CZ298709B6 - Peptidové deriváty, zpusob jejich prípravy, farmaceutický prostredek s jejich obsahem a jejich použití - Google Patents

Abstract

Jsou popsány peptidové deriváty obecného vzorce R.sup.1.n.O(O)C-CH.sub.2.n.-(R)Cgl-Aze-Pab-R.sup.2.n., kde substituenty mají specifický význam, jejich farmaceuticky vhodné soli, zpusoby jejich prípravy, farmaceutické prostredky s jejich obsahem a jejich použití pro výrobu léciva a pro ošetrování stavu, kdy je žádoucí inhibice thrombinu, pro použití pri ošetrování thrombózy a pro použití jako antikoagulant.

Description

Vynález se týká dále popsaných peptidových derivátů, způsobu jejich přípravy, farmaceutických prostředků sjejich obsahem ajejich použití pro výrobu léčiva a pro ošetřování zdravotně nežádoucích stavů.

Dosavadní stav techniky

Koagulace krve je klíčivý proces zahrnutý jak v hemostázi (to je prevence ztráty krve z poškoze15 né cévy), tak thrombóze (to je vytváření krevních sraženin v cévách, vedoucí někdy k ucpávání cév).

Koagulace je výsledkem složité řady enzymatických reakcí. Jedním z konečných stupňů této řady reakcí je konverze proenzymu prothrombin na aktivní enzym thrombin.

Je známo, že thrombin má centrální úlohu při koagulaci. Aktivuje krevní destičky, což vede k agregaci destiček, převádí fibrinogen na fibrinové monomery, které spontánně polymerují na fibrinové polymery a aktivuje faktor XIII, který následně zesíťuje polymery za vzniku nerozpustného fibrinu. Kromě toho thrombin aktivuje faktor V a faktor VIII, co vytváří „pozitivní zpětnou vazbu“ generace thrombinu z prothrombinu.

Dalo by se proto očekávat, že efektivní inhibitory thrombinu inhibicí agregace krevních destiček a vytvářením a zesítěním fibrinu vykazují antithrombotickou aktivitu. Kromě antithrombotické aktivity by se dala očekávat podpora účinné inhibice mechanismu pozitivní zpětné vazby.

Vývoj nízkomolekulámích inhibitorů thrombinu popsal Claesson (Blood Coagul. Fibrin., 5, str. 411, 1994).

Blombáck a kol. (J. Clin. Lab. Invest. 24, doplněk 107, 59, 1969) popisuje inhibitory thrombinu na bázi aminokyselinové sekvence umístěné kolem místa štěpení pro fibrinogenové Aalfa řetězce. Z diskutovaných aminokyselinových sekvencí se doporučují tripeptidová sekvence Phe-ValArg jako nejúčinnější inhibitor.

Nízkomolekulámí thrombinové inhibitory na peptidové bázi jsou popsány například v paten40 tovém spise US 4 346 078, v mezinárodních zveřejněných přihláškách vynálezu číslo WO 93/11152, WO 94/29336, WO 93/18060 a WO 95/01168 a v evropských zveřejněných přihláškách vynálezu číslo 648780, 468231, 559046, 641779, 185390, 526877, 542525, 195212, 362002, 364344, 530167, 293881, 686642 a 601459.

Nověji byly popsány inhibitory thrombinu na bázi derivátů peptidu ve zveřejněné evropské přihlášce vynálezu číslo 0 649317 a v mezinárodních zveřejněných přihláškách vynálezu číslo WO 95/23609, WO 95/35309, WO 96/25426 a WO 94/29336.

Obzvláště v mezinárodní zveřejněné přihlášce vynálezu číslo WO 94/29336 se popisuje derivát obecného vzorce

R^aOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H, kde znamená R^a atom vodíku, benzylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlí55 ku.

-1 CZ 298709 B6

Jakkoliv je známo, že tyto aktivní sloučeniny vykazují výraznou antithrombinovou aktivitu, bylo by stále vhodné zlepšit jejich farmakokinetické vlastnosti jak při orálním, tak při parenterálním podávání, přičemž takováto žádoucí zlepšení zahrnují:

a) zlepšenou absorpci z gastrointestinálního traktu se zřetelem na snížení intra a/nebo interindividuální variability se zřetelem na biologickou dostupnost účinných látek,

b) zploštění časového profilu koncentrace v plazmě (to je snížení píku koncentrace v plazmě v průběhu dávkovacího intervalu), se zřetelem na snížení nebezpečí poklesu mimo hranici terapeutického intervalu a vedlejších jevů způsobených koncentračním pikem, který je příliš vysoký (například krvácení) a příliš nízký (například vytváření thrombu) a

c) zvýšení doby působení účinných látek.

Kromě toho orální a parenterální podávání aktivních inhibitorů thrombinu může vést k nežádoucímu lokálnímu krvácení (například ve střevním lumenu nebo subkutánně) jakožto následek vysoké místní koncentrace.

Konečně orálního podávání aktivních inhibitorů thrombinu, které také inhibují trypsin a jiné sereinové proteázy v gastrointestinálním traktu, může mít přídavně vedlejší účinky včetně netrávení (například v případě, kdy je trypsin inhibován ve střevním lumenu).

Jakkoliv určité N-benzyloxykarbonylové deriváty shora zmíněných aktivních sloučenin byly rovněž označovány jako inhibitory thrombinu v mezinárodní zveřejněné přihlášce vynálezu číslo WO 94/29336, neuvádělo se, že by tyto deriváty mohly být užitečné jako prodrogy. Ve skutečnosti se v WO 94/29336 nikde nezmiňují vhodné prodrogy aktivních sloučenin.

Nyní se s překvapením zjistilo, že shora vytčené problémy mohou být zvládnuty podáváním sloučenin podle vynálezu, které jsou jako takové neaktivní, po orálním a/nebo parenterálním podání metabolizují v těle za vytváření aktivních inhibitorů thrombinu včetně inhibitorů shora uvedených.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu jsou peptidové deriváty obecného vzorce I

R^lO(O)C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-R² (I) kde

R¹ znamená skupinu -R³ nebo -A¹C(O)N(R⁴)R⁵ nebo -A^]C(O)OR⁴,

A¹ znamená alkylenovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku,

R², který nahrazuje jeden z atomů vodíku v amidinové jednotce Pab-H, znamená hydroxy45 skupinu, skupinu obecného vzorce OC(O)R⁶, C(O)OR⁷ nebo C(O)OCH(R⁸)OC(O)R⁹,

R³ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 10 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 10 atomy uhlíku, která může být substituována alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu, která může být popřípadě substituována alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkyloxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo atomem halogenu,

-2CZ 298709 B6

R⁴ a R⁵ znamenají na sobě nezávisle atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsa5 huje od 4 do 6 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, fenylovou skupinu, 2-naftylovou skupinu nebo v případě, kdy R¹ znamená skupinu vzorce A'C(O)N(R⁴)R⁵, spolu s atomem dusíku, na který jsou vázány, znamená pyrrolidinylovou skupinu nebo piperidylovou skupinu, ío R⁶ znamená alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 17 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 17 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 17 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 17 atomy uhlíku, fenylovou skupinu nebo 2-naftylovou skupinu, přičemž všechny tyto skupiny jsou popřípadě substituovány alkylovou skupi15 nou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinou, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinou se 3 až 6 atomy uhlíku nebo atomem halogenu,

R⁷ znamená skupinu 2-naftylovou, fenylovou, alkylfenylovou s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu, přičemž všechny tyto skupiny jsou popřípadě substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinou, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinou se 3 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo atomem halogenu, nebo R⁷ znamená alkylovou skupinu s 1 až 12 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 12 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 12 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 12 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 12 atomy uhlíku, která je popřípadě substituována alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, acyloxyskupinou s 1 až atomy uhlíku nebo atomem halogenu,

R⁸ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, alkylovou skupi35 nou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje mezi 4 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 nebo 4 atomy uhlíku,

R⁹ znamená skupinu 2-naftylovou, fenylovou, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu s 2 až 8 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje mezi 4 a 8 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, které jsou popřípadě substituována atomem halogenu, nebo R⁹ znamená alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo acyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

Cgl znamená zbytek cyklohexylglycinu,

Aze znamená zbytek S-azetidin-2-karboxylové kyseliny a

Pab je odvozen od H-Pab-H, který má význam l-amidino-4-aminomethylbenzenu, za podmínky, že když

-3CZ 298709 B6

R¹ znamená skupinu R³, R³ znamená skupinu benzylovou, methylovou, ethylovou, n-butylovou nebo n-hexylovou a R² znamená skupinu vzorce C(O)OR⁷, potom R⁷ neznamená benzylovou skupinu, a j ej ich farmaceuticky vhodné sol i.

Předmětem tohoto vynálezu je také způsob přípravy shora vymezených peptidových derivátů obecného vzorce I, jehož podstata spočívá v tom, že

a) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde R² znamená hydroxyskupinu, se nechává rea10 govat odpovídající sloučenina obecného vzorce I, kde R² znamená skupinu OC(O)R⁶, kde R⁶ má význam uvedený výše, s alkoxidovou zásadou,

b) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde R² znamená hydroxyskupinu, se nechává reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce I, kde R² znamená skupinu C(O)OR⁷, kde R⁷ má význam uvedený výše, s hydroxylaminem nebo s jeho adiční solí s kyselinou,

c) nechává se reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce II

H-(R)Cgl-Aze-Pab-R² (II) kde R² má význam uvedený výše, se sloučeninou obecného vzorce III

R¹O(O)C-CH₂-L¹ (III) kde R¹ má význam uvedený výše a L¹ znamená uvolňovanou skupinu,

d) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde R¹ znamená atom vodíku a R² znamená hydroxyskupinu nebo skupinu C(O)OR⁷, kde R⁷ má shora uvedený význam, se nechává reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce I, kde R¹ znamená alkylovou skupinu s 1 až atomy uhlíku nebo alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu a R² znamená hydroxyskupinu nebo skupinu C(O)OR⁷, se zásadou,

e) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde R² znamená skupinu OC(O)R⁶, kde R⁶ má význam uvedený výše, se nechává reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce I, kde

R² znamená hydroxyskupinu, se sloučeninou obecného vzorce IV

R⁶C(O)-O-C(O)R⁶ (IV) nebo se sloučeninou obecného vzorce V

R⁶C(O)Hal (V) kde Hal znamená vždy atom chloru nebo bromu a R⁶ má význam uvedený výše,

f) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde R¹ znamená atom vodíku a R² znamená sku45 pinu C(O)OR⁶, kde R⁶ má význam uvedený výše, se nechává reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce VI,

P’O(O)C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-R² (VI) kde P¹ znamená skupinu chránící labilní ester kyseliny a R² znamená skupinu C(O)OR⁶, kde R⁶ má význam uvedený výše, s kyselinou, nebo

g) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde R¹ znamená skupinu R³, R³ znamená alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém

-4CZ 298709 B6 podílu a R² znamená hydroxyskupinu nebo skupinu obecného vzorce C(O)OR⁷, kde R⁷ má význam uvedený výše, se nechává reagovat transesterifikační reakcí sloučenina obecného vzorce VII,

R^laO(O)C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-R² (VII) kde R^la znamená alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu odlišnou než se připravuje nebo alternativně labilní alkylový substituent a R² má význam uvedený výše.

Předmětem tohoto vynálezu je taktéž farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje peptidový derivát obecného vzorce I vymezený výše nebo některý z jeho dále popsaných výhodných forem nebo jeho farmaceuticky vhodnou sůl ve směsi s farmaceuticky vhodným pomocným činidlem, ředidlem nebo nosičem.

Předmětem tohoto vynálezu jsou rovněž peptidové deriváty obecného vzorce 1 nebo některé z jejich dále popsaných výhodných forem nebo jejich farmaceuticky vhodné soli pro použití jako léčivo, pro použití při ošetřování stavů, kdy je žádoucí inhibice thrombinu, pro použití při ošetřování thrombózy, pro použití jako antikoagulantu, jakož i pro ošetřování stavů, při kterých je žádoucí inhibice thrombinu a zejména kde stavem je thrombóza.

Předmětem tohoto vynálezu je konečně použití peptidového derivátu obecného vzorce I nebo některého z jeho dále popsaných výhodných forem nebo jeho farmaceuticky vhodné soli jakožto účinné látky pro výrobu antikoagulantu, pro výrobu léčiva pro ošetřování stavů, kdy je žádoucí inhibice thrombózy, zejména kde stavem je thrombóza nebo kde stavem je hyperkoagulace v krvi a ve tkáni.

Dále se uvádějí podrobnější údaje týkající se předmětného vynálezu, jakož i srovnávací údaje.

Peptidový derivát obecného vzorce I, některá z jeho dále popsaných výhodných forem nebo jeho farmaceuticky vhodná sůl jsou v popise tohoto vynálezu označovány nadále také jako „sloučenina podle vynálezu“.

Výrazem „prodroga“ je vždy míněn prekurzor léčiva.

Sloučeniny podle vynálezu mohou vykazovat tautomerii. Všechny tautomemí formy a směsi jsou zahrnuty do rozsahu předmětného vynálezu.

Sloučeniny podle vynálezu mohou obsahovat jeden nebo několik asymetrických atomů uhlíku a mohou proto vykazovat optický a/nebo diastereoizomerismus. Všechny diastereomery se mohou oddělovat o sobě známými způsoby například chromatografií nebo frakcionovanou krystalizací. Různé stereoizomery se mohou izolovat separací racemické nebo jiné směsi sloučenin o sobě známými způsoby například frakcionovanou krystalizací nebo chromatografií HPLC. Nebo se žádané optické izomery mohou připravovat reakcí vhodných opticky aktivních výchozích látek za podmínek, které nevedou k racemizaci nebo epimerizaci, nebo derivatizací například homochirální kyselinou s následným oddělením diastereomemích derivátů o sobě známými způsoby (například HPLC, chromatografií na oxidu křemičitém). Vynález zahrnuje všechny možné stereoizoméry.

Vynález se také týká použití sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I, shora popsané avšak bez platnosti výjimky, jakožto prodrogy.

Alkylové skupiny symbolu R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ a R⁹ mají lineární řetězec nebo, pokud mají dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec, nebojsou cyklické nebo parciálně cyklické, nasy55 cené nebo nenasycené, přerušené atomem kyslíku a/nebo substituované nebo zakončené hydro-5CZ 298709 B6 xylovou skupinou za podmínky, že hydroxylová skupina není vázána na sp² atom uhlíku nebo na atom uhlíku, který přiléhá k atomu kyslíku.

„Parciálně cyklickými alkylovými skupinami“ se míní skupiny jako například CH₂Ch.

Alkylové skupiny symbolu R⁸ a R³, R⁶ a R⁷ jsou popřípadě substituovány, mají lineární řetězec nebo, pokud mají dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec, jsou nasycené nebo nenasycené a/neb jsou přerušené atomem kyslíku.

Alkylové podíly alkylfenolových skupin symbolu R³ a R⁷ mají lineární řetězec nebo, pokud mají dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec a/nebo jsou nasycené nebo nenasycené.

Alkylenové skupiny symbolu A¹ mají lineární řetězec nebo, pokud mají dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec a/nebo jsou nasycené nebo nenasycené.

Alkoxyskupiny symbolu R⁹ a R³, R⁷ a R⁹ jsou popřípadě substituovány, mají lineární řetězec nebo, pokud mají dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec a/nebo jsou nasycené nebo nenasycené.

Acyloxyskupiny symbolu R⁷ a R⁹ jsou popřípadě substituovány, mají lineární řetězec nebo, pokud mají dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec a/nebo jsou nasycené nebo nenasycené.

Používané zkratky mají následující význam:

Ac ag

Aze

Boc (Boc)₂O

Bn

Bu

Cgl

Ch

DCC

DMAP

EDC

Et

EtOH

EtOAc

Ph h

HC1

H-Pab-H

H-Pab-Z

HPLC

K₂CO₃

Me

Men

Pab-OH

Piv(aloyl)

Pr

Prl

RPLC acetyl vodný

S-azetidin-2-karboxylová kyselina terc.-butyloxykarbonyl di-terc.-butyloxykarbonyl benzyl butyl cyklohexylglycin cyklohexyl dicyklohexylkarbodiimid

N,N-dimethylaminopyridin l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid ethyl ethanol ethylacetát fenyl hodiny kyselina chlorovodíková

-am i di no-4-am i nomethy 1 benzen

4-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)benzen vysokovýkonnostní kapalinová chromatografie uhličitan draselný, bezvodý methyl (1 R,2S,5R)-menthyl

4-aminomethylbenzamidoxim (4-aminomethyl-l-(aminohydroxyiminomethyljbenzen)

2,2-dimethylacetyl propyl

N-pyrrolidinyl reverzní fázová vysokovýkonnostní kapalinová chromatografie

-6CZ 298709 B6

TFA trifluoroctová kyselina

THF tetrahydrofuran

Z benzyloxykarbonyl

Prefixy n, s, i a t před chemickými názvy mají o sobě známý význam: normální, iso, sekundární a terciární. V případě NMR spekter označení s, d, t, q a b znamenají singlet, dublet, triplet, kvartet a široký. Stechiometrie pro aminokyseliny je vždy (S), pokud není uvedeno jinak.

Vynález se také týká sloučenin obecného vzorce I, shora definovaných s další podmínkou, že

a) R¹ neznamená-A¹ C(O)OR⁴,

b) R⁴ a R⁵ neznamenají na sobě nezávisle atom vodíku,

c) R⁶ neznamená alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku, jestliže R² znamená skupinu obecného vzorce OC(O)R⁶.

Vynález se také týká sloučenin obecného vzorce I, kde znamená

a) R¹ skupinu-A¹ C(O)OR⁴,

b) R⁴ a R⁵ na sobě nezávisle atom vodíku,

c) R⁶ alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku, jestliže R² znamená skupinu obecného vzorce OC(O)R⁶.

Jestliže R¹ znamená skupinu obecného vzorce -A*C(O)N(R⁴)R⁵, jsou výhodnými sloučeniny kde znamená

A¹ alkylenovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku,

R⁴ atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

R⁵ alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo

R⁴ a R⁵ pyrrolidinylovou skupinu.

Jestliže R¹ znamená skupinu obecného vzorce -A’C(O)OR⁴, jsou výhodnými sloučeniny kde znamená

A¹ alkylenovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku,

R⁴ alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.

Jestliže R¹ znamená skupinu R³, jsou výhodnými ty sloučeniny podle vynálezu, kde v obecném vzorci I znamená R³ atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, která má lineární řetězec nebo, pokud má dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec, nebo je cyklická nebo parciálně cyklická, nebo znamená alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu, která je popřípadě substituovaná a má lineární řetězec nebo, pokud má dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec.

