CZ294683B6 - Kompozice mající schopnost omezovat kolonizaci enteropatogenních bakterií u hospodářských zvířat - Google Patents
Kompozice mající schopnost omezovat kolonizaci enteropatogenních bakterií u hospodářských zvířat Download PDFInfo
- Publication number
- CZ294683B6 CZ294683B6 CZ19991200A CZ120099A CZ294683B6 CZ 294683 B6 CZ294683 B6 CZ 294683B6 CZ 19991200 A CZ19991200 A CZ 19991200A CZ 120099 A CZ120099 A CZ 120099A CZ 294683 B6 CZ294683 B6 CZ 294683B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- composition
- culture
- obtainable
- animal
- scraping
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
Kompozice, získaná kultivací z oškrabků tenkého střeva zdravých zvířat, je určena k podávání zvířatům. Tento preparát způsobuje výrazný rozsah ochrany proti následující kolonizaci enteropatogenními bakteriemi, včetně Salmonella, Campylobacter a Escherichia coli 0157:H 7, které jsou běžně příčinou vysokého výskytu chorob a mortality u lidí a snižují produktivitu v produkci hospodářských zvířat.ŕ
Description
Oblast techniky
Tento vynález se týká bakteriální kultury připravené ze střevního traktu zvířat třídy savců prostých patogenů. Týká se rovněž subkultur takových kultur, použitelných k ochraně hospodářských zvířat před kolonizací enteropatogenními bakteriemi.
Dosavadní stav techniky
Enteropatogeny jako Salmonella a Escherichia coli 0157: H7 způsobují nepřijatelně vysoký výskyt chorob a úmrtnosti u lidí a mohou snižovat produktivitu populací hospodářských zvířat. Gastrointestinální patogeny u lidí pocházejí typicky ze střevní kontaminace masy, která lidé požívají. Při sympoziu „ Tracking Foodborne Pathogens front Farm to Table: Data Needs to Evaluate Control Groups“ konaném v lednu 1995 byla položena otázka „Jak významné jsou choroby způsobené potravou?“ (Tracking Foodborne Pathogens from Farm to Table: Data Needs to Evaluate Control Groups, Washington, DC, 3-29, 1995). Bylo konstatováno, že ve Spojených Státech se odhaduje pro každý rok 6,5 milionu až 33 milionů případů potravou vyvolaných onemocnění, způsobujících až 9 000 úmrtí. Ekonomický výzkumný servis US Department of Agriculture odhaduje u sedmi z potravy pocházejících patogenů medicínské náklady a ztráty na produktivitě v USA na 5,6 miliard až 9,4 miliard dolarů ročně. Menning odhaduje, že ve Spojených Státech je ročně přes 5 milionů případů nemocí způsobených potravou z masa a drůbeže a mnoho procent z toho je třeba přičítat infekcím vyvolaným Salmonellou a Campylobacterem (J. Am. Vet. Med. Assoc., svazek 192, 494-497, 1988). Roberts odhaduje, že každý případ salmonelosy stojí 700 dolarů (Amer. J. Agr. Econ., svazek 71, 486-474, 1989). Na základě přehledů odhadujících potravou vyvolané choroby v jiných zemích není nelogické představit si, že na celém světě roční počet potravou způsobených onemocnění diarrhoeou, které lze přičítat Salmonelle, pravděpodobně překračuje 100 miliard s odhadovanými náklady, které překračují 25 miliard dolarů. Tyto patogeny také odpovídají za bolest, utrpení a ztráty na životech. Vedle toho mohou enteropatogenní bakterie způsobovat podstatné ekonomické ztráty infikováním hospodářských zvířat.
Kompetitivní eklusivní (CE) techniky se používají ke snížení kolonizace enteropatogenních bakterií u drůbeže. Nurmi a spol. (Nátuře, svazek 241, 201-211 1973) nalezli, že preparáty ze zralých, zdravých kuřat poskytly ochranu mladým kuřátkům, u kterých se ještě nevyvinula mikroflóra proti kolonizaci Salmonellou. Podávání nedefinovaných CE preparátů kuřátkům urychluje zrání střevní flory u nově vylíhlých ptáků a poskytuje substrát pro přirozený proces přenosu mikroflóry z dospělé slepice na jejího potomka.
Snoeyenbos a spol. (patent US 4 335 107, červen 1982) popisují CE techniku mikroflóiy pro prevenci kolonizace Salmonellou lyofilizací trusu a kultivací tohoto preparátu za anaerobních podmínek. Mikola a spol. (patent US 4 657 762, duben, 1987) použili jako zdroj CE mikroflóry pro prevenci kolonizace Salmonellou intestinální obsahy fekální a caekální. Zpracování kultury tohoto typu vyžaduje, aby prostředí bylo anaerobní a s vyváženým pH.
Stem a spol. (patent US 5 451 400, 19. září 1995) publikují mukosální CE kompozici pro chránění drůbeže před kolonizací Salmonellou a Campylobacterem, kde je z předepraného caeca seškrabána vrstva mucinu a v kyslíku prostém prostředí uchovávané oškrabky jsou anaerobně kultivovány.
