CZ295371B6 - Izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující chimerní TIE-2 ligand, chimerní TIE-2 ligand kódující molekulu nukleové kyseliny, vektor zahrnující molekulu nukleové kyseliny, způsob produkce ligandu, konjugát obsahující ligand a farmaceutický prostředek, obsahující ligand - Google Patents
Izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující chimerní TIE-2 ligand, chimerní TIE-2 ligand kódující molekulu nukleové kyseliny, vektor zahrnující molekulu nukleové kyseliny, způsob produkce ligandu, konjugát obsahující ligand a farmaceutický prostředek, obsahující ligand Download PDFInfo
- Publication number
- CZ295371B6 CZ295371B6 CZ1999310A CZ31099A CZ295371B6 CZ 295371 B6 CZ295371 B6 CZ 295371B6 CZ 1999310 A CZ1999310 A CZ 1999310A CZ 31099 A CZ31099 A CZ 31099A CZ 295371 B6 CZ295371 B6 CZ 295371B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- tie
- ligand
- nucleic acid
- receptor
- cells
- Prior art date
Links
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title claims abstract description 562
- 101000753291 Homo sapiens Angiopoietin-1 receptor Proteins 0.000 title claims abstract description 80
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 74
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 71
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 71
- 102100022014 Angiopoietin-1 receptor Human genes 0.000 title claims abstract description 42
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 64
- 102000012753 TIE-2 Receptor Human genes 0.000 claims abstract description 487
- 108010090091 TIE-2 Receptor Proteins 0.000 claims abstract description 487
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 295
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 69
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 69
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 61
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 50
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 50
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 26
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 21
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 20
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 12
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 10
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 8
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 claims description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 4
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 4
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 101
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 94
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 94
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 87
- 102100022007 Tyrosine-protein kinase receptor Tie-1 Human genes 0.000 description 85
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 76
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 69
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 69
- BYXHQQCXAJARLQ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BYXHQQCXAJARLQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 60
- 102000005450 TIE receptors Human genes 0.000 description 58
- 108010006830 TIE receptors Proteins 0.000 description 58
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 47
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 44
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 43
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 43
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 42
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 40
- 102000044214 human TEK Human genes 0.000 description 38
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 37
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 35
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 34
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 34
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 34
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 32
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 31
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 29
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 29
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 29
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 27
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 26
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 24
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 24
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 23
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 23
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 23
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 21
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 21
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 20
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 20
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 18
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 18
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 18
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 18
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 18
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 18
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 17
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 16
- 201000000760 cerebral cavernous malformation Diseases 0.000 description 16
- 238000011161 development Methods 0.000 description 16
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 16
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 16
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 16
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 16
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 15
- 210000003711 chorioallantoic membrane Anatomy 0.000 description 15
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 15
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 15
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 14
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 14
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 14
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 14
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 14
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 13
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 13
- 101100221606 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) COS7 gene Proteins 0.000 description 13
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 13
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 13
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 13
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 13
- 101100481408 Danio rerio tie2 gene Proteins 0.000 description 12
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 12
- 101100481410 Mus musculus Tek gene Proteins 0.000 description 12
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 12
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 12
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 12
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 12
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 12
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 12
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 11
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 11
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 11
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 11
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 11
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 11
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 11
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 11
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 11
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 11
- MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N Asn-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 10
- UPADCCSMVOQAGF-LBPRGKRZSA-N Gly-Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CNC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 UPADCCSMVOQAGF-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 10
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 10
- SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N Lys-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 10
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 10
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 10
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 10
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 10
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 10
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 10
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 10
- 102200082946 rs33948578 Human genes 0.000 description 10
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- SJUXYGVRSGTPMC-IMJSIDKUSA-N Asn-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O SJUXYGVRSGTPMC-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 9
- NZAFOTBEULLEQB-WDSKDSINSA-N Gly-Asn-Glu Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)CN NZAFOTBEULLEQB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 9
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 9
- QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 9
- FQPQPTHMHZKGFM-XQXXSGGOSA-N Thr-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FQPQPTHMHZKGFM-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 9
- PRTHQBSMXILLPC-XGEHTFHBSA-N Thr-Ser-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PRTHQBSMXILLPC-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 9
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 9
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 9
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 9
- 108010085203 methionylmethionine Proteins 0.000 description 9
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 9
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- RWCLSUOSKWTXLA-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RWCLSUOSKWTXLA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 8
- RCAUJZASOAFTAJ-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)CN=C(N)N RCAUJZASOAFTAJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 8
- RPUYTJJZXQBWDT-SRVKXCTJSA-N Asp-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N RPUYTJJZXQBWDT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 8
- KKZHXOOZHFABQQ-UWJYBYFXSA-N Cys-Ala-Tyr Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KKZHXOOZHFABQQ-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 8
- RDDSZZJOKDVPAE-ACZMJKKPSA-N Glu-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RDDSZZJOKDVPAE-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 8
- IRXNJYPKBVERCW-DCAQKATOSA-N Glu-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IRXNJYPKBVERCW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 8
- JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N Glu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 8
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 8
- YPLYIXGKCRQZGW-SRVKXCTJSA-N His-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YPLYIXGKCRQZGW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 8
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N N-formyl-L-phenylalanine Chemical compound O=CN[C@H](C(=O)O)CC1=CC=CC=C1 NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N 0.000 description 8
- VVKVHAOOUGNDPJ-SRVKXCTJSA-N Ser-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VVKVHAOOUGNDPJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 8
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 8
- QGXCWPNQVCYJEL-NUMRIWBASA-N Thr-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QGXCWPNQVCYJEL-NUMRIWBASA-N 0.000 description 8
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 8
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 8
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 8
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 8
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000003566 phosphorylation assay Methods 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 8
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 8
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 8
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 7
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 7
- SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N Asn-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N 0.000 description 7
- SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 7
- 102100029112 Endothelin-converting enzyme 1 Human genes 0.000 description 7
- 108030001679 Endothelin-converting enzyme 1 Proteins 0.000 description 7
- 101710116742 Ephrin type-A receptor 5 Proteins 0.000 description 7
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 7
- JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N Glu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- LJLPOZGRPLORTF-CIUDSAMLSA-N Glu-Asn-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O LJLPOZGRPLORTF-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- LYCVKHSJGDMDLM-LURJTMIESA-N His-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 LYCVKHSJGDMDLM-LURJTMIESA-N 0.000 description 7
- JQSXWJXBASFONF-KKUMJFAQSA-N Leu-Asp-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O JQSXWJXBASFONF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 7
- ICYRCNICGBJLGM-HJGDQZAQSA-N Leu-Thr-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O ICYRCNICGBJLGM-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 7
- VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N Leu-Thr-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 7
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 7
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 7
- FIDMVVBUOCMMJG-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO FIDMVVBUOCMMJG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 7
- TYVAWPFQYFPSBR-BFHQHQDPSA-N Thr-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O TYVAWPFQYFPSBR-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 7
- LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)=CNC2=C1 LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 7
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 7
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 7
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 7
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 7
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 7
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 7
- 108010031491 threonyl-lysyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 7
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 7
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N Ala-Gly-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N 0.000 description 6
- ISCYZXFOCXWUJU-KZVJFYERSA-N Ala-Thr-Met Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O ISCYZXFOCXWUJU-KZVJFYERSA-N 0.000 description 6
- WYBVBIHNJWOLCJ-IUCAKERBSA-N Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N WYBVBIHNJWOLCJ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 6
- XYOVHPDDWCEUDY-CIUDSAMLSA-N Asn-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XYOVHPDDWCEUDY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 6
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- OWUCNXMFJRFOFI-BQBZGAKWSA-N Asn-Gly-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O OWUCNXMFJRFOFI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 6
- QRULNKJGYQQZMW-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asn-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QRULNKJGYQQZMW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 6
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 6
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N Glu-Asn-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZJICFHQSPWFBKP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 6
- MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N Glu-Tyr-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 6
- UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N Gly-Arg-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 6
- OQDLKDUVMTUPPG-AVGNSLFASA-N His-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OQDLKDUVMTUPPG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- HPBCTWSUJOGJSH-MNXVOIDGSA-N Leu-Glu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HPBCTWSUJOGJSH-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 6
- HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N 0.000 description 6
- LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N Leu-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 6
- DGWXCIORNLWGGG-CIUDSAMLSA-N Lys-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DGWXCIORNLWGGG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 6
- PBIPLDMFHAICIP-DCAQKATOSA-N Lys-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PBIPLDMFHAICIP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 6
- JMNRXRPBHFGXQX-GUBZILKMSA-N Lys-Ser-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O JMNRXRPBHFGXQX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- AEQVPPGEJJBFEE-CYDGBPFRSA-N Met-Ile-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AEQVPPGEJJBFEE-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WYBVBIHNJWOLCJ-UHFFFAOYSA-N N-L-arginyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCCN=C(N)N WYBVBIHNJWOLCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 6
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 6
- WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N Phe-Gly-Asn Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 6
- IAOZOFPONWDXNT-IXOXFDKPSA-N Phe-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IAOZOFPONWDXNT-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 6
- MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N Ser-Gly-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N 0.000 description 6
- NAXBBCLCEOTAIG-RHYQMDGZSA-N Thr-Arg-Lys Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O NAXBBCLCEOTAIG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 6
- PJCYRZVSACOYSN-ZJDVBMNYSA-N Thr-Thr-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PJCYRZVSACOYSN-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 6
- BARBHMSSVWPKPZ-IHRRRGAJSA-N Tyr-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O BARBHMSSVWPKPZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 6
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 6
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 6
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 6
- 244000309466 calf Species 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 6
- DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N phosphotyrosine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(OP(O)(O)=O)C=C1 DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 6
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M sodium fluoride Chemical compound [F-].[Na+] PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N Ala-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- UISQLSIBJKEJSS-GUBZILKMSA-N Arg-Arg-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UISQLSIBJKEJSS-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- AGVNTAUPLWIQEN-ZPFDUUQYSA-N Arg-Ile-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AGVNTAUPLWIQEN-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 5
- PZBSKYJGKNNYNK-ULQDDVLXSA-N Arg-Leu-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O PZBSKYJGKNNYNK-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 5
- IGFJVXOATGZTHD-UHFFFAOYSA-N Arg-Phe-His Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccccc1)C(=O)NC(Cc2c[nH]cn2)C(=O)O IGFJVXOATGZTHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- MRYDJCIIVRXVGG-QEJZJMRPSA-N Asp-Trp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MRYDJCIIVRXVGG-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 5
- 101100481403 Bos taurus TIE1 gene Proteins 0.000 description 5
- VDUPGIDTWNQAJD-CIUDSAMLSA-N Cys-Lys-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O VDUPGIDTWNQAJD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- IXPSSIBVVKSOIE-SRVKXCTJSA-N Cys-Ser-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)N)O IXPSSIBVVKSOIE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- 241001200922 Gagata Species 0.000 description 5
- UTKUTMJSWKKHEM-WDSKDSINSA-N Glu-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O UTKUTMJSWKKHEM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 5
- ZJFNRQHUIHKZJF-GUBZILKMSA-N Glu-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZJFNRQHUIHKZJF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N Glu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 5
- DJTXYXZNNDDEOU-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Cys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN)C(=O)N DJTXYXZNNDDEOU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- XVYKMNXXJXQKME-XEGUGMAKSA-N Gly-Ile-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XVYKMNXXJXQKME-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- JWTKVPMQCCRPQY-SRVKXCTJSA-N His-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JWTKVPMQCCRPQY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- LDFWDDVELNOGII-MXAVVETBSA-N His-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N LDFWDDVELNOGII-MXAVVETBSA-N 0.000 description 5
- YKLOMBNBQUTJDT-HVTMNAMFSA-N Ile-His-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N YKLOMBNBQUTJDT-HVTMNAMFSA-N 0.000 description 5
- TVYWVSJGSHQWMT-AJNGGQMLSA-N Ile-Leu-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N TVYWVSJGSHQWMT-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 5
- OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N Leu-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- LVTJJOJKDCVZGP-QWRGUYRKSA-N Leu-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O LVTJJOJKDCVZGP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 5
- WXZOHBVPVKABQN-DCAQKATOSA-N Leu-Met-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N WXZOHBVPVKABQN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- ZXEUFAVXODIPHC-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Asn Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ZXEUFAVXODIPHC-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- AETNZPKUUYYYEK-CIUDSAMLSA-N Met-Glu-Asn Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AETNZPKUUYYYEK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- OMHMIXFFRPMYHB-SRVKXCTJSA-N Phe-Cys-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N OMHMIXFFRPMYHB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SCSVNSNWUTYSFO-WDCWCFNPSA-N Thr-Lys-Glu Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SCSVNSNWUTYSFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 5
- HSQXHRIRJSFDOH-URLPEUOOSA-N Thr-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HSQXHRIRJSFDOH-URLPEUOOSA-N 0.000 description 5
- AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N Thr-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N 0.000 description 5
- AAZOYLQUEQRUMZ-GSSVUCPTSA-N Thr-Thr-Asn Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O AAZOYLQUEQRUMZ-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 5
- RPECVQBNONKZAT-WZLNRYEVSA-N Thr-Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N RPECVQBNONKZAT-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 5
- VMBBTANKMSRJSS-JSGCOSHPSA-N Trp-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O VMBBTANKMSRJSS-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 5
- ZNFPUOSTMUMUDR-JRQIVUDYSA-N Tyr-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ZNFPUOSTMUMUDR-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 5
- FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N Tyr-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 5
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 5
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 5
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 5
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 5
- 108010091871 leucylmethionine Proteins 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 5
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 5
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- 210000002394 ovarian follicle Anatomy 0.000 description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 5
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 5
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 5
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 5
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 4
- LGQPPBQRUBVTIF-JBDRJPRFSA-N Ala-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LGQPPBQRUBVTIF-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 4
- OPZJWMJPCNNZNT-DCAQKATOSA-N Ala-Leu-Met Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N OPZJWMJPCNNZNT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N Ala-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O KUFVXLQLDHJVOG-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 4
- VRZDJJWOFXMFRO-ZFWWWQNUSA-N Arg-Gly-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O VRZDJJWOFXMFRO-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 4
- WTFIFQWLQXZLIZ-UMPQAUOISA-N Arg-Thr-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O WTFIFQWLQXZLIZ-UMPQAUOISA-N 0.000 description 4
- QHUOOCKNNURZSL-IHRRRGAJSA-N Arg-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QHUOOCKNNURZSL-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- VDCIPFYVCICPEC-FXQIFTODSA-N Asn-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VDCIPFYVCICPEC-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- VKCOHFFSTKCXEQ-OLHMAJIHSA-N Asn-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VKCOHFFSTKCXEQ-OLHMAJIHSA-N 0.000 description 4
- DHVMIHWNDBFTHB-FXQIFTODSA-N Asn-Cys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N DHVMIHWNDBFTHB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- PBSQFBAJKPLRJY-BYULHYEWSA-N Asn-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N PBSQFBAJKPLRJY-BYULHYEWSA-N 0.000 description 4
- VXLBDJWTONZHJN-YUMQZZPRSA-N Asn-His-Gly Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N VXLBDJWTONZHJN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- UHGUKCOQUNPSKK-CIUDSAMLSA-N Asn-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N UHGUKCOQUNPSKK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- MUWDILPCTSMUHI-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asn-Cys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)C(=O)O MUWDILPCTSMUHI-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102100021605 Ephrin type-A receptor 5 Human genes 0.000 description 4
- 101100127166 Escherichia coli (strain K12) kefB gene Proteins 0.000 description 4
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 4
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 4
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- ITBHUUMCJJQUSC-LAEOZQHASA-N Glu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O ITBHUUMCJJQUSC-LAEOZQHASA-N 0.000 description 4
- JHSRJMUJOGLIHK-GUBZILKMSA-N Glu-Met-Glu Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N JHSRJMUJOGLIHK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- JZJGEKDPWVJOLD-QEWYBTABSA-N Glu-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JZJGEKDPWVJOLD-QEWYBTABSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- WSLHFAFASQFMSK-SFTDATJTSA-N Gly-Trp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 WSLHFAFASQFMSK-SFTDATJTSA-N 0.000 description 4
- MDOBWSFNSNPENN-PMVVWTBXSA-N His-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O MDOBWSFNSNPENN-PMVVWTBXSA-N 0.000 description 4
- OEQKGSPBDVKYOC-ZKWXMUAHSA-N Ile-Gly-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N OEQKGSPBDVKYOC-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- REXAUQBGSGDEJY-IGISWZIWSA-N Ile-Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N REXAUQBGSGDEJY-IGISWZIWSA-N 0.000 description 4
- NGKPIPCGMLWHBX-WZLNRYEVSA-N Ile-Tyr-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N NGKPIPCGMLWHBX-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 4
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UCOCBWDBHCUPQP-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UCOCBWDBHCUPQP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- IGUOAYLTQJLPPD-DCAQKATOSA-N Leu-Asn-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IGUOAYLTQJLPPD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- IWTBYNQNAPECCS-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IWTBYNQNAPECCS-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- FMEICTQWUKNAGC-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O FMEICTQWUKNAGC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N Leu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N 0.000 description 4
- GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N Lys-Glu-Gly Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C(=O)NCC([O-])=O GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N 0.000 description 4
- ZXFRGTAIIZHNHG-AJNGGQMLSA-N Lys-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ZXFRGTAIIZHNHG-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 4
- SBQDRNOLGSYHQA-YUMQZZPRSA-N Lys-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SBQDRNOLGSYHQA-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- HGAJNEWOUHDUMZ-SRVKXCTJSA-N Met-Leu-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O HGAJNEWOUHDUMZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 4
- DFEVBOYEUQJGER-JURCDPSOSA-N Phe-Ala-Ile Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O DFEVBOYEUQJGER-JURCDPSOSA-N 0.000 description 4
- ZKSLXIGKRJMALF-MGHWNKPDSA-N Phe-His-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N ZKSLXIGKRJMALF-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 4
- MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N Phe-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)O MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 4
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 4
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- JIPVNVNKXJLFJF-BJDJZHNGSA-N Ser-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N JIPVNVNKXJLFJF-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 4
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- JTEICXDKGWKRRV-HJGDQZAQSA-N Thr-Asn-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JTEICXDKGWKRRV-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- UJRIVCPPPMYCNA-HOCLYGCPSA-N Trp-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N UJRIVCPPPMYCNA-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 4
- GQEXFCQNAJHJTI-IHPCNDPISA-N Trp-Phe-Asp Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N GQEXFCQNAJHJTI-IHPCNDPISA-N 0.000 description 4
- AOLQJUGGZLTUBD-WIRXVTQYSA-N Trp-Trp-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O AOLQJUGGZLTUBD-WIRXVTQYSA-N 0.000 description 4
- CKKFTIQYURNSEI-IHRRRGAJSA-N Tyr-Asn-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CKKFTIQYURNSEI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- OFHKXNKJXURPSY-ULQDDVLXSA-N Tyr-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OFHKXNKJXURPSY-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- MQGGXGKQSVEQHR-KKUMJFAQSA-N Tyr-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MQGGXGKQSVEQHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 4
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010077435 glycyl-phenylalanyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 4
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 4
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 4
- WDVIDPRACNGFPP-QWRGUYRKSA-N (2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O WDVIDPRACNGFPP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N Ala-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- GSCLWXDNIMNIJE-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GSCLWXDNIMNIJE-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- MKZCBYZBCINNJN-DLOVCJGASA-N Ala-Asp-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MKZCBYZBCINNJN-DLOVCJGASA-N 0.000 description 3
- KRHRBKYBJXMYBB-WHFBIAKZSA-N Ala-Cys-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O KRHRBKYBJXMYBB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- DWYROCSXOOMOEU-CIUDSAMLSA-N Ala-Met-Glu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N DWYROCSXOOMOEU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- VJVQKGYHIZPSNS-FXQIFTODSA-N Ala-Ser-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N VJVQKGYHIZPSNS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- AOAKQKVICDWCLB-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N AOAKQKVICDWCLB-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 3
- QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 QRIYOHQJRDHFKF-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 3
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 3
- WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N Arg-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- UXJCMQFPDWCHKX-DCAQKATOSA-N Arg-Arg-Glu Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UXJCMQFPDWCHKX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N Arg-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N Arg-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- UFBURHXMKFQVLM-CIUDSAMLSA-N Arg-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UFBURHXMKFQVLM-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- VYLVOMUVLMGCRF-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asp-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VYLVOMUVLMGCRF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- WQSCVMQDZYTFQU-FXQIFTODSA-N Asn-Cys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O WQSCVMQDZYTFQU-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- IQTUDDBANZYMAR-WDSKDSINSA-N Asn-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O IQTUDDBANZYMAR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N Asn-Phe Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- OROMFUQQTSWUTI-IHRRRGAJSA-N Asn-Phe-Arg Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N OROMFUQQTSWUTI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N Asn-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N 0.000 description 3
- QYRMBFWDSFGSFC-OLHMAJIHSA-N Asn-Thr-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O QYRMBFWDSFGSFC-OLHMAJIHSA-N 0.000 description 3
- FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N Asn-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- QIRJQYQOIKBPBZ-IHRRRGAJSA-N Asn-Tyr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QIRJQYQOIKBPBZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- BEHQTVDBCLSCBY-CFMVVWHZSA-N Asn-Tyr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O BEHQTVDBCLSCBY-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 3
- GBAWQWASNGUNQF-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N GBAWQWASNGUNQF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 3
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N Glu-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- DWBBKNPKDHXIAC-SRVKXCTJSA-N Glu-Leu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O DWBBKNPKDHXIAC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- CUYLIWAAAYJKJH-RYUDHWBXSA-N Gly-Glu-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CUYLIWAAAYJKJH-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 3
- QSVMIMFAAZPCAQ-PMVVWTBXSA-N Gly-His-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QSVMIMFAAZPCAQ-PMVVWTBXSA-N 0.000 description 3
- ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)CN ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 3
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- IGOYNRWLWHWAQO-JTQLQIEISA-N Gly-Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 IGOYNRWLWHWAQO-JTQLQIEISA-N 0.000 description 3
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 3
- UMBDRSMLCUYIRI-DVJZZOLTSA-N Gly-Trp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)CN)O UMBDRSMLCUYIRI-DVJZZOLTSA-N 0.000 description 3
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N His-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N His-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- WSDOHRLQDGAOGU-BQBZGAKWSA-N His-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 WSDOHRLQDGAOGU-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- YADRBUZBKHHDAO-XPUUQOCRSA-N His-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YADRBUZBKHHDAO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 3
- FYTCLUIYTYFGPT-YUMQZZPRSA-N His-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FYTCLUIYTYFGPT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- MRVZCDSYLJXKKX-ACRUOGEOSA-N His-Tyr-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N MRVZCDSYLJXKKX-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 3
- FJWYJQRCVNGEAQ-ZPFDUUQYSA-N Ile-Asn-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N FJWYJQRCVNGEAQ-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 3
- QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N 0.000 description 3
- RCMNUBZKIIJCOI-ZPFDUUQYSA-N Ile-Met-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N RCMNUBZKIIJCOI-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 3
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- NXRNRBOKDBIVKQ-CXTHYWKRSA-N Ile-Tyr-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N NXRNRBOKDBIVKQ-CXTHYWKRSA-N 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 3
- OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YVKSMSDXKMSIRX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- LLBQJYDYOLIQAI-JYJNAYRXSA-N Leu-Glu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O LLBQJYDYOLIQAI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 3
- OYQUOLRTJHWVSQ-SRVKXCTJSA-N Leu-His-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OYQUOLRTJHWVSQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- FKQPWMZLIIATBA-AJNGGQMLSA-N Leu-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FKQPWMZLIIATBA-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 3
- DDVHDMSBLRAKNV-IHRRRGAJSA-N Leu-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DDVHDMSBLRAKNV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- AEDWWMMHUGYIFD-HJGDQZAQSA-N Leu-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AEDWWMMHUGYIFD-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 3
- LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 3
- FGZVGOAAROXFAB-IXOXFDKPSA-N Leu-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O FGZVGOAAROXFAB-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 3
- AAORVPFVUIHEAB-YUMQZZPRSA-N Lys-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O AAORVPFVUIHEAB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- SSJBMGCZZXCGJJ-DCAQKATOSA-N Lys-Asp-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O SSJBMGCZZXCGJJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- ZAWOJFFMBANLGE-CIUDSAMLSA-N Lys-Cys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ZAWOJFFMBANLGE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- ODUQLUADRKMHOZ-JYJNAYRXSA-N Lys-Glu-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O ODUQLUADRKMHOZ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 3
- NJNRBRKHOWSGMN-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NJNRBRKHOWSGMN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- ZNAPAUSAUBHENO-IHPCNDPISA-N Lys-Trp-His Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CN=CN3)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ZNAPAUSAUBHENO-IHPCNDPISA-N 0.000 description 3
- JPCHYAUKOUGOIB-HJGDQZAQSA-N Met-Glu-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JPCHYAUKOUGOIB-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 3
- IUYCGMNKIZDRQI-BQBZGAKWSA-N Met-Gly-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IUYCGMNKIZDRQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- LQMHZERGCQJKAH-STQMWFEESA-N Met-Gly-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 LQMHZERGCQJKAH-STQMWFEESA-N 0.000 description 3
- PESQCPHRXOFIPX-UHFFFAOYSA-N N-L-methionyl-L-tyrosine Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PESQCPHRXOFIPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 3
- KNPVDQMEHSCAGX-UWVGGRQHSA-N Phe-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 KNPVDQMEHSCAGX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- YCCUXNNKXDGMAM-KKUMJFAQSA-N Phe-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YCCUXNNKXDGMAM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 3
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 3
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- XVAUJOAYHWWNQF-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XVAUJOAYHWWNQF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N Ser-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 3
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 3
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 3
- CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N Thr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 3
- KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N Thr-Gly-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 3
- LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LUMXICQAOKVQOB-YWIQKCBGSA-N 0.000 description 3
- KRDSCBLRHORMRK-JXUBOQSCSA-N Thr-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KRDSCBLRHORMRK-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 3
- UXUAZXWKIGPUCH-RCWTZXSCSA-N Thr-Met-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O UXUAZXWKIGPUCH-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 3
- WNQJTLATMXYSEL-OEAJRASXSA-N Thr-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O WNQJTLATMXYSEL-OEAJRASXSA-N 0.000 description 3
- NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N Thr-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 3
- QYDKSNXSBXZPFK-ZJDVBMNYSA-N Thr-Thr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QYDKSNXSBXZPFK-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 3
- YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N Thr-Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- OAZLRFLMQASGNW-PMVMPFDFSA-N Trp-His-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CN=CN3)C(=O)N[C@@H](CC4=CC=C(C=C4)O)C(=O)O)N OAZLRFLMQASGNW-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 3
- YLGQHMHKAASRGJ-WDSOQIARSA-N Trp-Leu-Met Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N YLGQHMHKAASRGJ-WDSOQIARSA-N 0.000 description 3
- NSGZILIDHCIZAM-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N NSGZILIDHCIZAM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- ZSXJENBJGRHKIG-UWVGGRQHSA-N Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZSXJENBJGRHKIG-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- NZBSVMQZQMEUHI-WZLNRYEVSA-N Tyr-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N NZBSVMQZQMEUHI-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 3
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 3
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 3
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 239000011775 sodium fluoride Substances 0.000 description 3
- 235000013024 sodium fluoride Nutrition 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 3
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 3
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 3
- 230000006459 vascular development Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 2
- NXSFUECZFORGOG-CIUDSAMLSA-N Ala-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NXSFUECZFORGOG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- WGDNWOMKBUXFHR-BQBZGAKWSA-N Ala-Gly-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N WGDNWOMKBUXFHR-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- BLIMFWGRQKRCGT-YUMQZZPRSA-N Ala-Gly-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN BLIMFWGRQKRCGT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- KLKARCOHVHLAJP-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Cys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O KLKARCOHVHLAJP-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 2
- ZJLORAAXDAJLDC-CQDKDKBSSA-N Ala-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZJLORAAXDAJLDC-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 2
- IASNWHAGGYTEKX-IUCAKERBSA-N Arg-Arg-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(O)=O IASNWHAGGYTEKX-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N Arg-Asp Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- FIQKRDXFTANIEJ-ULQDDVLXSA-N Arg-Phe-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N FIQKRDXFTANIEJ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- BWMMKQPATDUYKB-IHRRRGAJSA-N Arg-Tyr-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BWMMKQPATDUYKB-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- DXZNJWFECGJCQR-FXQIFTODSA-N Asn-Asn-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N DXZNJWFECGJCQR-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- KXFCBAHYSLJCCY-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KXFCBAHYSLJCCY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- PIWWUBYJNONVTJ-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asp-Asn Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)C(=O)N PIWWUBYJNONVTJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- ULRPXVNMIIYDDJ-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N ULRPXVNMIIYDDJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- OLGCWMNDJTWQAG-GUBZILKMSA-N Asn-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O OLGCWMNDJTWQAG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- COUZKSSMBFADSB-AVGNSLFASA-N Asn-Glu-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N COUZKSSMBFADSB-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- NLRJGXZWTKXRHP-DCAQKATOSA-N Asn-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NLRJGXZWTKXRHP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- ZMUQQMGITUJQTI-CIUDSAMLSA-N Asn-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ZMUQQMGITUJQTI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- COWITDLVHMZSIW-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O COWITDLVHMZSIW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- MDDXKBHIMYYJLW-FXQIFTODSA-N Asn-Met-Asp Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N MDDXKBHIMYYJLW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- VITDJIPIJZAVGC-VEVYYDQMSA-N Asn-Met-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VITDJIPIJZAVGC-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 2
- XTMZYFMTYJNABC-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N XTMZYFMTYJNABC-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- SNYCNNPOFYBCEK-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNYCNNPOFYBCEK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- AMGQTNHANMRPOE-LKXGYXEUSA-N Asn-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AMGQTNHANMRPOE-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 2
- WKGJGVGTEZGFSW-FXQIFTODSA-N Asp-Asn-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O WKGJGVGTEZGFSW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- QXHVOUSPVAWEMX-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QXHVOUSPVAWEMX-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- AMRANMVXQWXNAH-ZLUOBGJFSA-N Asp-Cys-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O AMRANMVXQWXNAH-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- JUWZKMBALYLZCK-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JUWZKMBALYLZCK-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- OMMIEVATLAGRCK-BYPYZUCNSA-N Asp-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O OMMIEVATLAGRCK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- XWSIYTYNLKCLJB-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XWSIYTYNLKCLJB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- JSNWZMFSLIWAHS-HJGDQZAQSA-N Asp-Thr-Leu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O JSNWZMFSLIWAHS-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100292356 Caenorhabditis elegans mtl-2 gene Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- WTEJFWOJHCJDML-FXQIFTODSA-N Cys-Met-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O WTEJFWOJHCJDML-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 2
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 2
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 2
- 230000007023 DNA restriction-modification system Effects 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- SBYVDRJAXWSXQL-AVGNSLFASA-N Glu-Asn-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SBYVDRJAXWSXQL-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- BUAKRRKDHSSIKK-IHRRRGAJSA-N Glu-Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BUAKRRKDHSSIKK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- KRGZZKWSBGPLKL-IUCAKERBSA-N Glu-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N KRGZZKWSBGPLKL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- VMKCPNBBPGGQBJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N VMKCPNBBPGGQBJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- NWOUBJNMZDDGDT-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 NWOUBJNMZDDGDT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N Glu-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- BCYGDJXHAGZNPQ-DCAQKATOSA-N Glu-Lys-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BCYGDJXHAGZNPQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- SXGAGTVDWKQYCX-BQBZGAKWSA-N Glu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SXGAGTVDWKQYCX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- QLNKFGTZOBVMCS-JBACZVJFSA-N Glu-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O QLNKFGTZOBVMCS-JBACZVJFSA-N 0.000 description 2
- XUDLUKYPXQDCRX-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XUDLUKYPXQDCRX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- DWUKOTKSTDWGAE-BQBZGAKWSA-N Gly-Asn-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DWUKOTKSTDWGAE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- AIJAPFVDBFYNKN-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Asp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN)C(=O)N AIJAPFVDBFYNKN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- PTIIBFKSLCYQBO-NHCYSSNCSA-N Gly-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CN PTIIBFKSLCYQBO-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- MTBIKIMYHUWBRX-QWRGUYRKSA-N Gly-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN MTBIKIMYHUWBRX-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- FFJQHWKSGAWSTJ-BFHQHQDPSA-N Gly-Thr-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FFJQHWKSGAWSTJ-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 2
- ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- FFALDIDGPLUDKV-ZDLURKLDSA-N Gly-Thr-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FFALDIDGPLUDKV-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N Gly-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MDCTVRUPVLZSPG-BQBZGAKWSA-N His-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 MDCTVRUPVLZSPG-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- BPOHQCZZSFBSON-KKUMJFAQSA-N His-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O BPOHQCZZSFBSON-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- RNMNYMDTESKEAJ-KKUMJFAQSA-N His-Leu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 RNMNYMDTESKEAJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- LVWIJITYHRZHBO-IXOXFDKPSA-N His-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LVWIJITYHRZHBO-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- LNVILFYCPVOHPV-IHPCNDPISA-N His-Trp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LNVILFYCPVOHPV-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- 101100481405 Homo sapiens TIE1 gene Proteins 0.000 description 2
- 108700039609 IRW peptide Proteins 0.000 description 2
- NULSANWBUWLTKN-NAKRPEOUSA-N Ile-Arg-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N NULSANWBUWLTKN-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- ZXJFURYTPZMUNY-VKOGCVSHSA-N Ile-Arg-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 ZXJFURYTPZMUNY-VKOGCVSHSA-N 0.000 description 2
- AWTDTFXPVCTHAK-BJDJZHNGSA-N Ile-Cys-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N AWTDTFXPVCTHAK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- SLQVFYWBGNNOTK-BYULHYEWSA-N Ile-Gly-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N SLQVFYWBGNNOTK-BYULHYEWSA-N 0.000 description 2
- CMNMPCTVCWWYHY-MXAVVETBSA-N Ile-His-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N CMNMPCTVCWWYHY-MXAVVETBSA-N 0.000 description 2
- DBXXASNNDTXOLU-MXAVVETBSA-N Ile-Leu-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N DBXXASNNDTXOLU-MXAVVETBSA-N 0.000 description 2
- HQEPKOFULQTSFV-JURCDPSOSA-N Ile-Phe-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N HQEPKOFULQTSFV-JURCDPSOSA-N 0.000 description 2
- 108700002232 Immediate-Early Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- CLVUXCBGKUECIT-HJGDQZAQSA-N Leu-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CLVUXCBGKUECIT-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N Leu-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- PRZVBIAOPFGAQF-SRVKXCTJSA-N Leu-Glu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PRZVBIAOPFGAQF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- CFZZDVMBRYFFNU-QWRGUYRKSA-N Leu-His-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(O)=O CFZZDVMBRYFFNU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- KUIDCYNIEJBZBU-AJNGGQMLSA-N Leu-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KUIDCYNIEJBZBU-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 2
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N Leu-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- BJWKOATWNQJPSK-SRVKXCTJSA-N Leu-Met-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N BJWKOATWNQJPSK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- KZZCOWMDDXDKSS-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KZZCOWMDDXDKSS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JGKHAFUAPZCCDU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQCJGQHHYZNUDK-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CCCN=C(N)N NQCJGQHHYZNUDK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- UETQMSASAVBGJY-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 UETQMSASAVBGJY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- ZASPELYMPSACER-HOCLYGCPSA-N Lys-Gly-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O ZASPELYMPSACER-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 2
- WOEDRPCHKPSFDT-MXAVVETBSA-N Lys-His-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCCCN)N WOEDRPCHKPSFDT-MXAVVETBSA-N 0.000 description 2
- YWJQHDDBFAXNIR-MXAVVETBSA-N Lys-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N YWJQHDDBFAXNIR-MXAVVETBSA-N 0.000 description 2
- OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N Lys-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N 0.000 description 2
- UQRZFMQQXXJTTF-AVGNSLFASA-N Lys-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UQRZFMQQXXJTTF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- DAHQKYYIXPBESV-UWVGGRQHSA-N Lys-Met-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(O)=O DAHQKYYIXPBESV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 108010058398 Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptor Proteins 0.000 description 2
- QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N Met-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- MCNGIXXCMJAURZ-VEVYYDQMSA-N Met-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N)O MCNGIXXCMJAURZ-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 2
- IZLCDZDNZFEDHB-DCAQKATOSA-N Met-Cys-Lys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N IZLCDZDNZFEDHB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- LBNFTWKGISQVEE-AVGNSLFASA-N Met-Leu-Met Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCSC LBNFTWKGISQVEE-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- DBXMFHGGHMXYHY-DCAQKATOSA-N Met-Leu-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DBXMFHGGHMXYHY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- XDGFFEZAZHRZFR-RHYQMDGZSA-N Met-Leu-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XDGFFEZAZHRZFR-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- LCPUWQLULVXROY-RHYQMDGZSA-N Met-Lys-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LCPUWQLULVXROY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- LLKWSEXLNFBKIF-CYDGBPFRSA-N Met-Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@@H](N)CCSC LLKWSEXLNFBKIF-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 2
- XOFDBXYPKZUAAM-GUBZILKMSA-N Met-Met-Ser Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N XOFDBXYPKZUAAM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N Met-Thr Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C([O-])=O KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 2
- XYVRXLDSCKEYES-JSGCOSHPSA-N Met-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(O)=O)=CNC2=C1 XYVRXLDSCKEYES-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- LBSARGIQACMGDF-WBAXXEDZSA-N Phe-Ala-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 LBSARGIQACMGDF-WBAXXEDZSA-N 0.000 description 2
- VHWOBXIWBDWZHK-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 VHWOBXIWBDWZHK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- LDSOBEJVGGVWGD-DLOVCJGASA-N Phe-Asp-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 LDSOBEJVGGVWGD-DLOVCJGASA-N 0.000 description 2
- BWTKUQPNOMMKMA-FIRPJDEBSA-N Phe-Ile-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BWTKUQPNOMMKMA-FIRPJDEBSA-N 0.000 description 2
- AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N Phe-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- YUSRGTQIPCJNHQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YUSRGTQIPCJNHQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- RDFQNDHEHVSONI-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RDFQNDHEHVSONI-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- CICQXRWZNVXFCU-SRVKXCTJSA-N Ser-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CICQXRWZNVXFCU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- HEUVHBXOVZONPU-BJDJZHNGSA-N Ser-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HEUVHBXOVZONPU-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N Ser-Ser-Ser-Ser Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(O)=O JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N 0.000 description 2
- SQHKXWODKJDZRC-LKXGYXEUSA-N Ser-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SQHKXWODKJDZRC-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 2
- VLMIUSLQONKLDV-HEIBUPTGSA-N Ser-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VLMIUSLQONKLDV-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 2
- XVNZSJIKGJLQLH-RCWTZXSCSA-N Thr-Arg-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N)O XVNZSJIKGJLQLH-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 2
- XPNSAQMEAVSQRD-FBCQKBJTSA-N Thr-Gly-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XPNSAQMEAVSQRD-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 2
- FKIGTIXHSRNKJU-IXOXFDKPSA-N Thr-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)CC1=CN=CN1 FKIGTIXHSRNKJU-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- IHAPJUHCZXBPHR-WZLNRYEVSA-N Thr-Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N IHAPJUHCZXBPHR-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 2
- XIULAFZYEKSGAJ-IXOXFDKPSA-N Thr-Leu-His Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XIULAFZYEKSGAJ-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- FLPZMPOZGYPBEN-PPCPHDFISA-N Thr-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FLPZMPOZGYPBEN-PPCPHDFISA-N 0.000 description 2
- MECLEFZMPPOEAC-VOAKCMCISA-N Thr-Leu-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MECLEFZMPPOEAC-VOAKCMCISA-N 0.000 description 2
- ZSPQUTWLWGWTPS-HJGDQZAQSA-N Thr-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZSPQUTWLWGWTPS-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- UJQVSMNQMQHVRY-KZVJFYERSA-N Thr-Met-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O UJQVSMNQMQHVRY-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 2
- XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N Thr-Ser-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N)O XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 2
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 2
- CCZXBOFIBYQLEV-IHPCNDPISA-N Trp-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O CCZXBOFIBYQLEV-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- KOVXHANYYYMBRF-IRIUXVKKSA-N Tyr-Glu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O KOVXHANYYYMBRF-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 2
- QJKMCQRFHJRIPU-XDTLVQLUSA-N Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 QJKMCQRFHJRIPU-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 2
- PSALWJCUIAQKFW-ACRUOGEOSA-N Tyr-Phe-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N PSALWJCUIAQKFW-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- BXJQKVDPRMLGKN-PMVMPFDFSA-N Tyr-Trp-Leu Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 BXJQKVDPRMLGKN-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 2
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 2
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108010076324 alanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 2
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- -1 angiogenesis Diseases 0.000 description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 2
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 2
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical compound NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015624 blood vessel development Effects 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 2
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 description 2
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 210000004996 female reproductive system Anatomy 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 230000001723 fibrinogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 230000008217 follicular development Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 2
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003566 hemangioblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 2
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 108010056787 lysyl-arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 108010034507 methionyltryptophan Proteins 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 108010079892 phosphoglycerol kinase Proteins 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 230000036515 potency Effects 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000011191 terminal modification Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N trisodium vanadate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-][V]([O-])([O-])=O IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 230000032665 vasculature development Effects 0.000 description 2
- 238000004804 winding Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 1
- AUXMWYRZQPIXCC-KNIFDHDWSA-N (2s)-2-amino-4-methylpentanoic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O AUXMWYRZQPIXCC-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- RVLOMLVNNBWRSR-KNIFDHDWSA-N (2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O RVLOMLVNNBWRSR-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QEIFSLUFHRCVQL-UHFFFAOYSA-N (5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl) hydrogen phosphate;(4-methylphenyl)azanium Chemical compound CC1=CC=C(N)C=C1.C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QEIFSLUFHRCVQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- ITZMJCSORYKOSI-AJNGGQMLSA-N APGPR Enterostatin Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 ITZMJCSORYKOSI-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- 244000202285 Acrocomia mexicana Species 0.000 description 1
- 201000010000 Agranulocytosis Diseases 0.000 description 1
- CCUAQNUWXLYFRA-IMJSIDKUSA-N Ala-Asn Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC(N)=O CCUAQNUWXLYFRA-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N Ala-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- JQDFGZKKXBEANU-IMJSIDKUSA-N Ala-Cys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O JQDFGZKKXBEANU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- GGNHBHYDMUDXQB-KBIXCLLPSA-N Ala-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N GGNHBHYDMUDXQB-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N Ala-Gly Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- WMYJZJRILUVVRG-WDSKDSINSA-N Ala-Gly-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O WMYJZJRILUVVRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- VGPWRRFOPXVGOH-BYPYZUCNSA-N Ala-Gly-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VGPWRRFOPXVGOH-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- LXAARTARZJJCMB-CIQUZCHMSA-N Ala-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LXAARTARZJJCMB-CIQUZCHMSA-N 0.000 description 1
- SOBIAADAMRHGKH-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SOBIAADAMRHGKH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SDZRIBWEVVRDQI-CIUDSAMLSA-N Ala-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SDZRIBWEVVRDQI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XSTZMVAYYCJTNR-DCAQKATOSA-N Ala-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XSTZMVAYYCJTNR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZBLQIYPCUWZSRZ-QEJZJMRPSA-N Ala-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CC=CC=C1 ZBLQIYPCUWZSRZ-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 206010002961 Aplasia Diseases 0.000 description 1
- VWVPYNGMOCSSGK-GUBZILKMSA-N Arg-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O VWVPYNGMOCSSGK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- DPXDVGDLWJYZBH-GUBZILKMSA-N Arg-Asn-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O DPXDVGDLWJYZBH-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- XLWSGICNBZGYTA-CIUDSAMLSA-N Arg-Glu-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O XLWSGICNBZGYTA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JEOCWTUOMKEEMF-RHYQMDGZSA-N Arg-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JEOCWTUOMKEEMF-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- NPAVRDPEFVKELR-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NPAVRDPEFVKELR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- DNLQVHBBMPZUGJ-BQBZGAKWSA-N Arg-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O DNLQVHBBMPZUGJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- LRPZJPMQGKGHSG-XGEHTFHBSA-N Arg-Ser-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O LRPZJPMQGKGHSG-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- XTWSWDJMIKUJDQ-RYUDHWBXSA-N Arg-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XTWSWDJMIKUJDQ-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N Arg-Tyr Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccc(O)cc1)C(=O)O UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QMQZYILAWUOLPV-JYJNAYRXSA-N Arg-Tyr-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QMQZYILAWUOLPV-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- XMZZGVGKGXRIGJ-JYJNAYRXSA-N Arg-Tyr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XMZZGVGKGXRIGJ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N Asn-Ala-Lys Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SLKLLQWZQHXYSV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ACRYGQFHAQHDSF-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ACRYGQFHAQHDSF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JZRLLSOWDYUKOK-SRVKXCTJSA-N Asn-Asp-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N JZRLLSOWDYUKOK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZKDGORKGHPCZOV-DCAQKATOSA-N Asn-His-Arg Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N ZKDGORKGHPCZOV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HXWUJJADFMXNKA-BQBZGAKWSA-N Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HXWUJJADFMXNKA-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- MYCSPQIARXTUTP-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N MYCSPQIARXTUTP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WXVGISRWSYGEDK-KKUMJFAQSA-N Asn-Lys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N WXVGISRWSYGEDK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- NPZJLGMWMDNQDD-GHCJXIJMSA-N Asn-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NPZJLGMWMDNQDD-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- VLDRQOHCMKCXLY-SRVKXCTJSA-N Asn-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O VLDRQOHCMKCXLY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HNXWVVHIGTZTBO-LKXGYXEUSA-N Asn-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HNXWVVHIGTZTBO-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- FKBFDTRILNZGAI-IMJSIDKUSA-N Asp-Cys Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O FKBFDTRILNZGAI-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N Asp-Ile Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBFYTUPYYZENIR-GHCJXIJMSA-N Asp-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N LBFYTUPYYZENIR-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- YVHGKXAOSVBGJV-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YVHGKXAOSVBGJV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- AKKUDRZKFZWPBH-SRVKXCTJSA-N Asp-Lys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N AKKUDRZKFZWPBH-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- JXGJJQJHXHXJQF-CIUDSAMLSA-N Asp-Met-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JXGJJQJHXHXJQF-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DRCOAZZDQRCGGP-GHCJXIJMSA-N Asp-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O DRCOAZZDQRCGGP-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N Asp-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- NTQDELBZOMWXRS-IWGUZYHVSA-N Asp-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- KBJVTFWQWXCYCQ-IUKAMOBKSA-N Asp-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KBJVTFWQWXCYCQ-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- ITGFVUYOLWBPQW-KKHAAJSZSA-N Asp-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ITGFVUYOLWBPQW-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- YODBPLSWNJMZOJ-BPUTZDHNSA-N Asp-Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YODBPLSWNJMZOJ-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- KNDCWFXCFKSEBM-AVGNSLFASA-N Asp-Tyr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KNDCWFXCFKSEBM-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- XMKXONRMGJXCJV-LAEOZQHASA-N Asp-Val-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XMKXONRMGJXCJV-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000020089 Atacta Species 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100285688 Caenorhabditis elegans hrg-7 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100402795 Caenorhabditis elegans mtl-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100315627 Caenorhabditis elegans tyr-3 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- HAYVTMHUNMMXCV-IMJSIDKUSA-N Cys-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CS HAYVTMHUNMMXCV-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- GEEXORWTBTUOHC-FXQIFTODSA-N Cys-Arg-Ser Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)CN=C(N)N GEEXORWTBTUOHC-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- TULNGKSILXCZQT-IMJSIDKUSA-N Cys-Asp Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O TULNGKSILXCZQT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- QYKJOVAXAKTKBR-FXQIFTODSA-N Cys-Asp-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N QYKJOVAXAKTKBR-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- IRKLTAKLAFUTLA-KATARQTJSA-N Cys-Thr-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O IRKLTAKLAFUTLA-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- DRXOWZZHCSBUOI-YJRXYDGGSA-N Cys-Thr-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O DRXOWZZHCSBUOI-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 238000007900 DNA-DNA hybridization Methods 0.000 description 1
- 101100481404 Danio rerio tie1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000044168 Fibroblast Growth Factor Receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010001515 Galectin 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100039556 Galectin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PBEQPAZRHDVJQI-SRVKXCTJSA-N Glu-Arg-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PBEQPAZRHDVJQI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- TUTIHHSZKFBMHM-WHFBIAKZSA-N Glu-Asn Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O TUTIHHSZKFBMHM-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ZOXBSICWUDAOHX-GUBZILKMSA-N Glu-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O ZOXBSICWUDAOHX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N Glu-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- LGYZYFFDELZWRS-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LGYZYFFDELZWRS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N Glu-Glu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- BIHMNDPWRUROFZ-JYJNAYRXSA-N Glu-His-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BIHMNDPWRUROFZ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- XTZDZAXYPDISRR-MNXVOIDGSA-N Glu-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N XTZDZAXYPDISRR-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HRBYTAIBKPNZKQ-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O HRBYTAIBKPNZKQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- ZQYZDDXTNQXUJH-CIUDSAMLSA-N Glu-Met-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZQYZDDXTNQXUJH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZWMYUDZLXAQHCK-CIUDSAMLSA-N Glu-Met-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZWMYUDZLXAQHCK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FGSGPLRPQCZBSQ-AVGNSLFASA-N Glu-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FGSGPLRPQCZBSQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- BDISFWMLMNBTGP-NUMRIWBASA-N Glu-Thr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BDISFWMLMNBTGP-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KFMBRBPXHVMDFN-UWVGGRQHSA-N Gly-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCNC(N)=N KFMBRBPXHVMDFN-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QCTLGOYODITHPQ-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QCTLGOYODITHPQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- SXJHOPPTOJACOA-QXEWZRGKSA-N Gly-Ile-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SXJHOPPTOJACOA-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LHYJCVCQPWRMKZ-WEDXCCLWSA-N Gly-Leu-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LHYJCVCQPWRMKZ-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-His Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- QGDOOCIPHSSADO-STQMWFEESA-N Gly-Met-Phe Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O QGDOOCIPHSSADO-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GULGDABMYTYMJZ-STQMWFEESA-N Gly-Trp-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GULGDABMYTYMJZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 206010018687 Granulocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSLXGYMEHVAJBH-DLOVCJGASA-N His-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VSLXGYMEHVAJBH-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- SYMSVYVUSPSAAO-IHRRRGAJSA-N His-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SYMSVYVUSPSAAO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- UOAVQQRILDGZEN-SRVKXCTJSA-N His-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UOAVQQRILDGZEN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- JCOSMKPAOYDKRO-AVGNSLFASA-N His-Glu-Lys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N JCOSMKPAOYDKRO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- NDKSHNQINMRKHT-PEXQALLHSA-N His-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N NDKSHNQINMRKHT-PEXQALLHSA-N 0.000 description 1
- JUIOPCXACJLRJK-AVGNSLFASA-N His-Lys-Glu Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N JUIOPCXACJLRJK-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- UXSATKFPUVZVDK-KKUMJFAQSA-N His-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N UXSATKFPUVZVDK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- YYOCMTFVGKDNQP-IHRRRGAJSA-N His-Met-Lys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N YYOCMTFVGKDNQP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- CCUSLCQWVMWTIS-IXOXFDKPSA-N His-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CCUSLCQWVMWTIS-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- QYZYJFXHXYUZMZ-UGYAYLCHSA-N Ile-Asn-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N QYZYJFXHXYUZMZ-UGYAYLCHSA-N 0.000 description 1
- UAVQIQOOBXFKRC-BYULHYEWSA-N Ile-Asn-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O UAVQIQOOBXFKRC-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- JSZMKEYEVLDPDO-ACZMJKKPSA-N Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O JSZMKEYEVLDPDO-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- PHIXPNQDGGILMP-YVNDNENWSA-N Ile-Glu-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N PHIXPNQDGGILMP-YVNDNENWSA-N 0.000 description 1
- UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- UASTVUQJMLZWGG-PEXQALLHSA-N Ile-His-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)NCC(=O)O)N UASTVUQJMLZWGG-PEXQALLHSA-N 0.000 description 1
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 description 1
- SJLVSMMIFYTSGY-GRLWGSQLSA-N Ile-Ile-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N SJLVSMMIFYTSGY-GRLWGSQLSA-N 0.000 description 1
- DMSVBUWGDLYNLC-IAVJCBSLSA-N Ile-Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 DMSVBUWGDLYNLC-IAVJCBSLSA-N 0.000 description 1
- HUORUFRRJHELPD-MNXVOIDGSA-N Ile-Leu-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N HUORUFRRJHELPD-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- PHRWFSFCNJPWRO-PPCPHDFISA-N Ile-Leu-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N PHRWFSFCNJPWRO-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- ADDYYRVQQZFIMW-MNXVOIDGSA-N Ile-Lys-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N ADDYYRVQQZFIMW-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- CEPIAEUVRKGPGP-DSYPUSFNSA-N Ile-Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 CEPIAEUVRKGPGP-DSYPUSFNSA-N 0.000 description 1
- XLXPYSDGMXTTNQ-UHFFFAOYSA-N Ile-Phe-Leu Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XLXPYSDGMXTTNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PELCGFMHLZXWBQ-BJDJZHNGSA-N Ile-Ser-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N PELCGFMHLZXWBQ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- ZDNNDIJTUHQCAM-MXAVVETBSA-N Ile-Ser-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N ZDNNDIJTUHQCAM-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- WCNWGAUZWWSYDG-SVSWQMSJSA-N Ile-Thr-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N WCNWGAUZWWSYDG-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- WIYDLTIBHZSPKY-HJWJTTGWSA-N Ile-Val-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WIYDLTIBHZSPKY-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PBCHMHROGNUXMK-DLOVCJGASA-N Leu-Ala-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 PBCHMHROGNUXMK-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- POJPZSMTTMLSTG-SRVKXCTJSA-N Leu-Asn-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N POJPZSMTTMLSTG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WXHFZJFZWNCDNB-KKUMJFAQSA-N Leu-Asn-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WXHFZJFZWNCDNB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- PNUCWVAGVNLUMW-CIUDSAMLSA-N Leu-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PNUCWVAGVNLUMW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FOEHRHOBWFQSNW-KATARQTJSA-N Leu-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O FOEHRHOBWFQSNW-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N Leu-Gly-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- VBZOAGIPCULURB-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N VBZOAGIPCULURB-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- VGPCJSXPPOQPBK-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VGPCJSXPPOQPBK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YWYQSLOTVIRCFE-SRVKXCTJSA-N Leu-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YWYQSLOTVIRCFE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N Leu-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CN=CN1 CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- KVOFSTUWVSQMDK-KKUMJFAQSA-N Leu-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CC1=CN=CN1 KVOFSTUWVSQMDK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- AZLASBBHHSLQDB-GUBZILKMSA-N Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C AZLASBBHHSLQDB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N Leu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- REPBGZHJKYWFMJ-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N REPBGZHJKYWFMJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- NTISAKGPIGTIJJ-IUCAKERBSA-N Leu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C NTISAKGPIGTIJJ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- ZJZNLRVCZWUONM-JXUBOQSCSA-N Leu-Thr-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZJZNLRVCZWUONM-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- ODRREERHVHMIPT-OEAJRASXSA-N Leu-Thr-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ODRREERHVHMIPT-OEAJRASXSA-N 0.000 description 1
- ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- VJGQRELPQWNURN-JYJNAYRXSA-N Leu-Tyr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VJGQRELPQWNURN-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- KNKHAVVBVXKOGX-JXUBOQSCSA-N Lys-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KNKHAVVBVXKOGX-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- VHXMZJGOKIMETG-CQDKDKBSSA-N Lys-Ala-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N VHXMZJGOKIMETG-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- JGAMUXDWYSXYLM-SRVKXCTJSA-N Lys-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JGAMUXDWYSXYLM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HKCCVDWHHTVVPN-CIUDSAMLSA-N Lys-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HKCCVDWHHTVVPN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PHHYNOUOUWYQRO-XIRDDKMYSA-N Lys-Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N PHHYNOUOUWYQRO-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- BYEBKXRNDLTGFW-CIUDSAMLSA-N Lys-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BYEBKXRNDLTGFW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ISHNZELVUVPCHY-ZETCQYMHSA-N Lys-Gly-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O ISHNZELVUVPCHY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- GQFDWEDHOQRNLC-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN GQFDWEDHOQRNLC-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- FHIAJWBDZVHLAH-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FHIAJWBDZVHLAH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- SQJSXOQXJYAVRV-SRVKXCTJSA-N Lys-His-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N SQJSXOQXJYAVRV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FGMHXLULNHTPID-KKUMJFAQSA-N Lys-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CN=CN1 FGMHXLULNHTPID-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- KYNNSEJZFVCDIV-ZPFDUUQYSA-N Lys-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KYNNSEJZFVCDIV-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- GAHJXEMYXKLZRQ-AJNGGQMLSA-N Lys-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O GAHJXEMYXKLZRQ-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- XBZOQGHZGQLEQO-IUCAKERBSA-N Lys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XBZOQGHZGQLEQO-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ODTZHNZPINULEU-KKUMJFAQSA-N Lys-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ODTZHNZPINULEU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- DYJOORGDQIGZAS-DCAQKATOSA-N Lys-Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)N DYJOORGDQIGZAS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMEWFDUAFKVAAT-WDSKDSINSA-N Met-Asn Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC(N)=O JMEWFDUAFKVAAT-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- TZLYIHDABYBOCJ-FXQIFTODSA-N Met-Asp-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O TZLYIHDABYBOCJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N Met-Glu-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- QGRJTULYDZUBAY-ZPFDUUQYSA-N Met-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QGRJTULYDZUBAY-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- GETCJHFFECHWHI-QXEWZRGKSA-N Met-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N GETCJHFFECHWHI-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- AFFKUNVPPLQUGA-DCAQKATOSA-N Met-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O AFFKUNVPPLQUGA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PZUUMQPMHBJJKE-AVGNSLFASA-N Met-Leu-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N PZUUMQPMHBJJKE-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- RBGLBUDVQVPTEG-DCAQKATOSA-N Met-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N RBGLBUDVQVPTEG-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GRKPXCKLOOUDFG-UFYCRDLUSA-N Met-Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 GRKPXCKLOOUDFG-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 229920000426 Microplastic Polymers 0.000 description 1
- 101100481406 Mus musculus Tie1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241001045988 Neogene Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- CGOMLCQJEMWMCE-STQMWFEESA-N Phe-Arg-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 CGOMLCQJEMWMCE-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- HXSUFWQYLPKEHF-IHRRRGAJSA-N Phe-Asn-Arg Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N HXSUFWQYLPKEHF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- HHOOEUSPFGPZFP-QWRGUYRKSA-N Phe-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O HHOOEUSPFGPZFP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- ZBYHVSHBZYHQBW-SRVKXCTJSA-N Phe-Cys-Asp Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N ZBYHVSHBZYHQBW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BIYWZVCPZIFGPY-QWRGUYRKSA-N Phe-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BIYWZVCPZIFGPY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-STQMWFEESA-N Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- SCKXGHWQPPURGT-KKUMJFAQSA-N Phe-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SCKXGHWQPPURGT-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- MGLBSROLWAWCKN-FCLVOEFKSA-N Phe-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MGLBSROLWAWCKN-FCLVOEFKSA-N 0.000 description 1
- KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N Phe-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011653 Platelet-Derived Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100037596 Platelet-derived growth factor subunit A Human genes 0.000 description 1
- 208000008601 Polycythemia Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002727 Protein Tyrosine Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 101100451713 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) HTL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 1
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 1
- PZZJMBYSYAKYPK-UWJYBYFXSA-N Ser-Ala-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O PZZJMBYSYAKYPK-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- OYEDZGNMSBZCIM-XGEHTFHBSA-N Ser-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OYEDZGNMSBZCIM-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- KAAPNMOKUUPKOE-SRVKXCTJSA-N Ser-Asn-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KAAPNMOKUUPKOE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N Ser-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- KNCJWSPMTFFJII-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KNCJWSPMTFFJII-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- PVDTYLHUWAEYGY-CIUDSAMLSA-N Ser-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PVDTYLHUWAEYGY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N Ser-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N Ser-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- IXCHOHLPHNGFTJ-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N IXCHOHLPHNGFTJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IOVHBRCQOGWAQH-ZKWXMUAHSA-N Ser-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O IOVHBRCQOGWAQH-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- IFPBAGJBHSNYPR-ZKWXMUAHSA-N Ser-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O IFPBAGJBHSNYPR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- HBTCFCHYALPXME-HTFCKZLJSA-N Ser-Ile-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HBTCFCHYALPXME-HTFCKZLJSA-N 0.000 description 1
- FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CO VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- KJKQUQXDEKMPDK-FXQIFTODSA-N Ser-Met-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KJKQUQXDEKMPDK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KZPRPBLHYMZIMH-MXAVVETBSA-N Ser-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KZPRPBLHYMZIMH-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N Ser-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- KKKVOZNCLALMPV-XKBZYTNZSA-N Ser-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KKKVOZNCLALMPV-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- PCJLFYBAQZQOFE-KATARQTJSA-N Ser-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PCJLFYBAQZQOFE-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- UBTNVMGPMYDYIU-HJPIBITLSA-N Ser-Tyr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O UBTNVMGPMYDYIU-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N Ser-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 1
- 241001479493 Sousa Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfisoxazole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150024829 Tek gene Proteins 0.000 description 1
- IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N Thr-Ala-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 1
- DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N Thr-Ala-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DGDCHPCRMWEOJR-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- VFEHSAJCWWHDBH-RHYQMDGZSA-N Thr-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VFEHSAJCWWHDBH-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- SWIKDOUVROTZCW-GCJQMDKQSA-N Thr-Asn-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N)O SWIKDOUVROTZCW-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N Thr-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- QNJZOAHSYPXTAB-VEVYYDQMSA-N Thr-Asn-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O QNJZOAHSYPXTAB-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- JEDIEMIJYSRUBB-FOHZUACHSA-N Thr-Asp-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O JEDIEMIJYSRUBB-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- VUKVQVNKIIZBPO-HOUAVDHOSA-N Thr-Asp-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N)O VUKVQVNKIIZBPO-HOUAVDHOSA-N 0.000 description 1
- UDQBCBUXAQIZAK-GLLZPBPUSA-N Thr-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UDQBCBUXAQIZAK-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 1
- WBCCCPZIJIJTSD-TUBUOCAGSA-N Thr-His-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N WBCCCPZIJIJTSD-TUBUOCAGSA-N 0.000 description 1
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- XGUAUKUYQHBUNY-SWRJLBSHSA-N Thr-Trp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XGUAUKUYQHBUNY-SWRJLBSHSA-N 0.000 description 1
- MYNYCUXMIIWUNW-IEGACIPQSA-N Thr-Trp-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MYNYCUXMIIWUNW-IEGACIPQSA-N 0.000 description 1
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 1
- VMSSYINFMOFLJM-KJEVXHAQSA-N Thr-Tyr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N)O VMSSYINFMOFLJM-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- CKHWEVXPLJBEOZ-VQVTYTSYSA-N Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O CKHWEVXPLJBEOZ-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N Thr-Val-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 1
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 1
- 108091052352 Tir receptor family Proteins 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- HJXOFWKCWLHYIJ-SZMVWBNQSA-N Trp-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HJXOFWKCWLHYIJ-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- YTYHAYZPOARHAP-HOCLYGCPSA-N Trp-Lys-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)O)N YTYHAYZPOARHAP-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 1
- IMMPMHKLUUZKAZ-WMZOPIPTSA-N Trp-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 IMMPMHKLUUZKAZ-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- WBZOZLNLXVBCNW-LTHWPDAASA-N Trp-Thr-Ile Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)[C@@H](C)O)=CNC2=C1 WBZOZLNLXVBCNW-LTHWPDAASA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- GDPDVIBHJDFRFD-RNXOBYDBSA-N Trp-Tyr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O GDPDVIBHJDFRFD-RNXOBYDBSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOOCQRRBKZTPKO-AVGNSLFASA-N Tyr-Glu-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 LOOCQRRBKZTPKO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- LMLBOGIOLHZXOT-JYJNAYRXSA-N Tyr-Glu-His Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N)O LMLBOGIOLHZXOT-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- NXRGXTBPMOGFID-CFMVVWHZSA-N Tyr-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NXRGXTBPMOGFID-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 1
- GZOCMHSZGGJBCX-ULQDDVLXSA-N Tyr-Lys-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O GZOCMHSZGGJBCX-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N Tyr-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N Tyr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 1
- XUIOBCQESNDTDE-FQPOAREZSA-N Tyr-Thr-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O XUIOBCQESNDTDE-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- LVILBTSHPTWDGE-PMVMPFDFSA-N Tyr-Trp-Lys Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LVILBTSHPTWDGE-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- FZADUTOCSFDBRV-RNXOBYDBSA-N Tyr-Tyr-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 FZADUTOCSFDBRV-RNXOBYDBSA-N 0.000 description 1
- LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N Val-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- 102000016549 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000648 angioblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000000823 artificial membrane Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001510 aspartic acids Chemical class 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- ISCJHDHABVEXDH-UHFFFAOYSA-N benzenecarboximidamide;sodium Chemical compound [Na].NC(=N)C1=CC=CC=C1 ISCJHDHABVEXDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 108700010039 chimeric receptor Proteins 0.000 description 1
- 101150059917 chtl-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 239000011247 coating layer Substances 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- OZRNSSUDZOLUSN-LBPRGKRZSA-N dihydrofolic acid Chemical compound N=1C=2C(=O)NC(N)=NC=2NCC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OZRNSSUDZOLUSN-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L disodium;(4-nitrophenyl) phosphate;hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000001174 endocardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 238000009650 gentamicin protection assay Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002307 glutamic acids Chemical class 0.000 description 1
- 108010042598 glutamyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 101150089730 gly-10 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000012613 in situ experiment Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N methyl acetate Chemical compound COC(C)=O KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002071 myeloproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 108010065781 myosin light chain 2 Proteins 0.000 description 1
- 101150091879 neo gene Proteins 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000011599 ovarian follicle development Effects 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- DCWXELXMIBXGTH-QMMMGPOBSA-N phosphonotyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(OP(O)(O)=O)C=C1 DCWXELXMIBXGTH-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000865 phosphorylative effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 108010017843 platelet-derived growth factor A Proteins 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 230000009822 protein phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 108020000494 protein-tyrosine phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001525 receptor binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000001718 repressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000002805 secondary assay Methods 0.000 description 1
- 238000010517 secondary reaction Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 210000000998 shell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005245 sintering Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 102000047459 trkC Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010064892 trkC Receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- LSGOVYNHVSXFFJ-UHFFFAOYSA-N vanadate(3-) Chemical compound [O-][V]([O-])([O-])=O LSGOVYNHVSXFFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004862 vasculogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000007998 vessel formation Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/515—Angiogenesic factors; Angiogenin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/15—Humanized animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/30—Bird
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/0331—Animal model for proliferative diseases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
- A01K2267/0375—Animal model for cardiovascular diseases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
- A01K2267/0381—Animal model for diseases of the hematopoietic system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
Abstract
Izolovaná molekula nukleové kyseliny, kódující chimerní TIE-2 ligand obsahující alespoň podíl prvního TIE-2 ligandu a podíl druhého TIE-2 ligandu, který je odlišný od prvního TIE-2 ligandu, přičemž první a druhý TIE-2 ligand je volen ze souboru zahrnujícího TIE-2 ligand 1, TIE-2 ligand 2, TIE-2 ligand 3 a TIE-2 ligand 4, je vhodná pro výrobu farmaceutických prostředků pro ošetřování jedinců trpících poruchami buněk, tkání nebo orgánů, které expresují TIE-2 receptor a pro diagnostické účely.ŕ
Description
Izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující chimerní TIE-2 ligand, chimerní ΊΊΕ-2 ligand kódující molekulu nukleové kyseliny, vektor zahrnující molekulu nukleové kyseliny, způsob produkce ligandů, konjugát obsahující ligand a farmaceutický prostředek, obsahující ligand
Oblast techniky
Vynález se obecně týká oboru genetického inženýrství a především gelu pro receptorové tyrozinkinázy a jejich příbuzné ligandy, jejich inzerce do rekombinantních DNA vektorů a produkce zakódovaných proteinů v hostitelských kmenech mikroorganizmů a v hostitelských eukaryotických buňkách. Zvláště se vynález týká nového modifikovaného ΊΊΕ-2 ligandů, který váže TIE-2 receptor, jakož také způsobu výroby a použití modifikovaného ligandů. Vynález se dále týká sekvence nukleové kyseliny kódující modifikovaný ligand a způsobu kódování modifikovaného ligandů a genového produktu nukleovou kyselinou.