Výhodnými jsou sloučeniny podle vynálezu, kde v obecném vzorci I znamená R² hydroxylovou skupinu, skupinu OC(O)R⁶ (přičemž v takovém případě znamená R⁶ popřípadě substituovanou fenylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku, která má lineární řetězec nebo, pokud má dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec, neboje cyklická nebo parci50 álně cyklická a/nebo nasycená nebo nenasycená), nebo R² znamená skupinu OC(O)R⁷ (přičemž v takovém případě znamená R⁷ popřípadě substituovanou fenylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 12 atomy uhlíku, která je popřípadě substituovaná, má lineární řetězec nebo, pokud má dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec, nebo je cyklická nebo parciálně

-7CZ 298709 B6 cyklická a/nebo nasycená nebo nenasycená), nebo R² znamená skupinu alkylfenylovou s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu, která je popřípadě substituovaná a má lineární řetězec nebo, pokud má dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec, nebo R² znamená skupinu C(O)OCH(R⁸)OC(O)R⁹ (přičemž v takovém případě znamená R⁸ atom vodíku nebo methylovou skupinu, R⁹ fenylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, kteráje popřípadě substituovaná, má lineární řetězec nebo, pokud má dostatečný počet atomů uhlíku, rozvětvený řetězec, neboje cyklická nebo parciálně cyklická.

Ještě výhodnějšími jsou sloučeniny podle vynálezu, kde v obecném vzorci I znamená

R¹ atom vodíku, lineární alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, rozvětvenou alkylovou skupinu se 3 až 10 atomy uhlíku, parciálně cyklickou alkylovou skupinu se 4 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 4 až 10 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou lineární alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu, popří15 pádě substituovanou alkylfenylovou skupinu se 3 atomy uhlíku v rozvětveném alkylovém podílu, nebo znamená skupinu obecného vzorce -A’C(O)N(R⁴)R⁵, kde znamená A¹ alkylenovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, R⁴ atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a R⁵ alkylovou skupinu s 2 až 6 atomy uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu se 5 až 6 atomy uhlíku nebo R⁴ a R⁵ spolu dohromady pyrrolidinylovou skupinu nebo R¹ znamená skupinu obecného vzorce -A’C(O)OR⁴, kde znamená A¹ alkylenovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku a R⁴ alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R² znamená hydroxylovou skupinu, skupinu OC(O)R⁶ (přičemž v takovém případě zna25 mená R⁶ popřípadě substituovanou fenylovou skupinu nebo lineární alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, rozvětvenou alkylovou skupinu se 3 až 4 atomy uhlíku nebo cisoleylovou skupinu) nebo R² znamená skupinu OC(O)R⁷ (přičemž v takovém případě znamená R⁷ popřípadě substituovanou a/nebo popřípadě nenasycenou lineární alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, nebo popřípadě substituovanou a/nebo popřípadě nenasycenou rozvětvenou alkylovou skupinu s 3 až 4 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou fenylovou skupinu nebo popřípadě substituovanou alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v lineárním alkylovém podílu, nebo popřípadě substituovanou alkylfenylovou s 3 atomy uhlíku v rozvětveném alkylovém podílu), nebo R² znamená skupinu C(O)OCH(R⁸)OC(O)R⁹ (přičemž v takovém případě znamená R⁸ atom vodíku nebo methylovou skupinu, R⁹ fenylovou skupinu nebo cykloalkylovou skupinu s 5 až atomy uhlíku, lineární alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, rozvětvenou alkylovou skupinu s 3 až 6 atomy uhlíku, nebo parciálně cyklickou alkylovou skupinu se 7 až atomy uhlíku).

Obzvláště výhodnými jsou sloučeniny podle vynálezu, kde v obecném vzorci I znamená

R¹ lineární alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku nebo, popřípadě substituovanou alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v lineárním alkylovém podílu, ' · 6

R znamená hydroxylovou skupinu, skupinu OC(O)R (přičemž v takovém případě znamená R⁶ lineární alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo rozvětvenou alkylovou skupinu se 3 atomy uhlíku) nebo R² znamená skupinu OC(O)R⁷ (přičemž v takovém případě znamená R⁷ popřípadě substituovanou lineární alkylovou skupinu s 1 až 4 ato50 my uhlíku, nebo popřípadě substituovanou rozvětvenou alkylovou skupinu s 3 až 4 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v lineárním alkylovém podílu, nebo popřípadě substituovanou alkylfenylovou skupinu s 3 atomy uhlíku v rozvětveném alkylovém podílu), nebo R² znamená skupinu C(O)OCH(R⁸)OC(O)R⁹ (přičemž v takovém případě znamená R⁸ atom vodíku a R⁹

-8CZ 298709 B6 cykloalkylovou skupinu s 5 až 7 atomy uhlíku, lineární alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo parciálně cyklickou alkylovou skupinu se 7 až 8 atomy uhlíku).

Jestliže R¹ znamená R³ a R³ znamená popřípadě substituovanou alkylfenylovou skupinu s 1 až 5 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu, je výhodným substituentem alkylová skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, zvláště methylová skupina.

Jestliže R² znamená skupinu OC(O)R⁷ a R⁷ znamená popřípadě substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 12 atomy uhlíku, jsou výhodnými substituenty atom halogenu, zvláště chloru a alkoio xyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku, zvláště methoxyskupina.

Jestliže R² znamená skupinu OC(O)R⁷ a R⁷ znamená popřípadě substituovanou fenylovou skupinu, jsou výhodnými případnými substituenty alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, zvláště methylová skupina, alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku, zvláště methoxyskupina a atom halo15 genu zvláště chloru.

Jestliže R² znamená skupinu C(O)OR⁷ a R⁷ znamená popřípadě substituovanou alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, je výhodným případným substituentem nitroskupina.

Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou sloučeniny podle příkladu 1 až 68.

Jakožto výhodnější sloučeniny podle vynálezu se uvádějí:

-9CZ 298709 B6

EtOOCCH₂-(J?)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH =CH₂;

nPrOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH=CH₂;

řBuOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH=CH₂;

EtOOCCH_r(/?)Cgl-Aze-PabCOOEt;

EtOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu;

PrlC(O)CH₂CH₂CH₂OOCCH₂-(K)Cgl-Aze-Pab-Z;

ChNHC(O)CH₂OOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab~Z;

(nPr)₂NC(0)CH₂OOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCC(CH₃)₃;

EtOOCCH_r(tf)CgI-Aze-Pab~COOCH₂OOCC(CH₃)₃;

EtOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH₃)OOCCH₃;

MeOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-OOCPh;

MeOOCCH₂-(7?)Cgl-Aze-Pab-OH;

EíOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-OH;

BnOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-PabOH;

nPrOOCCH₂-(K)Cgl-Aze-Pab-Z;

nPrOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-OH;

/PrOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab~OH;

zBuOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-OH;

(nPr)₂NCOCH₂OOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-OH;

ChNHCOCH₂OOCCH₂-(fl)Cgl-Aze-Pab-OH;

EtOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-OAc;

HOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-OH;

HOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-O^-Oleyl;

Cyklooktyl~OOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab~Z;

/BuCH₂OOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-Z;

(2-Me)BnOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-Z;

ChCH₂OOCCH₂-(7?)Cgl-Aze-Pab-Z;

ChOOCCH₂(/?)Cgl-Aze-Pab-Z;

-10CZ 298709 B6

PhC(Me)₂OOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-Z;

(Mc^CHCíMe^OOCCHj-í/OCgl-Azc-Pab-Z;

BnOOCCH₂-</?)CgI-Aze-Pab-COOPh(4-OMe);

ChCH₂OOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4OMe);

(2-Me)BnOOCCH_r(/?)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe);

EtOOCCH₂-(/?)Cgí-Aze-Pab-COOPh(4-Me);

BnOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me);

BnOOCCH₂-(J?)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu;

/PrOOCCH₂-(/?)CgI-Aze-Pab-COOCH₂CH-CH₂;

EtOOCCH₂-(J?)Cgl-Aze-Pab-COO-íBu;

BnOOCCH₂-(/?)Cgí-Aze-Pab-COO-nPr;

EtOOCCH₂-(^)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCCh;

EtOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-CQOCH₂OOCCH₂Ch;

EtOOCCH₂-(/?)CgI-Aze-Pab-COOCH(Me)OOCPh;

EtOOCCH₂-(2?)Cgí~Aze-Pab-COOCH₂OOCPh;

BnOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-COOCH(Me)OAc;

EtOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OAc;

fBuOOCCH₂-(/?)Cgi-Aze-Pab-COOCH₂OAc;

MeOOC-C(=CHEt)CH₂-OOCCH₂-(J?)Cgl-Aze-Pab-Z;

Mcn-OOCCH₂-</?)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe); a

E(OOCCH₂-(7?)CgI-Aze-Pab-COOCH₂CCJ₃.

Obzvláště výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou:

- 11 CZ 298709 B6

EtOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CCl₃;

BnOOCCH₂-(/ř)Cgl-Aze-Pab-COOnBu;

nPrOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-Z;

Cyklooktyl-OOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-Z;

EtOOCCH₂-(/?)CgI-Aze-PabX:OOCH₂OOCCh;

MeOOCCH_r(/?)Cgl-Aze-Pab-OH;

EtOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-OH;

«PrOOCCH₂-(tf)Cgl-Aze-Pab-OH;

íPrOOCCH₂-(/?)CgI-Aze-Pab-OH;

BnOOCCH_r(/?)Cgl-Aze-Pab-OH; and

EtOOCCH₂-(/?)Cgl-Aze-Pab-OAc.

Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I spočívá podle vynálezu v tom, že

a) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde znamená R² hydroxylovou skupinu, se nechává reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce I, kde znamená R² skupinu C(O)OR⁶, kde R⁶ má shora uvedený význam, s alkoxidovou zásadou (například s alkoxidem alkalického kovu), například při teplotě místnosti a v přítomnosti vhodného rozpouštědla (například tetra10 hydrofuranu),

b) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde znamená R² hydroxylovou skupinu, se nechává reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce I, kde znamená R² skupinu C(O)OR⁷, kde R⁷ má shora uvedený význam, s hydroxylaminem nebo s jeho adiční solí s kyselinou, například při teplotě místnosti a v přítomnosti vhodné zásady (například uhličitanu draselného nebo triethylaminu) a v přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (například tetrahydrofuranu nebo ethanolu),

c) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I se nechává reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce II

H-(R)Cgl-Aze-Pab-R² (II) kde R² má shora uvedený význam, se sloučeninou obecného vzorce III

R^OjC-CIh-L¹ (III) kde R¹ má shora uvedený význam a L¹ znamená uvolňovanou skupinu, například skupinu halogenidovou jako bromidovou nebo skupinu alkylsulfonátovou například trifluormethylsulfonátovou, například při teplotě místnosti nebo zvýšené (například 40 °C) v přítomnosti vhodné zásady (například uhličitanu draselného) a ve vhodném organickém rozpouštědle (například v tetrahydrofuranu, v dimethylformamidu nebo v acetonitrilu),

d) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde R¹ znamená atom vodíku a R² hydroxylovou skupinu, nebo skupinu C(O)OR⁷, kde R⁷ má shora uvedený význam, se nechává reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce I, kde znamená R¹ alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu a R² hydro35 xylovou skupinu, nebo skupinu C(O)OR⁷, se vhodnou zásadou (například s alkoxidem

- 12CZ 298709 B6 alkalického kovu nebo s hydroxidem alkalického kovu) například při teplotě místnosti a v přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (například vody nebo methanolu),

e) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde R² znamená skupinu OC(O)R⁶, kde R⁶ má shora uvedený význam, se nechává reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce I, kde znamená R² hydroxylovou skupinu, se sloučeninou obecného vzorce IV

R⁶C(O)-O-C(O)R⁶ (IV) nebo se sloučeninou obecného vzorce V

R⁶C(O)Hal (V) kde znamená Hal vždy atom chloru nebo bromu a R⁶ má shora uvedený význam, například při teplotě místnosti a v přítomnosti vhodné zásady (například triethylaminu, pyridinu nebo

DMAP) a v přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (například methylenchloridu nebo tetrahydrofuranu),

f) pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, kde znamená R¹ atom vodíku a R² skupinu C(O)OR⁶, kde R⁶ má shora uvedený význam, se nechává reagovat odpovídající sloučenina obecného vzorce VI,

P¹O(O)C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-R² (VI) kde znamená P¹ skupinu chránící labilní ester kyseliny, například tBu nebo Bn, a R² skupinu C(O)OR⁶, kde R⁶ má shora uvedený význam, se vhodnou kyselinou (například s trifluor25 octovou kyselinou) například při teplotě místnosti a v přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (například methylenchloridu),

g) pro přípravu sloučenin obecného vzorce 1, kde znamená R¹ skupinu R³, R³ znamená alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu a R² znamená hydroxylovou skupinu nebo skupinu obecného vzorce C(O)OR⁷, kde R⁷ má shora uvedený význam, se nechává reagovat transesterifikační reakcí sloučenina obecného vzorce VII,

R^laO(O)C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-R² (Vil) kde znamená R^la alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu a R² má shora uvedený význam nebo znamená alternativní labilní alkylovou skupinu za o sobě známých podmínek.

Sloučeniny obecného vzorce II se mohou získat odstraněním chránící skupiny ze sloučeniny obecného vzorce VIII

Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-R² (VIII) kde R² má shora uvedený význam za o sobě známých podmínek.

Sloučeniny obecného vzorce VI a VII se mohou připravovat obdobně jako je popsáno pro sloučeniny obecného vzorce I, kde znamená R¹, R³ a R³ znamená alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu.

Sloučeniny obecného vzorce VIII se mohou připravovat reakcí sloučenin obecného vzorce IX

H-Pab-R² (IX)

- 13CZ 298709 B6 kde má R² shora uvedený význam, se sloučeninou Boc-Cgl-Aze-OH, například při teplotě místnosti v přítomnosti vhodného kopulačního systému, například EDC, vhodné zásady například DMAP a vhodného organického rozpouštědla, například dichlormethanu nebo acetonitrilu.

Sloučeniny obecného vzorce VIII, kde znamená R² hydroxylovou skupinu, se mohou připravovat reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce VIII, kde znamená R² skupinu C(O)OR⁷ nebo C(O)OCH(R⁸)OC(O)R⁹, s hydroxylaminem nebo sjeho adiční solí s kyselinou, například při teplotě místnosti v přítomnosti vhodné zásady (například uhličitanu draselného nebo triethylaminu) a vhodného organického rozpouštědla (například tetrahydrofuranu nebo ethanolu).

Sloučeniny obecného vzorce VIII, kde znamená R² skupinu C(O)OR⁷ nebo C(O)OCH(R⁸)OC(O)R⁹, se mohou připravovat reakcí

Boc-(R)Cgl-Aze-Pat^H se sloučeninou obecného vzorce X

L²C(O)OR^2a ( X) kde znamená L² uvolňovanou skupinu (například halogen nebo fenolát) a R^2a skupinu R⁷ nebo

CH(R⁸)OC(O)R⁹ a R⁷, R⁸ a R⁹ mají shora uvedený význam, například při teplotě místnosti nebo při nižší teplotě než teplotě místnosti, v přítomnosti vhodné zásady (například hydroxidu sodného) a vhodného organického rozpouštědla (například tetrahydrofuranu).

Sloučeniny obecného vzorce VIII, kde znamená R² skupinu OC(O)R⁶ se mohou připravovat také reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce VIII, kde znamená R² hydroxylovou skupinu, se sloučeninou obecného vzorce IV nebo V, shora definovanou, například při teplotě místnosti, v přítomnosti vhodné zásady (například triethylaminu, pyridinu nebo DMAP) a vhodného organického rozpouštědla (například methylenchloridu nebo tetrahydrofuranu).

Sloučeniny obecného vzorce VIII, kde znamená R² skupinu OC(O)R⁶ se mohou připravovat také reakcí

Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H se sloučeninou obecného vzorce XI

R⁶C(O)-O-O-C(O)R⁶ (XI) kde R⁶ má shora uvedený význam, například při teplotě místnosti, v přítomnosti vhodného orga40 nického rozpouštědla (například tetrahydrofuranu).

Sloučeniny obecného vzorce VIII, kde znamená R² hydroxylovou skupinu, se mohou připravovat reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce VIII, kde znamená R² skupinu OC(O)R⁶ a R⁶ má shora uvedený význam, se vhodnou zásadou (například s alkoxidem alkalického kovu) například při teplotě místnosti, v přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (například tetrahydrofuranu).

Sloučeniny obecného vzorce IX jsou z literatury dobře známy a mohou se připravovat obdobnými způsoby, jako je shora popsáno. Například sloučeniny obecného vzorce IX, kde znamená

R² skupinu C(O)OR⁷ nebo C(O)OCH(R⁸)OC(O)R⁹ a R⁷, R⁸ a R⁹ mají shora uvedený význam, se mohou připravovat reakcí H-Pab-H nebo jeho chráněného derivátu se sloučeninou obecného vzorce X, shora definovanou, například při teplotě místnosti nebo při nižší teplotě než teplotě místnosti, v přítomnosti vhodné zásady (například hydroxidu sodného) a vhodného organického rozpouštědla (například tetrahydrofuranu).

- 14CZ 298709 B6

Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H se může připravovat reakcí H-Pab-H nebo jeho chráněného derivátu se sloučeninou Boc-Cgl-Aze-OH, například způsobem shora popsaným pro přípravu sloučeniny obecného vzorce VIII.

Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H se může také připravovat odstraněním chránící skupiny ze sloučeniny obecného vzorce XII

Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-P² (XII) kde znamená P² chránící skupinu ortogonální k Boc za podmínek v oboru o sobě dobře známých.

Sloučeniny obecného vzorce III, IV, V, X, XI a XII jsou buď obchodně dostupné, nebo jsou z literatury dobře známy, nebojsou připravitelné o sobě známými způsoby (například jak shora popsáno).

Sloučeniny podle vynálezu se mohou izolovat z reakčních směsí o sobě známými způsoby.

Pro pracovníky v oboru je důležité, že se při shora popsaných způsobech funkční skupiny meziproduktů nemusí chránit chránícími skupinami.

Funkční skupiny, které je žádoucí chránit, jsou skupina hydroxylová, aminoskupina, amidinoskupina a skupina karboxylové kyseliny. Jakožto vhodné chránící skupiny pro hydroxylovou skupinu se uvádějí skupina trialkylsilylová a diarylsilylová (například terc.-butyldimethylsilylová, tercbutyldifenylsilylová nebo trimethylsilylová) a skupina tetrahydropyranylová. Jakožto vhodné chránící skupiny pro skupinu karboxylové kyseliny se uvádějí skupina alkylová s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupina benzylesterová. Jakožto vhodné chránící skupiny pro aminoskupinu a amidinoskupinu se uvádějí skupina terc.-butyloxykarbonylová nebo benzyloxykarbonylová. Dusíky amidinoskupiny mohou mít jednu nebo dvě chránící skupiny.

