního výtěžku vazby a minimálního obsahu nenavázaného doxorubicinu v produktu je ve všech případech důležité dodržet koncentrace reaktantů a kyseliny octové
-3 CZ 299053 B6 v reakční směsi: koncentrace doxorubicinu (DOX) 19 mg/ml, koncentrace kyseliny octové 51 mg/ml. Optimální doba reakce je 24 h při teplotě 25 °C. Výše uvedené podmínky jsou optimální, vedoucí k maximálním výtěžkům. Reakce může být prováděna i za mírně pozměněných reakčních podmínek, přizpůsobených typu použitého rozpouštědla i (methakryloylamino)acyl5 hydrazidu. Pokud je použita nižší koncentrace DOX (10 mg/ml), je třeba pracovat při vyšší teplotě (až do 35 °C), je možné snížit koncentraci kyseliny octové až na 35 mg/ml, případně prodloužit dobu reakce (až do 28 hodin). Při vyšší koncentraci DOX (30 mg/ml) je výhodné zvýšit koncentraci kyseliny octové až max. na 60 mg/ml a zkrátit reakční dobu na 20 hodin, případně snížit teplotu na 20 °C. Na odstranění volného léčiva z produktu je možné s výhodou použít malý ío přídavek polymeru poly(HPMA-co-MA-AH-NHNH2), jehož hydrazídové skupiny vyváží nezreagovaný doxorubicin (DOX). Reakční směs je následně vyčištěna gelovou filtrací, s výhodou na koloně LH-20 v methanolu. Frakce monomemího derivátu DOX je po zahuštění izolována vysrážením do diethyletheru. Příprava 6-(methakryloylamino)hexanoylhydrazid-doxorubicinu a methakroylglycylfenylalanylleucylglycylhydrazid-doxorubicinu jako příklady syntézy (meth15 akryloylaminojacylhydraziddoxorubicinů jsou uvedeny v příkladové části.
Syntéza polymemích konjugátů doxorubicinu - kopolymerů HPMA s methakryloylovanými deriváty aminokyselin a oligopeptidů zakončených hydrazonovou vazbou připojeným doxorubicinem je založena na přímé radikálové kopolymerizací HPMA s odpovídajícími methakryloylo20 vánými deriváty DOX vzorce II
(II)
Polymerace je prováděna v roztoku za použití methanolu, ethanolu, dimethylsulfoxidu nebo dimethylformamidu jako polymeračního prostředí. Polymerizace je iniciována tepelně rozložitelnými iniciátory radikálové polymerizace na bázi azo nebo peroxy iniciátorů. S výhodou je možno použít azobis(izobutyronitril)(AIBN), azobis(izokyanvalerová kyselina) (ABIK) nebo diizopropylperkarbonát (DIP). Teplota polymerizace se řídí příslušným iniciátorem a použitým rozpouštědlem (AIBN, ABIK v methanolu, ethanolu, DMF a DMSO 50 až 60 °C, DIP 40 až 50 °C). Obvyklá doba polymerizace je 15 až 24 h. Příprava všech polymemích konjugátů radikálovou polymerizací je analogická, například kopolymerizace HPMA s methakryloylovaným derivátem
DOX je uvedena v příkladu 3. Oproti dříve používané polymeranalogické vazebné reakci DOX na polymemí prekurzor poly(HPMA-co-MA-AH-NHNH2) vede přímá kopolymerizace HPMA s methakryloylovaným derivátem DOX k přesně definovaným polymemím konjugátem.
Polymemí konjugát je kopolymer HPMA s methakryloylovanými deriváty aminokyselin a oligo35 peptidů zakončených hydrazonovou vazbou připojeným doxorubicinem vzorce I
-4CZ 299053 B6
(I) jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje 90 až 99,5 % mol. HPMA a 10 až 0,5 % mol. jednotek (methakryloylamino)acylhydrazid-doxorubicinů.
V používaných strukturních schématech je zavedena zkratka pro spojky (spacery) v bočních řetězcích konjugátů a monomerů - SP] je aminoacyl v methakryloylacylhydrazid-doxorubicinech, například glycyl, glycylglycyl, β-alanyl, 6-aminohexanoyl (AH), 4-aminobenzoyl a nebo složený acyl vycházející z oligopeptidů GlyPheGly, GlyLeuGly, GlyLeuPheGly a GlyPheLeuGly.