Dosavadní stav techniky
Modifikovaný TIE-2-receptorový ligand, jakož také nukleová kyselina, která ho kóduje, mohou být užitečné při diagnóze a ošetřování určitých nemocí zahrnující endoteliální buňky a asociované TIE receptory, jako jsou neoplastická onemocnění, zahrnující nádorovou angiogenezi, hojení ran, tromboembolická onemocnění, ateroskleróza a zánětlivá onemocnění. Kromě toho se modifikovaného ligandů může používat k podpoře proliferace a/nebo diferenciace hematopoietických kmenových buněk. Obecně se receptor aktivující modifikované TIE-2 ligandy, zde popisované, může používat v podpoře růstu, přežití, migrace a/nebo diferenciace a/nebo stabilizace nebo destabilizace buněk exprimujících TIE receptor. Biologicky aktivní modifikovaný TIE-2 ligand se může použít pro TIE receptor exprimující TIE receptor, zahrnující například kardiatické a vaskulámí endoteliální buňky čočkové epitelium a srdeční epikardium a čerstvé hematopoietické buňky. Alternativně se takové lidské ligandy mohou používat pro podporu buněk, které jsou určeny k expresi receptoru TIE. Kromě toho modifikovaný ligand TIE-2 a jeho příbuzný receptor se může používat ve zkušebních systémech k identifikaci dalších agonistů nebo antagonistů receptoru.
Buněčné chování, zodpovědné za vývoj, udržování a opravu různých buněk a tkání, se řídí ve velké míře vnitřními buněčnými signály vedenými cesty růstových faktorů a podobných ligandů a jejich receptorů. Receptory jsou umístěny na buněčném povrchu a váží peptidy nebo polypeptidy, známé jako růstové faktory a jako jiné hormonu podobné ligandy. Výsledky interakce jsou rychlé biologické změny v odezvových buňkách jakož také rychlé a dlouhodobé úpravy buněčné genové exprese. Některé receptory, spojené s různými povrchy buněk, mohou vázat specifické růstové faktory.
Fosforylace tyrozinových zbytků v proteinech tyrozinkinázami je jedním klíčovým způsobem, kterým se signály napříč plazmové membrány. Některé současně známé proteinové tyrozinkinázové geny kódují transmembránové receptory polypeptidových růstových faktorů a hormonů, jako jsou epidermální růstový faktor (EGF), inzulín, inzulínu podobný růstový faktor-1 (IGF-I), růstové faktory odvozené od destiček (PDGF-A a B) a fibroblastové růstové faktory (FGF) (Heldin a kol., Cell Regulation, 1: str. 555 až 566, 1990; Ullrich a kol., Cell 61, str. 243 až 254, 1990). V každém případě tyto růstové faktory vykonávají své působení vázáním na mimobuněčný podíl svých příbuzných receptorů, což vede k aktivaci vnitřní tyrozinkinázy obsažené v cytoplazmovém podílu receptoru. Receptory růstového faktoru endoteliových buněk mají zvláštní význam pro možné zahrnutí růstových faktorů do některých důležitých fyziologických a patologických procesů, jako jsou vaskulogeneze, angiogeneze, ateroskleróza a zánětlivá onemocnění (Folkman a kol., Science, 235, str. 442 až 447, 1987). Receptory některých hematopoietických růstových faktorů jsou tyrozinkinázy; zahrnují c-fms, což je stimulační faktor 1
-1 CZ 295371 B6 receptorů kolonu (Sherr a kol., Cell, 41, str. 665 až 676, 1985) a c-kit, faktor receptorů primitivního hematopoietického růstu, který popsal Hung a kol. (Cell, 63, str. 225 až 233, 1990).
Receptorové tyrozinkinázy se dělí na evoluční podčeledi na bázi charakteristické struktury svých ektodomén (Ullrich a kol., Cell 61, str. 243 až 254, 1990). Takové podčeledi zahrnují EGF receptorů podobnou kinázu (subtřída I) a inzulínovou receptorů podobnou kinázu (subtřída II), přičemž každá tato podčeled’ obsahuje opakující se homologické cysteinem bohaté sekvence ve svých mimobuněčných doménách. Jediný cystein bohatý region se také zjistil v mimobuněčných doménách podobných kinázám eph (Hirai a kol., Science 238, str. 1717 až 1720, 1987; Lindberg a kol., Mol. Cell. Biol. 10, str. 6316 až 6324, 1990; Lhotak a kol., Mol Cell. Biol. 11, str. 2496 až 2502, 1991). PDGF receptory stejně jako c-fms a c-kit receptorové tyrozinokinázy se mohou seskupovat v podčeledi III; zatímco FGF receptory tvoří podčeled’ IV. Typické pro členy obou těchto podčeledi jsou mimobuněčné vinuté jednotky stabilizované meziřetězcovými disulfidickými vazbami. Tato tak zvaná imunoglobulinu Ig-podobná vinutí jsou zjištěna v proteinech imunoglobulinové nadčeledi, která obsahuje četné různé jiné buněčné povrchové receptory mající buď na buňku vázané, nebo rozpustné ligandy (Williams a kol., Ann. Rev. Immunol., 6, str. 381 až 405, 1988).
Receptorové tyrozinkinázy se liší svou specifícitou a afinitou. Obecně jsou receptorové tyrozinkinázy glykoproteiny, které sestávají (1) z mimobuněčné domény schopné vázat specifický růstový faktor nebo specifické růstové faktory; (2) z transmembránové domény, kterou je obvykle α-dvoušroubovicový podíl proteinu; (3) zjuxtamembránové domény, kde se receptor může regulovat například proteinovou fosfoiylací; (4) z tyrozinkinázové domény, která je enzymatickou složkou receptorů; a (5) z karboxylového zakončení, které je zahrnuto v mnoha receptorech v rozpoznávacím místu a ve vazbě substrátů pro tyrozinkinázu.
Procesy, jako jsou alternativní exonový sestřih a alternativní volba genového promotoru nebo polyadenylačního místa, se označují jako schopné produkovat některé polypeptidy ze stejného genu. Tyto polypeptidy mohou, avšak nemusí obsahovat různé shora uvedené domény. Následkem toho některé mimobuněčné domény mohou být exprimovány jako oddělené sekretované proteiny a některé formy receptorů mohou postrádat tyrozinkinázovou doménu a obsahují toliko mimobuněčnou doménu včleněnou do plazmové membrány prostřednictvím transmembránové domény plus krátké karboxylové zakončení.
Gen, kódující endoteliální buněčnou transmembránovou tyrozinkinázu, označenou původně jako RT-PCR jakožto neznámý tyrozinkinázový homologový cDNA fragment z lidských leukemických buněk, popsal Partanen a kol. (Proč. Nati. Acad. Sci. USA 87, str. 8913 až 8917, 1990). Tento gen a jeho zakódovaný protein se označují jako „TIE“ což je zkratka pro „tyrozinkinázu s Ig a EGF homologovými doménami“ (Partanen a kol., Mol. Cell. Biol. 12, str. 1698 až 1707, 1992).
Je známo, že vinutá mRNA je obsažena ve všech lidských zárodečných a ve všech myších zárodečných tkání. Na základě inspekcí je mediátor tie lokalizován do kardiatických a vaskulárních endoteliových buněk. Tedy tie mRNA je lokalizovaná do endotelu krevních cév a do endokardia 9,5 až 18,5 dní stalých myších zárodků. Podporovaná tie exprese je doložená v průběhu neovaskularizace spojené s vývojem vaječníkových folikulů a granulace tkáně v ranách pokožky (Korhonon a kol., Blood 80, str. 2548 až 2555, 1992). Proto se usuzuje, že TIE má úkol při angiogenezi, která je důležitá pro vývoj ošetřování pevných nádorů a některých jiných na angiogenezi závislých onemocnění, jako jsou diabetická retinopathie, lupénka, ateroskleróza a artritida.
Je známo, že dva strukturálně příbuzné krysí TIE receptorové proteiny kódují odlišné geny s příbuznými profily exprese. Jeden gen, označovaný tie-1 je krysí homolog lidského tie (Maisonpierre a kol., Oncogene 8, str. 1631 až 1637, 1993). Druhý gen tie-2 může být krysí homolog myšího tek genu, o kterém se podobně jako o tie uvádí, že se exprese u myší výhradně
-2CZ 295371 B6 v endoteliových buňkách a v jejich předpokládaných předgenitorech (Dumont a kol., Oncogene 8, str. 1293 až 1301, 1993). Lidský homolog tie-2, který je zde zcela začleněn, popsal Ziegler (americký patentový spis US 5 447 860, 5. září 1995) (přičemž se označuje jako „ork“).
Zjistilo se, že oba geny jsou ve velké míře exprimovány v endoteliových buňkách embryí a v postnatálních tkáních. Významné hladiny tie-2 transkriptů jsou obsaženy také v jiných populacích zárodečných buněk, včetně epitelia čočky, srdečního epikardia a regionů mesenchymu (Maisonpierre a kol., Oncogene 8, str. 1631 až 1637,1993).
Z převážné exprese TIE receptoru ve vaskulámím endoteliu vyplývá, že TIE má význam ve vývoji a v udržování vaskulámího systému. To může mít význam při determinaci endoteliové buňky, při proliferaci, diferenciaci a migraci buněk a při začleňování do vaskulámích prvků. Analýza myších embryí s deficitem TIE-2 objasňuje význam angiogeneze, zvláště pro vytváření vaskulámího síťoví v endoteliových buňkách (T.N. Sáto a kol., Nátuře 376, str. 70 až 74, 1995). Ve zralém vaskulámím systému může mít TIE funkci v přežívání endoteliových buněk v udržování a v odezvě na patogenní vlivy.
Receptory TIE jsou tedy exprimovány v primitivních hematopoietických kmenových buňkách, B buňkách a v podskupině megakaryotických buněk, mají roli ligandů, které váží tyto receptory v časné hematopoiezi, v diferenciaci a/nebo v proliferaci B buněk a v megakaryocytické diferenciační dráze (Iwama a kol., Biochem. Biphys. Research Communications 195, str. 301 až 309, 1993; Hashiyama a kol., Bllod 87, str. 93 až 101, 1996; Batard a kol., Blood 87, str. 2212 až 2220, 1996).
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující chimemí TIE-2 ligand obsahující jednu N-koncovou doménu, jednu smyčkově stočenou doménu a jednu fibrinogenu podobnou doménu, přičemž alespoň dvě domény jsou odvozeny od odlišných TIE-2 ligandů ze souboru zahrnujícího TIE-2 ligand 1, TIE-2 ligand 2, TIE-2 ligand 3 a TIE-2 ligand 4.
Podstatou vynálezu je také kompozice obsahující modifikovaný TIE-2 ligand v podstatě prostý jiných proteinů. Modifikovaný TIE-2 ligand se týká ligandů čeledi TIE ligandů, které reprezentativně obsahují popsané ligandy TLI, TL2, TL3 a TL4, které jsou pozměněné adicí, delecí nebo substitucí jedné nebo několika aminokyselin nebo způsobem značení například podílu Fc lidského IgG-1, přičemž jim však zůstává schopnost vázat TIE-2 receptor. Modifikovaný TIE-2 ligand zahrnuje také chimemí TIE-2 ligand obsahující alespoň podíl prvního TIE-2 ligandů a podíl druhého TIE-2 ligandů, který je od prvního odlišný. Například, tedy bez záměru na jakémkoliv omezení, prvním TIE-2 ligandem je TLI a druhým TIE-2 ligandem je TL2. Vynález předpokládá jiné kombinace za použití dalších členů TIE-2 ligandové čeledi. Například jiné kombinace pro vytvoření chimemího TIE-2 ligandů jsou možné včetně, avšak bez záměru na jakémkoliv omezení, kombinací, kde první ligand je volen ze souboru zahrnujícího TLI, TL2, TL3 a TL4, a druhý ligand, odlišný od prvního ligandů, je volen ze souboru zahrnujícího TLI, TL2, TL3 a TL4.
Podstatou vynálezu je izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand. Podle jednoho provedení izolovaná molekula nukleové kyseliny kóduje TIE-2 ligand z čeledi ligandů TIE, jejímiž reprimentativními ligandy jsou TLI, TL2, TL3 a TL4, jak shora uvedeno, které jsou obměněny adicí, delecí nebo substitucí jedné nebo několika aminokyselin nebo způsobem značení například podílem Fc lidského IgG-1, přičemž jim však zůstává schopnost vázat TIE-2 receptor. Podle jiného provedení izolovaná molekula nukleové kyseliny kóduje TIE-2 ligand, který je chimerním ligandem, obsahujícím alespoň část prvního TIE-2 ligandů a alespoň část druhého TIE-2 ligandů, který je odlišný od prvního TIE-2 ligandů. Například, avšak bez záměru na jakémkoliv omezení, prvním TIE-2 ligandem je TLI a druhým
-3 CZ 295371 B6
TIE-2 ligandem je TL2. Vynález předpokládá jiné kombinace za použití dalších členů TIE-2 ligandové čeledi. Například jiné kombinace jsou možné včetně, avšak bez záměru na jakémkoliv omezení, kombinace, kdy izolovaná molekula nukleové kyseliny kóduje modifikovaný TIE-2 ligand, který je chimerní TIE-2 ligand obsahující část prvního ligandu volenou ze souboru zahrnujícího TLI, TL2, TL3 a TL4, a část druhého ligandu, odlišného od prvního ligandu, voleného ze souboru zahrnujícího TLI, TL2, TL3 a TL4.
Izolovanou nukleovou kyselinou může být ENA, cDNA nebo RNA. Vynález se také týká vektoru obsahujícího izolovanou molekulu nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand. Vynález se také týká hostitelského vektorového systému pro produkci vhodné hostitelské buňky polypeptidu majícího biologickou aktivitu modifikovaného TIE-2 ligandu. Vhodná hostitelská buňka může být bakteriální, kvasinková, hmyzí nebo savčí. Vynález se také týká způsobu produkce polypeptidu majícího biologickou aktivitu modifikovaného TIE-2 ligandu, který obsahuje rostoucí buňky hostitelského vektorového systému za podmínek umožňujících produkci polypeptidu a získání takto produkovaného polypeptidu.
Podle vynálezu popsaná izolovaná buňka nukleové kyseliny, kódující modifikovaný TIE-2 ligand, umožňuje vývoj ligandu jako terapeutického činidla pro ošetřování jedinců trpících poruchami buněk, tkání nebo orgánů, které exprimují TIE-2 receptor. Vynález se také týká protilátky, která specificky váže takovou terapeutickou molekulu. Protilátka může být monoklonální nebo polyklonální. Vynález se také týká způsobu použití takové monoklonální nebo polyklonální protilátky k měření množství terapeutické molekuly ve vzorku, odebraném pacientovi pro účely monitorování průběhu terapie.
Vynález se také týká protilátky, které specificky váže shora popsaný modifikovaný TIE-2 ligand. Protilátka může být monoklonální nebo polyklonální. Vynález se také týká farmaceutických prostředků, které obsahují protilátku, která specificky váže shora popsaný modifikovaný TIE-2 ligand, ve farmaceuticky vhodném nosiči. Vynález se také týká způsobu blokování růstu krevních cév v případě savců podáváním účinného množství terapeutického prostředku obsahujícího protilátku, která specificky váže receptor aktivující shora opsaný modifikovaný TIE-2 ligand ve farmaceuticky vhodném nosiči.
Vynález se také týká farmaceutických prostředků, které obsahují shora popsaný modifikovaný TIE-2 ligand, ve farmaceuticky vhodném nosič. Vynález se také týká způsobu podpory neovaskularizace podáváním účinného množství terapeutického prostředku obsahujícího receptor aktivující shora popsaný modifikovaný TIE-2 ligand ve farmaceuticky vhodném nosiči. Podle jednoho provedení se vynález využívá pro ošetřování ischemie. Podle ještě dalšího provedení se receptoru, aktivujícího shora popsaný modifikovaný TIE-2 ligand, využívá samotného nebo v kombinaci s jinými hematopoietickými faktory k podpoře proliferace nebo diferenciace hematopoietických kmenových buněk, B buněk nebo megakaryotických buněk.
Modifikované TIE-2 ligandy se podle vynálezu mohou konjugovat na cytotoxická činidla a na terapeutické kompozice z nich připravené. Vynález se proto dále týká receptorů, které specificky váží modifikované TIE-2 ligandy. Vynález se dále týká farmaceutických prostředků, které obsahují receptory, které specificky váží shora popsaný modifikovaný TIE-2 ligand ve farmaceuticky vhodném nosiči. Vynález se také týká způsobu blokování růstu krevních cév savců podáváním účinného množství terapeutického prostředku obsahujícího receptor, který specificky váže popsaný modifikovaný TIE-2 ligand ve farmaceuticky vhodném nosiči.
Vynález se také týká TIE-2 receptorového antagonistu a způsobu inhibice TIE-2 biologické aktivity savců, při kterém se podává savcům účinné množství TIE-2 antagonistu. Podle vynálezu může být antagonistem shora popsaný modifikovaný TIE-2 ligand, který váže, nikoliv však aktivuje TIE-2 receptor.
-4CZ 295371 B6
Vynález blíže objasňuje další podrobný popis s připojenými obrázky.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. IA a 1B: TIE-2 receptor (TIE-2 BR) inhibuje vývoj krevních cév v kuřecí zárodečné chorioallantoické membráně (CAM). Jeden kousek resorbovatelné želatinové pěny (galforma) napuštěný 6 pg RB se vloží bezprostředně pod CAM 1 den starého kuřecího embrya. Po dalších třech dnech inkubace se 4 dny staré embryo a obklopující CAM izoluje a zkouší. Na obr. 1A je embryo ošetřené EHK-1 RB (rEHK-1 ecto/hlgGl Fc) a má normálně vinuté krevní cévy v obklopujícím CAM. Na obr. 1B jsou všechna embrya, ošetřená TIE-2 RB (r TIE-2 ecto/h IgGl Fc), mrtvá, mají zmenšenou velikost a většinou zcela bez obklopujících krevních cév.
Obr. 2: Vektor pJF 14.
Obr. 3: Restrikční mapa lambdagtlO.
Obr. 4: Nukleová kyselina a odvozená nukleová kyselina (jednopísmenový kód) sekvence lidského TIE-2 ligandu-1 z klonu lambdagtlO kódující htie-2-ligand-l.
Obr. 5: Nukleová kyselina a odvozená nukleová kyselina (jednopísmenový kód) sekvence lidského TIE-2 ligandu-1 z klonu T98G.
Obr. 6: Nukleová kyselina a odvozená nukleová kyselina (jednopísmenový kód) sekvence lidského TIE-2 ligandu-2 z klonu pBluescript KS kódující lidský TIE-2 ligand 2.
Obr. 7: Western blot ukazující aktivaci TIE-2 receptoru TIE-2 ligandem 1 (pas LI) nikoliv však TIE-2 ligandem 2 (pas L2) nebo kontrola (Mock).
Obr. 8: Western blot ukazující prioritní ošetření HAEC buněk s nadbytkem TIE-2 ligandu 2 (pás L2) antagonizuje následující schopnost ředit TIE-2 ligand 1 k aktivaci TIE-2 receptoru (TIE2-R) ve srovnání s prioritním ošetřením HAEC buněk prostředím Mock (Mock).
Obr. 9: Western blot ukazující schopnost TL2 konkurenčně inhibovat TL-1 aktivaci TIE-2 receptoru za použití lidské buněčné hybridní linie EA.hy926.
Obr. 10: Histogram ukazující vázání na krysí TIE-2 IgG imobilizovaný povrch TIE-2 ligandu vC2C12 ras, Rat2 ras, Shep a T98G koncentrovaných (10 X) kondicionovaným prostředím. Krysí TIE-2 (rTIE2) specifické vázání je doloženo významnou redukcí aktivity vázání v přítomnosti 25 pg/ml rozpustného kiysího TIE-2 RB ve srovnání s menší redukcí v přítomnosti rozpustného trkB RB.
Obr. 11: Vázání rekombinantního lidského TIE-2 ligandu 1 (hTLl) a lidského TIE-2 ligandu 2 (hTL2) v COS buněčných supernatantech na lidský TIE 2 receptorový (RB) imobilizovaný povrch. Lidské TIE-2-specifícké vázání se stanovuje inkubací vzorků s 25 pg/ml buď rozpustného lidského TIE-2 RB, nebo trkB RB; významné snížení aktivity vázání se pozoruje toliko pro vzorky inkubované s lidským TIE-2 RB.
Obr. 12: Western blot ukazující, že TIE-2 receptor (označovaný jako TIE-2 RB nebo jako zde TIE-2-FC) blokuje aktivaci TIE-2 receptorů TIE-2 ligandem 1 (TLI) vHUVEC buňkách, zatímco nepříbuzný receptor (TRKB-Fc) neblokuje tuto aktivaci.
Obr. 13: Agarové gely ukazují sériové ředění [nezředěno (1) až 10'4] TLI a TL2 RT-PCR produktů získaných z El4.5 myších fatálních jater (pásy 1 -totál, pásy 3 - stromálně obohaceno
-5CZ 295371 B6 a pásy 4 c-kit+TERl 19 hematopoietické prekurzorové buňky) a E14.5 myší fetální thymus (pásy 2 - totál).
Obr. 14: Agarové gely ukazují sériové ředění [nezředěné (1) až 10'3] TLI a TL2 RT-PCR produktů získaných z kortikálních trámčinových buněk E14.5 myšího fetálního thymu (pásy 1 - CDR1 + /A2B5-) a z medulámích trámčinových buněk (pásy CDR1 + /A2B5+).
Obr. 15: Schéma hypotetické úlohy TIE-2/TIE ligandů v angiogenezi. TLI je představované (o), TL2 je představované (x), TIE-2 je představované (T), VEGF je přestavované ([]) a fikl (VEGF receptor) je představované (Y).
Obr. 16: In šitu hybridizační sklíčka ukazující dočasné expresní vzorce TIE-2, TLI, TL2 a VEGF v průběhu angiogeneze, spojené s folikulámím vývojem a tvořením corpus luteum ve vaječníku krys ošetřených sérem březí klisny. Sloupec 1: časný předovulační folikul; sloupec 2: předovulační folikul; sloupec 3: časný corpus luteum; a sloupec 4: atretický folikul; řádek A: široké pole; řádek B: VEGF; řádek C: TL2; řádek D: TLI; a řádek E: TIE-2 receptor.
Obr. 17: Srovnání aminokyselinových sekvencí zralého TLI proteinu a zralého TL2 proteinu. TLI sekvence je stejná jako obr. 4 stou výjimkou, že zdánlivá vedoucí sekvence se odstranila. Podobně TL2 sekvence je stejná jako sled podle obr. 6 s tou výjimkou, že zdánlivá vedoucí sekvence se odstranila. Šipky naznačují zbytky Arg49, Cys245 a Arg264 z TLI, což odpovídá zbytkům aminokyselin v poloze 69,265 a 284 nebo TLI podle obr. 4.
Obr. 18: Western blot kovalentní multimemí struktury TLI a TL2 (panel A) a interkonverze TLI a TL2 mutací jednoho cysteinu (panel B).
Obr. 19: Typická křivka TIE-2-IgG vázání k ímobilizovanému TLI ve kvantitativním testu vázání v nepřítomnosti buněk.
Obr. 20: Typická křivka ukazující TIE-2 ligand 1 ligandové části obsahující fibrinogenu podobnou doménu ligandu vázaného na Fc doménu IgG (TLl-fFc) vázání k imobilizované TIE-2 ectodoméně ve kvantitativním testu vázání v nepřítomnosti buněk.
Obr. 21: Nukleotid a odvozená aminokyselina (jednopísmenový kód) sekvence TIE ligand 3. Kódující sekvence startuje v poloze 47. Fibrinogenu podobná doména startuje v poloze 929.
Obr. 22: Srovnání aminokyselinových sekvencí TIE ligandových členů čeledi. mTL3 je myší TIE ligand-3; hTLl je lidský TIE-2 ligand-1; chTLl je kuřecí TIE-2 ligand-1; mTLl je myší TIE-2 ligand-1; mTL2 je myší TIE-2 ligand-2; hTL2 je lidský TIE-2 ligand-2. Orámované oblasti indikují konzervované regiony homologu mezi členy čeledi.
Obr. 23: Nukleotid a odvozená aminokyselina (jednopísmenový kód) sekvence TIE ligand 4. Šipka indikuje nukleotidovou pozici 569.
Obr. 24: Nukleotid a odvozená aminokyselina (jednopísmenový kód) chimemího TIE ligandu označeného 1N1C2F (chiméra 1). Údajná vedoucí sekvence se kóduje nukleotidy 1-60.
Obr. 25: Nukleotid a odvozená aminokyselina (jednopísmenový kód) chimemího TIE ligandu označeného 2N2C1F (chiméra 2).Údajná vedoucí sekvence se kóduje nukleotidy 1-48.
Obr. 26: Nukleotid a odvozená aminokyselina (jednopísmenový kód) chimemího TIE ligandu označeného 1N2C2F (chiméra 3). Údajná vedoucí sekvence se kóduje nukleotidy 1-60.
Obr. 27: Nukleotid a odvozená aminokyselina (jednopísmenový kód) chimemího TIE ligandu označeného 2N1C1F (chiméra 4). Údajná vedoucí sekvence se kóduje nukleotidy 1-48.
-6CZ 295371 B6
Další podrobný popis je zaměřen na vytvořené nové modifikované TIE-2 ligandy, které váží TIE-2 receptor. Vynález se týká kompozice obsahující modifikovaný TIE-2 ligand v podstatě prostý jiných proteinů. Modifikovaným TIE-2 ligandem se míní ligand TIE čeledi ligandů, jejíž 5 reprezentanty obsahují ligandy TLI, TL2, TL3 a TL4, který je obměněn adicí, delecí nebo substitucí jedné nebo několika aminokyselin nebo značením například PC podílu lidského IgG, který si však ponechává schopnost vázat TIE-2 receptor. Modifikovaný TIE-2 ligand zahrnuje také chimemí TIE-2 ligand, obsahující alespoň podíl prvního TIE-2 ligandu a podíl druhého TIE-2 ligandu, který je odlišný od prvního podílu TIE-2 ligandu. Příkladně, bez záměru na 10 jakémkoliv omezení, je prvním TIE-2 ligandem TLI a druhým TIE-2 ligandem je TL2. Vynález předpokládá možnost jiné kombinace pro vytváření TIE-2 ligandu členů čeledi. Například jiné kombinace pro vytváření chimerního TIE-2 ligandu jsou možné včetně, bez záměru na jakémkoliv omezení, kombinací, kdy první ligand je volen ze souboru zahrnujícího TLI, TL2, TL3 a TL4 a druhý ligand, odlišný od prvního ligandu, je volen ze souboru zahrnujícího TLI, 15 TL2, TL3aTL4.
Vynález se rovněž týká izolované molekuly nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand. Podle jednoho provedení izolovaná molekula nukleové kyseliny kóduje TIE-2 ligand rodiny TIE ligandů, jehož reprezentanty zahrnují shora popsané ligandy TLI, TL2, TL3 a TL4, 20 které jsou obměněny adicí, delecí nebo substitucí jedné nebo několika aminokyselin nebo značením například PC podílu lidského IgG-1, který si však ponechává schopnost vázat TIE-2 receptor. Podle jiného provedení izolovaná molekula nukleové kyseliny kóduje modifikovaný TIE-2 ligand, který je chimemím TIE-2 ligandem, obsahujícím alespoň podíl prvního TIE-2 ligandu a podíl druhého TIE-2 ligandu, který je odlišný od prvního podílu. Příkladně, bez záměru 25 na jakémkoliv omezení, je prvním TIE-2 ligandem TLI a druhým TIE-2 ligandem TL2. Vynález předpokládá jiné kombinace za použití přídavných členů TIE-2 ligandové čeledi. Například jsou možné další kombinace zahrnující příkladně, bez záměru na jakémkoliv omezení, kombinace, ve kterých izolovaná molekula nukleové kyseliny kóduje modifikovaný TIE-2 ligand, který je chimemím TIE-2 ligandem obsahujícím podíl prvního ligandu voleného ze souboru zahrnujícího 30 TLI, TL2, TL3 a TL4 a podíl druhého ligandu, odlišného od prvního ligandu, voleného ze souboru zahrnujícího TLI, TL2, TL3 a TL4.
Vynález zahrnuje modifikované TIE-2 ligandy a jejich aminokyselinové sekvence jakož také jejich funkční ekvivalentní varianty, jakož také proteiny nebo peptidy zahrnující substituci, delecí 35 nebo inserci mutantů popsaných sekvencí, které váží TIE-2 receptor a působí jako jejich agonisty nebo antagonisty. Takové varianty zahrnují přísady, kdy jsou aminokyselinové zbytky nahrazeny zbytky v sekvenci vedoucí ke změně bez zřejmých příznaků. Například jeden nebo několik aminokyselinových zbytků v sekvenci mohou být nahrazeny alespoň jednou jinou aminokyselinou s podobnou polaritou, která působí jako funkční ekvivalent vedoucí ke obměně bez zřejmých 40 příznaků. Substituenty pro aminokyselinu v rámci sekvence mohou být voleny z jiných členů třídy, do které aminokyselina patří. Například třída nepolárních (hydrofobních) aminokyselin zahrnuje alanin, leucin, isoleucin, valin, prolin, fenylalanin, tryptofan a methionin. Polární neutrální aminokyseliny zahrnují glycin, serin, threonin, cystein, tyrozin, asparagin a glutamin. Aminokyseliny s pozitivním nábojem (zásadité) zahrnují arginin, lysin a histidin. Aminokyseliny 45 s negativním nábojem (kyselé) zahrnují asparagovou a glutamovou kyselinu.
Vynález zahrnuje také proteiny nebo fragmenty jejich derivátů, které mají stejnou nebo podobnou aktivitu jako shora popsané definované TIE-2 ligandy a deriváty, které jsou odlišně modifikovány v průběhu translace nebo po ní, například glykosylací, proteolytickým štěpením, 50 vázáním na protilátkovou molekulu nebo na jiný buněčný ligand. Funkčně ekvivalentní molekuly také zahrnují molekuly, které obsahují modifikace, N-koncové modifikace, které jsou výsledkem exprese v určitém rekombinantním hostiteli, jako jsou například N-koncová modifikace, ke kterým dochází v určitých bakteriálních (například E. coli) expresních systémech.
Vynález zahrnuje také nukleotidové sekvence, které kódují shora popsané proteiny jako modifikované TIE-2 ligandy, jakož také hostitelské buňky, včetně kvasinek, bakterií, virů a savčích buněk, které jsou geneticky upraveny k produkci proteinů, například transfekci, transdukcí, infekcí, elektroporací nebo mikroinjekcí nukleové kyseliny, kódující shora popsané modifikované TIE-2 ligandy do vhodného expresního vektoru. Vynález také zahrnuje zavádění nukleové kyseliny kódující modifikované TIE-2 ligandy technikou genové terapie, popsanou v literatuře (například Finkel a Epstein FASEB J. 9, str. 843 až 851, 1995; Guzman a kol. PNAS (USA) 91, str. 10732 až 10736, 1994).
Pracovníkům v oboru je zřejmé, že vynález zahrnuje DNA a RNA sekvence, které hybridizují na modifikovaném TIE-2 ligandu kódující nukleotidové sekvence za podmínek mírné tvrdosti, jak je objasněno v literatuře (například Sambrook a kol., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání, svazek 1, str. 101 až 104, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989). Proto molekula nukleové kyseliny, uvažovaná podle vynálezu, zahrnuje molekulu mající nukleotidovou sekvenci odvozenou z aminokyselinové sekvence modifikovaného TIE-2 ligandu, jak shora popsáno, stejně jako molekulu mající sekvenci nukleotidů, které hybridizují na takové nukleotidové sekvenci a také nukleotidovou sekvenci, která je produktem odbourání shora popsané sekvence jakož výsledek genetického kódu, která však kóduje ligand, který váže TIE-2 receptor a která má aminokyselinovou sekvenci a jiné primární, sekundární a terciární charakteristiky, které jsou dostatečně duplikační shora popsaného modifikovaného TIE-2 ligandu, takže dodávají molekule stejnou biologicky aktivitu jako je shora popsaný modifikovaný TIE-2 ligand.
Vynález se týká izolované molekuly nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand, který váže a aktivuje TIE-2 receptor obsahující nukleotidovou sekvenci kódující TIE-2 ligand 1, přičemž podíl nukleotidové sekvence, který kóduje N-koncovou doménu TIE-2 ligandu 1, je nahrazen nukleotidovou sekvencí, která kóduje N-koncovou doménu TIE-2 ligandu 2. Vynález se také týká takové molekuly nukleové kyseliny s další modifikací, přičemž podíl nukleotidové sekvence, který kóduje smyčkově stočenou doménu TIE-2 ligandu 1 je nahrazen nukleotidovou sekvencí, která kóduje smyčkově stočenou doménu TIE-2 ligandu 2.
Vynález se také týká izolované molekuly nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand, který váže a aktivuje TIE-2 receptor obsahující nukleotidovou sekvenci kódující TIE-2 ligand 1, přičemž podíl nukleotidové sekvence, který kóduje N-koncovou doménu TIE-2 ligandu 1, je nahrazen nukleotidovou sekvencí, která kóduje N-koncovou doménu TIE-2 ligandu 2 a který je dále modifikován ke kódování odlišné aminokyseliny místo cysteinového zbytku kódovaného nukleotidu 784-787, jak je objasněno na obr. 27. Serinový zbytek je s výhodou nahrazen za cysteinový zbytek. Podle jiného provedení je molekula nukleové kyseliny modifikována ke kódování odlišné aminokyseliny místo argininového zbytku kódovaného nukleotidy 199-201, jak je objasněno na obr. 27. Serinový zbytek je s výhodou nahrazen za argininový zbytek.
Vynález se také týká izolované molekuly nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand, který váže a aktivuje TIE-2 receptor obsahující nukleotidovou sekvenci kódující TIE-2 ligand 1, který je modifikován ke kódování odlišné aminokyseliny místo cysteinového zbytku aminokyseliny v pozici 245. Serinový zbytek je s výhodou nahrazen za cysteinový zbytek.
Vynález se dále týká izolované molekuly nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand, který váže avšak neaktivuje TIE-2 receptor obsahující nukleotidovou sekvenci kódující TIE-2 ligand 1, přičemž podíl nukleotidové sekvence, který kóduje N-koncovou doménu TIE-2 ligandu 1, je vypuštěn. Vynález se dále týká molekuly nukleové kyseliny dále modifikované tak, že podíl nukleotidové sekvence, který kóduje smyčkově stočenou doménu TIE-2 ligandu 1, je vypuštěn a podíl, který kóduje fibrinogenovou doménu je fúzován ve struktuře do nukleotidové sekvence kódující lidský imunoglobulinový gamma-1 konstantní region (IgG Fc).
Vynález se dále týká izolované molekuly nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand, který váže avšak neaktivuje TIE-2 receptor obsahující nukleotidovou sekvenci kódující
-8CZ 295371 B6
TIE-2 ligand 2, přičemž podíl niikleotidové sekvence, který kóduje N-koncovou doménu TIE-2 ligandů 2, je vypuštěn. Vynález se dále týká molekuly nukleové kyseliny dále modifikované tak, že podíl nukleotidové sekvence, který kóduje smyčkově stočenou doménu TIE-2 ligandů 2, je vypuštěn a podíl, který kóduje fíbrinogenovou doménu je fúzován ve struktuře do nukleotidové sekvence kódující lidský imunoglobulinový gamma-1 konstantní region (IgG Fc).
Vynález se dále týká izolované molekuly nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand, který váže avšak neaktivuje TIE-2 receptor obsahující nukleotidovou sekvenci kódující TIE-ligand 1, přičemž podíl nukleotidové sekvence, který kóduje N-koncovou doménu TIE-2 ligandů 1, je nahrazen nukleotidovou sekvencí, která kóduje fíbrinogenovou doménu TIE-2 ligandů 2. Vynález se dále týká molekuly nukleové kyseliny dále modifikované tak, že podíl nukleotidové sekvence, který kóduje smyčkově stočenou doménu TIE-2 ligandů 1, je nahrazen nukleotidovou sekvencí, které kóduje smyčkově stočenou doménu TIE-2 ligandů 2.
Vynález se dále týká modifikovaného TIE-2 ligandů zakódovaného jakýmikoliv molekulami nukleové kyseliny podle vynálezu.
Vynález se také týká chimemího TIE-2 ligandů obsahujícího alespoň část prvního TIE-2 ligandů a alespoň část druhého TIE-2 ligandů, který je odlišný od prvního TIE-2 ligandů, přičemž jsou první a druhé TIE-2 ligandy voleny ze souboru zahrnujícího TIE-2 ligand 1, TIE-2 ligand 2, TIE ligand 3 a TIE ligand 4. Výhody chimemí TIE-2 ligand obsahující alespoň část TIE-2 ligandů 1 a alespoň část TIE-2 ligandů 2.
Vynález se týká molekuly nukleové kyseliny, která kóduje chimemí TIE ligand, jak je uvedeno na obr. 24, 25, 26 nebo 27. Vynález se také týká chimemího ligandů podle obr. 24, 25, 26 nebo 27. Vynález se také týká chimemího ligandů podle obr. 27, modifikovaného tak, aby měl odlišnou aminokyselinu místo cysteinového zbytku kódovaného nukleotidy 784-787.
Jakéhokoliv způsobu, známého pracovníkům v oboru pro inserci DNA fragmentů do vektoru, se může používat pro konstrukci expresního vektoru kódujícího modifikovaný TIE-2 ligand za použití vhodných transkripčních/translačních kontrolních signálů a proteinových kódujících sekvencí. Tyto způsoby mohou zahrnovat in vitro rekombinantní DNA a syntetické technicky a in vivo rekombinaci (genetická rekombinace). Exprese sekvence nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand nebo jejich peptidové fragmenty se může regulovat druhou sekvencí nukleové kyseliny, která je operativně vázána na modifikovaný TIE-2 ligand kódováním sekvence tak, že je modifikovaný TIE-2 ligandový protein nebo peptid expresován v hostiteli transformovaném rekombinantní DNA molekulou. Například exprese modifikovaného TIE-2 ligandů, zde popsaná, se může řídit jakýmkoliv systémem promotor/podporovač, známým v oboru. Promotory, kteiých se může používat k řízení exprese ligandů zahrnují, bez záměru na jakémkoliv omezení, dlouhou koncovou repetici, popsanou v literatuře (Squinto a kol., Cell 65, str. 1 až 20, 1991); SV40 časný promotorový region (Bemoist a Chambon, Nátuře 290, str. 304 až 310), CMV promotor, M-MuLV 5' koncovou repetici, promotor obsažený ve 3' dlouhé koncové repetici viru Rous sercoma (Yamamoto a kol., Cell 22, str. 787 až 797, 1980), oparový thimidinkinázový promotor (Wagner a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 78, str. 144 až 145, 1981), adenovirový promotor, regulační sekvence metallothioneinového genu (Brinster a kol., Nátuře 296, str. 39 až 42, 1982), prokaryotické expresní vektory, například β-laktamázový promotor (Villa-Kamaroff a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 75, str. 3727 až 3731, 1978) nebo tac promotor (DeVoer a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 80, str. 21 až 25, 1983), viz také „Useful proteins from recombinant bacteria“ (Scientific Američan 242, str. 74 až 94, 1980); promotorové prvky z kvasinek nebo z jiných hub, například GAL 4 promotor, ADH (alkoholdehydrogenázový) promotor, PGK (fosfoglycerolkinázový) promotor, alkalický fosfatázový promotor a následující živočišné transkripční řídicí regiony, které specificky exhibují tkáň a použily se v transgenních živočiších; elastázový I genový řídicí region, který je aktivní v pankreatických acinárních buňkách (Swift a kol., Cell 38, str. 639 až 646, 1984; Ornitz a kol., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50, str. 399 až 409, 1986; Mac Donald, Hepatology 7, str. 425 až 515,
-9CZ 295371 B6
1987); inzulínový gen řídící region, který je aktivní v pankreatických β buňkách (Hanahan, Nátuře 315, str. 115 až 122, 1985); imunoglobulinový gen řídící region, který je aktivní v lymfoidních buňkách (Grosscheld a kol., Cell 38, str. 647 až 658, 1984; Adames a kol., Nátuře 318, str. 533 až 538, 1985; Alexander a kol., Mol. Cell. Biol. 7, str. 1436 až 1444, 1987) myší prsní nádorový virový řídící region, který je aktivní v testikulámích, v prsních a vžírných buňkách (Leder a kol., Cell 45, str. 485 až 495, 1986), albuminový gen řídící region, který je aktivní v játrech (Pinkert a kol., Genes and Devel 1, str. 268 až 276, 1987), α-fotoproteinový gen řídící region, který je aktivní v játrech (Krumlauf a kol., Mol. Cell. Biol. 5, str. 1639 až 1648, 1985; Hammer a kol., Science 235, str. 53 až 58, 1987); a 1-antitrypsinový gen řídící region, který je aktivní v játrech (Kelsey a kol., Genes and Devel. 1, str. 161 až 171, 1987), β-globinový gen řídící region, který je aktivní v myeloidních buňkách (Morgan, a kol., Nátuře 315, str. 338 až 340, 1985; Kollias a kol., Cell 46, str. 89 až 94, 1986); myelinový bazický proteinový gen řídící region, který je aktivní v oligodendrocytech v mozku (Readhead a kol., Cell 48, str. 703 až 712, 1987); myosinový lehký řetězcový-2 gen řídící region, který je aktivní ve skeletálních svalech (Shání, Nátuře 314, str. 283 až 286, 1985) a genadotropní hormon uvolňující gen řídící region, který je aktivní v hypothalamu (Mason a kol., Nátuře 234, str. 1372 až 1378, 1986). Vynález dále zahrnuje produkci antimediátorových sloučenin, které jsou schopny specifické hybridizace se sekvencí RNA kódující modifikovaný TIE-2 ligand k modulaci jeho exprese (Ecker, americký patentový spis US 5 166 195, 24. listopadu 1992).
Podle vynálezu se expresní vektory, schopné replikace v bakteriálním nebo v eukaryotickém hostiteli obsahujícím nukleovou kyselinu kódující modifikovaný TIE-2 ligand, jak shora popsáno, používají pro transfektování hostitele a tím k přímé expresi takové nukleové kyseliny k produkci modifikovaného TIE-2 ligandu, který se může získat v biologicky aktivní formě. Biologicky aktivní forma zde zahrnuje formu schopnou vázat TIE receptor a vyvolávat biologickou odezvu, jako diferenciovanou funkci nebo ovlivňovat fenotyp buňky exprimující receptor. Takové biologicky aktivní formy mohou například navozovat fosfory láci tyrozinkinázové domény TIE receptoru. Nebo biologická aktivita může být jevem, jako je antagonist k TIE receptoru. V alternativním provedení je aktivní formou modifikovaného TIE-2 ligandu forma, která může rozeznávat TIE receptor a tím působit jako terčové činidlo pro receptor pro použití k diagnostickým i k terapeutickým účelům. Podle tohoto provedení vynálezu aktivní forma nemusí dodávat žádné TIE expresní buňce žádnou změnu fenotypu.
Expresní vektory obsahující genové inserty mohou být identifikovány prostřednictvím čtyř obecných přístupů: (a) DNA-DNA hybridizace, (b) přítomnost nebo nepřítomnost funkcí „markerového“ genu, (c) exprese včleněných sekvencí a (d) PCR detekce. Podle prvního přístupu se může zjišťovat přítomnost cizího genu, včleněného do expresního vektoru DNA-DNA hybridizací za použití nukleotidových sond obsahujících sekvence, které jsou homologické se zřetelem na včleněný modifikovaný TIE-2 ligand kódující gen. Podle druhého přístupu se může identifikovat rekombinantní systém vektor/hostitel a selektovat na základě přítomnosti nebo nepřítomnosti funkcí „markerového“ genu (například thimidinkinázové aktivity, odolnosti proti antibiotikům, transformačního fenotypu, vytváření okluzní látky vbaculoviru) způsobujících inserci cizích genů do vektoru. Například jestliže se včlení nukleová kyselina kódující modifikovaný TIE-2 ligand v markerové genové sekvenci vektoru, mohou se identifikovat rekombinanty nepřítomností markerové genové funkce. Podle třetího přístupu se mohou identifikovat rekombinantní expresní vektory zjištěním cizího genového produktu exprimovaného rekombinantem. Taková zjištění mohou být založena například na fyzikálních nebo na funkčních vlastnostech modifikovaného TIE-2 ligandového genového produktu, například vázáním ligandu na TIE receptor nebo na jeho část, která se může značit například zjistitelnou protilátkou nebo její částí nebo vázáním protilátek, produkovaných proti modifikovanému TIE-2 ligandovému proteinu nebo jeho části. Buňky podle vynálezu mohou přechodně, konstitučně nebo trvale exprimovat modifikovaný TIE-2 ligand, jak shora uvedeno. Podle čtvrtého přístupu se mohou připravovat DNA nukleotidové primery odpovídající smyčkové specifické DNA sekvenci. Tyto primery se mohou používat pro PCR smyčkový fragment (PCR Protocols: A Guide To Methods and Applications, vydavatel Michael A. Innis a kol., Academie Press, 1990).
-10CZ 295371 Β6
Rekombinantní ligand se může čistit jakýmkoliv způsobem, kteiý umožňuje následující vytvoření stabilního, biologicky aktivního proteinu. S výhodou se ligand vylučuje do kultivačního prostředí, ze kterého se získal. Nebo se ligand může získat z buněk buď ve formě rozpustných proteinů, nebo jako inkluzní látky, ze kterých se může kvantitativně extrahovat 8M guanidiniumhydrochloridem a dialýzou o sobě dobře známými způsoby. Pro další čištění ligandu se může používat afínitní chromatografie, konvenční ionexové chromatografíe, hydrofobní interakční chromatografie, reverzní fázové chromatografíe nebo gelové filtrace.
Podle přídavného provedení vynálezu, podrobněji popsaného v příkladech, se může modifikovaný TIE-2 ligand kódující gen používat pro inaktivaci nebo „knock out“ endogenního genu homologovou rekombinací a tím k vyváření TIE ligandu postrádajícího buňky, tkáně nebo živočichy. Například, bez záměru na jakémkoliv omezení, se může konstruovat rekombinantní TIE ligand-4 kódující gen obsahující insercionální mutaci, například neo gen. Takový konstrukt za řízení vhodného promotoru, se může zavádět do buňky, jako je zárodečná kmenová buňka, způsobem například transfekce, transdukce nebo injekce. Buňky, obsahující konstrukt, se pak mohou selektovat G418 odolností. Buňky prosté intaktní TIE ligand-4 kódujícího genu se pak mohou identifikovat například způsobem Southern blotting, PCR detekce, Northem blotiing nebo zkouškou exprese. Buňky prosté intaktní TIE ligand-4 kódujícího genu se pak mohou fúzovat na časné zárodečné buňky pro generaci transgenických živočichů prostých takového ligandu. Takoví živočichové se mohou používat k definici zvláště ve in vivo procesech, normálně závislých na ligandech.