Nisbet a spol. (patent US 5 478 557, 26. prosince 1996) publikují probioticum, které je možné získávat z rozličných domestikovaných zvířat neomezujících se jen na drůbež, ale zahrnujících také koně, prasata a hovězí dobytek. Nisbet a spol. uvádějí, že stabilní definované probiotikum se
- 1 CZ 294683 B6 výhodně získá kontinuální kultivací dávek kultury produkované přímo z trusu, obsahu caeca a/nebo tlustého střeva zvolených dospělých zvířat. Uvádějí dále, že velká množství probiotika může být získáváno buď kultivací po dávkách, nebo kontinuální kultivací, přičemž při kultivaci po dávkách se pokračuje dokud koncentrace octové kyseliny je větší než nebo rovná cca 20 mM, koncentrace propionové kyseliny je větší než nebo rovná cca 10 mM a koncentrace máseiné plus izomáselné kyseliny je větší než nebo rovná 15 mM.
Asplund a spol. (Joumal of Applied Bacteriology, svazek 81, 217-223, 1996) referují o modelu prasečího střeva in vitro a jeho použití vykazovat inhibici Yersinia enterocolitica 0:3 u ileální a ceacální mikroflóry prasete. Caeca a vyluhované části tenkého střeva se shromáždí, uchovávají za anaerobních podmínek, nashromážděné obsahy se spojí a kultivují. Cekální a ileální očka prokázala, že potlačují růst kultivované Y. enterolitica v cekální flóře poněkud efektivněji než ve flóře ileální. Účinnost in vivo popsána nebyla.
Závažnost střevních infekcí u lidí byla stoupající měrou dobře rozpoznávána během posledních dvanácti let. Podobně byl i dobře prokázán vztah mezi kontaminací hospodářských zvířat a infekcí lidí. Během produkce a zpracování zvířat, jako hospodářských zvířat, může být fekální materiál obsahující patogeny přenesen na maso a přetrvávat v potravě při kuchyňském zpracování. Vepř spolu s drůbeží, skot a mořské ryby, korýši a měkkýši jsou významnými nositeli Salmonelly (Beán a spol., J. Food Protéct., svazek 53, 804—817, 1990; Lammerding a spol., J. Food Protéct., svazek 51, 47-52, 1988). Nedotčená zvířata jsou infikována kontaminovaným krmením, chronickými bacilonosiči, zanesenými do populace, infikovanými hlodavci, anebo kontaminovaným personálem farmy (Heard, Vet. Rec., svazek 85, 482-484, 1969; Williams a spol., J. Hyg. Camb., svazek 66, 281-293, 1968; Wilcock a spol. Diseases in Svine, editoři Leman a spol., Iowa Statě University Press, Ames IA, 570-583, 1992; Duhamel a spol., Proč. 12th Int. Symp. New and Emerging Infect. Dis., San Diego, CA, 381,1992). Pro vepře na jatkách je prvotním zdrojem kontaminace prasečí bacilonosič a má se za to, že k přenosu dochází vzájemnými kontakty prasat anebo expozicí v kontaminovaném fyzickém okolí (Newell a spol., J. Am. Vet. Med. Assoc., sv. 158, 89-98, 1971). Tato infikovaná zvířata následně kontaminují areál a budovy, vybavení a personál, a to vede ke kontaminaci konečného produktu (Williams a spol., Am. J. Pub. Health, svazek 60, 926-929, 1970; Newell a spol., viz shora; Morgan a spol., Epidomiol. Infect., svazek 98, 323-330, 1987). Prvotním zdrojem však zůstává prasečí bacilonosič. Běžné pokusy identifikovat a vymýtit populaci bacilonosičů mezi hospodářskými zvířaty byly bráněny nedostatkem informací s ohledem na epidemiologii a patogenezi salmonelosy u hospodářských zvířat. Eliminace a kontrola byla nesnadná, protože druhy Salmonelly jsou široce rozšířeny a přetrvávají dobře v daném prostředí. Existuje značné množství informací s ohledem na virulenci Salmonelly vztahující se k pathogenezi u lidí. Avšak k dispozici je skutečně málo informací, které by se týkaly živočišných zdrojů tohoto infekčního agens. Pochopení průběhu infekce v potravě produkované ze zvířecích zdrojů získalo silnou prioritu a kontrola a eliminace zvířecího nosiče umožní prevenci přenosu nemoci ze zvířat na lidi. Ovládnutí choroby, jejíž původ je v potravě, lze nejlépe dosáhnout identifikací a vymýcením populace bacilonosiče. Zatímco bacilonosičem je možné stát se kdykoliv během doby života zvířete, expozice při narození bude u zvířete první příležitostí expozice patogenem. Byla objevena aplikace mukosální kultury ke kontrole kolonizace patogenu u zvířat pro produkci potravy. Termínem kontrola se rozumí snížení nebo prevence kolonizace enteropatogenních bakterií. Termínem zvířata pro produkci potravy se rozumí každé zvíře, které lidé konzumují.
Podstata vynálezu
Vynález se týká jedinečné bakteriální kultury, získané z oškrabků střevního traktu zvířat prostých choroboplodných zárodků. Tato počáteční kultura se subkultivuje a pak je vhodná pro podávání mladým zvířatům.
-2CZ 294683 B6
Získání kultury může zahrnovat aseptické odebrání tenkého střeva včetně céka zvířeti a umístění do sterilní nádoby. Nádoba se výhodně během přípravy kultur udržuje v anaerobním prostředí.