ío Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 představuje schéma struktury methakryloylovaných derivátů aminokyselin a oligopeptidů zakončených hydrazonovou vazbou připojeným doxorubicinem ((methakryloylamino)acylhydrazid-doxorubicin)).
Obr. 2 představuje schéma struktury konjugátu 1 - kopolymerů HPMA a methakryloylovaného derivátu aminokyselin a oligopeptidů zakončených hydrazonovou vazbou připojeným doxorubicinem (x = 40 až 335, y = 1 až 25).
Obr. 3 představuje graf rychlosti uvolňování DOX z polymemího konjugátu 1 a polymemího konjugátu připraveného polymeranalogickou reakcí (patent Etrych) v pufru o pH 5 (model intracelulámího prostředí).
Obr. 4 představuje graf rychlosti uvolňování DOX z polymemího konjugátu 1 a polymemího konjugátu připraveného polymeranalogickou reakcí (patent Etrych) v pufru o pH 7,4 (model krevního řečiště).
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Syntéza monomerů
HPMA byl připraven podle dříve popsaného postupu [Ulbrich a kol. 2000], Elementární analýza: vypočteno 58,8 % C, 9,16 % H, 9,79 %N; nalezeno 58,59 % C, 9,18 % H, 9,82 %N. Produkt byl chromatografický čistý.
-5CZ 299053 B6
6-(methakryloylamino)hexanoylhydrazid (V’-(6-hydrazino-6-oxohexyl)-2-methylakrylamid) (MA-AH-NHNH2) byl připraven podle dříve popsaného postupu [Ulbrich patenty, Etrych patent],
Methakroylglycylfenylalanylleucylglycylhydrazid (MA-Gly-D,L-PheLeuGly-NHNH2) byl připraven podle dříve popsaného postupu [Etrych patent].
6-(Methakryloylamino)hexanoylhydrazid-doxombicin (MA-AH-NHN=DOX)
6-(Methakryloylamino)hexanoylhydrazid (40 mg, 0,188 mmol) byl rozpuštěn při teplotě místnosti v 6 ml methanolu. Tento roztok byl nalit do reakční nádobky, ve které byl umístěn doxorubicin.HCl (115 mg, 0,198 mmol), a suspenze byla intenzivně míchána. Do této suspenze bylo přidáno 310 μΐ kyseliny octové a reakční směs byla míchána 24 hodin při 25 °C. Průběh reakce sledován na TLC - destičky Silikagel 60 F254 (methanol:chloroform:kyselina octová 2:8:1, Rf(DOX)= 0,75, Rf(MA-AH-NHN=DOX)= 0,9). V průběhu reakce došlo k pozvolnému rozpuštění suspenze a po 2 h reakce byl roztok homogenní. Po 24 hodinách bylo do homogenní reakční směsi přidáno 100 mg kopolymeru poly(HPMA-co-MA-AH-NHNH2) (na vyvázání zbytkového volného DOX) a reakční směs míchána další 4 h při teplotě místnosti. Produkt byl vyčištěn od polymemích a nízkomolekulámích příměsí pomocí gelové chromatografie na koloně (30cm x 3cm) naplněné Sephadexem LH-20 v methanolu. Nízkomolekulámí frakce byla zahuštěna na 2 ml a produkt vysrážen do 30 ml diethyléteru. Produkt byl odsát, promyt malým množstvím diethyléteru a vakuově sušen do konstantní hmotnosti. Výtěžek činil 110 mg produktu (79 %) s teplotou tání 172 až 175 °C. TLC (methanol:chloroform:kyselina octová 2:8:1) jedna skvrna při Rf = 0,9. MALD1-TOF MS: 762 (M+Na).