Vynález se také týká protilátek k modifikaci popsaného TIE-2 ligandu, který je užitečný pro detekci ligandu například pro diagnostické účely. Pro přípravu monoklonálních protilátek, zaměřených na modifikovaný TIE-2 ligand, se může používat jakéhokoliv způsobu pro produkci protilátkových molekul kontinuálními buněčnými liniemi v kultuře. Například do rozsahu vynálezu patří technika hybridomu, kterou vyvinul Kohled a Milstein (Nátuře 256, str. 495 až 497, 1975), jakož také technika triomu, technika lidského B-buňky hybridomu (Kozbor a kol., Immunology Today 4, str. 72, 1983) a technika EBV-hybridomu pro produkci lidských monoklonálních protilátek (Cole a kol., „Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy“ Alan R. Liss, lne., str. 77 až 96, 1985).
Monoklonálními protilátkami mohou být lidské monoklonální protilátky nebo chimemí lidskomyší (nebo jiného typu) monoklonální protilátky. Lidské monoklonální protilátky se mohou vyrábět četnými způsoby, známými ze stavu techniky (například Tang a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 80, str. 7308 až 7312, 1983; Kozbor a kol., Immunology Today 4, str. 72 až 79, 1982; Olsson a kol. Meth. Enzymol 92, str. 3 až 16, 1982). Mohou se připravovat molekuly chimemí protilátky obsahující myší antigen vázající doménu s lidskými konstantními regiony (Morrison a kol., Proč. Nati. Acad. Sci U.S.A. 81, str. 6851, 1984; Takeda a kol., Nátuře 314, str. 452, 1985).
Mohou se použít různé způsoby, známé ze stavu techniky pro produkci polyklonálních protilátek na epitopy modifikovaného shora popsaného TIE-2 ligandu. Pro výrobu protilátky se mohou imunizovat různí hostitelé, přičemž se příkladně, tedy bez záměru na jakémkoli omezení, uvádějí králíci, myši a krysy, vstřikováním modifikovaného TIE-2 ligandu nebo jeho fragmentu nebo derivátu. Mohou se používat různá pomocná činidla ke zvýšení imunologické odezvy v závislosti na druhu hostitele a včetně, avšak bez záměru na jakémkoliv omezení, Freudova činidla (kompletního a nekompletního), minerálních gelů, jako je hydroxid hlinitý, povrchově aktivních látek, jako jsou lysolecithin, pluronických polyolů, polyaniontů, peptidů, olejových emulzí, hemocyaninů, dinitrofenolu a potenciálně užitečných lidských pomocných činidel, jako je BCG (Bacille Calmette-Guerin) a Corynebacterium parvum.
Molekulární klon protilátky k selektovanému modifikovanému TIE-2 ligandovému epitelu se může připravovat o sobě známým způsobem. Rekombinantní DNA metodika (například Maniatis
-11 CZ 295371 B6 a kol., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1982) se může používat ke konstruování sekvencí nukleové kyseliny, které kódují monoklonální protilátkovou molekulu nebo region vázání její protilátky.
Vynález se týká protilátkových molekul a fragmentů takových protilátkových molekul. Protilátkové fragmenty, které obsahují idiotyp molekuly, se mohou generovat o sobě známými způsoby. Například takové fragmenty zahrnují například, tedy bez záměru na jakémkoliv omezení. F(ab')2 fragment, který se může produkovat pepsinovou digescí protilátkové molekuly; Fab' fragmenty, které se mohou generovat redukcí disulfídických můstků F(ab')2 fragmentu a Fab fragmenty, které se generují zpracováním protilátkové molekuly papainem a redukčním činidlem. Protilátkové molekuly se mohou čistit o sobě známými způsoby, například imunoabsorpční nebo imunoafínitní chromatografíí, chromatografíckými způsoby, jako je HPLC (vysoce účinná kapalinová chromatografie) nebo kombinacemi těchto způsobů.
Vynález zahrnuje imunozkoušku pro měření množství modifikovaného TIE-2 ligandu v biologických vzorcích, při které se
a) uvádí do styku biologický vzorek s alespoň jednou protilátkou, která specificky váže modifikovaný TIE-2 ligand, takže protilátka vytváří komplex s jakýmkoliv TIE-2 ligandem obsaženým ve vzorku a
b) měří se množství komplexu a tím se měří množství modifikovaného ΉΕ-2 ligandu v biologickém vzorku.
Vynález dále zahrnuje zkoušku pro měření množství TIE-2 receptoru v biologických vzorcích, při které se
a) uvádí do styku biologický vzorek s alespoň jedním ligandem podle vynálezu, takže ligand vytváří komplex s jakýmkoliv TIE-2 receptorem a
b) měří se množství komplexu a tím se měří množství modifikovaného TIE-2 receptoru v biologickém vzorku.
Vynález se také týká využití modifikovaného TIE-2 ligandu, který aktivuje TIE-2 receptor, jak shora popsáno k podpoře přežití a/nebo růstu a/nebo migrace a/nebo diferenciace TIE-2 buněk exprimujících receptor. Ligand se tak může využít jako doplněk nosiče, například endoteliových buněk v kultuře.
Kromě toho vytvoření modifikovaného TIE-2 ligandu pro TIE-2 receptor umožňuje využít testovacích systémů užitečných pro identifikaci agonistů nebo antagonistů TIE-2 receptoru. Takové testovací systémy by mohly být užitečné v identifikačních molekulách schopných podpory nebo inhibice angiogeneze. Například podle jednoho provedení se mohou antagonisty TIE-2 receptoru identifikovat jako testovací molekuly, které jsou schopny interference s interakcí TIE-2 receptoru s modifikovaným TIE-2 ligandem, který váže TIE-2 receptor. Takové antagonisty se identifikují svojí schopností 1) blokovat vázání biologicky aktivního modifikovaného TIE-2 ligandu na receptor při měření například za použití technologie BIAcore biosenzor (BIAcore, Pharmacia Biosensor, Piscataway. NJ) nebo 2) blokovat schopnost biologicky aktivního modifikovaného TIE-2 ligandu vyvolávat biologickou odezvu. Takové biologické odezvy zahrnují příkladně, bez záměru na jakémkoliv omezení, fosforylaci TIE receptory nebo složek TIE signálu transdukční cestou nebo přežití, růst nebo diferenciaci TIE receptor nesoucích buněk.
Podle jednoho provedení buňky, směrované k expresi TIE receptoru, mohou být závislé pro růst na přidání modifikované TIE-2 ligandu. Takové buňky poskytují užitečné testovací systémy pro
-12CZ 295371 B6 identifikaci přídavných agonistů TIE receptoru nebo antagonistů schopných rušit aktivitu modifikovaného TIE-2 ligandu na takové buňky. Na autocrinní buňky, upravené ke schopnosti koexprese jak modifikovaného TIE-2 ligandu, tak receptoru, mohou být užitečnými systémy možných agonistů nebo antagonistů.
Vynález proto umožňuje zavedení TIE-2 receptoru do buněk, které by normálně neexprimovaly tento receptor a tak umožňuje těmto buňkám vytvářet výrazné a snadno rozlišitelné odezvy na ligand, který váže tento receptor. Typ vyvolané odezvy závisí na použití buňce a nikoliv na specifickém receptoru, zavedeném do buňky. Mohou se volit vhodné buněčné linie k dosažení odezvy největší užitečnosti pro posouzení i pro objevení molekul, které působí jako receptory tyrozinkinázy. Těmito molekulami může být jakýkoliv typ molekuly včetně, tedy bez záměru na jakémkoliv omezení, peptidových a nepeptidových molekul, které působí v popisovaných systémech receptorově specifickým způsobem.
Jeden z četných použitelných systémů zahrnuje zavedení TIE receptoru (nebo chimemího receptoru obsahujícího mimobuněčnou doménu jiné receptorové tyrozinkinázy, jako například trkC a vnitřní buněčnou doménu TIE receptoru) do fibroblastové buněčné linie (například NIH3T3 buňky), takže receptor, kteiý normálně nezprostředkovává proliferaktivní nebo jiné odezvy, může po zavedení do fibroblastů být nicméně testován různými dobře známými způsoby ke kvantitativnímu stanovení fibroblastových růstových faktorů (například začlenění thymidinu) nebo jiných typů zkoušek proliferace (van Zoelen, „The Use Of Biological Assay For Detection Of Polypeptide Growth Factors“, Progress, Factor Research, svazek 2, str. 131 až 152, 1990; Zhan a M. Goldfarb, Mol. Cell. Biol. svazek 6, st. 3541 až 3544, 1986). Tyto testy mají přídavnou výhodou, že se může zkoušet jakýkoliv preparát jak buněčné linie se zavedeným receptorem, tak mateřské buněčné linie bez receptoru; posuzují se toliko jevy na buněčné linie s receptorem zprostředkovávané zavedením receptoru. Takové buňky mohou být dále upravovány k expresi modifikovaného TIE-2 ligandu za vytváření autokrinního systému užitečného pro zkoušení molekul, které působí jako antagonisty/agonisty pro toto vzájemné působení. Vynález tak umožňuje pro hostitelské buňky, obsahující nukleovou kyselinu, kódovat modifikovaný TIE2 ligand a nukleovou kyselinu zakóduj ící TIE receptor.
Interakce TIE receptor/modifikovaný TIE-2 ligand také poskytuje užitečný systém pro identifikaci malých molekulových agonistů nebo antagonistů TIE receptoru. Například fragmenty, mutanty nebo deriváty modifikovaného TIE-2 ligandu umožňují další charakterizaci aktivních podílů molekuly. Identifikace ligandu umožňuje také stanovení rentgenové krystalové struktury komplexu receptor/ligand, čímž je umožněna identifikace vázajícího míst na receptor. Znalost vázající místa se jeví užitečná pro racionální konstrukci nových agonistů a antagonistů.
Specifické vázání testované molekuly na TIE receptor se může měřit různými způsoby. Například aktuální vázání testované molekuly na buňky exprimující TIE se mohou zjistit nebo měřit detekcí nebo měřením (1) testované molekuly vázané na povrch nedotčené buňky, (ii) testované molekuly příčně vázané na TIE protein v buněčných lyzátech nebo (iii) testované molekuly vázané na TIE in vitro. Specifická interakce mezi testovanou molekulou a TIE se může vyhodnocovat použitím reakčních činidel, která demonstrují jedinečné vlastnosti takové interakce.
Jakožto specifický příklad, bez záměru na jakémkoliv omezení, se způsobu podle vynálezu používá následovně. Uvažuje se případ, při kterém se měří modifikovaný TIE-2 ligand ve vzorku. Obměňující se ředění vzorku (testovaná molekula) paralelně s negativní kontrolou (NC), prostou modifikované TIE-2 aktivity, a s pozitivní kontrolou, obsahující známé množství modifikovaného TIE-2 ligandu, se může vystavovat působení buněk, které exprimují TIE v přítomností zjistitelného značeného modifikovaného TIE-2 ligandu (v tomto případě radiojodovaného ligandu). Množství modifikovaného TIE-2 ligandu v testovaném vzorku se může vyhodnocovat stanovením množství 125J-značeného modifikovaného TIE-2 ligandu, které se
- 13CZ 295371 B6 váže na kontroly a v každém zředění a pak porovnáním hodnot vzorku se standardní křivkou. Čím je více modifikovaný TIE-2 ligand ve vzorku, tím méně se váže 125J-ligand na TIE.
Množství vázaného 125J-ligandu se může stanovit měřením množství radioaktivity na buňku nebo příčně vázaného modifikovaného TIE-2 ligandu na buněčný povrch proteinů za použití DSS způsobem, který popsal Meakin a Shooter (Nátuře 6, str. 153 až 163, 1991) a detekcí množství značeného proteinu v buněčných extraktech za použití například SDS polyakrylamidové genové elektroforézy, která může zjistiti značený protein mající velikost odpovídající systému TIE receptor/modifikovaný TIE-2 ligand. Specifický test interakce molekula/TIE se může dále testovat přidáním do různých ředění neznačeného kontrolního ligandu, který neváže TIE receptor, a proto nemá podstatný vliv na konkurenci mezi značeným modifikovaným TIE-2 ligandem a testovanou molekulou se zřetelem na TIE vázání. Nebo molekula, o které je známo, že ruší vázání systému TIE receptor/modifikovaný TIE-2 ligand, například avšak bez záměru na jakémkoliv omezení, antiTIE protilátka nebo TIE-2 receptor, jak shora uvedeno, podle očekávání bude interferovat s konstrukcí mezi 125J-modifikovaným TIE-2 ligandem a testovanou molekulou pro vázání TIE receptoru.
Stanovitelný značený modifikovaný TIE-2 ligand zahrnuje například, teda bez záměru na jakémkoliv omezení, modifikovaný TIE-2 ligand navázaný kovalentně nebo nekovalentně na radioaktivní látku, na fluorescenční látku, na látku s enzymovou aktivitou, na látku, která může sloužit jako substrát pro enzym (přednost se dává enzymům a látkám s kolorimetricky zjistitelnou reakcí), nebo na látku, která se může zjistit molekulou protilátky, což je s výhodou značená molekula protilátky.
Nebo specifické vázání zkoušené molekuly na TIE se může měřit hodnocením sekundárních biologických vlivů vázání systému modifikovaný TIE-2 ligand/TIE receptor včetně, avšak bez záměru na jakémkoliv omezení, růstu buněk a/nebo diferenciace nebo bezprostřední urychlené exprese genu nebo fosforylace TIE. Například schopnost testované molekuly zahrnovat diferenciaci se může testovat v buňkách, které nemají tie a ve srovnatelných buňkách, které exprimují tie; diferenciace tie exprimujících buněk nikoliv však ve srovnatelných buňkách prostých tie je indikativní pro specifickou interakci testovaná molekula/TIE. Podobná analýza se může provádět detekcí bezprostředně časného genu (například fos a jin) zavedením tie-minus a tie-plus buněk nebo detekcí fosforylace TIE za použití standardního fosforylačního testu v oboru o sobě známého. Takové analýzy mohou být užitečné pro identifikaci agonistů nebo antagonistů, které se konkurenčně neváží na TIE.
Podobně vynález umožňuje způsob identifikace molekuly, která má biologickou aktivitu modifikovaného TIE-2 ligandu, zahrnující (i) expozici buňky, které exprimují tie, testovací molekuly a (ii) detekci specifického vázání testované molekuly na TIE receptor, přičemž specifické vázání na TIE je v pozitivním vztahu s TIE obdobnou aktivitou. Specifické vázání se může zjistit buď testováním přímé vazby, nebo podle sekundárních biologických působení vázání, jak shora uvedeno. Takový způsob je obzvláště užitečný pro identifikaci nových členů čeledi TIE ligandu nebo ve farmaceutickém průmyslu při skrínování velké řady peptidových a nepeptidových molekul (například peptidomimetika) pro biologickou aktivitu spojenou s TIE. Podle výhodného, specifického nikoliv však omezujícího provedení vynálezu se může připravit velká sada kultivačních důlků, které obsahují řady PC12 buněk (nebo fibroblastů, jak shora uvedeno), které jsou buď tie-minus, nebo jsou konstruovány, aby byly tie-plus. Mohou se přidávat četné testované molekuly, aby každá řada nebo její část obsahovala různé testované molekuly. Následně se hodnotí každý důlek se zřetelem na přítomnost nebo nepřítomnost růstu a/nebo diferenciace. Mimořádně velké množství testovaných molekul se mohou tímto způsobem skrínovat se zřetelem na takovou aktivitu.
Přídavně vynález umožňuje detekci nebo měření aktivity podobné TIE ligandové aktivitě nebo identifikaci molekuly mající takovou aktivitu (i) vystavením testované molekuly TIE receptorovému proteinu in vitro za podmínek, které umožňují vázání, (ii) detekci vázání testované
- 14CZ 295371 B6 molekuly na TIE receptorový protein, přičemž je vazba testované molekuly na TIE receptor ve vztahu k aktivitě podobné aktivitě TIE ligandu. Při takovém způsobu se TIE receptor může nebo nemusí v podstatě čistit, může být fixován na pevný nosič (například na afinitní sloupec nebo jako při testu ELISA) nebo může být včleněn do umělé membrány. Vázání testované molekuly na TIE receptor se může hodnotit jakýmkoliv známým způsobem. Podle výhodného provedení se vázání testované molekuly zjišťuje nebo měří hodnocením schopnosti konkurovat se zjistitelně značenými známými TIE ligandy pro TIE receptorové vázání.
Vynález se také týká zjišťování schopnosti testované molekuly působit jako antagonist podobné ligandové aktivity jako ligandové aktivity TIE, přičemž se zjišťuje schopnost molekuly inhibovat vliv TIE ligandového vázání na TIE receptor buňky, která exprimuje receptor. Takový antagonist může ale nemusí interferovat vázání systému TIE receptor/modifikovaný TIE-2 ligand. Vlivy vázání modifikovaného TIE-2 ligandu na TIE receptor jsou přednostně biologické nebo biochemické včetně, avšak bez záměru na jakémkoliv omezení, přežívání nebo proliferace buněk, transformace buněk, bezprostřední časné genové indukce nebo TIE fosfory láce.
Vynález se dále týká jak způsobu identifikace protilátek nebo jiných molekul schopných neutralizace ligandu nebo blokovat vázání na receptor, tak molekul pro tento způsob. Například, avšak bez záměru na jakémkoliv omezení, se může způsobu využít podobně jako testu ELISA. Například se TIE reptorová látka („receptorbody“) může vázat na pevný nosič, jako je plastová mnohodůlková destička. Jako kontrola se do důlku může zavádět známé množství modifikovaného TIE-2 ligandu, který je Myc značený, a jakýkoliv značený modifikovaný TIE-2 ligand, který se váže na receptorovou látku, se pak může identifikovat receptorovou protilátkou směrovanou proti značení Myc-tag. Tento testovací systém se pak může použít ke skrínování vzorků molekul, které jsou schopny i) vazby na značený ligand nebo ii) vazby na receptorovou látku a tak blokovat vazbu na receptorovou látku značeným ligandem. Například testovaný vzorek obsahující zkoumanou molekulu spolu se známým množstvím značeného ligandu, se může zavádět do důlků a měří se množství značeného ligandu, které se váže na receptorovou látku. Porovnáním množství vázaného značeného ligandu v testovaném vzorku se množstvím v kontrole, se mohou identifikovat vzorky obsahující molekuly schopné blokovat vazbu ligandu na receptor. Takto identifikované molekuly se mohou izolovat o sobě známými způsoby pracovníkům v oboru.
Jakmile se zjistí blokátor vazby ligandu, je pracovník v oboru schopen provést sekundární zkoušku ke stanovení, zdali se blokátor váže na receptor nebo na ligand a zjistit, zdali blokátorová molekula je schopna neutralizovat biologickou aktivitu ligandu. Například za použití testu vázání, při kterém se používá BIAcore biosenzorové technologie (nebo zařízení), přičemž se buď TIE receptor, nebo modifikovaný TIE-2 ligand nebo ligandová látka kovalentně váže na pevný nosič (například karboxymethyldextran na zlatém povrchu), je pracovník v oboru schopen stanovit, zdali se blokátorová molekula váže specificky na ligand, na ligandovou látku nebo na receptorovou látku. Ke stanovení, zdali blokátorová molekula může neutralizovat biologickou aktivitu ligandu, může pracovník v oboru provádět fosforylační zkoušku (příklad 5) nebo funkční biotest, jako je test přežívání, za použití primární kultury například endoteliových buněk. Nebo blokátorová molekula, která se váže na receptorovou látku, může být antagonistem a pracovník v oboru to může zjistit, vhodným testem pro identifikaci přídavných agonistů TIE receptoru.
Vynález se také týká kompozic, přičemž TIE ligand je receptorovou vázací doménou TIE-2 ligandu, jak shora popsáno. Například TIE-2 ligand 1 obsahuje smyčkově stočenou („coiled coil“) doménu (začínající na 5' zakončení a táhnoucí se přibližně k poloze 1160 na obr. 4 a přibližně k poloze 1157 na obr. 5) a fibrinogenovou doménu (která je zakódovaná nukleotidovou sekvencí podle obr. 4 začínající přibližně v poloze 1161 a přibližně k poloze 1158 na obr. 5). Fibrinogenová domén TIE-2 ligandu 2 pravděpodobně začíná na aminokyselinové sekvenci nebo ligand 1 nebo okolo této sekvence jako ligand 1 (FRDCA), která je zakódovaná nukleotidy začínajícími přibližně v poloze 1197 na obr. 6. Fibrinogenová doména TIE ligandu 3 pravděpodobně začíná na aminokyselinové sekvenci okolo sekvence, která je zakódovaná nukleotidy
-15CZ 295371 B6 začínajícími okolo polohy 929 na obr. 21. Multimerizace smyčkově stočené domény při produkci ligandu vadí čištění. Jak se popisuje v příkladu 19, zjistilo se podle vynálezu, že fibrinogenová doména obsahuje TIE-2 receptorovou vázací doménu. Monomerní formy fíbrinogenové domény se však nejeví, že by vázaly receptor. Studie, využívající myc-značenou fibrinogenovou doménu, která byla „nahromaděna“ anti-yc protilátkami, váže TIE-2 receptor. (Způsoby produkce „nahromaděných“ ligandů a ligandových látek popsal Davisa a kol., Science 266, str. 818 až 819, 1994). Na základě těchto poznatků byly podle vynálezu připraveny „ligandové látky“, které obsahují fibrinogenovou doménu TIE-2 ligandu kopulovanou na FC doménu IgG („fFc's). Tyto ligandové látky, které vytvářejí dimery, účinněji váží TIE-2 receptor. Podle vynálezu se uvažuje o produkci modifikovaných TIE ligandový protilátek, kterých se může používat jako štítových činidel nebo nádory a/nebo pro asociovanou vaskulaturu, přičemž se indikuje TIE antagonist.
Vynález se dále týká vývoje ligandu, fragmentu nebo jiného derivátu nebo jiné molekuly, která je receptorovým agonistem nebo antagonistem jako terapeutického činidla pro ošetřování jedinců trpících poruchami buněk, tkání nebo orgánů, které exprimují TIE receptor. Takových molekul se může používat pro ošetřování lidí nebo zvířat nebo při diagnostice.
Jelikož TIE receptor byl identifikován v asociaci s endoteliovými buňkami a jak zde doloženo blokování TIE-2 ligandu 1 se jeví jako prevence vaskularizace, očekává se podle vynálezu, že modifikovaný TIE-2 ligand podle vynálezu může být užitečný pro navozování vaskularizace při nemocích nebo poruchách, kde se taková vaskularizace indikuje. Takové nemoci a poruchy zahrnují hojení ran, ischemii a diabetes. Ligandy se mohou zkoušet na zvířecích modelech a používat terapeuticky jako jiné účinné látky, jako například vaskulární endoteliový růstový faktor (VEGF), jiný endoteliový buněčně specifický faktor než angiogenní (Ferrara a kol., americký patentový spis US 5 332 671, 26. července 1994). Ferrara, jakož také jiní autoři, popisují in vitro a in vivo způsoby k doložení vlivu antiogenního faktoru při podpoře toku do ischemického myokardu, k podpoře hojení ran a pro další terapeutické účely, kde je žádoucí neoangiogeneze (Sudo a kol., evropská přihláška vynálezu číslo 0 550296 A2, zveřejněná 7. července 1993; Banai a kol., Circulation 89, str. 2183 až 2189, 1994; Unger a kol., Am.
J. Physiol. 266, str. H1588 až 1595, 1994; Lazarous a kol., Circulation 91, str. 145 až 153, 1995). Podle vynálezu modifikovaný TIE-2 ligand se může používat samotný nebo spolu s jedním nebo s několika přídavnými farmaceuticky účinnými sloučeninami, jako jsou například VEGF nebo bazický fibroblastový růstový faktor (bFGF), stejně jako cytokiny nebo neurotrofiny.
Naproti tomu antagonisty TIE receptoru, jako modifikované TIE-2 ligandy, které váží avšak neaktivují zde popsaný receptor, receptorovou látku, jak popsáno v příkladu 2 a 3 a TIE-2 ligand 2, jak popsáno v příkladu 9, jsou užitečné k předcházení nebo k zeslabení vaskularizace a tak k předcházení nebo k zeslabení nádorového růstu. Tato činidla se mohou používat samotná nebo v kombinaci s jinými činidly, jako jsou například anti-VEGF protilátky, které se jeví jako užitečné při ošetřování stavů, při kterých je terapeutickým záměrem blokovat angiogenezi. Podle vynálezu se očekává, že modifikovaný TIE-2 ligand podle vynálezu může být také užitečný s činidly, jako jsou například cytokinové antagonisty, například IL-6 antagonisty, o kterých je známo, že blokují záněty.
Například se podle vynálezu zjistilo, že se TIE ligandy exprimují v buňkách v nádorech nebo v těsně přilehlých buňkách. Například TIE-2 ligand 2 se jeví jako těsně přiléhající k nádorovým endoteliovým buňkám. Proto také jiné TIE antagonisty mohou být užitečné při prevenci nebo zeslabování například nádorového růstu. Kromě toho TIE ligandy nebo ligandové látky mohou být užitečné pro uvolňování toxinů k buňce nesoucí receptor. Nebo jiné molekuly, například růstové faktory, cytokiny nebo živiny se mohou uvolňovat k TIE receptor nesoucím buňkám prostřednictvím TIE-2 ligandů nebo ligandových látek. TIE-2 ligandy nebo ligandové látky, jako modifikovaný TIE-2 ligand podle vynálezu se také mohou používat jako diagnostické reakční činidlo pro TIE receptor ke zjišťování receptoru in vivo a in vitro. Když souvisí TIE receptor s chorobným stavem, TIE ligandy nebo ligandové látky, například modifikovaný TIE-2 ligand, mohou být užitečný jako diagnostická činidla k detekci nemoci nebo například k zabarvení tkáně
-16CZ 295371 B6 nebo k představě celého tělesa. Taková reakční činidla zahrnují radioizotopy, fluorochromy, barviva, enzymy a biotin. Taková diagnostická a štítová činidla se mohou připravovat způsobem, který popsal Alitalo a kol., (světový patentový spis číslo WO 95/26364, zveřejněno 5. října 1995; a Burrows F a Thorpe P., PNAS (USA) 90, str. 8996 až 9000, 1993).
Podle jiného provedení TIE ligandy, receptorový aktivační modifikovaný TIE-2 ligand podle vynálezu, se používají jako hematopoietické faktory. Různé hematopoietické faktory a jejich receptory jsou zahrnuty v proliferaci a/nebo v diferenciaci a/nebo v migraci různých buněčných typů obsažených v krvi. Jelikož jsou TIE receptory exprimovány časnými hematopoietickými buňkami, očekává se, že TIE ligandy budou mít podobný úkol v proliferaci nebo v diferenciaci nebo v migraci těchto buněk. Proto se například mohou TIE obsahující prostředky připravovat, testovat a zkoušet v biologických systémech in vitro a in vivo a terapeuticky používat, jak je popsáno v literatuře (například Sousa, americký patentový spis číslo 4 810643; Lee a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 82, STR. 4360 až 4364, 1985; Wong a kol., Science, 228, str. 710 až 814, 1985; Yokota a kol., Proč. Nati. Acad. Sci (USA) 81, str. 1070, 1984; Borselman a kol., světový patentový spis číslo WO 91/05795, zveřejněný 2. května 1991 pod názvem „Stem Cell Factor“; aKirkness a kol., světový patentový spis číslo WO 95/1985, zveřejněný 27. června 1995 pod názvem „Haemapoietic Maturation Factor“). Proto se receptorového aktivačního modifikovaného TIE-2 ligandu může používat pro diagnostikování a pro ošetřování stavů, při ktetých je normální omezení, anemie, trombocytopenie, leukopenie a granulocytopenie. Podle výhodného provedení receptorový aktivační modifikovaný TIE-2 ligand se může používat pro stimulaci diferenciace prekurzorů krevních buněk v situacích, kdy jedinec trpí nemocí, jako je získaný syndrom imunitní nedostatečnosti (AIDS), která způsobí snížení normální hladiny krevních buněk nebo v klinických stavech, při kterých je žádoucí podpora hematopoietické populace, jako při transplantaci kostní dřeně nebo při ošetřování aplasie nebo myelopotlačení v důsledku ozáření, chemického ošetřování nebo chemoterapie.
Receptorové aktivační modifikované TIE-2 ligandy podle vynálezu se mohou používat samotné nebo spolu s jinými farmaceuticky aktivními látkami, jako jsou například cytokiny, neurotropiny a interleukiny. Podle výhodného provedení se ligandy mohou používat spolu s jakýmkoliv počtem shora uvedených faktorů, o nichž je známo, že indukují proliferaci kmenové buňky nebo jiného hematopoietického prekurzoru, nebo faktorů působících na další buňky v hematopoietické cestě včetně, avšak bez záměru na jakémkoliv omezení, hematopoietického faktoru zrání, trombopoietinu, faktoru kmenová buňky, erythropoietinu, G-CSF a GM-CSF.
Podle alternativního provedení TIE receptorové antagonisty jsou užitečné k diagnóze nebo k ošetřování jedinců, přičemž je žádoucí inhibice hematopoietické cesty, například při ošetřování myeloproliferativních nebo jiných proliferativních poruch krvetvorných orgánů, jako je trombocytemie, polycytemie a leukemie. Podle takového provedení může ošetřování zahrnovat použití terapeuticky účinného množství modifikovaného TIE-2 ligandu, TIE-protilátky, TIE receptorové látky, konjugátu modifikovaného TIE-2 ligandu nebo ligandové látky fFC, jak shora uvedeno.
Vynález se také týká farmaceutických prostředků, obsahujících modifikovaný TIE-2 ligand nebo ligandovou látku zde popsanou, její peptidové fragmenty nebo deriváty ve farmaceuticky vhodném nosiči. Modifikované TIE-2 ligandové proteiny, peptidové fragmenty nebo deriváty se mohou podávat systemicky nebo místně. Může se použít jakýkoliv vhodný způsob podání včetně, avšak bez záměru na jakémkoliv omezení, intravenózního, intratekálního, intraarteriálního, intranasálního, orálního, subkutánního, intraperitoneálního nebo lokálního vstřikování nebo chirurgického implantátu. Jsou také možné prostředky s pozdrženým uvolňováním.
Vynález se také týká protilátky, která specificky váže takovou terapeutickou molekulu. Protilátka může být monoklonální nebo polyklonální. Vynález se také týká použití takové monoklonální nebo polyklonální protilátky k měření množství terapeutické molekuly ve vzorku odebraném jedinci pro monitorování průběhu terapie.
- 17CZ 295371 B6
Vynález se dále týká terapeutického prostředku obsahujícího modifikovaný TIE-2 ligand nebo ligandovou látku a cytotoxické činidlo sním konjugované. Podle jednoho provedení cytotoxickým činidlem může být radioizotop nebo toxin.
Vynález se také týká protilátky, která specificky váže modifikovaný TIE-2 ligand. Protilátka může být monoklonální nebo polyklonální.
Vynález se dále týká způsobu čištění modifikovaného TIE-2 ligandu, při kterém se
a) kopuluje alespoň jeden TIE vážící substrát na pevnou matrici,
b) substrát podle odstavce a) se inkubuje s buněčným lyzátem, takže substrát vytvoří komplex s jakýmkoliv TIE-2 ligandem v buněčném lyzátu,
c) pevná matrice se omyje a
d) modifikovaný TIE-2 ligand se eluuje z kopulovaného substrátu.
Substrátem může být jakákoliv látka, která specificky váže modifikovaný TIE-2 ligand. Podle jednoho provedení se substrát volí ze souboru zahrnujícího antimodifikovanou TIE-2 ligandovou protilátku, TIE receptor a TIE receptorovou látku. Vynález se dále týká receptorové látky, která specificky váže TIE-2 ligand stejně jako terapeutického prostředku obsahujícího receptorovou látku ve farmaceuticky vhodném nosiči a způsobu blokování růstu krevních cév u lidí, kterým se podá účinné množství terapeutického prostředku.
Vynález se dále týká terapeutického prostředku obsahujícího receptorový aktivační modifikovaný TIE-2 ligand nebo ligandovou látku ve farmaceuticky vhodném nosič, jakož také způsobu podpory neovaskularizace u jedinců, kterým se podává účinné množství terapeutického prostředku.
Kromě toho se vynález týká způsobu identifikace buňky, která exprimuje TIE receptor, při kterém se uvádí do styku buňka s detekovatelným značeným modifikovaným TIE-2 ligandem nebo se ligandovou látkou za podmínek umožňujících vázání detekovatelného značeného ligandu na TIE receptor a stanovuje se, zdali se detekovatelný značený ligand váže na TIE receptor, čímž se identifikuje buňka, která exprimuje TIR receptor. Vynález se taký týká terapeutického prostředku, který obsahuje modifikovaný TIE-2 ligand nebo ligandovou látku a cytotoxické činidlo s ním konjugované. Cytotoxickým činidlem může být radioizotop nebo toxin.
Vynález se také týká způsobu detekce exprese modifikovaného TIE-2 ligandu buňkou, při kterém se získá mRNA z buňky, takto získaná mRNA se uvádí do styku se značenou molekulou nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand za hybridizačních podmínek, stanovuje se obsah mRNA hybridizované na značenou molekulu a tak se zjišťuje exprese modifikovaného TIE-2 ligandu v buňce.
Vynález se také týká způsobu detekce exprese modifikovaného TIE-2 ligandu v sekcích tkáně, při kterém se uvádí do styku sekce tkáně se značenou molekulou nukleové kyseliny kódující modifikovaný TIE-2 ligand za hybridizačních podmínek, stanovuje se obsah mRNA hybridizované na značenou molekulu a tak se zajišťuje exprese modifikovaného TIE-2 ligandu v tkáňové sekci.
Vynález blíže objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení.
-18CZ 295371 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Identifikace buněčných linií ABAE jako reporterských buněk pro vazební TIE-2 receptor
Dospělé buňky BAE jsou zaregistrovány v evropském rejstříku European Cell Culture Repository pod označením ECACC#92010601 (viz PNAS75:2621 (1978)). Northem (RNA) analýzy objevily střední úrovně přepisu tie-2 buněčné linii ABAE (Adult Bovine Arterial Endothelia) konzistentní s výsledky hybridizace in šitu, které ukázaly téměř výhradní lokalizaci TIE-2 RNA na cévních endoteliových buňkách. Proto byly zkoumány lyzáty buněk ABAE z hlediska přítomnosti proteinu TIE-2 stejně jako z hlediska rozsahu, v jakém je protein TIE-2 fosforylován tyrozinem za normálních podmínek růstu oproti podmínkám růstu bez séra. Lyzáty buněk BAE byly shromážděny a podrobeny imunoprecipitaci, po které následovaly analýzy Western blot imunoprecipitovaných proteinů se specifikací TIE-2 a s antiséiy s fosfotyrozinovou specifikací. Vynechání nebo začlenění peptidů TIE-2 jako specifických blokujících molekul během imunoprecipitace TIE-2 umožnilo nepochybnou identifikaci TIE-2 jako středně detekovatelného proteinu přibližně 150 kD, jehož setrvalý stav hladiny fosfotyrozinu se zmenšuje až na nezjistitelnou míru v případě buněk v nepřítomnosti séra.
Kultivace buněk ABAE a shromáždění lyzátů buněk se provádí tímto způsobem: na plastové petrimisce (Falcon) se rozprostřou v jedné vrstvě buňky v hustotě 2x106 buněk/150 mm ABAE s nízkým počtem pasáží a pěstují se v Eaglově médium modifikovaném Dulbecco médiem (DMEM) obsahujícím 10% telecího séra (10% BCS), 2mM L-glutaminu (Q) a po 1 % penicillinu a streptomycinu (P-S) v prostředí s 5 % oxidu uhličitého. Před shromážděním buněčných lyzátů se buňky ponechají 24 hodin v prostředí bez séra v DMEM/Q/P-S, prostředí se odtáhne a destičky se pokropí ledově studenou solankou pufrovanou fosfátem (PBS) doplněnou orthovanadátem sodným, fluoridem sodným a benzamidinem sodným. Buňky se lysují v malém objemu tohoto oplachového pufru, který byl doplněn 1 % detergentu NP40 a inhibitory proteázy PMSF a aprotininem. Nerozpuštěné zlomky se z buněčných lyzátů odstraní odstřeďováním po dobu 10 minut při 14 000 xG při teplotě 4 °C a supematanty se podrobí imunoprecipitaci antisérem specifickým pro receptor TIE-2, přibližně za přítomnosti blokujících peptidů přidaných do přibližně 20 pg/ml lyzátů. Imunoprecipitované proteiny se rozpustí za použití PAGE (7,5% gel Laemmli), provede se a elektrotransfekce na membránu PVDF a inkubují se buď s různými TIE-2 specifickými antiséry, nebo s antiséry specifickými pro fosfotyrozin. Protein TIE-2 se zviditelní inkubací membrány se sekundárním antisérem vázaným na HRP následovanou zpracováním reakčním činidlem ECL (Amersham).
Příklad 2
Klonování a exprese receptorové látky TIE-2 ke studiu založené na afinitě ligandu TIE-2 Interakce
Byla vytvořena expresní sestava, která by měla poskytovat oddělený protein sestávající z úplně mimobuněčné části receptoru TIE-2 fúzované ke konstantní oblasti (lgGl Fc) lidského imunoglobulinu gama-1. Tento fúzní protein se nazývá TIE-2 receptorová látka („receptorbody“) (RB) a normálně se předpokládá, že existuje jako dimer v roztoku založeném na vytváření disulfídických vazeb mezi jednotlivými konci lgGl Fc. Podíl Fc TIE-2 RB se připraví takto: Fragment DNA kódující část Fc lidského lgGl, která zasahuje do patentové oblasti ke karboxylovému konci proteinu, se zesílí z lidské placentní cDNA pomocí PCR s oligonukleotidy odpovídajícími publikované sekvenci lidského lgGl; výsledný fragment DNA se klonuje do plazmidového vektoru. Příslušné restrikční fragmenty DNA od plazmidu, kódujícího receptor TIE-2 v plné
-19CZ 295371 B6 délce a od lidského plazmidu lgGl Fc, se liguje po obou stranách krátkého fragmentu odvozeného od PCR, který byl určen k fúzování v základní struktuře sekvence kódujících TIE-2 a lidský protein lgGl Fc. Výsledný protein TIE-2 oktodoménní-Fc fúze tudíž přesně substituoval lgGl Fc v místě oblasti zasahující do transmembrány TIE-2 a do cytoplazmových domén. Alternativní způsob přípravy RB popsal Goodwin a kol. (Cell 73, str. 447 až 456, 1993).
Klonováním fragmentu DNA TIE-2 RB do vektoru baculoviru pVL1393 se získají miligramová množství TIE-2 RB, načež se infikuje buněčná linie SF-21AE hmyzu Spodoptera frugiperda. Alternativně může být použito buněčné linie SF-9 (ATTC Accession No. CRL-1711) nebo buněčné linie BTI-TN-5bl-4. DNA kódující TIE-2 RB se klonuje jako fragment Eco RI-Notl do transferového baculoviru plazmidu pVL1393. Plazmid DNA, vyčištěný odstředěním gradientu hustoty chloridu česného, se rekombinuje do virové DNA přimíšením 3 pg plazmidu DNA s 0,5 pg Baculo-Gold DNA (Pharminigen) následovaným zavedením do liposomů pomocí 30 pg Lipofektinu (GIBCO-BRL). Do buněk SF-21AE (2xl06 buněk na 60 mm misku) v médiu TMNFH (Modified Grace's Insect Cell Medium (GIBCO-BRL) se přidají směsi DNA-liposomu na pět hodin při teplotě 27 °C, načež následuje inkubace pět dní při teplotě 27 °C v prostředí TMNFH doplněným 5% zárodečným telecím sérem. Médium tkáňové kultury se shromáždí k destičkovému čištění rekombinantních virů, což se provede v literatuře popsanými způsoby (O'Reily, D.R., L.K. Miller a V. A. Luckow, Baculovirus Exprimsion Vectors - A Laboratory Manual 1992, New York: W.H. Freeman), s tou výjimkou, že agarová krycí vrstva obsahuje 125 pg/ml X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-P-D-galaktopyranosidu GIBCO-BRL). Po pětidenní inkubaci při teplotě 27 °C nebyly shledány žádné rekombinantní destičky pozitivní chromogenovou reakcí na X-gal substrát a jejich polohy se vyznačí. Rekombinantní destičky se pak zviditelní přísadou druhé krycí vrstvy obsahující 100 pg/ml MTT (3-[4,5-dimethyIthiazol-2yl]-2,5-difenyltetrazoliumbromid; Sigma). Předpokládaný rekombinantní virový plak se vytře tamponem a vyčistí se několika průběhy izolace k zaručení homogenity. Zásoby viru se vytvoří sérií několikanásobných pasáží plaku s vyčištěným virem. Získají se zásoby klonu viru s nízkou pasáží (v TIE-2 receptorové látce).
Buňky SF-21AE se pěstují v médiu prostém séra (SF-900 II Gibco BERL) obsahujícím roztok systému IX antibiotikum/antimykotikum (GIBCO BRL) a 25 mg/1 gentamycinu (Gibco-BRL). Přidá se Pluronik F-68 jako povrchově aktivní činidlo do konečné koncentrace 1 g/1. Před infikováním se kultury (4 1) ponechají nejméně tři dny v bioreaktoru (Artisan Cell Station Systém). Buňky se nechají růst při teplotě 27 °C v plynu obsahujícím 50 % rozpuštěného kyslíku při proudění plynu rychlostí 80 ml/min (ovzdušnění na kropicím prstenci). K ovzdušnění slouží námořní vektor s počtem otáček 100/min. Buňky se shromáždí ve střední logaritmické růstové fázi (přibližně 2x106 buněk/ml), zkoncentrují se odstředěním a infikují se 5 plak tvořícími jednotkami TIE-2 receptorové látky na buňky. Buňky se inokulum se vnesou do 400 ml čerstvého média a vir se absorbuje po dobu dvou hodin při teplotě 27 °C v odstředivkové baňce. Kultura se resuspenduje na konečný objem 8 1 čerstvým médiem prostým séra a buňky se inkubují v bioreaktoru za shora popsaných podmínek.
Po 72 hodinách od infikování se kultivační médium od buněk SF-21AE, infikovaných TIE-2 receptorovou látkou, shromáždí odstředěním (500x g, 10 minut). Hodnota pH buněčných supernatantů se upraví na 8 hydroxidem sodným. Přidá se EDTA do konečné koncentrace 10 mM a hodnota pH supernatantu se znovu upraví na 8. Supernatanty se zfiltrují (0,45 μπι Milipore) a vnesou se na sloupec proteinu A (rychle tekutý protein A separosy 4 nebo HiTrap protein A, obojí obchodní produkt společnosti Pharmacia). Sloupec se promyje PBS obsahujícím 0,5M chloridu sodného až do klesnutí absorbance při 280 nm na základní linii. Sloupec se promyje PBS a eluuje se 0,5M kyselinou octovou. Frakce kolony se okamžitě neutralizují eluováním do zkumavek obsahujících 1M Tris o hodnotě pH 9. Píkové frakce, obsahující TIE-2 receptorovou látku, se zředí a dialyzují se proti PBS.
-20CZ 295371 B6
Příklad 3
Doklad rozhodující úlohy TIE-2 ve vývoji cév
Pochopení funkce TIE-2 zprostředkovalo zavedení „nadbytku“ rozpustné TIE-2 receptorové látky (TIE-2 RB) do vývojového systému. Potenciální způsobilost TIE-2 RB vázat a tím také neutralizovat dostupný ligand TIE-2 by mohla vést k pozorovatelnému přerušení normálního vývoje cév a ke charakterizování ligandů. K vyzkoušení, zda vy bylo možno použít ligandů TIE-2 RB k přerušení vývoje cév v čerstvých kuřecích embryích, se nasály malé podíly biologicky resorbovatelné pěny s TIE-2 RB a vnesly se těsně za chorioallantoickou membránou v poloze těsně bočně k časnému embryu.
Časná kuřecí embrya se vyvíjejí nad žloutkem z malého kotoučku buněk, který je povlečen chorioallantoickou membránou (CAM). Endoteliové buňky, které přijdou do cévní linie embrya, pocházejí jak z vnějších, tak z vnitřních zdrojů zárodečných buněk. Zvnějšku odvozené zárodečné endoteliové buňky, které tvoří hlavní zdroj endoteliových buněk embrya, pocházejí z přirůstání mesenchymu, který je situován bočně kolem vlastního embrya, těsně pod CAM. Když tyto mesenchymové buňky dospějí, dají vznik společnému progenitoru jak endotelových tak hematopoietických linií buněk, nazývaných hemangioblast. Hemangioblast pak okamžitě umožní vznik smíšené populaci anioblastů (progenitoru endoteliových buněk) a hematoblastům (pluripotenciálnímu hematopoietickému prekurzoru). Tvoření základů oběhového systému začíná, když progeny endoteliových buněk segregují za vytvoření váčku s jednobuněčnou tloušťkou, který obklopuje původní krevní buňky. Proliferace a migrace těchto buněčných složek případně vytvoří rozsáhlé síťoví krví naplněných mikrocév pod CAM, které nakonec přivedou embiyo ke spojení s omezenými, intra-embryonicky odvozenými cévními elementy.
Čerstvě oplozená vajíčka kuřat (obchodní produkt společnosti Spafas, lne. Boston, MA) se inkubují při teplotě 37,5 °C a 55% relativní vlhkosti. Po přibližně 24 hodinách vývoje se vajíčka otřou 70% ethanolem a zubařským vrtáčkem se v nich vytvoří 1,5 cm otvor v tupím konci každého vajíčka. Skořápková membrána se odstraní k odkrytí volného prostoru přímo nad embiyem. Skalpelem se vyříznou čtvercové kousky Gelfoamu (Upjoh) a napustí se ve stejné koncentraci TIE-2 nebo EHK-1 receptorovou látkou. Receptorová látka EHK-1 se získá jako podle příkladu 2 pomocí mimobuněčné domény EHK-1 místo mimobuněčné domény TIE-2 (Maisonpierre a kol. Oncogene 8, str. 3277 až 3288, 1993). Každý kousek Gelfoamu adsorboval přibližně 6 pg Proteinu ve 30 μΐ. K otevření malé dírky v CAM se použije hodinářské pinsety v místě několika milimetrů stranou primitivního embiya. Pod CAM se zasune hlavní část Gelfoamu s napuštěným RB pod CAM a skořápka vajíčka se zalepí lepicí pásku. Ostatní vajíčka v podobném stavu se paralelně ošetří RB neodvozenou, neuronálně exprimovanou receptorovou tyrozinkinázou, EHK-1 (Maisonpierre a kol., Oncogene 8, str. 3277 až 3288, 1993). Vývin se nechá pokračovat čtyři dny a pak se vejce podrobí vizuální prohlídce. Embrya se vyjmou opatrným rozbitím skořápky v miskách zahřáté PBS a opatrně se odřízne embryo s obklopující CAM. Ze 12 vajec, z nichž každé bylo ošetřeno RB, 6 TIE-2 a RB a 5 EHK-1 RB, se vyvinula embrya od stavu pozorovanému na začátku pokusu. Mezi těmito vyvinutými embryi se pozoruje dramatický rozdíl, jak patrno z obr. IA a 1B. Vejce ošetřená EHK-1 RB se vyvinula poměrně normálně. Čtyři z pěti embryí EHK-1 žilo, podle tlukoucího srdce. Kromě toho vnější embiyové cévy, které jsou vizuálně patrné přítomností červených krvinek, jsou hluboké a nacházejí se několik centimetrů pod CAM. Na rozdíl od toho, embrya ošetřená TIE-2 RB jsou silně zakrnělá, mají 2 až 5 mm, oproti průměru 10 mm embryí EHK-1 RB. Všechny embrya ošetřená TIE-2 RB jsou mrtvá a jejich CAM jsou prostá krevních cév. Způsobilost TIE-2 RB blokovat vývoj cév u kuřat ukazuje, že ligand TIE-2 je nutný pro vývoj vaskulatury.
-21 CZ 295371 B6
Příklad 4
Identifikace vazební aktivity specifické pro TIE-2 v kondiciovaném médiu od onkogenně-rastransformované myoblastové buněčné linie myši C2C12
Snímání desetinásobně koncentrovaného média (10 x CCM) od různých buněčných linií pro přítomnost specifické vazební aktivity rozpustného TIE-2 (BIAcore; Pharmacvia Biosensor, Poscataway, NJ) ukázala vazební aktivitu v médiu prostém séra od onkogenně-ras-transformovaných buněk C2C12 (C2C12-ras), RAT 2-ras (což je ras transformovaná fibroblastová buněčná linie), lidské glioblastoma T98G a lidské buněčné linie neuroblastomu známé jako SHEP-1.
C2C12-ras lOx CCM pochází od stabilně transfektované linie C2C12 myoblastů, které byly transformovány onkogenicky transfekci mutantem T-24 H ras standardními metodami na bázi kalciumfosfátu. Plazmid SV40, založený na expresi neomycinové resistance, byl fyzicky vázán splazmidem ras exprese k umožnění selekce transfektovaných klonů. Výsledné buňky G418 resistantní ras-C2C12 byly rutinně udržovány jako monovrstva na plastových miskách v systému DMEM/glutamin/penicillin-streptomycin doplněném 10 % zárodečného telecího séra (FCS). Séra prosté C2C12-ras lOx CCM se připraví překrytím buněk při 60% slití v médium prostém séra v průběhu 12 hodin (Zhan a Goldfarb, Mol. Cell. Biol. 6, str. 3541 až 3544, 1986; Zhan a kol., Oncogene 1, str. 369 až 376,1987). Médium se vyhodí a nahradí čerstvým DMEM/Q/P-S na 24 hodin. Toto médium se shromáždí a buňky se doplní čerstvým DMEM/Q/P-S, které se rovněž vyhodí po dalších 24 hodinách. Tyto CCM byly doplněny inhibitory proteázy PMSF (lmM) a aprotininem (10 pg/ml) a desetinásobně zkoncentrovány na sterilních velikost vylučujících membránách (Amicon). Vazební aktivita TIE-2 by mohla být neutralizována inkubaci média nadbytkem TIE-2 RBC, nikoli však inkubaci s EHK-1 RB, před analýzou BIAcore.
Vazební aktivita lOx CCM se měří pomocí biosenzorové technologie (BIAcore: Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ), která monitoruje biomolekulámí interakce v reálném čase cestou povrchové plazmonové rezonance. Vyčištěný TIE-2 RB se kovalentně kopuluje přes primární aminy na vrstvu karboxymethyldextranu CM5 senzorového čipu pro výzkum (Pharmacia Biosensor; Piscataway, NJ). Povrch senzorového čipu byl aktivován pomocí směsi N-hydroxysukcinimidu (NHS) a N-ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)-karbodiimidu (EDC), s následnou imobilizací TIE-2 RB (25 pg/ml, hodnota pH 4,5) a deaktivací nezreagovaných míst 1,0 M ethanolaminem (hodnota pH 8,5). Negativní kontrolní povrch receptorové látky EHK-1 se připraví podobným způsobem.
Běžným pufrem, použitým v systému, je HBS (10 mM Hepes, 3,4 mM EDTA, 150 mM NaCl, 0,005 % povrchově aktivního činidla P20, hodnota pH 7,4). Vzorky lOx CCM se odstřeďují 15 minut při teplotě 4 °C a vyčeří se použitím sterilního filtru 0,45 pm, vázajícího nízký protein (Millipore; Bedford, MA). Do každého vzorku CCM se přidá dextran (2 mg/ml) a povrchově aktivní činidlo P20 (0,005 %). Podíly 40 pl se vstřikují přes imobilizovaný povrch (buď TIE-2, nebo EHK-1) při průtočné rychlosti 5 pl/min a vazba receptoru se sleduje po dobu osmi minut. Vazební aktivita (rezonanční jednotky, RU) se měří jako rozdíl mezi základní hodnotou stanovenou 30 sekund před vstřiknutím do vzorku a měření proběhne 30 sekund po vstřiknutí. Regenerace povrchu se provede jedním pulzem 12 pl 3M chloridu hořečnatého.
Šumová úroveň přístroje je 20 RU; proto nemůže být žádná vazební aktivita se signálem nad 20 RU interpretována jako skutečná interakce s receptorem. Pro média kondiciovaná C2C12-ras, jsou vazební aktivity v rozmezí 60 až 90 RU pro imobilizovaný povrch TIE-2 RB. U stejných vzorků zkoumaných na imobilizovaném povrchu EHK-1 RB, jsou naměřené aktivity nižší než 35 RU. Specifická vazba na receptorovou látku se vyhodnocuje inkubací vzorků s nadbytkem buď rozpustného TIE-2, nebo EHK-1 RB před zkoumáním vazební aktivity. Přísada rozpustného TIE-2 RB nemá žádný účinek na vazební aktivitu TIE-2 u kteréhokoli vzorku, zatímco
-22CZ 295371 B6 v přítomnosti rozpustného TIE-2 je vazba k povrchu o dvě třetiny nižší než hodnota naměřená v přítomnosti TIE-2. Opakovaná zkouška s použitím více než 50x koncentrovaného C2C12-ras CCM ukázala čtyřnásobné zlepšení vůči pozadí vazebního signálu specifického pro TIE-2.
Příklad 5
C2C12-ras CCM obsahuje aktivitu, která indukuje tyrozinovou fosforylaci receptorů TIE-2
C2C12-ras lOx CCM se zkoumá z hlediska schopnosti vyvolat tyrozinovou fosforylaci TIE-2 v buňkách ABAE. Sérem vyhladovělé buňky ABAE se krátce inkubují C2C12-ras CCM, lysují se a podrobí se imunoprecipitaci a Western analýze jak shora uvedeno. Stimulace sérem vyhladovělých buněk ABAE C2C12-ras lOx CCM se provede následujícím způsobem: Médium ABAE buněk, vyhladovělých jak uvedeno, se odstraní a nahradí se buď definovaným médiem, nebo lOx CCM předehřátým na 37 °C. Po deseti minutách se média odstraní a buňky se dvakrát na ledu promyjí nadbytkem chladné PBS doplněné systémem orthovanadát/fluorid sodný/benzamidin. Lyse buněk a TIE-2 specifická imunoprecipitace se provedou, jak shora popsáno.
Buňky ABAE, inkubované 10 minut s definovaným médiem, nevykazují žádnou indukci fosforylace TIE-2 tyrozinu, zatímco inkubace C2C12-ras lOx CCM stimuluje nejméně 100 násobný nárůst fosforylace TIE-2. Tato aktivace je téměř úplně vyčerpána předinkubací C2C12-ras ÍOx CCM 90 minut při teplotě místnosti s 13 pg TIE-2 RB kopulované na protein kuliček G-sefarosy. Médium inkubované proteinem G separosy samotné nebylo zbaveno této fosforylační aktivity.
Příklad 6
Expresní klonování ligandu TIE-2
V Dulbeccem modifikovaném Eaglově médiu (DMEM) obsahujícím 10 % zárodečného telecího séra (FBS), po 1 % penicillinu a streptomycinu (P/S) a 2 mM glutaminu v prostředí 5% oxidu uhličitého se kultivují buňky COS-7. V Eaglově minimálně potřebném médiu (EMEM) s 10 % FBS, (P/S) a 2 mM glutaminu se kultivuje linie buněk myšího myoblastu C2C12 ras. Snímáním knihovny C2C12-ras cDNA v buňkách COS exprimovaných vektorem pJFE12 se získají v plné délce myší klony cDNA ligandu TIE-2. Tento vektor, jak vyplývá z obr. 2, je modifikovanou verzí vektoru pSRa (Tabake a kol., Mol. Cell. Biol. 8, str. 466 až 472, 1988). Knihovna se vytvoří pomocí dvou restrikčních míst BSTX1 ve vektoru pJFE14.
Buňky COS-7 se přechodně transfekují buď knihovnou pJFE14, nebo řídicím vektorem podle transfekčního protokolu DEAE-dextran. Přitom se buňky COS-7 24 hodin před transfekcí pokryjí povlakem 1,0 x 106 buněk/lOOmm. K transfekcí se buňky kultivují v DMEM prostém séra, obsahujícím 400 pg/ml DEAE-dextranu, 1 pM chlorochinu a 2mM glutaminu a 1 pg příslušné DNA po dobu 3 až 4 hodin při teplotě 37 °C v prostředí 5% oxidu uhličitého. Transfekční médium se odsaje a nahradí se PBS s 10 % DMSO na 2 až 3 minuty. Po „šoku“ DMSO se buňky COS-7 umístí do DMEM s 10 % FBS, po 1 % penicillinu a streptomycinu a 2 mM glutainu na 48 hodin.
Jelikož se ligand TIE-2 vylučuje, je nutno buňky uschopnit k detekci vazeb receptorové sondy k ligandu. Dva dny po transfekcí se buňky propláchnou PBS a pak se inkubují s PBS obsahujícím 1,8% formaldehydu na 15 až 30 minut při teplotě místnosti. Buňky se pak promyjí PBS a inkubují se na 15 minut s PBS obsahujícím 0,1 % Tritonu x-100 a 10 % zárodečného telecího séra k permeabilizaci buněk a k blokování nespecifických vazebních míst.
