CZ298398A3 - Farmaceutický přípravek - Google Patents

Description

Oblast techniky

Vynález se týká použití 2-methyl-4-(4-methyl-l-piperazinyl)-10Hthieno[2,3-b][1,5]benzodiazepinu, dále označovaného jako „olanzapin pro přípravu léčiva k léčení migrénové bolesti.

Dosavadní stav techniky

Předložený vynález přináší použití olanzapinu pro léčení migrénové bolesti.

Existují požadavky na účinnější analgetická činidla se sníženými vedlejšími účinky a toxicitou, která nezpůsobují závislost. Ideální analgetikum snižuje vědomí bolesti, přináší analgetické působení pro širokou škálu typů bolestí, působí uspokojivě, ať je podáváno orálně nebo parenterálně, přináší minimální nebo žádné vedlejší účinky a nemá tendenci vytvářet odolnost nebo závislost a je relativně laciné. Obzvláště výhodný lék pro migrénovou bolest je sloučenina, která minimalizuje nebo odstraňuje migrénovou bolest.

Přihlašovatelé zjistili, že olanzapin má mnoho vlastností léčiva migrénové bolesti.

Je známo, že olanzapin přináší antipsychotický účinek a je komerčně dostupný pro léčení psychóz. Olanzapin je známá sloučenina a je popsán v U.S. Patentu č. 5,229,382 jako

- 2akutních mánií, stavů mírné úzkosti a psychózy. U.S. Patent č. 5,229,382 je zde celý zahrnut jako reference. Překvapivě a podle tohoto vynálezu přihlašovatelé zjistili, že olanzapin může být vhodný pro léčení migrénové bolesti. Olanzapin může naplnit dlouho pociťovanou potřebu po bezpečném a účinném léčení migrénové bolesti.

Podstata vynálezu

Předložený vynález přináší způsob pro léčení migrénové bolesti, zahrnující podávání účinného množství olanzapinu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pacientovi, který má jeho potřebu.

Olanzapin má obecný vzorec

a nebo je použita adiční sůl· kyseliny sloučeniny tohoto vzorce.

Je obzvláště výhodné, aby olanzapin byl v polymorfní formě II, která má typické rentgenové difrakční spektrum, které je • · · · · reprezentováno následujícím interplanární rozestupy:

d

10,2689

8,577

7,4721 _________7,12 5____________

6,1459

6, 071

5,4849

5,2181

5,1251

4,9874

4,7665

4,7158

4,4787

4,3307

4,2294

4, 141

3,9873

3,7206

3,5645

3,5366

3,3828

3,2516

3, 134

3,0848

3,0638

3,0111

2,8739 __ 4 _ ··♦· • ·

2,8102 2,7217 2,6432 2,6007

Typický příklad rentgenového difrakčního spektra formy II je uveden dále,___přičemž d představuje interplanární rozestupy a

I/Ii představuje typické relativní intenzity:

d	I/Ii
10,2689	100,00
8,577	7,96
7,4721	1,41
7, 125	6, 50
6,1459	3, 12
6,071	5,12
5,4849	0,52
5,2181	6, 86
5,1251	2,47
4,9874	7,41
4,7665	' 4,03
4,7158	6,80
4,4787	14,72
4,3307	1,48
4,2294	23, 19
4,141	' 11,28
3,9873	9, 01
3,7206	14,04
3,5645	2,27
3,5366	4,85

·· φ

- £-

3,3828	3,47
3,2516	1,25
3,134	0,81
3,0848	0,45
3,0638	1,34
3,0111	3,51
2,8739	0,79
2,8102	1,47
2,7217	0,20
2,6432	1,26
2,6007	0,77

Rentgenové difrakční spektrum popsané zde bylo získáno použitím rentgenového práškového difraktometru Siemens D5000 který má měděný radiační zdroj K_a s vlnovou délkou 1 =

1,541A.

Dále je výhodné, aby polymorfní forma II olanzapinu byla podávána jako v zásadě čistá polymorfní forma II olanzapinu.

Jak je zde používán, výraz „v zásadě čistý se vztahuje k formě II obsahující méně než 5% formy I, výhodně méně než asi 2% formy I a výhodněji méně než asi 1% formy I. Dále výraz „v zásadě čistá forma II by měla obsahovat méně než asi 0„, 5% souvisejících látek, přičemž „související látka znamená nežádoucí chemické nečistoty nebo zbytkové rozpouštědlo nebo vodu. Konkrétně „v zásadě čistá” forma II by měla obsahovat méně než asi 0,05% obsahu acetonitrilu a výhodněji méně než asi 0,005% obsahu acetonitrilu. Navíc by polymorfní forma podle předloženého vynálezu měla obsahovat méně než 0,5%

- ζvody.