Zvíře může být v jakémkoliv stáří, nejvíce se preferuje používat k ochraně nově narozených i starších zvířat zvířata mladá. Prvotní kultura se zkultivuje a potom podává mladým zvířatům. Způsob podle tohoto vynálezu je použitelný pro jakékoliv zvíře, ať již domestikované nebo divoké a zejména pak pro hospodářská zvířata pěstovaná pro konzumaci lidmi, která by mohla sloužit jako nosič pro cílové patogeny. Hospodářská zvířata zahrnují hovězí dobytek, telata, vepře, selata, ovce, jehňata, bizony, kozy, králíky, mořské živočichy a podobné. Preferuje se podávat preparát mukosální kompetitivní exkluzní subkultury („livestock mucosal competitive exclusion subculture“, LMCES) dvakrát během prvních 24 hodin po porodu. Avšak preparát je možné podávat kdykoliv během života zvířete, jako například na kontinuální bázi nebo v čase voleném během doby života zvířete. Termínem „na kontinuální bázi“ se rozumí, že se konzistentní zdroj LMCES poskytuje podáváním v pitné vodě, krmení, při vykrmování do jícnu nebo pomocí aerosolu. LMCES může být podávána denně v krmení nebo vodě, týdně, měsíčně atd. na kontinuální bázi. Termínem „v čase voleném během doby života zvířete“ se rozumí podávání LMCES kultury v kritických bodech kontroly, ke kterým dochází během narození, odstavení mláděte, nemoci, podávání antibiotik, nepřiměřeném horku, dehydrataci, chladu, během transportu jako při přestěhování do jiných budov při produkčním procesu a před transportem na porážku atd.
Cílové patogeny zahrnují všechny lidské enteropatogenní bakterie schopné kolonizovat zvířata, zejména pak hospodářská zvířata pěstovaná pro konzumaci lidmi. Výraz „lidské enteropatogenní bakterie“, zde zahrnuje bakterie, které jsou schopny nebo o nichž je známo, že kolonizují lidskou zažívací trubici, nebo do ní rozsévají toxiny, a které jsou schopny působit střevní nemoci u lidského hostitele. Příklady lidských enteropatogenních bakterií představují, ale neomezují se jen na druhy Salmonella, druhy Campylobacter a Escherichia coli.
Tato mukosální kompetitivní exkluzní subkultura (LMCES) může být kombinována s dalšími kulturami nebo terapiemi, účinnými při potírání salmonelly u zvířat, jako jsou například laktobacily, fruktooligosacharidy a kvasinky. Podávání LMCES může být doplněno jakoukoli běžnou nebo známou léčbou zvířat, zejména pro inhibici enteropatogenů, pokud neovlivňuje účinnost preparátu LMCES.
Při postupech podle předkládaného vynálezu se zvířatům podávají kompozice mukosálních kompetitivních exkluzních subkultur hospodářských zvířat (LMCES). „Podávání“ zde zahrnuje jakoukoli vhodnou metodu orální aplikace kompozice zvířatům, známou v oboru, jako je například orální sonda, krmení, nastříkání nebo nanesení pasty na mateřské nebo umělé struky, podávání v mléce apod. LMCES mohou být podávány rovněž přímo do otevřeného tenkého střeva. Preparát může být v jakékoli známé aplikační formě, například jako kapalina, pasta, gelový uzávěr nebo aerosol. LMCES preparáty se podávají zvířatům při kterémkoliv stáří včetně nově narozených zvířat v množství účinném alespoň pro redukci lidských enteropatogenních bakterií zjištěných ve vnitřnostech zvířat. Zde používané „redukce bakterií“ a „alespoň redukování lidských enteropatogenních bakterií“ se vztahuje k redukci počtu bakterií ve srovnání s tím, co by se očekávalo u zvířete, které nebylo ošetřeno metodami podle předkládaného vynálezu. Pro takové srovnání může být použita každá přesná metoda měření, sčítání a srovnávání bakterií ve střevním traktu zvířat, jak to bude zřejmě odborníkům znalým oboru. Zde používané „v množstvích účinných“, „účinné množství“ nebo „množství účinné“ se vztahuje k podávanému množství LMCES preparátu, kdy účinek podávání způsobuje alespoň snížení enteropatogenních bakterií zjištěných při každém stáří zvířat. Množství preparátu se bude měnit v závislosti na velikosti zvířete, které se ošetřuje a na způsobu podávání. Pro malá zvířata, včetně malých nově narozených zvířat může být vykrmováním do jícnu podáváno kolem 4 až 8 ml druhé nebo 48 hodin později podávané pasáže subkultury LMCES kultury, přičemž kolem 5 ml je preferovaná dávka. Pro velká zvířata, včetně nově narozených velkých zvířat, druhá 48 hodinová nebo pozdější pasáž LMCES může být pro orální aplikaci nezředěná anebo až desetkrát zředěna v kapalné suspenzi a rozpouštědlem může být například mléko, voda atd. I další pasáž subkultury je možné provést, avšak pravděpo
-3 CZ 294683 B6 dobně bude méně účinná. Zředěné i nezředěné kapalné LMCES preparáty mohou být aplikovány přímo. U nově narozených zvířat se LMCES preparát podává přibližně během 2 až 48 hodin po narození, věští přednost se dává přibližně 2 až 6 hodinám a druhá dávka následuje o přibližně 18 až 24 hodin později. Nejvíce se dává přednost rozvrhu ošetřování, kdy první dávka se podává do asi 6 hodin po narození a druhá dávka následuje kolem 24 hodin po narození. Obvykle se první dávka při ošetření podává kolem 2 až 24 hodin před odstavením, transportem nebo stěhováním do jiných budov, přičemž preferovaná doba je asi 2 až 6 hodin. V těchto případech se vyžaduje jen jedno ošetření, ale druhé ošetření může být uskutečněno 18 až 24 hodin po prvním ošetření. Variace rozvrhu ošetřování budou odrážet obchodní praktiky hospodářství. Další dávky mohou být podávány při odstavení, před stěhováním v produkčním zařízení nebo před transportem na porážku. Pokud jsou podávány v krmení nebo vodě, měla by aplikace probíhat denně.