-23 CZ 295371 B6
Skríning se provede přímou lokalizací zbarvení pomocí TIE-2 receptorové látky (RB), která sestává z extrabuněčné oblasti TIE-2 fúzovaného do konstantní oblasti lgGl. Tato receptorová látka se připraví podle příkladu 2. Miska o průměru 100 mm transfektovaných, fixovaných a permeabilizovaných buněk COS se sonduje jejich 30 minutovou inkubaci s TIE-2 RB. Buňky se promyjí dvakrát PBS a inkubují se na dalších 30 minut skonjugátem PBS/10% telecího séra/antihumánní lgG-alkalická fosfatáza. Po trojnásobném promytí PBS, se buňky inkubují v alkalicko-fosfatázovém substrátu po dobu 30 až 60 minut. Miska se pak zkoumá mikroskopem z hlediska přítomnosti obarvených buněk. Kolem každé zabarvené buňky se odškrabe koncem plastové pipety má ploška buněk obsahující vybarvenou buňku a plazmid DNA se pak uchová a použije se k elektroporaci bakteriálních buněk. Jednotlivé kolonie bakterií z elektroporace se vyjmou a plazmid DNA, připravený z těchto kolonií, se použije k transfektování buněk COS-7, které byly sondovány na expresi ligandu TIE-2, jak vyplývá z vazby na receptorová tělesa TIE2. To umožňuje identifikaci jednotlivých klonů kódujících ligand TIE-2. Potvrzení exprese ligandu TIE-2 se získá fosforylací receptorů TIE-2 popsanou v příkladu 5. Plazmidový klon, kódující ligand TIE-2, byl uložen v ATCC 7. října 1994 a označen jako „pJFE14 kódující ligand TIE-2“ pod číslem ATCC Accession No. 75910.
Příklad 7
Izolace a sekvencování klonu cDNA v plné délce, kódujícího lidský ligand TIE-2
Z Clontech Laboratories lne. (Palo Alto, CA) se získá čeleď cDNA lidských zárodečných plic v lambda gt-10 (obr. 3). Destičky se povléknou v hustotě 1,25 x 106 povlakem 20x20 cm a odeberou se replika filtry standardními postupy (Sambrook a kol., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání, str. 8 až 46, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor New York).
Izolace lidských ligandových klonů tie—2 se provede takto: Fragment 2,2 kb Xhol z uloženého ligandového klonu tie-2 (ATCC No. 75910- viz příklad 6) se označí náhodným znakem pro specifickou aktivitu přibližně 5x108 cpm/ng. Hybridizace se provede při teplotě 65 °C v hybridizačním roztoku obsahujícím 0,5 mg/ml DNA lososového sperma. Filtry se promyjí při teplotě 65 °C ve 2xSSC, 0,1% SDS a exponují se přes noc na filmu Kodak XAR-5 při teplotě -70 °C. Pozitivní fág je vyčištěný plak. K izolaci DNA způsobem sloupce Qiagen se použijí fágové lyzáty čistého fágu s vysokým titrem fágu standardními způsoby (Qiagen, lne., Chatworth, CA, 1995, katalog str. 36). Fág DNA se digeruje EcoRI k uvolnění fragmentu klonované cDNA k následnému subklonování Lambda fágový vektor obsahující lidský ligand tie-2 DNA byl uložen ATCC 26. října 1994 pod označením lambda gtlO, kódující htie-2 ligand 1 (ATCC Accession No 75928). Fág DNA může být podroben přímo analýze sekvencí DNA metodou dideoxy řetězcového ukončení (Aanger a kol., Proč. Nati. Acad. Sci USA 74, str. 5463 až 5467, 1977).
Subklonování lidského ligandu tie-2 DNA do savčího expresního vektoru se může provést takto: Klon lambda gtlO, kódující htie-2 ligand 1, obsahuje místo EcoRI umístěných 490 párů bází ve směru od začátku kódovací sekvence pro lidský ligand TIE-2. Kódovací oblast může být vystřižena pomocí jedinečných restrikčních míst ve směru nahoru a dolů od iniciátoru a koncových kodonů. Například místo Spěl, umístěné 70 bp 5' vůči kodonu iniciátoru a Bpu 1102i (známé též jako B1P1) místo umístěné 265 bp 3' ke konečnému kodonu, může být použito k vystřižení úplné kódovací oblasti. To pak může být subklonováno do klonovacího vektoru pJFE14 pomocí Xbal (kompatibilní s převisem Spěl) a míst Pstl (Pstl a Pbull02i jsou oba s hrubým koncem).
Kódovací oblast od klonu lambda gtlO, kódujícího htie-2 ligand 1 se sekvencují pomocí sekvenceru ABI 373Q DNA a Taq Dideoxy Terminátor Cycle Sequencing Kit (Applied
-24CZ 295371 B6
Biosystems, lne., Foster City, CA). Nukleotidová a odvozená sekvence aminokyselin lidského ligandu TIE-2 od klonu lambda gtlO, kódujícího thie-2 ligand 1, je znázorněna na obr. 4.
Kromě toho se získaly klony lidského tie-2 ligandu cDNA v plné délce snímáním lidské knihovny cDNA glioblastomu T98G ve vektoru pJFE14. Klony, kódující lidský ligand TIE-2, byly identifikovány hybridizací DNA pomocí fragmentu 2,2kbXhol od uloženého klonu ligandu tie-2(ATCC No. 75910) jako sonda (příklad 6). Kódující oblast se sekvencuje použitím sekvenceru ABI 373A DNA a Tag Dideoxy Terminátor Cycle Sequencing Kit (Appliet Biosystems, inc. Foster City, CA). Tato sekvence byla téměř stejná jako klonu lambda gtlO, kódujícího thie 2 ligand 1. Jak vyplývá z obr. 4, obsahuje klon lambda gtlO, kódující thie-2 ligand 1, přídavný glycinový zbytek, který je zakódován nukleotidy 1114 až 1116. Kódovací sekvence klonu T98G neobsahuje tento glycinový zbytek, je však jinak identická s kódovací sekvencí klonu lambda gtlO, kódujícího htie-2 ligand 1. Obr. 5 ukazuje nukleotid a odvozené sekvence aminokyselin lidského ligandu TIE-2 od klonu T98G.
Příklad 8
Izolace a sekvencování druhého klonu A v plné délce cDNA kódující lidský ligand TIE-2
Knihovna cDNA lidských zárodečných plic v lambda gt-10 (obr. 3), se získá od Clontech Laboratoried, Inc. (Palo Alto, CA). Plaky se nanesou v hustotě 1,25 x 106/destičky 20x20 cm a standardními způsoby byly odebrány filtry replik (Sambrook a kol. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání, str. 8 až 46, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor New York). Duplikátní filtry se snímají s nízkým řazením (2xSSC, 55 °C) se sondami provedenými na sekvenci lidského ligandu 1 TIE-2. Jeden z duplikátních filtrů byl opatřen sondou 5', kódující aminokyseliny 25 až 265 lidského ligandu 1 TIE-2, jak patrno z obr. 4. Druhý duplikátní filtr byl opatřen sondou 3', kódující aminokyseliny 286 až 498 lidského ligandu 1 TIE-2, jak patrno z obr. 4. Obě sondy byly hybridizovány při teplotě 55 °C v hybridizačním roztoku obsahujícím 0,5 mg/ml DNA lososového sperma. Filtry se promyjí 2xSSC při teplotě 55 °C a přes noc se exponují na rentgenový film. Kromě toho se také hybridizují duplikátní filtry při normálním řazení (2xSSC při teplotě 65 °C) do plné délky kódující sondy myšího ligandu 1 TIE-2 (F3-15, Xhol insert).Vyberou se tři pozitivní klony, které splňovaly následující kritéria: i) hybridizace nebyla patrná u sondy (myší) v plné délce při normálním řazení a ii) hybridizace byla patrná při nízkém řazení u obou sond 3' a 5'. Digesce EcoRI fágu DNA získaná z těchto klonů indikuje dva nezávislé klony s vloženými rozměry přibližně 2,2kb a přibližně l,8kb. Insert 2,2kb EcoRI se subklonuje do míst EcoRI obou pBluescript KS (Stratagene) a do savčího expresního vektoru vhodného k použití u buněk COS. U savčího expresního vektoru se identifikovaly dvě orientace. Insert 2,2kb v pBluescript KS byl uložen ATCC 9. prosince 1994 s označením pBluescript KS kódující ligand 2 lidského TIE-2. Výchozí bod, kódující sekvence TIE-2 ligandu 2 je přibližně 355 párů bází ve směru místa pBluescript EcoRI.
Buňky COS-7 byly přechodně transfektovány buď expresním vektorem, nebo řídicím vektorem transfekčního protokolu DEAE-dextran. Buňky COS-7 byly naneseny s hustotou 1,0x106 buněk na 100 mm destičku 24 hodin před transfekci. Ke transfekci byly buňky kultivovány v DMEM prostém séra obsahujícím 400 pg/ml DEAE-dextranu, 1 μΜ chlorochinu a 2 mM glutaminu 1 pg příslušné DNA 3 hodiny při teplotě 37 °C v prostředí 5% oxidu uhličitého. Transfekční médium se nasaje a nahradí se fosfátem pufrovanou solankou 10% DMSO po dobu 2 až 3 minuty. Po tomto „šoku“ DMSO se buňky COS-7 umístí do DMEM s 10 % FBS, po 1 % penicillinu a streptomycinu a 2 mM glutaminu na 48 hodin.
Jelikož ligand TIE-2 je sekretován, bylo nutno permeabilizovat buňky k detekci vazby sondy receptorové látky na ligand. Transfektované buňky COS-7 byly naneseny s hustotou 1,0x106 buněk na 100 mm destičku. Buňky se opláchnou PBS a inkubují se s PBS obsahujícím 1,8% formaldehydu po dobu 15 až 30 minut při teplotě místnosti. Buňky se promyjí PBS
-25CZ 295371 B6 ainkubují se na 15 minut PBS obsahujícím 0,1% Tritonu X-100 a 10 % telecího séra k permeabilizaci buněk a k blokování nespecifických vazebních míst. Snímání se provede přímou lokalizací vybarvení za pomocí TIE-2 receptorové látky, která sestává z mimobuněčné domény TIE-2 fúzované ke konstantní oblasti lgGl. Tato receptorová látka se připraví, jak uvedeno v příkladu 2. Transfektované buňky COS se podrobí inkubaci na 30 minut s TIE-2 receptorovou látkou. Buňky se promyjí dvakrát PBS, fixují se methanolem a inkubují se na dalších 30 minut skonjugátem PBS/10% telecího séra/antihumánní lgG-alkalická fosfatáza. Po třech promytích PBS se buňky inkubují v substrátu alkalické fosfatázy po dobu 30 až 60 minut. Miska se zkoumá mikroskopem na přítomnost obarvených buněk. Ukázalo se, že buňky exprimující jednu orientaci klonu, avšak nikoli jinou orientaci, se vážou na TIE-2 receptorovou látku.
Pracovníkům v oboru je zřejmé, že popsané způsoby mohou být použity dále k identifikaci jiných příbuzných látek čeledi ligandů TIE-2.
Kódující oblast od klonu pBluescript KS, kódující lidský ligand 2 TIE-2, se sekvencuje sekvencerem ABI 373A DNA a Taq Dideoxy Terminátor Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems lne., Foster City, CA). Nukleotidová a odvozená sekvence aminokyselin lidského ligandu TIE-2 od klonu pBluescript KS kódující lidský ligand 2 TIE-2 je na obr. 6.
Příklad 9
Ligand 2 TIE-2 je antagonist receptoru
Kondiciovaná média z buněk COS exprimující buď TIE-2 ligand (T12), nebo TIE-2 ligand 1 (TLI) se porovnávají z hlediska schopnosti aktivovat receptory TIE-2 vyskytující se přírodně v liniích lidských endoteliových buněk.
K transfektování buněk COS-7 bylo použito lipofektaminového reakčního činidla (GIBCOBRL, lne.) buď samotným expresním vektorem pJFE14, vektorem pJFE14 obsahujícím TIE-2 ligand 1, nebo expresním vektorem pMT21 (Kaufman R.J., Proč. Nati. Acad. Sci USA 82, str. 689 až 693 1985) obsahujícím lidský TIE-2 ligand 2 cDNA. Média COS, obsahující sekretované ligandy, se shromáždí po třech dnech a zkoncentrují se na 20-násobek diafiltrací (DIAFLO ultrafiltrační membrány, Amicon, lne.). Množství aktivních TIE-2 ligandů la TIE-2 ligandu 2, obsažené v těchto médiích, se zjistí a vyjádří se jako množství (v rezonančních jednotkách R.U.) specifické vazební aktivity receptoru TIE-2 měřené vazebním testem BIAcore.
Analýzy Northem (RNA) ukázaly významné úrovně transkriptů TIE-2 v HAEC (Human Aortic Endothelia Cell) lidských primárních endoteliových buněk (Clonetics, lne.). Proto bylo těchto buněk použito k vyzkoušení, zda receptor TIE-2 je fosforylován tyrozinem, když je vystaven médiu COS obsahujícímu TIE-2 ligandy. Buňky HAEC se udržovaly v úplném růstovém médiu endoteliových buněk (Clonetics, lne.), které obsahovaly 5 % zárodečného telecího séra, rozpustný extrakt hovězího mozku, lOng/ml lidské EGF, 1 mg/ml hydrokortisonu, 50 mg/ml gentamicinu a 50 ng/ml amfotericinu-B. K posouzení, zda může TLI a TL2 aktivovat receptor TIE-2 v buňkách HAEC, se postupovalo takto: Napůl slité buňky HAEC se nechají dvě hodiny vyhladovět sérem v Dulbecově MEM s vysokou glukózou s přidaným L-glutaminem a systémem penicillin-streptomycin při teplotě 37 °C, načež následuje náhrada vyhladovacího média kondicionovaným médiem COS obsahujícím ligand na 7 minut při teplotě 37 °C v inkubátoru s 5 % oxidu uhličitého. Buňky se nato lyžují a TIE-2 receptorový protein se získá imunoprecipitací lyzátu s TIE-2 peptidovým antisérem a následným způsobem Western bloting s antifosfotyrozinovým antisérem způsobem podle příkladu 1. Výsledky jsou na obr. 7. Fosfotyrozinové úrovně TIE-2 receptoru (TIE-2-R) se zavedou zpracováním HEAC buněk TIE-2 ligandem 1 (dráha 1) avšak nikoli TIE-2 ligandem (dráha 2) kondicionovaného média COS. MOCK je kondicionované médium z COS transfektovaného JFE14 vyprázdněným vektorem.
-26CZ 295371 B6
Poznatek, že jak TLI tak TL2 se specificky vážou na receptor TIE-2, byl prokázán použitím BIA-jádra ke zkoumání specifických vazebních aktivit receptorů TIE-2 ve transfektováném médiu COS a imunovybarvením TLI a TL2 exprimováním buněk COS receptorovými hlavními podíly TIE-2. Jelikož TL-2 neaktivoval receptor TIE-2, dospělo se podle vynálezu k úvaze, zda TL2 by mohly být schopné sloužit jako antagonisty aktivity TLI. Byly provedeny zkoušky fosforylace HAEC, ve kterých byly buňky napřed inkubovány s „nadbytkem“ TL2, s následnou přísadou zředěného TLI. Usoudilo se, že přední okupování receptorů TIE-2, způsobené vysokými hladinami TL2, může bránit následné stimulaci receptorů po expozici na TLI existující při mezních koncentracích.
Poloslinuté buňky HAEC byly vyhladověny sérem, jak shora popsáno, a pak inkubovány tři minuty při teplotě 37 °C s 1 až 2 ml kondiciovaného média 20X COS/JFE14-TL2. Kontrolní destičky byly zpracovány pouze médiem 20X COS/JFE14 (MOCK). Destičky se vyjmuly z inkubátoru a přidala se různá zředění média COS/JFE-14-TL1, načež následovala další inkubace destiček na pět až sedm minut při teplotě 37 °C. Buňky se pak opláchly, lyžovaly a tyrozinová fosforylace TIE-2 v lyzátech se zkoumala receptorovou imunoprecipitací a způsobem Western blotting, jak shora popsáno. Zředění TLI byla provedena použitím média 20X COS/JFE14-TL1 zředěného na 2x, 0,5x, 0,lx nebo 0,02x přísadou samotného média 20X COS/JFE14. Zkouška počátečního 20X TLI a 20X TL2 COS pomocí BIAcore biosenzorové technologie naznačila, že měly podobné množství specifických vazebních aktivit TIE-2, tedy 445 R.U. a 511 R.U. pro TLI TL2. Výsledky antifosfotyrozinového Western blotu, znázorněné na obr. 8, ukazují, že v porovnání s předchozím zpracováním buněk HAEC médiem MOCK (linie 1), před zpracováním buněk HAEC nadbytkem TIE-2 ligandů 2 (linie 2) antagonizuje následnou schopnost zředěného TIE-2 ligandů 1 aktivovat TIE-2 receptor (TIE-2-R).
Schopnost TL2 konkurenčně bránit TLI aktivaci TIE-2-R se doložila použitím lidské hybridní buněčné linie EA.hy926 (příklad 21), kde je podrobně popsána tato buněčná linie a její uchovávání). Byly provedeny pokusy, při kterých byla zkoncentrovaná buněčná média COS obsahující TLI směšována s různým zředěním například MOCK kondicionovaného nebo TL2 kondicionovaného prostředí nanášena na monovrstvy sérem vyhladovělých buněk EA.hy926 na 5 minut při teplotě 37 °C. Média se pak odstranila, buňky se shromáždily lyží a specifická tyrozinová fosforylace pro TIE-2 se zkoumala způsoby Western blot, jak shora popsáno. Obr. 9 ukazuje pokus, který zahrnuje tři skupiny zpracování, jak patrno zleva doprava. Jak patrno ve čtyřech řádcích vlevo, zpracování buněk EA.hy926 samotný lx COS-TL1 mocně aktivovalo endogenní TIE-2-R v těchto buňkách, zatímco médium lx TL2 COS bylo neaktivní. Avšak směs TLI je s MOCK, tak s TL2 ukázala, že TL2 může blokovat aktivitu TLI způsobem závislým na dávce. V prostředních třech párech linií byl poměr TL2 (nebo MOCK) snížen, zatímco množství TLI ve směsi bylo příslušně zvýšeno z 0,lx na 0,3x. U každé z těchto poměrů směsí linie TL1:TL2 ukazuje sníženou míru fosforylace ve srovnání s odpovídajícími liniemi TLLMOCK. Když však bylo množství TLI zachováno stejné a množství TL2 (nebo MOCK) se snížilo (znázorněno ve třech párech linií vpravo) bylo dosaženo bodu, ve kterém TL2 ve vzorku bylo příliš zředěno, než aby účinně bránilo aktivitě TLI. Relativní množství každého ligandů, obsaženého v tomto kondiciovaném médiu COS, mohlo být stanoveno z jejich vazebních jednotek, jak změřeno testem BIAcore a způsoby Western blot, média COS s protilátkami specifickými pro ligand. V důsledku toho lze dospět k závěru, že k účinnému blokování aktivity TLI in vitro je potřebný jen málonásobný molámí přebytek TL2. To je významné, jelikož se pozorovalo v jednotlivých příkladech in vivo (příklad 17 a obr. 16), že TL2 mRNA dosahuje značné hojnosti se zřetelem na mRNA TLI. TL2 tak může mít významnou fyziologickou úlohu kúčinnému blokování, signalizací TIE-2-R v těchto místech.
Tak se zjistilo, že na rozdíl od TLI, TL2 je neschopen stimulovat endogenně exprimovaný TIE-2-R na endoteliových buňkách. Nadto může málonásobný molámí přebytek TL2 blokovat stimulaci receptorů TIE-2, což značí, že TL2 je přirozeně se vyskytujícím antagonistem v TIE-2 receptorů.
-27CZ 295371 B6
Příklad 10
Identifikace specifické vazební aktivity TIE-2 v kondicionovaném médiu buňky COS
Vazební aktivita ÍOxCCM z buněčných linií C2C12-ras, Rat2-ras, SHEP a T98G, nebo supernatantů buněk COS po transfekci buď s lidským TIE-2 ligandem 1 (hTLl), nebo lidským TIE-2 ligandem 2 (hTL2) se měří pomocí biosenzorové technologie (BIA-core; Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ), která monitoruje biomolekulámí interakce v reálním čase cestou povrchové plazmové rezonance (SPR). Vyčištěné krysí nebo lidské TIE-2 RB byly kovalentně kopulovány přes primární aminy ke karboxymethyldextranové vrstvě senzorového čipu CM5 výzkumného druhu (Pharmacia Biosensors; Piscatawy, NJ). Povrch senzorového čipu byl aktivován pomocí směsi N-hydroxysukcinimidu (NHS) a N-ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (EDC), následnou imobilizací TIE-2 RB (25 pg/ml, pH 4,5) a deaktivací nezreagovaných míst l,0M ethanolaminem (pH 8,5). K senzorovému čipu bylo kopulováno obecně 9000 až 10000 RU každého receptorového tělesa.
Běžným pufrem, použitým v systému, byl HBS (10 mM Hepes, 150 mM chloridu sodného, 0,005 % povrchově aktivního činidla P20, hodnota pH 7,4). Vzorky se odstřeďovaly po dobu 15 minut při teplotě 4 °C a vyčeřily se použitím sterilního 0,45 pm filtru s nízkou vazbou proteinů (Millipore, Bedford, MA). Ke každému vzorku byl přidán Dextran (2 mg/ml) a povrchově aktivní činidlo P20 (0,005 %). Přes imobilizovaný povrch byly injektovány podíly 40 μΐ (krysího nebo lidského TfE-2) nízkou rychlostí 5 μΐ/min a receptorová vazba byla sledována po dobu osmi minut. Vazební aktivita (v rezonančních jednotkách RU) byla měřena jako rozdíl mezi základní hodnotou stanovenou 30 sekund před injekcí vzorku a měřením 30 sekund po injekci. Regenerace povrchu byla provedena jedním pulzem 15—μΐ 3M chloridu hořečnatého.
Vzorky CCM (C2C12-ras, Rat2-ras, SHEP, T98G) byly testovány na krysím imobilizovaném povrchu TIE-2 RB, zatímco rekombinantní HTLl a HTL2 byly testovány na imobilizovaném povrchu lidského TIE-2 RB. V každém případě byla specifická vazba na receptorové těleso TfE-2 vyhodnocena inkubací vzorků s 25 pg/ml buď rozpustným TIE-2 (krysím nebo lidským) RB, nebo trkB RB před zkoumáním vazební aktivity. Jak patrno na obr. 10 a 11, přísada rozpustného trkB RB způsobuje mírný pokles vazební aktivity TIE-2, zatímco přísada rozpustného TIE-2 RB snižuje významně vazební aktivitu ve srovnání s aktivitou měřenou v nepřítomnosti TIE-2 RB.
Příklad 11
TIE-2 RB specificky blokuje aktivaci receptoru TIE-2 ligandem 1 TIE-2
Zkoumá se, zda rozpustný TIE-2 RB může sloužit jako konkurenční inhibitor k blokování aktivace TIE-2 receptoru TIE-2 ligandem 1 (TLI). Ktomu byla média COS, obsahující TLI, předběžně inkubována buď s TIE-2, nebo TrkB-RB a pak pozorována z hlediska schopnosti aktivovat TIE-2 receptory přirozeně obsažené v lidské linii endoteliových buněk.
Kondiciovaná média COS byla vytvořena z buněk COS-7 transfektovaných buď se samotným expresním vektorem pJFE14 (MOCK), nebo s vektorem pLFE14, obsahujícím lidský TIE-2 ligand 1 cDNA (TLI) a shromážděna, jak popsáno shora v příkladu 9, s tou výjimkou, že média byla sterilně zfiltrována, avšak bezkoncentrována. Množství ZLÍ bylo určeno a vyjádřeno jako množství (v rezonančních jednotkách R.U.) vazební aktivity specifické pro receptor TIE-2 měřené vazebním testem BIAcore.
-28CZ 295371 B6
Analýzy Northern (RNA) ukázaly významné úrovně transkriptů TIE2 ve HUVEC (Human Umbilical Vein Endosthelial Cell) lidských primárních endoteliových buňkách (Clonetics, lne.). Proto byly tyto buňky použity ke zjištění, zda může být TIE-2 receptor tyrozinem fosforylován, je-li vystaven v přítomnosti TIE-2 nebo TrkB-RB médiu COS obsahujícímu TLI. Buňky HUVEC byly udržovány při teplotě 37 °C v 5% oxidu uhličitém v úplném růstovém prostředí endoteliových buněk (Clonetics lne.), které obsahovalo 5 % zárodečného telecího séra, rozpustný extrakt hovězího mozku s 10 pg heparinu,10 ng/ml lidské EGF, 1 mg/ml hydrokortisonu, 50 mg/ml gentamicinu a 50 ng/ml amfotericinu-B. Posouzení, zda může TLI aktivovat receptor TL2 v buňkách HUVEC, se provádí tímto způsobem: Slinuté misky buněk HIVEC se nechají dvě až čtyři hodiny vyhladovět sérem v Dulbeco MEM s nízkou glukózou při teplotě 37 °C, načež následuje desetiminutová inkubace ve vyhladovacím médiu, které obsahuje 0,1 mM ortovanadátu sodného, mocného inhibitoru fosfotyrozinových fosfatáz. Mezi tím se předběžně inkubuje 30 minut při teplotě místnosti kondicionované médium COS buď TIE-2, nebo TrkB-RB přidaným do 50 pg/ml uvedeného média. Vyhladovací médium se z misek HUVEC odstraní a inkubuje se s médiem COS obsahujícím RB sedm minut při teplotě 37 °C. Buňky HUVEC se lyžují a protein TIE-2 se získá imunoprecipitací peptidovým antisérem TIE-2, načež následuje Western blotting antifosfotyrozinovým antisérem, přesně jak je popsáno v příkladu 1. Výsledky jsou na obr. 12. Fosfotyrozinové hladiny TIE-2 receptoru se zavedou zpracováním buněk HUVEC TIE-2 ligandem 1 (TLI), podobným s pozorovaným u kontrolního média (MOCK), a tato indukce je specificky blokována předběžnou inkubací TIE-2 RB (TIE-2-FC), nikoli však inkubací TIE-2 RB (TrkB-Fc). To znamená, že rozpustný TIE-2 RB může sloužit jako selektivní inhibitor k blokové aktivaci TIE-2 receptoru TIE-2 ligandem 1.
Příklad 12
Konstrukce ligandových těles TIE-2
Vytvoří se expresní konstrukt, který může poskytovat sekreční protein sestávající z úplné kódovací sekvence lidského TIE-2 ligandu 1 (TLI) nebo TIE-2 ligandu 2 (TL2) fúzovaného na lidskou konstantní oblast imunoglobulinu gama-1 (lgGl Fc). Tyto fúzované proteiny se nazývají „ligandobodies“ TIE-2 (TLl-Fc nebo TL2-Fc). Fc část TL1-FC a TL2-FC se připraví následujícím způsobem: Fragment DNA, kódující Fc část lidského lgGl, který zasahuje od stěžejní oblasti ke karboxylovému konci proteinu, se zesílí z lidské placentální cDNA pomocí PCR s oligonukleotidy odpovídajícími publikované sekvenci lidského lgGl; výsledný fragment DNA se klonuje do plazmidového vektoru. Příslušné restrikční fragmenty DNA od plazmidu kódujícího receptoru TLI a TL2 v plné délce a od lidského plazmidu lgGl Fc se liguje po obou stranách krátkého fragmentu, odvozeného od PCR, který byl určen k fúzování do TLI a TL2 s lidskými sekvencemi kódujícími lgGl Fc.
Klonováním fragmentu DNA TL2-FC do vektoru baculoviru pVL1393 se získají miligramová množství TL2 Fc, načež se infikuje buněčná linie SF-21AE hmyzu Spodoptera frugiperda. Alternativně může být použito buněčné linie SF-9 (ATCC Accession No. CRL-1711) nebo buněčné linie BTI-TN-5bl-4. DNA, kódující TL2-Fc, se klonuje jako fragment Eco Rl-Notl do transfektorového baculorivu plazmidu pVL1393. Plazmid DNA se rekombinuje do virové DNA přimíšením 3 pg plazmidu DNA s 0,5 pg DNA Baculo-Gold (Pharminigen) následovaným zavedením do liposomů pomocí 30 pg Lipofektinu (GIBCO-BRL). Přidávají se DNA-liposomové směsi do buněk SF-21AE (2x106 buněk na 60 mm misku) v médiu TMN-FH (Modifíed Grace's Insect Cell Medium) (GIBCO-BRL) na pět hodin při teplotě 27 °C, načež následuje inkubace pět dní při teplotě 27 °C v prostředí TMN-FH doplněném 5 % zárodečného telecího séra. Médium tkáňové kultury se shromáždí k destičkovému čištění rekombinantních virů, což se provede shora popsanými způsoby (D.R. O'Reily, L.K. Miller a V.A. Luckow, Baculovirus Exprimsion Vectors- A Laboratory Manual 1992, New York: W.H. Freeman) s výjimkou, že agarová vrchní vrstva obsahovala 125 mg/ml X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-|3-D-29CZ 295371 B6 galaktopyranosidu GIBCO-BRL). Po pětidenní inkubaci při teplotě 27 °C byly počítány nerekombinantní destičky pozitivní chromogenickou reakcí na X-gal substrát a jejich polohy se vyznačí. Rekombinantní destičky se pak zviditelní přísadou druhé vrchní vrstvy obsahující 100 pg/ml MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-difenyltetrazoliumbromid; Sigma). Domnělé destičky rekombinantního viru se vyjmou odsátím zátkou a vyčistí se několika průběhy izolace destiček k zaručení homogenity. Zásoby viru se vytvoří sérií několikanásobným průchodem viru vyčištěného destičkami. Získají se zásoby jednoho klonu viru s nízkým průchodem (vTL2-Fc klon #7).
Buňky SF-21AE se pěstují v médiu prostém séra (SF-900II Gibco BRL) obsahujícím roztok IX antibiotika a antimykotika (Gibco BRL) a 25 mg/1 gentamycinu (Gibro-BRL). Přidá se Pluronik F-68 jako povrchově aktivní činidlo do konečné koncentrace 1 g/1. Před infikováním se kultury (4 1) ponechají nejméně tři dny v bioreaktoru (Artisan Cell Station Systém). Buňky se nechají růst při teplotě 27 °C v plynu obsahujícím 50 % rozpuštěného kyslíku při proudění plynu iychlostí 80 ml/min (ovzdušnění na rozprašovacím prstenci). K ovzdušnění sloužil námořní ventilátor s počtem otáček 100/min. Buňky se shromáždí ve střední logaritmické růstové fázi (2xl06 buněk/ml), zkoncentrují se odstředěním a infikují se 5 jednotkami tvořícími destičky receptorových těles vTL2-Fc na buňku. Buňky se inokulum se vnesou do 400 ml čerstvého média a virus se adsorbuje dvě hodiny při teplotě 27 °C v odstředivkové zkumavce. Kultury se resuspenduje na konečný objem 8 1 čerstvým médiem prostým séra a buňky se inkubují v bioreaktoru ze shora popsaných podmínek.
Po 72 hodinách od infikování se kultivační médium od buněk SF-21AE, infikovaných v TL2-FC, shromáždí odstředěním (500x g, 10 minut). Hodnota pH buněčných supematantů se upraví na 8 hydroxidem sodným. Přidá se EDTA do konečné koncentrace 10 mM a hodnota pH supematantu se znovu upraví na 8. Supematanty se zfiltrují (0,45 pm Milipore) a vnesou se na sloupec proteinu A separosy 4 nebo HiTrap proteinu A (rychle tekutý protein A separosy 4 nebo HiTrap protein A, obojí obchodní produkt společnosti Pharmacia). Sloupec se promývá PBS obsahujícím 0,5M chloridu sodného až do klesnutí adsorbance při 280 nm na základní linii. Sloupec se promyje PBS a eluuje při 280 nm na základní linii. Sloupec se promyje PBS a eluuje se 0,5M kyselinou octovou. Frakce kolony se okamžitě neutralizují eluováním do zkumavek obsahujících 1M Tris, hodnota pH 9. Píkové frakce, obsahující TL2-FC se zředí a dialyzují se proti PBS.
Příklad 13
Exprese TIE-1, TIE-2, TLI a TL2 v karcinomu ledvinových buněk
Pokusy hybridizace in šitu byly provedeny na lidské tkáni rakovinových nádorových buněk pomocí sond cDNA TIE-1, TIE-2, TLI a TL2. Exprese TIE-1, TIE-2, TLI a TL2 byly všechny přeregulovány v cévním řečišti nádoru. Ukázalo se, že ligandová exprese je umístěna buď na cévních endoteliových buňkách (TL2), nebo v jejich těsné blízkosti vmesenchymu (TLI). Je patrno, že VEGF je dramaticky přeregulován v této nádorové tkáni (Brown a kol. Am. J. Pathol. 143, str. 1255 až 1262, 1993).
Příklad 14
Exprese TIE-1, TIE-2, TLI a TL2 při hojení ran
Byly provedeny pokusy in šitu na průřezových proužcích tkáně získané z modelu krysích řezných ran pomocí sond cDNA TIE-1,TIE-2, TLI a TL2. Model hojení ran zahrnuje přitisknutí malé korkové vývrtky ke kůži krysy a odejmutí malého válcového vzorku kůže. Když začne hojení na spodině rány, odebere se svislý proužek tkáně a použije se ho k hybridizaci in šitu. V testovaném
-30CZ 295371 B6 vzorku se jeví TLI a TL2 mírně přeregulované čtyři dny po poranění. Na rozdíl k mírně přeregulované expresi TLI a TL2 v této tkáni, je dramaticky přeregulována exprese VEGF, která může předcházet expresi TLI a TL2.
Příklad 15
Exprese ligandů v játrech a v brzlíku myšího zárodku
Provedla se reverzní transkripce PCR (RT-PCR) na játrech E14,5 myšího zárodku a na brzlíku El7,5 myšího zárodku. Elektroforéza agarového gelu produktů RT-PCR ukázala, že v myších zárodečných játrech je TIE-2 ligand 1 (TLI) RNA obohacen v podpůrné vazivové oblasti, chybí však v hematopoietických prekurzorových buňkách c-kiťTERl 19. V téže tkání je TIE-2 ligand 2 (TL2) RNA obohacen ve vazivových buňkách, chybí však v hematopoietických prekurzorových buňkách (obr. 13). V myším zárodečném brzlíku je TL2 obohacen ve vazivových buňkách (obr. 14).
Příklad 16
Systém TIE receptor/ligand v angiogenezi
Ačkoliv se jeví, že ligandový systém TIE-2/TIE má významnou úlohu v biologii endoteliových buněk, nemá významnou aktivní úlohu v počátečních až středních stadiích tvorby cév (například proliferace angioblastových nebo endoteliových buněk a jejich migrace, tvorba kanálků a další počáteční děje ve vytváření cév). Na rozdíl od receptorů a faktorů, o kterých je známo, že zprostředkují tyto děje ve vývoji cév, naznačuje dočasný pozdější obrazec exprese TIE-2 a TLI v průběhu tvoření cév, že tento systém má odlišnou úlohu v pozdějších stadiích vývoje cév, včetně strukturní a funkční odlišnosti a stabilizace krevních cév. Obrazec exprese TIE-2 TLI je také konzistentní s pokračující úlohou v uchování strukturální integrity a/nebo fyziologické charakteristiky ustálené vaskulatury.
Zdá se, že ligand 2 (TL2) je konkurenčním inhibitorem TLI. Prostočasová charakteristika exprese TL2 naznačuje, že tato samotná inhibiční molekula může mít několikanásobnou úlohu závislou na kontextu, potřebnou k příslušnému vývoji nebo přemodelování (například destabilizaci/dediferenciaci zralých endoteliových buněk umožňujících tvoření nových cév ze stávající vaskulatury, inhibici vytváření nevhodných krevních cév a regresi/involuci zralých krevních cév). Na obr. 15 je schematicky znázorněna hypotetická úloha ligandů TIE-2/TIE při angiogenezi. Na tomto obr. je TLI vyznačena tečkou (.), TL2 hvězdou (x), TIE-2 je vyznačena (T), VEGF závorkou ([]) a flk-1 (receptor VEGF) je znázorněna (y).
Příklad 17
Exprese ligandů v ženském reprodukčním systému: exprese ve vaječníku
Předběžné poznatky z pokusů zkoumajících expresi TIE receptorů a ligandů v ženském reprodukčním systému jsou konzistentní s hypotézou o úloze TLI v neovaskularizaci, která časově následuje po VEGF. Obrazec exprese TL2 také souhlasí s antagonismem působení TLI a se specifickou úlohou v cévní regresi. K ověření může být zkoumána exprese relevantních mRNA následující po experimentální indukci vývoje folikula a žlutého tělíska, takže jejich časový poměr k různým aspektům systému neovascularizace/vaskulámí regrese může být jasněji definován (například ve spojení s barvením endoteliových buněk cévních výplní). Angiogeneze, spojená s vývojem folikula a s tvořením žlutého tělíska ve vaječnících dospělých krysích samic nebo sledování indukované ovulace v předpubertálních zvířatech se sledovala pomocí hybridizace in
-31 CZ 295371 B6 šitu. Obr. 16 obsahuje snímky in šitu hybridizačních řezů ukazující časový obrazec exprese TIE2, TLI, TL2 a VEGF během ovariálního cyklu [Sloupec 1: časný předovulační folikul, sloupec 2: předovulační folikul, sloupec 3: časné žluté tělísko a sloupec 4: atretický folikul, řádek A: světlé pole, řádek B: VRGF, řádek C: TL2, řádek D: TLI a řádek E receptor TIE-2], Tyto studie ukázaly, že VEGE, TLI a TL2 jsou exprimovány časově a prostorově koordinovaným způsobem vzhledem k vývoji a regresi vaskulatury ve vaječníku, specificky s ohledem na ustavení cévního systému, který je generován v průběhu konverze vaječníkového folikula na žluté tělísko (CL).
Je možno konstatovat, že exprese VEGF se zvětšuje ve vrstvě folikulámích granulí před vaskularizací během procesu vývoje žlutého tělíska. V průběhu procesu vytváření CL se vyskytují nejvyšší hladiny VEGF uprostřed vyvíjejícího se CL v sousedství vývoje buněk žlutého tělíska, které nebyly dosud vaskularizovány. Hladiny VEGF zůstávají středně vysoké a jsou difuzně rozděleny ve vyvinutém CL. Na rozdíl od toho, vykytuje se patrná zlepšená exprese TIE-2 ligandu pouze později v procesu vytváření CL, po ustavení primárního vaskulámího plexu. Později je v celém CL patrná exprese TLI, kdy bylo ustaveno definitivní kapilární síťoví CL.
TL2 vykazuje značně složitější obrazec exprese než VEGF nebo TLI. Při vývoji CL je TL2 exprimován při nejvyšších úrovních na čele vyvíjejícího se kapilárního plexu mezi centrální vaskulámí oblastí CL, kde je exprese VEGF nejvyšší a nejvíce obvodová část CL, kde exprese TLI převládá a kde proces vývoje žlutého tělíska je ukončena a vaskulámí systém je nejzralejší. Zdá se, že TL2 je také exprimován ve vysokých hladinách ve folikulámí vrstvě velkých folikulů, které prodělávají atresii. Zatímco je TLI také patrná v atretických folikulech, VEGF není exprimována.
Shora popsaný model exprese je nejkonzistnější s úlohou VEGF v iniciaci angiogeneze, s TLI působícím v tomto procesu později - například při modelování a/nebo stabilizaci definitivního cévního síťoví. Na rozdíl od toho je TL2 obsažená jako v oblastech aktivní expanze nově se tvořícího cévního síťoví (během tvoření CL), tak v oblastech, které selhávají ve vytváření nové vaskulatury a vaskulámí regrese převládá (atretické folikuly). To naznačuje dynamičtější a komplexnější úlohu pro TL2, možná zahrnující destabilizaci stávající vaskulatury (nutné pro regresi) nebo vývoj vaskulatury (nutné pro dynamické formování nově se tvořících cév).
Příklad 18
Test vazby receptorového tělesa a test ligandové vazby a kopetice
Byl vyvinut kvantitativní test buněk prosté vazby ve dvou alternativních podobách k detekci buď vazby TIE-2 receptorové látky, nebo ligandové vazby a konkurence. Ve verzi testu vazby receptorové látky se ligandy TIE-2 (vyčištěné nebo částečně vyčištěné; buď TLI, nebo TL2) nanesou na destičku ELISA. Přidá se receptorová látka v různých koncentracích, která se váže na imobilizovaný ligand způsobem závislým na dávce. Po dvou hodinách se receptorová látka odplaví, množství vázané na destičku se reportuje pomocí specifické anti-lidské Fc protilátky, která je značená alkalickou fosfatázou. Přebytek reportérové protilátky se odplaví, načež se vyvolá reakce AP pomocí barevného substrátu. Test se vyhodnocuje spektrofotometrem. Obr. 19 ukazuje typickou křivku vazby TIE-2-lgG. Testu bylo použito k vyhodnocení integrity TIE-2lgG. Testu bylo použito k vyhodnocení integrity TIE-2-lgG po injektování do krys a myší. Testu může být použito v této podobě jako testu ligandové konkurence, při které čištěné nebo částečně vyčištěné TIE ligandy konkurují s imobilizovaným ligandem pro těleso receptoru. Ve verzi ligandové vazby nebo konkurenční verzi vazebního testu se destička ELISA povlékne TIE-2 ektodoménou. Fragmenty Fc-značené domény podobné fibrinogenu TIE ligandů (TLI fFc a TL2-fFc) se vážou na ektodoménu a mohou být detekovány pomocí stejné antihumánní Fc protilátky, jak shora popsáno. Na obr. 20 je příklad vazby Tll-fFc na ektodoménu TIE-2. Této verze testu může být také použito ke kvantitativnímu vyhodnocení hodnot TLl-fFc v séru nebo
-32CZ 295371 B6 v jiných vzorcích. Pokud neznačený ligand (opět buď vyčištěný, nebo nevyčištěný) je přidán současně jako Tll-fFc, pak nastane konkurence mezi značeným ligandovým fragmentem a ligandem v plné délce. Ligand v plné délce může vytěsnit Fc-značený fragment a vytvoří se konkurenční křivka.
Příklad 19
Jako reportéra buněčné linie pro aktivitu TIE ligandu může být použito buněčné linie EA.hy926
EA.hy926 je buněčná hybridní linie, která se ustavila fúzí HUVEC s buněčnou linií odvozenou z karcinomu lidských plic A549 (Edgell a kol., Proč. Nati. Acad. Sci (USA) 80, str. 3734 až 3737, 1983). Zjistilo se, že buď EA.hy926 exprimují významné množství proteinu TIE-2 receptoru s nízkými bazálními úrovněmi fosfotyrozinu. Hustota, při které jsou buňky EA.hy926 pasažovány před svým použitím pro receptorové testy, stejně jako jejich stupeň slinutí v době testu, může ovlivnit receptorovou hojnost a relativní indukovatelnost v odezvě na zpracování ligandem. Přijetím následujících režimů pro růst těchto buněk může být linie buněk EA.hy926 použito jako závislého systému pro test aktivit ligandu TIE-2.
Buňky EA.hy926 se nasadí v množství l,5x 106 buněk do baněk T-75 (Falconware) a každý druhý den se jim přidají živiny Dulbeco MEM obsahující vysoké množství glukózy, 10 % zárodečného hovězího séra, L-glutamin, penicillin-streptomycin a lx hypoxanthin/aminopterin/thymidin (HAT, Gibco/BRL). Po třech až čtyřech dnech růstu se buňky ještě jednou přemístí do baňky T-75 v množství l,5xl06 buněk a kultivují se po dobu dalších tří až čtyř dní. K fosfory lačním testům se buňky upraví, jak shora uvedeno, vyhladoví se na sérum náhradou kultivačního média DMEM s vysokou glukózou a inkubují se dvě až tři hodiny při teplotě 37 °C. Toto médium se z baňky odsaje a do baňky se přidají vzorky kondiciovaného média nebo vyčištěného ligandu v celkovém množství 1,5 ml, načež následuje inkubace 5 minut při teplotě 37 °C. Baňky se z inkubátoru vyjmou a umístí se na vrstvu ledu. Médium se odstraní a nahradí se 1,25 ml lyzového pufru obsahujícího 1 % nonidet P-40, 0,5 % deoxycholátu sodného, 0,1 % SDS ve 20 mM Tris, hodnota pH 7,6, 150 mM chloridu sodného, 50 mM fluoridu sodného, 1 mM orthovanadátu sodného, 5 mM benzamidinu a 1 mM EDTA obsahující inhibitory proteázy PMSF, aprotidin a leupeptin. Po 10 minutách na ledu k rozpuštění membrán, se destičky seškrábou a buněčné lyzáty se vyčeří mikroodstředěním vrcholovou rychlostí 10 minut při teplotě 4 °C. TIE-2 receptor se imunoprecipituje zvyčeřeného supematantu inkubací v chladu s antiTIE-2 polyklonálním antisérem a s protein G-konjugovanými kuličkami sefarosy. Kuličky se promyjí třikrát studeným lyzovým pufrem a vaří se 5 minut v Laemliho vzorkovém pufru, který byl pak vylit na 7,5% SDS-polyakrylamidové gely. Rozpuštěné proteiny se elektrotransferují na membránu PVDF (Lambia-P) a pak se podrobí analýze Western blot za použití anti-fosfotyrozinové protilátky a reakčního činidla ECL. Následující porovnání celkových hladin proteinu TIE-2 na těchže blotech se provede stripováním anti-fosfotyrozinové protilátky a reinkubací s polyklonálním antisérem specifickým pro ektodoménu TIE-2.
Příklad 20
Izolace a sekvencování klonu cDNA o plné délce kódujícího savčí TIE ligand-3
TIE ligand-3 (TL3) se klonuje zgenomické knihovny myšího BAC (Research Genetetics) hybridizací knihovních duplikátů buď myší sondy TLI, nebo myší sondy TL2 odpovídající celé kódovací sekvenci těchto genů. Každá kopie knihovny se hybridizuje pomocí fosfátového pufru přes noc při teplotě 55 °C. Po hybridizací se filtry promyjí pomocí 2xSSC, 0,1% SDS při teplotě 60 °C, načež následuje expozice filtrů na rentgenový film. Identifikují se silné hybridizační signály odpovídající myšímu TLI a myšímu TL2. Kromě toho se identifikují signály, které slabě hybridizují jak myší TLI, tak myší TL2. DNA odpovídající těmto klonům se vyčistí, pak digerují
-33CZ 295371 B6 s restrikčními enzymy a dva fragmenty, které hybridizovaly na původní sondy se subklonují na bakteriální plazmid a sekvencují se. Sekvence plazmidu obsahuje dva exony s homologií jak myšího TLI, tak myšího TL2. Primerů specifických pro tyto sekvence se použije jako primerů PCR k identifikaci tkání obsahujících transkripce odpovídající TL3. Svazek PCR odpovídající TL3 byl identifikován v knihovně cDNA myší dělohy v lambda gt—11 (Clontech Laboratories, lne. Palo Alto, CA).
Destičky se povléknou 1,25x106/20x20 cm a pořídí se replikové filtry standardním způsobem (Sambrook a kol. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání, str. 8 až 46, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York). Duplikátní filtry se sejmou při „normálním“ řádkování (2 x SSC, 65 °C) s 200 bp PCR radioaktivní sondou myší sekvence TL3. Hybridizace se provádí při 65 °C v roztoku obsahujícím 0,5 mg/ml DNA lososího spermatu. Filtry se promyjí 2x SSC při teplotě 65 °C a exponují se 6 hodin na rentgenový film. Zachytí se dva pozitivní klony, které hybridizují v duplikátu. Digesce EcoRI fágu DNA, získaného z těchto klonů, indikuje dva nezávislé klony s vloženými rozměry přibližně 1,2 kb a přibližně 2,2 kb. Vložka
2,2 kb EcoRI se subklonuje do místa EcoRI pBluescriptu KS (Stratagene). Sekvenční analýza ukázala, že delšímu klonu chyběl iniciátor methioninu a signál peptidu ale jinak zakódoval sondu homologicky k jak myšímu TLI, tak k myšímu TL2.
Pak byly syntetizovány dva primery PCR specifické pro TL3
US2: cctctgggctcgccagtttgttagg
US1: ccagctggcagatatcagg
Pomocí expresních knihoven, odvozených z myších buněčných linií C2C12ras a MG87, byly provedeny následující reakce PCR. V primární reakci PCR bylo použito ve spojení s oligy specifickými pro vektor k umožnění zesílení v každé orientaci. PCR byl v celkovém objemu 100 ml používající 35 cyklů 94 °C, 1 min; 42 °C nebo 48 °C na 1 min, 72 °C, 1 min. Sekundární reakce pCR zahrnovaly sekundární specifický primer, US1, který je obsažen v primárním produktu PCR, ve spojení se stejným oligo vektorem. Sekundární reakce činily 30 cyklů pomocí stejných teplot a časů jako shora uvedeno. Produkty PCF byly gelově izolovány a podrobeny sekvenční analýze. Na základě sekvencí získaných z celkem čtyř nezávislých reakcí PCR, používajících dvou různých knihoven cDNA, byl odvozen konec 5' sekvence TL3. Northem analýza ukázala střední až nízké hodnoty myšího transkriptu LT3 a myší placentě. Exprese myšího TL3 sestávala z transkriptu přibližně 3kb. Kódovací sekvence TL3 v plné délce je na obr. 21.
Myší sekvence TL3 je pak možno použít k získání lidského klonu obsahujícího sekvenci lidské TL3 hybridizací buď lidské genomové knihovny, nebo cDNA se sondou odpovídající myšímu TL3, jak bylo shora popsáno například v příkladu 8.
Příklad 21
Izolace genomového klonu v plné délce kódujícího lidský TIE ligand-4
Z myší BAC genomové knihovny (BAC HUMAN (II), Genome Systems lne.) byl klonován ligand-4 (TL4) hybridizací duplikátové knihovny buď s lidskou radioaktivní sondou TLI k úplné sekvenci TLI kódující fibrinogen (nukleotidy 1153 až 1806 z obr. 4), nebo z myší radioaktivní sondou TL3 odpovídající segmentu 186 nukleotidů z fibrinogenní oblasti myšího TL3 (nukleotidy 1307 až 1492 z obr. 21). Každá sonda se značí pomocí přesných oligonukleotidů a standardních podmínek PCR s výjimkou náhrady dCTP P32dCTP. Směs PCR se nechá procházet gelovým filtračním sloupcem k oddělení sondy od volného P32dCTP. Každá kopie knihovny se hybridizuje pomocí fosfátového pufru a radioaktivní sondou přes noc při teplotě 55 °C za použití standardních hybridizačních podmínek. Po hybridizací se filtry promyjí 2x SSC,
-34CZ 295371 B6
0,1 % SDS při teplotě 55 °C následované expozicí na rentgenový film. Pozorují se silné hybridizační signály odpovídající lidské TLI. Kromě toho se identifikují signály, jež slabě hybridizují jak lidský TLI, tak myší TL3. DNA, odpovídající těmto klonům, se čistí pomocí standardních postupů, provádí se digesce s restrikčními enzymy a jeden fragment, který hybridizoval k původním sondám, byl subklonován do bakteriálního plazmidu a sekvencován. Sekvence fragmentů obsahovala jeden exon s homologií jak k lidskému TLI, tak k myšímu TL3 a k dalším členům rodiny ligandů TIE. Primerů specifických pro tyto sekvence může být použito jako primerů PCR k identifikaci tkání obsahujících transkripci odpovídající TL4.
Kompletní sekvence lidského TL4 může být získána sekvencováním plného klonu BAC, obsaženého v uložených bakteriálních buňkách. Exony mohou být identifikovány homologií ke známým členům rodiny ligandů TIE, jak jsou TLI, TL2 a TL3. Úplná kódovací sekvence TL4 může pak být určena spojením dohromady exonů z genomového klonu TL4, což opět může být použito k vytvoření proteinu TL4. Alternativně mohou být exony použity jako sondy k získání plné délky klonu cDNA, kterého může pak být použito k vytvoření proteinu TL4. Exony mohou být také identifikovány ze sekvence klonů BAC homologií k proteinovým doménám, jako jsou fibrinogenní domény, smyčky smyčkových domén, nebo proteinové signály, jako jsou signály peptidových sekvencí. Chybějící exony z klonu BAC mohou být získány identifikací přilehlých klonů BAC, například pomocí konců uloženého klonu BAC jako sondy ke skrínování lidské genomové knihovny, jako je jedna z nich zda použitá pomocí exonové sekvence obsažená v klonu BAC ke snímání knihovny cDNA, nebo provedením buď postupu 5', nebo 3' race za použití oligonukleotidových primerů, založených na sekvencích exonu TL4.
Identifikace dalších členů čeledi ligandu TIE
Nových sekvencí ligandu 4 TIE může být použito k racionálnímu pátrání po dalších členech čeledi ligandů TIE pomocí přístupu, který využívá výhod existence konzervovaných segmentů silné homologie známých členů čeledi. Například seřazení sekvencí aminokyselin ligandů TIE ukazuje několik oblastí konzervované sekvence (viz boxové oblasti na obr. 22). Degenerovaných oligonukleotidů, v podstatě založených na těchto boxech, v kombinaci s buď dříve známými segmenty, nebo novými homologiemi ligandů TIE může být použito k identifikování nových ligandů TIE.
Výše konzervovaných oblastí mezi TLI, TL2 a TL3 může být použito ke konstrukci degenerovaných oligonukleotidových primerů, ve kterých mohou být generovány první rekce pCR použitím cDNA. Matrice cDNA mohou být generovány reverzní transkripcí tkání RNA použitím oligo d(T) nebo jiných příslušných primerů. Podíly reakční směsi PCR mohou pak být podrobeny elektroforéze na agarovém gelu. Výsledné zesílené fragmenty DNA mohou být klonovány začleněním do plazmidů, sekvencovány a sekvence DNA porovnány se sekvencemi všech známých ligandů TIE.
Zesílené fragmenty, vybrané podle velikosti, z těchto reakcí PCR mohou být klonovány do plazmidů, zavedeny do E. coli elektroporací a transformanty mohou být naneseny na selektivní agar. Kolonie bakterií z transformace PCR mohou být analyzovány sekvencováním plazmidových DNA, které jsou vyčištěny standardními plazmidovými postupy.
Klonovaných fragmentů, obsahujících segment nového ligandu TIE, může být použito jako hybridizačních sond k získání klonů cDNA o plné délce z knihovny cDNA. Například může být použito genomové lidské sekvence TL4 k získání lidského klonu cDNA obsahujícího úplnou kódovací sekvenci lidského TL4 hybridizací lidské knihovny cDNA sondou odpovídající lidské TL4, jak bylo shora popsáno.
-35 CZ 295371 B6
Příklad 22
Klonování úplné kódovací sekvence hTL4
Kódovací sekvence 5' a 3' z genomového lidského klonu TL-4, kódující lidský ligand-4 TIE (hTL-4 ATCC Acession No. 98095), byla získána restrikcí enzymové digesce Southem blotting a hybridizací klonu hTL-4 ke kódování sekvencí z myší TL-3 následované subklonováním a sekvencováním hybridizačních fragmentů. Kódovací sekvence, odpovídající N-koncovým a C-koncovým aminokyselinám hTL4, bylo použito ke konstrukci primerů PCR (znázorněno dále), kterým se pak použilo k zesílení PCR TL4 z lidské vaječníkové cDNA. Pásmo PCR se identifikuje jako odpovídající lidské TL4 sekvencováním DNA pomocí sekvenceru ABI 373A DNA a Taq Dideoxy Terminátor Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, lne., Foster City, CA), Pásmo PCR se subklonuje do vektoru pCR-skriptu a několik plazmidových klonů se analyzuje sekvencováním. Úplná kódovací sekvence lidského TL4 se provede jak patrno na obr. 23. Podle jiného provedení vynálezu se zamění nukleotid v poloze 569 z A do G, což vede ke změně aminokyselin z Q na R.
Primery PCR, použité je shora, popsaného se označují takto:
hTL4atg 5- gcatgctattcgagccacc ATGCTCTCCCAGCTAGCCATGCTGCAG-3' hTL4not 5'- gtgtcgacgcggccgctctagatcagacTTAGATGTCCAAAGGCCGTATCATCAT-3'.
Malá písmena vyznačují „tail“ sekvence přidané k usnadnění klonování zesílených fragmentů PCR.
Příklad 23
Konstrukce a charakterizace modifikovaných ligandů TIE
K získání názoru na počet jejich pozorovaných vlastností byla provedena genetická analýza TIE-2 ligandu 1 a TIE-2 ligandu 2 (TLI a TL2). Ačkoli TLI a TL2 mají podobnou strukturální homologii, vykazující rozdílné fyzikální a biologické vlastnosti. Nejprominentnější význak, který rozlišuje oba ligandy, je skutečnost, že ačkoli oba vážou receptor TIE-2, je TLI agonist a TL2 antagonist. Za neredukujících elektroforetických podmínek vykazují oba proteiny kovalentní, multimerní struktury. TLI je produkován jako směs disulfídy zesítěných multimerů, primárních trimerů a druhů vyšších řádu, bez jakýchkoli dimemích druhů. Avšak TL2 se produkuje téměř výhradně jako dimemí druhy. Také, ačkoli TL2 je produkován dobře ve většině expresních systémů. TLI je exprimován zřídka a je obtížné ho vyrobit ve velkých množstvích. Konec výrobní a čisticí podmínky se také jeví jako určující TLI k inaktivaci proteolytického štěpení v místě blízkém aminovému konci.