Polymorfní forma, kterou lze získat způsobem podle patentu č. 5,229,382 je označována jako forma I a má typické rentgenové difrakční spektrum v zásadě jako spektrum uvedené dále, které bylo získáno použitím rentgenového práškového difraktometru Siemens D5000, kde d představuje interplanární rozestupy:

d

9,9463 8,5579 8,2445 6,8862 6,3787 6,2439 5,5895 5,3055 4,9815 4,8333 4,7255 4,6286 4,533 4,4624 4,2915 4,2346 4,0855 3,8254 3,7489 3,6983 3,5817

3,5064

3,3392

3,2806

3,2138

3,1118

3,0507

2,948

2,8172

2,7589

2,6597

2,6336

2,5956

Typický příklad rentgenového difrakčního spektra formy I je uveden dále, přičemž d představuje interplanární rozestupy a I/Ii představuje typické relativní intenzity:

d	I/Ii
9, 9463	100,00
8,5579	15, 18
8,2445	1, 96
6,8862	14,73
6,3787	4,25
6,2439	5,21
5,5895	1,10
5,3055	0,95
4,9815	6, 14
4,8333	68, 37
4,7255	21,88
4,6286	3, 82

4,533	17,83
4,4624	5,02
4,2915	9, 19
4,2346	18,88
4,0855	17,29
3,8254	6,49
3,7489 _______	. —_ 10,64
3,6983	14,65
3,5817	3, 04
3,5064	9, 23
3,3392	4,67
3,2806	1, 96
3,2138	2,52
3,1118	4,81
3,0507	1, 96
2, 948	2,40
2,8172	2,89
2,7589	2,27
2,6597	1,86
2,6336	1, 10
2,5956	1,73

Rentgenové difrakční spektrum popsané zde bylo získáno použitím měděného radiačního zdroj K_a s vlnovou délkou 1 = 1,541A. Interplanární rozestupy ve sloupci, označeném „d” jsou v Angstromech. Typické relativní intenzity se nacházejí ve sloupci, označeném „Ι/Ιχ”.

Jak je zde používán, výraz „savec” se vztahuje k třídě Mammalia vyšších obratlovců. Výraz „savec” zahrnuje, aniž by tím byl omezen, člověka. Výraz „léčení, jak je zde používán, zahrnuje profylaxi uvedeného stavu nebo zlepšení nebo odstranění stavu, pokud již nastal.

Olanzapin je účinný v širokém rozmezí dávek; je však žádoucí, aby byl podáván v co nejnižší možné dávce. Tak například denní dávky olanzapinu jsou normálně v rozmezí od a.si_l__mg^-dQ asi 30 mg denně. Je však zřejmé, že množství sloučeniny, které bude ve skutečnosti podáváno bude určeno lékařem a to v závislosti na relevantních okolnostech, které zahrnují typ akutní bolesti, která má být léčena, věk, váhu a odezvu individuálního pacienta, sílu pacientových symptomů a zvolenou cestu podávání a proto výše uvedené rozmezí dávek není zamýšleno tak, aby omezovalo jakýmkoli způsobem rozsah předloženého vynálezu. Zatímco popisované sloučeniny jsou výhodně podávány orálně člověku, u kterého může nastat migrénová bolest nebo který migrénovou bolestí trpí, tyto sloučeniny mohou také být podávány řadou jiných způsobů, jako je podávání cestou transdermální, parenterální, subkutánní, intranasální, intramuskulární a intravenózní. Takové přípravky mohou být navrženy tak, aby poskytovaly zpožděné nebo řízené uvolňování za použití farmaceutických technik, které jsou dobře známy odborníkům.'

Jak je zde používán, výraz „léčení' migrénové bolesti u pacientů, u nichž je tendence k vyvinutí odstranění vzniklé zahrnuje profylaxi se takové bolesti a zlepšení nebo migrénové bolesti, pokud k ní došlo nebo charakteristických symptomů takové migrénové bolesti.

úlevu

- to *-·

Jak je zde používán, výraz „migrénová bolest je používán ve smyslu, ve kterém je běžně užíván odborníky.

Výsledky farmakologických studií ukazují, že olanzapin má účinek na muskarinické cholinergní receptory. Sloučenina působí na receptory dopaminu D-l a D-2 jak bylo prokázáno pomocí vazebného testu IC₅₀ s méně než 1 μΜ u 3H-SCH233390 (Billard a kol. Life Sciences 35:1885 (1984)), respektive 3H spiperonu (Seeman a kol. Nátuře 216:717 (1976)). Dále, olanzapin je účinný na 5-HT-2 receptor a 5-HT1C receptor. Komplexní farmakologický profil sloučeniny poskytuje lék, který může být vhodný pro léčení migrénové bolesti.

Podávaná dávka se bude přirozeně měnit v závislosti na známých faktorech jako jsou farmakodynamické vlastnosti konkrétního činidla a jeho způsobu a cestě podávání; věku, zdraví a váze příjemce; na povaze a rozsahu symptomů, druhu současně probíhajícího léčení, frekvenci léčení a požadovaném účinku. Obvykle může být denní dávka taková, aby denní dávka účinné složky byla podávána v rozmezí od asi 1 mg do asi 25 mg olanzapin denně. Mohou být požadovány dávky od asi 1 mg do asi 50 mg oianzapinu.

Kompozice, vhodná pro· vnitřní -podávání obsahuje od asi jedné poloviny (0,5) miligramu do asi 500 miligramů účinné složky na dávku. V těchto farmaceutických kompozicích je účinná složka obvykle přítomna v množství od asi 0, 5% do asi 95% hmotnostních vzhledem k celkové hmotnosti kompozice.