LMCES preparát se připravuje aseptickým odebráním tenkého střeva včetně céka zvířeti a jeho umístěním do sterilní nádoby. Nádoba se po celou dobu přípravy kultur výhodně udržuje v anaerobním prostředí. Zvolená délka střeva se jakýmkoli známým způsobem obrátí naruby. Obsah střeva se odebere kombinací vyplachování a oškrabávání. Vyplachování se děje vhodným anaerobním médiem. Pro vyplachování je možno používat jakékoli médium účinné pro uvedený účel, včetně vody. Přednost se dává anaerobnímu médiu, zvlášť přednostně preredukovanému Eh vyváženému anaerobnímu médiu. Povrchové oškrábání se provádí nástrojem s tupým ostřím, například čepelí skalpelu s oblou hranou. Po oškrábání se průsvit znovu vypláchne a následuje oškrábání nástrojem s ostrou hranou, například ostrou hranou skalpelu nebo jiného vhodného nástroje. Nástroj s ostrou hranou a průsvit se vypláchnou výše popsaným médiem za účelem získání epitelových buněk a původní mikroflóry a výplachy se shromažďují ve sterilní nádobě. Je také možno tkáň přímo nařezat do kultivačního média, aniž by se předtím provádělo oškrabávání. Při zahájení procesu je výhodné tkáň uchovávat v redukční atmosféře, tj. pod proudem dusíku. Výplach nebo řezy s přidruženými epitelovými buňkami a mikroflórou se suspendují a obsah se naočkuje do sterilního anaerobního média pro kulturu. Termín mikroflórazde zahrnuje původní, tj. vlastní bakterie. Kultura se anaerobně inkubuje 48 h při 35 až 40 °C, přenese do čerstvého anaerobního média a znovu inkubuje ještě 48 h. Tato druhá inkubace je druhá 48hodinová pasáž subkultury a je nejvýhodnějším používaným LMCES preparátem. Popsaným způsobem mohou být použity i další pasáže subkultury. Kultura se pak pomocí jakékoli vhodné a běžné izolační metody analyzuje na přítomnost lidských enteropatogenů. Kultury prosté patogenů se podávají okamžitě, lyofilizované nebo zmrazené běžnými technikami pro zmrazování buněčných kultur. Krev zvířecích dárců by měla být sérologicky testována na hladinu protilátek vůči příslušným patogenům hostitelů, včetně člověka. Měly by být používány kultury pouze ze zvířat, u kterých neproběhla sérokonverze.
Dále uváděné příklady jsou uváděny pouze pro další ilustraci vynálezu a nejsou míněny, aby omezovaly rozsah vynálezu jak je definován patentovými nároky.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Příprava mukosálních CE kultur hovězího dobytka
Střeva zdravých dospělých kusů hovězího dobytka byla získána z místních jatek a v plastickém vaku ve sterilním anaerobním prostředí byla během jedné hodiny transportována do laboratoře. Mukosální kultura byla připravena ze spodní části střevního traktu. Před odejmutím části střeva, které má být použito, se okolní oblast podváže motouzem, aby nedošlo k vytečení střevního obsahu. Asepticky se odejme přibližně 4 až 5 palců (10, 16 až 12,7 cm) délky a vloží se do sterilního kontejneru. Kontejner se potom umístí do kádě, která je kontinuálně proplachována dusíkem kyslíku prostým. Všechny manipulace se provádějí pod okrajem kádě, aby se kultura, která se má
-4CZ 294683 B6 získat, uchovala v anaerobním prostředí. Střevní tkáň se opatrně po délce obrátí na sterilní skleněné tyčce, aniž by došlo k dotyku vnitřního povrchu.
Jakmile je obráceno, odstraní se obsah kombinací vymývání a oškrabování. Vymývání se provádí pomocí injekční stříkačky při aplikaci „pre-reduced brain hearth infusion broth“ (PR-PHIB) [předredukované infuzní živné půdy pro mozek a srdce]. Pro vymývací krok lze používat každé jiné vhodné anaerobní médium. Oškrabání se provede tupým břitem čepele skalpelu. Vnitřní povrch střeva se vymyje, oškrábe a znovu vymyje. Nyní se ceacální epithelium jemně oškrábe a pro oškrábání je nejlépe použít ostrý břit skalpelu. Avšak tkáň může být nařezána přímo do kultivačního média. Po oškrabání obráceného střeva se skalpel a vršek vnitřní stěny znovu omyje PR-BHIB. Toto konečné omytí se shromáždí ve sterilní nádobě. Vymývací kapalina doprovázená spolu s epitheliálními a bakteriálními buňkami se natáhne do injekční stříkačky s jehlou a použije k naočkování do sterilní zkumavky s PR-PHIB skrze gumové septum. Tyto zkumavky se 48 hodin inkubují při 35 °C, transferují a znovu inkubují dalších 48 hodin. Kultura se vyzkouší na přítomnost lidských enteropatogenů, o které je zájem, takových jako Salmonella, E. coli a druhy Campylobacter. Pokud je kultura prosta jak lidských, tak zvířecích enteropatogenů a považována za bezpečnou je nyní připravena k aplikaci nebo ke skladování pro pozdější použití.