Methakroylglycylfenylalanylleucylglycylhydrazid-doxorubicin (MA-GFLG-NHN=DOX)
Příprava MA-GFLG-NHN=DOX byla prováděna za podobných podmínek, jako v případě
MA-AH-NHN=DOX. Methakroylglycylfenylalanylleucylglycylhydrazid (122 mg, 0,258 mmol) byl rozpuštěn při teplotě místnosti v 8,2 ml methanolu. Tento roztok byl nalit do reakční nádobky, ve které byl umístěn doxorubicin.HCl (157 mg, 0,271 mmol), a suspenze byla intenzivně míchána. Do této suspenze bylo přidáno 420 μΐ kyseliny octové a reakční směs byla míchána 24 hodin při 25 °C. Průběh reakce sledován na TLC - destičky Silikagel 60 F254 (metha35 nol:chloroform:kyselina octová 2:8:1, Rf(DOX) = 0,75, Rf(MA-GFLG-NHN=DOX)= 0,95). V průběhu reakce došlo k pozvolnému rozpuštění suspenze a po 19 h reakce byl roztok homogenní, Po 24 hodinách bylo do homogenní reakční směsi přidáno 130 mg kopolymeru poly(HPMA-co-MA-AH-NHNH2) (na vyvázání zbytkového volného DOX) a reakční směs míchána další 4 h při teplotě místnosti. Produkt byl vyčištěn od polymemích a nízkomolekulámích příměsí pomocí gelové chromatografie na koloně (30cm x 3cm) naplněné Sephadexem LH-20 v methanolu. Nízkomolekulámí frakce byla zahuštěna na 2,5 ml a produkt vysrážen do 40 ml diethyléteru. Produkt byl odsát, promyt malým množstvím diethyléteru a vakuově sušen do konstantní hmotnosti. Výtěžek činil 210 mg produktu (78 %) s teplotou tání 179 až 182 °C. TLC (methanol:chloroform:kyselina octová 2:8:1) jedna skvrna při Rf = 0,95. MALDI-TOF MS: 1023 (M+Na).
Příklad 2: Syntéza polymemího konjugátu - Konjugátu 1 - kopolymeru HPMA s MA-AHNHN-DOX
Kopolymer poly(HPMA-co-MA-AH-NHN=DOX)] byl připraven roztokovou radikálovou kopolymerizací HPMA a MA-AH-NHN=DOX v methanolu při 60 °C.
840 mg HPMA a 165 mg MA-AH-NHN=DOX (18 hmotn. % monomerů) bylo rozpuštěno v 5,7 ml methanolu, k roztoku bylo přidáno 67 mg ABIN (1,2 hmotn. %). Po filtraci byla poly-6CZ 299053 B6 merizační směs vložena v argonové atmosféře do polymerizačního reaktoru (objem 20 ml) umístěného v termostatu. Nad hladinou byl ještě několik minut zaváděn dusík. Teplota polymerizační směsi byla nastavena na 60 °C a polymerizace probíhala za míchání (50 rpm) v dusíkové atmosféře. Polymerizační směs byla po 22 h vyjmuta z termostatu, ochlazena v lázni na teplotu míst5 nosti a polymer byl izolován vysrážením do ethylacetátu (celkem 100 ml). Vysrážený polymer byl izolován filtrací na fritě S4. Sraženina byla promyta ethylacetátem a sušena při teplotě místnosti za vakua membránové vývěvy cca 1 h. Polymemí produkt byl vyčištěn od nízkomolekulárních příměsí a nenavázaného léčiva gelovou chromatografií na koloně naplněné Sephadexem LH-20 v methanolu. Polymemí frakce byla zachycena, zahuštěna na vakuové rotační odparce na ío objem 5 ml a kopolymer byl izolován vysrážením do 50 ml ethylacetátu. Produkt byl vysušen do konstantní hmotnosti.
Obsah celkového DOX byl stanoven spektrálně. Mw a M„ byly stanoveny kapalinovou chromatografií (LC AKTA) s detekcí rozptylem světla (Multiangel detector DAWN DSP, Wyatt).
Charakterizace polymemího léčiva: Výtěžek polymerizační reakce: 750 mg (75 %), obsah celkového DOX 10,8 % hmotnostních, obsah volného DOX 0,35 % z celkového obsahu DOX, molekulová hmotnost Mw = 34 000, index polydisperzity Mw / Mn= 1,72.
Příklad 3: Syntéza polymemího konjugátu - Konjugátu 2 - kopolymeru HPMA s MA-AHNHN=DOX
Kopolymer poly(HPMA-co-MA-AH-NHN=DOX) byl připraven roztokovou radikálovou kopo25 lymerizací HPMA a MA-AH-NHN=DOX v methanolu při 60 °C stejným způsobem jako v příkladu 2, stím rozdílem, že složení polymerizační směsi bylo následující: 770 mg HPMA, 235 mg MA-AH-NHN=DOX, 5,7 ml methanolu, 67 mg ABIN (1,2 hmotn. %). Izolace a čištění produktu bylo prováděno stejným způsobem, jako u příkladu 2. Charakterizace polymemího léčiva: Výtěžek polymerizační reakce: 740 mg (74 %), obsah celkového DOOX 16,5 % hmot30 nostních, obsah volného DOX 0,45 % z celkového obsahu DOX, molekulová hmotnost Mw = 32 800, index polydisperzity M2 Mn = 1,78.