• ·

- yysloučeninu. granulárním

Typická kompozice zahrnuje olanzapin nebo jeho farmaceuticky přijatelnou adiční sůl kyseliny, spojené s farmaceuticky přijatelným excipientem, kterým může být nosič nebo ředidlo nebo mohou být zředěny nosičem nebo obsaženy v nosiči, který může být ve tvaru kapsle, sáčku, papíru nebo jiného tvaru obsahujícího účinnou látku. Při vytváření kompozice mohou být použity —konvenční - techní-ky-- p ro přípravu------farmaceutických kompozic. Tak například aktivní sloučenina je obvykle smíchána s nosičem nebo zředěna nosičem nebo uzavřena v nosiči, který může být ve tvaru ampulky, kapsle, sáčku, papíru nebo jiného obalu. Pokud nosič slouží jako ředidlo, může jím být pevný, polotuhý nebo kapalný materiál, který slouží jako vehikulum, excipient nebo médium pro aktivní Aktivní sloučenina může být adsorbována na pevném obalu například v sáčku. Některými příklady vhodných nosičů jsou voda, roztoky solí, alkoholy, polyethylenglykoly, polyhydroxyethoxylovaný ricinový olej, laktóza, amylóza, stearan horečnatý, talek, kyseliny, monoglyceridy a diglyceridy mastných pentaerythritol, estery mastných kyselin, hydroxymethylcelulóza a polyvinylpyrrolidon. Přípravky mohou také zahrnovat smáčedla, emulzifikační a suspenzní činidla, konzervační činidla, sladidla nebo činidla dodávající chuť. Přípravky _podle předloženého vynálezu mohou být formulovány tak, aby poskytovaly okamžité, stálé nebo zpožděné uvolňováni účinné složky po podání pacientovi využitím postupů dobře známých odborníkům.

želatina, křemičité kyselin,

Farmaceutické přípravky mohou být sterilizovány a smíchány, pokud je to požadováno, s pomocnými činidly, emulzifikátory,

- Í2solemi pro ovlivnění osmotického tlaku, pufry a/nebo barvidly a podobně, které nereagují nepříznivě s účinnou sloučeninou.

Pro parenterální aplikaci jsou obzvláště vhodné injektovatelné roztoky nebo suspenze, výhodně vodné roztoky účinné sloučeniny, rozpuštěné v polyhydroxylovaném ricinovém oleji.

Tablety, dražé nebo kapsle, které mají talkový a/nebo uhlovodíkový nosič nebo vazebné činidlo a podobně jsou obzvláště vhodné pro orální aplikaci. Výhodné nosiče pro tablety, dražé nebo kapsle zahrnují laktózu, kukuřičný škrob, a/nebo bramborový škrob. Sirup nebo elixír může být použit v případech, kdy je použito oslazené vehikulum. Obecně je olanzapin podáván v jednotkových dávkách, zahrnujících od asi 1 mg do asi 30 mg látky ve farmaceuticky přijatelném nosiči na jednotkovou dávku.

Nej výhodněji je tuhý orální přípravek obsažen v obalovém materiálu, který chrání přípravek proti vlhkosti a světlu. Tak například vhodné obalové· materiály zahrnují jantarově zbarvené lahvičky z polyethylenu o vysoké hustotě, jantarově zbarvené skleněné lahvičky a další obaly, vyrobené z materiálů, které zabraňují průchodu světla. Nejvýhodněji obal zahrnuje vysušující látku. Obal může být uzavřen hliníkovou fólií, která poskytuje požadovanou ochranu a udržuje stabilitu produktu..

Kompozice podle předloženého vynálezu mohou být vhodné pro podávání živočichům. Mezi takovéto živočichy patří jak ·· · ·· ·9 « 9 9 9

9 · ··

9 · 9 · 9 9 domestikovaná zvířata, například hospodářská zvířata, laboratorní zvířata a domácí zvířata, tak i nedomestikovaná zvířata jako jsou divoce žijící zvířata. Výhodněji je živočichem obratlovec. Nejvýhodněji je sloučenina podle předloženého vynálezu podávána savci. Obzvláště výhodné je podávání sloučeniny domácímu savci nebo člověku. Nejvýhodnějším savcem je člověk. Pro uvedené_účely může být sloučenina podle předloženého vynálezu podávána jako aditivum do potravy nebo krmivá.

Způsoby testování užitečnosti

Neočekávaný migrénový analgetický účinek olanzapinu byl prokázán testy, které byly nejprve prováděny u myší. Myší samci byli ponecháni hladovět po 1-2 hodiny a zváženi. Pro následující studie byly použity myši, které v okamžiku provádění testů vážily 18-22 gramů. Všem myším byla postupně orální cestou podána suspenze klasického analgetika a/nebo olanzapinu. Dávky byly kódovány za použití kódu, který nebyl znám pozorovateli.

Zásobní suspenze olanzapinu byla připravena rozpuštěním olanzapinu v 10% kyselině mléčné a doplněním na konečný objem destilovanou vodou. Směs mohla být sonikována po asi 10 až 15 vteřin použitím ultrazvukového systému. Všechny dávkové suspenze byly připraveny ředěním zásobní suspenze destilovanou vodou.

Všechny suspenze byly použity do dvou hodin po jejich přípravě.