Chránící skupiny se mohou odstraňovat o sobě známými způsoby, které jsou dále příkladně popsány.

Používání chránících skupin je zevrubně popsáno v publikaci „Protective Groups in Organic Chemistry“, J. W. F. McOmie, Plenům Press, 1973 a „Protective Groups in Organic Synthesis“,

2. vydání, T. W. Greene & P. G. M. Wutz, Wiley-Interscience, 1991.

Sloučeniny podle vynálezu jsou užitečné, protože metabolizují v lidském těle na sloučeniny, které mají farmakologickou účinnost. Proto se označují jako farmaceutka a zvláště jako prodrogy.

Zvláště jakkoliv jsou sloučeniny podle vynálezu jako takové inaktivní na thrombin, metabolizují v těle na mocné inhibitory thrombinu, jak například dokládají následující testy.

Výrazem, že „sloučeniny podle vynálezu jako takové jsou inaktivní na thrombin“ se zde míní, že vykazují hodnotu IC₅₀TT, stanovenou níže popsaným testem A, větší než 1 μΜ.

Očekává se proto, že sloučeniny podle vynálezu budou užitečné za podmínek, kdy je žádoucí inhibice thrombinu.

Sloučeniny podle vynálezu jsou proto indikovány pro terapeutické a/nebo profylaktické ošetření thrombózy a hyperkoagulace v krvi a v tkáních zvířat včetně lidí.

Thromboembolická onemocnění, která se připomínají, zahrnují aktivovanou odolnost proteinu C, jako faktor V-mutace (faktor V Leiden) a mají vlastní nebo získanou deficienci v antithrombinu III, proteinu C, proteinu S, heparinového kofaktoru II. Jiné stavy, o kterých je známo, že jsou spojeny s hyperkoagulační schopností a thromboembolickými nemocemi, zahrnují cirkulující

- 15CZ 298709 B6 antiphospholipidové protilátky (Lupus antikoagulant) homocysteinemii, heparinem navozenou thrombocytopenii a defekty v fíbrinolýze. Sloučeniny podle vynálezu jsou proto vhodné pro terapeutické a/nebo profylaktické ošetřování těchto stavů.

Sloučeniny podle vynálezu jsou dále indikovány pro ošetřování stavů, kdy se projevuje nežádoucí nadbytek thrombinu bez znaků hyperkoagulace, například pro neurodegenerativní nemoce, jako je Alzheimerova nemoc.

Jako zvláštní případy, které přicházejí v úvahu, se uvádějí terapeutické a/nebo profylaktické ošet10 ření thrombózy cév a pulmonámího embolismu, arteriální thrombózy (například infarktu myokardu, nestabilní angíny, mrtvice na bázi thrombózy a periferální arteriální thrombóza) a systemický embolismus zpravidla z atria v průběhu arteriální fibrilace nebo z levé komory po transtěnovém myokardiálním infarktu.

Kromě toho se očekává, že sloučeniny podle vynálezu budou užitečné v profylaxi reokluze (to je thrombózy) po trombolýze, perkutanní trans-luminální angioplastii (PTA) a po operaci k zavedení srdečního bypasu. Prevence rethrombózy po mikrochirurgii a po cévní chirurgii je obecná.

Jakožto další indikace se uvádí terapeutické a/nebo profylaktické ošetření roztroušené intravaskulámí koagulace způsobené bakteriemi, mnohočetným trauma, intoxikací nebo jakýmkoliv jiným mechanismem. Antikoagulační ošetření v případech, kdy krev přichází do styku s cizím povrchem v těle, například s vaskulámím štěpem, vaskulámím stentem, s vaskulámím kathetrem, s mechanickými a s biologickými protézovými ventily nebo s jakýmkoliv jiným lékařským zaří25 zením; a antikoagulační ošetření v případech, kdy krev přichází do styku s mechanickými předměty vně těla, například v průběhu kardiovaskulární chirurgie za použití zařízení pro srdce a plíce a při hemodialýze.

Kromě působení na koagulační proces je známo, že thrombin aktivuje velký počet buněk (napří30 klad neutrofily, fibroblasty, endotheliální buňky a buňky hladkého svalstva). Proto mohou být sloučeniny podle vynálezu užitečné také pro terapeutické a/nebo profylaktické ošetření idiopatického syndromu, distresového respiračního syndromu dospělých, pulmonámí fibrózy po ošetření radiací a chemoterapií, septického šoku, septicemie, zánětlivé odezvy, která zahrnuje bez záměru na jakémkoliv omezení edem, akutní nebo chronickou atherosklerózu například koronární arte35 riální onemocnění, mozkové arteriální onemocnění, periferální arteriální onemocnění, reperfuzní poškození a restenózu po perkutánní trans-luminální angioplastii (PTA).

Sloučeniny podle vynálezu, které inhibují trypsin a/nebo thrombin mohou být také užitečné při ošetřování pankreatitidy.

Vynález se také týká způsobu ošetřování stavů, které vyžadují inhibici thrombinu, přičemž se podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, shora definované nebo její farmaceuticky vhodná sůl, osobám, které takovými stavy trpí nebojsou k nim náchylné.

Sloučeniny podle vynálezu se zpravidla podávají orálně, lícně, rektálně, dermálně, nasálně, tracheálně, bronchiálně, jakýmkoliv parenterálním způsobem nebo inhalačně ve formě farmaceutických prostředků, které obsahují prodrogu jako takovou ve formě zásady nebo ve formě adiční soli s farmaceuticky vhodnou anorganickou nebo organickou kyselinou ve farmaceuticky vhodné dávkovači formě. V závislosti na poruše, ošetřované osobě a cestě podání se prostředky mohou podávat v různých dávkách.

Sloučeniny podle vynálezu se také mohou kombinovat a/nebo společně podávat s jakoukoliv antithrombotickou účinnou látkou s různým mechanismem působení, jako jsou proti destičkám působící acetylsalicylová kyselina, ticlopidin, clopidogrel, thromboxanový receptor a/nebo inhi- 16CZ 298709 B6 bitory synthetázy fibrinogenové receptorové antagonisty, prostacyklinová mimetika a fosfodiesterázové inhibitory a antagonisty ADP receptoru (P₂T).

Sloučeniny podle vynálezu se dále mohou kombinovat a/nebo společně podávat s thrombolytiky, jako jsou například tkáňový plazmigenový aktivátor (přírodní nebo rekombinantní), streptokináza, urokináza, prourokináza, anisolovaný treptokinázový plazminogenový aktivátorový komplex (ASPAC) a zvířecí salivámí žlázové plazminogenové aktivátory při ošetřování thrombotických nemocí a zvláště infarktu myokardu.

Vynález se také týká farmaceutických prostředků obsahujících sloučeninu obecného vzorce I, shora definovanou nebo její farmaceuticky vhodnou sůl ve směsi s farmaceuticky vhodnými pomocnými činidly, ředidly nebo nosiči.

Vhodnými denními dávkami sloučeniny podle vynálezu při terapeutickém ošetřování lidí je při15 bližně 0,001 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti při perorálním podání a 0,001 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti při parenterálním podání.

Sloučeniny podle vynálezu mají přednost v tom, že mají zlepšené farmakodynamické vlastnosti, jak shora uvedeno, jak při orálním tak při parenterálním podání ve srovnání se sloučeninou obec20 ného vzorce

RO(O)C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H kde R^a má shora definovaný význam a zvláště sloučeniny, kde znamená R^a atom vodíku.

Sloučeniny podle vynálezu jsou neaktivní na thrombin, trypsin a na jiné serinové proteázy. Sloučeniny podle vynálezu zůstávají inaktivní v gastrointestinálním traktu a předcházejí možným komplikacím známým při orálním podání antikoagulantů, která jsou jako taková aktivní, jako jsou krvácení a netrávení v důsledku inhibice trypsinu.

Kromě toho místí krvácení, spojené s parenterálním a po parenterálním podání aktivního inhibitoru thrombinu se může předcházet použitím sloučeniny podle vynálezu.

Sloučeniny podle vynálezu jsou také výhodné tím, že jsou účinnější, méně toxické, déle působící se širší aktivitou, vykazují méně vedlejších účinků, jsou ochotněji absorbovány a mají další výhodnější vlastnosti než sloučeniny známé ze stavu techniky.

Biologické testy

Test A

Stanovení doby srážení thrombinu (TT)

Lidský thrombin (T 6769, Sigma Chem Co., konečná koncentrace 1,4 NIH jednotek/ml) v pufro45 vém roztoku, hodnota pH 7,4 100 μΐ, a roztok inhibitoru, 100 μΐ, se inkubují po dobu jedné minuty. Shromážděná normální citrátovaná lidská plazma, 100 μΐ, se pak přidá a měří se doba koagulace v automatickém zařízení (KC 10, Amelung).

Doba koagulace v sekundách se vynese proti koncentraci inhibitoru a IC₅₀ TT se stanoví interpo50 lácí.

IC50TT je koncentrace inhibitoru, která zdvojnásobuje koagulaci thrombinu pro lidskou plazmu.

-17CZ 298709 B6

Test B

Stanovení doby thrombinu v plazmě ex vivo

Inhibice thrombinu po orálním nebo parenterálním podání sloučeniny podle vynálezu se zkouší u krysy při vědomí, která jeden nebo dva dny před zkouškou se vybaví katetherem pro odebírání vzorků krve z krční tepny. Ve dni zkoušky se podá sloučenina, rozpuštěná v systému ethanohSolutol :voda (5:5:90) a odebírají se vzorky krve v určitých intervalech do plastových zkumavek obsahujících 1 díl roztoku citrátu sodného (0,13 mol/1) a 9 dílů krve. Zkumavky se odstředí k získání destiček prosté plazmy. Plazmy se používá ke stanovení doby thrombinu dále popsaným způsobem.

Citrátovaná krysí plazma, 100 μΐ, se zředí roztokem solanky, 0,9%, 100 μΐ, a koagulace plazmy se nastartuje přidáním lidského thrombinu (T 6769, Sigma Chem Co., Sp. st.a.) v pufrovém roz15 toku, hodnota pH 7,4, 100 μΐ. Měří se doba koagulace v automatickém zařízení (KC 10, Amelung, Německo).

Koncentrace aktivního inhibitoru thrombinu HO(O)C-CH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H (mezinárodní zveřejněná přihláška vynálezu číslo WO 94/29336) v krysí plazmě se stanovuje použitím stan20 dardní křivky vztahu doby ve shromážděné citrátové krysí plazmě ke známé koncentraci shora uvedeného aktivního thrombinového inhibitoru rozpuštěného v solance.

Na základě stanovené plazmové koncentrace inhibitoru aktivního thrombinu HO(O)CCH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H (za předpokladu, že prodloužení doby koagulace je způsobeno shora uvedenou sloučeninou) v případě krysy, plocha pod křivkou po orálním a/nebo parenterálním podání prodrogy se vypočte (AUCpd) za použití trapezoidálního pravidla a extrapolačních hodnot do nekonečna.

Biologická dostupnost aktivního thrombinového inhibitoru HO(O)C-CH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H po orálním a/nebo parenterálním podání se vypočte podle vzorce:

[(AUCpd/dávka)/(AUCaktivní, iv/dávka] x 100 kde AUCaktivní, iv znamená AUC, získanou po intravenózním podání HO(O)C-CH₂(R)Cgl35 Aze-Pab-H bdělé kryse, jak shora popsáno.

TestC

Stanovení doby thrombinu v moči ex vivo

Množství aktivního thrombinového inhibitoru HO(O)C-CH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H, které se vylučuje močí po orálním a/nebo parenterálním podání sloučeniny podle vynálezu rozpuštěné v systému ethanol:Solutol™:voda (5:5:90) se určuje stanovením doby thrombinu v moči ex vivo (za předpokladu, že prodloužení doby koagulace je způsobeno shora uvedenou sloučeninou).

Bdělé krysy se umístí do metabolických klecí, umožňujících oddělené shromažďování moče a výkalů po 24 hodin po orálním podání sloučeniny podle vynálezu. Thrombinová doba se stanovuje ve shromážděné moči dále popsaným způsobem.

Shromážděná normální citrátovaná lidská plazma, 100 μΐ, se inkubuje s koncentrovanou krysí močí nebo s jejím solankovým roztokem po dobu jedné minuty. Koagulace plazmy se iniciuje podáním lidského thrombinu (T 6769, Sigma Chem Co) v pufrovém roztoku, hodnota pH 7,4, 100 μΐ. Měří se doba koagulace v automatickém zařízení (KC 10, Amelung).

-18CZ 298709 B6

Koncentrace aktivního inhibitoru thrombinu HO(O)C-CH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H v krysí moči se stanovuje použitím standardní křivky vztahu doby ve shromážděné normální citrátové lidské plazmě ke známé koncentraci shora uvedeného aktivního thrombinového inhibitoru rozpuštěného v koncentrované krysí moči (nebo v jejím solankovém roztoku). Násobením celkové produkce krysí moče v průběhu 24 hodin zjištěnou střední koncentrací shora uvedeného aktivního inhibitoru, vyloučeného v moči, se může vypočítat množství vyloučeného aktivního inhibitoru (AMOUNTpd).

Biologická dostupnost aktivního inhibitoru thrombinu HO(O)C-CH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H po ío orálním a/nebo parenterálním podání prodrogy se vypočte podle následujícího vzorce:

[(AMOUNTpd/dávka)/(AMOUNTaktivní, iv/dávka] x 100 kde AMOUNTaktivní, iv znamená množství vyloučené mocí po intravenózním podání HO(O)C15 CH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H bdělé kryse, jak shora popsáno.

Test D

Stanovení HO(O)C-CH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H v moči způsobem LC-MS

Množství aktivního thrombinového inhibitoru HO(O)C-CH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H, které se vylučuje močí po orálním a/nebo parenterálním podání sloučeniny podle vynálezu, rozpuštěné v systému ethanol:Solutol™:voda (5:5:90) se určuje níže popsanou analýzou LC-MS.

Studie na zvířeti se provádí stejně jako je popsáno při testu C. Vzorky moče se shromáždí a zmrazí při teplotě -20 °C před analýzou.

Ve vzorcích moče se stanovuje obsah HO(O)C-CH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H tímto způsobem:

Roztálé vzorky moče se promísí a popřípadě se převedou do odstředivky. Pevná fáze v extrakční zkumavce (Analytichem Bond Elut. No. 1210-2059) se aktivuje 1,0 ml methanolu a kondicionuje se 1,0 ml systému acetonitrihvoda (50:50) a přidá se 1 ml 0,1% kyseliny mravenčí. Přidá se 50 μΐ pracovního vnitřního standardu (20 pmol/l) do každé extrakční zkumavky. Pro močové standardy se přidá 50 μΐ standardního roztoku. Do každé zkumavky se vnese 200 μΐ vzorku nebo pro močového standardy slepá moč a protlačí se působením gravitace nebo mírného vakua. Zbylá moč se promyje 1,0 ml octanu amonného (2 mmol/1) před eluováním 1,0 ml systému acetonitrikoctan amonný (2 mmol/1) (35:65). Shromážděný eluát se převede do autovzorkovací fioly. Vstřikuje se 30 μΐ extraktu na LC sloupec (Hypersil BDS-C18; 3 pm; 75 mm x 4,0 mm vnitřní průměr; Hewlett-Packard No. 7992603354), jako elučního činidla se používá amoniumacetáto40 vého pufru (1,3 mmol/1) se 40 % acetonitrilu a 0,1 % kyseliny mravenčí při 0,75 ml/min. Výtok se rozdělí tak, že 30 μΐ/min se zavádí do iontového zdroje elektronů v hmotovém spektrometru P-E Sciex AP1-3. HO(O)C-CH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H a HO(O)C-CH₂(R)Cgl-Pro-Pab-H (vnitřní standard) mají obě retenční doby blízké 1,5 minut. Jejich molekulární ionty ((M+H)⁺) se monitorují při m/z 430,2 a 444,2 při jednotkovém hmotovém rozlišení. Močové standardy o dvou kon45 centracích, jeden při mezi kvantifikace, se použijí pro cejchování na základě poměru píkové plochy HO(O)C-CH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H se zřetelem k vnitřnímu standardu. Posuzuje se linearita metody v oboru 0,050 až 20 pmol/l. Koeficient variace je 1 až 2 % při 1 až 20 pmol/l a 7 % při 0,5 pmol/l. Mez kvantifikace je 0,050 pmol/l.

Násobením celkové produkce krysí moče v průběhu 24 hodin naměřenou koncentrací HO(O)CCH₂(R)Cgl-Aze-Pab-H v moči se může vypočítat množství vyloučeného aktivního inhibitoru (AMOUNTpd). Biologická dostupnost aktivního inhibitoru thrombinu HO(O)C-CH₂(R)CglAze-Pab-H se vypočte způsobem podle testu C.

-19CZ 298709 B6

Vynález blíže objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení, přičemž jsou díly a procenta míněny hmotnostně, pokud není uvedeno jinak a jednotlivé zkratky a symboly mají shora uvedený význam.

Všeobecné experimentální postupy

Hmotová spektra se zaznamenávají na trojitém čtyřpólovém hmotovém spektrometru Finnigan MAT TSQ 700 opatřeném elektrospray interface.

ío Měření ^!H NMR a ¹³C NMR se provádějí na spektrometrech BRUKER ACP 300 a Varian UNITYS plus 400 a 500, pracujících na frekvencích 'H 300,13, 399,96 a 499,82 MHz a ¹³C na frekvencích 75,46, 100,58 a 125,69 MHz. Chemické posuny jsou vyjádřeny v jednotkách delta.

Příprava výchozích materiálů

Způsoby popsanými v mezinárodní přihlášce vynálezu WO 94/29336 se připraví Boc-(R)CglAze-Pab-H, Boc-(R)Cgl-Aze-Pab x HCI, H-(R)Aze-Pab-Z, H-(R)Aze-Pab-Z x HCI, BnOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-Z, Boc-(R)Cgl-Aze-OH a Pab-Z x HCI.