Příklad 2
Test účinnosti hovězí LMCES
Hovězí LMCES kompozice popsaná svrchu v příkladu 1, byla dvakrát podána nově narozeným telatům během přibližně prvních 24 hodin života. Kultura byla podána orálně pomocí lahve s dudlíkem. Každé ošetřované tele při každé aplikaci obdrželo kolem 500 ml LMCES nezředěné nebo až desetinásobně zředěné v mléce. Po administraci byla telata krmena jako obvykle. Asi dvacetčtyři hodin po administraci, bylo každému teleti krmením do jícnu podáno kolem 108 buněk E. coli 0157:H7 rezistentní vůči nalidixové kyselině. Po tomto otestování byla telata chována kolem sedmi dní v izolovaných komorách, aby bylo přechodným buňkám E. coli 0157:H7 umožněno vyčistit střevní trakt. Pak byla telata zabita, asepticky byla odstraněna caeca a uložena do plastických vaků. Caeca byla potom testována na přítomnost a hladinu E. coli 0157:H7. Průměrně zaznamenaný počet sledovaných patogenů na gram caeca pro celou skupinu se nazývá kolonizační faktor (CF). Poměr CF neošetřené kontrolní skupiny ku CF ošetřené skupiny se nazývá protekční faktor (PF). Relativní hodnota stupně ochrany pro kulturu se získává porovnáním PF jedné CE mukosální kultury s PF jiné kultury.
Příklad 3
Příprava prasečích mukosálních CE kultur
Zdravé mladé prase ve stáří od 1 do 6 měsíců až do úplné dospělosti bylo trankvilizováno směsí narkotik, jak je to v oboru rutinně používáno. Byla použita směs 8 mg/kg Ketasetu, 6 mg/kg Telazolu a 4 mg/kg Rompunu. Prase bylo potom vykrvácením zabito. Jedno caecum bylo asepticky vyjmuto a umístěno do sterilní Petriho misky. Miska byla potom vložena do kádě, která byla kontinuálně proplachována dusíkem kyslíku prostým. Všechny manipulace se musí provádět pod okrajem kádě, aby kultura, která má být získána, byla uchovávána v anaerobním prostředí. Caecum se po délce opatrně obrátí na sterilním nástroji, bez dotyku vnitřního povrchu. Jakmile je obráceno, obsah se odstraní kombinací vymývání a oškrábání. Vymytí se provede předredukovaným živným roztokem za pomoci injekční stříkačky. Oškrábání se provede tupým břitem sterilního instrumentu. Vnitřní povrch se omyje, oškrábe a potom znovu vymyje. Nyní se caecální epithelium jemně oškrábe ostrým břitem skalpelu nebo může být nařezáno na krátké kousky (kolem 5 cm). Po oškrábání obráceného caeca se skalpel a vršek vnitřní stěny znovu vymyje PRBHIB. Toto finální vymytí nebo kousky caeca se shromáždí do sterilní nádoby. Vymývací kapa
-5CZ 294683 B6 lina spolu s doprovázejícími bakteriálními buňkami se natáhnou do sterilní injekční stříkačky s jehlou a skrze gumové septum se použijí k naočkování do zkumavky se sterilní PR-BHIB. Tyto zkumavky se inkubují přibližně při 35 °C po asi 48 hodin, transferují a znovu inkubují dalších přibližně 48 hodin. Kultura se vyzkouší na přítomnost lidských enteropatogenů, o které je zájem, takových jako Salmonella, E. coli a druhy Campylobacter. Pokud je kultura prosta jak lidských, tak zvířecích enteropatogenů a považována za bezpečnou, je nyní připravena k aplikaci nebo ke skladování pro pozdější použití.
Příklad 4
Test účinnosti mukosální CE kultury (LMCES) prasečího dobytka
Prasnice se známým datem vrhu selat se držela v porodních klecích v izolovaných jednotkách. Každá prasnice byla kontrolována každé čtyři hodiny počínaje jeden den před známým datem vrhu, aby se zajistilo, že první LMCES kultura byla podána včas. Po vrchu se podsvinčata nechala nakojit, aby se zajistilo, že dostala kolostrum, a každému podsvinčeti se mezi asi 2 a 6 hodinami po vrhu krmením do jícnu podalo 5 ml LMCES. Druhá dávka přibližně 5 ml byla podána asi za 24 hodin. Selata byla stimulována kolem 103 CFU S. choleraesuis intranasálním nakapáním asi 48 hodin po vrhu (24 hodin po posledním podání LMCES). Po podání preparátu byla podsvinčata připouštěna k obvyklému krmení. Po zhruba 7 dní po stimulaci byla denně u každého selete měřena rektální teplota a byl prováděn a na Salmonellu kultivován rektální výtěr. Zhruba za 7 dní po stimulaci byla všechna selata zabita a pitvána. Tkáně byly shromažďovány pro kvalitativní bakteriologii a zahrnovaly mandle (ton), mandibulámí lymfatické uzliny (min), plíce, brachiální lymfatické uzliny (bln), játra, slezinu (spi), prostředí ileum, ileotračníkové spojení (icj), ileotračníkové lymfatické uzliny, caecum (cec), caecální obsahy, tračník (col), tračníkové lymfatické uzliny a žaludeční stěnu (sw). Kvantitativní bakteriologie byla prováděna také na caecálním obsahu a ileotračníkovém spojení, aby se stanovila úroveň Salmonelly uvnitř tkání.
Aby se zjistil vliv, který mohly mít prasnice na selata, shromažďovaly se také výkaly prasnic a kultivovaly se před vrhem, během asi 48 hodin po vrhu a kolem sedmého dne po stimulaci selat (prasnice nikdy nebyly přímo stimulovány pomocí S. choleraesuis). Kontrolním selatům nebyla podávána LMCES, byla však stimulována ve stáří kolem 48 hodin. Tkáně byly shromažďovány a zpracovávány tak, jak je svrchu popsáno.