Příklad 4: Syntéza polymemího konjugátu - Konjugátu 3 - kopolymeru HPMA s MA-GFLG35 NHN=DOX
Kopolymer poly(HPMA-co-MA-GFLG-NHN=DOX) byl připraven roztokovou radikálovou kopolymerizací HPMA a MA-GFLG-NHN=DOX v methanolu při 60 °C stejným způsobem jako v příkladu 2, stím rozdílem, že složení polymerizační směsi bylo následující: 700 mg
HPMA, 183 mg MA-AH-NHN=DOX, 5 ml methanolu, 64 mg ABIN (1,3 hmotn. %). Izolace a čištění produktu bylo prováděno stejným způsobem, jako u příkladu 2. Charakterizace polymemího léčiva: Výtěžek polymerizační reakce: 670 mg (76 %), obsah celkového DOX 10,5 % hmotnostních, obsah volného DOX 0,32 % z celkového obsahu DOX, molekulová hmotnost
Mw = 34 800, index polydisperzity M„ = 1,82.
Příklad 5: Uvolňování doxorubicinu z roubovaných polymemích konjugátů
Bylo měřeno množství doxorubicinu uvolněného z polymemích konjugátů po jejich inkubací ve fosfátovém pufru o pH 5,0 (0,1 M fosfátový pufr obsahujícím 0,05 M NaCl) modelujícím intracelulámí prostředí a fosfátovém pufru pH 7,4 modelujícím prostředí krevního řečiště. Množství uvolňovaného DOX v inkubačním roztoku bylo stanoveno pomocí HPLC (Shimadzu). V předem určených časových intervalech bylo odebíráno 50 μΐ inkubačního roztoku a analyzováno na koloně TSKGel G 3000x1, izokratický průtok 0,5 ml/min mobilní fáze složené ze směsi metha-7CZ 299053 B6 nokoctaný pufr pH 6,5 (80 : 20 % obj.). Množství DOX bylo vypočteno z ploch píků volného a vázaného DOX (UV-VIS detekce při 488 nm). Po inkubaci konjugátů (koncentrace 5 mg/ml) ve fyziologickém prostředí při 36 °C (fosfátový pufr, pH 7,4) se uvolňuje jen malé množství léčiva (do 10 %/24 hod) (Obr. 4); naopak rychlost uvolňování DOX z roubovaných polymemích konju5 gátů, a tedy rychlost aktivace cytotoxického léčívaje v mírně kyselém prostředí při pH 5,0 (Obr. 3) značná. Rychlosti uvolňování léčiva v pH 7,4 a pH 5 z polymemích konjugátů připravených přímou kopolymerizací s využitím 6-(methakryloylamino)acylhydrazid-doxorubicinů jsou plně srovnatelné s rychlostmi uvolňování léčiva zjištěných u hydrazonových konjugátů připravených polymeranalogickou reakcí (PA reakce) [Etrych patent]. Výsledky měření rychlosti in vitro uvol10 ňování aktivního léčiva z polymemího nosiče v prostředí modelujícím prostředí krve (při dopravě léčiva organizmem) a intracelulámí prostředí cílové buňky potvrzuje vhodnost použití navrhovaného polymemího cytostatika pro nádorově specifické terapie.
Claims (10)
- PATENTOVÉ NÁROKY20 1. Polymemí léčivo ve formě konjugátu kopolymeru N-(2-hydroxypropyl)methakrylamiduHPMA s doxorubicinem vázaným na polymer prostřednictvím spojek obsahujících hydrolyticky štěpitelné hydrazonové vazby vzorce I (I), kde SPi představuje aminoacylovou spojku, zvolenou ze skupiny zahrnující glycyl, glycylglycyl, 25 β-alanyl, 6-aminohexanoyl, 4-aminobenzoyl nebo složený acyl vycházející z oligopeptidůGlyPheGly, GlyLeuGly, GlyLeuPheGly nebo GlyPheLeuGly, x = 40 až 335, y = 1 až 25, sestávající z 90 až 99,5 % mol. jednotek HPMA a 10 až 0,5 % mol. komonomemích jednotek obsahujících doxorubicin.