Ke studiu těchto rozdílů bylo zkonstruováno několik modifikovaných ligandů následujícím způsobem:
23.1 Cysteinová substituce - Výzkum faktorů, které by mohly přispívat k různým fyzikálním a biologickým vlastnostem obou molekul, ukázal přítomnost v TLI cysteinovém zbytku (CYS 265 na obr. 4, CYS 245 na obr. 17) procházející fibrinu podobnou doménu v TLI, nevyskytující se však v TL2 - nebyly tedy odpovídající cysteinové zbytky v TL2. Zbytek cysteinu 265 v TLI je zakódován TGC a je umístěn u nukleotidů 1102 až 1104 (obr. 4) při přibližném spojení mezi stočenou smyčkou a fibrinu podobnou oblastí. Jelikož cysteinové zbytky jsou obvykle zahrnovány do disulfídem vázaných formací, jejichž přítomnost může přispívat jak k terciární struktuře, tak k biologickým vlastnostem molekuly, mělo se zato, že snad přítomnost zbytku CYS265 v TLI může být alespoň částečně zodpovědná za různé vlastnosti obou molekul.
-36CZ 295371 B6
K potvrzení této hypotézy byl zkonstruován expresní plazmid, který obsahoval mutaci v TLI, ve které CYS (zbytek 265 na obr. 4, zbytek 245 na obr. 17) byl nahražen aminokyselinou (serinem), která nevytváří disulfidické vazby. Vedle tohoto TLl/CYS-mutantu byl zkonstruován druhý expresní plazmid, který mutoval přibližně odpovídající polohu v TL2 (Met247 na obr. 17), takže tento zbytek byl nyní cystein. Oba nemutovaný a mutovaný expresní plazmid TLI a TL2 byly přechodně transfektovány do buněk COS7, buněčné supematanty obsahující rekombinantní proteiny se shromáždily a vzorky se podrobily jak redukční, tak neredukční elektroforese SDS/PAGE a následném Western blottingu.
Obr. 18 ukazuje Western bloty za neredukčních podmínek jak mutovaného, tak nemutovaného proteinu TLI a TL2, což ukazuje, že mutant TL1/CYS’ probíhá jako dimer velmi podobně TL2 aTL2/CYS+ je schopen tvořit trimer, stejně jako multimery vyššího řádu podobně TLI. Když byly dva mutantní proteiny testovány z hlediska schopnosti indukovat fosforylaci v expresních buňkách TIE-2, byl mutant TL1/CYS’ schopen aktivovat receptor TIE-2 zatímco mutans TL2/CYS+ nikoli.
Jestliže tedy cysteinový zbytek (zbytek 265 na obr. 4, zbytek 245 na obr. 17). TLI byl geneticky změněn na serin, zjistilo se, že kovalentní struktura TLI se stala podobnou struktuře TL2, tedy primárně dimemí. Modifikovaná molekula TLI se stále chovala jako agonist, tudíž trimemí a/nebo multimerní struktura vyššího řádu nebyla určujícím faktorem dávajícím TLI schopnost aktivace. Ačkoli odstraňování cystainu vytvářelo molekulu s více žádoucími vlastnostmi, nezlepšilo produkční úroveň TLI.
23.2 Dělení domén - Nukleotidové sekvence kódující TLI a TL2 mají genetickou strukturu, která může být rozdělena do tří domén na základě sekvencí aminokyselin zralých proteinů. Posledních přibližně 215 zbytků aminokyselin každého zralého proteinu obsahuje šest cysteinů a tvoří velkou podobnost doméně fíbrinogenu. Tento region byl tedy přejmenován na „fibrinogenu podobná“ doména neboli „F-doména“. Centrální oblast zralého proteinu, obsahující přibližně 205 zbytků, měla velkou pravděpodobnost k předpokladu „smyčkově stočené“ struktury a byla nazvána doména „coiled-coil“ neboli „C-doména“. Aminozakončení přibližně 55 zbytků zralých proteinů obsahovalo dva cysteiny a s nízkou pravděpodobností mělo smyčkově stočenou strukturu. Tato oblast byla pojmenována „N-zakončení“ nebo „N-doména“. Zde popsané modifikované ligandy jsou označovány použitým názvoslovím, kde N = N-koncová doména, C = smyčkově stočená doména, F = fíbrinogenu podobná doména a číslice 1 a 2 se týkají TLI a TL2. Znamená tedy například IN N-koncovou doménu z TLI a 2F fíbrinogenu podobnou doménu TL2.
K vyzkoušení, zda fíbrinogenu podobná doména (F-doména) ligandů TIE-2 obsahuje TIE-2 aktivační aktivitu, se zkonstruovaly expresní plazmidy které vypustily smyčkově stočenou a Nkoncovou doménu a ponechaly pouze část sekvence DNA kódující F-doménu (pro TLI, začínající na obr. 4 přibližně u nukleotidu 1159 zbytku aminokyseliny ARG284; pro TL2 odpovídající přibližně nukleotidu 1200 na obr. 6, zbytku aminokyseliny 282). Tento mutantní konstrukt byl pak transientně transfektován do buněk COS. Získal se supematant, obsahující rekombinantní protein. Mutant TLl/F-domény byl testován z hlediska schopnost vázat receptor TIE-2. Výsledky ukázaly, že jako monomer nebyl mutant TLl/F-domény schopen vázat TIE-2 ve zjistitelné míře.
Jestliže však byl monomer TLl/F-domény značen myc a následně seskupen s protilátkou zaměřenou proti myc tag, vykázal zjistitelnou vazbu TIE-2. Avšak protilátkový seskupený mutant TLl/F-domény nebyl schopen indukovat fosforylaci v buněčné linii exprimující TIE-2.
Zjistilo se tedy, že F-doména ligandů TIE-2 je zapletena do vazby receptoru, ale že zkomolení sestávající ze samotné F-domény není postačující k vazbě receptoru. To vyvolalo možnost, že doména smyčkově stočená zodpovídala za to, že několik domén podobných fíbrinogenu drželo
-37CZ 295371 B6 při sobě, což mohlo být potřebné pro receptorovou vazbu. Ve snaze o potvrzení této domněnky byla F-doména fúzována se sekcí Fc lidské protilátky lgGl. Jelikož Fc sekce dimerizuje na expresi savčími buňkami, napodobovaly tyto rekombinantní proteiny teoretickou konfigurací F-domén, kde nativní ligandy dimenzují. Tento konstrukt F-domény-Fc vázal, avšak nedokázal aktivovat receptor. Multimerace zřejmě způsobená jinými oblastmi ligandu je nutná k uschopnění ligandu vázat receptor TIE-2. Kromě toho musejí některé jiné faktory mimo F-doménu přispívat k fosforylaci receptoru.
Pak byly zkonstruovány mutanty, kterým chyběla fibrinu podobná doména a obsahovaly proto pouze N-koncovou doménu a doménu smyčkově stočenou. Nebyly schopné se vázat na receptor. K odsouzení úlohy N-koncové domény ve vázání receptoru a aktivaci, byly ligandy spleteny až na jejich C- a F-domény a značeny s FLAG tag a se N-zakončením, za vytváření konstruktů, nazývaných FLAG-1C1F a FLAG-2C2F. Ačkoli se tyto molekuly silně vybarvovaly v buňkách COS7 transfektované přechodně kexprimování receptoru TIE-2, selhaly ve výpovědi ve fosforylačním testu. N-Doména tudíž neobsahuje potřebný faktor k aktivaci receptoru, ačkoli, jako uzavřená infra, schopnost chimemích molekul 2N2C1F k aktivování receptoru ukazuje, že dokonce N-doména inaktivního ligandu může splňovat tuto úlohu.
Rozdíly v chování mezi myc-značenou F-doménou a Fc-značenou F-doménou, shora uvedené, naznačily, že ligandy TIE mohou být vázány pouze v dimemích nebo ve vyšších multimemích formách. Ve skutečnosti neredukční SDS-FÁGE ukázala, že ligandy TIE existují přirozeně v dimemích, vtrimemích a v multimemích formách. Skutečnost, že se FLAG-1C1F a FLAG2C2F mohou vázat na receptor TIE-2 bez dimerizace syntetickým zakončením (jako je Fc), zatímco F nemohou, naznačuje, že C-region je alespoň zčásti zodpovědný za agregaci F-domén.
23.3 Záměnné konstrukty (chiméry) - Zjistilo se, že úroveň produkce TLI v buňkách COS7 byla přibližně desetkrát nižší než produkce TL2. Proto se zkonstruovaly chiméry TLI a TL2 ve snaze vysvětlit tento rozdíl a také k dalšímu charakterizování aktivity agonistů TLI ve srovnání s aktivitou agonistů TL2.
Zkonstruovaly se čtyři chiméry, ve kterých jedna z N-koncových domén fibrinogenní domény byla vyměněna mezi TLI a TL2 a byly označeny pomocí shora popsaného názvosloví tak, že například 1N1C2F se týká chiméry mající N-zakončení a smyčkově stočené domény TLI, společně s fibrinogenu podobnou doménou z T2. Čtyři chimeiy byly konstruovány takto:
chiméra 1 - 1N1C2F chiméra 2 - 2N2C1F chiméra 3 - 1N2C2F chiméra 4 - 2N1C1F
Nukleotidy a sekvence aminokyselin chimér 1 až 4 jsou znázorněny na obr. 24 až 27.
Každá chiméra byla začleněna do separátního expresního vektoru pJFE14.
Chiméry byly pak transfektovány do buněk COS7, spolu s prázdným vektorem pJFE14, nativním TLI a nativním TL2 jako kontroly a supematanty kultur se shromáždily.
Ke zjištění, jak změna ovlivní míru exprese ligandů, byly na nitrocelulóze dot-blotována zředění 1:5 a 1:50 supernatantů COS7. Tři ligandy, které obsahovaly TLI N-doménu (tedy nativní TLI, 1N2C2F a 1N1C2F), byly pak sondovány s králičí protilátkou specifickou pro N-zakončení TLI. Tři ligandy, obsahující TL2 N-doménu (tedy nativní TL2, 2N1C1F a 2N2C1F), byly sondovány s králičí protilátkou specifickou pro N-zakončení TL2. Výsledky ukázaly, že buňky COS7 exprimovaly každou molekulu obsahující N-doménu TL2 při přibližně desetinásobku úrovně jakékoliv molekuly obsahující N-doménu TLI, nezávisle na úpravě zbytku proteinu. Dospělo se k závěru, že N-doména musí zásadně řídit úroveň exprese ligandu.
-38CZ 295371 B6
Další otázkou byla schopnost nebo neschopnost chimér aktivovat receptor TIE-2. Buňky EAhy926 byly porovnány se čtyřmi chimérami jakož také sTLl jako pozitivní kontrolou fosforylace a s TL2 nebo s prázdným pJFE14-transfektovaným COS7 buněčným supernatantem jako negativní kontrolou fosforylace. Buňky se lyžují a receptor TIE-2 se imunoprecipituje z buněčného lyzátu a prodělá SDS-PAGE. Vzorky byly Western blotovány a sondovány s antifosfotyrozinovou protilátkou k detekci jakéhokoli receptorů, který byl fosforylován. S překvapením pouze konstrukt obsahující TLI fíbrinu-podobnou doménu (2N1C1F a 2N2C1F) mohl fosforylovat receptor TIE-2.Tudíž, ačkoli N-koncová oblast TLI je potřebná k aktivaci, může být nahražena N-koncovou oblastí TL2, což znamená že informace určující, zda ligand je agonistem nebo antagonistem je aktuálně obsažena ve fíbrinogenu podobné doméně.
Zjistilo se tedy, že F-doména, vedle vázání TIE-2 receptorů je zodpovědná za fosfory lační aktivitu TLI. Dále, když TL2, což je jinak neaktivní molekula, byla změněna náhradou své F-domény F-doménou TLÍ, působila změněná TL2 jako agonist.
Konstrukt 2N1C1F byl však poněkud méně mocný. Signál, způsobený chimérou 2N1C1F, se jevil poněkud silnější než chimérou 2N2C1F, což vedlo k úvahám, že C-doména TLI, ačkoli není rozhodující pro fosforylaci, může zlepšit potenci TLI. Avšak, jelikož vzorky použité k testu fosforylace nebyly normalizovány ve smyslu koncentrace ligandu, bylo možné, že silnější fosforylační signál pouze indikoval přítomnost více ligandu. Fosforylační test se proto opakoval s různým množstvím ligandu ke zjištění, zda aktivní chiméry vyvolávaly rozdílné potence. Koncentrace ligandu v supematantech ligandových transfekcí COS7 byla zjištěna pomocí biosenzorové technologie BIAcore způsoby shora popsanými (T.N. Stitt a kol., Cell 80, str. 661 až 670, 1995). Technologie BIAcore měřila vazbovou aktivitu supematantu k TIE-2 receptorů v dohodnutých jednotkách nazývaných rezonanční jednotky (RU). Obecně byla pozorován velmi dobrý vztah mezi RU a koncentrací ligandu s aktivitou 400 RU, odpovídající přibližně 1 pg proteinu na ml supematantu. Vzorky se zředily na koncentrace 100 RU, 20 RU a5RU a fosforylační test se opakoval. Výsledky ukázaly, že chiméra 2N2C1F byla zřetelně mocnější než jak nativní TLI tak chiméra 1N1C2F při stejných koncentracích.
Jiným zajímavým význakem těchto výměnných konstruktů je jejich úroveň exprese. Každá ze čtyř chimér byla testována z hlediska úrovně produkce buněk COS, schopnost vázat TIE-2 a schopnost fosforylace TIE-2. Výsledky těchto pokusů ukázaly, že chiméry 1 a 3 byly produkovány v množství porovnatelném sTLl, zatímco chiméry 2 a 4 byly produkovány v množství porovnatelném s TL2. Vysoká úroveň produkce proteinu byla tudíž ve vztahu s N-koncovou doménou TL2. Kromě toho při testování na endoteliových buňkách EAhy926, byly chiméry 2 a 4 aktivní, zatímco chiméry 1 a 3 aktivní nebyly. Tato aktivita (fosforylace receptorů) je ve vztahu s fibrinogenu-podobnou doménou TLI. Chiméry 2 a 4 měly obě žádoucí vlastnosti vysoké produkční úrovně stejně jako agonistovou aktivitu.
23.4 Proteolyticky rezistentní konstrukty - Na základě poznatku, že frakce TLI preparátů byla často proteolyticky rozštěpena v blízkosti N-zakončení, se usoudilo, že argininový zbytek v poloze 49 zralého proteinu (obr. 17) byl kandidujícím místem štěpení, které mohlo být účastno na regulaci proteinové aktivity in vivo a náhrada argininu serinem (R49->S) mohl zvyšovat stabilitu proteinu, aniž nutně ovlivnila jeho aktivitu. Takový mutant TIL byl zkonstruován a zjistilo se, že je přibližně stejně aktivní jako nativní TLI, nevykazoval však odolnost proti proteolytickému štěpení.
23.5 Kombinační mutanty - Nejmocnější z chimemích konstruktů 2N1C1F, byl dodatečně změněn tak, že cystein zakódovaný nukleotidy 784 až 787, jak patrno na obr. 27, byl převeden na serin. Tato molekula (označená 2N1C1F (C246S)) byla dobře expresována, případně aktivována receptorem, byla odolná vůči proteolytickému štěpení a byla primárně dimemí, spíše než multimerní vyššího řádu. Zdálo se, že doména 2N udílí proteázovou odolnost molekule. Nakonec byla tato molekula změněna k eliminování potenciálně na proteázu citlivého místa zakódovaného nukleotidy 199 až 201, jak patrno z obr. 27, k získání molekuly (označené 2N1C1F
-39CZ 295371 B6 (R51-»S,C246->S)) u které se očekávalo, že bude aktivující, dobře exprimovaná, dimemí a vůči proteáze odolná.
Tabulka I shrnuje modifikované ligandové konstrukty TIE-2, které byly realizovány, a charakterizuje každý z nich z hlediska schopnosti vázat receptor TIE-2, schopnosti aktivovat receptor TIE-2, typu vytvořené struktury (na příklad monomer, dimer) a relativní produkční úrovně. Nemodifikovaný TLI (plný) a TL2 (čárovaný) jsou znázorněny se třemi doménami jako boxy. Čárkované boxy tedy indikují domény od TL2. Cystein, umístěný v poloze 245 zralého proteinu TLI, je označen „C“. Označení „X“ až „C“ znamená, že cysteinový zbytek byl substituován pro jinou aminokyselinu než například vmutantu TLI CYS~. Podobně „X“ až „R“ v posledním konstruktu znamená substituci pro zbytek Arg v poloze 49 zralého proteinu TLI. „C“ je obsažen v jednom modifikovaném TL2 konstruktu vykazujícím TL2 CYS+ mutant. Konstrukty mají Fc zakončení.
Na základě shora uvedeného je pracovníkům v oboru zřejmé, že další konstrukty jsou možné k vytvoření přídavných modifikovaných a chimemích TIE-2 ligandů s odměněnými vlastnostmi. Například se může vytvořit konstrukt obsahující N-zakončovací doménu a F-doménu TLI fúzovanou se sekcí Fc lidské protilátky IgGl. Tento konstrukt bude vázat a aktivovat TIE-2 receptor. Podobně se mohou vytvořit jiné konstrukty podle shora uvedených skutečností, přičemž tyto konstrukty spadají do rozsahu vynálezu.
23.6 Materiály a způsoby
Konstrukce chimér
Četné konstrukty se včleňují do pJFE14 vektoru, ve kterém je Xbal místo zaměněno za Ascl místo. Tento vektor se digeruje s Ascl a Notl za získání Ascl-NOtl řetězce. Fragmenty DNA pro chiméry se generují PCR za použití vhodných oligonukleotidů.
FLAG-1C1F a FLAG-2C2F inserty se subklonují do pMT21 vektorového řetězce, který se digeruje s ECoRi a NOtl. „CF“ úseky se získají prostřednictvím PCR a FLAG tag a předběžná trypsin signalizující sekvence se konstruuje napojením syntetických oligonukleotidů.
Transfekce
Všechny konstrukty se transfektují přechodně do COS7 buněk za použití buď DEAE-dextranu, nebo LipofectAMINU o sobě známými způsoby. Buněčné kultury se sklidí tři dny po transfekci aodstřeďují se při otáčkách 1000/min po dobu jedné minuty a supematanty se převedou do čistých zkumavek a uloží se při teplotě -20 °C.
Zabarvování FLAG-1C1F transfektovaného a FLAG-2C2F transfektovaných buněk
Šestidůlkové destičky COS7 buněk se transfektují přechodně TIE-2 receptorem. COS7 supernatant z různých ligandových transfekci se inkubuje na buňkách po dobu 30 minut, dvakrát se promyje fosfátem pufrovanou solankou (PBS) bez hořčíku nebo vápníku. Buňky se fixují v methanolu o teplotě -20 °C po dobu tří minut, promyjí se jedno PBS a inkubují se s anti FLAB M2 protilátkou (IBI, zředění 1:3000) v systému PBS/10 % hovězího telecího séra (BCS) po dobu 30 minut. Buňky se promyjí jedno PBS a inkubují se s kozí antimyší IgG alkalickou fosfatázovou (AP) konjugovanou protilátkou (Promega, 1:1000) v systému PBS/10 % BCS. Buňky se promyjí dvakrát PBS a inkubují se s fosfátovým substrátem, BCIP/NBT s lmM levamisolem.
Fosforylační test
Zředí se COS7 supematanty pro studii odezvy na dávku v supematantu COS7 buněk transfektovaných prázdným vektorem pJFE14. EA buňky, které normálně exprimují TIE-2
-40CZ 295371 B6 receptor, se vyhladoví po dobu více než dvou hodin v prostředí prostém séra a následně se působí vhodným COS supematantem po dobu 10 minut při teplotě 37 °C v prostředí 5% oxidu uhličitého. Buňky se propláchnou ledově chladným PBS a lyžují se 1% NP40 lyžovaným pufrem obsahujícím proteázové inhibitory (10pg/ml leupeptinu, 10pg/ml aprotininu, 1 mM PMSF), načež se provede imunoprecipitace s protilátkou specifickou pro TIE-2 receptor. Vzorky se podrobí imunoblot analýze za použití anti pTyr protilátek.
„Dot Blots”
Vzorky se nanášejí na nitrocelulózovou membránu, která se blokuje a sonduje vhodnými protilátkami.
23.7 Produkce chimemího TIE-2 ligandu z CHO a hmyzích buněk infikovaných Bacilovirem
Produkce viru
Gen pro chimemí ligand (označený 2N1C1F (C246S)) se zabuduje do baculovirového expresního plazmidu a rekombinuje se s virovou DNA ke generaci rekombinantního baculoviru, zesíleného a sklízeného způsoby popsanými v literatuře (D.R. O'Reily, L.K. Miller a V.A. Luckow, Baculovirus Exprimsion Vectors - A Laboratory Manual, 1992, New York, W.F. Freeman). SF21 hmyzí buňky (Spodoptera frugiperda) získané z invitrogenu se adaptují a expandují při teplotě 27 °C v séru prostém prostředí Gibco SF900 II. Neinfikované buňky se nechají růst do hustoty 1x600 buněk/ml. Hustota buněk se posuzuje počítáním viditelných buněk za použití hymacytometru. Virový zásobní roztok pro ligand se vnese do bioreaktoru při 0,01 až 0,1 PFU/buňka na začátku infekce. Infekční proces se nechá probíhat podobu tří až čtyř dnů za umožnění maximální virové replikace bez podstatnější lýze buněk. Buněčná suspenze se asepticky rozdělí do sterilních odstředivkových zkumavek a buňky se získají odstředěním (otáčky 1600/min, 30 minut) Supematant, prostý buněk, se shromáždí ve sterilních baňkách a uloží se při teplotě 4 °C za vyloučení světla až do dalšího použití.
Virový titr se stanoví povlakovou zkouškou, kterou popsali D.R. O'Reilly, L.K. Miller a V.A. Luckow. Způsob se provádí v 60 mm tkáňových kultivačních miskách, které se naočkují 1,5x106 buňkami. Přidává se sériové ředění virového zásobního roztoku na zachycení buňky a směs se inkubuje za protřepávání, aby se virus obsahoval na jednotlivých buňkách. Přidá se agarové překrytí a destičky se inkubují po dobu pěti dnů při teplotě 27 °C. Viditelné buňky se zabarvují neutrální červení za zviditelnění okrouhlých povlaků, které se počítají za získání virového titru vyjádřeného počtem povlaků vytvářejících jednotku na ml (PFU/ml).
Infekce buněk pro produkci proteinu
Neinfikované SF21 buňky se nechají růst na tkáňových kultivačních destičkách a přidá se vir obsahující chimemí ligandový gen v množství 1 až 10 pfu/buňka. Vir se nechává absorbovat po dobu 90 minut při teplotě 27 °C za mírného protřepávání a na buňky se nanese čerstvé množství Sf-900 II séra prostého prostředí. Nechá se růst tři dyn při teplotě 27 °C, kapaliny se shromáždí a ligand se stanovuje imunoblotingem.
CHO exprese TIE-2 ligandovými chimérami
TIE-2 ligandové chiméry se klonují do několika savčích buněčných expresních vektorů včetně (avšak bez záměru na jakémkoliv omezení) například pJFE, pcDNA3, pMT21, pED. Plazmidy se transfektují do CHO DG44 buněk (G. Urlaub a L.A. Chasin, Isolation of Chinese hamster cell mutants deficient in hydrofolate reductase activity, Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 77, str. 4216 až 4220, 1980; G. Urlaub, E. Kas, A.M. Carothers a L.S. Chasin, Deletion of diploid dihydrofolate locus from cultured mammalian cells, Cell, 33, str. 405 až 412, 1983) kalciumfosfátovým vysrážením nebo kationtovými liposovými. V případě vektorů postrádajících dhfr selektovatelné
-41 CZ 295371 B6 markéry se plazmid pSV2.dhfr kotransfektuje v 20% molámím poměru do plazmidu obsahujícího TIE ligandové chiméry. DHFR+ buňky se selektují růstem v selekčním prostředí (médium prosté nukleosidů a nukleotidů obsahující 10 % dialyzované zárodečného telecího séra) a klony se skrínují se zřetelem na produkci chimemích TIE ligandů imunoblotingem s TIE-2 receptorovou 5 látkou. Klony, exprimující žádaný protein, se podrobují opakovanému genovému zesílení za použití odstupňovaných koncentrací methotrexátu v selekčním prostředí. Identifikují se vysoce exprimující klony po genovém zesílení podobnými imunoblotingovými způsoby.
Buněčné linie, exprimující chimemí TIE ligandy, se kultivují v mnohovrstvách, v suspenzních ío buňkách, v protřepávaných baňkách a v bioreaktorech v selekčním prostředí nebo v prostředí prostém sekce a mohou se nechávat růst v prostředí prostém séra.
Následující tabulka I se týká mutační analýzy TIE ligandů. Ve sloupci I je vázání TIE-2, ve sloupci II aktivace TIE-2, ve sloupci III multimemí struktura a ve sloupci IV produkční úroveň. 15 „N.D. znamená nestanoveno, „higher order“ vyššího řádu, „LOW“ nízký „HIGH“ vysoký, „HIGH*“ nej vyšší produkce RU a ** nejmocnější aktivace.
-42CZ 295371 B6
Tabulka I
smyekovSfibriI’0' stoCené senové | 1 | 11 | 111 | IV | |
ml .„I....................±1--------1 | + | + | HGHER ORDER | LOW | |
tu | + | * | CC4ER | HGH | |
ΓΊ 53 1 | 4· | JDOffiR | LOW | ||
HGHEA Aercn νΛΙϊΙΛ··» | |||||
VA//////7777777A | + | * | HGH | ||
1.....f··— | « | N.D. | N.D, | LOW | |
W//7MM | • | N.D. | N.O. | HGH | |
L_______1 | * | * | MONOMER | HGH | |
tžžžZd | * | * | MONOMER | HGH | |
1 ...................1........ | Fc | ] + | DtMER | HGH | |
F® | 1 + | * | CtMER HGHER OROER HGHER OROER | HGH | |
1 1 «1 1 | fis | ] + | + | LOVÍ | |
777777777X7777/7 | F® | ] + | *· | LOW | |
««s-l 1 cl 1 | + | + | N.D. | LOW | |
f | * | N.O. | HGH | ||
flag -I č] | | + | * | H.D. | HGH | |
^í-W/////777777A | •h | * | N.D. | HGH | |
Π~......~~ ·Χ77777Λ | • | N.D. | LOW | ||
WS/Z/7///L·....... 1 | + | 4 | N.D. | HGH* | |
ΓΤ7////Ζ17////Ζ | + | 1» | N.O. | LOW | |
KT“ 3 1 | 4. | +** | N.D. | HGH | |
P/Τ' 5Τ ϊ | + | + | WER | HGH | |
4“ | + | N.O. | LOW |
-43CZ 295371 B6
Seznam sekvencí (1) Obecné informace
i) Přihlašovatel: Regeneron Pharmaceuticals, lne.
ii) Název vynálezu: Nové modifikované ligandy iii) Počet sekvencí: 28 iv) Adresy pro korespondenci
A. Adresát: Regeneron Pharmaceuticals, lne.
B. Ulice: 777 Old Saw Milí Road
C. Město: Tarratown
D. Stát: NY
E. Země: Sp. st. a.
F. ZIP: 10591
v) Forma pro počítač
A. Typ média: Disketa
B. Počítač: IBM Compatible
C. Operační systém: DOS
D. Software: FastSEQ Version 2,0 vi) Platné přihlašovací údaje
A. Číslo přihlášky: dosud neznámé
B. Datum podávání:
C. Klasifikace:
vii) Předchozí přihlašovací údaje
A. Číslo přihlášky: USSN 08/740,223
B. Datum dodání: 25. října 1996
C. Klasifikace:
vii) Předchozí přihlašovací údaje
A. Číslo přihlášky: USSN 60/022/999
B. Datum podání: 2. srpna 1996 viii) Informace o zástupci/zmocněnci
A. Jméno: Cobert, Robert J.
B. Registrační číslo: 36,108
C. Referenční/štítkové číslo: REG 333 ix) Telekomunikační informace
A. Telefon: 914-345-7400
B. Telefax: 914-345-7721
-44CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 1:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 2149 párů bází
B. Typ: nukleová kyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA ix) Charakteristika
A. jméno/khc: kódující sekvence
B. lokace: 310..1803
D. Jiné informace:
A. jméno/khc: lidský TIE-2 ligand 1
B. lokace: 1....2149
D. Jiné informace: od klonu λ gtlO kódující hite—2 ligand
-45 CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 1:
CAGCTGACTC GCTACTATGC AAAATTTTAA AACGCTTTCT CTAGTTTTAG GGCAGTACA i
AGGCAGGCTC AATAAATATC AATTTTAGAA TTGAGGGGGA AGGTCAGAAG TG ACA GTT íet Thr Val
CATGCTGAAC TCAAGTTTTA CAAAGCTAAC AAGAGTCAAA AAAGGAGCAA
GGTCACACAG ACGAAGAAAA AAATGGCTAG CAAACAAGCA GTTTTGCGAG
AGAGGAAACA ACATCATTGC TTTTCTATGA GTTTTACCTG AGGCACGGAA
ATAAATCTCA AGTGAAATAA TTCTTCTTCA AAATAAAGAA GGAGTGTGCT
TTC CIT TCC TTT GCT TTC CTC GCT GCC ATT CTG Phe Leu Ser Phe Ala Phe Leu Ala Ala Ile Leu S 10
120
180
240
300
351
ACT CAC | ATA GGG Ile Gly | TGC AGC Cys Ser 20 | AAT CAG CGC CGA AGT | CCA Pro | GAA AAC AGT GGG | 399 | ||||||||||
Thr 15 | His | Asn | Gin | Arg Arg Ser 25 | Glu Asn Ser | Gly 30 | ||||||||||
AGA | AGA | TAT | AAC | CGG | ATT | CAA | CAT | GGG | CAA | TGT | GCC | TAC | ACT | TTC | ATT | 447 |
Arg | Arg | Tyr | ASn | Arg 35 | Ile | Gin | His | Gly | Gin 40 | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe 45 | Ile | |
CTT | CCA | GAA | CAC | GAT | GGC | AAC | TGT | CGT | GAG | AGT | ACG | ACA | GAC | CAG | TAC | 495 |
Leu | Pro | Glu | His 50 | Asp | Gly | Asn | Cys | Arg 55 | Glu | Ser | Thr | Thr | Asp 60 | Gin | Tyr | |
AAC | ACA | AAC | GCT | CTG | CAG | AGA | GAT | GCT | CCA | CAC | GTG | GAA | CCG | GAT | TTC | 543 |
Asn | Thr | Asn 65 | Ala | Leu | Gin | Arg | Asp 70 | Ala | Pro | His | Val | Glu 75 | Pro | Asp | Phe | |
TCT | TCC | CAG | AAA | CTT | CAA | CAT | CTG | GAA | CAT | GTG | ATG | GAA | AAT | TAT | ACT | 591 |
Ser | Ser 80 | Gin | Lys | Leu | Gin | His 85 | Leu | Glu | His | val | Met 90 | Glu | Asn | Tyr | Thr | |
CAG | TGG | CTG | CAA | AAA | CTT | GAG | AAT | TAC | ATT | GTG | GAA | AAC | ATG | AAG | TCG | 639 |
Gin 95 | Trp | Leu | Gin | Lys | Leu 100 | Glu | Asn | Tyr | Ile | Val 105 | Glu | Asn | Met | Lys | Ser 110 | |
GAG | ATG | GCC | CAG | ATA | CAG | CAG | AAT | GCA | GTT | CAG | AAC | CAC | ACG | GCT | ACC | 687 |
Glu | Met | Ala | Gin | Ile 115 | Gin | Gin | Asn | Ala | Val 120 | Gin | Asn | His | Thr | Ala 125 | Thr | |
ATG | CTG | GAG | ATA | GGA | ACC | AGC | CTC | CTC | TCT | CAG | ACT | GCA | GAG | CAG | ACC | 735 |
Met | Leu | Glu | Ile 130 | Gly | Thr | Ser | Leu | Leu 135 | Ser | Gin | Thr | Ala | Glu 140 | Gin | Thr | |
AGA | AAG | CTG | ACA | GAT | GTT | GAG | ACC | CAG | GTA | CTA | AAT | CAA | ACT | TCT | CGA | 783 |
Arg | Lys | Leu 145 | Thr | Asp | val | Glu | Thr 150 | Gin | Val | Leu | Asn | Gin 155 | Thr | Ser | Arg | |
CTT | GAG | ATA | CAG | CTG | CTG | GAG | AAT | TCA | TTA | TCC | ACC | TAC | AAG | CTA | GAG | 831 |
Leu | Glu 160 | Ile | Gin | Leu | Leu | Glu 165 | Asn | Ser | Leu | Ser | Thr 170 | Tyr | Lys | Leu | Glu | |
AAG | CAA | CTT | CTT | CAA | CAG | ACA | AAT | GAA | ATC | TTG | AAG | ATC | CAT | GAA | AAA | 879 |
Lys 175 | Gin | Leu | Leu | Gin | Gin 180 | Thr | Asn | Glu | Ile | Leu 185 | Lys | Ile | His | Glu | Lys 190 | |
AAC | AGT | TTA | TTA | GAA | CAT | AAA | ATC | TTA | GAA | ATG | GAA | GGA | AAA | CAC | AAG | 927 |
Asn | Ser | Leu | Leu | Glu 195 | His | Lys | Ile | Leu | GlU 200 | Met | Glu | Gly | Lys | His 205 | Lys |
GAA Glu | GAG TTG | GAC ACC TTA AAG | GAA GAG AAA GAG AAC CTT CAA | GGC Gly | TTG Leu | 975 | ||||||||||
Glu | Leu | Asp 210 | Thr Leu | Lys | Glu Glu 215 | Lys | Glu | Asn | Leu | Gin 220 | ||||||
GTT | ACT | CGT | CAA | ACA | TAT | ATA | ATC | CAG | GAG | CTG | GAA | AAG | CAA | TTA | AAC | 1023 |
val | Thr | Arg 225 | Gin | Thr | Tyr | Ile | Ile 230 | Gin | Glu | Leu | Glu | Lys 235 | Gin | Leu | Asn | |
AGA | GCT | ACC | ACC | AAC | AAC | AGT | GTC | CTT | CAG | AAG | CAG | CAA | CTG | GAG | CTG | 1071 |
Arg | Ala 240 | Thr | Thr | Asn | Asn | Ser 245 | Val | Leu | Gin | Lys | Gin 250 | Gin | Leu | Glu | Leu | |
ATG | GAC | ACA | GTC | CAC | AAC | CTT | GTC | AAT | CTT | TGC | ACT | AAA | GAA | GGT | GTT | 1119 |
Met 2S5 | Aap | Thr | Val | His | Asn 260 | Leu | Val | Asn | Leu | Cys 265 | Thr | Lys | Glu | Gly | Val 270 | |
TTA | CTA | AAG | GGA | GGA | AAA | AGA | GAG | GAA | GAG | AAA | CCA | TTT | AGA | GAC | TGT | 1167 |
Leu | Leu | Lys | Gly | Gly 275 | Lys | Arg | Glu | Glu | Glu 280 | Lys | Pro | Phe | Arg | Asp 285 | Cys | |
GCA | GAT | GTA | TAT | CAA | GCT | GGT | TTT | AAT | AAA | AGT | GGA | ATC | TAC | ACT | ATT | 1215 |
Ala | Asp | Val | Tyr 290 | Gin | Ala | Gly | Phe | Asn 295 | Lys | Ser | Gly | Ile | Tyr 300 | Thr | Ile | |
TAT | ATT | AAT | AAT | ATG | CCA | GAA | CCC | AAA | AAG | GTG | TTT | TGC | AAT | ATG | GAT | 1263 |
Tyr | Ile | Asn 305 | Asn | Met | Pro | Glu | Pro 310 | Lys | Lys | Val | Phe | Cys 315 | Asn | Met | Asp | |
GTC | AAT | GGG | GGA | GGT | TGG | ACT | GTA | ATA | CAA | CAT | CGT | GAA | GAT | GGA | AGT | 1311 |
Val | Asn 320 | Gly | Gly | Gly | Trp | Thr 325 | Val | Ile | Gin | His | Arg 330 | Glu | Asp | Gly | Ser | |
CTA | GAT | TTC | CAA | AGA | GGC | TGG | AAG | GAA | TAT | AAA | ATG | GGT | TTT | GGA | AAT | 1359 |
Leu 335 | Aep | Phe | Gin | Arg | Gly 340 | Trp | Lys | Glu | Tyr | Lys 345 | Met | Gly | Phe | Gly | Asn 350 | |
CCC | TCC | GGT | GAA | TAT | TGG | CTG | GGG | AAT | GAG | TTT | ATT | TTT | GCC | ATT | ACC | 1407 |
Pro | Ser | Gly | Glu | Tyr 3 55 | Trp | Leu | Gly | Asn | G1U 360 | Phe | Ile | Phe | Ala | Ile 365 | Thr | |
AGT | CAG | AGG | CAG | TAC | ATG | CTA | AGA | ATT | GAG | TTA | ATG | GAC | TGG | GAA | GGG | 145 S |
Ser | Gin | Arg | Gin 370 | Tyr | Met | Leu | Arg | Ile 375 | Glu | Leu | Met | Asp | Trp 380 | Glu | Gly | |
AAC | CGA | GCC | TAT | TCA | CAG | TAT | GAC | AGA | TTC | CAC | ATA | GGA | AAT | GAA | AAG | 1503 |
Asn | Arg | Ala 385 | Tyr | Ser | Gin | Tyr | Aep 390 | Arg | Phe | His | Ile | Gly 395 | Asn | Glu | Lys | |
CAA | AAC | TAT | AGG | TTG | TAT | TTA | AAA | GGT | CAC | ACT | GGG | ACA | GCA | GGA | AAA | 1551 |
Gin | Asn 400 | Tyr | Arg | Leu | Tyr | Leu 405 | Lys | Gly | His | Thr | Gly 410 | Thr | Ala | Gly | Lys | |
CAG | AGC | AGC | CTG | ATC | TTA | CAC | GGT | GCT | GAT | TTC | AGC | ACT | AAA | GAT | GCT | 1599 |
Gin 415 | Ser | Ser | Leu | Ile | Leu 420 | His | Gly | Ala | Asp | Phe 425 | Ser | Thr | LyB | Asp | Ala 430 | |
GAT | AAT | GAC | AAC | TGT | ATG | TGC | AAA | TGT | GCC | CTC | ATG | TTA | ACA | GGA | GGA | 1647 |
Asp | Aen | Asp | Asn | Cys 435 | Met | Cys | Lys | Cys | Ala 440 | Leu | Met | Leu | Thr | Gly 445 | Gly | |
TGG | TGG | TTT | GAT | GCT | TGT | GGC | CCC | tcc | AAT | CTA | AAT | GGA | ATG | TTC | TAT | 1695 |
Trp | Trp | Phe | Asp 450 | Ala | Cys | Gly | Pro | Ser 455 | Asn | Leu | Asn | Gly | Met 460 | Phe | Tyr | |
ACT | GCG | GGA | CAA | AAC | CAT | GGA | AAA | CTG | AAT | GGG | ATA | AAG | TGG | CAC | TAC | 1743 |
Thr | Ala | Gly 465 | Gin | Asn | Mis | Gly | Lys 470 | Leu | Asn | Gly | Ile | Lye 475 | Trp | Hie | Tyr |
-47CZ 295371 B6
TTC | AAA | GGG | CCC | AGT | TAC | TCC | TTA | CGT | TCC | ACA | ACT | ATG | ATG | ATT | CGA | 1791 |
Phe | Lye | Gly | Pro | Ser | Tyr | Ser | Leu | Arg | Ser | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | |
480 | 485 | 490 |
CCT TTA GAT TTT TGA AAG CGCA ATGTCAGAAG CGATTATGAA AGCAACAAAG AAATC 1848 Pro Leu Aep Phe
495
CGGAGAAGCT CTTCCAGCAA CCGTTTGAGT AAAACTCCAC AAACTACTAC
GCCAGGTGAG TAAGTGGTAG TCACAAGAGT TGACTGTCGG TGGACCTTAT
AAACTGTTTG TTATGTGAAG CTCTACTTGG GCTTTAAAAA TTTGGAACTA
AAAACTTCAG TCACCAAGGT GGTGACAGTG GGGAAGAAAC TGGTAGCCAG
AAGCAAACAA TCTTGACCGT CTCACGTGGC TGCTGAGCTT ATGATAAATA
TATTGTCTCC GAATCTGGAG TCGACTATAG GCTGTGCTTC TGGTTAATTT
1908 1968 2028
2088 2148
2149
2. Informace o sekv. ID. NO. 2:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 498 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein
v) Typ fragmentu: interní ix) Charakteristika
A. jméno/klíě: lidský TIE-2 ligand 1
B. lokace: 1....498
D. Jiné informace: od klonu λ gtlO kódující hite-2 ligand
-48CZ 295371 B6
xi) | Popis sekvence: SEQ ID NO: 2: | ||||||||||||||
Het | Thr | Val | Phe | Leu | Ser | Phe | Ala | Phe | Leu | Ala | Ala | Ile | Leu | Thr | His |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ile | Gly | Cys | Ser | Asn | Gin | Arg | Arg | Ser | Pro | Glu | Asn | Ser | Gly | Arg | Arg |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Tyr | Asn | Arg | Ile | Gin | His | Gly | Gin | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe | Ile | Leu | Pro |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | His | Asp | Gly | Asn | Cys | Arg | Glu | Ser | Thr | Thr | Asp | Gin | Tyr | Asn | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asn | Ala | Leu | Gin | Arg | Asp | Ala | Pro | His | Val | Glu | Pro | Asp | Phe | Ser | Ser |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Gin | Lys | Leu | Gin | His | Leu | Glu | His | Val | Het | Glu | Asn | Tyr | Thr | Gin | Trp |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Gin | Lys | Leu | Glu | Asn | Tyr | Ile | Val | Glu | Asn | Met | Lys | Ser | Glu | Met |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Ala | Gin | Ile | Gin | Gin | Asn | Ala | Val | Gin | Asn | His | Thr | Ala | Thr | Met | Leu |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Glu | Ile | Gly | Thr | Ser | Leu | Leu | Ser | Gin | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | LyB |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Leu | Thr | Asp | Val | Glu | Thr | Gin | Val | Leu | Asn | Gin | Thr | Ser | Arg | Leu | Glu |
14 5 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Ile | Gin | Leu | Leu | Glu | Asn | Ser | Leu | Ser | Thr | Tyr | Lys | Leu | Glu | Lys | Gin |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Leu | Leu | Gin | Gin | Thr | Asn | Glu | Ile | Leu | Lya | Ile | His | Glu | Lys | Asn | Ser |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Leu | Leu | Glu | His | Lys | Ile | Leu | Glu | Met | Glu | Gly | Lys | Hle | Lys | Glu | Glu |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Leu | Asp | Thr | Leu | Lys | Glu | Glu | Lys | Glu | Asn | Leu | Gin | Gly | Leu | Val | Thr |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Arg | Gin | Thr | Tyr | Ile | Ile | Gin | Glu | Leu | Glu | Lys | Gin | Leu | Asn | Arg | Ala |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Thr | Thr | Asn | Asn | Ser | val | Leu | Gin | Lys | Gin | Gin | Leu | GlU | Leu | Met | Asp |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Thr | Val | His | Asn | Leu | Val | Asn | Leu | CyB | Thr | Lys | Glu | Gly | Val | Leu | Leu |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Lys | Gly | Gly | Lye | Arg | Glu | Glu | Glu | Lys | Pro | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala | Asp |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Val | Tyr | Gin | Ala | Gly | Phe | Asn | Lys | Ser | Gly | ile | Tyr | Thr | ile | Tyr | ile |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Asn | Asn | Het | Pro | Glu | Pro | Lys | Lys | Val | Phe | Cys | Asn | Met | Asp | Val | Asn |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Gly | Gly | Gly | Trp | Thr | Val | Ile | Gin | His | Arg | Glu | Aep | Gly | Ser | Leu | Asp |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Phe | Gin | Arg | Gly | Trp | Lye | Glu | Tyr | Lys | Met | Gly | Phe | Gly | Asn | Pro | ser |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Gly | Glu | Tyr | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Phe | Ile | Phe | Ala | ile | Thr | Ser | Gin |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Arg | Gin | Tyr | Het | Leu | Arg | Ile | Glu | Leu | Met | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Arg |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Ala | Tyr | ser | Gin | Tyr | Αθρ | Arg | Phe | His | Ile | Gly | Asn | Glu | Lys | Gin | Asn |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Tyr | Arg | Leu | Tyr | Leu | Lys | Gly | His | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Gin | Ser |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Ser | Leu | Ile | Leu | His | Gly | Ala | Asp | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Ala | Asp | Asn |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Asp | Asn | Cys | Het | Cys | Lys | Cys | Ala | Leu | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Phe | Asp | Ala | Cys | Gly | Pro | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Het | Phe | Tyr | Thr | Ala |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Gly | Gin | Asn | His | Gly | Lys | Leu | Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | His | Tyr | Phe | Lys |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Gly | Pro | Ser | Tyr | Ser | Leu | Arg | Ser | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Leu |
485 | 490 | 495 | |||||||||||||
Asp | Phe |
-49CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 3:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 2146 párů bází
B. Typ: nukleová kyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: kódující sekvence
B. lokace: 310..1800
D. Jiné informace:
A. jméno/klíč: lidský TIE-2 ligand 1
B. lokace: 1....2146
D. Jiné informace: od T98G klonu xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 3:
CAGCTGACTC AGGCAGGCTC CATGCTGAAC GGTCACACAG AGAGGAAACA ATAAATCTCA60
GCTACTATGC AATAAATATC TCAAGTTTTA ACGAAGAAAA ACATCATTGC AGTGAAATAA120
AAAATTTTAA AATTTTAGAA CAAAGCTAAC AAATGGCTAG TTTTCTATGA TTCTTCTTCA180
AACGCTTTCT TTGAGGGGGA AAGAGTCAAA CAAACAAGCA GTTTTACCTG AAATAAAGAA240
CTAGTTTTAG AGGTCAGAAG AAAGGAGCAA GTTTTGCGAG AGGCACGGAA GGAGTGTGCT300
GGCAGTACA ATG ACA GTT TTC CTT TCC TTT GCT TTC CTC GCT GCC ATT CTG351
Met Ťhr Val Phe Leu Ser Phe Ala Phe Leu Ala Ala Ile Leu 1510
ACT CAC ATA GGG TGC AGC AAT CAG CGC CGA AGT CCA GAA AAC AGT GGG399
Thr His Ile Gly Cys Ser Asn Gin Arg Arg Ser Pro Glu Asn SerGly
1S 20 2530
-50CZ 295371 B6
AGA Arg | AGA TAT AAC CGG ATT | CAA CAT | GGG CAA TGT GCC TAC ACT TTC | ATT Ile | 447 | ||||||||||
Arg | Tyr | Αβη Arg 35 | Xle | Gin | His | Gly | Gin 40 | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe 45 | |||
CTT | CCA | GAA | CAC GAT | GGC | AAC | TGT | CGT | GAG | AGT | ACG | ACA | GAC | CAG | TAC | 495 |
Leu | Pro | Glu | Hle Asp 50 | Gly | Asn | Cys | Arg 55 | Glu | Ser | Thr | Thr | Asp 60 | Gin | Tyr | |
AAC | ACA | AAC | GCT CTG | CAG | AGA | GAT | GCT | CCA | CAC | GTG | GAA | ecG | GAT | TTC | 543 |
Asn | Thr | Asn 65 | Ala Leu | Gin | Arg | Asp 70 | Ala | Pro | His | Val | Glu 75 | Pro | Asp | Phe | |
TCT | TCC | CAG | AAA CTT | CAA | CAT | CTG | GAA | CAT | GTG | ATG | GAA | AAT | TAT | ACT | 591 |
Ser | Ser 80 | Gin | Lys Leu | Gin | Hle 85 | Leu | Glu | HLb | Val | Met 90 | Glu | Asn | Tyr | Thr | |
CAG | TGG | CTG | CAA AAA | CTT | GAG | AAT | TAC | ATT | GTG | GAA | AAC | ATG | AAG | TCG | 639 |
Gin 95 | Trp | Leu | Gin Lys | Leu 100 | Glu | Asn | Tyr | Ile | Val 105 | Glu | Asn | Het | Lys | Ser 110 | |
GAG | ATG | GCC | CAG ATA | CAG | CAG | AAT | GCA | GTT | CAG | AAC | CAC | ACG | GCT | ACC | 687 |
Glu | Het | Ala | Gin Ile 115 | Gin | Gin | Asn | Ala | Val 120 | Gin | Asn | Hiě | Thr | Ala 125 | Thr | |
ATG | CTG | GAG | ATA GGA | ACC | AGC | CTC | CTC | TCT | CAG | ACT | GCA | GAG | CAG | ACC | 735 |
Met | Leu | Glu | Ile Gly 130 | Thr | Ser | Leu | Leu 135 | Seť | Gin | Thr | Ala | Glu 140 | Gin | Thr | |
AGA | AAG | CTG | ACA GAT | GTT | GAG | ACC | CAG | GTA | CTA | AAT | CAA | ACT | TCT | CGA | 783 |
Arg | Lys | Leu 145 | Thr Asp | Val | Glu | Thr 150 | Gin | Val | Leu | Asn | Gin 155 | Thr | Ser | Arg | |
CTT | GAG | ATA | CAG CTG | CTG | GAG | AAT | TCA | TTA | TCC | ACC | TAC | AAG | CTA | GAG | 831 |
Leu | Glu 160 | Ile | Gin Leu | Leu | Glu 165 | Asn | Ser | Leu | Ser | Thr 170 | Tyr | Lys | Leu | Glu | |
AAG | CAA | CTT | CTT CAA | CAG | ACA | AAT | GAA | ATC | TTG | AAG | ATC | CAT | GAA | AAA | 879 |
Lys 175 | Gin | Leu | Leu Gin | Gin 180 | Thr | Asn | Glu | Ile | Leu 185 | Lys | Ile | His | Glu | Lys 190 | |
AAC | AGT | TTA | TTA GAA | CAT | AAA | ATC | TTA | GAA | ATG | GAA | GGA | AAA | CAC | AAG | 927 |
Asn | Ser | Leu | Leu Glu 195 | His | Lys | Ile | Leu | Glu 200 | Het | Glu | Gly | Lys | His 205 | Lys | |
GAA | GAG | TTG | GAC ACC | TTA | AAG | GAA | GAG | AAA | GAG | AAC | CTT | CAA | GGC | TTG | 975 |
Glu | Glu | Leu | Aep Thr 210 | Leu | Lys | G1U | Glu 215 | Ly6 | Glu | Asn | Leu | Gin 220 | Gly | Leu | |
GTT | ACT | CGT | CAA ACA | TAT | ATA | ATC | CAG | GAG | CTG | GAA | AAG | CAA | TTA | AAC | 1023 |
Val | Thr | Arg 225 | Gin Thr | Tyr | Ile | Ile 230 | Gin | Glu | Leu | Glu | Lys 235 | Gin | Leu | Asn | |
AGA | GCT | ACC | ACC AAC | AAC | AGT | GTC | CTT | CAG | AAG | CAG | CAA | CTG | GAG | CTG | 1071 |
Arg | Ala 240 | Thr | Thr Asn | Asn | Ser 245 | Val | Leu | Gin | Lys | Gin 250 | Gin | Leu | Glu | Leu | |
ATG | GAC | ACA | GTC CAC | AAC | CTT | GTC | AAT | CTT | TGC | ACT | AAA | GAA | GTT | TTA | 1119 |
Het 255 | Asp | Thr | Val His | Asn 260 | Leu | Val | Asn | Leu | Cys 265 | Thr | Lys | Glu | Val | Leu 270 | |
CTA | AAG | GGA | GGA AAA | AGA | GAG | GAA | GAG | AAA | CCA | TTT | AGA | GAC | TGT | GCA | 1167 |
Leu | Lys | Gly | Gly Lys 275 | Arg | Glu | Glu | Glu | Lys 280 | Pro | Phe | Arg | Asp | Cys 285 | Ala | |
GAT | GTA | TAT | CAA GCT | GGT | TTT | AAT | AAA | AGT | GGA | ATC | TAC | ACT | ATT | TAT | 1215 |
Asp | Val | Tyr | Gin Ala 290 | Gly | Phe | Asn | Lys 295 | Ser | Gly | Ile | Tyr | Thr 300 | Ile | Tyr |
ATT AAT AAT | ATG Met | CCA Pro | CAA Glu | CCC AAA | AAG GIG | TTT TGC AAT ATG GAT | GTC Val | 1263 | |||||||
Ile | Asn | Asn 305 | Pro | Lys 310 | Lys | Val | Phe | Cys Aen 315 | Met | Asp | |||||
AAT | GGG | GGA | GGT | TGG | ACT | GTA | ATA | CAA | CAT | CGT | GAA GAT | GGA | AGT | CTA | 1311 |
Asn | Gly 320 | Gly | Gly | Trp | Thr | Val 325 | Ile | Gin | His | Arg | Glu Asp 330 | Gly | Ser | Leu | |
GAT | TTC | CAA | AGA | GGC | TGG | AAG | GAA | TAT | AAA | ATG | GGT TTT | GGA | AAT | CCC | 1359 |
Aap 335 | Phe | Gin | Arg | Gly | Trp 340 | Lye | GlU | Tyr | Lys | Met 345 | Gly Phe | Gly | Asn | Pro 350 | |
TCC | GGT | GAA | TAT | TGG | CTG | GGG | AAT | GAG | TTT | ATT | TTT GCC | ATT | ACC | AGT | 1407 |
Ser | Gly | Glu | Tyr | Trp 355 | Leu | Gly | Asn | Glu | Phe 360 | ile | Phe Ala | Ile | Thr 355 | Ser | |
CAG | AGG | CAG | TAC | ATG | CTA | AGA | ATT | GAG | TTA | ATG | GAC TGG | GAA | GGG | AAC | 145S |
Gin | Arg | Gin | Tyr 370 | Met | Leu | Arg | Ile | Glu 375 | Leu | Met | Asp Trp | Glu 380 | Gly | Asn | |
CGA | GCC | TAT | TCA | CAG | TAT | GAC | AGA | TTC | CAC | ATA | GGA AAT | GAA | AAG | CAA | 1503 |
Arg | Ala | Tyr 385 | Ser | Gin | Tyr | Asp | Arg 390 | Phe | His | Ile | Gly Aen 395 | Glu | Lya | Gin | |
AAC | TAT | AGG | TTG | TAT | TTA | AAA | GGT | CAC | ACT | GGG | ACA GCA | GGA | AAA | CAG | 1551 |
Asn | Tyr 400 | Arg | Leu | Tyr | Leu | Lya 405 | Gly | His | Thr | Gly | Thr Ala 410 | Gly | Lys | Gin | |
AGC | AGC | CTG | ATC | TTA | CAC | GGT | GCT | GAT | TTC | AGC | ACT AAA | GAT | GCT | GAT | 1599 |
Ser 415 | Ser | Leu | Ile | Leu | His 420 | Gly | Ala | Asp | Phe | Ser 425 | Thr Lya | Asp | Ala | Aap 430 | |
AAT | GAC | AAC | TGT | ATG | TGC | AAA | TGT | GCC | CTC | ATG | TTA ACA | GGA | CGA | TGG | 1647 |
Aen | Aep | Asn | Cys | Met 435 | Cys | Lys | cys | Ala | Leu 440 | Het | Leu Thr | Gly | Gly 445 | Trp | |
TGG | TTT | GAT | GCT | TGT | GGC | CCC | TCC | AAT | CTA | AAT | GGA ATG | TTC | TAT | ACT | 1695 |
Trp | Phe | Aep | Ala 450 | Cys | Gly | Pro | Ser | Asn 455 | Leu | Asn | Gly Met | Phe 460 | Tyr | Thr | |
GCG | GGA | CAA | AAC | CAT | CGA | AAA | CTG | AAT | GGG | ATA | AAG TGG | CAC | TAC | TTC | 1743 |
Ala | Gly | Gin 465 | Asn | His | Arg | Lya | Leu 470 | Asn | Gly | Ile | Lys Trp 47S | His | Tyr | Phe | |
AAA | GGG | CCC | AGT | TAC | TCC | TTA | CGT | TCC | ACA | ACT | ATG ATG | ATT | CGA | CCT | 1791 |
Lya | Gly 480 | Pro | Ser | Tyr | Ser | Leu 485 | Arg | Ser | Thr | Thr | Met Met 490 | Ile | Arg | Pro |
TTA GAT TTT TGA AAGCGCA ATGTCAGAAG CGATTATGAA AGCAACAAAG AAATCCGGA 1849 Leu Aep Phe
495
GAAGCTGCCA CACCAATAAG TTGAGTTCAC CTCCACTGAC TACTACTGGA
GGTGAGAAAC TGGTAGTTAT AAGAGTCTCT TGTCGGGCTT CCTTATTTTG
TGTTTGAAAA GTGAAGTCAC ACTTGGGGTG TAAAAAGGGA GAACTATGGT
CTTCAGAAGC CAAGGTTCTT ACAGTGCTCA AGAAACTGCT AGCCAGATGA
AAACAATATT GACCGTGAAT CGTGGCTCGA GAGCTTGCTG TAAATATGGT
GTCTCCCTTC CTGGAGCCGT CTATAGAAAA TGCTTCAAAC TAATTTC
1909
1969
2029
2089
2146
2. Informace o sekv. ID. NO. 4:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 497 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein
-52CZ 295371 B6
v) Typ fragmentu: interní ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: lidský TIE-2 ligand 1
B. lokace: 1....2146
D. Jiné informace: od T98G klonu jíí) Pepla sskvenes: f EO ID NO: d:
Met | Thr | Val | Phe | Leu | ser | Phe | Ala | Phe | Leu | Ala | Ala | Ile | Leu | Thr | His |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ile | Gly | Cys | Ser | Asn | Gin | Arg | Arg | Ser | Pro | Glu | Asn | Ser | Gly | Arg | Arg |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Tyr | Asn | Arg | Ile | Gin | His | Gly | Gin | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe | Ile | Leu | Pro |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | His Asp | Gly | Asn | Cys | Arg | Glu | Ser | Thr | Thr | Asp | Gin | Tyt | Asn | Thr | |
SO | 55 | 60 | |||||||||||||
Asn | Ala | Leu | Gin | Arg | ABp | Ala | Pro | His | val | Glu | Pro | Asp | Phe | Ser | Ser |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Gin | Lys | Leu | Gin | His | Leu | Glu | His | Val | Met | Glu | Asn | Tyr | Thr | Gin | Trp |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Gin | Lys | Leu | Glu | Asn | Tyr | Ile | Val | Glu | Asn | Met | Lys | Ser | Glu | Met |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Ala | Gin | Ile | Gin | Gin | Asn | Ala | Val | Gin | Asn | His | Thr | Ala | Thr | Met | Leu |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Glu | Ile | Gly | Thr | Ser | Leu | Leu | Ser | Gin | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | Lys |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Leu | Thr | Asp | Val | Glu | Thr | Gin | Val | Leu | Asn | Gin | Thr | Ser | Arg | Leu | Glu |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Ile | Gin | Leu | Leu | Glu | Asn | Ser | Leu | Ser | Thr | Tyr | Lys | Leu | Glu | Lys | Gin |
165 | 17 G | 175 | |||||||||||||
Leu | Leu | Gin | Gin | Thr | Asn | Glu | Ile | Leu | Lys | Ile | His | Glu | Lys | Asn | Ser |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Leu | Leu | Glu | His | Lys | Ile | Leu | Glu | Met | Glu | Gly | Lys | His | Lys | Glu | Glu |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Leu | Asp | Thr | Leu | Lys | Glu | Glu | Lys | Glu | ASn | Leu | Gin | Gly | Leu | Val | Thr |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Arg | Gin | Thr | Tyr | Ile | Ile | Gin | Glu | Leu | Glu | Lys | Gin | Leu | Asn | Arg | Ala |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Thr | Thr | Asn | Asn | Ser | Val | Leu | Gin | Lys | Gin | Gin | Leu | Glu | Leu | Met | Asp |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Thr | val | His | Asn | Leu | Val | Asn | Leu | Cys | Thr | Lys | Glu | Val | Leu | Leu | Lys |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Gly | Gly | Lys | Arg | Glu | Glu | Glu | Lys | Pro | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala | Asp | Val |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Tyt | Gin | Ala | Gly | Phe | Asn | Lys | Ser | Gly | Ile | Tyr | Thr | Ile | Tyr | Ile | Asn |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Asn | Met | Pro | Glu | Pro | Lys | Lys | Val | Phe | Cys | Asn | Met | Asp | Val | Asn | Gly |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Gly | Gly | Trp | Thr | Val | Ile | Gin | His | Arg | Glu | Asp | Gly | Ser | Leu | Asp | Phe |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Gin | Arg | Gly | Trp | Lys | Glu | Tyr | Lys | Met | Gly | Phe | Gly | Asn | Pro | Ser | Gly |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Glu | Tyr | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Phe | Ile | Phe | Ala | Ile | Thr | Ser | Gin | Arg |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Gin | Tyr | Met | Leu | Arg | Ile | Glu | Leu | Met | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Arg | Ala |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Tyr | Ser | Gin | Tyr | Asp | Arg | Phe | His | Ile | Gly | Asn | Glu | Lys | Gin | Asn | Tyr |