4«

4 4 4 ··«· 4 «44 4*4 44

-/4Test záškubů s myší

Uznávaný standardní test pro detekci a porovnávání analgetického účinku různých tříd analgetických sloučenin, u kterého existuje dobrá korelace s analgetickým účinkem na člověka jsou prevence záškubů myši, vyvolávaných fenyi-pbenzochinonem. [H. Blumberg a kol. Proč. Soc. Exp. Biol. Med., 118, 763-766 (1965)].

Myším, ošetřeným různými dávkami olanzapinu nebo vehikula je intraperitoneálně injektována standardní dávka fenyl-pbenzochinonu 5 minut před určeným pozorovacím časovým intervalem. Fenyl-p-benzochinon je připraven ve formě roztoku 0,1 mg/ml v asi 5% objemových ethanolu ve vodě. Záškubová dávka 1,25 mg/kg je injektována v objemu asi 0,25 ml/lOg. Pro účely počítání je „záškub indikován protažením nebo smrštěním celé abdominální partie v průběhu pozorovacího časového intervalu, který začíná zhruba pět minut po podání dávky fenyl-p-benzochinonu.

Všechny hodnoty ED₅₀ a jejich rozmezí 95% pravděpodobnosti byly určeny použitím uznávaných numerických metod. Jako příklad viz W.F. Thompson, Bacteriological Rev., 11, 115-145 (1947) .

Uznávaný model určování analgetického působení na migrénovou bolest je model s podvázáním ischiatického nervu:

• · « 4 » · · • ·

- isZáškuby indukované kyselinou octovou

Další standardní test pro detekci a porovnávání analgetického účinku různých tříd analgetických sloučenin, u kterého existuje dobrá korelace s analgetickým účinkem na člověka jsou záškuby myši, vyvolávané kyselinou octovou. Myším byly před- tes t ováním orálně podávány růz né dáv ky’ olan zap inu nebo placeba. Potom byla myším intraperitoneálně podána injekce kyseliny octové (0,5% roztok, 10 ml/kg) 5 minut před určeným pozorovacím intervalem. Pro účely počítání je „záškub indikován protažením nebo smrštěním celé abdominální partie v průběhu pozorovacího časového intervalu, který začíná zhruba pět minut po podání dávky kyseliny octové. Inhibice záškubů je důkazem analgetického účinku.

Haubrich, D.R., Ward, S.J., Baizman, E., Bell, M.R., Bradford, J. , Ferrari, R. , Miller, M., Perrone, M. , Pierson, A.K., Saelens, J.K. a Luttinger, D.: „Farmakology of pravadoline: a new analgesic agent, The Journal of Farmakology and Experimental Therapeutics 255 (1990) 511-522.

Předpokládá se, že neurogenická meningeální extravazace vede k migrénové bolesti; proto je nejprve měřena použitím standardních procedur vazebná afinita olanzapinu k receptorům serotoninu, který souvisí s tímto stavem. Například ke schopnosti sloučeniny vázat se k receptoru subtypu 5-HT_1F dochází v zásadě tak, jak je popsáno v N. Adham a kol., Proceedings of the National Academy of Sciences (USA), 90,

408-412 (1993:

Pro účely srovnání je vazebná afinita olanzapinu k dalším receptorům serotoninu určena v zásadě

-tétak, jak je popsán níže s výjimkou, že jsou namísto zde používaného receptorového klonu 5-HT_1F, který je zde použit, používáno jiných klonovaných receptorů.

Příprava membrán

Membrány byl y p ř ipraveny z1 rans fe kt ovaných Ltk-buně k, které byly pěstovány až do 100% splynutí. Buňky byly promývány dvakrát fosforečnanem pufrovaným solným roztokem, přeneseny z kultivačních misek do 5 ml ledově studeného fosforečnanem pufrovaného roztoku a centrifugovány při 200 g po dobu 5 minut při teplotě 4°C. Pelet byl resuspendován <v 2,5 ml ledově studeného pufru Tris (20 mM Tris HC1, pH=7,4 při teplotě 23°C, 5 mM EDTA) a homogenizován Wheatonovým tkáňovým drtičem. Lyzát byl následně centrifugován při 200 g po dobu 5 minut při teplotě 4°C na velké fragmenty peletu, které byly odstraněny. Supernatant byl odebrán a centrifugován při 40,000 g po dobu 20 minut při teplotě 4°C. Pelet pocházející z této centrifugace byl jednou promýván v ledově studeném promývacím pufru Tris a resuspendován ve finálním pufru, obsahujícím 50 mM Tris HC1 a 0,5 mM EDTA, pH=7,4 při teplotě 23°C. Připravené membrány byly uchovávány na ledu a použity do dvou hodin pro radioligandové vazebné pokusy. Koncentrace proteinů byly určovány způsobem podle Bradforda (Anal. Biochem., 12, 248-254 (1976)).