Příklad 1

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH = CH₂ (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH = CH₂

Do roztoku Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (6,1 g, 13 mmol) v THF (125 ml) a 2M NaOH (70 ml, 140 mmol) při teplotě 0 °C se přikape allylchlorformát (1,7 g, 14 mmol). Po 1-hodinovém míchání při teplotě 0 °C se reakční směs zkoncentruje, přidá se voda (100 ml) a výsledná vodná fáze se extrahuje methylenchloridem (3x100 ml). Spojené organické fáze se zkoncentrují a získá se 6,4 g surového produktu, který se čistí bleskovou chromatografií s elučním systémem EtOAc:THF:Et₃N (68:29:3). Zkoncentrováním se získá 5,8 g (81 % teorie) sloučeniny Boc(R)Cgl-Aze-Pah-COOCH₂CH = CH₂ v podobě bílé pevné látky.

Ή NMR (500 MHz, CDCÍ₃): δ 8,19 (bt, 1H), 7,78 (d, 2H), 7,26 (d, 2H), 6,02 -5,92 (m, 1H), 5,32 (d, J=17 Hz, 1H), 5,18 (d, J=10 Hz, 1H), 5,06 (d, J=7 Hz, 1H), 4,82 (bs, 1H), 4,61 (d, J=6 Hz, 2H), 4,58-4,48 (m, 1H), 4,38-4,27 (m, 2H), 4,144,03 (m, 1H), 3,77-3,68 (m, 1H), 2.60-0.90 (m, 24H).

^{1 1 13}C NMR (125 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 172,70, 170,74, 168,02, 164,54, 155,98.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH = CH₂ x 2 TFA

Do roztoku Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH = CH₂ (2,03 g, 3,65 mmol ze stupně (i)) v methylenchloridu (15 ml) při teplotě 0 °C se přidá TFA (15 ml). Reakční směs se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti. Zkoncentrováním se získá 2,8 g sloučeniny H-(R)Cgl-Aze-Pab45 COOCH₂CH = CH₂ x 2 TFA v podobě bílé pevné látky.

-20CZ 298709 B6

Ή NMR (500 MHz, MeOH <d4)): δ 7,80 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 6,02 (m, 1H), 5,45 (d, J = 17 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 10 Hz, IH), 5,91-4,80 (m, 3H), 4,56 (s, 2H), 4,38 (bq, J=8 Hz, 1H), 3,71 (d, J=7 Hz, 1H), 2,76-2,60 (m, IH), 2,35-2,20 (m, 1H), 1,9-1,0 (m, 11H).

(iii) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH = CH₂

Směs H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH = CH₂ x 2 TFA (649 mg, 0,95 mmol ze stupně (ii)), uhličitan draselný (656 mg, 4,8 mmol), voda (0,1 ml) a THF (10 ml) se míchá 2 hodiny při teplotě 40 °C s následným přidáním ethylbromacetátu (190 mg, 1,14 mmol) v THF (1 ml). Po míchání 4 hodiny při teplotě 40 °C a 14 hodin při teplotě místnosti se reakční směs zfiltruje, zkoncentruje a vyčistí bleskovou chromatografií s elučním systémem EtOAc: THF :Et₃N (68:29:3), čímž se získá 244 mg (47 % teorie) sloučeniny EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂CH = CH₂ v podobě bílé pevné látky.

(m, 2H), 2,0-1,0 (m 17H).

¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 175,33, 172,24, 170,72,

168,19, 164,35.

Příklad 2 nPrOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOOCH₂CH = CH₂

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂CH = CH₂ x 2 TFA (503 mg, 0,704 mmol; příklad 1 (ii)) a z n-propylbromacetátu (160 mg, 0,88 mmol), v množství 277 mg (68 % teorie) v podobě bílé pevné látky.

(qd, 2H), 0,90 (t, 3H).

¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 175,4, 172,3, 170,7, 167,9,

164,5.

-21 CZ 298709 B6

Příklad 3 tBuOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH = CH₂

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂CH = CH₂ x 2 TFA (285 mg, 0,42 mmol; příklad 1 (ii)) a z t-butylbromacetátu (96 mg, 0,50 mmol), v množství 93 mg (39 % teorie) v podobě bílé pevné látky.

Ή NMR (500 MHz, CDC1₃): S 8,50 (bt, 1H), 7,81 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,07-5,97 (m, 1H), 5,36(d, J=16Hz, 1H), 5,22(d, J=10Hz, 1H), 4,93 (dd, J=9 a . 6 Hz, 1H), 4,76 (d, J=6 Hz, 2H), 4,57-4,46 (m, 2H), 4,18-4,04 (m, 2H), 3,19-3,08 (AB-speJttrum, =20 Hz, 2H), 2,86 (d, J=8 Hz, 1H), 2,72-2,53 (m, 2H), 2,0-0,9 (m, 23H).

¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 175,28, 171,53, 170,76, 167,81, 164,1.

Příklad 4

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt 20 (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (i) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (600 mg, 1,3 mmol) a z ethylchlorformátu (150 mg, 1,4 mmol), v množství 240 mg (34 % teorie) v podobě bílé látky.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 9,37 (bs, 1H), 8,16 (bs, 1H), 7,72 (d, 2H), 7,18 (d, 2H), 5,17 (d, 1H), 4,73 (t, 1H), 4,47 (dd, 1H), 4,27 (m, 2H), 4,06 (q, 2H), 3,66 (t, 1H), 2,48 (m, 1H), 2,37 (m, 1H), 1,4-1,8 (m, 7H), 1,22 (s, 9H), 1,3-0,8 (m, 7H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 172,6, 170,7, 167,9, 164,8, 156,0.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt x 2 HC1

Do roztoku Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt (240 mg, 0,44 mmol ze stupně (i)) v EtOAc (20 ml) se zavádí 5 minut chlorovodík při teplotě 0 °C. Reakční směs se míchá 1 hodinu při teplotě 0 °C, čímž se získá 225 mg (100 % teorie) produktu v podobě bílé látky.

-22CZ 298709 B6

Ή-NMR (300 MHz, D₂O): 5 7,85 (d, 2H), 7,61 (d, 2H), 4,98 (dd, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,44 (p, 5H), 3,90 (d, 1H), 2,73 (m, 1H), 2,37 (m, 1H), 2,0-1,65 (m, 9H), 1,39 (t, 3H), 1,44,1 (m, 7H), 0^8 (m, 1H).

¹³C NMR (75 MHz, D₂O) karbonylové a amidinové signály: delta 172,7, 169,4, 166,8, 154,3.

(iii) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt x 2 HC1 (160 mg, 0,31 mmol, ze stupně (ii)) a z ethybromacetátu (52,5 mg, 0,31 mmol. Výtěžek je 100 mg (61 % teorie) v podobě světle žlutého prášku.

o ‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): 6 8,48 ( bt, 1H), 7,81 (d, 2H), 7,38 (d, 2H), 4,51 (AB . část ABX-_ÍSpektra_z 2H), 4,21 (q, 2H), 4_f15-4./>5 (m, 4H), 3,21 (AB-spetemm, 2H), 2,86 (d, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,53 (m, 1H), 1,96 (bd, 2H), 1,90-1,70 (m, 12H), 1,35 (t, 3H), 1,22 (t, 6H), 1,300.95 (m, 2H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 175,5, 172,2, 170,7, 167,6,

164,9.

Příklad 5

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (i) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (6,0 g, 13 mmol) a n-propylchlorformátu (1,57 ml, 14 mmol). Výtěžek je 5,4 g (76 % teorie).

‘H-NMR (400 MHz, CDC1₃): 6 8,25 (bt, 1H), 7,82 (d, 2H), 7,31 (d, 2H), 5,09 (bd, 1H), 4,87 (dd, 1H), 4,58 (dd, 1H), 4,39 (dd, 2H), 4,14 (q, 1H), 4,10 (t, 2H), 3,79 (t, 1H), 2,54 (dm, 2H), 2,21 (s, 1H), 1,87-1,55 (m, 8H), 1,33 (s, 9H), 1,45-1,0 (m, 4H), 0,99 (t, 3H).

¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 172,7, 170,6, 167,8, 165,0,

155,9.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr x 2 TFA

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (ii) za použití 2,1 g (3,7 mmol) Boc(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr (ze stupně (1 i)) ve výtěžku 3,7 g.

-23CZ 298709 B6 ’Η-NMR (400 MHz, MeOH-d₄): δ 7,77 (d, 2H), 7,60 (d, 1H), 4,86 (dd, 1H), 4,56 (AB ěáat ABX-spectrum, 2H), 4,33 (m, 4H), 3,72 (d, 1H), 3,30 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 1,9-1,7 (m, 9H), 1,41.1 (m, 6H), 1,02 (t, 3H).

¹³C NMR (100 MHz, MeOH-cU) karbonylové a amidinové signály: delta 172,7, 169,3, 168,0, 161,4.

(iii) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂CH = CH₂ x 2 TFA (472 g, 0,69 mmol ze stupně (ii)) a z ethylbromacetátu (138 mg, ío 0,83 mmol), v množství 0,22 mg (58 % teorie) v podobě bílé pevné látky.

Ή-NMR (400 MHz, CDCl₃): ó 8,46 (bt, IH), 7,82 (d, 2H), 7,32 (d, 2H),

4,92 (dd, 1H), 4,49 (AB _eásL ABX-spectrum, 2H), 4,10 (m, 6H), 3_ř23 (AB-spektrum, 2H), 2,80 (dm, 2H), 1,98 (bd, 2H),1_;74 (q, 2H), 1,63 (dd, 2H), 1,52 (m, 1), 1,21 (t, 3H), 1,20-1,10 (m, 2H), 0,98 (t, 3H).

¹³C NMR (100 MHz, CDCI3) karbonylové a amidinové signály: delta 175,3, 172,2, 170,7, 167,6, 15 164,8.

Příklad 6

MeOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂CH = CH₂ x 2 TFA (365 g, 0,53 mmol; příklad 5 (ii)) a z methylbromacetátu (98 mg, 0,64 mmol), v množství 114 mg (41 % teorie) v podobě bílé pevné látky.

‘H-NMR (500 MHz, CDCi₃): δ 8,44 (bt, 1H), 7,82 (d, 2H), 7,32 ( (d, 2H), 7,04 (b , 1H), 4,92 (dd, 1H), 4,49 (AB část ABX spektra), 4,12 (m, 2H), 4,10 (t, 2H), 3,63 (s, 3H), 3/4 (s, 2H), 2,87 (d, 1H), 2_?65 (m, 1H), 2,52 (m, ΪΗ), 2,01 (b , 1H), 1.96 (bd, 2H), 1,75 (q, 4H), 1,63 (bdd, 1H), 1,53 (m, 1H), 1,3-1,1 (m, 5H), 0,99 (t, 3H).

¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 175,3, 172,2, 170,7, 167,6, 165,0.

-24CZ 298709 B6

Příklad 7

Et-OOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pah-COOCH₂CH₂OMe (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH₂OMe

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (iii) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (6,0 g, 13 mmol) a z 2-methoxyethylchlorformátu (1,94 mg, 14 mmol) v množství 3,9 g (52 % teorie).

‘H-NMR (400 MHz, CDCI,): i 8,24 (bt, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,31 (d, 2H),

5,08 (bd, 1H), 4,87 (dd, 1H), 4,58 (dd, 1H), 4,39 (dd, 2H), 4,30 (t, 2H),

4,15 (m, 1H), 3,79 (bt, 1H), 3,68 (t, 2H), 3,40 (s, 3H), 2,65-2,45 (m,

2H), 2,20 (b. ., 1H), 1,9-1,55 (m, 6H), 1,34 (s, 9H), 1,3-0,95 (m, 6H).

¹³C NMR (100 MHz, CDCI3) karbonylové a amidinové signály: delta 172,7, 170,7, 167,8, 164,6,

155,9.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH₂OMe x 2 TFA

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (ii) z 1,71 g, Boc-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂CH₂OMe (ze stupně (i) v množství 1,89 g (88 % teorie).

Ή-NMR (400 MHz, MeOH-d4); δ 7,77 (d, 2H), 7,59 (d, 2H), 4,85 (dd, 1H), 4,56 (d, 2H), 4_f49 (m, 2H), 4,37 (tn, 1H), 4,28 (n, 1H), 3,70 (m, 3H), 3,37 (s, 3H), 2,68 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 1,9-1,7 (m, 7H), 1,4-1,1 (m, 6H).

¹³C NMR (100 MHz, MeOH-d4) karbonylové a amidinové signály: delta 172,7, 169,3, 168,0, 154,6.

(iii) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CH₂OMe

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂CH= CH₂x 2 TFA (487 mg, 0,69 mmol (ii)) a z ethylbromacetátu (138 mg,

0,83 mmol) za získání surového produktu, který se vyčistí bleskovou chromatografií za použití systému THF:methylenchlorid (3:1) jako elučního činidla. Výtěžek 0,13 mg (34 % teorie) v podobě bílé pevné látky.

‘H-NMR (400 MHz, CDC1₃): δ 8,44 (t, IH), 7,83 (d, 2H), 7,31 (d, 2H),

4,92 (dd, 1H), 4,49 (AB _óást ABX spektra 2H), 4,30 (t, 2H), 4,13 (m, 2H), 3,68 (t, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,39 (s, 3H), 3,25 (s, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,62 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 1,96 (bd, 1H), 1,8-1,5 (m, 6H), 1,3-1,1 (m, 5H), 1,00 (q, 2H).

-25CZ 298709 B6 ¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 175,3, 172,2, 170,7, 167,8, 164,6.

Příklad 8

MeOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2CH2OMe

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂CH = CH₂ x 2 TFA (4902 mg, 0,7 mmol; příklad 7(ii)) a z methylbromacetátu (128 mg, 0,84 mmol), čímž se získá surový produkt, který se čistí bleskovou chromatografií za použití systému THF:methylenchlorid (3:1) jako elučního činidla. Výtěžek je 155 mg (41 % teorie) v podobě bílé pevné látky.

‘H-NMR (400 MHz, CDC1₃): δ 8,44 (t, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,31 (d, 2H),

4,92 (dd, 1H), 4,49 (AB _část ABX spektra 2H), 4,30 (t, 2H), 4,13 (m, 2H), 3,68 (t, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,39 (s, 3H), 3,25 (s, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,62 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 1,96 (bd, 1H), 1,8-1,5 (m, 6H), 1,3-1,1 (tn, 5H), 1,00 (q, 2H).

^!3C NMR (100 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 175,2, 172,6, 170,7, 167,8, 164,5.

Příklad 9

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 1 (i) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,0 g, 2,1 mmol) a z n-butylchlorformátu (0,32 g, 2,4 mmol). Po 1,5-hodinovém míchání při teplotě místnosti se reakční směs zkoncentruje a extrahuje se třemi dávkami methylenchloridu. Spojená organická fáze se promyje vodou, vysuší síranem sodným a zkoncentruje se, čímž se získá 1,0 g (83 % teorie) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu v podobě bílé pevné látky.

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 9,81-9,31 (bs, 1H), 8,36-8,20 (m, 1H), 7_}35 (d, 2H), 7,84 (d, 2H), 6,78-6,43 (bs, 1H), 5,05-4,82 (ra, 2H), 4,694,15 (m, 3H), 4,15-4,08 (m, 3H), 3,86-3,70 (m, 1H), 2,68-2,42 (m, 2H), 1,92-0,88 (m, 25H).

¹³C NMR (125 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 172,5, 170,7, 167,9, 164,9, 156,0.

FAB-MS: (m+l)=572 (m/z) (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu x 2 HCI

-26CZ 298709 B6

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu 4(ii) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOnBu (2,5 g, 4,4 mmol; ze stupně (ii)) v množství 2,4 g (100 % teorie) v podobě bílé pevné látky.

‘H-NMR (300 MHz, MeOH-d4): δ 7,78-7,60 (m, 2H), 4,66 -4,49 (m, 2H), 0,98 (t, 2H), 4,49-4.35 (tn, 3H), 4,35-4,22 (m, IH), 3,75 (d, 1H), 1,92-1,67 (m, 8H), 1,56-1,07 (tn, 8H).

Signál jednoho z protonů je částečně překryt signálem CD₃OH.

¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 172,7, 169,3, 167,9, 154,7. MS: (m+1)=472 (m/z) (iii) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu l(ii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOnBu x 2 HC1 (400 mg, 0,74 mmol) a z ethylbromacetátu (147 mg, 0,88 mmol). Produkt se čistí bleskovou chromatografií za použití gradientu EtOH 0,1 = > 12,8 % jako elučního činidla, čímž se získá 290 mg (70 % teorie) v podobě bílé pevné látky.

Ή-NMR (300MHz, CDC1₃): δ 9,70-9,36 (bs, 1H), 8,47 (t, 1H), 7,81 (d, 2H), 7,32 (d, 2H), 7,07-6,73 (bs, 1H), 4,97-4,87 (dd, 1H), 4_;62-4_?35 (m, 2H), 4,20-3,98 (m, 6H), 3,27-3,12 (m, 2H), 2,84 (s, IH), 2,70-2,40 (m, 2H), 2,03-0,85 (m, 22H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 175,3, 172,3, 170,8, 167,9,

165,0.

FAB-MS: (m+1)=55 8 (m/z)

Příklad 10

PrlC(O)CH₂CH₂CH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) PrlC(O)CH₂CH₂CH₂OH

Směs gama-butyrolaktonu (4,0 g, 46,5 mmol) a pyrrolidinu (6,6 g, 92,8 mmol) se míchá 2,5 hodiny při teplotě místnosti. Produkt se zkoncentruje ve vakuu, čímž se získá 14,5 g (100 % teorie) produktu v podobě žlutého oleje.

'fl NMR (300 MHz, MeOH-d4)): delta 3,58 (t, 2H), 3,50 (t, 2H), 3,40 (t, 2H), 2,42 (t, 2H), 2,06I, 75 (m, 6H) (ii) PrlC(O)CH₂CH₂CH₂OOCCH₂Br

Do směsi PrlC(O)CH₂CH₂CH₂OH (7,2 g, 45,8 mmol ze stupně (i)) a DMAP (5,6 g, 45,8 mmol) v methylenchloridu se při teplotě 0 °C přikape bromacetylbromid (4,0 ml, 45,8 mmol). Po 1,5— hodinovém míchání při teplotě místnosti se přidá další dávka bromacetylbromidu (1,0 ml,

II, 4 mmol) a DMAP (1,4 g, 11,4 mmol) a reakční směs se udržuje na teplotě zpětného toku po dobu 1,5 hodiny. Přidá se voda a methylenchlorid se třikrát extrahuje. Organická fáze se vysuší

-27CZ 298709 B6 síranem sodným a po zkoncentrování se získá 10,3 g (81 % teorie) produktu v podobě žlutého oleje.