- 2. Způsob výroby polymemího konjugátu vzorce I podle nároku 1,vyznačující se přímou kopolymerací monomem obsahujícího doxorubicin vzorce II-8CZ 299053 B6 (Π), kde SPi má význam uvedený v nároku 1, s HPMA v molámím poměru 90 až 99,5 : 10 až 0,5.
- 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se t í m , že se polymerace provádí v prostředí methanolu, ethanolu, dimethylsulfoxidu nebo dimethylformamidu a je iniciována tepelně rozložitelnými iniciátory radikálové polymerace.ío
- 4. Způsob podle nároku 2 nebo 3, vyznačuj ící se t í m , že jsou iniciátory radikálové polymerace zvoleny ze skupiny, kterou tvoří azobis(izobutyronitril) AIBN, azobis(izokyanvalerová)kyselina ABIK a diizopropylperkarbonát DIP.
- 5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že je iniciátor zvolen ze skupiny15 AIBN nebo ABIK a reakce probíhá při 50 až 60 °C po dobu 15 až 24 hodin.
- 6. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že je jako iniciátor zvolen DIP a reakce probíhá při 40 až 50 °C pod dobu 15 až 24 hodin.20
- 7. Způsob podle nároků 2 až 6, vyznačující se tím, že je monomemí jednotka vzorce II vyrobena reakcí doxorubicin hydrochloridu s methakryloyl(aminoacyl)hydraziny vzorce MA-SP]NHNH2, kde MA je methakryloyl a SP] má význam uvedený v nároku 1, v organickém rozpouštědle za přítomnosti kyseliny octové.25
- 8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že je ve výchozí směsi koncentrace doxorubicinu volena v rozmezí koncentrací 10 až 30 mg/ml a kyseliny octové v rozmezí 35 až 60 mg/ml.
- 9. Způsob podle nároku 8, v y z n a č u j í c í se t í m , že je ve výchozí reakční směsi kon30 centrace doxorubicinu hydrochloridu 19 mg/ml a kyseliny octové 51 mg/ml.10. Způsob podle libovolného z nároků 7 až 9, vy znač u j í cí se t í m, že reakce se provádí při teplotě 20 až 35 °C po dobu 20 až 28 hodin.3511. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že reakce se provádí při teplotě25 °C po dobu 24 h.-9CZ 299053 B612. Způsob podle nároků 7 až 11,vyznačující se tím, že se po ukončení reakce pro odstranění přebytečného doxorubicinu použije kopolymer HPMA s methakryloylovaným (aminoacyl)hydrazidem.13. Způsob podle nároků 7 až 12, vyznačující se tím, že je reakční prostředí tvořeno organickým rozpouštědlem zvoleným ze skupiny, kterou tvoří methanol, bezvodý ethanol, dimethylsulfoxid, dimethylformamid a dimethylacetamid.
- 10 14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že je reakční prostředí tvořeno methanolem.