Radioligandová vazba [³H 5-HT] vazba byla prováděna použitím malé modifikace podmínek vazebného testu 5-HT_1D, který popsali Herrick-Davis a • · · é « · · · · • · · ·· · · ··· • · · « · · · ·* « ····?. · · · ·«· ·

- Z? —

Titeler (J. Neurochem., 50, 1624-1631 (1988)) s vynecháním maskovacích ligandů. Radioligandové vazebné pokusy byly prováděny při teplotě 37 °C v celkovém objemu 250 ml pufru (50 mM Tris, 10 mM MgCl₂, 0,2 mM EDTA, 10 mM pargylinu, 0,1% askorbátu, pH=7,4 při teplotě 37°C) v 96 jamkové mikrotitrační destičce. Saturační pokusy byly prováděny pou ži11m- [³ϊI]5-HT- při 12 různých končentracích~ v rczoezí od----------”

0,5 nM do 100 nM. Přemisťovací pokusy byly prováděny s použitím 4,5-5,5 nM [³H]5-HT. Vazebný profil sloučenin v kompetičních pokusech byl získán použitím 10-12 koncentrací sloučeniny. Inkubační doby byly 30 minut pro saturační i pro přemisťovací pokusy a byly založeny na počátečních výzkumech, které určily rovnovážné vazebné podmínky. Nespecifická vazba byla definována v přítomnosti 10 mM 5-HT. Vazba byla iniciována přidáním 50 ml membránového homogenátu (10-20 mg) . Reakce byla ukončena rychlou filtrací přes předem navlhčené (0,5% poylethylenimin) filtry použitím přístroje 48R Brandel Cell Harvester (Gaithersburg, MD). Filtry byly následně promývány po 5 vteřin ledově studeným pufrem (50 mM Tris HC1, pH=7,4 při teplotě 4°C), sušeny a umístěny do nádobek, obsahujících 2,5 ml Readi-Safe (Beckman, Fullerton, CA) a radioaktivita je měřena použitím kapalinového scintilačního čítače Beckman LS 5000TA. Účinnost čítání [³H]5-HT byla v průměru mezi 45-50%. Vazebná data byla analyzována počítačově podporovanou nelineární regresní analýzou (Accufit a Accucomp, Lunden Software, Chagrin Falls, OH) . Hodnoty IC₅₀ byly přepočítány na hodnoty Ki použitím Cheng-Pruaoffovy rovnice (Biochem. Farmakol., 22, 3099-3108 (1973).

Jak bylo popsáno v R.L. Weinshank a kol·., WO93/14201, «·> *

- /<řreceptor 5-HTi_F je funkčně vázán k G-proteinu, jak bylo změřeno na základě schopnosti serotoninu a serotoneřgických sloučenin inhibovat forskolinem stimulovanou produkci cAMP v buňkách NIH3T3, transfektovaných receptorem 5-HTi_f. Adenylátcyklázová aktivita byla určena použitím standardních technik. Maximální účinek byl dosažen serotoninem. E_max bylo urče no___dělen im inhibice olanzapinu___maximáln ím „ účinkem______a__ určením procenta inhibice. (N.Adham a kol., citováno výše; R.L. Weinshank a kol., Proceedings of the National Academy of Sciences (USA), 89, 3630-3634 (1992)) a tam citované reference.

Měřeni tvorby cAMP koncentrace koncentrací forskolinu okamžitým přidáním buňky inkubovány po

Transfektované buňky NIH3T3 (odhadnuté B_max · z jednobodového kompetičního pokusu = 488 fmoi/mg proteinu) byly inkubovány v DMEM, 5 mM theofylinu, 10 mM HEPES (4-[2-hydroxyethyl]-1piperazinethansulfonová kyselina) a 10 mM pargylinu po dobu 20 minut při teplotě 37°C, 5% CO2. Potom byly určeny křivky léku - účinek přidáním 6 různých konečných látky, následovaných (10 mM) . Následně byly dodatečných 10 minut při teplotě 37°C, 5% CO₂. Médium bylo odsáto a reakce byla zastavena přidáním 100 mM HC1. Pro důkaz kompetitivního antagonismu byla křivka odezvy na koncentraci pro 5-HT měřena paralelně, užívajíce pevné dávky methiothepinu (0,32 mM). Destičky byly uchovávány při teplotě 4°C po dobu 15 minut a potom centrifugovány po dobu 5 minut při 500 g pro separaci buněčných zbytků peletu a supernatant byl rozdělen na alikvóty a uchováván při teplotě -20°C před

- /<?určováním vytváření cAMP (cAMP radioimunologická Magnetics, Cambridge, MA) . čítače Packard COBRA Auto redukci dat.

pomocí radioimunologického pokusu testovací souprava; Advanced

Radioaktivita byla měřena použitím Gamma, vybaveného softwarem pro

Následující_____„test_________byd.._„_pr.o.váděii_______s._____cílem—u-r-ě-i-t—schopnost--------------sloučenin inhibovat proteinovou extravazaci, což je funkční pokus pro neuronální mechanismus migrény.

Tesť proteinové exťravazace

Krysy Harlan Sprague-Dawley (225-325 g) nebo morčata z

Charles River Laboratories (225-325 g) byly podrobeny anestezii intraperitoneálně pentobarbitalem sodným (65 mg/kg respektive 45 mg/kg) a umístěny ve stereotaxickém rámu (David Kopf Instruments) s incizní příčkou nastavenou na -3,5 mm pro krysy nebo -4,0 mm pro morčata. Po středovém sagitálním řezu pokožky na temeni hlavy byly lebkou vyvrtány dva páry dvoustranných otvorů (6 mm posteriálně, 2,0 a 4,0 mm laterálně u krys.; 4 mm posteriálně a 3,2 a 5,2 mm laterálně u morčat, všechny souřadnice vztaženy k bregma). Otvory byly prostrčeny páry stimulačních elektrod z nerezové oceli, které byly izolovány všude kromě konců (Rhodes Medical Systems, lne.) a to do obou hemisfér do hloubky 9 mm (krysy) nebo 10,5 mm (morčata) od pleny.