3Θ5 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Arg | Leu | Tyr | Leu | Lys | Gly | His | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Gin | Ser | Ser |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Leu | Ile | Leu | Híb | Gly | Ala | Asp | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Ala | Asp | Asn | Asp |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Aen | Cys | Met | Cys | Lys | Cys | Ala | Leu | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Asp | Ala | Cye | Gly | Pro | ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Met | Phe | Tyr | Thr | Ala | Gly |
-53CZ 295371 B6
450 | 455 | 460 | ||||||||||||
Gin | Asn | Hle | Arg | Lys | Leu | Asn Gly | Ile | Lyfl | Trp | Hle | Tyr | Phe | Lye Gly | |
465 | 470 | 475 | 480 | |||||||||||
Pro | Ser | Tyr | Ser | Leu | Arg | Ser Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Leu | Αβρ |
485 | 490 | 495 |
2. Informace o sekv. ID. NO. 5:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 2282 párů bází
B. Typ: nukleová kyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: kódující sekvence
B. lokace: 357..1844
D. Jiné informace:
A. jméno/klíč: lidský TIE-2 ligand 2
B. lokace: 1....2282
D. Jiné informace: od klonu pBluescripst KS zakódující lidský TIE-2 ligand 2 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 5:
GAATTCCTGG TCTGGGGAGA CCAAGTGAGC AACACAGCAG ACGGACCCAG TGGACGTGTG
GTTGGTGTTT GAGGAACAAA AGGACTGTTC TAAAAACCAG CCATGGCAGC TTTGCCCTCA
ATCTCCTCCC GGACCGŤGAA TTCCCACTGC GTTTGCTACT GTAGCAGCCC AGTTTGCTAA
AGCCTTGAGG AGCTGCTCTG AATCTGACAG GGAAAAAGAG TGCGTTTCAG GCTGCTGGTT
GAGGGAACAA TAAAAGCTGA TTTACTGCAT GAAAGAGAAG ACGGCAGCAG TATTACTGAA
GACTGTAGGA CACAGCCCTC GCCTGGAGAG ACTTTCATTG CTCGGGACTC GAAAGA ATG Met 1
120
180
240
300
3S9
TGG Trp | CAG ATT GTT TTC TTT ACT CTG AGC TGT GAT | CTT Leu | GTC TTG | GCC Ala | GCA Ala | 407 | ||||||||||
Gin | Ile Val 5 | Phe | Phe Thr | Leu | Ser 10 | Cys | Asp | Val | Leu 15 | |||||||
GCC | TAT | AAC | AAC | TTT | CGG | AAG | AGC | ATG | GAC | AGC | ATA | GGA | AAG | AAG | CAA | 455 |
Ala | Tyr | Asn | Asn | Phe | Arg | Lye | Ser | Met | Asp | Ser | Ile | Gly | Lys | Lys | Gin | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
TAT | CAG | GTC | CAG | CAT | GGG | TCC | TGC | AGC | TAC | ACT | TTC | CTC | CTG | CCA | GAG | 503 |
Tyr | Gin | val | Gin | His | Gly | Ser | Cys | Ser | Tyr | Thr | Phe | Leu | Leu | Pro | Glu | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
ATG | GAC | AAC | TGC | CGC | TCT | TCC | TCC | AGC | CCC | TAC | GTG | TCC | AAT | GCT | GTG | 551 |
Met | Asp | ΑΒΠ | Cys | Arg | Ser | Ser | Ser | Ser | Pro | Tyr | Val | Ser | Asn | Ala | Val | |
50 | 55 | 60 | 65 | |||||||||||||
CAG | AGG | GAC | GCG | CCG | CTC | GAA | TAC | GAT | GAC | TCG | GTG | CAG | AGG | CTG | CAA | 599 |
Gin | Arg | Asp | Ala | Pro | Leu | Glu | Tyr | Asp | Asp | Ser | Val | Gin | Arg | Leu | Gin | |
70 | 75 | 80 | ||||||||||||||
GTG | CTG | GAG | AAC | ATC | ATG | GAA | AAC | AAC | ACT | CAG | TGG | CTA | ATG | AAG | CTT | 647 |
Val | Leu | Glu | Asn | Ile | Met | Glu | Asn | Asn | Thr | Gin | Trp | Leu | Met | Lys | Leu | |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
GAG | AAT | TAT | ATC | CAG | GAC | AAC | ATG | AAG | AAA | GAA | ATG | GTA | GAG | ATA | CAG | 695 |
Glu | Asn | Tyr | Ile | Gin | Asp | Asn | Met | Lys | Lye | Glu | Met | Val | Glu | Ile | Gin | |
100 | 105 | 110 |
CAG AAT CCA | GTA CAG | AAC Asn | CAG ACG GCT GTG ATG | ATA Ile 125 | GAA Glu | ATA GGG | ACA Thr | 743 | ||||||||
Gin Asn | Ala | Val | Gin | Gin Thr Ala 120 | Val | Met | Ile | Gly | ||||||||
115 | ||||||||||||||||
AAC | CTG | TTG | AAC | CAA | ACA | GCT | GAG | CAA | ACG | CGG | AAG | TTA | ACT | GAT | GTG | 791 |
Asn 130 | Leu | Leu | Asn | Gin | Thr 135 | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg 140 | Lys | Leu | Thr | Asp | Val 145 | |
GAA | GCC | CAA | GTA | TTA | AAT | CAG | ACC | ACG | AGA | CTT | GAA | CTT | CAG | CTC | TTG | 839 |
Glu | Ala | Gin | Val | Leu 150 | Asn | Gin | Thr | Thr | Arg 155 | Leu | Glu | Leu | Gin | Leu 160 | Leu | |
GAA | CAC | TCC | CTC | TCG | ACA | AAC | AAA | TTG | GAA | AAA | CAG | ATT | TTG | GAC | CAG | 887 |
Glu | Hle | Ser | Leu 165 | Ser | Thr | Asn | Lys | Leu 170 | Glu | LyB | Gin | Ile | Leu 175 | Asp | Gin | |
ACC | AGT | GAA | ATA | AAC | AAA | TTG | CAA | GAT | AAG | AAC | AGT | TTC | CTA | GAA | AAG | 935 |
Thr | ser | G1U 180 | Ile | Asn | Lys | Leu | Gin 185 | Asp Lys | Asn | Ser | Phe 190 | Leu | Glu | Lys | ||
AAG | GTG | CTA | GCT | ATG | GAA | GAC | AAG | CAC | ATC | ATC | CAA | CTA | CAG | TCA | ATA | 983 |
Lys | Val 195 | Leu | Ala | Met | Glu | Asp 200 | Lys | His | Ile | Ile | Gin 205 | Leu | Gin | Ser | Ile | |
AAA | GAA | GAG | AAA | GAT | CAG | CTA | CAG | GTG | TTA | GTA | TCC | AAG | CAA | AAT | TCC | 1031 |
Lys 210 | Glu | Glu | Lys | Asp | Gin 215 | Leu | Gin | val | Leu | val 220 | Ser | Lys | Gin | Asn | Ser 225 | |
ATC | ATT | GAA | GAA | CTA | GAA | AAA | AAA | ATA | GTG | ACT | GCC | ACG | GTG | AAT | AAT | 1079 |
Ile | Ile | Glu | Glu | Leu 230 | Glu | Lys | Lys | Ile | Val 235 | Thr | Ala | Thr | Val | Asn 240 | Asn | |
TCA | GTT | CTT | CAA | AAG | CAG | CAA | CAT | GAT | CTC | ATG | GAG | ACA | GTT | AAT | AAC | 1127 |
Ser | Val | Leu | Gin 245 | Lys | Gin | Gin | His | Asp 250 | Leu | Met | Glu | Thr | Val 255 | Asn | Asn | |
TTA | CTG | ACT | ATG | ATG | TCC | ACA | TCA | AAC | TCA | GCT | AAG | GAC | CCC | ACT | GTT | 1175 |
Leu | Leu | Thr 260 | Met | Met | Ser | Thr | Ser 265 | Asn | Ser | Ala | Lys | Asp 270 | Pro | Thr | Val | |
GCT | AAA | GAA | GAA | CAA | ATC | AGC | TTC | AGA | GAC | TGT | GCT | GAA | GTA | TTC | AAA | 1223 |
Ala | Lys 275 | Glu | Glu | Gin | Ile | Ser 280 | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala 285 | Glu | Val | Phe | Lys | |
TCA | GGA | CAC | ACC | ACA | AAT | GGC | ATC | TAC | ACG | TTA | ACA | TTC | CCT | AAT | TCT | 1271 |
Ser 290 | Gly | His | Thr | Thr | Asn 295 | Gly | Ile | Tyr | Thr | Leu 300 | Thr | Phe | Pro | Asn | Ser 305 | |
ACA | GAA | GAG | ATC | AAG | GCC | TAC | TGT | GAC | ATG | GAA | GCT | GGA | GGA | GGC | GGG | 1319 |
Thr | Glu | Glu | Ile | Lys 310 | Ala | Tyr | Cys | Asp | Ket 315 | Glu | Ala | Gly | Gly | Gly 320 | Gly | |
TGG | ACA | ATT | ATT | CAG | CGA | CGT | GAG | GAT | GGC | AGC | GTT | GAT | TTT | CAG | AGG | 1367 |
Trp | Thr | Ile | Ilě 325 | Gin | Arg | Arg | Glu | Asp Gly 330 | Ser | Val | Asp | Phe 335 | Gin | Arg | ||
ACT | TGG | AAA | GAA | TAT | AAA | GTG | GGA | TTT | GCT | AAC | CCT | TCA | GGA | GAA | TAT | 1415 |
Thr | Trp | Lys 340 | Glu | Tyr | Lys | Val | Gly 345 | Phe | Gly | Asn | Pro | Ser 350 | Gly | Glu | Tyr | |
TGG | CTG | GGA | AAT | GAG | TTT | GTT | TCG | CAA | CTG | ACT | AAT | CAG | CAA | CGC | TAT | 1463 |
Trp | Leu 35S | Gly | Asn | Glu | Phe | Val 360 | ser | Gin | Leu | Thr | Asn 365 | Gin | Gin | Arg | Tyr | |
GTG | CTT | AAA | ATA | CAC | CTT | AAA | GAC | TGG | GAA | GGC | AAT | GAG | GCT | TAC | TCA | 1511 |
Val 370 | Leu | Lys | Ile | His | Leu 375 | Lys | Asp | Trp | Glu | Gly 380 | Asn | Glu | Ala | Tyr | Ser 385 |
-55CZ 295371 B6
TTG TAT GAA Leu Tyr Glu | CAT His | TTC TAT CTC TCA | AGT GAA GAA CTC AAT TAT | AGG ATT | 1559 | |||||||||||
Phe 390 | Tyr | Leu | Ser | Sér | Glu 395 | Glu | Leu | Asn | Tyr | Arg 400 | Ile | |||||
CAC | CTT | AAA | GGA | CTT | ACA | GGG | ACA | GCC | GGC | AAA | ATA | AGC | AGC | ATC | AGC | 1607 |
His | Leu | Lys | Gly | Leu | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Ile | Ser | Ser | Zle | Ser | |
405 | 410 | 415 | ||||||||||||||
CAA | CCA | GGA | AAT | GAT | TTT | AGC | ACA | AAG | GAT | GGA | GAC | AAC | GAC | AAA | TGT | 1655 |
Gin | Pro | Gly | Asn | Asp | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Gly | Asp | Asn | Asp | Lys | Cys | |
420 | 425 | 430 | ||||||||||||||
ATT | TGC | AAA | TGT | TCA | CAA | ATG | CTA | ACA | GGA | GGC | TGG | TGG | TTT | GAT | GCA | 1703 |
Ile | Cys | Lys | Cys | Ser | Gin | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp | Ala | |
435 | 440 | 445 | ||||||||||||||
TGT | GGT | CCT | TCC | AAC | TTG | AAG | GGA | ATG | TAC | TAT | CCA | CAG | AGG | CAG | AAC | 1751 |
Cys | Gly | Pro | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Met | Tyr | Tyr | Pro | Gin | Arg | Gin | Asn | |
450 | 455 | 460 | 465 | |||||||||||||
ACA | AAT | AAG | TTC | AAC | GGC | ATT | AAA | TGG | TAC | TAC | TGG | AAA | GGC | TCA | GGC | 1799 |
Thr | Asn | Lys | Phe | Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | Tyr | Tyr | Trp | Lys | Gly | Ser | Gly | |
470 | 475 | 480 | ||||||||||||||
TAT | TCG | CTC | AAG | GCC | ACA | ACC | ATG | ATG | ATC | CGA | CCA | GCA | GAT | TTC | TAAAC | 1849 |
Tyr | Ser | Leu | Lys | Ala | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Ala | Asp | Phe | ||
485 | 490 | 495 |
ATCCCAGTCC GAAAGTCACG CGGGACCCAC AACGGACCAA AGATGAACCC AATGTTATGT ACAGATCATC ATGTCCTGAA
ACCTGAGGAA CTGTCTCGAA
GCTGCGCACT ATGCTCCAGA AGCAAGACCC GAGGCTGAGA GCAAGTTTAT TTGGAACTGC TTC
GTGTCCTCTT TTAGAGCCTG TAAACATCCA ATCAGACTGA CAGTAAATAA ATTCTTCTGA
CTATTTTCAA CCACCACAGA TAAACTTTAT TAATTGTGAT CAGTTTACAG CTGGAAAACA GCACTGTTTA
AGACTTAAGC GGGCGTGTGC CACTTAAACT TAGACAGAAC ACGCTGCTGT GAACACTTAT TACACTGTGT
CCAGTGCACT TCGGTGCTGA TGCATCACTT ACCTATGCAA CACAACCAAG GTTATACAAT AAATACCCAT
1909
1969
2029
2089
2149
2209
2269
2282
2. Informace o sekv. ID. NO. 6:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 496 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein
v) Typ fragmentu: interní ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: lidský TIE-2 ligand 2
B. lokace: 1....2146
D. Jiné informace: od klonu pBLuescript KS zakódující lidský TIE-2 ligand 2
-56CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 6:
Met Trp Gin | Ile Val | Phe | Phe Thr | Leu | Ser | Cys | Asp Leu Val | Leu | Ala | |||||
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
Ala Ala | Tyr | Asn 20 | Asn | Phe | Arg | Lys | Ser 25 | Met | Asp | Ser | Ile | Gly 30 | Lys | Lys |
Gin Tyr | Gin 35 | Val | Gin | His | Gly | Ser 40 | Cys | Ser | Tyr | Thr | Phe 45 | Leu | Leu | Pro |
GLu Met 50 | Aep | Asn | Cys | Arg | Ser 55 | Ser | Ser | Ser | Pro | Tyr 60 | Val | Ser | Asn | Ala |
Val Gin 65 | Arg | Asp | Ala | Pro 70 | Leu | Glu | Tyr | Asp | ASp 75 | Ser | Val | Gin | Arg | Leu 80 |
Gin Val | Leu | Glu | Aen 85 | Ile | Met | Glu | Asn | Asn 90 | Thr | Gin | Trp | Leu | Met 95 | Lys |
Leu Glu | Aen | Tyr 100 | Ile | Gin | Aep | Asn | Met 105 | Lys | Lys | Glu | Met | Val 110 | Glu | Ile |
Gin Gin | Aen 11S | Ala | Val | Gin | Asn | Gin 120 | Thr | Ala | Val | Met | Ile 125 | Glu | Ile | Gly |
Thr Asn 130 | Leu | Leu | Asn | Gin | Thr 135 | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg 140 | Lys | Leu | Thr | Asp |
val Glu 145 | Ala | Gin | Val | Leu 150 | Aen | Gin | Thr | Thr | Arg 155 | Leu | Glu | Leu | Gin | Leu 160 |
Leu Glu | Hle | Ser | Leu 165 | Ser | Thr | Asn | Lys | Leu 170 | Glu | Lys | Gin | Ile | Leu 175 | Aep |
Gin Thr | Ser | Glu 180 | Ile | Asn | Lys | Leu | Gin 185 | Asp | Lyfl | Asn | Ser | Phe 190 | Leu | Glu |
Lys Lys | Val 195 | Leu | Ala | Met | Glu | Asp 200 | Lys | His | Ile | Ile | Gin 205 | Leu | Gin | Ser |
Ile Lys 210 | Glu | Glu | Lye | Asp | Gin 215 | Leu | Gin | Val | Leu | Val 220 | Ser | Lys | Gin | Asn |
Ser Ile 225 | Ile | Glu | Glu | Leu 230 | G1U | Lys | Lys | Ile | Val 235 | Thr | Ala | Thr | Val | Asn 240 |
Asn Ser | Val | Leu | Cín 245 | Lye | Gin | Gin | His | Asp 250 | Leu | Met | Glu | Thr | Val 255 | Asn |
Asn Leu | Leu | Thr 260 | Met | Met | Ser | Thr | Ser 265 | Asn | Ser | Ala | Lys | Asp 270 | Pro | Thr |
Val Ala | Lys 275 | Glu | Glu | Gin | Ile | Ser 280 | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala 285 | Glu | Val | Phe |
Lys Ser 290 | Gly | His | Thr | Thr | Asn 295 | Gly | Ile | Tyr | Thr | Leu 300 | Thr | Phe | Pro | Asn |
Ser Thr 305 | Glu | Glu | Ile | Lye 310 | Ala | Tyr | Cys | Asp | Met 315 | Glu | Ala | Gly | Gly | Gly 320 |
Gly Trp | Thr | Ile | Ile 325 | Gin | Arg | Arg | Glu | Asp 330 | Gly | Ser | Val | Asp | Phe 335 | Gin |
Arg Thr | Trp | Lys 340 | Glu | Tyr | Lys | Val | Gly 345 | Phe | Gly | Asn | Pro | Ser 350 | Gly | Glu |
Tyr Trp | Leu 355 | Gly | Asn | Glu | Phe | Val 360 | Ser | Gin | Leu | Thr | Asn 365 | Gin | Gin | Arg |
Tyr Val 370 | Leu | Lys | Ile | His | Leu 375 | Lys | Asp | Trp | Glu | Gly 380 | Asn | Glu | Ala | Tyr |
Ser Leu 385 | Tyr | Glu | His | Phe 390 | Tyr | Leu | Ser | Ser | Glu 395 | Glu | Leu | Asn | Tyr | Arg 400 |
Ile His | Leu | Lys | Gly 405 | Leu | Thr | Gly | Thr | Ala 410 | Gly | Lys | Ile | Ser | Ser 415 | Ile |
Ser Gin | Pro | Gly 420 | Asn | Asp | Phe | Ser | Thr 425 | Lys | Asp | Gly | Asp | Aen 430 | Asp | Lys |
Cys Ile | Cys 435 | Lys | cys | Ser | Gin | Met 440 | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp 445 | Trp | Phe | Asp |
Ala Cya 450 | Gly | Pro | ser | Asn | Leu 455 | Asn | Gly | Met | Tyr | Tyr 460 | Pro | Gin | Arg | Gin |
Aen Thr 465 | Asn | Lys | Phe | Asn 470 | Gly | Ile | Lye | Trp | Tyr 475 | Tyr | Trp | Lys | Gly | Ser 480 |
Gly Tyr | Ser | Leu | Lys 485 | Ala | Thr | Thr | Met | Met 490 | Ile | Arg | Pro | Ala | Asp 495 | Phe |
2. Informace o sekv. ID. NO. 7:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 478 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: zralý TLI protein
B. lokace: 1....478
D. Jiné informace:
-58CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 7:
Asn 1 | Gin Arg | Arg Ser 5 | Pro | Glu Asn | Ser | Gly 10 | Arg | Arg Tyr | Asn | Arg 15 | Ile | ||||
Gin | His | Gly | Gin | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe | Ile | Leu | Pro | Glu | His | Asp | Gly |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Asn | Cys | Arg | Glu | Ser | Thr | Thr | Asp | Gin | Tyr | Asn | Thr | Asn | Ala | Leu | Gin |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Arg | Aap | Ala | Pro | His | Val | Glu | Pro | Asp | Phe | Ser | Ser | Gin | Lys | Leu | Gin |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
His | Leu | Glu | His | Val | Met | Glu | Asn | Tyr | Thr | Gin | Trp | Leu | Gin | Lys | Leu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Glu | Aen | Tyr | Ile | Val | Glu | Asn | Met | Lys | Ser | Glu | Met | Ala | Gin | Ile | Gin |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Gin | Asn | Ala | Val | Gin | Asn | His | Thr | Ala | Thr | Met | Leu | Glu | Ile | Gly | Thr |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Ser | Leu | Leu | Ser | Gin | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | Lys | Leu | Thr | Asp | Val |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Glu | Thr | Gin | Val | Leu | Asn | Gin | Thr | ser | Arg | Leu | Glu | Ile | Gin | Leu | Leu |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Glu | Asn | Ser | Leu | Ser | Thr | Tyr | Lys | Leu | Glu | Lys | Gin | Leu | Leu | Gin | Gin |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Thr | Asn | Glu | Ile | Leu | Lys | Ile | His | Glu | Lys | Asn | Ser | Leu | Leu | Glu | His |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Lys | Ile | Leu | Glu | Met | Glu | Gly | Lye | Hifl | Lys | G1U | Glu | Leu | Asp | Thr | Leu |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Lys | Glu | Glu | Lys | Glu | Asn | Leu | Gin | Gly | Leu | Val | Thr | Arg | Gin | Thr | Tyr |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Ile | Ile | Gin | Glu | Leu | Glu | Lys | Gin | Leu | Asn | Arg | Ala | Thr | Thr | Asn | Asn |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Ser | Val | Leu | Gin | Lys | Gin | Gin | Leu | Glu | Leu | Met | Asp | Thr | Val | His | Asn |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Leu | Val | Asn | Leu | Cys | Thr | Lys | Glu | Gly | val | Leu | Leu | Lys | Gly | Gly | Lys |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Arg | Glu | Glu | Glu | Lys | Pro | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala | A.sp | Val | Tyr | Gin | Ala |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Gly | Phe | Asn | Lys | Ser | Gly | Ile | Tyr | Thr | Ile | Tyr | Ile | Asn | Asn | Met | Pro |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Glu | Pro | Lys | Lys | Val | Phe | CyB | Asn | Met | Asp | Val | Aan | Gly | Gly | Gly | Trp |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Thr | Val | Ile | Gin | His | Arg | Glu | Asp | Gly | Ser | Leu | Asp | Phe | Gin | Arg | Gly |
305 | 310 | 31S | 320 | ||||||||||||
Trp | Lye | Glu | Tyr | Lys | Met | Gly | Phe | Gly | Αεη | Pro | Ser | Gly | Glu | Tyr | Trp |
325 | 330 | 333 | |||||||||||||
Leu | Gly | Asn | Glu | Phe | Ile | Phe | Ala | Ile | Thr | Ser | Gin | Arg | Gin | Tyr | Met |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Leu | Arg | Ile | Glu | Leu | Het | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Arg | Ala | Tyr | Ser | Gin |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Tyr | Asp | Arg | Phe | His | Ile | Gly | Asn | Glu | Lys | Gin | Asn | Tyr | Arg | Leu | Tyr |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Leu | Lys | Gly | His | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Gin | Ser | Ser | Leu | Ile | Leu |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
His | Gly | Ala | Asp | Phe | Ser | Thr | Lya | Asp | Ala | Asp | Asn | Asp | Asn | Cys | Met |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Cys | Lys | Cys | Ala | Leu | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Aap | Ala | Cys |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Gly | Pro | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Met | Phě | Tyr | Thr | Ala | Gly | GLn | Asn | His |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Gly | Lys | Leu | Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | His | Tyr | Phe | LyB | Gly | Pro | Ser | Tyr |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Ser | Leu | Arg | Ser | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Leu | Asp | Phe |
465 470 475
-59CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 8:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 480 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: zralý TL2 protein
B. lokace: 1....480
D. Jiné informace:
-60CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 8:
Ala | Ala | Tyr | Asn | Asn | Phe | Arg | Lys | Ser | Met | Asp | Ser | Ile | Gly | Lys | Lye |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Gin | Tyr | Gin | Val | Gin | His | Gly | Ser | Cys | Ser | Tyr | Thr | Phe | Leu | Leu | Pro |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Glu | Met | Asp | Asn | Cys | Arg | Ser | ser | Ser | Ser | Pro | Tyr | Val | Sér | Asn | Ala |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Val | Gin | Arg | Asp | Ala | Pro | Leu | Glu | Tyr | Asp | Asp | Ser | Val | Gin | Arg | Leu |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Gin | Val | Leu | Glu | Asn | Ile | Met | Glu | Asn | Asn | Thr | Gin | Trp | Leu | Met | Lya |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Leu | Glu | ΑΒΠ | Tyr | Ile | Gin | Asp | Asn | Met | Lys | Lys | Glu | Met | Val | Glu | Ile |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Gin | Gin | Asn | Ala | Val | Gin | Asn | Gin | Thr | Ala | Val | Met | Ile | Glu | Ile | Gly |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Thr | Asn | Leu | Leu | Asn | Gin | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | Lys | Leu | Thr | Asp |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Val | Glu | Ala | Gin | Val | Leu | Asn | Gin | Thr | Thr | Arg | Leu | G1U | Leu | Gin | Leu |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Leu | Glu | His | Ser | Leu | Ser | Thr | Asn | Lys | Leu | Glu | Lys | Gin | Ile | Leu | Asp |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Gin | Thr | Ser | Glu | Ile | Asn | Lys | Leu | Gin | Asp | Lys | Asn | Ser | Phe | Leu | Glu |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Lys | Lye | Val | Leu | Ala | Met | Glu | Asp | Lys | His | Ile | Ile | Gin | Léu | Gin | Ser |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Ile | Lys | Glu | Glu | Lye | Asp | Gin | Leu | Gin | Val | Leu | Val | Ser | Lys | Gin | Asn |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Ser | Ile | Ile | Glu | G1U | Leu | Glu | Lys | Lys | Ile | val | Thr | Ala | Thr | Val | Asn |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Asn | Ser | Val | Leu | Gin | Lys | Gin | Gin | His | Asp | Leu | Met | Glu | Thr | Val | Asn |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Asn | Leu | Leu | Thr | Met | Met | Ser | Thr | Ser | Asn | Ser | Ala | Lys | Asp | Pro | Thr |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Val | Ala | Lye | Glu | Glu | Gin | Ile | Ser | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala | Glu | Val | Phe |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Lye | Ser | Gly | His | Thr | Thr | Asn | Gly | Ile | Tyr | Thr | Leu | Thr | Phe | Pro | Asn |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Ser | Thr | Glu | Glu | Ile | Lys | Ala | Tyr | Cys | Asp | Met | Glu | Ala | Gly | Gly | Gly |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Gly | Trp | Thr | Ile | Ile | Gin | Arg | Arg | Glu | Asp | Gly | Ser | Val | Asp | Phe | Gin |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Arg | Thr | Trp | Lya | Glu | Tyr | Lys | Val | Gly | Phe | Gly | Aen | Pro | ser | Gly | Glu |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Tyr | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Phe | Val | Ser | Gin | Leu | Thr | Asn | Gin | Gin | Arg |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Tyr | Val | Leu | Lys | Ile | His | Leu | Lys | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Glu | Ala | Tyr |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Ser | Leu | Tyr | Glu | His | Phe | Tyr | Leu | Ser | Ser | Glu | Glu | Leu | Asn | Tyr | Arg |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Ile | His | Leu | Lys | Gly | Leu | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | LyB | Ile | Ser | Ser | Ile |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Ser | Gin | Pro | Gly | Asn | Asp | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Gly | Asp | Asn | Asp | Lys |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Cya | ile | Cys | Lys | Cys | Ser | Gin | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Ala | Cye | Gly | Pro | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Met | Tyr | Tyr | Pro | Gin | Arg | Gin |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Asn | Thr | Asn | Lys | Phe | Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | Tyr | Tyr | Trp | Lys | Gly | Ser |
450 | 45S | 460 | |||||||||||||
Gly | Tyr | Ser | Leu | Lys | Ala | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Ala | Asp | Phe |
465 | 470 | 475 | 480 |
-61 CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 9:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 1849 párů bází
B. Typ: nukleová kyselina
C. Rozvětvení: j eden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: kódující sekvence
B. lokace: 47..1573
D. Jiné informace:
A. jméno/klíč: TIE ligand 3
B. lokace: 1....1849
D. Jiné informace: fíbrinogenová doména začíná v poloze 929 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 9:
CTGTCCTGGT ACCTGACAAG ACCACCTCAC CACCACTTGG TCTCAG ATG CTC TGC S5
Met Leu Cye
CAG CCA GCT ATG | CTA Leu | CTA Leu | GAT Asp 10 | GGC CTC Gly Leu | CTC CTG | CTG GCC ACC | ATG Met | GCT Ala | 103 | |||||||
Gin | Pro Ala S | Het | Leu | Leu | Leu 15 | Ala | Thr | |||||||||
GCA | GCC | CAG | CAC | AGA | GGG | CCA | GAA | GCC | GGT | GGG | CAC | CGC | CAG | ATT | CAC | 151 |
Ala 20 | Ala | Gin | His | Arg | Gly 25 | Pro | Glu | Ala | Gly | Cly 30 | His | Arg | Gin | Ile | His 35 | |
CAG | GTC | CGG | CGT | GGC | CAG | TGC | AGC | TAC | ACC | TTT | GTG | GTG | CCG | GAG | CCT | 199 |
Gin | Val | Arg | Arg | Gly 40 | Gin | Cye | Ser | Tyr | Thr 45 | Phe | Val | Val | Pro | Glu 50 | Pro | |
GAT | ATC | TGC | CAG | CTG | GCG | CCG | ACA | GCG | GCG | CCT | GAG | GCT | TTG | GGG | GGC | 247 |
Asp | Ile | Cya | Gin 55 | Leu | Ala | Pro | Thr | Ala 60 | Ala | Pro | Clu | Ala | Leu 65 | Cly | Gly | |
TCC | AAT | AGC | CTC | CAG | AGG | GAC | TTG | CCT | GCC | TCG | AGG | CTG | CAC | CTA | ACA | 295 |
Šer | Asn | Ser 70 | Leu | Gin | Arg | Asp | Leu 75 | Prů | Ala | Ser | Arg | Leu 80 | His | Leu | Thr | |
GAC | TGG | CGA | GCC | CAG | AGG | GCC | CAG | CGG | GCC | CAG | CGT | GTG | AGC | CAG | CTG | 343 |
Asp | Trp 85 | Arg | Ala | Gin | Arg | Ala 90 | Gin | Arg | Ala | Gin | Arg 95 | Val | Ser | Gin | Leu | |
GAG | AAG | ATA | CTA | GAG | AAT | AAC | ACT | CAG | TGG | CTG | CTG | AAG | CTG | GAG | CAG | 391 |
Glu 100 | Lys | Ile | Leu | Glu | Αβη 105 | Asn | Thr | Gin | Trp | Leu 110 | Leu | Lys | Leu | Glu | Gin 115 | |
TCC | ATC | AAG | GTG | AAC | TTG | AGG | TCA | CAC | CTG | GTG | CAG | GCC | CAG | CAG | GAC | 439 |
Ser | Ile | Lys | Val | Asn 120 | Leu | Arg | Ser | His | Leu 125 | Val | Gin | Ala | Gin | Gin 130 | Asp |
-62CZ 295371 B6
ACA ATC | CAG Gin | AAC CAG ACA ACT ACC | ATG Met 140 | CTG Leu | GCA CTG GGT GCC | AAC Asn | CTC Leu | 487 | ||||||||
Thr | Ile | ΑΒΠ 135 | Gin | Thr Thr Thr | Ala Leu | Gly | Ala 145 | |||||||||
ATG | AAC | CAG | ACC | AAA | GCT | CAG | ACC | CAC | AAG | CTG | ACT | GCT | GTG | GAG | GCA | 535 |
Met | Asn | Gin 150 | Thr | Lys | Ala | Gin | Thr 155 | His | Lys | Leu | Thr | Ala 160 | Val | Glu | Ala | |
CAG | GTC | CTA | AAC | CAG | ACA | TTG | CAC | ATG | AAG | ACC | CAA | ATG | CTG | GAG | AAC | 583 |
Gin | Val 165 | Leu | Asn | Gin | Thr | Leu 170 | His | Met | Lys | Thr | Gin 175 | Met | Leu | Glu | Asn | |
TCA | CTG | TCC | ACC | AAC | AAG | CTG | GAG | CGG | CAG | ATG | CTG | ATG | CAG | AGC | CGA | 631 |
Ser 180 | Leu | Ser | Thr | Asn | Lys 165 | Leu | Glu | Arg | Gin | Met 190 | Leu | Met | Gin | Ser | Arg 195 | |
GAG | CTG | CAG | CGG | CTG | CAG | GGT | CGC | AAC | AGG | GCC | CTG | GAG | ACC | AGG | CTG | 679 |
Glu | Leu | Gin | Arg | Leu 200 | Gin | Gly | Arg | Asn | Arg 205 | Ala | Leu | Glu | Thr | Arg 210 | Leu | |
CAG | GCA | CTG | GAA | GCA | CAA | CAT | CAG | GCC | CAG | CTT | AAC | AGC | CTC | CAA | GAG | 727 |
Gin | Ala | Leu | Glu 215 | Ala | Gin | Hle | Gin | Ala 220 | Gin | Leu | Asn | Ser | Leu 225 | Gin | Glu | |
AAG | AGG | GAA | CAA | CTG | CAC | AGT | CTC | CTG | GGC | CAT | CAG | ACC | GGG | ACC | CTG | 775 |
Lys | Arg | Glu 230 | Gin | Leu | His | Ser | Leu 235 | Leu | Gly | His | Gin | Thr 240 | Gly | Thr | Leu | |
GCT | AAC | CTG | AAG | CAC | AAT | CTG | CAC | GCT | CTC | AGC | AGC | AAT | TCC | AGC | TCC | 823 |
Ala | Asn 245 | Leu | LyB | His | Asn | Leu 250 | His | Ala | Leu | Ser | Ser 255 | Asn | Ser | Ser | Ser | |
CTG | CAG | CAG | CAG | CAG | CAG | CAA | CTG | ACG | GAG | TTT | GTA | CAG | CGC | CTG | GTA | 871 |
Leu 260 | Gin | Gin | Gin | Gin | Gin 265 | Gin | Leu | Thr | Glu | Phe 270 | Val | Gin | Arg | Leu | Val 275 | |
CGG | ATT | GTA | GCC | CAG | GAC | CAG | CAT | CCG | GŤT | TCC | TTA | AAG | ACA | CCT | AAG | 919 |
Arg | Ile | Val | Ala | Gin 280 | Asp | Gin | His | Pro | val 285 | Ser | Leu | Lys | Thr | Pro 290 | Lys | |
CCA | GTG | TTC | CAG | GAC | TGT | GCA | GAG | ATC | AAG | CGC | TCC | GGG | GTT | AAT | ACC | 967 |
Pro | Val | Phe | Gin 295 | Asp | Cys | Ala | Glu | Ile 300 | Lys | Arg | Ser | Gly | Val 305 | Asn | Thr | |
AGC | GGT | GTC | TAT | ACC | ATC | TAT | GAG | ACC | AAC | ATG | ACA | AAG | CCT | CTC | AAG | 1015' |
Ser | Gly | Val 310 | Tyr | Thr | Ile | Tyr | Glu 315 | Thr | Asn | Met | Thr | Lys 320 | Pro | Leu | Lys | |
GTG | TTC | TGT | GAC | ATG | GAG | ACT | GAT | GGA | GGT | GGC | TGG | ACC | CTC | ATC | CAG | 1063 |
val | Phe 325 | Cys | Aap | Met | Glu | Thr 330 | Asp | Gly | Gly | Gly | Trp 335 | Thr | Leu | Ile | Gin | |
CAC | CGG | GAG | GAT | GGA | AGC | GTA | AAT | TTC | CAG | AGG | ACG | TGG | GAA | GAA | TAC | 1111 |
His 340 | Arg | Glu | Asp | Gly | Ser 345 | Val | Asn | Phe | Gin | Arg 350 | Thr | Trp | Glu | Glu | Tyr 355 | |
AAA | GAG | GGT | TTT | GGT | AAT | GTG | GCC | AGA | GAG | CAC | TGG | CTG | GGC | AAT | GAG | 1159 |
Lys | Glu | Gly | Phe | Gly 360 | Asn | Val | Ala | Arg | Glu 365 | HiB | Trp | Leu | Gly | Asn 370 | Glu | |
GCT | GTG | CAC | CGC | CTC | ACC | AGC | AGA | ACG | GCC | TAC | TTG | CTA | CGC | GTG | GAA | 1207 |
Ala | Val | His | Arg 375 | Leu | Thr | Ser | Arg | Thr 380 | Ala | Tyr | Leu | Leu | Arg 385 | Val | Glu | |
CTG | CAT | CAC | TGG | GAA | GCC | CGC | CAG | ACC | TCC | ATC | CAG | TAT | GAG | AAC | TTC | 1255 |
Leu | His | Asp 390 | Trp | Clu | Gly | Arg | Gin 395 | Thr | ser | Ile | Gin | Tyr 400 | Glu | Asn | Phe |
CAG CTG | GGC Gly | AGC GAG | AGG Arg | CAG CGG TAC AGC CTC TCT GTG AAT GAC AGC | 1303 | |||||||||||
Gin | Leu 405 | Ser | Glu | Gin Arg 410 | Tyr Ser | Leu Ser Val 415 | Asn Asp Ser | |||||||||
AGC | AGT | TCA | GCA | GGG | CGC | AAG | AAC | AGC | CTG | GCT | CCT | CAG | GGC | ACC | AAG | 1351 |
Ser | Ser | Ser | Ala | Gly | Arg | Lys | Aen | ser | Leu | Ala | Pro | Gin | Gly | Thr | Lys | |
420 | 425 | 430 | 435 | |||||||||||||
TTC | AGC | ACC | AAA | GAC | ATG | GAC | AAT | GAT | AAC | TGC | ATG | TGT | AAA | TGT | GCT | 1399 |
Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Met | Asp | Asn | Asp | Asn | Cys | Met | Cys | Lys | Cys | Ala | |
440 | 445 | 450 | ||||||||||||||
CAG | ATG | CTG | TCT | CGA | GGG | TGG | TGG | TTT | GAT | GCC | TGT | GGC | CTC | TCC | AAC | 1447 |
Gin | Met | Leu | Ser | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp | Ala | Cys | Gly | Leu | ser | Asn | |
455 | 460 | 465 | ||||||||||||||
CTC | AAT | GGC | ATC | TAC | TAT | TCA | GTT | CAT | CAG | CAG | TTG | CAG | AAG | ATC | AAT | 1495 |
Leu | Asn | Gly | Ile | Tyr | Tyr | Ser | Val | His | Gin | Hle | Leu | His | Lys | Ile | Asn | |
470 | 47S | 480 | ||||||||||||||
GGC | ATC | CGC | TGG | CAC | TAC | TTC | CGA | GGC | CCC | AGC | TAC | TCA | CTG | CAC | GGC | 1543 |
Gly | Ile | Arg | Trp | His | Tyr | Phe | Arg | Gly | Pro | Ser | Tyr | Ser | Leu | Hle | Gly | |
485 | 490 | 495 | ||||||||||||||
ACA | CGC | ATG | ATG | CTG | AGG | CCA | ATG | GGT | GCC | TGA | CACACAG | CCCTGCAGAG ACT | 1596 | |||
Thr | Arg | Met | Met | Leu | Arg | Pro | Met | Gly | Ala | |||||||
500 | 505 |
GATQCCGTAG TCAGTGCCCA AATTACAAGA AAGGCACCTG
GAGGATTCTC GGGCTCATCT ATTCACCTGC CCTCTGTTGG
AACCCAGGTG TGACATTCTG CTCCCTGTTG AACCATACTC
ACTCTGTGCA GAACATCGGA CCCTCTAATT TTTCCCCCTC
CGCTGGGCCC ACCAGCTTAC GTGAAATTGC CTGCTGCATG
TGCCCAGAAA CTTGCCCCTG TGGGTGCTTG CCCGGGAATC
1656 1716 1776
1836
CCTGCCATGA ACT
1849
2. Informace o sekv. ID. NO. 10:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 509 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein
v) Typ fragmentu: interní ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: TIE ligand 3
B. lokace: 1....509
D. Jiné informace:
-64CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 10:
Met | Leu | Cys | Gin | Pro | Ala | Met | Leu | Leu | Aep | cly | Leu | Leu | Leu | Leu | Ala |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Thr | Met | Ala | Ala | Ala | Gin | His | Arg | Gly | Pro | G1U | Ala | Gly | Gly | His | Arg |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gin | Ile | His | Gin | Val | Arg | Arg | Gly | Gin | Cys | Ser | Tyr | Thr | Phe | val | Val |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Pro | Glu | Pro | Aep | Ile | Cys | Gin | Leu | Ala | Pro | Thr | Ala | Ala | Pro | Glu | Ala |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Leu | Gly | Gly | Ser | Asn | Ser | Leu | Gin | Arg | Asp | Leu | Pro | Ala | Ser | Arg | Leu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
His | Leu | Thr | Asp | Trp | Arg | Ala | Gin | Arg | Ala | Gin | Arg | Ala | Gin | Arg | Val |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Ser | Gin | Leu | Glu | Lys | Ile | Leu | Glu | Asn | Asn | Thr | Gin | Trp | Leu | Leu | Lys |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Leu | Glu | Gin | Ser | Ile | Lys | Val | Asn | Leu | Arg | Ser | His | Leu | Val | Gin | Ala |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Gin | Gin | Aep | Thr | ile | Gin | Asn | Gin | Thr | Thr | Thr | Met | Leu | Ala | Leu | Gly |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Ala | Asn | Leu | Met | Asn | Gin | Thr | Lys | Ala | Gin | Thr | His | Lys | Leu | Thr | Ala |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Val | Glu | Ala | Gin | Val | Leu | Asn | Gin | Thr | Leu | His | Met | Lys | Thr | Gin | Met |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Leu | GLU | Asn | Ser | Leu | Ser | Thr | Asn | Lys | Leu | Glu | Arg | Gin | Met | Leu | Met |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Gin | Ser | Arg | Glu | Leu | Gin | Atg | Leu | Gin | Gly | Arg | Asn | Arg | Ala | Leu | Glu |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Thr | Arg | Leu | Gin | Ala | Leu | Glu | Ala | Gin | His | Gin | Ala | Gin | Leu | Asn | Ser |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Leu | Gin | Glu | Lys | Arg | Glu | Gin | Leu | His | Ser | Leu | Leu | Gly | His | Gin | Thr |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Gly | Thr | Leu | Ala | Asn | Leu | Lys | His | Asn | Leu | His | Ala | Leu | Ser | Ser | Asn |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Ser | Ser | Ser | Leu | Gin | Gin | Gin | Gin | Gin | Gin | Leu | Thr | Glu | Phe | Val | Gin |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Arg | Leu | Val | Arg | Ile | val | Ala | Gin | ASp | Gin | His | Pro | Val | Ser | Leu | Lys |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Thr | Pro | Lys | Pro | Val | Phe | Gin | Asp | Cys | Ala | Glu | Ile | Lys | Arg | Ser | Gly |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Val | Asn | Thr | Ser | Gly | Val | Tyr | Thr | Ile | Tyr | Glu | Thr | Asn | Met | Thr | Lys |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Pro | Leu | Lys | Val | Phe | Cys | Asp | Met | Glu | Thr | Asp | Gly | Gly | Gly | Trp | Thr |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Leu | Ile | Gin | His | Arg | Glu | Asp | Gly | ser | val | Asn | Phe | Gin | Arg | Thr | Trp |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Glu | Glu | Tyr | Lys | Glu | Gly | Phe | Gly | Asn | Val | Ala | Arg | Glu | His | Trp | Leu |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Gly | Asn | Glu | Ala | Val | His | Arg | Leu | Thr | Ser | Arg | Thr | Ala | Tyr | Leu | Leu |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Arg | Val | Glu | Leu | His | Asp | Trp | Glu | Gly | Arg | Gin | Thr | Ser | Ile | Gin | Tyr |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Glu | Asn | Phe | Gin | Leu | Gly | Ser | Glu | Arg | Gin | Arg | Tyr | ser | Leu | Sér | Val |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Asn | Asp | Ser | Ser | Ser | Ser | Ala | Gly | Arg | Lys | Asn | Ser | Leu | Ala | Pro | Gin |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Gly | Thr | Lys | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Met | Asp | Asn | Asp | Asn | Cys | Met | Cys |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Lye | Cys | Ala | Gin | Met | Leu | Ser | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp | Ala | Cys | Gly |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Leu | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Ile | Tyr | Tyr | Ser | Val | His | Glň | His | Leu | His |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Lye | Ile | Asn | Gly | Ile | Arg | Trp | His | Tyr | Phe | Arg | Gly | Pro | Ser | Tyr | Ser |
485 | 490 | 495 | |||||||||||||
Leu | His | Gly | Thr | Arg | Met | Met | Leu | Arg | Pro | Met | Gly | Ala | |||
500 | 505 |
2. Informace o sekv. ID. NO. 11:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 503 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: mTL3
B. lokace: 1....503
D. Jiné informace: myší TIE ligand-3
-66CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 11:
Met Leu Leu 1 | Asp Gly 5 | Leu | Leu | Leu | Leu | Ala 10 | Thr | Met Ala | Ala | Ala 15 | Gin | ||||
His | Arg | Gly | Pro | Glu | Ala | Gly | Gly | Híb | Arg | Gin | Ile | His | Gin | Val | Arg |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Arg | Gly | Gin | Cys | Ser | Tyr | Thr | Phe | Val | Val | Pro | Glu | Pro | Asp | Ile | Cys |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Gin | Leu | Ala | Pro | Thr | Ala | Ala | Pro | Glu | Ala | Leu | Gly | Gly | Ser | Aan | Ser |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Leu | Gin | Arg | Asp | Leu | Pro | Ala | Ser | Arg | Leu | His | Leu | Thr | Asp | Trp | Arg' |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Ala | Gin | Arg | Ala | Gin | Arg | Ala | Gin | Arg | Val | Ser | Gin | Leu | Glu | Lys | Ile |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Glu | Asn | Asn | Thr | Gin | Trp | Leu | Leu | Lys | Leu | Glu | Gin | Ser | Ile | Lys |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Val | ASn | Leu | Arg | Ser | His | Leu | Val | Gin | Ala | Gin | Gin | Asp | Thr | Ile | Gin |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Asn | Gin | Thr | Thr | Thr | Het | Leu | Ala | Leu | Gly | Ala | Asn | Leu | Met | Asn | Gin |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Thr | Lys | Ala | Gin | Thr | His | Lys | Leu | Thr | Ala | Val | Glu | Ala | Gin | Val | Leu |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Asn | Gin | Thr | Leu | His | Met | Lys | Thr | Gin | Met | Leu | Glu | Asn | Ser | Leu | Ser |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Thr | Asn | Lys | Leu | Clu | Arg | Gin | Met | Leu | Met | Gin | Ser Arg | Glu | Leu | Gin | |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Arg | Leu | Gin | Gly | Arg | Asn | Arg | Ala | Leu | Glu | Thr | Arg | Leu | Gin | Ala | Leu |
19 S | 200 | 205 | |||||||||||||
Glu | Ala | Gin | His | Gin | Ala | Gin | Leu | Asn | Ser | Leu | Gin | Glu | Lys | Arg | Glu |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Gin | Leu | His | ser | Leu | Leu | Gly | His | Gin | Thr | Gly | Thr | Leu | Ala | Asn | Leu |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Lys | His | Asn | Leu | Hie | Ala | Leu | Ser | Ser | Asn | Ser | Ser | Ser | Leu | Gin | Gin |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Gin | Gin | Gin | Gin | Leu | Thr | Glu | Phe | Val | Gin | Arg | Leu | Val | Arg | Ile | Val |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Ala | Gin | Asp | Gin | His | Pro | Val | Ser | Leu | Lys | Thr | Pro | Lys | Pro | Val | Phe |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Gin | Asp | Cys | Ala | Glu | Ile | Lys | Arg | Ser | Gly | Val | Asn | Thr | Ser | Gly | Val |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Tyr | Thr | Ile | Tyr | Glu | Thr | Asn | Met | Thr | Lys | Pro | Leu | Lys | Val | Phe | Cys |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Asp | Met | Glu | Thr | Asp | Gly | Gly | Gly | Trp | Thr | Leu | Ile | Gin | Hie | Arg | Glu |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Asp | Gly | Ser | Val | Asn | Phe | Gin | Arg | Thr | Trp | Glu | Glu | Tyr | Lys | Glu | Gly |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Phe | Gly | Asn | Val | Ala | Arg | Glu | His | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Ala | Val | His |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Arg | Leu | Thr | Ser | Arg | Thr | Ala | Tyr | Leu | Leu | Arg | Val | Glu | Leu | His | Asp |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Trp | Glu | Gly | Arg | Gin | Thr | Ser | Ile | Gin | Tyr | Glu | Asn | Phe | Gin | Leu | Gly |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Ser | Glu | Arg | Gin | Arg | Tyr | Ser | Leu | Ser | Val | Asn | Asp | Ser | Ser | Ser | Ser |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Ala | Gly | Arg | Lys | Asn | Ser | Leu | Ala | Pro | Gin | Gly | Thr | Lys | Phe | Ser | Thr |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Lys | Asp | Met | Aep | Asn | Asp | Asn | Cys | Met | Cys | LyS | Cys | Ala | Gin | Met | Leu |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Ser | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp | Ala | Cys | Gly | Leu | Ser | Asn | Leu | Αβη | Gly |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Ile | Tyr | Tyr | ser | Val | His | Gin | His | Leu | His | Lys | Ile | Asn | Gly | Ile | Arg |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Trp | His | Tyr | Phe | Arg | Gly | Pro | Ser | Tyr | Ser | Ile | His | Gly | Thr | Arg | Het |
485 | 490 | 495 | |||||||||||||
Met | Leu | Arg | Pro | Met | Gly | Ala | |||||||||
500 |
-67CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 12:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 480 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein ix) Charakteristika
A. jméno/klíě: hTLl
B. lokace: 1....490
D. Jiné informace: lidský TIE-2 ligand 1
-68CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 12:
Ala Phe 1 | Leu | Ala Ala 5 | Ile | Leu Thr His Ile Gly Cys 10 | Ser | Asn | Gin 15 | Arg | |||||||
Arg | ser | Pro | Glu | Asn | Ser | Gly | Arg | Arg | Tyr | Asn | Arg | Ile | Gin | His | Gly |
20 | 28 | 30 | |||||||||||||
Gin | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe | Ile | Leu | Pro | Glu | His | Asp | Gly | Asn | Cys | Arg |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | Ser | Thr | Thr | Asp | Gin | Tyr | Asn | Thr | Asn | Ala | Leu | Gin | Arg | Asp | Ala |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Pro | His | Val | Glu | Pro | Asp | Phe | Ser | Ser | Gin | Lys | Leu | Gin | His | Leu | Glu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
His | Val | Met | Glu | Asn | Tyr | Thr | Gin | Trp | Leu | Gin | Lys | Leu | Glu | Asn | Tyr |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Ile | Val | Glu | Asn | Met | Lys | Ser | Glu | Met | Ala | Gin | Ile | Gin | Gin | Asn | Ala |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Val | Gin | Asn | His | Thr | Ala | Thr | Met | Leu | Glu | Ile | Gly | Thr | Ser | Leu | Leu |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Ser | Gin | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | Lys | Leu | Thr | Asp | Val | Glu | Thr | Gin |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Val | Leu | Asn | Gin | Thr | Ser | Arg | Leu | Glu | Ile | Gin | Leu | Leu | Glu | Asn | Ser |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Leu | Ser | Thr | Tyr | Lys | Leu | Glu | Lys | Gin | Leu | Leu | Gin | Gin | Thr | Asn | Glu |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Ile | Leu | Lys | Ilé | His | Glu | Lys | Asn | Ser | Leu | Leu | Glu | His | Lys | Ile | Leu |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Glu | Met | Glu | Gly | Lys | His | Lys | Glu | Glu | Leu | Asp | Thr | Leu | Lys | Glu | Glu |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Lys | Glu | Asn | Leu | Gin | Gly | Leu | Val | Thr | Arg | Gin | Thr | Tyr | Ile | ile | Gin |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Glu | Leu | Glu | Lys | Gin | Leu | Asn | Arg | Ala | Thr | Thr | Asn | Asn | Ser | Val | Leu |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Gin | Lys | Gin | Gin | Leu | Glu | Leu | Met | Asp | Thr | Val | His | Asn | Leu | Val | Asn |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Leu | Cys | Thr | Lys | Glu | Val | Leu | Leu | Lys | Gly | Gly | Lys | Arg | Glu | Glu | Glu |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Lys | Pro | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala | Asp | Val | Tyr | Gin | Ala | Gly | Phe | Asn | Lys |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Ser | Gly | Ile | Tyr | Thr | Ile | Tyr | Ile | Asn | Asn | Met | Pro | Glu | Pro | Lys | Lys |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Val | Phe | Cys | Asn | Met | Asp | Val | Asn | Gly | Gly | Gly | Trp | Thr | Val | Ile | Gin |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
His | Arg | Glu | Αβρ | Gly | Ser | Leu | Asp | Phe | Gin | Arg | Gly | Trp | Lys | Glu | Tyr |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Lys | Met | cly | Phe | Gly | Asn | Pro | ser | Gly | Glu | Tyr | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Phe | Ile | Phe | Ala | Ile | Thr | Ser | Gin | Arg | Gin | Tyr | Met | Leu | Arg | Ile | Glu |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Leu | Met | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Arg | Ala | Tyr | Ser | Gin | Tyr | Asp | Arg | Phe |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
His | Ile | Gly | Asn | Glu | Lys | Gin | Asn | Tyr | Arg | Leu | Tyr | Leu | Lys | Gly | His |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Gin | Ser | Ser | Leu | Ile | Leu | His | Gly | Ala | Asp |
405 | 410 | 41S | |||||||||||||
Phe | Ser | Thr | Lys | Αβρ | Ala | Asp | Asn | Asp | Asn | Cys | Met | Cys | Lys | Cys | Ala |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Leu | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp | Ala | Cys | Gly | Pro | Ser | Asn |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Leu | Asn | Gly | Met | Phe | Tyr | Thr | Ala | Gly | Gin | Asn | His | Gly | Lys | Leu | Asn |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Gly | Ile | Lys | Trp | HiS | Tyr | Phe | Lys | Gly | Pro | Ser | Tyr | Ser | Ile | Arg | Ser |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Leu | Asp | Phe | ||||||
485 | 490 |
-69CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 13:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 491 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: hTLl
B. lokace: 1....491
D. Jiné informace: kuřecí TIE-2 ligand 1 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 13:
Ala | Phe | Leu | Ala | Ala | Ile | Leu | Ala | His | Ile | Gly | Cys | Thr | Thr | Gin | Arg |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Arg | Ser | Pro | Glu | Asn | Ser | Gly | Arg | Arg | Phe | Asn | Arg | Ile | Gin | His | Gly |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gin | Cys | Thr | Tyr | Thr | Phe | Ile | Leu | Pro | Glu | Gin | Asp | Gly | Asn | cys | Arg |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | Ser | Thr | Thr | Asp | Gin | Tyr | Asn | Thr | Asn | Ala | Leu | Gin | Arg | Asp | Ala |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Pro | His | Val | Glu | Gin | Asp | Phe | Ser | Phe | Gin | Lys | Leu | Gin | His | Leu | Glu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Hle | Val | Met | Glu | Asn | Tyr | Thr | Gin | Trp | Leu | Gin | Lys | Leu | Glu | Ser | Tyr |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Ile | Val | Glu | Asn | Met | Lys | Ser | Glu | Met | Ala | Gin | Leu | Gin | Gin | Asn | Ala |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Val | Gin | Asn | His | Thr | Ala | Thr | Met | Leu | Glu | Ile | Gly | Thr | Ser | Leu | Leu |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Ser | Gin | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | Lys | Leu | Thr | Asp | Val | Glu | Thr | Gin |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Val | Leu | Asn | Gin | Thr | Ser | Arg | Leu | Glu | Ile | Gin | Leu | Leu | Glu | Asn | Ser |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Leu | Ser | Thr | Tyr | Lys | Leu | Glu | Lys | Gin | Leu | Leu | Gin | Gin | Thr | Asn | Glu |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Ile | Leu | Lys | Ile | His | Glu | Lys | Asn | Ser | Leu | Leu | Glu | His | Lys | Ile | Leu |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Glu | Met | Glu | Glu | Arg | His | Lys | Glu | Glu | Met | Asp | Thr | Leu | Lys | Glu | Glu |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Lys | Glu | Asn | Leu | Gin | Gly | Leu | Val | Thr | Arg | Gin | Ser | Tyr | Ile | Ile | Gin |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Glu | Leu | Glu | Lys | Gin | Leu | Asn | Lys | Ala | Thr | Thr | Asn | Asn | Ser | Val | Leu |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Gin | Lys | Gin | Gin | Leu | Glu | Leu | Met | Asp | Thr | Val | His | Thr | Leu | Ile | Thr |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Leu | Cys | Ser | Lys | Glu | Gly | Val | Leu | Leu | Lys | Asn | Ala | Lys | Arg | Glu | Glu |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