Priority Applications (11)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20060505A CZ2006505A3 (cs) | 2006-08-09 | 2006-08-09 | Polymerní konjugáty doxorubicinu s pH-rízeným uvolnováním léciva a zpusob jejich prípravy |
| PCT/CZ2007/000077 WO2008017277A2 (en) | 2006-08-09 | 2007-08-08 | Polymeric conjugates of doxorubicin with ph-regulated release of the drug and a method of preparing |
| EP07785504A EP2049157B1 (en) | 2006-08-09 | 2007-08-08 | Polymeric conjugates of doxorubicin with ph-regulated release of the drug and a method of preparing |
| DE602007012111T DE602007012111D1 (de) | 2006-08-09 | 2007-08-08 | Polymerkonjugate von doxorubicin mit ph-regulierter freisetzung des arzneimittels und herstellungsverfahren |
| ES07785504T ES2356991T3 (es) | 2006-08-09 | 2007-08-08 | Conjugados poliméricos de doxorubicina con liberación del fármaco regulada por ph y un método de preparación. |
| UAA200902032A UA95814C2 (ru) | 2006-08-09 | 2007-08-08 | ПОЛИМЕРНЫЕ КОНЬЮГАТЫ ДОКСОРУБИЦИНА С рН-РЕГУЛИРОВАННЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ |
| PL07785504T PL2049157T3 (pl) | 2006-08-09 | 2007-08-08 | Polimeryczne koniugaty doksorubicyny o uwalnianiu leku regulowanym za pomocą pH i sposób wytwarzania |
| US12/376,915 US20100190928A1 (en) | 2006-08-09 | 2007-08-08 | Polymeric conjugates of doxorubicin with ph-regulated release of the drug and a method of preparing |
| AT07785504T ATE495759T1 (de) | 2006-08-09 | 2007-08-08 | Polymerkonjugate von doxorubicin mit ph- regulierter freisetzung des arzneimittels und herstellungsverfahren |
| EA200900295A EA200900295A1 (ru) | 2006-08-09 | 2007-08-08 | Полимерные конъюгаты доксорубицина с рн-регулируемым высвобождением лекарственного средства и способ получения |
| PT07785504T PT2049157E (pt) | 2006-08-09 | 2007-08-08 | Conjugados poliméricos de doxorubicina com libertação do fármaco regulada pelo ph e método de preparação |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20060505A CZ2006505A3 (cs) | 2006-08-09 | 2006-08-09 | Polymerní konjugáty doxorubicinu s pH-rízeným uvolnováním léciva a zpusob jejich prípravy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ299053B6 true CZ299053B6 (cs) | 2008-04-09 |
| CZ2006505A3 CZ2006505A3 (cs) | 2008-04-09 |
Family
ID=38828704
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20060505A CZ2006505A3 (cs) | 2006-08-09 | 2006-08-09 | Polymerní konjugáty doxorubicinu s pH-rízeným uvolnováním léciva a zpusob jejich prípravy |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20100190928A1 (cs) |
| EP (1) | EP2049157B1 (cs) |
| AT (1) | ATE495759T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ2006505A3 (cs) |
| DE (1) | DE602007012111D1 (cs) |
| EA (1) | EA200900295A1 (cs) |
| ES (1) | ES2356991T3 (cs) |
| PL (1) | PL2049157T3 (cs) |
| PT (1) | PT2049157E (cs) |
| UA (1) | UA95814C2 (cs) |
| WO (1) | WO2008017277A2 (cs) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090311182A1 (en) * | 2004-03-31 | 2009-12-17 | Dong Wang | Macromolecular Delivery Systems for Non-Invasive Imaging, Evaluation and Treatment of Arthritis and Other Inflammatory Diseases |
| CZ303072B6 (cs) * | 2009-02-13 | 2012-03-21 | Zentiva, K.S. | Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH rízeným uvolnováním kancerostatika |
| EP3338816A1 (en) * | 2009-09-09 | 2018-06-27 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Compositions and methods for detecting and treating implant loosening and osteolysis |
| CN103936945B (zh) * | 2013-01-23 | 2017-02-08 | 中国科学院化学研究所 | 一类高效抗肿瘤靶向药物载体及其制备方法 |
| CN105963706B (zh) * | 2016-04-15 | 2019-03-15 | 四川大学 | 一种支化hpma共聚物-dox偶联物及其制备方法和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995013798A1 (en) * | 1993-11-18 | 1995-05-26 | Cancer Research Institute Inc. | Controlled release preparation |
| US6060518A (en) * | 1996-08-16 | 2000-05-09 | Supratek Pharma Inc. | Polymer compositions for chemotherapy and methods of treatment using the same |