Byla obnažena femorální céva a intravenózně byla podána injekce dávky olanzapinu (1 ml/kg). Přibližně 7 minut později

- 2 obyla také intravenózně podána injekce dávky 50 mg/kg Evansovy modři, fluorescenčního barviva. Evansova modř vytváří komplexy s proteiny v krvi a funguje jako značkovač pro proteinovou extravazaci. Přesně 10 minut po injekci testované sloučeniny byl levý trigeminální ganglion stimulován po 3 minuty proudem o intenzitě 1,0 mA (5 Hz, trvání 4 msec) pomocí potenciostatu/galvanostatu Model 2 7 3 (EGGG Princeton_ Applied Research).

Patnáct minut po stimulaci byla zvířata zabita a tkáně zbaveny krve pomocí 20 ml fyziologického roztoku. Horní část lebky' byla odebrána, aby se usnadnilo odebrání durální membrány. Vzorky membrány byly odebrány z obou hemisfér, promývány vodou a rozprostřeny na mikroskopická sklíčka. Po vyschnutí byla tkáň ošetřena 70% roztokem glycerol/voda.

Fluorescenční mikroskop (Zeiss), vybavený mřížovým monochromátorem a spektrofotometrem byl použit pro určení množství Evansovy modři v každém vzorku. Byla použita excitační vlnová délka přibližně 535 nm a byla určena emisní intenzita při 600 nm. Mikroskop byl vybaven motorizovaným suportem- a také byl spojen s počítačem. To usnadňovalo počítačem řízené pohyby suportu s měřením fluorescence v 25 bodech (kroky 500 mm) u každého durálního vzorku. Střední hodnota a standardní odchylka měření byly určeny počítačem.

Extravazace indukovaná elektrickou stimulací trigeminálního ganglionu vykazuje ipsilaterální jev (to jest došlo k ní pouze na té straně pleny, na které byl stimulován trigeminální ganglion). To umožnilo, aby druhá ·· (néstimulovaná) polovina pleny byla použita jako kontrolní.

Byl vypočten poměr velikosti extravazace v pleně na stimulované straně vzhledem k nestimulované straně. Kontrolní vzorky s fyziologickým roztokem dávaly poměr přibližně 2,0 u krys a 1,8 u morčat. Ve srovnání s tím sloučenina, která účinně zabraňuje extravazaci v pleně na stimulované straně by měla mít_poměr přibližně 1,0 .—Byla—určena křivka závislost i — odezvy na dávce a byla odhadnuta dávka, která inhibuje extravazaci na 50% (ID₅₀) .

Aby bylo určeno, zda existuje vztah mezi vazebnou afinitou ke každému z receptorů 5-HTi_Da 5-HT_1Db, 5-ΗΤ_ΪΕ a 5-HT_1F a extravazaci neuronálního proteinu, byla vazebná afinita pro každý subtyp. receptorů je znázorněna proti jejich ID₅₀ v modelu extravazace proteinu. Byla provedena lineární regresní analýza na každém souboru dat a potom byl vypočten korelační faktor R².

Následující pokus byl prováděn pro změření schopnosti olanzapinu zprostředkovat vazokonstrikci králičí safeny.

Kontrakce králiči safeny

Samci, novozélandského bílého králíka (3-6 liber) (Hazleton, Kalamazoo, MI) byli usmrceni letální dávkou pentobarbitalu sodného (325 mg.) injekcí do ušní cévy. Tkáně byly zbaveny spojovací tkáně, byla do nich zavedena in šitu kanyla představovaná polyethylenovou trubicí (PESO, vnější průměr 0,97 mm) a byly umístěny do Petriho misek, obsahujících Krebsův uhličitanový pufr (popsán dále). Špičky dvou ♦ · · • · • ·

I

- ZZhypodermických jehel kalibru 30 z nerezové zahnuté do tvaru písmene L byly vsunuty do polyetylenové trubice. Cévy byly jemně natlačeny z kanyly na jehly. Jehly potom byly odtaženy od sebe tak, že dolní byla připojena vláknem k pevné skleněné tyčince a horní byla spojena vláknem s převodníkem.

Tkáně byly vloženy do orgánové lázně, obsahuj ící __ 10 ml modifikovaného Krebsova roztoku následujícího složení:

118,2 mMol NaCl, 4,6 mMol. KC1, 1,6 mMol CaCl₂*H₂0, 1,2 mMol KH2PO4, 1,2 mMol MgSOo 10,0 mMol dextrózy a 24,8 mMol NaHCC>3. Roztoky tkáňové lázně byly' udržovány při teplotě 37 °C a provzdušňovány 95% O₂ a 5% C0₂. Na safenu byla aplikována počáteční optimální klidová síla 1 g. Isometrická kontrakce byly zaznamenávána jako změna síly, určené v gramech, na Beckmanově Dynografu s převodníky Statham UC-3 a mikroúrovňovými přídavnými zařízeními. Tkáně byly ponechány, aby dosáhly rovnováhy 1 až 2 hodiny před vystavení léku. Pro kumulativní křivka agonistické žádná tkáň nebyla použita pro tkáně byla vytvořena koncentrace a odezvy a vytvoření více než dvou křivek agonistické koncentrace a odezvy. Všechny výsledky byly vyjádřeny jako střední EC₅₀ a maximální odezva byla vyjádřena v procentech vzhledem k odezvě na 67 mM KC1 podáváného původně v každé tkáni.