GlU | Lys | Pro | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala | Asp | Val | Tyr | Gin | Ala | Gly | Phe | Asn |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Lys | Ser | Gly | Ile | Tyr | Thr | Ile | Tyr | Ile | Asn | Asn | Val | Ser | Asp | Pro | Lys |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Lys | Val | Phe | Cys | Asn | Met | Asp | Val | Asn | Gly | Gly | Gly | Trp | Thr | Val | Ile |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Gin | His | Arg | Glu | Asp | Gly | Ser | Leu | Asp | Phe | Gin | Lys | Gly | Trp | Lys | Glu |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Tyr | Lys | Met | Gly | Phe | Gly | Ser | Pro | Ser | Gly | Glu | Tyr | Trp | Leu | Gly | Asn |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Glu | Phe | Ile | Phe | Ala | Ile | Thr | ser | Gin | Arg | Gin | Tyr | Ser | Leu | Arg | Ile |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Glu | Leu | Met | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Arg | Ala | Tyr | Ser | Gin | Tyr | Asp | Arg |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Phe | Hle | Ile | Gly | Asn | Glu | Lys | Gin | Asn | Tyr | Arg | Leu | Tyr | Leu | Lys | Gly |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Hle | Ser | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Gin | Ser | Ser | Leu | Ile | Leu | His | Gly | Ala |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Glu | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Ala | Asp | Asn | ASp | Asn | Cys | Met | Cys | Lys | Cys |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Ala | Leu | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp | Ala | Cys | Gly | Pro | Ser |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Asn | Leu | Asn | Gly | Met | Phe | Tyr | Thr | Ala | Gly | Gin | Asn | His | Gly | Lys | Leu |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | His | Tyr | Phe | Lys | Gly | pro | Arg | Tyr | Ser | Ile | Arg |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Ser | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Leu | Asp | Phe | |||||
485 | 490 |
2. Informace o sekv. ID. NO. 14:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 497 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: mTLl
B. lokace: 1....497
D. Jiné informace: myší TIE-2 ligand 1
-71 CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 14:
Met | Thr | val | Phe Leu | Ser | Phe | Ala | Phe Phe Ala Ala | Ile | Leu | Thr | His | ||||
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ile | Gly | Cys | Ser | Asn | Gin | Arg | Arg | Asn | Pro | Glu | Asn | Ser | Gly | Arg | Arg |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Tyr | Asn | Arg | Ile | Gin | His | Gly | Gin | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe | Ile | Leu | Pro |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | His | Asp | Gly | Asn | Cys | Arg | Glu | Ser | Thr | Thr | Asp | Gin | Tyr | Asn | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asn | Ala | Leu | Gin | Arg | Asp | Ala | Pro | His | Val | Glu | Pro | Asp | Phe | Ser | Ser |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Gin | Lys | Leu | Gin | His | Leu | Glu | His | Val | Met | Glu | Asn | Tyr | Thr | Gin | Trp |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Gin | Lys | Leu | Glu | Asn | Tyr | Ile | Val | Glu | Asn | Met | Lys | Ser | Glu | Met |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Ala | Gin | Ile | Gin | Gin | Asn | Ala | Val | Gin | Asn | His | Thr | Ala | Thr | Met | Leu |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Glu | Ile | Gly | Thr | Ser | Leu | Leu | Ser | Gin | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | Lys |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Leu | Thr | Asp | val | Glu | Thr | Gin | val | Leu | Asn | Gin | Thr | ser | Arg | Leu | Glu |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Ile | Gin | Leu | Leu | Glu | Asn | Ser | Leu | Ser | Thr | Tyr | Lys | Leu | Glu | Lys | Gin |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Leu | Leu | Gin | Thr | Asn | Glu | Ile | Leu | Lys | Ile | His | Glu | Lys | Asn | Ser | Leu |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Leu | Glu | His | Lys | Ile | Leu | Glu | Met | Glu | Gly | Lys | His | Lys | Glu | Glu | Met |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Asp | Thr | Leu | Lys | Glu | Glu | Lys | Glu | Asn | Leu | Gin | Gly | Leu | Val | Ser | Arg |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Gin | Ser | Phe | Ile | Ile | Gin | Glu | Leu | GlU | Lys | Gin | Leu | Ser | Arg | Ala | Thr |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Asn | Asn | Asn | Ser | Ile | Leu | Gin | Lys | Gin | Gin | Leu | Glu | Leu | Met | Asp | Thr |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Val | His | Asn | Leu | Ile | Ser | Leu | Cys | Thr | Lys | Glu | Gly | Val | Leu | Leu | Lys |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Gly | Gly | Lys | Arg | Glu | Glu | Glu | Lys | Pro | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala | Asp | Val |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Tyr | Gin | Ala | Gly | Phe | Asn | Lys | Ser | Gly | Ile | Tyr | Thr | Ile | Tyr | Phe | Asn |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Asn | Val | Pro | Glu | Pro | Lys | Lys | Val | Phe | Cys | Asn | Met | Asp | Val | Asn | Gly |
30S | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Gly | Gly | Trp | Thr | Val | Ile | Gin | His | Arg | Glu | Asp | Gly | Ser | Leu | Asp | Phe |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Gin | Lys | Gly | Trp | Lys | Glu | Tyr | Lys | Met | Gly | Phe | Gly | Ser | Pro | Ser | Gly |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Glu | Tyr | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Phe | Ile | Phe | Ala | Ile | Thr | Ser | Gin | Arg |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Gin | Tyr | Met | Leu | Arg | Ile | Glu | Leu | Met | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Arg | Ala |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Tyr | Ser | Gin | Tyr | Asp | Arg | Phe | His | Ile | Gly | Asn | Glu | Lys | Gin | Asn | Tyr |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Arg | Leu | Tyr | Leu | Lys | Gly | His | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lye | Gin | Ser | Ser |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Leu | Ile | Leu | His | Gly | Ala | Asp | Phe | ser | Thr | Lys | Asp | Ala | Asp | Asn | Asp |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Asn | Cys | Met | Cys | Lys | Cys | Ala | Leu | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Asp | Ala | Cys | Gly | Pro | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Met | Phe | Tyr | Thr | Ala | Gly |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Gin | Asn | His | Gly | Lys | Leu | Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | His | Tyr | Phe | Lys | Gly |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Pro | Arg | Tyr | Ser | Ile | Arg | Ser | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Leu | Asp |
485 | 490 | 495 | |||||||||||||
Phe |
-72CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 15:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 496 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: mTL2
B. lokace: 1....496
D. Jiné informace: myší TIE-2 ligand 2
-73 CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 15:
Met Trp ' | Gin | Ile | Ile | Phe | Leu | Thr | Phe | Gly Trp | Asp | Ala | Val | Leu | Thr | ||
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ser Ala | Tyr | Ser | Asn | Phe | Arg | Lys | Ser | Val | Asp | Ser | Thr | Gly | Arg | Arg | |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Arg | Tyr | Arg | Ile | Gin | Asn | Gly | Pro | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe | Leu | Leu | Pro |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | Thr | Asp | Ser | Gly | Arg | Ser | Ser | Ser | Ser | Thr | Tyr | Met | Thr | Asn | Ala |
50 | S5 | 60 | |||||||||||||
Val | Gin | Arg | Asp | Ala | Pro | Pro | Asp | Tyr | Glu | Asp | Ser | Val | Gin | Ser | Leu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Gin | Leu | Leu | Glu | Asn | Val | Met | Glu | Asn | Tyr | Thr | Gin | Trp | Leu | Met | Lys |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Glu | Asn | Tyr | Ile | Gin | Asp | Asn | Met | Lys | Lys | Glu | Met | Ala | Glu | Ile |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Gin | Gin | Asn | Val | Val | Gin | Asn | H1B | Thr | Ala | Val | Met | Ile | Glu | Ile | Gly |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Thr | Ser | Leu | Leu | Ser | Gin | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | Lys | Leu | Thr | Asp |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Val | Glu | Thr | Gin | Val | Leu | Asn | Gin | Thr | Thr | Arg | Leu | Glu | Leu | Gin | Leu |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Leu | Gin | His | Ser | Ile | Ser | Thr | Tyr | Lys | Leu | Glu | Lye | Gin | Ile | Leu | Asp |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Gin | Thr | Ser | Glu | Ile | Asn | Lys | Ile | His | Asn | Lys | Asn | Ser | Phe | Leu | Glu |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Gin | Lys | Val | Leu | Asp | Met | Glu | Gly | Lys | His | Ser | Glu | Glu | Met | Gin | Thr |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Met | Lys | Glu | Gin | Lys | Asp | Glu | Leu | Gin | Val | Leu | Val | Ser | Lys | Gin | Ser |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Ser | Val | Ile | Asp | Glu | Leu | Glu | Lys | Lys | Leu | Val | Thr | Ala | Thr | Val | Asn |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Asn | Ser | Leu | Leu | Gin | Lys | Gin | Gin | His | Asp | Leu | Met | Asp | Thr | Val | Asn |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Ser | Leu | Leu | Thr | Met | Met | Ser | Ser | Pro | ASn | Ser | Lys | Ser | Ser | Leu | Ala |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Ile | Arg | Arg | Glu | Glu | Gin | Thr | Thr | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala | Asp | val | Phe |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Lys | Ala | Gly | Leu | Thr | Lys | Ser | Gly | Ile | Tyr | Thr | Leu | Thr | Phe | Pro | Asn |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Ser | Pro | Glu | Glu | Ile | Lys | Ala | Tyr | Cys | Asn | Met | Asp | Val | Gly | Gly | Gly |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Gly | Trp | Thr | Val | Ile | Gin | His | Arg | Glu | Asp | Gly | Ser | Leu | Asp | Phe | Gin |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Lys | Gly | Trp | Lys | Glu | Tyr | Lys | Met | Gly | Phe | Gly | Asn | Pro | Leu | Gly | Glu |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Tyr | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Phe | Ile | Ser | Gin | Ile | Thr | Gly | Gin | His | Arg |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Tyr | Val | Leu | Lys | Ile | Gin | Leu | Lys | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Glu | Ala | His |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Ser | Leu | Tyr | Asp | His | Phe | Tyr | Ile | Ala | Gly | Glu | Glu | Ser | Asn | Tyr | Arg |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Ile | His | Leu | Thr | Gly | Leu | Thr | Gly | Thr | Ala | Ala | Lys | Ile | Ser | Ser | Ile |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Ser | Gin | Pro | Gly | Ser | Asp | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Ser | Asp | Asn | Asp | Lys |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Cys | Ile | Cys | Lys | Cys | Ser | Leu | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Ala | Cys | Gly | Pro | Šer | Asn | Leu | Asn | Gly | Gin | Phe | Tyr | Pro | Gin | Lys | Gin |
4S0 | 4S5 | 460 | |||||||||||||
Asn | Thr | Asn | Lys | Phe | Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | Tyr | Tyr | Trp | Lys | Gly | Ser |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Gly | Tyr | Ser | Ile | Lys | Ala | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Ala | Asp | Phe |
485 | 490 | 495 |
2. Informace o sekv. ID. NO. 16:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 496 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: mTL2
B. lokace: 1....496
D. Jiné informace: myší TIE-2 ligand 2
-75CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 16:
Met Trp Gin | ile | val | Phe | Phe | Thr | Leu | ser | Cys | Asp | Ala | Val | Leu | Thr | ||
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ala Ala Tyr | Aen 20 | Asn | phe | Arg | Lye | ser 25 | Met | Aep | Ser | ile | Oly Lys 30 | Lye | |||
Arg | Tyr | Arg | Ile | Gin | His | Oly | Ser | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe | Leu | Leu | Pro |
35 | 40 | 4$ | |||||||||||||
Glu | Met | Asp | A«n | Gly Arg | Ber | Ser | Ser | Ser | Thr | Tyr | Val | ZNhti» | Asn | Ala | |
50 | 55. | «0 | |||||||||||||
Val | Gin | Arg | AS» | Ala | Pro | Pro | Glu | Tyr | Glu | Asp | ser'val | Gin | Ser | Leu | |
es | 70 | 75 | eo | ||||||||||||
Gin Lau | Leu | Glu | Asn | Val | Met | Glu | Tyr Thr | Gin | Trp | Leu | Met | Lye | |||
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Glu | Aen | Tyr | Zle | Gin | Aep | Asn | Met | Lys Lys | GlU | Mat | Ala | Glu | Zle | |
100 | 10$ | 110 | |||||||||||||
Gin | Gin | Asn | Val | Gin | Asn | His | Thr | Ala val | Mat | Ile | GlU | Ile | Giy | ||
lis | 120 | 12S | |||||||||||||
Thr | Ser | Leu | Leu | Ser | cm | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | Lys | Leu | Thr | |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Val | Glu | Thr | Gin | val | Leu | Aen | Gin | Thr | Thr | Arg | Leu | Glu | Leu | Gin | Leu |
145 | 150 | 1S5 | 160 | ||||||||||||
Lau | Gin | His | ser | Ile | Ser | Thr | Tyr | Lys | Leu | Glu | Lys | Gin | Zla | Leu | ASP |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Gin | Thr | Ser | Glu | Ile | Asn | Lye | Ile | Mls | As» Lys | Asn | Ser | Phe | Leu | Glu | |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Lye | Lys | Val | Leu | Asp | Met | Glu | Asp Lys | Kle | Zle | Ile | Glu | Met | Gin | Thr | |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Ile | Lys | Glu | Glu | Lys | Asp | Glu | Leu | Gin | val | Leu | Val | Ser | Lye | Gin | Aan |
210 | 215 | 220 | Val | ||||||||||||
Ser | Iltt | Ile | Glu | Olu | Leu | Glu | Lys | Lye | Ile | Val | Thr | Ala | Thr | Asn | |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Asn | Ser | Val | Leu | Gin | Lys | Gin | Gin | His | Aap | Leu Met | Asp | Thr | Val | Asn | |
2 45 | 250 | 25S | |||||||||||||
Aín | Leu | Leu | Thr | Met | Met | ser | Thr | Ser | Asn | Ber | Ala | Lye | Asp | Ser | Thr |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
val | Ala | Arg | Glu | Glu | Gin | Ile | Ser | Phe | Arg Asp | cys | Ala | Asp | Val | Phe | |
275 | 280 | 28S | |||||||||||||
Lye | ΐλΧ> Λ | Gly | His | Thr | Lys | Asn | Gly | Zits | Tyr Thr | Leu | Thr | Phe | Pro | ||
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Ser | Prc | Glu | GXxi | Ile | Lys | íí | Tyr | Cys | Aen | MSt | Aep | Ala | Gly | Gly Gly | |
305 | 310 | 31S | 320 | ||||||||||||
Gly Trp | Thr | Ile | Ile | Gin | Arg Arg | Glu | Αβρ Gly | Ser | Leu | Asp | Phe Gin | ||||
32S | 330 | 335 | |||||||||||||
Lye Gly | Trp | Lys | G1U | Tyr | Lys | Val | CíLy | Phe | Gly | Ser | Pro | Ser | Gly | GLu | |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Tyr Trp | Leu | Gly | Asn | Olu | Phe | Zle | Ser | Gin | Ile | Thr | Asn | Gin | Cln | Arg | |
365 | 360 | 36S | |||||||||||||
Tyr | val | Leu | Lya | Ile | Hle | Leu | Lys | λβρ | Trp | G1U | Gly | Asn | Glu | Ala | Tyr |
370 | 376 | 380 | |||||||||||||
Ser | Leu | Tyr | Asp | His | Phe | Tyr | Ile | Ser | Gly | Glu | Glu | Leu | Asn | Tyr | Arg |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Ile | His | Leu | Lye | Gly | Leu | Thr | Gly | Thr | Ala | Lys | Ile | ser | ser | XXcs | |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
ser | Gin | Pro | oiy | Asn | ASp | Phe | ser | Thr | Lys | Asp Gly | Asp | Asn | Asp Lys | ||
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Cye | Ile | cys | Lys | cys | Ser | Χ*θνι | Mat | Leu | Thr | Gly | Qiy | Trp | Trp | Phe Asp | |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Ala | Cys | Gly | pro | ser | Aoft | Leu | Asn | Cly | Het | Phe | Tyr | Pro | Gin | Arg | Gin |
450 | 455 | 460 | ||||||||||||
Asn | Thr | Asn | Lys | Phe | Asn | GLy | Ile | Lys | Trp | Tyr | Tyr | Trp | Lys Gly | Ser |
465 | 470 | 475 | 480 | |||||||||||
Gly | Tyr | Ser | Ile | Lys | Ala | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Ala Asp | Phe |
485 | 490 | 495 |
-76CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 17:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 1512 párů bází
B. Typ: nukleová kyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: kódující sekvence
B. lokace: 1....1509
D. Jiné informace:
A. jméno/klíč: TIE ligand-4
B. lokace: 1....1512
D. Jiné informace:
xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 17:
ATG CTC TCC CAG | CTA GCC | ATG Met | CTG Leu | CAG GGC AGC CTC | CTC Leu | CTT GTG | GTT Val | 48 | ||||||||
Met 1 | Leu | Ser Gin | Leu 5 | Ala | Gin | Gly 10 | Ser | Leu | Leu | Val 15 | ||||||
GCC | ACC | ATG | TCT | GTG | GCT | CAA | CAG | ACA | AGG | CAG | GAG | GGG | GAT | AGG | GGC | 96 |
Ala | Thr | Met | Ser | Val | Ala | Gin | Gin | Thr | Arg | Gin | Glu | Ala | Asp | Arg | Gly | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
TGC | GAG | ACA | CTT | GTA | GTC | CAG | CAC | GGC | CAC | TGT | AGC | TAC | ACC | TTC | TTG | 144 |
Cys | Glu | Thr | Leu | Val | Val | Gin | His | Gly | HlS | Cys | Ser | Tyr | Thr | Phe | Leu | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
CTG | ccc | AAG | TCT | GAG | ccc | TGC | CCT | CCG | GGG | CCT | GAG | GTC | TCC | AGG | GAC | 192 |
Leu | Pro | Lys | Ser | Glu | Pro | Cys | Pro | Pro | Gly | Pro | Glu | Val | ser | Arg | Asp | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
TCC | AAC | ACC | CTC | CAG | AGA | GAA | TCA | CTG | GCC | AAC | CCA | CTG | CAC | CTG | GGG | 240 |
Ser | Asn | Thr | Leu | Gin | Arg | Glu | Ser | Leu | Ala | Asn | Pro | Leu | His | Leu | Gly | |
es | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
AAG | TTG | ccc | ACC | CAG | CAG | GTG | AAA | CAG | CTG | GAG | CAG | GCA | CTG | CAG | AAC | 288 |
Lys | Leu | Pro | Thr | Gin | Gin | Val | Lys | Gin | Leu | Glu | Gin | Ala | Leu | Gin | ASn | |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
AAC | ACG | CAG | TGG | CTG | AAG | AAG | CTA | GAG | AGG | GCC | ATC | AAG | ACG | ATC | TTG | 336 |
Asn | Thr | Gin | Trp | Leu | Lys | Lys | Leu | Glu | Arg | Ala | Ile | Lys | Thr | Ile | Leu | |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
AGG | TCG | AAG | CTG | GAG | CAG | GTC | CAG | CAG | CAA | ATG | GCC | CAG | AAT | CAG | ACG | 384 |
Arg | Ser | Lys | Leu | Glu | Gin | val | Gin | Gin | Gin | Met | Ala | Gin | Asn | Gin | Thr | |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
GCC | ccc | ATG | CTA | GAG | CTG | GGC | ACC | AGC | CTC | CTG | AAC | CAG | ACC | ACT | GCC | 432 |
Ala | Pro | Met | Leu | Glu | Leu | Gly | Thr | Ser | Leu | Leu | Asn | Gin | Thr | Thr | Ala | |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
CAG | ATC | CGC | AAG | CTG | ACC | GAC | ATG | GAG | GCT | CAG | CTC | CTG | AAC | CAG | ACA | 480 |
Gin | Ile | Arg | Lys | Leu | Thr | Asp | Met | Glu | Ala | Gin | Leu | Leu | Asn | Gin | Thr |
-ΊΊCZ 295371 B6
145 1S0 15 5 160
TCA AGA Ser Arg | ATG Met | GAT Asp | GCC Ala 165 | CAG ATG | CCA GAG ACC TTT | CTG TCC ACC | AAC Asn 175 | AAG Lys | 528 | |||||||
Gin | Met | Pro | Glu | Thr 170 | Phe | Leu | Ser | Thr | ||||||||
CTG | GAG | AAC | CAG | CTG | CTG | CTA | CAG | AGG | CAG | AAG | CTC | CAG | CAG | CTT | CAG | 576 |
Leu | Glu | Asn | Gin 180 | Leu | Leu | Leu | Gin | Arg 185 | Gin | Lys | Leu | Gin | Gin 190 | Leu | Gin | |
GGC | CAA | AAC | AGC | GCG | CTC | GAG | AAG | CGG | TTG | CAG | GCC | CTG | GAG | ACC | AAG | 624 |
Gly | Gin | Aen 195 | Ser | Ala | Leu | Glu | Lys 200 | Arg | Leu | Gin | Ala | Leu 205 | Glu | Thr | Lye | |
CAG | CAG | GAG | GAG | CTG | GCC | AGC | ATC | CTC | AGC | AAG | AAG | GCG | AAG | CTG | CTG | 672 |
Gin | Gin 210 | Glu | Glu | Leu | Ala | Ser 215 | Ile | Leu | Ser | Lys | Lys 220 | Ala | Lye | Leu | Leu | |
AAC | ACG | CTG | AGC | CGC | CAG | AGC | GCC | GCC | CTC | ACC | AAC | ATC | GAG | CGC | GGC | 720 |
Asn 225 | Thr | Leu | Ser | Arg | Gin 230 | Ser | Ala | Ala | Leu | Thr 235 | Asn | Ile | Glu | Arg | Gly 240 | |
CTG | CGC | GGT | GTC | AGG | CAC | AAC | TCC | AGC | CTC | CTG | CAG | GAC | CAG | CAG | CAC | 768 |
Leu | Arg | Gly | Val | Arg 245 | Hle | Asn | Ser | Ser | Leu 250 | Leu | Gin | Asp | Gin | Gin 255 | His | |
AGC | CTG | CGC | CAG | CTG | CTG | GTG | TTG | TTG | CGG | CAC | CTG | GTG | CAA | GAA | AGG | 816 |
Ser | Leu | Arg | Gin 260 | Leu | Leu | Val | Leu | Leu 265 | Arg | His | Leu | Val | Gin 270 | Glu | Arg | |
GCT | AAC | GCC | TCG | GCC | CCG | GCC | TTC | ATA | ATG | GCA | GGT | GAG | CAG | GTG | TTC | 864 |
Ala | Asn | Ala 275 | Ser | Ala | Pro | Ala | Phe 280 | Ile | Met | Ala | Gly | Glu 285 | Gin | Val | Phe | |
CAG | GAC | TGT | GCA | GAG | ATC | CAG | CGC | TCT | GGG | GCC | AGT | GCC | AGT | GGT | GTC | 912 |
Gin | Asp 290 | Cys | Ala | Glu | Ile | Gin 295 | Arg | Ser | Cly | Ala | Ser 300 | Ala | Ser | Gly | Val | |
TAC | ACC | ATC | CAG | GTG | TCC | AAT | GCA | ACG | AAG | CCC | AGG | AAG | GTG | TTC | TGT | 960 |
Tyr 305 | Thr | Ile | Gin | Val | Ser 310 | Asn | Ala | Thr | Lye | Pro 315 | Arg | Lys | Val | Phe | Cys 320 | |
GAC | CTG | CAG | AGC | AGT | GGA | GGC | AGG | TGG | ACC | CTC | ATC | CAG | CGC | CGT | GAG | 1008 |
Asp | Leu | Gin | Ser | Sér 325 | Gly | Gly | Arg | Trp | Thr 330 | Leu | Ile | Gin | Arg | Arg 335 | Glu | |
AAT | GGC | ACC | GTG | AAT | TTT | CAG | CGG | AAC | TGG | AAG | GAT | TAC | AAA | CAG | GGC | 1056 |
Asn | Gly | Thr | Val 340 | Asn | Phe | Gin | Arg | Asn 345 | Trp | Lys | Asp | Tyr | Lys 350 | Gin | Gly | |
TTC | GGA | GAC | CCA | GCT | GGG | GAG | CAC | TGG | CTG | GGC | AAT | GAA | GTG | GTG | CAC | 1104 |
Phe | Gly | Aep 355 | Pro | Ala | Gly | Glu | His 360 | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu 365 | Val | Val | His | |
CAG | CTC | ACC | AGA | AGG | GCA | GCC | TAC | TCT | CTG | CGT | GTG | GAG | CTG | CAA | GAC | 1152 |
Gin | Leu 370 | Thr | Arg | Arg | Ala | Ala 375 | Tyr | Ser | Leu | Arg | Val 380 | Glu | Leu | Gin | Asp | |
TGG | GAA | GGC | CAC | GAG | GCC | TAT | GCC | CAG | TAC | GAA | CAT | TTC | CAC | CTG | GGC | 1200 |
Trp 385 | Glu | Gly | His | Glu | Ala 390 | Tyr | Ala | Gin | Tyr | Glu 395 | His | Phe | H1B | Leu | Gly 400 | |
AGT | GAG | AAC | CAG | CTA | TAC | AGG | CTT | TCT | GTG | GTC | GGG | TAC | AGC | GGC | TCA | 1248 |
Ser | Glu | Asn | Gin | Leu 405 | Tyr | Arg | Leu | Ser | Val 410 | Val | Gly | Tyr | Ser | Gly 415 | Ser | |
GCA | GGG | CGC | CAG | AGC | AGC | CTG | GTC | CTG | CAG | AAC | ACC | AGC | TTT | AGC | ACC | 1296 |
Ala | Gly Arg | Gin 420 | Ser Ser Leu Val Leu Gin 425 | Asn | Thr Ser | Phe 430 | Ser | Thr | ||||||||
CTT | GAC | TCA | GAC | AAC | GAC | CAC | TGT | CTC | TGC | AAG | TGT | GCC | CAG | GTG | ATG | 1344 |
Leu | Asp | Ser | Asp | Asn | Aep | His | Cys | Leu | Cys | Lys | Cys | Ala | Gin | Val | Met | |
435 | 440 | 445 | ||||||||||||||
TCT | GGA | GGG | TGG | TGG | TTT | GAC | GCC | TGT | GGC | CTG | TCA | AAC | CTC | AAC | GGC | 1392 |
Ser | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp | Ala | Cys | Gly | Leu | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | |
450 | 455 | 460 | ||||||||||||||
GTC | TAC | TAC | CAC | GCT | ccc | GAC | AAC | AAG | TAC | AAG | ATG | GAC | GGC | ATC | CGC | 1440 |
Val | Tyr | Tyr | His | Ala | Pro | Asp | Asn | Lys | Tyr | Lys | Met | Asp | Gly | Ile | Arg | |
465 | 470 | 475 | 4J30 | |||||||||||||
TGG | CAC | TAC | TTC | AAG | GGC | CCC | AGC | TAC | TCA | CTG | CGT | GCC | TCT | CGC | ATG | 1488 |
Trp | His | Tyr | Phe | Lye | Gly | Pro | Ser | Tyr | Ser | Leu | Arg | Ala | ser | Arg | Met | |
465 | 490 | 495 | ||||||||||||||
ATG | ATA | CGG | CCT | TTG | GAC | ATC | TAA | 1512 | ||||||||
Met | Ile | Arg | Pro | Leu | Aep | Ile |
500
2. Informace o sekv. ID. NO. 18:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 503 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein
v) Typ fragmentu: interní ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: TIE ligand-4
B. lokace: 1....503
D. Jiné informace:
xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 18:
Met | Leu | Ser | Gin | Leu | Ala | Met | Leu | Gin | Gly | Ser | Leu | Leu | Leu | Val | Val |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ala | Thr | Met | Ser | Val | Ala | Gin | Gin | Thr | Arg | Gin | Glu | Ala | Asp | Arg | Gly |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Cys | Glu | Thr | Leu | Val | Val | Gin | His | Gly | His | Cys | Ser | Tyr | Thr | Phe | Leu |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Leu | Pro | Lys | Ser | Glu | Pro | Cys | Pro | Pro | Gly | Pro | Glu | val | Ser | Arg | Asp |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Ser | Asn | Thr | Leu | Gin | Arg | Glu | Ser | Leu | Ala | Asn | Pro | Leu | His | Leu | Gly |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Lys | Leu | Pro | Thr | Gin | Gin | Val’ | Lys | Gin | Leu | Glu | Gin | Ala | Leu | Gin | Asn |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Asn | Thr | Gin | Trp | Leu | Lys | Lys | Leu | Glu | Arg | Ala | Ile | Lys | Thr | Ile | Leu |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Arg | Ser | Lys | Leu | Glu | Gin | val | Gin | Gin | Gin | Met | Ala | Gin | Asn | Gin | Thr |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Ala | Pro | Met | Leu | Glu | Leu | Gly | Thr | ser | Leu | Leu | Asn | Gin | Thr | Thr | Ala |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Gin | Ile | Arg | Lye | Leu | Thr | Asp | Met | Glu | Ala | Gin | Leu | Leu | Asn | Gin | Thr |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Ser | Arg | Met | Asp | Ala | Gin | Met | Pro | Glu | Thr | Phe | Leu | Ser | Thr | Asn | Lys |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Leu | Glu | Asn | Gin | Leu | Leu | Leu | Gin | Arg | Gin | Lys | Leu | Gin | Gin | Leu | Gin |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Gly | Gin | Asn | Ser | Ala | Leu | Glu | Lys | Arg | Leu | Gin | Ala | Leu | Glu | Thr | Lys |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Gin | Gin | Glu | Glu | Leu | Ala | Ser | Ile | Leu | Ser | Lye | Lye | Ala | Lye | Leu | Leu |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Asn | Thr | Leu | Ser | Arg | Gin | Ser | Ala | Ala | Leu | Thr | Asn | Ile | Glu | Arg | Gly |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Leu | Arg | Gly | Val | Arg | His | Asn | Ser | Ser | Leu | Leu | Gin | Asp | Gin | Gin | His |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Ser | Leu | Arg | Gin | Leu | Leu | Val | Leu | Leu | Arg | His | Leu | Val | Gin | Glu | Arg |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Ala | Asn | Ala | Ser | Ala | Pro | Ala | Phe | Ile | Met | Ala | Gly | Glu | Gin | Val | Phe |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Gin | Asp | Cys | Ala | Glu | Ile | Gin | Arg | Ser | Gly | Ala | Ser | Ala | Ser | Gly | Val |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Tyr | Thr | Ile | Gin | Val | Ser | Asn | Ala | Thr | Lys | Pro | Arg | Lys | Val | Phe | Cys |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Asp | Leu | Gin | Ser | Ser | Gly | Gly | Arg | Trp | Thr | Leu | Ile | Gin | Arg | Arg | Glu |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Asn | Gly | Thr | Val | Asn | Phe | Gin | Arg | Asn | Trp | Lys | Asp | Tyr | Lys | Gin | Gly |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Phe | Gly | Asp | Pro | Ala | Gly | GlU | His | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Val | Val | His |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Gin | Leu | Thr | Arg | Arg | Ala | Ala | Tyr | ser | Leu | Arg | Val | Glu | Leu | Gin | Asp |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Trp | Glu | Gly | His | Glu | Ala | Tyr | Ala | Gin | Tyr | Glu | His | Phe | His | Leu | Gly |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Ser | Glu | Asn | Gin | Leu | Tyr | Arg | Leu | ser | Val | Val | Gly | Tyr | Ser | Gly | Ser |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Ala | Gly | Arg | Gin | Ser | Ser | Leu | Val | Leu | Gin | Asn | Thr | Ser | Phe | Ser | Thr |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Leu | Asp | Ser | Asp | Asn | Asp | His | Cys | Leu | Cys | Lys | Cys | Ala | Gin | Val | Met |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Ser | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp | Ala | Cys | Gly | Leu | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Val | Tyr | Tyr | His | Ala | Pro | Asp | Asn | Lys | Tyr | Lys | Mét | Asp | Gly | Ile | Arg |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Trp | His | Tyr | Phe | Lys | Gly | Pro | Ser | Tyr | Ser | Leu | Arg | Ala | Ser | Arg | Met |
485 490 495
Met Ile Arg Pro Leu Asp Ile
500
-80CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 19:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 1497 párů bází
B. Typ: nukleová kyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: kódující sekvence
B. lokace: 1....1494
D. Jiné informace:
A. jméno/klíč: 1N1C2F (chiméra 1)
B. lokace: 1....1497
D. Jiné informace:
A. jméno/klíč: jiný
B. lokace: 1....60
D. Jiné informace: domnělá vedoucí sekvence je zakódována nukleotidy 1-60
-81 CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 19:
ATG ACA Het Thr 1 | GTT Val | TTC CTT TCC TTT GCT | TTC CTC GCT GCC ATT CTG ACT CAC | 48 | ||||||||||||
Phe Leu s | Ser Phe | Ala | Phe Leu 10 | Ala Ala | Ile | Leu | Thr Hie 1S | |||||||||
ATA | GGG | TGC | AGC | AAT | CAG | CGC | CGA | AGT | CCA | GAA | AAC | AGT | GGG | AGA | AGA | 96 |
Ile | Gly | Cye | Ser 20 | Asn | Gin | Arg | Arg | Ser 25 | Pro | Glu | Aen | Ser | Gly 30 | Arg | Arg | |
TAT | AAC | CGG | ATT | CAA | CAT | GGG | CAA | TGT | GCC | TAC | ACT | TTC | ATT | CTT | CCA | 144 |
Tyr | Asn | Arg 35 | Ile | Gin | His | Gly | Gin 40 | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe 45 | Ile | Leu | Pro | |
GAA | CAC | GAT | GGC | AAC | TGT | CGT | GAG | AGT | ACG | ACA | GAC | CAG | TAC | AAC | ACA | 192 |
Glu | His 50 | Asp | Gly | Asn | Cys | Arg 55 | Glu | Ser | Thr | Thr | Aep 60 | Gin | Tyr | Aen | Thr | |
AAC | GCT | CTG | CAG | AGA | GAT | GCT | CCA | CAC | GTG | GAA | CCG | GAT | TTC | TCT | TCC | 240 |
Aen 65 | Ala | Leu | Gin | Arg | Asp 70 | Ala | Pro | His | Val | Glu 75 | Pro | Asp | Phe | Ser | Ser 80 | |
CAG | AAA | CTT | CAA | CAT | CTG | GAA | CAT | GTG | ATG | GAA | AAT | TAT | ACT | CAG | TGG | 288 |
Gin | Lys | Leu | Gin | His 85 | Leu | Glu | His | Val | Met 90 | Glu | Aěn | Tyr | Thr | Gin 95 | Trp | |
CTG | CAA | AAA | CTT | GAG | AAT | TAC | ATT | GTG | GAA | AAC | ATG | AAG | TGG | GAG | ATG | 336 |
Leu | Gin | Lys | Leu 100 | G1U | Asn | Tyr | Ile | Val 105 | Glu | Asn | Met | Lys | Ser lio | Glu | Met | |
GCC | CAG | ATA | CAG | CAG | AAT | GCA | GTT | CAG | AAC | CAC | ACG | GCT | ACC | ATG | CTG | 384 |
Ala | Gin | Ile 115 | Gin | Gin | Asn | Ala | Val 120 | Gin | Aen | His | Thr | Ala 125 | Thr | Met | Leu | |
GAG | ATA | GGA | ACC | AGC | CTC | CTC | TCT | CAG | ACT | GCA | GAG | CAG | ACC | AGA | AAG | 432 |
Glu | Ile 130 | Gly | Thr | Ser | Leu | Leu 135 | Ser | Gin | Thr | Ala | Glu 140 | Gin | Thr | Arg | Ly6 | |
CTG | ACA | GAT | GTT | GAG | ACC | CAG | GTA | CTA | AAT | CAA | ACT | TCT | CGA | CTT | GAG | 480 |
Leu 145 | Thr | Asp | Val | Glu | Thr 150 | Gin | Val | Leu | Aen | Gin 15 S | Thr | Ser | Arg | Leu | Glu 160 | |
ATA | CAG | CTG | CTG | GAG | AAT | TCA | TTA | TCC | ACC | TAC | AAG | CTA | GAG | AAG | CAA | 528 |
Ile | Gin | Leu | Leu | G1U 165 | Asn | Ser | Leu | Ser | Thr 170 | Tyr | Lys | Leu | GlU | Lys 175 | Gin | |
CTT | CTT | CAA | CAG | ACA | AAT | GAA | ATC | TTG | AAG | ATC | CAT | GAA | AAA | AAC | AGT | 576 |
Leu | Leu | Gin | Gin 180 | Thr | Asn | Glu | Ile | Leu 185 | Lye | Ile | His | Glu | Lys 190 | Aen | Ser | |
TTA | TTA | GAA | CAT | AAA | ATC | TTA | GAA | ATG | GAA | GGA | AAA | CAC | AAG | GAA | GAG | 624 |
Leu | Leu | Glu 195 | His | Lys | Ile | Leu | Glu 200 | Het | Glu | Gly | Lys | His 205 | Lys | Glu | Glu | |
TTG | GAC | ACC | TTA | AAG | GAA | GAG | AAA | GAG | AAC | CTT | CAA | GGC | TTG | GTT | ACT | 672 |
Leu | Aep 210 | Thr | Leu | Lys | Glu | Glu 215 | Lys | Glu | Asn | Leu | Gin 220 | Gly | Leu | Val | Thr | |
CGT | CAA | ACA | TAT | ATA | ATC | CAG | GAG | CTG | GAA | AAG | CAA | TTA | AAC | AGA | GCT | 720 |
Arg 225 | Gin | Thr | Tyr | Ile | Ile 230 | Gin | Glu | Leu | Glu | Lys 235 | Gin | Leu | Asn | Arg | Ala 240 | |
ACC | ACC | AAC | AAC | AGT | GTC | CTT | CAG | AAG | CAG | CAA | CTG | GAG | CTG | ATG | GAC | 768 |
Thr | Thr | Asn | Asn | Ser 245 | Val | Leu | Gin | Lys | Gin 250 | Gin | Leu | Glu | Leu | Met 255 | Asp | |
ACA | GTC | CAC | AAC | CTT | GTC | AAT | CTT | TGC | ACT | AAA | GAA | GGT | GTT | TTA | CTA | 816 |
-82CZ 295371 B6
Thr Val Hle | Aen 260 | Leu | Val | Aen Leu Cye Thr 265 | Lye Glu | Gly | Val 270 | Leu | Leu | |||||||
AAG | GGA | GGA | AAA | AGA | GAG | GAA | GAG | AAA | CCA | TTT | AGA | GAC | TGT | GCT | GAA | 864 |
Lye | Gly | Gly 275 | Lys | Arg | Glu | Glu | Glu 280 | Lys | Pro | Phe | Arg | Asp 285 | Cys | Ala | Glu | |
GTA | TTC | AAA | TCA | GGA | CAC | ACC | ACA | AAT | GGC | ATC | TAC | ACG | TTA | ACA | TTC | 912 |
Val | Phe 290 | Lys | Ser | Gly | His | Thr 295 | Thr | Asn | Gly | Ile | Tyr 300 | Thr | Leu | Thr | Phe | |
CCT | AAT | TCT | ACA | GAA | GAG | ATC | AAG | GCC | TAC | TGT | GAC | ATG | GAA | GCT | GGA | 960 |
Pro 305 | Aen | Ser | Thr | Glu | Glu 310 | Ile | Lys | Ala | Tyr | Cys 315 | Asp | Met | Glu | Ala | Gly 320 | |
GGA | GGC | GGG | TGG | ACA | ATT | ATT | CAG | CGA | CGT | GAG | GAT | GGC | AGC | GTT | GAT | 1008 |
Gly | Gly | Gly | Trp | Thr 325 | Ile | Ile | Gin | Arg | Arg 330 | Glu | Asp | Gly | Ser | Val 335 | Aep | |
TTT | CAG | AGG | ACT | TGG | AAA | GAA | TAT | AAA | GTG | GGA | TTT | GGT | AAC | cct | TCA | 1056 |
Phe | Gin | Arg | Thr 340 | Trp | Lys | Glu | Tyr | Lys 345 | Val | Gly | Phe | Gly | Asn 350 | Pro | ser | |
GGA | GAA | TAT | TGG | CTG | GGA | AAT | GAG | TTT | GTT | TCG | CAA | CTG | ACT | AAT | CAG | 1104 |
Gly | Glu | Tyr 355 | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu 360 | Phe | Val | Ser | Gin | Leu 365 | Thr | Asn | Gin | |
CAA | GGC | TAT | GTG | CTT | AAA | ATA | CAC | CTT | AAA | GAC | TGG | GAA | GGG | AAT | GAG | 1152 |
Gin | Arg 370 | Tyr | Val | Leu | Lys | Ile 375 | His | Leu | Lys | Asp | Trp 380 | Glu | Gly | Asn | Glu | |
GCT | TAC | TCA | TTG | TAT | GAA | CAT | TTC | TAT | CTC | TCA | AGT | GAA | GAA | CTC | AAT | 1200 |
Ala 385 | Tyr | Ser | Leu | Tyr | Glu 390 | His | Phe | Tyr | Leu | Ser 395 | Ser | Glu | Glu | Leu | Asn 400 | |
TAT | AGG | ATT | CAC | CTT | AAA | GGA | CTT | ACA | GGG | ACA | GCC | GGČ | AAA | ATA | AGC | 1248 |
Tyr | Arg | Ile | His | Leu 405 | Lys | Gly | Leu | Thr | Gly 410 | Thr | Ala | Gly | Lys | Ile 415 | Ser | |
AGC | ATC | AGC | CAA | CCA | GGA | AAT | GAT | TTT | AGC | ACA | AAG | GAT | GGA | GAC | AAC | 1296 |
Ser | Ile | Ser | Gin 420 | Pro | Gly | Asn | Asp | Phe 425 | Ser | Thr | Lys | Asp | Gly 430· | ASp: | Asn | |
GAC | AAA | TGT | ATT | TGC | AAA | TGT | TCA | CAA | ATG | CTA | ACA | GGA | GGC | TGG | TGG | 1344 |
Asp | Lys | Cys 435 | Ile | Cye | Lys | Cys | Ser 440 | Gin | Het | Leu | Thr | Gly 445 | Gly | Trp | Trp | |
TTT | GAT | GCA | TGT | GGT | CCT | TCC | AAC | TTG | AAC | GGA | ATG | TAC | TAT | CCA | CAG | 1392 |
Phe | Asp 450 | Ala | Cys | Gly | Pro | Ser 455 | Asn | Leu | Asn | Gly | Het 460 | Tyr | Tyr | Pro | Gin | |
AGG | CAG | AAC | ACA | AAT | AAG | TTC | AAC | GGC | ATT | AAA | TGG | TAC | TAC | TGG | AAA | 1440 |
Arg 465 | Gin | Asn | Thr | Asn | Lys 470 | Phe | Asn | Gly | Ile | Lys 475 | Trp | Tyr | Tyr | Trp | Lys 480 | |
GGC | TCA | GGC | TAT | TCG | CTC | AAG | GCC | ACA | ACC | ATG | ATG | ATC | CGA | CCA | GCA | 1488 |
Gly | Ser | Gly | Tyr | Ser 485 | Leu | Lys | Ala | Thr | Thr 490 | Het | Het | Ile | Arg | Pro 495 | Ala |
GAT TTC TAA 1497
Asp Phe
-83 CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 20:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 498 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein
v) Typ fragmentu: interní ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: 1N1C2F (chiméra 1)
B. lokace: 1....498
D. Jiné informace:
-84CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 20:
Met | Thr | Val | Phe | Leu | Ser | Phe | Ala | Phe | Leu | Ala | Ala | Ile | Leu | Thr | His |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ile | Gly | Cys | ser | Asn | Gin | Arg | Arg | Ser | Pro | Glu | Asn | Ser | Gly | Arg | Arg |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Tyr | Asn | Arg | Ile | Gin | His | Gly | Gin | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe | Zle | Leu | Pro |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | His | Asp | Gly | Asn | Cys | Arg | Glu | Ser | Thr | Thr | Asp | Gin | Tyr | Asn | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asn | Ala | Leu | Gin | Arg | Asp | Ala | Pro | His | val | Glu | Pro | Asp | Phe | Ser | Ser |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Gin | Lys | Leu | Gin | His | Leu | Glu | His | Val | Met | Glu | Asn | Tyr | Thr | Gin | Trp |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Gin | Lys | Leu | Glu | Asn | Tyr | Ile | Vál | Glu | Aen | Met | Lys | Ser | Glu | Met |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Ala | Gin | Ile | Gin | Gin | Asn | Ala | Val | Gin | Asn | His | Thr | Ala | Thr | Met | Leu |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Glu | Ile | Gly | Thr | Ser | Leu | Leu | Ser | Gin | Thr | Ala | G1U | Gin | Thr | Arg | Lys |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Leu | Thr | Asp | Val | Glu | Thr | Gin | Val | Leu | Asn | Gin | Thr | Ser | Arg | Leu | Glu |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Ile | Gin | Leu | Leu | Glu | Asn | Ser | Leu | ser | Thr | Tyr | Lys | Leu | Glu | Lys | Gin |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Leu | Leu | Gin | Gin | Thr | Asn | Glu | Ile | Leu | Lys | Zle | His | Glu | Lys | Αεη | ser |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Leu | Leu | Glu | His | Lys | Ile | Leu | Glu | Met | Glu | Gly | Lys | His | Lys | Glu | Glu |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Leu | Aep | Thr | Leu | Lys | Glu | Glu | Lys | Glu | Asn | Leu | Gin | Gly | Leu | Val | Thr |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Arg | Gin | Thr | Tyr | Ile | Ile | Gin | Glu | Leu | Glu | Lys | Gin | Leu | Asn | Arg | Ala |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Thr | Thr | Asn | Asn | Ser | Val | Leu | Gin | Lys | Gin | Gin | Leu | Glu | Leu | Met | Asp |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Thr | Val | His | Asn | Leu | Val | Asn | Leu | Cys | Thr | Lys | Glu | Gly | Val | Leu | Leu |
260 | 265 | 270 | Ala | ||||||||||||
Lys | Gly | Gly | Lys | Arg | Glu | Glu | Glu | Lys | Pro | Phe | Arg | Asp | Cys | Glu | |
275 | 280 | 28S | |||||||||||||
Val | Phe | Lys | ser | Gly | His | Thr | Thr | Asn | Cly | Ile | Tyr | Thr | Leu | Thr | Phe |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Pro | Asn | Ser | Thr | Glu | Glu | Ile | Lys | Ala | Tyr | Cys | ASp | Met | Glu | Ala | Gly |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Gly | Gly | Gly | Trp | Thr | Ile | Ile | cm | Arg | Arg | Glu | Asp | Gly | Ser | Val | Asp |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Phe | Gin | Arg | Thr | Trp | Lys | Glu | Tyr | Lys | Val | Gly | Phe | Gly | Aen | Pro | Ser |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Gly | Glu | Tyr | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Phe | Val | Ser | Gin | Leu | Thr | Asn | Gin |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Gin | Arg | Tyr | Val | Leu | LyB | Ile | His | Leu | Lys | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Glu |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Ala | Tyr | Ser | Leu | Tyr | Glu | His | Phe | Tyr | Leu | Ser | Ser | Glu | Glu | Leu | Aen |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Tyr | Arg | Ile | His | Leu | Lys | Gly | Leu | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Ile | Ser |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Ser | Ile | Ser | Gin | Pro | Gly | Asn | Asp | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Gly | Asp | Asn |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Asp | Lye | Cys | Ile | Cys | Lys | Cys | Ser | Gin | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Phe | Asp | Ala | Cys | Gly | Pro | Ser | Asn | Leu | Aen | Gly | Met | Tyr | Tyr | Pro | Gin |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Arg | Gin | Asn | Thr | Asn | Lys | Phe | Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | Tyr | Tyr | Trp | Lys |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Gly | Ser | Gly | Tyr | Ser | Leu | Lys | Ala | Thr | Thr | Met | Het | Ile | Arg | Pro | Ala |
485 | 490 | 495 | |||||||||||||
Asp | Phe |
-85CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 21:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 1491 párů bází
B. Typ: nukleová kyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA ix) Charakteristika
A. jméno/klíě: kódující sekvence
B. lokace: 1....1488
D. Jiné informace:
A. jméno/klíě: 2N2C2F (chiméra 2)
B. lokace: 1....1491
D. Jiné informace:
A. jméno/klíě: jiný
B. lokace: 1....48
D. Jiné informace: domnělá vedoucí sekvence je zakódována nukleotidy 1-48 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 21:
ATG TGG Met Trp 1 | CAG Gin | ATT Ile | GTT TTC TTT ACT | CTG Leu | AGC TGT GAT | CTT Leu | GTC Val | TTG Leu 15 | GCC Ala | 48 | ||||||
Val 5 | Phe | Phe Thr | Ser 10 | Cys | Asp | |||||||||||
GCA | GCC | TAT | AAC | AAC | TTT | CGG | AAG | AGC | ATG | GAC | AGC | ATA | GGA | AAG | AAG | 96 |
Ala | Ala | Tyr | Asn | Asn | Phe | Arg | Lys | Ser | Met | ASp | ser | Ile | Gly | Lys | Lys | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
CAA | TAT | CAG | GTC | CAG | CAT | GGG | TCC | TGC | AGC | TAC | ACT | TTC | CTC | CTG | CCA | 144 |
Gin | Tyr | Gin | Val | Gin | His | Gly | Ser | Cys | Ser | Tyr | Thr | Phe | Leu | Leu | Pro | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
GAG | ATG | GAC | AAC | TGC | CGC | TCT | TCC | TCC | AGC | CCC | TAC | GTG | TCC | AAT | GCT | 192 |
Glu | Met | Asp | Asn | cys | Arg | Ser | Ser | Ser | Ser | Pro | Tyr | Val | Ser | Asn | Ala | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
GTG | CAG | AGG | GAC | GCG | CCG | CTC | GAA | TAC | GAT | GAC | TCG | GTG | CAG | AGG | CTG | 240 |
Val | Gin | Arg | Asp | Ala | Pro | Leu | Glu | Tyr | Asp | Asp | Ser | Val | Gin | Arg | Leu | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
CAA | GTG | CTG | GAG | AAC | ATC | ATG | GAA | AAC | AAC | ACT | CAG | TGG | CTA | ATG | AAG | 288 |
Gin | Val | Leu | Glu | Asn | Ile | Met | Glu | Asn | Asn | Thr | Gin | Trp | Leu | Met | Lye | |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
CTT | GAG | AAT | TAT | ATC | CAG | GAC | AAC | ATG | AAG | AAA | GAA | ATG | GTA | GAG | ATA | 336 |
-86CZ 295371 B6
Leu Glu Asn Tyr Ile Gin Asp Asn Met | Lys Lys | Glu | Met | Val Glu 110 | Ile | |||||||||||
100 | 105 | |||||||||||||||
CAG | CAG | AAT | GCA | GTA | CAG | AAC | CAG | ACG | GCT | GTG | ATG | ATA | GAA | ATA | GGG | 384 |
Gin | Gin | Asn 115 | Ala | Val | Gin | Asn | Gin 120 | Thr | Ala | Val | Met | Ile 125 | Glu | Ile | Gly | |
ACA | AAC | CTG | TTG | AAC | CAA | ACA | GCT | GAG | CAA | ACG | CGG | AAG | TTA | ACT | GAT | 432 |
Thr | Asn 130 | Leu | Leu | Asn | Gin | Thr 135 | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg 140 | Lys | Leu | Thr | Asp | |
GTG | GAA | GCC | CAA | GTA | TTA | AAT | CAG | ACC | ACG | AGA | CTT | GAA | CTT | CAG | CTC | 480 |
Val 145 | Glu | Ala | Gin | Val | Leu 150 | Ašn | Gin | Thr | Thr | Arg 155 | Leu | Glu | Leu | Gin | Leu Í60 | |
TTG | GAA | CAC | TCC | CTC | TCG | ACA | AAC | AAA | TTG | GAA | AAA | CAG | ATT | TTG | GAC | 528 |
Leu | Glu | His | Ser | Leu 165 | Ser | Thr | Asn | Lys | Leu 170 | Glu | Lys | Gin | Ile | Leu 175 | Asp | |
CAG | ACC | AGT | GAA | ATA | AAC | AAA | TTG | CAA | GAT | AAG | AAC | AGT | TTC | CTA | GAA | 576 |
Gin | Thr | Ser | Glu ιβο | Ile | Asn | Lys | Leu | Gin 185 | Asp | Lys | Asn | Ser | Phe 190 | Leu | Glu | |
AAG | AAG | GTG | CTA | GCT | ATG | GAA | GAC | AAG | CAC | ATC | ATC | CAA | CTA | CAG | TCA | 624 |
Lys | Lys | Val 195 | Leu | Ala | Met | Glu | Asp Lys 200 | His | Ile | Ile | Gin 205 | Leu | Gin | ser | ||
ATA | AAA | GAA | GAG | AAA | GAT | CAG | CTA | CAG | GTG | TTA | GTA | TCC | AAG | CAA | AAT | 672 |
Ile | Lys 210 | Glu | Glu | Lys | ABp | Gin Leu 215 | Gin | Val | Leu | Val 220 | Ser | Lys | Gin | Asn | ||
TCC | ATC | ATT | GAA | GAA | CTA | GAA | AAA | AAA | ATA | GTG | ACT | GCC | ACG | GTG | AAT | 720 |
šer 225 | Ile | Ile | Glu | Glu | Leu 230 | Glu | Lys | Lys | Ile | Val 235 | Thr | Ala | Thr | Val | Asn 240 | |
AAT | TCA | GTT | CTT | CAA | AAG | CAG | CAA | CAT | GAT | CTC | ATG | GAG | ACA | GTT | AAT | 768 |
Asn | Ser | Val | Leu | Gin 245 | Lys | Gin | Gin | His | Asp 250 | Leu | Met | Glu | Thr | Val 255 | Asn | |
AAC | TTA | CTG | ACT | ATG | ATG | TCC | ACA | TCA | AAC | TCA | GCT | AAG | GAC | CCC | ACT | 816 |
Asn | Leu | Leu | Thr 260 | Met | Met | Ser | Thr | Ser 265 | Asn | Ser | Ala | Lys | Asp 270 | Pro | Thr | |
GTT | GCT | AAA | GAA | GAA | CAA | ATC | AGC | TTC | AGA | GAC | TGT | GCA | GAT | GTA | TAT | 864 |
Val | Ala | Lys 275 | Glu | Glu | Gin | Ile | Ser 280 | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala 285 | Asp | Val | Tyr | |
CAA | GCT | GGT | TTT | AAT | AAA | AGT | GGA | ATC | TAC | ACT | ATT | TAT | ATT | AAT | AAT | 912 |
Gin | Ala 290 | Gly | Phe | Asn | Lys | Ser 295 | Gly | Ile | Tyr | Thr | Ile 300 | Tyr | Ile | Asn | Asn | |
ATG | CCA | GAA | CCC | AAA | AAG | GTG | TTT | TCC | AAT | ATG | GAT | GTC | AAT | GGG | GGA | 960 |
Met 305 | Pro | Glu | Pro | Lys | Lys 310 | Val | Phe | Cye | Asn | Met 315 | Asp | Val | Asn | Gly | Gly 320 | |
GGT | TGG | ACT | GTA | ATA | CAA | CAT | CGT | GAA | GAT | GGA | AGT | CTA | GAT | TTC | CAA | 1008 |
Gly | Trp | Thr | Val | Ile 325 | Gin | His | Arg | Glu | Asp 330 | Gly | Ser | Leu | Asp | Phe 335 | Gin | |
AGA | GGC | TGG | AAG | GAA | TAT | AAA | ATG | GGT | TTT | GGA | AAT | CCC | TCC | GGT | GAA | 1056 |
Arg | Gly | Trp | Lys 340 | Glu | Tyr | Lys | Met | Gly 345 | Phe | Gly | Asn | Pro | Ser 350 | Gly | Glu | |
TAT | TGG | CTG | GGG | AAT | GAG | TTT | ATT | TTT | GCC | ATT | ACC | AGT | CAG | AGG | CAG | 1104 |