Ή-NMR (400 MHz, CDC1₃): δ 4,15 (t, 2H), 3,75 (s, 2H), 3,40-3,31 (m, 4H), 2,30 (t, 2H), 1,98-1,83 (m, 4H), 1,81 -1,73 (m, 2H) (iii) PrlC(O)CH₂CH₂CH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu l(ii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (6 g, 10,4 mmol) a PrlC(O)CH₂CH₂CH₂OOCCH₂Br (3,5 g, 12,4 mmol ze stupně (ii)). Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií se systémem heptan-EtOAc.izopropanol (1:2:2) jako elučním činidlem, čímž se získá 4,2 g produktu, který se dále čistí preparativní RPLC se systémem 44 % acetonitrilu v 0,1 M NH4OAC jako elučním činidlem, čímž se získá 2,64 g (36 % teorie) produktu v podobě bílé pevné látky.

'H-NMR (500 MHz, CDCI₃): δ 9,80- 9,22 (b s, 1H), 8,36 (t, 1H), 7,96 -7,58 (m, 3H), 7,45 (d, 2H), 7,37 -7,22 (m, 5H), 5,20 (s, 2H), 4,95 4,88 (dd, 1H), 4,72 -4,29 (m, 2H), 4,15 -4,04 (m, 2H), 4,04 -3,88 (m, 2H), 3,40 (t, 2H), 3,34 (t, 2H), 3,28 -3,17 (m, 2H), 2,85 (d, 1H), 2,67 -2,48 (m, 1H), 2,23 (t, 2H), 2,14 -0,93 (m, 18H).

¹³C NMR (125 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 175,3, 172,4, 170,9, 170,4, 168,2, 164,6.

FAB-MS: (m+l)=703 (m/z).

Příklad 11

ChNHC(O)CH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z) (i) ChNHC(O)CH₂OH

Při teplotě 100 °C se 2,5-hodiny míchá směs cyklohexylaminu (9,9 g, 99,8 mmol) a 2,5-dioxo1,4-dioxanu (3,0 g, 25,9 mmol). Produkt se zkoncentruje, čímž se získá 8,1 g (100 % teorie) pro30 duktu v podobě hnědého oleje.

'H-NMR (500 MHz, MeOH-d4): delta 3,92 (s, 2H), 3,75 - 3,65 (m, 1H), 1,90 - 1,58 (m, 5H),

I, 43 - 1,07 (m, 5H). Signál dvou protonů je překryt signálem CD₃OH.

¹³C NMR (125 MHz, MeOH-d4) karbonylové a amidinové signály: delta 174,0, 62,5, 33,7, 26,5,

26,1, 26,0. Signál jednoho z atomů uhlíku je překryt signálem CD₃OD.

(ii) ChNHC(O)CH₂OOCCH₂Br

Do směsi ChNHC(O)CH₂OH (8,0 g, 50,9 mmol ze stupně (i)) a DMAP (6,2 g, 50,9 mmol) v methylenchloridu (80 ml) se při teplotě 0 °C přikape bromacetylbromid (4,0 ml, 45,8 mmol). Po 1,5-hodinovém míchání při teplotě místnosti se přidá další dávka bromacetylbromidu (1,0 ml,

II, 4 mmol) a DMAP (1,4 g, 11,4 mmol) a reakění směs se udržuje na teplotě zpětného toku po

-28CZ 298709 B6 dobu 1,5 hodiny. Přidá se voda a vodná fáze se extrahuje třemi dávkami methylenchloridu. Organická fáze se promyje vodou vysuší se síranem sodným a po zkoncentrování se získá 10,3 g (73 % teorie) produktu v podobě hnědého oleje.

1,56 (m, 1H), 1,43-1,29 (m, 2H), 1,24-1,10 (m, 3H).

(iii) ChNHC(O)CH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

Uvedená sloučenina se připraví způsobem podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (6 g, ío 10,4 mmol) a z ChNHC(O)CH₂OOCCH₂Br (3,5 g, 12,4 mmol, ze stupně (ii)). Surový produkt se čistí bleskovou chromatografií se systémem heptan:EtOAc:isopropanol (5:2:2) jako elučním činidlem a po zkoncentrování se podrobí preparativní RPLC za použití systému 50 % acetonitrilu v 0,lM NH4OAC jako elučního činidla. Po zkoncentrování a vysušení zmrazením se získá 2,6 g (36 % teorie) produktu v podobě bílé pevné látky.

¹³C NMR (125 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 175,1, 171,7, 168,8, 166,1, 164,4.

FAB-MS: (m+1 )=703 (m/z).

Příklad 12 (nPr)₂NC(O)CH₂OOCCH₂-<R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCC(CH3)3 (i) (nPr)₂NC(O)CH₂OH

Směs 2,5 dioxo-l,4-dioxanu (2,02 g, 17,4 mmol a di-n-propylaminu (5 ml, 36,5 mmol) se udr30 žuje 1 hodinu na teplotě 50 °C a 66 hodin na teplotě 90 °C. Přidá se toluen, který se následně odstraní ve vakuu s nadbytkem di-n-propylaminu. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií s použitím elučního systému 10 % methanolu v methylenchloridu, čímž se získá 4,18 g (66 % teorie) žádané sloučeniny.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): delta 4,1 (d, 2H), 3,65 (t, 1H), 3,25 (t, 1H), 3,25 - 3,35 (m, 2H), 2,90 - 3,0 (m, 2H), 1,45 - 1,6 (m, 4H), 0,8-0,95 (m 6H).

(ii) (nPr)₂NC(O)CH₂OOCCH₂-Br

Při teplotě místnosti se 1,5 hodiny míchá směs (nPr)₂NC(O)CH₂OH (0,743 g, 4,7 mmol ze stupně (i)), DCC (0,951 g, 4,6 mmol) a bromoctové kyseliny (0,704 g, 5,1 mmol) v methylenchloridu

-29CZ 298709 B6 (15 ml). Sraženina se oddělí filtrací a rozpouštědlo se odstraní z filtrátu ve vakuu. Destilací zbytku v koloně se získá 0,66 g (50 % teorie) žádaného produktu.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): delta 4,8 (s, 2H), 4,0 (s, 2H), 3,2 - 3,3 (m, 2H), 3,05 - 3,15 (m, 2H), 1,5-1,7 (m, 4H), 0,8 - 1,0 (dt, 6H).

(iii) Pivaloyloxymethyl-4-nitrofenylkarboxylát

Směs pivalátu stříbra (7,5 g, 25 mmol) a jodmethyl-4-nitrofenylkarboxylátu (Alexander a kol. ío J. Med. Chem. 31, str. 318, 1988) (7,99 g, 25 mmol) se refluxuje v benzenu (50 ml) po dobu hodin. Benzen se odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v toluenu. Filtrací přes hyflo a vyčištěním bleskovou chromatografií s použitím toluenu jako elučního činidla se získá 4,00 g (54 % teorie) uvedené sloučeniny.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): delta 8,25 (d, 2H), 7,40 (d, 2H), 5,85 (s, 2H), 1,2 (s, 2H) ¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 176,77, 155,06 (iv) Boc-<R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCC(CH₃)₃

Při teplotě místnosti se roztok pivaloyloxymethyl-4-nitrofenylkarboxylátu (1,18 g, 4 mmol ze stupně (iii)) v methylenchloridu (20 ml), přidá k roztoku Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,88 g, 4 mmol) a triethylaminu (0,66 ml, 4,75 mmol) v methylenchloridu (20 ml). Po 1 hodině se methylenchlorid nahradí EtOAc a směs se čistí bleskovou chromatografií při použití EtOAc jako elučního činidla, čímž se získá 1,27 g (50 % teorie) sloučeniny Boc-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂OOCC(CH₃)₃.

Ή NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 9,5 (bs, 1 H), 8.25 (t, 1 H), 7.8 (d, 2 H),

7,3 (d, 2 H), 7ý0 (bs, 1 H), 5,0-4,8 (m, 2 H), 4,65-4,5 (m, 1 H), 4,5-4.3 (m, 2 H), 4,2-4,05 (ra, 1 H), 3,75 (t, I H), 2,7-2,4 (m, 2 H), 1,9 -1,45 (m, 5 H), 1,45 - 0,8 (m, 24 H) (v) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCC(CH₃)₃

Sloučenina Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2OOCC(CH₃)₃ (327 mg, 0,52 mmol z předchozího stupně (iv)) se rozpustí ve směsi methylenchloridu (5 ml) a TFA (1,2 ml). Po 2 hodinách se reakční směs zkoncentruje ve vakuu, přidá se acetonitril a rozpouštědlo se opět odstraní ve vakuu, čímž se získá surový produkt H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCC(CH₃)₃, kterého se použije bez čištění v následujícím stupni.

(vi) (nPr)₂NC(O)CH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCC(CH₃)₃

Zbytek ze stupně (v) se smísí s (nPr)₂NC(O)CH₂OOCCH₂Br (150 mg, 0,53 mmol, ze stupně (ii)) a s uhličitanem draselným (480 mg, 3,5 mmol) v THF (5 ml) a směs se udržuje 3 hodiny na teplotě 40 °C. Reakční směs se zfiltruje a zkoncentruje na surový produkt, který se vyčistí preparativní RPLC, čímž se získá 78 mg (21 % teorie) sloučeniny (nPr)₂NC(O)CH₂OOCCH₂-(R)CglAze-Pab-COOCH₂OOCC(CH₃)₃.

-30CZ 298709 B6 ‘H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 9,3-9/ (bs, 1 H), 8.5 (m, 1 H), 7_;958,15 (bs, 1 H), 7/5-7/5 (d, 2 H), 7/-7,3 (d, 2 H), 5/ (s, 2 H), 4,8-4,9 (dd, 1 H), 4/-4,7 (m, 3 H), 4,0-4,4 (m, 3 H), 2,8-3,4 (m, 5 H), 2,2-2/7 (m, 3 H), 1,75-1,3 (m, 9 H), 1,3-1,0 (m, 14 H), 1,0-0,7 (m, 7 H).

^I3C NMR (75 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 177,24, 175,30, 171,85, 170,79, 165,82, 163,14.

Příklad 13

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCC(CH₃)₃

Tato sloučenina se připravuje podobně jako podle příkladu 12(vi) ze surového Boc-(R)Cgl-AzePab-COOCH₂OOCC(CH₃)₃ (0,41 g, 0,65 mmol, viz příklad 12(iv)) za použití acetonitrilu (10 ml) jakožto rozpouštědla. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi EtOAc a vodu. Vodná fáze se extrahuje třikrát

EtOAc, organické fáze se spojí, vysuší se (síranem sodným) a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se podrobí bleskové chromatografií za použití systému methylenchlorid/methanol jako elučního činidla. Vymražovacím sušením z ledové kyseliny octové se získá 84 mg (21 % teorie) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCC(CH₃)₃.

Ή NMR (300 MHz, CDC13): 8 9,9 (bs, 1 H), 8,5 (t, 1 H), 7,35 (d. 2 H), 5,85 (s, 2 H), 5,90 (dd, 2 H), 4,6-4,35 (m, 2 H), 4,154,0 (m, 4),

3,2 (a, 2 H), 2,85 (d, 1 H), 2,7-2,45 (m, 2), 2,0-1,9 (m, 2 H), 1,8-1,45 ₂₀ (m, 5 H), 1,3-0,9 (m, 18 H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 177,23, 175,48, 172,29, 170,80, 168,85, 163,14.

Příklad 14

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH₃)OOCCH₃ (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH₃)OOCCH₃

Při teplotě místnosti se 16 hodin míchá roztok Boc-(R)Cgl-Aze-Pab (6,38 g, 13,5 mmol), 1acetoxyethyl-4-nitrofenyl karboxylátu (Alexander a kol. J. Med. Chem. 31, str. 318, 1988) (3,05 g, 12 mmol) a triethylaminu (1,95 ml, 14 mmol) v methylenchloridu s následným přidáním

EtOAc. Výsledný roztok se mírně zkoncentruje a promyje se vodným roztokem uhličitanu sodného (10%), zkoncentruje se na surový produkt, který se čistí bleskovou chromatografií za použití EtOAc jako elučního činidla, čímž se získá 5,59 g (77 % teorie) sloučeniny Boc-(R)CglAze-Pab-COOCH(CH₃)OOCCH₃

-31 CZ 298709 B6 ‘H NMR (300 MHz, CDC13): ó 9,5 (bs, I H), 8,25 (t, 1 H), 7,85 (d, 2 H), 7,35 (d, 2 H), 6,95 (q, I H), 6,7 (bs, I H), 5,(M,85 (m, 2 H), 4,654,5 (m, 1 H), 4,5-4,25 (ra, 2 H), 4,2-4,05 (m, 1 H)3,75 (t, 1 H), 2,652,45 (m, 2 H)2,05 (s, 3 H), 1,9-1,45 (m, Π H), 1,45-0,8 (m, 12 H).

¹³C NMR (75 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 172,61, 170,80, 169,54, 168,91, 162,50, 156,02.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH₃)OOCCH₃

Surová sloučenina se připraví způsobem popsaným v příkladu 12(v) z Boc-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH(CH₃)OOCCH₃ (2,21 g, 3,68 mmol, ze stupně (i)).

(iii) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH₃)OOCCH₃

Surová sloučenina H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH₃)OOCCH₃ ze stupně (ii) se rozpustí v methylenchloridu (150 ml). Směs se promyje 10% roztokem uhličitanu sodného a organická fáze se vysuší síranem draselným a zfiltruje se. Do výsledného roztoku se přidá uhličitan draselný (756 mg, 5,5 mmol) a ethyl(0-trifluormethansulfonyl)glykolát (790 mg, 3,3 mmol) v methylenchloridu (5 ml). Reakční směs se míchá 5 až 10 minut při teplotě místnosti a zkoncentruje se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v EtOAc a výsledná směs se zfiltruje přes celit. Filtrát se podrobí bleskové chromatografii s EtOAc jako elučním činidlem následované HPLC, čímž se získá 475 mg (22 % teorie) sloučeniny EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH(CH₃)OOCCH₃.

Ή NMR (300 MHz, CDC13): 5 9,5 (bs, 1 H), 8,3 (t, 1 H), 7,7 (d, 2 H),

7,2 (d, 2 H), 6,85 (q, 1 H), 4,8 (t, 1 H), 4,45-4,25 (m, 2 H), 4,1-3,85 (m, 4 H), 3,1 (s, 2 H), 2,75 (s, 1 H), 2,5-2,3 (m, 2 H),l,95 (s, 3 H). 1,9-1,8 (m, 1 H), 1,7-1,25 (m, 8 H), 1,25-1,75 (m, 8 H).

¹³C NMR (75,5 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály:

delta 175,26, 172,34, 170,81, 169,49,168,80, 162,43.

Příklad 15

MeOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh

Do roztoku Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,0 g, 2,1 mmol) a dinatriumhydrogenfosfátu (18,7 g, 105 mmol) v THF (45 ml) se přikape při teplotě 20 °C během 45 minut dibenzoylperoxid (556 mg, 2,3 mmol), rozpuštěný v THF (10 ml). Po 24-hodinovém míchání při teplotě 20 °C se reakční směs zkoncentruje a výsledný surový produkt se podrobí preparativní RPLC. Získá se 124 mg (10% teorie) sloučeniny Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh v podobě bílé pevné látky.

-32CZ 298709 B6 ’Η-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 8,26 (m, 1H), 8,09 (m, 2H), 7,72 (m, 2H), 7,59 (ro, 1H), 7,48 (m, 2H), 7,36 (d, 2H), 5,13 (s, 2H), 4,87-4,98 (m, 2H), 4,54-4,61 (m, 1H), 4.33-4,47 (m, 2H), 4,13^19 (m, 1H), 3,81 (t, 1H), 2,53-2,63 (m, 2H), 1,73-1,86 (m, 3H), 1,66-1,72 (m, 2H), 1,36 (s, 9H), 0,968-1,28 (m, 6H).

¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 172,7, 170,6, 163,9, 157,0, 155,9.

LC-MS: m/z 592 (M+tf), m/z 614 (M + Na⁺).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh

Do roztoku Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (600 mg, 1,01 mmol z předchozího kroku (i) ío v methylenchloridu (18 ml) se přidá při teplotě 20 °C TFA (6 ml). Po 14-hodinovém míchání se reakční směs zkoncentruje a výsledný surový produkt se rozdělí mezi EtOAc:0,l M NaOH. Fáze se oddělí a organická vrstva se vysuší síranem sodným a odpaří se. Výtěžek: 480 mg (96 % teorie) v podobě bílé pevné látky.

’Η-NMR (400 MHz, MeOH-d4): δ 8,18 (m, 2H), 7,77 (m, 2H), 7,64 (m, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,43 (d, 2H), 4,75-4,81 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 4,184,34 (m, 2H), 3,12 (d, 1H), 2,57-2,68 (m, 1H), 2,23-2,33 (m, 1H), 1,88l_z96(m, 1H), 1,73-1,84(m,2H), 1,59-1,71 (m,2H), 1,45-1,57 (m, 1H), _{15 K} 0,80-1,34 (m, 5H)

LC-MS: m/z 492 (M+tT), m/z 514 (M + Na⁺).

(iii) MeOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh

Do roztoku H-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (480 mg, 0,97 mmol z předchozího stupně (ii)), uhličitanu draselného (270 mg, 2 mmol) v acetonitrilu (5 ml) se přidá při teplotě 20 °C methylbromacetát (177 mg, 1,16 mmol). Reakční směs se míchá 14 hodin při teplotě 20 °C. Reakční směs se zfiltruje a zkoncentruje se a výsledný surový produkt se podrobí preparativní RPLC, čímž se získá 269 mg (49 % teorie) sloučeniny v podobě bílé pevné látky MeOOCCH₂-(R)Cgl-AzePab-OOCPh.

‘H-NMR (500 MHz, CDC1₃): δ 8,43 (m, 1H, NH), 8,09 (m, 2H), 7,69 (tn, 2H), 7,59 (m, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,34 (m, 2H), 5,27 (s, 2H), 4,93 (dd, 1H), 4,59 (dd, 1H), 4,40 (dd, 1H), 4,12 (m, 2H), 3,65 (s, 3H), 2,87 (d, 1H), 2,72-2,63 (m, 1H), 2,55-2,48 (m, 1H), 1,96 (to, iH), 1,74 (m, 2H), 1,67 (d, 1H), 1,59 (d, 1H), 1,56-1,50 (m, 1H), 1,29-1,08 (m, 4H), 1,04-0,94 (m, 1H)

-33CZ 298709 B6 ¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 175,1, 172,5, 170,6, 164,0, 157,1.

LC-MS: m/z 564 (M+H⁺).

Příklad 16

MeOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Do roztoku MeOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Ph (260 mg, 0,46 mmol; příklad 15 (ii)) v THF (4,6 ml) se přidá při teplotě 20 °C KOMe (1,6 ml, 0,29 M, 0,46 mmol). Po 15 minutovém míchání se směs zkoncentruje a podrobí se preparativní RPLC. Získá se 109 mg (51 % teorie) sloučeniny MeOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH v podobě bílé pevné látky.