Tento vazokonstrikční test měří dva důležité parametry, kontrakci safeny (ECs₀) a maximální kontrakci jako procento maximální odezvy KC1. Kontrakce safeny (EC50) byla určena jako míra. dávky, která je nutná pro kontrakci tkáně na 50% maximální odezvy, kterou je specifická sloučenina schopna • · ff·· ff • · • · «

-2 3zprostředkovat. Maximální odezva, kterou je safena schopna vykázat je měřena po podávání vysoké koncentrace (67 mM) KC1. Procento maximální KC1 koncentrace je poměr maximální odezvy, kterou je specifická sloučenina schopna zprostředkovat, dělená maximální odezvou, kterou tkáň může vykázat.

M.í ra této—specifičnost i j e—poměr vasokonstrikce k účinnosti inhibice extravazace neuronálního proteinu. Tento poměr je definovaný jako Index Specifičnosti:

Korigovaná* vazokonstrikce EC₅₀ (M). Index Specifičnosti = --Extravazační ID₅₀ (mMol/kg) * Pro korekci hodnot EC₅₀ pro kontrakci safeny tak, že může být vzata do úvahy maximální kontrakce vzhledem ke KC1 pro každou individuální sloučeninu, je hodnota vazokonstrikce ID₅₀ dělena procentem maximální KC1 kontrakce, což dává „korigovanou vazokonstrikci EC₅₀ (M).

Zatímco sloučenina nebo kompozice s Indexem Specifičnosti větším než 1 je vhodná pro způsob podle předloženého vynálezu, jsou pro Index Specifičnosti výhodné větší hodnoty, yětší hodnota Indexu Specifičnosti Index indikuje větší specifičnost pro účinnost inhibice extravazace neuronálního proteinu na vazokonstrikci.

Celkově lze říci, že použitelnost s ve způsobu léčení migrénové bolesti bez podstatných vedlejších loučeniny nebo kompozice a souvisejících poruch účinků, způsobených účinků, • <

» »

·«

Z) / — 2. £-/ — vazokonstrikcí, je určena jejím Indexem specifičnosti. Index specifičnosti je poměr vazokonstrikce k účinnosti inhibice extravazace neuronálního proteinu. Měření schopnosti sloučeniny nebo kompozice zabraňovat extravazaci neuronálního proteinu je funkční test pro fyziologické události, vedoucí k migrénové bolesti.

Takové pokusy překvapivě naznačují, že olanzapin poskytuje významný analgetický účinek na migrénovou bolest.

Klinická pozorování.

Dvojnásobně slepý multicentrální klinický pokus je navržen ke zjištění bezpečností a účinnosti olanzapinu. Pacientům je náhodně podán olanzapin nebo placebo. Pacienti jsou sledováni vzhledem k vnímání bolesti za použití standardních metod.

Takové klinické pokusné výsledky naznačují, že olanzapin může být relativně bezpečná sloučenina pro léčení migrénové bolesti.

Látky, využívané podle předloženého vynálezu mohou být zakoupeny nebo připraveny řadou způsobů, které jsou dobře známy odborníkům v oboru. Olanzapin může být připraven způsobem, který popsal Chakrabarti v U.S. Patentu č. 5,229,382, který je zde celý zahrnut jako reference. Následující způsoby přípravy navíc ilustrují způsob přípravy, který je vhodný pro přípravu obzvláště výhodné polymorfní formy II olanzapinu.

9« 9 ► · · • 9

9 9 <

9 9

9

Způsoby charakterizace sloučeniny zahrnují například rentgenovou práškovou analýzu, termogravimetrickou analýzu (TGA), diferenciální skanovací kalorimeterii (DSC), titrametrickou analýzu obsahu vody a HI-NMR analýzu obsahu rozpouštědla.

Následující příklady jsou uvedeny s cílem ilustrovat předmět vynálezu a neomezují rozsah předloženého vynálezu.

Příprava 1

Technicky čistý olanzapin

Do vhodné baňky s třemi hrdly byly přidány následující látky:

Dimethylsulfoxid (analytický): Meziprodukt 1:

N-Methylpiperazin (reagent):

objemů 75 g ekvivalentů **· ·· ·· ··· • · · · · ···« • · · · · · * · · · ·· · • · · · · 9

999 9 9 ··· ··· «· 9 9

Meziprodukt 1 může být připraven použitím metod známých odborníkům. Příprava meziproduktu 1 je například popsána ve výše uvedeném patentu 5,229,382.