Klinické příznaky nebyly u všech selat podrobených experimentu zřejmé. Nalezení Salmonelly v rektálních výtěrech bylo kolísavé. Avšak u selat ošetřených LMCES bylo kolem 41 % tkání pozitivních proti 63 % pozitivních tkání u kontrolních selat (Tabulka 1, souhrn pro pokusy 1 a 2). Pro selata pocházející od negativních prasnic (pokus 1- prasnice 1, 2, 3 a pokus 2- prasnice 2) bylo pozitivních 39 % [120/310] tkání proti 78 % [47/60] (pokus 1-kontrolní negativní prasnice) pozitivních tkání z kontrolní prasnice. Snížení Salmonelly se ukázalo u selat ošetřených CE proti selatům neošetřeným. Zaznamenána byla 2 až 5 násobná redukce Salmonelly v caecálním obsahu (CC) nebo ileotračníkovém spojení (ICJ) u selat ošetřených LMCES, když se porovnávalo s kontrolami (Salmonella vymizela z ICJ respektive CC u selat od prasnic 2 a 1) (Tabulka 2, pokusy 1 a 2). V pokusu 1 byly všechny prasnice bez pathogenů. Původně všechny prasnice vykazovaly jednu skupinu séra, potom před vrhem přestaly. Při vrhu prasnice 1 a kontrolní prasnice vykázaly B skupinu séra. V pokusu 2 podsvinčata z prasnice 1 a 2 vykázaly pouze B typ Salmonelly a nikoliv stimulaci S. choleraesuis. Kontroly pro pokusy 1 a 2 nedostaly žádnou LMCES, pouze stimulační organizmus. Jak lze vidět, nejsou zde jenom snížené úrovně stimulačního organizmu, ale také snížené úrovně přirozené kolonizace. I když u podsvinčat již kolonizovaných Salmonellou bylo zaznamenáno jiné snížení než bylo získáno při stimulaci, snižuje se stupeň ochrany, což naznačuje, že u kojených podsvinčat může být dřívější včasná administrace oprávněná.
-6CZ 294683 B6
Účelem předcházejícího detailního popisuje ilustrace. Ten nebo onen detail má pouze tento účel a odborníci znalí oboru mohou v tom vytvářet variace, aniž by opustili ducha a rozsah vynálezu.
Tabulka 1
Incidence a úrovně Salmonelly u podsvinčat, jimž bylo poskytnuto ošetření LMCE a jimž nebylo poskytnuto ošetření (Ctrl)
Souhrn
Log10/g | ||||||
Výtéry | % positiv. | Tkáně | % positiv. | CC | ICJ | |
CE | 57/281 | 20,3 | 157/380 | 41,3 | 3,19 | 3,13 |
Ctrl | 72/114 | 63,2 | 95/150 | 63,3 | 5,09 | 5,45 |
Tabulka 2
Incidence a úrovně Salmonelly 2 dny po stimulaci u podsvinčat, jimž bylo poskytnuto ošetření LMCE a jimž nebylo poskytnuto ošetření (Ctrl)
Pokus 1 | ||||||
Prasnice/ počet podsvinčat | Počet pasáží | Počet positivních výtěrů | Počet positivních tkání | % positivních tkání | Iog10 CC | Iog10 ICJ |
1-//7 2 | 0 | 36/40 | 90 | 3,86 | 3,65 | |
2- /%/ 2 | 1 | 21/60 | 35 | 2,51 | 3,35 | |
3- /12 | 4/5 | 2 | 43/120 | 36 | 1,5 | 0 |
Suma | Ns | 100/220 | 45 | 3,16 | 3,14 | |
Kontrola | C/6 | 0 | 47/60 | 79 | 5,39 | 5,74 |
-7CZ 294683 B6
Všechny prasnice negativní
Tkáně
ton | bln | plíce | játra | spi | col | icj | cec | cc | sw | |
1(4) | 3 | 4 | 4 | 3 | 4 | 4 | 4 | 3 | 4 | 3 |
2(6) | 0 | 3 | 3 | 3 | 3 | 0 | 4 | 2 | 2 | 1 |
3(12) | 2 | 12 | 9 | 7 | 6 | 0 | 3 | 1 | 3 | 0 |
c(6) | 4 | 4 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 4 |
Pokus 2: | ||||||
Všechny salmonelly | ||||||
Prasnice/ počet podsvinčat | Počet pasáži | Počet positivních výtérů | Počet positivních tkání | % positivních tkání | Iog10 CC | log 10 ICJ |
1 +/7 | 4/4 | 50/56® | 37/70 | 53 | 2,32 | 1,38 |
2-/9 | 6/7 | 4/49® | 20/90 | 22 | -0- | -0- |
Suma | na | 57/160 | 36 | 2,02 | 1,08 | |
C+/9 | 72/72® | 48/90 | 53 | 3,33 | 4,23 |
8 vykazují pouze B
Tkáně
ton | bln | plíce | játra | spi | col | •cj | cec | cc | SW | |
1(7) | 2 | 6 | 6 | 5 | 4 | 4 | 4 | 2 | 4 | 0 |
2(9) | 1 | 5 | 3 | 2 | 3 | 1 | 1 | 2 | 2 | 0 |
c | 2 | 3 | 3 | 3 | 2 | 6 | 9 | 9 | 9 | 2 |
Pouze Cl : | ||||||
Prasnice/ počet podsvinčat | Počet pasáží | Počet positivních výtérů | Počet positivních tkání | % positivních tkání | Iog10 CC | Iog10 ICJ |
1 +/7 | 4/4 | na | 19/70 | 27 | -0- | -0- |
2-/9 | 6/7 | na | 18/90 | 20 | -0- | -0- |
-8CZ 294683 B6
Suma | na | 37/160 | 23 | -0- | -0- | |
C+/9 | na | 16/98 | 18 _ | 2,98 | 4,23 |
Tkáně
ton | bln | plíce | játra | spi | col | icj | cec | cc | sw | |
1(7) | 1 | 5 | 5 | 4 | 4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
2(9) | 1 | 5 | 3 | 2 | 3 | 1 | 1 | 1 | 1 | 0 |
c | 1 | 3 | 3 | 2 | 2 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (21)
1. Kompozice mající schopnost omezovat kolonizaci enteropatogenních bakterií u hospodářských zvířat, získatelná způsobem zahrnujícím získání zvířecí mukosální kompetitivní exkluzní kultury ze zvířete prostého patogenů, subkultivaci této kultury a přípravu kompozice vhodné pro podávání této subkultury zvířeti.