Ή-NMR (500 MHz, MeOH-d4): δ 7,59 (d, 2H), 7,34 (d, 2H), 4,83 (s, 2H), 4,82-4,76 (m, 1H), 4,48 (d, 1H), 4,33 (d, 1H), 4,15-4,30 (m,2H),

3j64 (s, 3H), 3,04 (d, 1H), 2,57 (m, 1H), 2,26 (m, 1H), l_f95 (m, IH), 1/75 (m, 2H), 1,58-1,70 (m, 2H), 1,53 (tn, lH), 1,314,10 (m, 4H), 1.04 (m, IH) ¹³C NMR (100 MHz, MeOH-d4) karbonylové a amidinové signály: delta 175,9, 174,3, 172,7, 155,2.

LC-MS: m/z 460 (M+H⁺), m/z 482 (M+Na⁺).

Příklad 17

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Do roztoku EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-C(O)OCH(CH₃)OOCCH₃ (184 mg, 0,31 mmol, viz příklad 14 (iii)), se přidá hydroxylaminhydrochlorid (120 mg, 1,72 mmol) a triethylamin (0,8 ml, 5,7 mmol) v EtOH (95%, 4,0 ml) a směs se míchá 4 dny při teplotě místnosti. Reakční směs se zkoncentruje a výsledný surový produkt se podrobí preparativní RPLC. Výsledkem je 85 mg (58 % teorie) sloučeniny EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH.

‘H-NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 7,6 (d, 2H), 7,35 (d, 2H), 4,75-4,85 (m, IH), 4,4-4,55 (m, 2H), 4.0-4,35 (m, 4H), 3,35 (d, 2H), 3,05 (d, IH), 2,5-2,65 (m, IH), 2,2-2,35 (m, IH), 1,9-2,05 (m, IH), 1,4-1,85 (ra, 5H), 0,85-1,35 (m, 8H) ¹³C NMR (75 MHz, CD₃OD) karbonylové a amidinové signály: delta 175,97, 173,91, 172,72, 35 155,23.

LC-MS: (m+1) = 474 (m/z).

-34CZ 298709 B6

Příklad 18

BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Do roztoku hydroxylaminhydrochloridu (320 mg, 4,59 mmol) a triethylaminu (1,7 ml, 12,24 mmol) v ethanolu se přidá BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (1,0 g, 1,52 mmol). Reakční směs se míchá 40 hodin při teplotě místnosti a zkoncentruje se. Surový produkt se čistí preparativní RPLC se systémem 50 % acetonitrilu v 0,lM NH4OAC jako elučním činidlem, čímž se získá 0,34 g (42 % teorie) BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH.

LC-MS: (m+1) = 536 (m/z).

Příklad 19 nPrOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabZx2HCl (700 mg, 1,2 mmol) a zn-propylbromacetátu (268 mg, 1,45 mmol). Výtěžek je 259 mg (35 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 606 (m/z).

Příklad 20 nPrOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 18 z nPrOOCCH₂-(R)Cgl-AzePab-Z (182 mg, 0,3 mmol; příklad 19) a surový produkt se podrobí preparativní RPLC se systé30 mem 40 % acetonitrilu v 0,lM NH4OAC jako elučním činidlem, čímž se získá 74 mg (51 % teorie) žádané sloučeniny.

LC-MS: (m+1 )=488 (m/z).

Příklad 21 iPrOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 18 z iPrOOCCH₂-(R)Cgl-AzePab-Z (590 mg, 0,7 mmol; příklad 39). Výtěžek je 110 mg (32 % teorie).

LC-MS: (m+l)=488 (m/z).

Příklad 22 tBuOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 18 z tBuOOCCH₂-(R)Cgl-AzePab-Z (738 mg, 1,2 mmol; příklad 37). Výtěžek je 290 mg (48 % teorie).

LC-MS: (m+l)=502 (m/z).

-35CZ 298709 B6

Příklad 23 (nPr)₂NCOCH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab(OH) (i) HOOCCH₂-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-Boc

Při teplotě místnosti se 2 hodiny míchá roztok HOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (670 mg,

1,5 mmol; příklad 28), (Boc)₂O (654 mg, 3 mmol) a DMAP (92 mg, 0,75 mmol) v systému

THF:voda (10:1). Reakční směs se zkoncentruje a vyčistí se preparativní RPLC. Po vysušení ío zmrazením se získá 112 mg (12 % teorie) sloučeniny HOOCCH₂-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab^O-Boc v podobě bílé pevné hmoty.

LC-MS: (m-1) = 643 (m/z) (ii) (nPr)₂NCOCH₂OOCCH₂-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-Boc

Při teplotě místnosti se míchá 4 dny roztok HOOCCH₂-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-0-Boc (100 mg,

0,15 mmol ze stupně (i)), (nPr)₂NCOCH₂OH (27 mg, 0,17 mmol, viz příklad 12(i))„ EDC (40 mg,

0,21 mmol) a DMAP (10 mg, 0,075 mmol) v acetonitrilu (5 ml). Reakční směs se zkoncentruje a 20 vyčistí se preparativní RPLC. Po vysušení zmrazením se získá 21 mg (18 % teorie) sloučeniny (nPr)₂NCOCH₂OOCCH₂-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-0-Boc

LC-MS: (m-1) = 787 (m/z) (iii) (nPr)₂NCOCH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Při teplotě místnosti se míchá 5 minut roztok (nPr)₂NCOCH₂-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-0-Boc (20 mg, 0,025 mmol) v systému TFA:methylenchlorid (1:1). Reakční směs se zkoncentruje. Po vysušení zmrazením z acetonitrilu a vody se získá 5 mg (34 % teorie) sloučeniny (nPr)₂30 NCOCH₂OOCCH₂-(R)Cgl-(Boc)-Aze-Pab-OH.

LC-MS: (m+1) = 587 (m/z)

Příklad 24

ChNHCOCH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 18 z CrNHCOCH₂-(R)Cgl-Aze40 Pab-Z (118 mg, 0,17 mmol; příklad 1 l(iii)). Výtěžek je 1,8 mg.

LC-MS: (m+l)=585 (m/z).

Příklad 25

MeNHCOCH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 18 z MeNHCOCH₂-(R)Cgl-Aze50 Pab-Z (81 mg, 0,12 mmol; příklad 36). Výtěžek je 10 mg, (16 % teorie).

LC-MS: (m+l)=517 (m/z).

-36CZ 298709 B6

Příklad 26

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OAc 5 (i) H-(R)Cgl-Aze-Pab-OAc

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 27 ve stupních (i), (ii) a (iii) za použití anhydridu kyseliny octové místo anhydridu kyseliny propanoové.

ío LC-MS: (m+1 )=430 (m/z).

(ii) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OAc

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 1 (iii) ze H-(R)Cgl-Aze-Pab-OAc 15 (370 mg, 0,6 mmol) a z ethylbromacetátu (105 mg, 0,63 mmol). Výtěžek je 67 mg, (22 % teorie).

LC-MS: (m+l)=516 (m/z).

Příklad 27

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et.

(i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Do roztoku hydroxylaminhydrochloridu z triethylaminu v EtOH se přidá Boc-(R)Cgl-Aza-PabZ (1,0 g, 1,52 mmol). Reakční směs se míchá 40 hodin při teplotě místnosti a zkoncentruje se. Surový produkt se čistí preparativní RPLC.

LC-MS: (m+1) = 488 (m/z) (ii) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et

Při teplotě místnosti se míchá 45 minut roztok Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (500 mg, 0,91 mmol ze stupně (i)) a anhydrid propanové kyseliny (3,5 ml) a zkoncentruje se. Surový produkt se čistí preparativní RPLC se systémem 50 % acetonitrilu v 0,lM NH4OAC jako elučním činidlem, čímž se získá 266 mg (54 % teorie) sloučeniny Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et.

LC-MS: (m+1) = 544 (m/z) (iii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(ii) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OC (238 mg, 0,44 mmol ze stupně (ii)). Výtěžek je 290 mg (100 % teorie).

LC-MS: (m+1 )=444 (m/z).

(iv) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et

Do roztoku H-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCet (300 mg, 0,45 mmol ze stupně (iii)) a uhličitanu draselného (308 mg, 2,23 mmol) v methylenchloridu (6 ml) se při teplotě 0 °C přikape EtOOCCH₂OSO₂CF₃ (105 mg, 0,45 mmol, připraveného z triflicaldehydu a ethylglykolátu). Po 1-hodinovém míchání při teplotě místnosti se reakční směs promyje vodou, citrónovou kyselinou a vodou, vysuší se síranem sodným a zkoncentruje se. Surový produkt se čistí preparativní RPLC

-37CZ 298709 B6 se systémem 45 % acetonitrilu v O,1M NH4OAC jako elučním činidlem, čímž se získá 63 mg (27 % teorie) sloučeniny EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et.

LC-MS: (m+l)=530 (m/z)

Příklad 28

HOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (i) tBuOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabOOCPh (250 mg, 0,5 mmol; příklad 15 (iii)) a z t-butylbromacetátu (119 mg, 0,6 mmol). Výtě15 žek je 211 mg (69 % teorie).

LC-MS: (m+1 )=606 (m/z).

(ii) HOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(ii) z tBuOOCH₂-(R)Cgl-AzePab-OOCPh (233 mg, 0,3 mmol ze stupně (i)). Výtěžek je 65 mg (37 % teorie).

LC-MS: (m+l)=550 (m/z) (iii) HOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Při teplotě místnosti se 5 minut míchá roztok HOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (60 mg, 0,1 mmol, ze stupně (ii)) a KOMe (0,2M, 0,2 mmol) v THF (10 ml) a methanolu (1,5 ml).

Reakční směs se zkoncentruje a zbaví se vody a methanolu vymrazovacím sušením. Získá se 28 mg (63 % teorie) sloučeniny HOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH.

LC-MS: (m+1) = 446 (m/z)

Příklad 29

HOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-O-cis-oleyl (i) tBuOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Při teplotě místnosti se 24 hodin míchá roztok tBuOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (1,7 g, 2,8 mmol; příklad 37), (Boc)₂O (672 mg, 3,08 mmol) a DMAP (68 mg, 0,56 mmol) v THF (30 ml). Při teplotě 5 °C se přidá další (Boc)₂ (305 mg, 1,4 mmol). Po dalších 24 hodinách se reakční směs zkoncentruje a čistí preparativní RPLC, čímž se získá 587 mg (30 % teorie) sloučeniny tBuOOCCH₂-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-Z.

EC-MS: (m+1 )=720 (m/z) (ii) tBuOOCCH₂-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-OH

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 18 z tBuOOCCH₂-(R)Cgl(Boc)Aze-Pab-Z (580 mg, 0,8 mmol, ze stupně (ii)). Výtěžek je 341 mg (71 % teorie).

EC-MS: (m+1 )=602 (m/z)

-38CZ 298709 B6 (iii) tBuOOCCH₂-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-cis-oleyl

Roztok tBuOOCCH₂-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-OH (340 mg, 0,56 mmol; ze stupně (ii)), cis-oleyl5 chloridu (170 mg, 0,56 mmol) a triethylaminu (62 mg, 0,61 mmol) v methylenchloridu se míchá minut. Reakční směs se zkoncentruje a čistí preparativní RPLC, čímž se získá 326 mg (67 % teorie) sloučeniny tBuOOCCH₂-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-0-cis-oleyl.

EC-MS: (m+1 )=867 (m/z) o (iv) HOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-O-cis-oleyl

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(ii) z tBuOOCCH₂-(R)Cgl(Boc)Aze-Pab-O-cis-oleylu (223 mg, 0,25 mmol ze stupně (iii)).

LC-MS: (m+1 )=710 (m/z)

Příklad 30

Cyklooktyl-OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) Cyklooktylbromacetát

V methylenchloridu se rozpustí cyklooktanol (1,3 g, 10 mmol) a DMAP (0,3 g) a přidá se bromacetylchlorid (1 ml, 12 mmol). Po 18-hodinovém níchání se reakční směs promyje vodným roztokem uhličitanu sodného (2M) a HC1 (1M), vysuší se, zkoncentruje se a vyčistí bleskovou chromatografií se systémem petroleumether:methylenchlorid (50:50) jako elučním činidlem, čímž se získá 1,8 g (72 % teorie) cyklooktylbromacetátu.

(ii) Cyklooktyl-OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2 HC1 (703 mg, 1,2 mmol) a z cyklooktylbromacetátu (363 mg, 1,46 mmol ze stupně (i)). Výtě35 žekje 379 mg (46 %).

FAB-MS: (m+l)= 674 (m/z)

Příklad 31 tBuCH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2 45 HC1 (2,5 g, 4,3 mmol) a z terc.-butylmethylbromacetátu (1,08 g, 5,2 mmol). Výtěžek je 1,87 g (69 % teorie)

FAB-MS: (m+l)= 634 (m/z)

Příklad 32 (2-Me)BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z 55 (i) Methylbenzylbromacetát

-39CZ 298709 B6

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 30(1) ze 2-methylbenzylalkoholu (5 g, 41 mmol) a z bromacetylchloridu (12,6 g, 80 mmol). Výtěžek je 8,2 g (82 % teorie).

(ii) (2-Me)BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabZ x 2 HC1 (580 mg, 1 mmol) a ze 2-methylbenzylbromacetátu (290 mg, 1,2 mmol ze stupně (i)). Výtěžek je 30 mg (4,5 %).

o

LC-MS: (m+1) = 668 (m/z)

Příklad 33

ChCH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab“Z

Na teplotě zpětného toku se udržuje 4 dny roztok BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (1,41 g, 1,7 mmol) a cyklohexylmethylalkoholu (6 ml) v triethylaminu (474 μΐ) a methylenchloridu (3 ml). Reakční směs se zpracuje na surový produkt, který se vyčistí bleskovou chromatografií se systémem methylenchlorid:methanol (95:5) jako elučním činidlem, čímž se získá 801 mg (71 % teorie) sloučeniny ChCH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z.

FAB-MS: (m+1) = 660 (m/z)

Příklad 34

ChOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) Cyklohexylbromacetát

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 32(i) z cyklohexanolu (1 g, 10 mmol) a z bromacetylchloridu (1 ml, 12 mmol).

(ii) ChOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2HC1 (2,5 g, 4,32 mmol) a z cyklohexylbromacetátu (1,5 g, 5,2 mmol). Výtěžek 1,7 g (60% teorie).

FAB-MS: (m+1) = 646 (m/z)

Příklad 35

PhC(Me₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) 2-Fenyl-2-propylbromacetát 50

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 30(i) z 2-fenyl-2-propanolu (3 g, 22 mmol) a z bromacetylchloridu (4,16 g, 26 mmol). Výtěžek je 1,2 g (44 % teorie).

(ii) PhC(Me₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

-40CZ 298709 B6

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabZ x 2 HC1 (1,2 g, 2,2 mmol) a z 2-fenyl-2-propylbromacetátu (640 mg, 2,5 mmol ze stupně (i)).

Výtěžek je 1,3 g (86 % teorie).

‘H-NMR (500 MHz; CDCl₃) δ 9,3 (br s, 1H), 8,35 (t, 1H), 7,75 (d, 2H),

7,45 (d, 2H), 7,30-7,05 (m, lORneboUH), 5,15 (s, 2H), 4,78 (t, 1H), 4,404,30 (AB ABX spektra, 2H), 3,95 (q, 1H), 3,74 (q, 1H), 3,27-3.19 (AB-spektnim, 2H), 2.72 (d, 1H), 2,43 (q, 2H), 1,93 (br d, 1H), 1,75-1,60 (m, 9Hnebol0H), 1,54 (d, 1H), 1,49-1,40 (m, 1H), 1,251,0 (m, 4H), 0,92 (q, 1H)

Příklad 36 ío MeNHCOCH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabZ x 2 HC1 (1,0 g, 1,7 mmol) a MeNHCOCH₂OOCCH₂Br (440 mg, 2 mmol, připravený obdobně jako podle příkladu 11 (stupně (i), (ii) a (iii) za použití methylaminu místo cyklohexylaminu).

Výtěžek je 380 (35 % teorie).

FAB-MS: (m+l)= 635 (m/z)

Příklad 37 tBuOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab25 Zx2HCl (500 mg, 1,0 mmol) a t-butylbromacetátu (231 mg, 1,2 mmol). Výtěžek je 420 mg (69 % teorie).

LC-MS: (m+l)= 620 (m/z)

Příklad 38 (Me)₂CHC(Me)₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabZ (787 mg, 1,4 mmol) a z 2,3-dimethyl-2-butylbromacetátu (364 mg, 1,63 mmol). Výtěžek je 590 (67 % teorie).

FAB-MS: (m+l)= 648 (m/z)

Příklad 39 iPrOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

-41 CZ 298709 B6

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (700 mg, 1,20 mmol) a z isopropylbromacetátu (262 mg, 1,5 mmol). Výtěžek je 225 mg (31 % teorie).

FAB-MS: (m+1 )= 606 (m/z)

Příklad 40 ío BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 1 (i) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H a z 15 4-methoxyfenylchlorformátu.

FAB-MS: (m+l)= 622 (m/z) (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) x 2 HC1

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 4(iii) z Boc-(R)Cgl-Aze-PabCOOPh(4-OMe) (ze stupně (i)).

(iii) BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOPh(4-OMe) x 2 HC1 (85 mg, 0,16 mmol, ze stupně (iii)) a z benzylbromacetátu (90 mg, 0,2 mmol). Výtěžek je 60 mg (56 % teorie).

FAB-MS: (m+l)= 670 (m/z)

Příklad 41

ChCH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOPh(4-OMe) (554 mg, 0,64 mmol; příklad 40 (ii)) a z cyklohexylmethylbromacetátu (165 mg, 0,7 mmol). Výtěžek je 34 mg (8 % teorie).

FAB-MS: (m+l)= 676 (m/z)

Příklad 42 45 (2-Me)BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOPh(4-OMe) (522 mg, 1 mmol; příklad 40(ii)) a z 2-(methyl)benzylbromacetátu (365 mg,

1,5 mmol). Výtěžek je 158 mg (23 % teorie).

FAB-MS: (m+l)= 684 (m/z)

-42CZ 298709 B6

Příklad 43

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(i) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab (1,96 g, 4,56 mmol) a z 4-tolylchlorformátu (850 mg, 4,99 mmol). Výtěžek je 1,39 mg (55 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 606 (m/z) (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 4(ii) z Boc-(R)Cgl-Aze-PabCOOPh(4-Me) (388 mg, 0,64 mmol) ze stupně (i). Výtěžekje 293 mg (91 % teorie).