| CZ297827B6 (cs) * | 2005-09-05 | 2007-04-04 | Zentiva, A. S. | Zpusob prípravy polymerních konjugátu doxorubicinu s pH-rízeným uvolnováním léciva |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ293787B6 (cs) * | 2001-12-20 | 2004-07-14 | Zentiva, A.S. | pH senzitivní polymerní konjugáty antracyklinového kancerostatika pro cílenou terapii |
-
2006
- 2006-08-09 CZ CZ20060505A patent/CZ2006505A3/cs not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-08-08 US US12/376,915 patent/US20100190928A1/en not_active Abandoned
- 2007-08-08 EP EP07785504A patent/EP2049157B1/en active Active
- 2007-08-08 DE DE602007012111T patent/DE602007012111D1/de active Active
- 2007-08-08 PL PL07785504T patent/PL2049157T3/pl unknown
- 2007-08-08 WO PCT/CZ2007/000077 patent/WO2008017277A2/en active Application Filing
- 2007-08-08 EA EA200900295A patent/EA200900295A1/ru unknown
- 2007-08-08 UA UAA200902032A patent/UA95814C2/ru unknown
- 2007-08-08 AT AT07785504T patent/ATE495759T1/de not_active IP Right Cessation
- 2007-08-08 PT PT07785504T patent/PT2049157E/pt unknown
- 2007-08-08 ES ES07785504T patent/ES2356991T3/es active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995013798A1 (en) * | 1993-11-18 | 1995-05-26 | Cancer Research Institute Inc. | Controlled release preparation |
| US6060518A (en) * | 1996-08-16 | 2000-05-09 | Supratek Pharma Inc. | Polymer compositions for chemotherapy and methods of treatment using the same |
| CZ297827B6 (cs) * | 2005-09-05 | 2007-04-04 | Zentiva, A. S. | Zpusob prípravy polymerních konjugátu doxorubicinu s pH-rízeným uvolnováním léciva |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL2049157T3 (pl) | 2011-04-29 |
| PT2049157E (pt) | 2011-02-23 |
| EA200900295A1 (ru) | 2009-06-30 |
| ATE495759T1 (de) | 2011-02-15 |
| UA95814C2 (ru) | 2011-09-12 |
| ES2356991T3 (es) | 2011-04-15 |
| WO2008017277A2 (en) | 2008-02-14 |
| WO2008017277A3 (en) | 2008-03-27 |
| CZ2006505A3 (cs) | 2008-04-09 |
| DE602007012111D1 (de) | 2011-03-03 |
| EP2049157B1 (en) | 2011-01-19 |
| EP2049157A2 (en) | 2009-04-22 |
| US20100190928A1 (en) | 2010-07-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101857900B1 (ko) | 공유결합된 치료제 전달을 위한 사이클로덱스트린-기초 중합체 | |
| EP2063914B1 (en) | Grafted macromolecular conjugates of doxorubicin with anticancer activity and method of their preparation | |
| CA3046541A1 (en) | Biocompatible and hydrophilic polymer conjugate for targeted delivery of an agent | |
| CZ297827B6 (cs) | Zpusob prípravy polymerních konjugátu doxorubicinu s pH-rízeným uvolnováním léciva | |
| EP2049157B1 (en) | Polymeric conjugates of doxorubicin with ph-regulated release of the drug and a method of preparing | |
| EP1463529B1 (en) | Ph-sensitive polymeric conjugates of an anthracycline cancerostatic drug for targeted therapy | |
| CZ303072B6 (cs) | Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH rízeným uvolnováním kancerostatika | |
| CN103145932A (zh) | 一种长循环抗肿瘤靶向药物载体及其制备方法 | |
| CZ2009844A3 (cs) | Dendritické vysokomolekulární polymerní nosice léciv a jejich konjugáty s lécivy pro lécbu zejména pevných nádoru | |
| Chytil et al. | Structural design and synthesis of polymer prodrugs | |
| Sintov et al. | Polymeric drug delivery of enzymatically degradable pendant agents: Peptidyl-linked procainamide model system studies | |
| CZ2006207A3 (cs) | Micelární nosiče léčiv s protinádorovou aktivitou | |
| Class et al. | Patent application title: POLYMERIC CONJUGATES OF DOXORUBICIN WITH PH-REGULATED RELEASE OF THE DRUG AND A METHOD OF PREPARING Inventors: Tomas Etrych (Praha, CZ) Karel Ulbrich (Praha, CZ) | |
| WO2021121446A1 (en) | Copolymer with hydrolytic release of cancerostatic agent cytarabine, method of its preparation and use thereof | |
| CZ309067B6 (cs) | Způsob přípravy polymerních nosičů pro pH-řízené uvolňování léčiv a jejich konjugátů s léčivy | |
| KR100411193B1 (ko) | ｐＨ가 정상조직과 차이가 나는 질병의 진단 및 치료용ｐＨ 민감성 조성물과 그 제형 | |
| WO2001036002A1 (en) | Conjugates of hpma copolymer and ellipticin | |
| CZ2003605A3 (en) | pH sensitive polymeric conjugates of anthracycline cancerostatic for targeted therapy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20210809 |