2. Kompozice podle nároku 1, získatelná způsobem, při němž uvedený stupeň získání zahrnuje aseptické odebrání tenkého střeva včetně céka zvířeti a umístění do sterilní nádoby.
3. Kompozice podle nároku 2, získatelná způsobem, při němž se uvedená nádoba udržuje v průběhu přípravy kultur v anaerobním prostředí.
4. Kompozice podle nároku 2, získatelná způsobem, při němž se obsah střeva odstraňuje kombinací vymývání a oškrabávání.
5. Kompozice podle nároku 4, získatelná způsobem, při němž se oškrabávání provádí čepelí skalpelu s oblou hranou.
6. Kompozice podle nároku 4, získatelná způsobem, při němž se po oškrábání obsah střeva opět promyje s následným oškrábáním ostrou hranou skalpelu.
7. Kompozice podle nároku 6, získatelná způsobem, při němž se ostrá hrana skalpelu a stěna průsvitu promyjí médiem pro získání epitelových buněk a původní mikroflóiy.
8. Kompozice podle nároku 1, získatelná způsobem, při němž se kultura anaerobně inkubuje
48 h při 35 až 40 °C, přenese do čerstvého anaerobního média a znovu inkubuje dalších 48 h.
9. Kompozice podle nároku 8, získatelná způsobem, při němž se kultura dále analyzuje s použitím izolačních technik na přítomnost lidských enteropatogenů.
10. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se t í m , že dále zahrnuje alespoň jednu další kulturu účinnou při potírání Salmonelly.
-9CZ 294683 B6
11. Kompozice podle nároku 10, vyznačující se tím, že další kultura může být vybrána ze skupiny tvořené laktobacily, kvasinkami a jejich směsmi.
12. Kompozice podle nároku 9, vyznačující se tí m , že je před podáváním zvířeti zmrazená.
13. Kompozice podle nároku 9, vyznačující se tí m , že je před podáváním zvířeti lyofílizována.
14. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že je kapalná.
15. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že je pastovitá.
16. Kompozice podle nároku 1, v y z n a č u j í c í se t í m , že je gelová.
17. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že je aerosolová.
18. Kompozice podle nároku 1, získatelná způsobem, který před subkultivací dále zahrnuje tyto stupně: aseptické odebrání tenkého střeva uvedenému zvířeti prostému patogenů, obrácení tohoto střeva, výplach obráceného střeva, oškrábání obráceného střeva, opakování výplachů a oškrabávání k získání epitelových buněk a mikroflóry, inokulaci výplachů a oškrabků do sterilního anaerobního média za vzniku inokula a kultivaci inokula po dobu 48 h za vzniku kultury.
19. Kompozice podle nároku 18, vyznačující se tím, že subkulturou je anaerobní subkultura.
20. Kompozice podle nároku 18, vyznačující se tím, že uvedená kultura je získána z oškrabků střevního traktu uvedených hospodářských zvířat prostých patogenů.