FAB-MS: (m+l)= 506 (m/z) (iii)EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOPh(4-Me) (288 mg, 0,6 mmol) ze stupně (ii) a z ethylbromacetátu (114 mg, 0,7 mmol). Výtěžekje 81 mg (24 % teorie).

FAB-MS: (m+l)= 592 (m/z)

Příklad 44 30

BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOPh(4-Me) (272 mg, 0,54 mmol) z příkladu 43 (ii) a z benzylbromacetátu (147 mg,

0,6 mmol). Výtěžekje 107 mg (31 % teorie).

FAB-MS: (m+l)= 654 (m/z)

Příklad 45

BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO45 nBu x 2 HC1) (400 mg, 0,74 mmol; příklad 9 (ii) a z benzylbromacetátu (210 mg, 0,88 mmol).

Výtěžekje 220 mg (48 % teorie).

FAB-MS: (m+l)= 620 (m/z)

Příklad 46 iPrOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2CH = CH₂

-43 CZ 298709 B6

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂CH = CH₂ x 2 TFA) (456 mg, 0,67 mmol, viz příklad 1 (ii)) a z izopropylbromacetátu (145 mg, 0,8 mmol). Výtěžek je 294 mg (79 % teorie).

FAB-MS: (m+l)= 556 (m/z)

Příklad 47 ío EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu (i) Boc-Pab-COO-iBu

Do roztoku Boc-Pab-H (500 mg, 2,0 mmol), připraveného z Pab-Z a (Boc)₂O (úpravou Boc15 Pab-Z) s následnou hydrogenaci v přítomnosti palladia na uhlí a triethylaminu (400 mg,

4,0 mmol) v methylenchloridu (10 ml) se přidá i-butylchlorformát (270 mg, 2,2 mmol) při teplotě 0 °C. Po 5-hodinovém míchání se přidá voda. Organická fáze se vysuší síranem sodným a po zkoncentrování se získá 530 mg (76 % teorie) sloučeniny Boc-Pab-COO-iBu.

’Η-NMR (500 MHz, CDC1₃) 5 9,5 (bs, 1H), 7,82 (d, 2H), 7,31 (d, 2H),

6,6 (bs, 1H), 5,0 (bs, 1H), 4,33 (bd, 2H), 3,93 (d, 2H), 2,04 (m, 1H),

1,45 (s, 9H), 0,97 (d, 6H) '

(ii) H-Pab-COO-iBu x 2 HC1

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 4(ii) z Boc-Pab-COO-iBu) 25 (520 mg, 1,5 mmol, ze stupně (i)). Výtěžek je 430 mg (88 % teorie).

(iii) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu

Do roztoku Boc-(R)Cgl-Aze-OH (480 mg, 1,4 mmol), H-Pab-COO-iBu x 2 HC1 (430 mg, 30 1,3 mmol, ze stupně (ii) a DMAP (650 mg, 5,3 mmol) v acetonitrilu (20 ml) se přidá EDC (270 mg, 1,4 mmol). Po 3-denním míchání při teplotě místnosti se reakční směs zkoncentruje a rozpustí se ve vodě a EtOAc. Organická fáze se promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem sodným zkoncentruje se a vyčistí bleskovou chromatografií za použití EtOAc jako elučního činidla, čímž se získá 510 mg (52 % teorie) sloučeniny Boc-(R)Cgl-Aze35 Pab-COO-iBu.

(iv) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu x 2 HC1

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 4(ii) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab40 COO-iBu) (500 mg, 0,88 mmol, ze stupně (iii)). Výtěžek je 360 mg (87 % teorie).

(v) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO45 iBu x 2 HC1) (290 mg, 0,53 mmol ze stupně (iv)) a z ethylbromacetátu (110 mg, 0,64 mmol).

Výtěžek je 140 mg (47 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 558 (m/z)

-44CZ 298709 B6

Příklad 48

BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOnPr x 2 TFA (902 mg, 1,3 mmol; příklad 5(ii)) a z benzylbromacetátu (362 mg, 1,6 mmol). Výtěžek je 199 mg (25 % teorie).

Ή-NMR: (400MHz; CDCI₃) δ 8.43 (bs, 1H), 7,78 (d, 2H), 7,38-7,27 (m, 7H), 5,05 (s, 2H), 4,90 (dd, 1H), 4,56-4,39 (AB _eást ABX spektra, 2H), 4,12-4,03 (m, 3H), 3,98-3,91 (q, IH), 3,33-3,22 (AB-spe- trum, 2H), 2,85 (d, 1H), 2,65-0,94 (m, 19H)

Příklad 49

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCCh (i) EtCOOCH₂OOCCh

Do roztoku tetrabutylamoniumhydrogensulfátu (15,6 g, 45,6 mmol) a cyklohexankarboxylové kyseliny (5,85 g, 46 mmol) v methylenchloridu se přidá NaOH (9,1 ml, 10M, 68 mmol) při tep20 lotě 0 °C. Po 5-minutovém míchání se reakční směs zfiltruje, promyje se methylenchloridem, rozpustí se v toluenu zkoncentruje se a rozpustí v THF, čímž se získá [Bu₄N]⁺[OOCCh]'. EtSCOOCH₂Cl (4 g, 25,9 mmol (Folkmann a Lund, J. Synthesis, str. 1159, 1990), který se přidá do roztoku THF [Bu₄N]⁺[OOCCh]' při teplotě místnosti. Po 12-hodinovém míchání při teplotě místností se reakční směs zkoncentruje a vyčistí se bleskovou chromatografií, čímž se získá

2,57 g (40 % teorie) sloučeniny EtCOOCH₂OOCCh.

'H-NMR (400 MHz, CDC1₃) diagnostické vrcholy delta 5,80 (s, 2H, O-CH₂-O), 2,85 (q, 2H, CHr-S).

(ii) ClCOOCH₂OOCCh

Při teplotě 0 °C se do sloučeniny EtCOOCH₂OOCCh (2,9 g, 11,8 mmol ze stupně (i)) přikape SO₂C1₂ (3,18 g, 243,6 mmol). Po 30-minutovém míchání se reakční směs zkoncentruje, čímž se získá 1,82 (70 % teorie) sloučeniny ClCOOCH₂OOCCh.

'H-NMR (500 MHz, CDCI3) diagnostické vrcholy delta 5,82 (s, 2H, O-CH₂-O).

(iii) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCCh

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(i) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (750 mg, 1,59 mmol) a z ClCOOCH₂OOCCh (460 mg, 2,1 mmol, ze stupně (ii)). Surový produkt se vyčistí preparativní RPLC. Výtěžek je 355 mg (9 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 656 (m/z) (iv) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCCh + 2 TFA

-45CZ 298709 B6

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(ii) z Boc-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂OOCCh (ze stupně (iii)).

(v) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCCh

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂OOCCh x 2 TFA (193 mg, 0,35 mmol, ze stupně (iv)) a z ethyltrifluoracetátu (83 mg, 0,35 mmol). Výtěžek je 87 mg (39 % teorie).

ío ’H-NMR (400 MHz, CDC1₃) delta 8,48 (t br, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 5,86 (s, 2H), 4,95 (dd, 1H), 4,15 - 4,39 (AB-část spektra ABX, 2H), 4,18 - 4,05 (m, 5H), (3,26 - 3,17 (AB-spektrum, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,75 - 0,95 (m, 29H).

Příklad 50

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCCH₂Ch

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 49, přičemž výchozí látkou je cyk20 lohexyloctová kyselina místo cyklohexankarboxylové kyseliny. Výtěžek je 74 mg, (17 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 656 (m/z)

Příklad 51

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(Me)OOCPh

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 49, přičemž výchozí látkou je 30 EtSCOOCH(CH₃)Cl (připravená z C1COCH(CH₃)C1 a z EtSH způsobem, který popsal Folkmann a kol. (J. Synthesis, str. 1159, 1990) místo EtSCOOCH₂Cl. Výtěžek je 70 mg, (23 % teorie). FAB-MS: (m+1) = 650 (m/z)

Příklad 52

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCPh

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 49, přičemž výchozí látkou je kyselina benzoová místo cyklohexankarboxylové kyseliny. Výtěžek je 50 mg, (39 % teorie).

‘H-NMR (300 MHz, CDC1₃) $ 9,73-9,25 (s br, 1H), 8,45 (t, 1H), 8,05 (d, 2H), 7_f83 (d, 2H), 7,60-7,10 (m, 6H), 6,10 (s, 2H), 4,96-4,84 (dd,

1H), 4,62-4,30 (ABX, 2H), 4,20-3,93 (m, 4H), 3,25 (s, 2H), 2,84 (d,

1H), 2,73-2,41 (m, 2H), 2,41-0,87 (m, 15H) ¹³C NMR (300 MHz, CDC1₃) karbonylové a amidinové signály: delta 163,1, 165,3, 169,0, 170,8,

172,3, 175,5.

-46CZ 298709 B6

Příklad 53

BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(Me)OAc

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH(CH₃)OC(O)CH₃ (108 mg, 0,21 mmol; příklad 14(11)) a z benzylbromacetátu (36 μΐ, 0,23 mmol). Výtěžek je 41 mg, (30 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 650 (m/z)

Příklad 54

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OAc (i) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOAc x 2 TFA

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 14(1) a (ii) za použití acetoxymethyl-4-nitrofenylkarboxylátu (připraveného obdobným způsobem jako podle příkladu 12 (iii)) za použití acetátu stříbra místo pivalátu stříbra. Zpracováním se získá sloučenina H-(R)Cgl-AzePab-COOCH₂OAc x 2 TFA, které se použije bez dalšího čištění v následujícím stupni.

(ii) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OAc

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂OAc x 2 TFA (0,83 mmol; ze stupně (i)) a z ethylbromacetátu (2,2 mmol). Výtěžek je 286 mg.

FAB-MS: (m+1) = 574 (m/z)

Příklad 55 tBuOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OAc

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂OAc x 2 TFA (0,313 mmol; příklad 54(i) a z t-butylbromacetátu (73 mg, 0,376 mmol). Výtěžek je 156 mg (83 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 602 (m/z)

Příklad 56

BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOC-tBu

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂OOC-tBu (379 mg, 0,71 mmol; příklad 12(v)) a z benzylbromacetátu (135 μΐ, 0,85 mmol). Výtěžek je 146 mg (30 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 678 (m/z)

-47CZ 298709 B6

Příklad 57

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CCl₃ (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CCl₃

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(i) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,0 g, 2,12 mmol), 2M NaOH (11,7 ml) a z trichlorethylchlorformátu (494 mg, 2,33 mmol). Výtěžek je 1,08 g (79 % teorie).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CCl₃

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(ii) z Boc-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂CC1₃ (1,04 g, 1,607 mmol; stupeň (i)). Výtěžekje 1,43 g (99 % teorie).

‘H-NMR: (500MHz; CD₃OD) 5 7,79 (d, 2H), 7,61 (d, 2H), 5,10 (s, 2H), 4,87-4,81 (m, 2H), 4,634,52 (q, 2H), 4,41-4,34 (m, 1H), 4,304,24 (m, 1H), 3,72 (d, 1H), 2,72-2,63 (m, 1H), 2,32-2,25 (m, 1H), 1,88-1,10 (m, 14H) (iii) EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂CCl₃

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂CC1₃ (400 mg, 0,52 mmol) ze stupně (ii)) a z ethylbromacetátu (95 mg, 0,57 mmol). Výtěžekje 8 mg (23 % teorie).

‘H-NMR: (500MHz; CDC1₃) δ 8.47 (bt, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,48 (bs, 1H), 7,31 (d, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.85 (s, 2H), 4.58-4.39 (AB eást ABX spektra, 2H), 4,16-4,06 (ra, 4H), 3,24 (s, 2H), 4,87 (d, 1H), 2,65-2,59 (m, 1H), 2,56-2,48 (m, 1H), 2,10-0,95 (ra, 16H)

Příklad 58

MeOOC-C(=CHEt)CH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) MeOOC-C(=CH₂)C(OH)Et

Propionaldehyd (10,1 g, 174 mol) se přikape do roztoku methylakrylátu (10 g, 0,116 mol) a 1,4diazobicyklo[2,2,2]oktanu (1,3 g, 0,0116 mol). Reakční směs se míchá 14 dní při teplotě míst35 nosti. Přidá se ethylacetát (150 ml). Organická fáze se promyje vodou a solankou, vysuší se (síranem sodným) zfíltruje se a zkoncentruje, čímž se získá MeOOC-C-(=CH₂)C(OH)Et. Výtěžekje 15,5 g (93 % teorie).

'H-NMR: (400 MHz; CDC1₃) δ 6,24 (s, 1H), 5,81 (s, 1H), 4,34 (t, 1H), 3,78 (s, 3H), 2,82 (bs,

1H), 1,69 (m, 1H), 0,95 (t, 3H).

-48CZ 298709 B6 (ii) MeOOC-C(=CHEt)CH₂Br

Do MeOOC-C(=CH₂)C(OH)Et (3 g, 20,8 mmol, ze stupně (i) uvedeného výše) se při teplotě 0 °C přikape HBr (6,5 ml, přibližně 48%). Po 5 minutách se přikape kyselina sírová (koncentro5 váná, 6 ml). Reakční směs se míchá 12 hodin při teplotě místnosti. Obě fáze se oddělí a horní fáze se rozředí etherem. Etherová fáze se promyje vodou a vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se (síran sodný a aktivní uhlí) a zkoncentruje se. Zbytek se vyčistí bleskovou chromatografií. Výtěžek je 1,7 g (40 % teorie).

ío 'H-NMR: (400 MHz; CDC1₃) δ 6,97 (t, 3H), 4,23 (s, 2H), 3,8 (s, 3H), 2,32 (m, 2H), 1,13 (t, 3H).

(iii) tBuOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (2,1 g, 3,6 mmol) a z t-butylbromacetátu (780 mg, 4,0 mmol). Výtěžek je 1,73 g (78 % teorie).

(iv) HOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Při teplotě místnosti se 3 hodiny míchá roztok tBuOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (ze stupně (iii) uvedeného výše) a TFA v methylenchloridu. Reakční směs se zkoncentruje a vymrazovacím sušením se zbaví vody a HC1 (koně., 10 ekv.).

(v) MeOOC-C(=CHEt)CH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Zmrazením se vysuší roztok HOOCCH₂-{R)Cgl-Aze-Pab-Z (263 mg, 0,41 mmol, ze stupně (iv) uvedeného výše), NaOH (1M, 1,239 ml, 1,239 mmol) a vody (4 ml). Přidá se DMF (5 ml), načež se přikape Me-OOC-C(=CHEt)CH₂Br (103 mg, 0,496 mmol; ze stupně (ii) uvedeného výše) při teplotě 0 °C. Reakční směs se míchá 24 hodin při teplotě místnosti, zředí se toluenem (5 ml), promyje se vodou, vysuší se (síranem sodným) a zkoncentruje se. Zbytek se vyčistí bleskovou chromatografií za použití systému EtOAc:methanol (95:5) jako elučního činidla. Výtěžek je 95 mg (33 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 690 (m/z).

Příklad 59

MenOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) (i) MenOOCCH₂Br

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 30(i) popsaného výše z MenOH (10 mmol) a z bromethylchloridu (12 mmol). Výtěžek je 1,5 g (54 % teorie).

(ii) MenOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOPh(4-OMe) (521 mg, 1 mmol) (příklad 40(ii) a zMenOOCCH₂Br (416 mg, 1,5 mmol, ze stupně (i)). Výtěžek je 36 mg (5 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 718 (m/z)

-49CZ 298709 B6

Příklad 60 tBuOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOnPr

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOnPr (575 mg, 0,837 mmol příklad 5(ii)) a z t-butylbromacetátu (196 mg, 1,01 mmol). Výtěžek je 110 mg (23 % teorie).

LC-MS: (m+1) = 572 (m/z)

Příklad 61

MenOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (0,7 g, 1,21 mmol) a z MenOPCCH₂Br (0,4 g, 1,45 mmol z příkladu 59(i)). Výtěžek je 0,33 g (38 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 702 (m/z)

Příklad 62

BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO₂) (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO₂)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(i) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H 30 (1,03 g, 2,18 mmol), z 2M NaOH (24 ml) a z 4-NO₂-benzylchlorformátu (518 mg, 2,4 mmol).

Výtěžek je 1,32 g (93 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 651 (m/z) (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO₂)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 4(i) z Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOBn(4-NO₂) (1,32 mg, 2,03 mmol), ze stupně (i). Výtěžek je 1,0 g (79 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 551 (m/z) (iii) BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO₂)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 1 (iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO45 Bn(4-NO₂) (0,5 g, 0,80 mmol ze stupně (ii)) a z benzylbromacetátu (220 mg, 0,90 mmol).

FAB-MS: (m+1) = 699 (m/z)

Příklad 63

EtOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Bn(4-NO₂)

-50CL 298709 B6

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOBn(4-NO₂) (211 g, 0,38 mmol; příklad 62 (ii)) a z ethylbromacetátu (47 μΐ, 0,42 mmol). Výtěžek je 44 mg (18 % teorie).

Ή-NMR; (300MHz; CDC13) δ 9,55 (bs, 1H), 8,50 (bt, 1H), 8,20 (d, 2H), 7,80 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,35 (d, 2H), 6,87 (bs, 1H), 4,95 (dd, 1H), 4,654,40 (AB Sást ABX spektra, 2H), 4,18-4,04 (m, 5H), 3,27-3,15 (AB-spefcrum, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,75-2,60 (ra, 1H), 2,572,45 (m, 1H), 2,00-0,95 (m, 16H).

Příklad 64 ío PrlC(O)CH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) PrlC(O)CH₂OH

Na teplotě zpětného toku se udržuje 1 hodinu směs 2,5-dioxo-l,4-dioxanu (2,0 g, 17 mmol) a pyrrolidinu (8 ml, 97 mmol). Přebytek pyrrolidinu se odstraní odpařením. Výtěžek je 4,4 g (99 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 130 (m/z) (ii) PrlC(O)CH₂OOCCH₂Br

Do roztoku PrlC(O)CH₂OH (0,4 g, 3,1 mmol, ze stupně (i)) v DMF (15 ml) se přikape bromacetylbromid (0,63 g, 3,1 mmol) při teplotě 0 °C. Reakční směs se míchá 1,5 hodiny při teplotě 0 °C a 3 hodiny při teplotě místnosti. Přidá se další bromacetylbromid (0,63 g, 3,1 mmol) a reakční směs se zahřeje na teplotu 80 °C, míchá se 12 hodin při teplotě místnosti a zkoncentruje se. Výtěžek je 320 mg (41 % teorie).