Tyr | Trp | Leu 355 | Gly | Asn | Glu | Phe | Ile 360 | Phe | Ala | Ile | Thr | ser 365 | Gin | Arg | Gin |
TAC ATG Tyr Met | CTA AGA ATT GAG | TTA ATG | GAC Asp | TCG Trp | GAA GGG AAC CGA GCC TAT | 1152 | ||||||||||
Leu | Arg | Ile | Glu | Leu 375 | Met | Glu Gly 380 | Asn | Arg | Ala | Tyr | ||||||
370 | ||||||||||||||||
TCA | CAG | TAT | GAC | AGA | TTC | CAC | ATA | GGA | AAT | GAA | AAG | CAA | AAC | TAT | AGG | 1200 |
Ser | Gin | Tyr | Asp | Arg | Phe | His | Ile | Gly | Asn | Glu | Lys | Gin | Asn | Tyr | Arg | |
385 | 390 | 39S | 400 | |||||||||||||
TTG | TAT | TTA | AAA | GGT | CAC | ACT | GGG | ACA | GCA | GGA | AAA | CAG | AGC | AGC | CTG | 1248 |
Leu | Tyr | Leu | Lys | Gly | His | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Gin | Ser | Ser | Leu | |
405 | 410 | 415 | ||||||||||||||
ATC | TTA | CAC | GGT | GCT | GAT | TTC | AGC | ACT | AAA | GAT | GCT | GAT | AAT | GAC | AAC | 1296 |
Ile | Leu | His | Gly | Ala | Asp | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Ala | Asp | Asn | Asp | Asn | |
420 | 425 | 430 | ||||||||||||||
TGT | ATG | TGC | AAA | TGT | GCC | CTC | ATG | TTA | ACA | GGA | GGA | TGG | TGG | TTT | GAT | 1344 |
Cys | Met | Cys | Lys | Cys | Ala | Leu | Met | Leu | Thr | Gly Gly | Trp | Trp | Phe | Asp | ||
435 | 440 | 445 | ||||||||||||||
GCT | TGT | GGC | CCC | TCC | AAT | CTA | AAT | GGA | ATG | TTC | TAT | ACT | GCG | GGA | CAA | 1392 |
Ala | Cys | Gly | Pro | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Het | Phe | Tyr | Thr | Ala | Gly | Gin | |
4S0 | 455 | 460 | ||||||||||||||
AAC | CAT | GGA | AAA | CTG | AAT | GGG | ATA | AAG | TGG | CAC | TAC | TTC | AAA | GGG | CCC | 1440 |
Asn | His | Gly | Lys | Leu | Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | His | Tyr | Phe | Lys | Gly | Pro | |
465 | 470 | 475 | 480 | |||||||||||||
AGT | TAC | TCC | TTA | CGT | TCC | ACA | ACT | ATG | ATG | ATT | CGA | GCT | TTA | GAT | TTT T | 1489 |
Ser | Tyr | Ser | Leu | Arg | Ser | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Leu | Asp | Phe | |
485 | 490 | 495 |
CA
1491
2. Informace o sekv. ID. NO. 22:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 496 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein
v) Typ fragmentu: interní ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: 2N2C2F (chiméra 2)
B. lokace: 1....496
D. Jiné informace:
-88CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 22:
Het | Trp | Gin | Ile | Val | Phe | Phe | Thr | Leu | Ser | Cys | Asp | Leu | Val | Leu | Ala |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ala | Ala | Tyr | Asn | Asn | Phe | Arg | Lys | Ser | Met | Αβρ | Ser | Ile | Gly | Lys | Lys |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gin | Tyr | Gin | Val | Gin | His | Gly | Ser | cys | Ser | Tyr | Thr | Phe | Leu | Leu | Pro |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | Met | Asp | Asn | Cys | Arg | Ser | Ser | Ser | Ser | Pro | Tyr | Val | ser | Asn | Ala |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Val | Gin | Arg | Aep | Ala | Pro | Leu | Glu | Tyr | Asp | Asp | Ser | Val | Gin | Arg | Leu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Gin | Val | Leu | Glu | Asn | Ile | Met | Glu | Asn | Asn | Thr | Gin | Trp | Leu | Met | Lys |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Glu | Asn | Tyr | Ile | Gin | Aep | Asn | Met | Lys | Lye | Glu | Met | Val | Glu | Ile |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Gin | Glr. | Aen | Ala | Val | Gin | Asn | Gin | Thr | Ala | Val | Met | Ile | Glu | Ile | Gly |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Thr | Asn | Leu | Leu | Asn | Gin | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | Lys | Leu | Thr | Asp |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Val | Glu | Ala | Gin | Val | Leu | Asn | Gin | Thr | Thr | Arg | Leu | Glu | Leu | Gin | Leu |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Leu | Glu | His | Ser | Leu | Ser | Thr | Asn | Lys | Leu | Glu | Lys | Gin | Ile | Leu | Asp |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Gin | Thr | Ser | Glu | Ile | Asn | Lys | Leu | Gin | Aep | Lye | Asn | Ser | Phe | Leu | Glu |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Lys | Lye | Val | Leu | Ala | Het | Glu | Asp | Lys | HiS | Ile | Ile | Gin | Leu | Gin | Ser |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Ile | Lye | Glu | Glu | Lys | Asp | Gin | Leu | Gin | Val | Leu | Val | ser | Lye | Gin | Asn |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Ser | Ile | Ile | Glu | Glu | Leu | Glu | Lys | Lye | Ile | Val | Thr | Ala | Thr | Val | Asn |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Asn | Ser | Val | Leu | Gin | Lys | Gin | Gin | His | Asp | Leu | Met | Glu | Thr | Val | Asn |
245 | 250 | 2S5 | |||||||||||||
Asn | Leu | Leu | Thr | Met | Met | Ser | Thr | Ser | Asn | Ser | Ala | Lys | Asp | Pro | Thr |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Val | Ala | Lys | Glu | Glu | Gin | Ile | Ser | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala | Asp | Val | Tyr |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Gin | Ala | Gly | Phe | Asn | Lys | Ser | Gly | Ile | Tyr | Thr | Ile | Tyr | Ile | Asn | Asn |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Het | Pro | Glu | Pro | Lys | Lys | Val | Phe | Cys | Aen | Met | Asp | Val | Asn | Gly | Gly |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Gly | Trp | Thr | Val | Ile | Gin | His | Arg | Glu | Asp | Gly | Ser | Leu | Asp | Phe | Gin |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Arg | Gly | Trp | Lys | Glu | Tyr | Lys | Met | Gly | Phe | Gly | Asn | Pro | Ser | Gly | Glu |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Tyr | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Phe | Ile | Phe | Ala | Ile | Thr | Ser | Gin | Arg | Gin |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Tyr | Het | Leu | Arg | Ile | Glu | Leu | Met | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Arg | Ala | Tyr |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Ser | Gin | Tyr | Aep | Arg | Phe | His | Ile | Gly | Asn | Glu | Lys | Gin | Asn | Tyr | Arg |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Leu | Tyr | Leu | Lys | Gly | His | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Gin | Ser | Ser | Leu |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Ile | Leu | His | Gly | Ala | Asp | Phe | ser | Thr | Lys | Asp | Ala | Αερ | Asn | Asp | Asn |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Cys | Het | Cys | Lys | Cys | Ala | Leu | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Ala | Cye | Gly | Pro | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Met | Phe | Tyr | Thr | Ala | Gly | Gin |
450 | 4SS | 460 | |||||||||||||
Asn | His | Gly | Lys | Leu | Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | His | Tyr | Phe | Lys | Gly | Pro |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Ser | Tyr | ser | Leu | Arg | Ser | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Leu | Asp | Phe |
485 | 490 | 495 |
-89CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 23:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 1500 párů bází
B. Typ: nukleová kyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: kódující sekvence
B. lokace: 1....1497
D. Jiné informace:
A. jméno/klíč: 1N2C2F (chiméra 3)
B. lokace: 1....1500
D. Jiné informace:
A. jméno/klíč: jiný
B. lokace: 1....60
D. Jiné informace: domnělá vedoucí sekvence je zakódována nukleotidy 1-60
-90CZ 295371 B6 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 23:
ATG Met 1 | ACA GTT TTC | CTT TCC TTT GCT | TTC CTC GCT | GCC ATT CTG ACT | CAC His | 48 | |||||||||
Thr | Val | Phe | Leu 5 | Ser | Phe Ala | Phe | Leu 10 | Ala | Ala | Ile | Leu | Thr 15 | |||
ATA | GGG | TGC | AGC | AAT | CAG | CGC CGA | AGT | CCA | GAA | AAC | AGT | GGG | AGA | AGA | 96 |
Ile | Gly | Cys | Ser 20 | Asn | Gin | Arg Arg | Ser 25 | Pro | Glu | Asn | Ser | Gly 30 | Arg | Arg | |
TAT | AAC | CGG | ATT | CAA | CAT | GGG CAA | TGT | GCC | TAC | ACT | TTC | ATT | CTT | CCA | 144 |
Tyr | Asn | Arg 35 | Ile | Gin | Hle | Gly Gin 40 | Cys | Ala | Tyr | Thr | Phe 45 | Ile | Leu | Pro | |
GAA | CAC | GAT | GGC | AAC | TGT | CGT GAG | AGT | ACG | ACA | GAC | CAG | TAC | AAC | ACA | 192 |
Glu | His 50 | Asp | Gly | Aen | Cys | Arg Glu 55 | ser | Thr | Thr | Asp 60 | Gin | Tyr | Asn | Thr | |
AAC | GCT | CTG | CAG | AGA | GAT | GCT CCA | CAC | GTG | GAA | CCG | GAT | GAC | TCG | GTG | 240 |
Asn 65 | Ala | Leu | Gin | Arg | Asp 70 | Ala Pro | His | Val | Glu 75 | Pro | Asp | Asp. | Ser | Val 80 | |
CAG | AGG | CTG | CAA | GTG | CTG | GAG AAC | ATC | ATG | GAA | AAC | AAC | ACT | CAG | TGG | 288 |
Gin | Arg | Leu | Gin | Val 85 | Leu | Glu Aen | Ile | Met 90 | Glu | Asn | Asn | Thr | Gin 95 | Trp | |
CTA | ATG | AAG | CTT | GAG | AAT | TAT ATC | CAG | GAC | AAC | ATG | AAG | AAA | GAA | ATG | 336 |
Leu | Met | Lys | Leu 100 | Glu | Asn | Tyr Ile | Gin 105 | Asp | Asn | Met | Lys | Lys 110 | Glu | Met | |
GTA | GAG | ATA | CAG | CAG | AAT | GCA GTA | CAG | AAC | CAG | ACG | GCT | GTG | ATG | ATA | 384 |
Vál | Glu | Ile 115 | Gin | Gin | Asn | Ala Val 120 | Gin | Asn | Gin | Thr | Ala 125 | Val | Met | Ile | |
GAA | ATA | GGG | ACA | AAC | CTG | TTG AAC | CAA | ACA | GCT | GAG | CAA | ACG | CGG | AAG | 432 |
Glu | Ile 130 | Gly | Thr | Asn | Leu | Leu Asn 135 | Gin | Thr | Ala | Glu 140 | Gin | Thr | Aťg | Lys | |
TTA | ACT | GAT | GTG | GAA | GCC | CAA GTA | TTA | AAT | CAG | ACC | ACG | AGA | CTT | GAA | 480 |
Leu 145 | Thr | Asp | Val | Glu | Ala 150 | Gin Val | Leu | Asn | Gin 155 | Thr | Thr | Arg | Leu | GlU 160 | |
CTT | CAG | CTC | TTG | GAA | CAC | TCC CTC | TCG | ACA | AAC | AAA | TTG | GAA | AAA | CAG | 528 |
Leu | Gin | Leu | Leu | G1U 165 | His | Ser Leu | ser | Thr 170 | Asn | Lys | Leu | Glu | Lys 175 | Gin | |
ATT | TTG | GAC | CAG | ACC | AGT | GAA ATA | AAC | AAA | TTG | CAA | GAT | AAG | AAC | AGT | 576 |
Ile | Leu | Asp | Gin 180 | Thr | Ser | Glu Ile | Asn 185 | Lys | Leu | Gin | Asp | Lys 190 | Asn | Ser | |
TTC | CTA | GAA | AAG | AAG | GTG | CTA GCT | ATG | GAA | GAC | AAG | CAC | ATC | ATC | CAA | 624 |
Phe | Leu | Glu 195 | Lys | Lys | Val | Leu Ala 200 | Met | Glu | Asp | Lye | His 205 | Ile | Ile | Gin | |
CTA | CAG | TCA | ATA | AAA | GAA | GAG AAA | GAT | CAG | CTA | CAG | GTG | TTA | GTA | TCC | 672 |
Leu | Gin 210 | Ser | Ile | Lys | Glu | Glu Lys 215 | Asp | Gin | Leu | Gin 220 | Val | Leu | Val | Ser | |
AAG | CAA | AAT | TCC | ATC | ATT | GAA GAA | CTA | GAA | AAA | AAA | ATA | GTG | ACT | GCC | 720 |
Lye 225 | Gin Asn Ser | Ile | Ile Glu 230 | Glu | Leu Glu | Lye Lys 235 | Ile | Val | Thr | Ala 240 | ||||||
ACG | GTG | AAT | AAT | TCA | GTT | CTT | CAA | AAG | CAG | CAA | CAT | GAT | CTC | ATG | GAG | 768 |
Thr | Val | Asn | Asn | Ser | Val | Leu | Gin | Lye | Gin | Gin | His | Asp | Leu | Met | Glu | |
245 | 250 | 25S | ||||||||||||||
ACA | CTT | AAT | AAC | TTA | CTG | ACT | ATG | ATG | TCC | ACA | TCA | AAC | TCA | GCT | AAG | 816 |
Thr | Val | Asn | Asn | Leu | Leu | Thr | Met | Met | Ser | Thr | Ser | Asn | Ser | Ala | Lys | |
260 | 265 | 270 | ||||||||||||||
GAC | CCC | ACT | GTT | GCT | AAA | GAA | GAA | CAA | ATC | AGC | TTC | AGA | GAC | TGT | GCT | 864 |
Asp | Pro | Thr | Val | Ala | Lye | Glu | Glu | Gin | Ile | ser | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala | |
275 | 280 | 285 | ||||||||||||||
GAA | GTA | TTC | AAA | TCA | GGA | CAC | ACC | ACA | AAT | GGC | ATC | TAC | ACG | TTA | ACA | 912 |
Glu | val | Phe | Lys | Ser | Gly | His | Thr | Thr | Aen | Gly | Ile | Tyr | Thr | Leu | Thr | |
290 | 295 | 300 | ||||||||||||||
TTC | CCT | AAT | TCT | ACA | GAA | GAG | ATC | AAG | GCC | TAC | TGT | GAC | ATG | GAA | GCT | 960 |
Phe | pro | Asn | Ser | Thr | Glu | Glu | Ile | Lys | Ala | Tyr | cys | Asp | Met | Glu | Ala | |
305 | 310 | 315 | 320 | |||||||||||||
GGA | GGA | GGC | GGG | TGG | ACA | ATT | ATT | CAG | CGA | CGT | GAG | GAT | GGC | AGC | GTT | 1008 |
Gly | Gly | Gly | Gly | Trp | Thr | Ile | Ile | Gin | Arg | Arg | Glu Asp | Gly | Ser | Val | ||
325 | 330 | 335 | ||||||||||||||
CAT | TTT | CAG | AGG | ACT | TGG | AAA | GAA | TAT | AAA | GTG | GGA | TTT | GGT | AAC | CCT | 1056 |
Aep | Phe | Gin | Arg | Thr | Trp | Lys | Glu | Tyr | Lys | Val | Gly | Phe | Gly | Asn | Pro | |
340 | 345 | 350 | ||||||||||||||
TCA | GGA | GAA | TAT | TGG | CTG | GGA | AAT | GAG | TTT | GTT | TCG | CAA | CTG | ACT | AAT | 1104 |
Ser | Gly | Glu | Tyr | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Phe | Val | Ser | Gin | Leu | Thr | Asn | |
355 | 360 | 365 | ||||||||||||||
CAG | CAA | CGC | TAT | GTG | CTT | AAA | ATA | CAC | CTT | AAA | GAC | TGG | GAA | GGG | AAT | 1152 |
Gin | Gin | Arg | Tyr | Val | Leu | Lys | Ile | His | Leu | Lys | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | |
370 | 375 | 380 | ||||||||||||||
GAG | GCT | TAC | TCA | TTG | TAT | GAA | CAT | TTC | TAT | CTC | TCA | AGT | GAA | GAA | CTC | 1200 |
Glu | Ala | Tyr | Ser | Leu | Tyr | Glu | His | Phe | Tyr | Leu | Ser | Ser | Glu | Glu | Leu | |
385 | 390 | 395 | 400 | |||||||||||||
AAT | TAT | AGG | ATT | CAC | CTT | AAA | GGA | CTT | ACA | GGG | ACA | GCC | GGC | AAA | ATA | 1248 |
Asn | Tyr | Arg | Ile | His | Leu | Lys | Gly | Leu | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Ile | |
405 | 410 | 415 | ||||||||||||||
AGC | AGC | ATC | AGC | CAA | CCA | GGA | AAT | GAT | TTT | AGC | ACA | AAG | GAT | GGA | GAC | 1296 |
Ser | Ser | Ile | Ser | Gin | Pro | Gly | Asn | Asp | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Gly | Asp | |
420 | 425 | 430 | ||||||||||||||
AAC | GAC | AAA | TGT | ATT | TGC | AAA | TGT | TCA | CAA | ATG | CTA | ACA | GGA | GGC | TGG | 1344 |
Asn | Aep | Lys | Cys | Ile | Cys | Lys | Cys | Ser | Gin | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | |
435 | 440 | 445 | ||||||||||||||
TGG | TTT | GAT | GCA | TGT | GGT | CCT | TCC | AAC | TTG | AAC | GGA | ATG | TAC | TAT | CCA | 1392 |
Trp | Phe | Aep | Ala | Cys | Gly | Pro | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Met | Tyr | Tyr | Pro | |
450 | 455 | 460 | ||||||||||||||
CAG | AGG | CAG | AAC | ACA | AAT | AAG | TTC | AAC | GGC | ATT | AAA | TGG | TAC | TAC | TGG | 1440 |
Gin | Arg | Gin | Asn | Thr | Aen | Lye | Phe | Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | Tyr | Tyr | Trp | |
465 | 470 | 475 | 480 | |||||||||||||
AAA | GGC | TCA | GGC | TAT | TCG | CTC | AAG | GCC | ACA | ACC | ATG | ATG | ATC | CGA | CCA | 1488 |
Lye | Gly | Ser | Gly | Tyr | Ser | Leu | Lys | Ala | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | |
485 | 490 | 495 |
1500
GCA GAT TTC TAA Ala Aep Phe
2. Informace o sekv. ID. NO. 24:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 499 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein
v) Typ fragmentu: interní ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: 1N2C2F (chiméra 3) xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 24:
Het | Thr | Val | Phe | Leu | Ser | Phe | Ala | Phe | Leu | Ala | Ala | Ile | Leu | Thr | His |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ile | Gly | Cys | Ser | Asn | Gin | Arg | Arg | Ser | Pro | Glu | Asn | Ser | Gly | Arg | Arg |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Tyr | Asn | Arg | Ile | Gin | His | Gly | Gin | Cye | Ala | Tyr | Thr | Phe | Ile | Leu | Pro |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | His | Asp | Gly | Aen | Cys | Arg | Glu | Ser | Thr | Thr | Asp | Gin | Tyr | Asn | Thr |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asn | Ala | Leu | Gin | Arg | Aep | Ala | Pro | Hle | Val | Glu | Pro | Aep | Asp | Ser | Val |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Gin | Arg | Leu | Gin | Val | Leu | Glu | Aen | Ile | Met | Glu | Asn | Asn | Thr | Gin | Trp |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Met | Lys | Leu | Glu | Asn | Tyr | Ile | Gin | Asp | Aen | Met | Lye | Lys | Glu | Met |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Val | Glu | Ile | Gin | Gin | Aen | Ala | Val | Gin | Aen | Gin | Thr | Ala | Val | Met | Ile |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Clu | Ile | Gly | Thr | Asn | Leu | Leu | Asn | Gin | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | Lys |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Leu | Thr | Aep | val | Glu | Ala | Gin | Val | Leu | Asn | Gin | Thr | Thr | Arg | Leu | Glu |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Leu | Gin | Leu | Leu | G1U | His | Ser | Leu | Ser | Thr | Asn | Lye | Leu | Glu | Lys | Gin |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Ile | Leu | Aep | Gin | Thr | Ser | Glu | ile | Αεη | Lys | Leu | Gin | Asp | Lys | Asn | Ser |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Phe | Leu | Glu | Lys | Lys | Val | Leu | Ala | Met | Glu | Asp | Lys | His | Ile | ile | Gin |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Leu | Gin | Ser | Ile | Lys | Glu | Glu | Lys | Asp | Gin | Leu | Gin | Val | Leu | Val | Ser |
210 | 21S | 220 | |||||||||||||
Lys | Gin | Asn | Ser | Ile | Ile | Glu | Glu | Leu | Glu | Lys | Lys | Ile | Val | Thr | Ala |
22S | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Thr | Val | Asn | Asn | Ser | Val | Leu | Gin | Lys | Gin | Gin | His | Asp | Leu | Met | Glu |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Thr | Val | Asn | Αβπ | Leu | Leu | Thr | Met | Met | Ser | Thr | Ser | Asn | ser | Ala | Lye |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Asp | Pro | Thr | Val | Ala | Lys | Glu | Glu | Gin | Ile | Ser | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Glu | Val | Phe | Lys | Ser | Gly | Hle | Thr | Thr | Aen | Gly | Ile | Tyr | Thr | Leu | Thr |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Phe | Pro | Asn | Ser | Thr | Glu | Glu | Ile | Lys | Ala | Tyr | Cye | Aep | Met | Glu | Ala |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Gly | Gly | Gly | Gly | Trp | Thr | Ile | Ile | Gin | Arg | Arg | Glu | Aep | Gly | Ser | Val |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Aep | Phe | Gin | Arg | Thr | Trp | Lys | Glu | Tyr | Lys | Val | Gly | Phe | Gly | Asn | Pro |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Ser | Gly | Glu | Tyr | Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Phe | Val | Ser | Gin | Leu | Thr | Asn |
355 | 360 | 365 |
Gin | Gin Arg 370 | Tyr | Val | Leu | Lys 375 | Ile | His Leu Lys | Asp 380 | Trp Glu Gly | Asn | |||||
G1U | Ala | Tyr | Ser | Leu | Tyr | Glu | His | Phe | Tyr | Leu | Ser | Ser | Glu | Glu | Leu |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Asn | Tyr | Arg | ile | His | Leu | Lys | Gly | Leu | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Ile |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Ser | Ser | Ile | Ser | Gin | Pro | Gly | Asn | Asp | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Gly | Asp |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Asn | Aep | Lys | Cys | Ile | Cys | Lys | Cys | Ser | Gin | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Trp | Phe | Asp | Ala | Cys | Gly | Pro | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Met | Tyr | Tyr | Pro |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Gin | Arg | Gin | Asn | Thr | Asn | Lys | Phe | Asn | Gly | Ile | Lys | Trp | Tyr | Tyr | Trp |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Lys | Gly | Ser | Gly | Tyr | Ser | Leu | Lys | Ala | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro |
485 | 490 | 495 | |||||||||||||
Ala | Asp | Phe |
2. Informace o sekv. ID. NO. 25:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 1488 párů bází
B. Typ: nukleová kyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: kódující sekvence
B. lokace: 1....1485
D. Jiné informace:
A. jméno/klíč: 2N1C1F (chiméra 4)
B. lokace: 1....1488
D. Jiné informace:
A. jméno/klíč: jiný
B. lokace: 1....48
D. Jiné informace: domnělá vedoucí sekvence je zakódována nukleotidy 1-48 xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 25:
ATG Met 1 | TGG Trp | CAG ATT GTT | TTC Phe | TTT ACT | CTG AGC Leu Ser 10 | TGT Cys | GAT Aep | CTT Leu | GTC Val | TTG Leu 15 | GCC Ala | 48 | ||||
Gin | Ile | Val 5 | Phe | Thr | ||||||||||||
GCA | GCC | TAT | AAC | AAC | TTT | CGG | AAG | AGC | ATG | GAC | AGC | ATA | GGA | AAG | AAG | 96 |
Ala | Ala | Tyr | Asn | Asn | Phe | Arg | Lys | Ser | Met | Asp | Ser | Ile | Gly | Lys | Lys | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
CAA | TAT | CAG | GTC | CAG | CAT | GGG | TCC | TGC | AGC | TAC | ACT | TTC | CTC | CTG | CCA | 144 |
Gin | Tyr | Gin | Val | Gin | His | Gly | Ser | Cys | Ser | Tyr | Thr | Phe | Leu | Leu | Pro | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
GAG | ATG | GAC | AAC | TGC | CGC | TCT | TCC | TCC | AGC | CCC | TAC | GTG | TCC | AAT | GCT | 192 |
Glu | Met | Asp | Asn | Cys | Arg | Ser | Ser | Ser | Ser | Pro | Tyr | val | Ser | Asn | Ala | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
GTG | CAG | AGG | GAC | GCG | CCG | CTC | GAA | TAC | GAT | TTC | TCT | TCC | CAG | AAA | CTT | 240 |
Val | Gin | Arg | Aep | Ala | Pro | Leu | Glu | Tyr | Aep | Phe | Ser | Ser | Gin | Lys | Leu | |
65 | 70 | 75 | 80 |
-94CZ 295371 B6
CAA CAT Gin His | CTG GAA CAT GTG | ATG Met | GAA AAT TAT ACT CAG | TGG CTG Trp Leu | CAA Gin 95 | AAA Lys | 288 | |||||||||
Leu Glu His 85 | Val | Glu | Asn | Tyr 90 | Thr | Gin | ||||||||||
CTT | GAG | AAT | TAC | ATT | GTG | GAA | AAC | ATG | AAG | TCG | GAG | ATG | GCC | CAG | ATA | 336 |
Leu | Glu | Asn | Tyr 100 | Ile | Val | Glu | Asn | Met 105 | Lys | Ser | G1U | Met | Ala 110 | Gin | Ile | |
CAG | CAG | AAT | GCA | GTT | CAG | AAC | CAC | ACG | GCT | ACC | ATG | CTG | GAG | ATA | GGA | 384 |
Gin | Gin | Asn 115 | Ala | Val | Gin | Asn | His 120 | Thr | Ala | Thr | Met | Leu 125 | Glu | Ile | Gly | |
ACC | AGC | CTC | CTC | TCT | CAG | ACT | GCA | GAG | CAG | ACC | AGA | AAG | CTG | ACA | GAT | 432 |
Thr | Ser 130 | Leu | Leu | Ser | Gin | Thr 135 | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg 140 | Lys | Leu | Thr | Asp | |
GTT | GAG | ACC | CAG | GTA | CTA | AAT | CAA | ACT | TCT | CGA | CTT | GAG | ATA | CAG | CTG | 480 |
Val 145 | Glu | Thr | Gin | Val | Leu 150 | Asn | Gin | Thr | ser | Arg 155 | Leu | Glu | Ile | Gin | Leu 160 | |
CTG | GAG | AAT | TCA | TTA | TCC | ACC | TAC | AAG | CTA | GAG | AAG | CAA | CTT | CTT | CAA | 528 |
Leu | Glu | Asn | Ser | Leu 165 | Ser | Thr | Tyr | Lys | Leu 170 | Glu | Lys | Gin | Leu | Leu 175 | Gin | |
CAG | ACA | AAT | GAA | ATC | TTG | AAG | ATC | CAT | GAA | AAA | AAC | AGT | TTA | TTA | GAA | 576 |
Gin | Thr | Asn | Glu 180 | Ile | Leu | Lys | Ile | His 185 | Glu | Lys | Asn | Ser | Leu 190 | Leu | Glu | |
CAT | AAA | ATC | TTA | GAA | ATG | GAA | GGA | AAA | CAC | AAG | GAA | GAG | TTG | GAC | ACC | 624 |
His | Lys | Ile 195 | Leu | Glu | Met | Glu | Gly 200 | Lys | His | Lys | Glu | Glu 205 | Leu | Asp | Thr | |
TTA | AAG | GAA | GAG | AAA | GAG | AAC | CTT | CAA | GGC | TTG | GTT | ACT | CGT | CAA | ACA | 672 |
Leu | Lys 210 | Glu | Glu | Lys | Glu | Asn 215 | Leu | Gin | Gly | Leu | Val 220 | Thr | Arg | Gin | Thr | |
TAT | ATA | ATC | CAG | GAG | CTG | GAA | AAG | CAA | TTA | AAC | AGA | GCT | ACC | ACC | AAC | 720 |
Tyr 225 | Ile | Ile | Gin | Glu | Leu 230 | Glu | Lys | Gin | Leu | Asn 235 | Arg | Ala | Thr | Thr | Asn 240 | |
AAC | AGT | GTC | CTT | CAG | AAG | CAG | CAA | CTG | GAG | CTG | ATG | GAC | ACA | GTC | CAC | 768 |
Asn | Ser | Val | Leu | Gin 245 | Lys | Gin | Gin | Leu | Glu 250 | Leu | Met | Asp | Thr | Val 255 | His | |
AAC | CTT | GTC | AAT | CTT | TGC | ACT | AAA | GAA | GGT | GTT | TTA | CTA | AAG | GGA | GGA | 816 |
Asn | Leu | Val | Asn 260 | Leu | Cys | Thr | Lys | Glu 265 | Gly | Val | Leu | Leu | Lys 270 | Gly | Gly | |
AAA | AGA | GAG | GAA | GAG | AAA | CCA | TTT | AGA | GAC | TGT | GCA | GAT | GTA | TAT | CAA | 864 |
Lys | Arg | Glu 275 | Glu | Glu | Lys | Pro | Phe 280 | Arg | Asp | Cys | Ala | Asp 285 | Val | Tyr | Gin | |
GCT | GGT | TTT | AAT | AAA | AGT | GGA | ATC | TAC | ACT | ATT | TAT | ATT | AAT | AAT | ATG | 912 |
Ala | Gly 290 | Phe | Asn | Lys | Ser | Gly 29 5 | Ile | Tyr | Thr | Ile | Tyr 300 | Ile | Asn | Asn | Met | |
CCA | GAA | CCC | AAA | AAG | GTG | TTT | TGC | AAT | ATG | GAT | GTC | AAT | GGG | GGA | GGT | 960 |
Pro 305 | Glu | Pro | Lys | Lys | Val 310 | Phe | Cys | Asn | Met | Asp 315 | Val | Asn | Gly | Gly | Gly 320 | |
TGG | ACT | GTA | ATA | CAA | CAT | CGT | GAA | GAT | GGA | AGT | CTA | GAT | TTC | CAA | AGA | 1008 |
Trp | Thr | Val | Ile | Gin 325 | His | Arg | Glu | Asp | Gly 330 | Ser | Leu | Asp | Phe | Gin 335 | Arg | |
GGC | TGG | AAG | GAA | TAT | AAA | ATG | GGT | TTT | GGA | AAT | CCC | TCC | GGT | GAA | TAT | 1056 |
Gly | Trp | Lys | Glu 340 | Tyr | Lys | Met | Gly | Phe 345 | Gly | Asn | Pro | Ser | Gly 350 | Glu | Tyr |
-95CZ 295371 B6
TGG CTG GGG AAT | GAG Glu | TTT ATT TTT GCC ATT ACC AGT | CAG AGG CAG TAC | 1104 | ||||||||||||
Trp | Leu | Gly Asn 355 | Phe | Ile | Phe 360 | Ala | Ile Thr Ser | Gin 365 | Arg Gin | Tyr | ||||||
ATG | CTA | AGA | ATT | GAG | TTA | ATG | GAC | TGG | GAA | GGG | AAC | CGA | GCC | TAT | TCA | 1152 |
Met | Leu | Arg | Ile | Glu | Leu | Met | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Arg | Ala | Tyr | Ser | |
370 | 375 | 380 | ||||||||||||||
CAG | TAT | GAC | AGA | TTC | CAC | ATA | GGA | AAT | GAA | AAG | CAA | AAC | TAT | AGG | TTG | 1200 |
Gin | Tyr | Asp | Arg | Phe | His | Ile | Gly | Asn | Glu | Lys | Gin | Asn | Tyr | Arg | Leu | |
385 | 390 | 395 | 400 | |||||||||||||
TAT | TTA | AAA | GGT | CAC | ACT | GGG | ACA | GCA | GGA | AAA | CAG | AGC | AGC | CTG | ATC | 1248 |
Tyr | Leu | Lys | Gly | Hle | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Gin | Ser | Ser | Leu | Tle | |
405 | 410 | 415 | ||||||||||||||
TTA | CAC | GGT | GCT | GAT | TTC | AGC | ACT | AAA | GAT | GCT | GAT | AAT | GAC | AAC | TGT | 1296 |
Leu | His | Gly | Ala | Asp | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Ala | Asp | Asn | Asp | Asn | Cys | |
420 | 425 | 430 | ||||||||||||||
ATG | TGC | AAA | TGT | GCC | CTC | ATG | TTA | ACA | GGA | GGA | TGG | TGG | TTT | GAT | GCT | 1344 |
Met | Cys | Lys | Cys | Ala | Leu | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp | Ala | |
435 | 440 | 445 | ||||||||||||||
TGT | GGC | CCC | TCC | AAT | CTA | AAT | GGA | ATG | TTC | TAT | ACT | GGG | GGA | CAA | AAC | 1392 |
Cys | Gly | Pro | Ser | Aen | Leu | Asn | Gly | Met | Phe | Tyr | Thr | Ala | Gly | Gin | Asn | |
450 | 45S | 460 | ||||||||||||||
CAT | GGA | AAA | CTG | AAT | GGG | ATA | AAG | TGG | CAC | TAC | TTC | AAA | GGG | CCC | AGT | 1440 |
His | Gly | Lys | Leu | Aen | Gly | Ile | Lys | Trp | His | Tyr | Phe | Lys | Gly | Pro | Ser | |
465 | 470 | 475 | 480 | |||||||||||||
TAC | TCC | TTA | CGT | TCC | ACA | ACT | ATG | ATG | ATT | CGA | CCT | TTA | GAT | TTT | TGA | 1488 |
Tyr | ser | Leu | Arg | Ser | Thr | Thr | Met | Met | Ile | Arg | Pro | Leu | Asp | Phe | ||
485 | 490 | 495 |
2. Informace o sekv. ID. NO. 26:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 495 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein
v) Typ fragmentu: interní ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: 2N1C1F (chiméra 4)
B. lokace: 1....495
-96CZ 295371 B6
xi) | Popis sekvence: SEQ ID NO: 26: | ||||||||||||||
Het | Trp | Gin | Ile | val | Phe | Phe | Thr | Leu | Ser | Cys | Asp | Leu | Val | Leu | Ala |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ala | Ala | Tyr | Asn | Ašn | Phe | Arg | Lys | Ser | Met | Asp | Ser | Ile | Gly | Lys | Lys |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Gin | Tyr | Gin | Val | Gin | His | Gly | Ser | Cys | Ser | Tyr | Thr | Phe | Leu | Leu | Pro |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | Met | Asp | Asn | Cys | Arg | Ser | Ser | Ser | Ser | Pro | Tyr | Val | Ser | Asn | Ala |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Val | Gin | Arg | Asp | Ala | Pro | Leu | Glu | Tyr | Asp | Phe | Ser | Ser | Gin | Lys | Leu |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Gin | His | Leu | Glu | His | Val | Met | Glu | Asn | Tyr | Thr | Gin | Trp | Leu | Gin | Lys |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Glu | Asn | Tyr | Ile | Val | Glu | Asn | Met | Lys | Ser | Glu | Met | Ala | Gin | Ile |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Gin | Gin | Asn | Ala | Val | Gin | Asn | His | Thr | Ala | Thr | Met | Leu | Glu | Ile | Gly |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Thr | Ser | Leu | Leu | Ser | Gin | Thr | Ala | Glu | Gin | Thr | Arg | Lys | Leu | Thr | Asp |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Val | Glu | Thr | Gin | Val | Leu | Asn | Gin | Thr | Ser | Arg | Leu | Glu | Ile | Gin | Leu |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Leu | Glu | Asn | Ser | Leu | Ser | Thr | Tyr | Lys | Leu | Glu | Lys | Gin | Leu | Leu. | Gin |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Gin | Thr | Asn | Glu | Ile | Leu | Lys | Ile | His | Glu | Lys | Asn | Ser | Leu | Leu | Glu |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
His | Lys | Ile | Leu | Glu | Het | Glu | Gly | Lys | His | Lys | Glu | Glu | Leu | Asp | Thr |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Leu | Lys | Glu | Glu | Lys | Glu | Asn | Leu | Gin | Gly | Leu | Val | Thr | Arg | Gin | Thr |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Tyr | Ile | Ile | Gin | Glu | Leu | Glu | Lys | Gin | Leu | Asn | Arg | Ala | Thr | Thr | Asn |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Asn | Ser | Val | Leu | Gin | Lys | Gin | Gin | Leu | Glu | Leu | Met | Asp | Thr | Val | His |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Asn | Leu | Val | Asn | Leu | Cys | Thr | Lys | Glu | Gly | Val | Leu | Leu | Lys | Gly | Gly |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Lys | Arg | Glu | Glu | Glu | Lys | Pro | Phe | Arg | Asp | Cys | Ala | Asp | Val | Tyr | Gin |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Ala | Gly | Phe | Asn | Lys | Ser | Gly | Ile | Tyr | Thr | Ile | Tyr | Ile | Asn | Asn | Met |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Pro | Glu | Pro | Lys | Lys | Val | Phe | Cys | Asn | Met | Asp | Val | Asn | Gly Gly | Gly | |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Trp | Thr | val | Ile | Gin | His | Arg | Glu | Asp | Gly | Ser | Leu | Asp | Phe | Gin | Arg |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Gly | Trp | Lys | Glu | Tyr | Lys | Met | Gly | Phe | Gly | Asn | Pro | ser | Gly | Glu | Tyr |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Trp | Leu | Gly | Asn | Glu | Phe | Ile | Phe | Ala | Ile | Thr | Ser | Gin | Arg | Gin | Tyr |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Met | Leu | Arg | Ile | Glu | Leu | Met | Asp | Trp | Glu | Gly | Asn | Arg | Ala | Tyr | Ser |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Gin | Tyr | Asp | Arg | Phe | His | Ile | Gly | Asn | Glu | Lys | Gin | Asn | Tyr | Arg | Leu |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Tyr | Leu | Lys | Gly | His | Thr | Gly | Thr | Ala | Gly | Lys | Gin | Ser | Ser | Leu | Ile |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Leu | His | Gly | Ala | Asp | Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Ala | Asp | Asn | Asp | Asn | Cys |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Met | Cys | Lye | Cys | Ala | Leu | Met | Leu | Thr | Gly | Gly | Trp | Trp | Phe | Asp | Ala |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Cys | Gly | Pro | Ser | Asn | Leu | Asn | Gly | Met | Phe | Tyr | Thr | Ala | Gly | Gin | Asn |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
His | Gly | Lys | Leu | Asn | Gly | Ile | Lye | Trp | His | Tyr | Phe | Lys | Gly | Pro | Ser |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Tyr | Ser | Leu | Arg | Ser | Thr | Thr | Het | Met | Ile | Arg | Pro | Leu | Asp | Phe |
485 490 495
-97CZ 295371 B6
2. Informace o sekv. ID. NO. 27:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 47 párů bází
B. Typ: nukleová kyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: hTL4atg
B. lokace: 1....47
D. Jiné informace: PCR primer
A. jméno/klíč: jiný
B. lokace: 1....20
D. Jiné informace: „koncová“ sekvence přidaná k PCR primeru k usnadnění klonování zesílený PCR fragmentů xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 27:
GCATGCTATC TCGAOCCACC ATGCTCTCCC AGCTAGCCAT GCTGCAG 47
2. Informace o sekv. ID. NO. 28:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 55 párů bází
B. Typ: nukleová kyselina
C. Rozvětvení: jeden
D. Topologie: lineární ii) Typ molekuly: cDNA ix) Charakteristika
A. jméno/klíč: hTL4not
B. lokace: 1....55
D. Jiné informace: PCR primer
A. jméno/klíč: jiný
B. lokace: 1....28
D. Jiné informace: „koncová“ sekvence přidaná k PCR primeru k usnadnění klonování zesílený PCR fragmentů xi) Popis sekvence: SEQ ID NO: 28:
GTGTCGACGC GGCCGCTCTA GATCAGACTT AGATGTCCAA AGGCCGTATC ATCAT 55
Claims (5)
1. Izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující chimemí TIE-2 ligand obsahující jednu N-koncovou doménu, jednu smyčkově stočenou doménu a jednu fíbrinogenu podobnou doménu, přičemž alespoň dvě domény jsou odvozeny od odlišných TIE-2 ligandů ze souboru zahrnujícího TIE-2 ligand 1, TIE-2 ligand 2, TIE-2 ligand 3 a TIE-2 ligand 4.
2. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 1 kódující chimemí TIE-2 ligand, přičemž jsou N-koncová doména, smyčkově stočená doména a fíbrinogenu podobná doména odvozeny od TIE-2 ligandu 1 nebo TIE-2 ligandu 2.
3. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 2 kódující chimemí TIE-2 ligand, který váže a aktivuje TIE-2 receptor zahrnující nukleotidové sekvenci kódující TIE-2 ligand 1, přičemž část nukleotidové sekvence, která kóduje N-koncovou doménu TIE-2 ligandu 1 je nahrazena nukleotidovou sekvencí, která kóduje N-koncovou doménu TIE-2 ligandu 2.
4. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 3, přičemž část nukleotidové sekvence, která kóduje smyčkově stočenou doménu TIE-2 ligandu 1 je nahrazena nukleotidovou sekvencí, která kóduje smyčkově stočenou doménu TIE-2 ligandu 2.
5. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 3 nebo 4, která je modifikována ke kódování jiné aminokyseliny než cysteinového zbytku, který se kóduje nukleotidy 784 až 786 podle obr. 27.
6. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 5, která je modifikována ke kódování serinového zbytku místo cysteinového zbytku.
7. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 5 nebo 6, která je dále modifikována ke kódování jiné aminokyseliny než argininové zbytky, který se kóduje nukleotidy 199 až 201 podle obr. 27.
8. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 7, která je modifikována ke kódování serinového zbytku místo argininového zbytku.
9. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 3, která kóduje TIE-2 ligand, který má aminokyselinovou sekvenci podle obr. 27.
10. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 4, která kóduje chimemí TIE-2 ligand, který má aminokyselinovou sekvenci podle obr. 25.
11. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 2, která kóduje modifikovaný TIE-2 ligand, který váže avšak neaktivuje TIE-2 receptor zahrnující nukleotidovou sekvenci kódující TIE-2 ligand 1, přičemž část nukleotidové sekvence, která kóduje fíbrinogenu podobnou doménu TIE-2 ligandu, je nahrazena nukleotidovou sekvencí, která kóduje fíbrinogenu podobnou doménu TIE-2 ligandu.
12. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 11, ve které je část nukleotidové sekvence, která kóduje smyčkově stočenou doménu TIE-2 ligandu 1, nahrazen nukleotidovou sekvencí, která kóduje smyčkově stočenou doménu TIE-2 ligandu 2.
13. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 11, která kóduje chimemí TIE-2 ligand, který má aminokyselinovou sekvenci podle obr. 24.
-99CZ 295371 B6
14. Izolovaná molekula nukleové kyseliny podle nároku 12, která kóduje chimemí TIE-2 ligand, který má aminokyselinovou sekvenci podle obr. 26.
15. Chimerní TIE-2 ligand kódující molekulu nukleové kyseliny podle nároků 1 až 14.
16. Chimemí TIE-2 ligand, který má aminokyselinovou sekvenci podle obr. 24, 25, 26 nebo 27.
17. Chimemí TIE-2 ligand podle nároku 15, který má aminokyselinovou sekvenci podle obr. 27, je však modifikován, takže kóduje jinou aminokyselinu místo cysteinového zbytku, který se kóduje nukleotidy 784 až 786.
18. Vektor zahrnující molekulu nukleové kyseliny podle nároků 1 až 14.
19. Vektor podle nároku 18, přičemž molekula nukleové kyseliny je operativně vázána na expresní řídicí sekvenci schopnou řídit expresi v hostitelské buňce.
20. Vektor podle nároku 18 nebo 19, kterým je plazmid.
21. Hostitelský vektorový systém pro produkci chimemího ligandu podle nároků 15, 16 nebo 17, který zahrnuje hostitelskou buňku a vektor podle nároků 18, 19 nebo 20.
22. Hostitelský vektorový systém podle nároku 21, přičemž hostitelskou buňkou je bakteriální, kvasnicová nebo savčí buňka.
23. Způsob produkce ligandu podle nároků 15, 16 nebo 17, vyznačující se tím, že se nechají růst buňky hostitelského vektorového systému podle nároku 21 nebo 22 za podmínek umožňujících produkci ligandu a izolaci takto produkovaného ligandu.
24. Protilátka, která specificky váže ligand podle nároků 15, 16 nebo 17 a která neváže nativní TIE-2 ligand.
25. Protilátka podle nároku 24, kterou je monoklonální protilátka.
26. Konjugát obsahující ligand podle nároků 15, 16 nebo 17 a konjugovaný s cytotoxicky účinnou látkou.
27. Konjugát podle nároku 26, přičemž cytotoxicky účinnou látkou je radioizotop nebo toxin.
28. Farmaceutický prostředek, vyznačující se t í m , že obsahuje chimemí ligand podle nároků 15, 16 nebo 17 a farmaceuticky vhodný nosič.
29. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje protilátku podle nároku 24 nebo 25 a farmaceuticky vhodný nosič.
30. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje konjugát podle nároku 26 nebo 27 a farmaceuticky vhodný nosič.
31. Ligand podle nároků 15, 16 nebo 17 pro použití při ošetřování lidí nebo zvířat nebo pro diagnostické účely.
-100CZ 295371 B6
32. Protilátka podle nároku 24 pro použití při ošetřování lidí nebo zvířat nebo pro diagnostické účely.
5 33. Konjugát podle nároku 26 pro použití při ošetřování lidí nebo zvířat nebo pro diagnostické účely.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US2299996P | 1996-08-02 | 1996-08-02 | |
US08/740,223 US6265564B1 (en) | 1996-08-02 | 1996-10-25 | Expressed ligand-vascular intercellular signalling molecule |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ31099A3 CZ31099A3 (cs) | 2000-03-15 |
CZ295371B6 true CZ295371B6 (cs) | 2005-07-13 |
Family
ID=26696604
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ1999310A CZ295371B6 (cs) | 1996-08-02 | 1997-08-01 | Izolovaná molekula nukleové kyseliny kódující chimerní TIE-2 ligand, chimerní TIE-2 ligand kódující molekulu nukleové kyseliny, vektor zahrnující molekulu nukleové kyseliny, způsob produkce ligandu, konjugát obsahující ligand a farmaceutický prostředek, obsahující ligand |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US6265564B1 (cs) |
EP (1) | EP0915974B1 (cs) |
JP (1) | JP3977434B2 (cs) |
KR (1) | KR100481560B1 (cs) |
CN (1) | CN1171997C (cs) |
AT (1) | ATE262037T1 (cs) |
AU (1) | AU724032C (cs) |
CA (1) | CA2262409C (cs) |
CZ (1) | CZ295371B6 (cs) |
DE (1) | DE69728149T2 (cs) |
DK (1) | DK0915974T3 (cs) |
ES (1) | ES2216163T3 (cs) |
HK (1) | HK1017379A1 (cs) |
HU (1) | HU227995B1 (cs) |
IL (1) | IL128311A (cs) |
NO (1) | NO990470L (cs) |
NZ (2) | NZ333994A (cs) |
PL (1) | PL189639B1 (cs) |
PT (1) | PT915974E (cs) |
RU (1) | RU2233880C2 (cs) |
WO (1) | WO1998005779A1 (cs) |
Families Citing this family (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6265564B1 (en) | 1996-08-02 | 2001-07-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Expressed ligand-vascular intercellular signalling molecule |
US6348350B1 (en) | 1997-09-19 | 2002-02-19 | Genentech, Inc. | Ligand homologues |
US6030831A (en) | 1997-09-19 | 2000-02-29 | Genetech, Inc. | Tie ligand homologues |
WO1999067382A2 (en) * | 1998-06-24 | 1999-12-29 | Compugen Ltd. | Angiopoietin-like growth factor sequences |
JP4493854B2 (ja) * | 1998-12-23 | 2010-06-30 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | リガンドの生物学的活性を増強する方法 |
US6455035B1 (en) | 1999-03-26 | 2002-09-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietins and methods of use thereof |
EP1253928A4 (en) * | 2000-01-20 | 2005-06-15 | Hadasit Med Res Service | NEW HAPTOTACTIC PEPTIDES |
DE60133743T2 (de) | 2000-08-21 | 2009-07-02 | Pacific Corp. | Neue thiourea-derivate und pharmazeutische zusammensetzungen die diese enthalten |
AU2001291019A1 (en) | 2000-09-15 | 2002-03-26 | Genvec, Inc. | Method of modulating neovascularization |
US7138370B2 (en) | 2001-10-11 | 2006-11-21 | Amgen Inc. | Specific binding agents of human angiopoietin-2 |
US7658924B2 (en) | 2001-10-11 | 2010-02-09 | Amgen Inc. | Angiopoietin-2 specific binding agents |
US7205275B2 (en) | 2001-10-11 | 2007-04-17 | Amgen Inc. | Methods of treatment using specific binding agents of human angiopoietin-2 |
US7521053B2 (en) | 2001-10-11 | 2009-04-21 | Amgen Inc. | Angiopoietin-2 specific binding agents |
US7052695B2 (en) | 2001-10-25 | 2006-05-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietins and methods of treating hypertension |
WO2003048185A2 (en) * | 2001-11-30 | 2003-06-12 | Genvec, Inc. | Angiopioetin related factors |
US7081443B2 (en) | 2002-05-21 | 2006-07-25 | Korea Advanced Institutes Of Science And Technology (Kaist) | Chimeric comp-ang1 molecule |
WO2004076650A2 (en) * | 2003-02-27 | 2004-09-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Angiopoietin and fragments, mutants, and analogs thereof and uses of the same |
WO2005013890A2 (en) * | 2003-05-29 | 2005-02-17 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Function and regulation of angiopoietin-3/angiopoietin-4 |
US7871610B2 (en) * | 2003-08-12 | 2011-01-18 | Dyax Corp. | Antibodies to Tie1 ectodomain |
US7485297B2 (en) * | 2003-08-12 | 2009-02-03 | Dyax Corp. | Method of inhibition of vascular development using an antibody |
US7348001B2 (en) * | 2003-08-12 | 2008-03-25 | Dyax Corp. | Tie1-binding ligands |
CN1323723C (zh) * | 2003-12-26 | 2007-07-04 | 上海新世界基因技术开发有限公司 | Tie2受体介导的靶向性肿瘤基因治疗的基因转移系统 |
US8298532B2 (en) | 2004-01-16 | 2012-10-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Fusion polypeptides capable of activating receptors |
KR101017301B1 (ko) | 2004-12-21 | 2011-02-28 | 메드임뮨 리미티드 | 앤지오포이에틴-2에 대한 항체 및 그의 용도 |
WO2008089070A2 (en) * | 2007-01-12 | 2008-07-24 | Dyax Corp. | Combination therapy for the treatment of cancer |
JO2913B1 (en) | 2008-02-20 | 2015-09-15 | امجين إنك, | Antibodies directed towards angiopoietin-1 and angiopoietin-2 proteins and their uses |
AU2009262199B2 (en) | 2008-06-27 | 2012-08-09 | Amgen Inc. | Ang-2 inhibition to treat multiple sclerosis |
AU2010237130B2 (en) * | 2009-04-13 | 2015-01-29 | Apceth Gmbh & Co. Kg | Engineered mesenchymal stem cells and method of using same to treat tumors |
CN106432506A (zh) | 2011-05-24 | 2017-02-22 | 泽恩格尼亚股份有限公司 | 多价和单价多特异性复合物及其用途 |
KR101967345B1 (ko) * | 2012-10-18 | 2019-04-09 | 삼성전자주식회사 | 안지오포이에틴-2와 인테그린 간의 결합을 저해하는 펩타이드 및 그 용도 |
EP2968541A4 (en) | 2013-03-15 | 2017-02-08 | Zyngenia, Inc. | Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses |
RU2538701C1 (ru) * | 2013-07-11 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Тюменский научный центр Сибирского отделения РАН" (ТюмНЦ СО РАН) | Способ извлечения куриного эмбриона из яйца для дальнейшего получения клеточных трансплантатов из фетальных тканей |
AU2014407088B2 (en) | 2014-09-26 | 2021-09-23 | Somalogic Operating Co., Inc. | Cardiovascular risk event prediction and uses thereof |
WO2017079556A1 (en) | 2015-11-06 | 2017-05-11 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Use of angiopoietins in promoting blood coagulation and in the treatment of blood coagulation disorders |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5070192A (en) * | 1988-03-23 | 1991-12-03 | The Johns Hopkins University | Cloned human topoisomerase i: cdna expression, and use for autoantibody detection |
US5814464A (en) * | 1994-10-07 | 1998-09-29 | Regeneron Pharma | Nucleic acids encoding TIE-2 ligand-2 |
EP0821728B1 (en) * | 1995-04-06 | 2004-08-11 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Tie-2 ligands, methods of making and uses thereof |
US6265564B1 (en) * | 1996-08-02 | 2001-07-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Expressed ligand-vascular intercellular signalling molecule |
-
1996
- 1996-10-25 US US08/740,223 patent/US6265564B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-08-01 AU AU39687/97A patent/AU724032C/en not_active Expired
- 1997-08-01 NZ NZ333994A patent/NZ333994A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 HU HU0400256A patent/HU227995B1/hu unknown
- 1997-08-01 CZ CZ1999310A patent/CZ295371B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 NZ NZ505684A patent/NZ505684A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 PL PL97331405A patent/PL189639B1/pl unknown
- 1997-08-01 KR KR10-1999-7000894A patent/KR100481560B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 DE DE69728149T patent/DE69728149T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 IL IL128311A patent/IL128311A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 PT PT97937086T patent/PT915974E/pt unknown
- 1997-08-01 RU RU99105129/13A patent/RU2233880C2/ru active
- 1997-08-01 AT AT97937086T patent/ATE262037T1/de active
- 1997-08-01 EP EP97937086A patent/EP0915974B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 JP JP50808798A patent/JP3977434B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 CN CNB971985316A patent/CN1171997C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 ES ES97937086T patent/ES2216163T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 CA CA002262409A patent/CA2262409C/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 WO PCT/US1997/013557 patent/WO1998005779A1/en active IP Right Grant
- 1997-08-01 DK DK97937086T patent/DK0915974T3/da active
-
1999
- 1999-02-01 NO NO990470A patent/NO990470L/no not_active Application Discontinuation
- 1999-06-02 HK HK99102434A patent/HK1017379A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-11-09 US US09/709,188 patent/US6441137B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-08-21 US US10/225,060 patent/US6825008B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-08-27 US US10/928,911 patent/US20050106099A1/en not_active Abandoned
-
2005
- 2005-03-04 US US11/073,120 patent/US7045302B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US6627415B1 (en) | TIE-2 ligands, methods of making and uses thereof | |
AU724032C (en) | Modified tie-2-receptor ligands | |
US6645484B1 (en) | Method of blocking blood vessel growth using tie-2 ligand 2 | |
US5650490A (en) | Tie-2 ligand 2 | |
US5879672A (en) | Tie-2 ligand 1 | |
US5851797A (en) | Tie ligand-3, methods of making and uses thereof | |
JP2000513932A (ja) | Tie―2レセプターリガンド(tieリガンド―3;tieリガンド―4)およびそれらの使用 | |
US7063840B2 (en) | TIE-2 ligands, methods of making and uses thereof | |
US20030166858A1 (en) | TIE-2 ligands, methods of making and uses thereof | |
US7063965B2 (en) | Nucleic acid encoding TIE-2 ligand | |
CA2595038C (en) | Modified tie-2 receptor ligands | |
AU2241300A (en) | New uses of tie-2 ligands | |
AU6134100A (en) | Novel modified tie-2 receptor ligands |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MK4A | Patent expired |
Effective date: 20170801 |