Podpovrchová trubice na probublávání dusíkem' byla přidána s cílem odstranit čpavek, vytvořený v průběhu reakce. Reakční směs byla zahřáta na teplotu 120°C a udržována__při této teplotě po dobu, po kterou reakce probíhala. Průběh reakce byl sledován pomocí HPLC dokud nezůstalo 5% meziproduktu 1 nezreagovaného. Po ukončení reakce byla směs ponechána pomalu zchladnout na teplotu zhruba 20°C (asi 2 hodiny). Reakční směs potom byla přenesena do vhodné baňky se třemi hrdly a plochám dnem a vodní lázně. Do tohoto roztoku bylo za míchání přidáno 10 objemů methanolu a reakční směs byla míchána při teplotě 20 °C po dobu 30 minut. Potom byly v průběhu zhruba 30 minut přidány tři objemy vody. Reakční suspenze byla ochlazena na teplotu 0°C až 5°C a míchána po dobu 30 minut. Produkt byl filtrován a mokrý’ filtrační koláč byl promýván studeným methanolem. Mokrý filtrační koláč byl potom sušen za vakua při teplotě 45°C přes noc. Produkt byl identifikován jako technický olanzapin.

Výtěžek: 76,7%; Teoreticky: 98,1%

Příprava 2

Polymorfní forma II olanzapinu

270 g vzorku technicky čistého 2-methyl-4-(4-methyl-lpipera ziny 1)-10H-thieno [-2,3-b ][ 1,5 ] benzodiazepinu bylo sus• 4 • · ·

• ·

- ZTpendováno v bezvodém ethylacetátu (2,7 1). Směs byla zahřívána na teplotu 76°C á udržována při teplotě 76°C po 30 minut. Směs byla ponechána ochladnout na teplotu 25°C. Výsledný produkt byl izolován použitím vakuové filtrace. Produkt byl identifikován jako forma II použitím rentgenové práškové analýzy.

Výtěžek: 197 g.

Způsob, který byl popsán výše pro přípravu formy II poskytuje farmaceuticky elegantní produkt, který má schopnost výtěžku větší než 97%, celkový obsah ostatních látek menší než 0,5% a výtěžek větší než 73%.

PŘÍKLAD 1

Část hydroxypropylcelulózy byla rozpuštěna v čisté vodě, aby byl vytvořen roztok pro granulaci. Zbývající hydroxypropylcelulóza (celkově 4,0% hmotnostních konečné hmotnosti tablety), která byla obzvláště jemná, byla spojena s olanzapinem (1,18% hmotnostních), laktózou (79,32% hmotnostních) a částí crospovidonu (5% hmotnostních) ve vysokovýkonném granulátoru. Všechny složky byly před přidáváním prosívány a za sucha smíchány v.granulátoru. Tato směs byla potom granulována s roztokem hydroxypropylcelulózy ve vysokovýkonném granulátoru. Granulace byla provedena použitím standardních způsobů. Vlhká granulovaná látka potom byla sušena v sušiči s fluidním ložem a tříděna. Materiál byl potom přidán do bubnového komorového mixéru. Ke granulátu byl přidán prášek, sestávající z

mikrokrystalické celulózy

-Zf(granulované) (10% hmotnostních), stearanu horečnatého (0,5% hmotnostních) a byl přidán zbytek crospovidonu. Směs byla promíchána a lisována použitím vhodných nástrojů na zařízení pro lisování tablet.

Předběžné pokrývání:

Hydroxypropylmethylcelulóza (10% hmotnostních) byla smíchána s čistou vodou, aby vytvořila roztok. Základní tablety byly rozděleny do přibližné stejných dílů a sprejově pokrývány roztokem hydroxypropylmethylcelulózy. Operace byla prováděna v perforované potahovací pánvi.

Potahování základních tablet:

Směs látek, nazvaná Color Mixture White (hydroxypropylmethylcelulóza, polyethylenglykol, polysorbát 80 a oxid titaničitý) byla smíchána s čistou vodou, aby vytvořila potahovací suspenzi. Předběžně potažené tablety bylý rozděleny do přibližně stejných dílů a sprejově potahovány výše popsanou potahovací suspenzí. Operace byla prováděna v perforované potahovací pánvi.

Potažené tablety byly lehce poprášeny karnaubovým voskem a byla na ně natištěna odpovídající identifikace.

Zastupuj e JUDr. O. Švorčík

JUDr. Otakar Švorčík advokát

Hálkova 2,120 00 Praha 2

Claims (4)

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Použití olanzapinu pro přípravu léčiva určeného k léčení migrénové bolesti.

2,8102 2,7217 2,6432 2,6007

2. Použití olanzapinu pro přípravu léčiva podle nároku 1, kdy olanzapin je v polymorfní formě II, která má _ nás ledu.jící typické rentgenové difrakční spektrum, kde d představuje interplanární rozestupy:

d

10,2689 8,577 7,4721 7,125 6,1459 6,071 5,4849 5,2181 5,1251 4,9874 4,7665 4,7158 4,4787 4,3307 4,2294 4,141 3,9873 3,7206 3,5645 3,5366 3,3828 3,2516 3, 134 3,0848 3,0638 3,0111 2,8739

3. Použití podle nároku 1, ve kterém účinné množství oianzapinu je od asi 5 mg do asi 30 mg denně.

4. Použití podle nároku 3, ve kterém analgetická dávka -------------oianzapinu je od asi 5 mg do asi 25 mg denně.---------------------------------