FAB-MS: (m+1) = 252 (m/z) (iii) PrlC(O)CH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)CgI-Aze-Pab-Z (580 mg, 1 mmol) a z PrlC(O)CH₂OOCCH₂Br (300 mg, 1,2 mmol, ze stupně (ii)). Výtěžek je 400 mg (60 % teorie).

Ή-NMR; (500MHz; CDC13) δ 9,66-9,42 (bs, 1H), 8,64-8,56 (m, 1H), 8,03-7,93 (d, 2H), 7,89-7,66 (bs, 1H), 7,45 (d, 2H), 7/5-7,25 (m, 5H), 5,20 (s, 2H), 4,984,92 (dd, 1H), 4,82-4,74 (m, 1H), 4,62, 4,58 (AB spektrum, 2H), 4,264,05 (m, 3H),3,47-3,16 (m, 6H), 2,95 (d,lH), 2,782,68 (m, 1H), 2,54-2,42 (m, 1H), 2,03-1,95 (m, 16H)

-51 CZ 298709 B6

Příklad 65 (2-Me)BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO₂)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOBn(4-NO₂) (500 g, 0,80 mmol, příklad 62(ii)) a z 2-(methyl)benzylbromacetátu (234 mg, 0,96 mmol, příklad 32(i). Výtěžek je 528 mg (92 % teorie).

Ή-NMR: (400MHz, CDC1₃) β 9,34 (bs, IH), 8,38 (í, IH), 8,09 (d, 2H), 7,72 (d, 2H), 7,48 (d, 2H), 7,37 (bs, IH), 7,23 (d, 2H), 7,17-7,05 (m, 4H), 5,18 (s, 2H), 5,00 (s, 2H), 4,81 (dd, IH), 4,454,34 (AB eást ABX spektra, 2H), 4,04-3,97 (q, IH), 3,93-3,86 (q, IH), 3,27-3,17 (AB spektrum, 2H), 2,79 (d, IH), 2,54-2,35 (m,2H), 2,22 (s, 3H), 1,911,84 (bd, IH),1,71-1,39 (m, 5H), 1,19-0,84 (m, 4H).

Příklad 66

MeOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt.

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu 3 (iii) z El-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt (305 g, 0,69 mmol; příklad 4(ii)) a z methylbromacetátu (126 mg, 0,83 mmol. Výtěžek je 188 mg (53 % teorie).

LC-MS: (m+1) = 516 (m/z)

Příklad 67 (nPr)₂NC(O)CH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO₂) (i) (nPr)₂NC(O)CH₂OOCCH₂Cl

Při teplotě místnosti se 12 hodin míchá směs (nPr)₂NC(O)CH₂OH (244 mg, 1,53 mmol; příklad 30 12(i)) a z bromacetylchloridu (270 mg, 1,72 mmol). Směs se vlije do vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se methylenchloridu. Organická fáze se promyje vodným roztokem hydrogensíranu draselného (0,2M) a solankou, vysuší se a zkoncentruje se.

FAB-MS: (m+1) = 237 (m/z)

Ή-NMR: (400MHz, CDC1₃) δ 4,82 (s, 2H), 4,22 (s, 2H), 3,31-3,26 (t, 2H), 3,10-3.15 (t, 2H), 1,68-1,52 (m, 2H), 1,97-0,86 (m, 6H) (ii) (nPr)₂NC(O)CH₂OOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO₂)

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOBn(4-NO₂) (343 g, 0,62 mmol; příklad 62(ii)) a z (nPr)₂NC(O)CH₂OOCCH₂Cl (160 mg,

-52CZ 298709 B6

0,68 mmol; příklad 62(ii)) a z (nPr)2NC(O)CH₂OOCCH₂Cl (160 mg, 0,68 mmol, ze stupně (i)).. Výtěžek je 89 mg (19 % teorie).

FAB-MS: (m+l) = 750 (m/z)

Příklad 68 (2Me)BnOOCCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH₂OOCtBu

Uvedená sloučenina se připraví obdobně jako podle příkladu l(iii) z H-(R)Cgl-Aze-PabCOOCH₂OOCtBu (380 mg, 0,71 mmol; příklad 12(v)) a z 2-(methyl)benzylbromacetátu (215 mg, 0,88 mmol, příklad 32(i)). Výtěžek je 37 mg (7,5 % teorie).

FAB-MS: (m+l) = 692 (m/z)

Příklad 69

Sloučeniny podle příkladů 1 až 68 byly všechny testovány testem A a všechny vykázaly hodnotu IC₅₀TT vyšší než 1,0 μΜ, (nebyly tedy aktivní na thrombin jako takový; aktivní inhibitor HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H vykazuje IC₅₀TT 0,01 μΜ.

Příklad 70

Sloučeniny podle příkladů 1 až 68 byly testovány jedním, dvěma nebo všemi testy B, C a/nebo D a všechny vykazují orální a/nebo parenterální biologickou dostupnost u kiys, jako aktivní inhibitor HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H buď jako volné kyseliny, a/nebo jejich jeden nebo několik esterů. Na základě předpokladu, že HOOC-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H se tvoří v krysách, byla biologická dostupnost vypočtená podle vzorců předepsaných v testech B a/nebo C jako přiměřená.

Průmyslová využitelnost

Sloučeniny s větší účinností, menší toxicitou, déle působící se širší aktivitou s menšími vedlejšími účinky a ochotněji absorbovatelné pro výrobu jako prodrogy pro výrobu inhibitorů thrombinu.

Claims (24)

1. Peptidové deriváty obecného vzorce I

R'O(O)C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-R² (I) kde

R¹ znamená skupinu -R³ nebo -A’C(O)N(R⁴)R⁵ nebo -A'C(O)OR⁴,

55 A¹ znamená alkylenovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku,

-53CZ 298709 B6

R², který nahrazuje jeden z atomů vodíku v amidinové jednotce Pab-H, znamená hydroxyskupinu, skupinu obecného vzorce OC(O)R⁶, C(O)OR⁷ nebo C(O)OCH(R⁸)OC(O)R⁹,

5 R³ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 10 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 10 atomy uhlíku, která může být substituována alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy io uhlíku v alkylovém podílu, která může být popřípadě substituována alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkyloxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo atomem halogenu,

R⁴ a R⁵ znamenají na sobě nezávisle atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

15 alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, fenylovou skupinu, 2-naftylovou skupinu nebo v případě, kdy R¹ znamená skupinu vzorce -A'C(O)N(R⁴)R⁵, spolu s atomem dusíku, na který jsou vázány, znamená pyrrolidi20 nylovou skupinu nebo piperidylovou skupinu,

R⁶ znamená alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 17 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 17 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 17 atomů uhlíku,

25 cykloalkylovou skupinu se 3 až 17 atomy uhlíku, fenylovou skupinu nebo 2-naftylovou skupinu, přičemž všechny tyto skupiny jsou popřípadě substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinou, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinou se

30 3 až 6 atomy uhlíku nebo atomem halogenu,

R⁷ znamená skupinu 2-naftylovou, fenylovou, alkylfenylovou s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu, přičemž všechny tyto skupiny jsou popřípadě substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku,

35 alkynylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinou, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinou se 3 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo atomem halogenu, nebo R⁷ znamená alkylovou skupinu s 1 až 12 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 12 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 12 atomy

40 uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 12 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 12 atomy uhlíku, která je popřípadě substituována alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, acyloxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo atomem halogenu,

45 R⁸ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje mezi 4 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 nebo 4 atomy uhlíku,

50 R⁹ znamená skupinu 2-naftylovou, fenylovou, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu s 2 až 8 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje mezi 4 a 8 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, které jsou popřípadě substituována atomem halogenu,

-54CZ 298709 B6 nebo R⁹ znamená alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo acyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

Cgl znamená zbytek cyklohexylglycinu,

Aze znamená zbytek S-azetidin-2-karboxylové kyseliny a

Pab je odvozen od H-Pab-H, který má význam l-amidino-4-aminomethylbenzenu, ío za podmínky, že když

R¹ znamená skupinu R³, R³ znamená skupinu benzylovou, methylovou, ethylovou, n-butylovou nebo n-hexylovou a R² znamená skupinu vzorce C(O)OR⁷, potom R⁷ neznamená benzylovou skupinu, a jejich farmaceuticky vhodné soli.

2. Peptidové deriváty podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená A¹ alkylenovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a R¹ skupinu vzorce -A’C(O)N(R⁴)R⁵ a ostatní symboly mají v nároku 1

20 uvedený význam.

3. Peptidové deriváty podle nároku 1 nebo 2 obecného vzorce I, kde znamená R⁴ atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou

25 skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, jestliže R¹ znamená skupinu vzorce -A^]C(O)N(R⁴)R⁵ a ostatní symboly mají v nároku 1 nebo 2 uvedený význam.

4. Peptidové deriváty podle některého z nároků 1 až 3 obecného vzorce I, kde znamená R⁵

30 alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu se 4 až 6 atomy uhlíku, jestliže R¹ znamená skupinu vzorce -A^]C(O)N(R⁴)R⁵ a ostatní symboly mají v nároku 1 až 3 uvedený význam.

5. Peptidové deriváty podle některého z nároků 1 až 3 obecného vzorce I, kde znamená R⁴ a R⁵ spolu dohromady pyrrolidinylovou skupinu, jestliže R¹ znamená skupinu vzorce -A’C(O)N(R⁴)R⁵ a ostatní symboly mají v nároku 1 až 3 uvedený význam.

40

6. Peptidové deriváty podle některého z nároků 2 až 5 obecného vzorce I, kde A¹ znamená alkylenovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, R⁴ znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku a R⁵ znamená alky45 lovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu s 5 nebo 6 atomy uhlíku nebo R⁴ a R⁵ znamenají dohromady pyrrolidinylovou skupinu a ostatní symboly mají v nároku 2 až 5 uvedený význam.

7. Peptidové deriváty podle nároku 1 obecného vzorce 1, kde A¹ znamená alkylenovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, jestliže R¹ znamená skupinu vzorce -A’C(O)OR⁴ a ostatní symboly mají v nároku 1 uvedený význam.

-55CZ 298709 B6

8. Peptidové deriváty podle nároku 1 nebo 7 obecného vzorce I, kde znamená R⁴ alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, jestliže R¹

5 znamená skupinu vzorce -A'C(O)OR⁴ a ostatní symboly mají v nároku 1 nebo 7 uvedený význam.

9. Peptidové deriváty podle nároku 7 nebo 8 obecného vzorce I, kde znamená A¹ alkylenovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, R⁴ znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkenyloio vou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, a ostatní symboly mají v nároku 7 nebo 8 uvedený význam.

15

10. Peptidové deriváty podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R³ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, kteráje lineární nebo v případě, že má dostatečný počet atomů uhlíku, může být rozvětvená, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku, nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy

20 uhlíku, která je popřípadě substituována, nebo R³ znamená alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu, přičemž tato skupina může být popřípadě substituována a alkylové podíly jsou lineární nebo v případě, že mají dostatečný počet atomů uhlíku rozvětvené, jestliže R¹ znamená skupinu R³ a ostatní symboly mají v nároku 1 uvedený význam.

25

11. Peptidové deriváty podle nároku 1 nebo 10 obecného vzorce I, kde R¹ znamená atom vodíku, lineární alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, rozvětvenou alkylovou skupinu se 3 až 10 atomy uhlíku, substituovanou cykloalkylovou skupinu se 4 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 4 až 10 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v lineárním alkylovém podílu nebo popřípadě substituovanou alkylfenylovou

30 skupinu se 3 atomy uhlíku v rozvětveném alkylovém podílu a ostatní symboly mají v nároku 1 nebo 10 uvedený význam.

12. Peptidové deriváty podle nároku 11 obecného vzorce I, kde R¹ znamená lineární alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku nebo popřípadě

35 substituovanou alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v lineárním alkylovém podílu a ostatní symboly mají v nároku 11 uvedený význam.

13. Peptidové deriváty podle některého z nároků 1 až 12 obecného vzorce I, kde R² znamená hydroxy skupinu a ostatní symboly mají v nároku 1 až 12 uvedený význam.

14. Peptidové deriváty podle některého z nároků 1 až 12 obecného vzorce I, kde R⁶ znamená popřípadě substituovanou fenylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 17 atomy uhlíku, kteráje lineární nebo v případě, že má dostatečný počet atomů uhlíku rozvětvená, nebo alkenylovou skupinu se 2 až 17 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 17 atomy uhlíku, alkylovou

45 skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 17 atomů uhlíku, nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 17 atomy uhlíku, jestliže R² znamená skupinu OC(O)R⁶ a ostatní symboly mají v nároku 1 až 12 uvedený význam.

15. Peptidové deriváty podle nároku 14 obecného vzorce I, kde R⁶ znamená popřípadě sub50 stituovanou fenylovou skupinu, lineární alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, rozvětvenou alkylovou skupinu se 3 nebo 4 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 17 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 17 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 17 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 17 atomy uhlíku, nebo cis-oleylovou skupinu a ostatní symboly mají v nároku 14 uvedený

55 význam.

-56CZ 298709 B6

16. Peptidové deriváty podle nároku 15 obecného vzorce I, kde R⁶ znamená lineární alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s 3 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 17 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 17 atomy uhlíku, alkylovou

5 skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 17 atomů uhlíku, nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 17 atomy uhlíku, a ostatní symboly mají v nároku 15 uvedený význam.

17. Peptidové deriváty podle některého z nároků 1 až 12 obecného vzorce I, kde R⁷ znamená ío popřípadě substituovanou fenylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 12 atomy uhlíku, která je popřípadě substituovaná a je lineární nebo v případě, že má dostatečný počet atomů uhlíku rozvětvená, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku, nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, kteráje popřípadě

15 substituována, nebo znamená alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu, kteráje popřípadě substituovaná a alkylové podíly jsou lineární nebo v případě, že mají dostatečný počet atomů uhlíku rozvětvené, jestliže R² znamená skupinu OC(O)R⁷ a ostatní symboly mají v nároku 1 až 12 uvedený význam.

20

18. Peptidové deriváty podle nároku 17 obecného vzorce I, kde R⁷ znamená popřípadě substituovanou a/nebo popřípadě nenasycenou lineární alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo popřípadě substituovanou a/nebo rozvětvenou alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku, nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 6

25 atomy uhlíku, rozvětvenou alkylovou skupinu se 3 nebo 4 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou fenylovou skupinu nebo popřípadě substituovanou alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v lineárním alkylovém podílu, nebo popřípadě substituovanou alkylfenylovou skupinu se 3 atomy uhlíku v rozvětveném alkylovém podílu a ostatní symboly mají v nároku 17 uvedený význam.

19. Peptidové deriváty podle nároku 18 obecného vzorce I, kde R⁷ znamená popřípadě substituovanou lineární alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo popřípadě substituovanou rozvětvenou alkylovou skupinu se 3 nebo 4 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalky35 lovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 6 atomů uhlíku, nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v lineárním alkylovém podílu nebo alkylfenylovou skupinu se 3 atomy uhlíku v rozvětveném alkylovém podílu a ostatní symboly mají v nároku 18 uvedený význam.

40 20. Peptidové deriváty podle některého z nároků 1 až 12 obecného vzorce I, kde R⁸ znamená atom vodíku nebo methylovou skupinu, jestliže R² znamená skupinu C(O)OCH(R⁸)OC(O)R⁹ a ostatní symboly mají v nároku 1 až 12 uvedený význam.

21. Peptidové deriváty podle některého z nároků 1 až 12 nebo 20 obecného vzorce I, kde R⁹

45 znamená fenylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, která je popřípadě substituovaná a je lineární nebo v případě, že má dostatečný počet atomů uhlíku rozvětvená, alkenylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 8 atomů uhlíku, nebo cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, která je popřípadě substituována,

50 jestliže R² znamená skupinu C(O)OCH(R⁸)OC(O)R⁹ a ostatní symboly mají v nároku 1 až 12 nebo 20 uvedený význam.

22. Peptidové deriváty podle nároku 20 nebo 21 obecného vzorce I, kde R⁸ znamená atom vodíku nebo methylovou skupinu a R⁹ znamená fenylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu s 5

55 až 7 atomy uhlíku, lineární alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, rozvětvenou alkylovou sku-57CZ 298709 B6 pinu se 3 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku, nebo popřípadě substituovanou cykloalkylovou skupinu se 7 nebo 8 atomy uhlíku a ostatní symboly mají v nároku 20 nebo 21 uvedený význam.

5 23. Peptidové deriváty podle nároku 22 obecného vzorce I, kde R⁸ znamená atom vodíku a R⁹ znamená cykloalkylovou skupinu s 5 až 7 atomy uhlíku, lineární alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku, alkynylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku, alkylovou skupinou ukončenou cykloalkylovou skupinu, kde tento celek obsahuje od 4 do 8 atomů uhlíku, nebo popřípadě substituovanou cykloalkylovou skupinu se 7 nebo 8 atomy ío uhlíku a ostatní symboly mají v nároku 22 uvedený význam.

24. Peptidové deriváty podle některého z předcházejících nároků obecného vzorce I, kde R¹ znamená R³ a R³ znamená alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu, která může být substituována nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, která může být sub15 stituována, a ostatní symboly mají v nároku 1 až 23 uvedený význam.

25. Peptidové deriváty podle nároku 24 obecného vzorce I, kde případným substituentem je methylová skupina a ostatní symboly mají v nároku 24 uvedený význam.

20 26. Peptidové deriváty podle některého z předcházejících nároků obecného vzorce I, kde R² znamená skupinu OC(O)R⁷ a R⁷ znamená popřípadě substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 12 atomy uhlíku, přičemž případným substituentem je atom halogenu nebo alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku a ostatní symboly mají v nároku 1 až 25 uvedený význam.

25 27. Peptidové deriváty podle nároku 26 obecného vzorce 1, kde případným substituentem je atom chloru nebo methoxyskupina a ostatní symboly mají v nároku 26 uvedený význam.

28. Peptidové deriváty podle některého z předcházejících nároků obecného vzorce I, kde R² znamená skupinu OC(O)R⁷ a R⁷ znamená popřípadě substituovanou fenylovou skupinu, přičemž

30 případným substituentem je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo atom halogenu a ostatní symboly mají v nároku 1 až 27 uvedený význam.

29. Peptidové deriváty podle nároku 28 obecného vzorce I, kde případným substituentem je methylová skupina, methoxyskupina nebo atom chloru a ostatní symboly mají v nároku 28 uve35 děný význam.

30. Peptidové deriváty podle některého z předcházejících nároků obecného vzorce I, kde R² znamená skupinu OC(O)R⁷ a R⁷ znamená popřípadě substituovanou alkylfenylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém podílu, přičemž případným substituentem je nitroskupina a ostatní

40 symboly mají v nároku 1 až 29 uvedený význam.