21. Kompozice podle nároku 20, vyznačující se tím, že střevním traktem je tenké střevo.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/729,113 US5807546A (en) | 1996-10-11 | 1996-10-11 | Livestock mucosal competitive exclusion culture to reduce enteropathogenic bacteria |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ120099A3 CZ120099A3 (cs) | 1999-07-14 |
CZ294683B6 true CZ294683B6 (cs) | 2005-02-16 |
Family
ID=24929644
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ19991200A CZ294683B6 (cs) | 1996-10-11 | 1997-10-10 | Kompozice mající schopnost omezovat kolonizaci enteropatogenních bakterií u hospodářských zvířat |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US5807546A (cs) |
EP (1) | EP0932661A4 (cs) |
JP (1) | JP2002503084A (cs) |
CN (2) | CN1515667A (cs) |
AU (1) | AU738730B2 (cs) |
BR (1) | BR9712252A (cs) |
CA (1) | CA2267233A1 (cs) |
CZ (1) | CZ294683B6 (cs) |
HU (1) | HUP0000148A3 (cs) |
PL (1) | PL189717B1 (cs) |
UA (1) | UA73269C2 (cs) |
WO (1) | WO1998016626A1 (cs) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5951977A (en) * | 1997-10-14 | 1999-09-14 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Competitive exclusion culture for swine |
EP1313574B1 (en) | 2000-08-11 | 2008-10-29 | WHITLOCK, David R. | Compositions including ammonia oxidizing bacteria to increase production of nitric oxide and nitric oxide precursors and methods of using same |
AU2003222569A1 (en) * | 2002-01-11 | 2003-07-24 | Whitlock, David R. | Compositions including ammonia oxidizing bacteria and methods of using same |
US7323166B2 (en) | 2002-06-19 | 2008-01-29 | Board Of Regents University Of Nebraska | Lactic acid bacteria cultures that inhibit food-borne pathogens |
US20040241150A1 (en) * | 2002-12-19 | 2004-12-02 | Hargis Billy M. | Defined competitive exclusion cultures for food borne pathogens |
WO2004104175A2 (en) * | 2003-05-14 | 2004-12-02 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Probiotic bacteria and methods |
BRPI0414813A (pt) * | 2003-09-26 | 2006-11-14 | David R Whitlock | método para o uso de bactéria que oxidam a amÈnia |
US20060039899A1 (en) * | 2004-08-23 | 2006-02-23 | Winn Robert T | Animal nutritional product that increases weight gain and reduces diarrhea morbidity, mortality and severity by stimulation of natural immune response, nutritional support of immune function and supplemental nutricines and probiotics |
EP2593187A4 (en) | 2010-07-16 | 2014-04-09 | Univ Arkansas | METHODS AND COMPOSITIONS COMPRISING SPORTS-CREATING BACTERIA FOR ENHANCING ANIMAL HEALTH |
WO2012044984A1 (en) | 2010-09-30 | 2012-04-05 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Methods of selecting and using therapeutic and prophylactic probiotic cultures to reduce bacterial pathogen loads |
WO2014022572A1 (en) | 2012-08-01 | 2014-02-06 | Pacific Vet Group-Usa, Inc. | Probiotic for amelioration of coccidiosis vaccine reaction |
US11225640B2 (en) | 2014-04-15 | 2022-01-18 | Aobiome Llc | Ammonia oxidizing bacteria for treatment of psoriasis |
KR20210100224A (ko) | 2014-04-15 | 2021-08-13 | 에이오바이오미 엘엘씨 | 암모니아-산화 니트로소모나스 유트로파 균주 d23 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4335107A (en) * | 1978-06-05 | 1982-06-15 | Snoeyenbos Glenn H | Mixture to protect poultry from salmonella |
FI840816A0 (fi) * | 1984-03-01 | 1984-03-01 | Farmos Oy | Bakteriepreparat |
US4910024A (en) * | 1988-07-05 | 1990-03-20 | Micro Chemical, Inc. | Method and apparatus for administering live bacteria as feed additives to livestock and poultry |
US5206015A (en) * | 1989-06-05 | 1993-04-27 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Introduction of bacteria in ovo |
US5478557A (en) * | 1992-07-29 | 1995-12-26 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Probiotic for control of salmonella |
DE69422501T2 (de) * | 1993-03-16 | 2000-06-15 | Us Agriculture | Kompetitiv verdrängende schleimhautflora |
GB2298432B (en) * | 1995-03-03 | 1999-04-14 | Orion Yhtymae Oy | In ovo administration of a competitive exclusion culture |
-
1996
- 1996-10-11 US US08/729,113 patent/US5807546A/en not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-10-10 UA UA99052610A patent/UA73269C2/uk unknown
- 1997-10-10 PL PL97332621A patent/PL189717B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-10-10 WO PCT/US1997/018769 patent/WO1998016626A1/en not_active Application Discontinuation
- 1997-10-10 BR BR9712252-1A patent/BR9712252A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-10-10 AU AU49071/97A patent/AU738730B2/en not_active Ceased
- 1997-10-10 EP EP97911774A patent/EP0932661A4/en not_active Withdrawn
- 1997-10-10 CN CNA031077617A patent/CN1515667A/zh active Pending
- 1997-10-10 HU HU0000148A patent/HUP0000148A3/hu unknown
- 1997-10-10 JP JP51861398A patent/JP2002503084A/ja not_active Ceased
- 1997-10-10 CA CA002267233A patent/CA2267233A1/en not_active Abandoned
- 1997-10-10 CN CN97198680A patent/CN1233285A/zh active Pending
- 1997-10-10 CZ CZ19991200A patent/CZ294683B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-06-26 US US09/105,306 patent/US6214335B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU4907197A (en) | 1998-05-11 |
CN1515667A (zh) | 2004-07-28 |
PL189717B1 (pl) | 2005-09-30 |
AU738730B2 (en) | 2001-09-27 |
JP2002503084A (ja) | 2002-01-29 |
US6214335B1 (en) | 2001-04-10 |
WO1998016626A1 (en) | 1998-04-23 |
EP0932661A4 (en) | 2000-08-23 |
PL332621A1 (en) | 1999-09-27 |
UA73269C2 (en) | 2005-07-15 |
BR9712252A (pt) | 2000-01-25 |
CN1233285A (zh) | 1999-10-27 |
EP0932661A1 (en) | 1999-08-04 |
US5807546A (en) | 1998-09-15 |
HUP0000148A2 (hu) | 2000-06-28 |
CA2267233A1 (en) | 1998-04-23 |
HUP0000148A3 (en) | 2001-09-28 |
CZ120099A3 (cs) | 1999-07-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Sørum et al. | Resistance to antibiotics in the normal flora of animals | |
Ringø et al. | Intestinal microflora of fish larvae and fry. | |
Mead | Prospects for ‘competitive exclusion’treatment to control salmonellas and other foodborne pathogens in poultry | |
Berchieri Jr et al. | The activity in the chicken alimentary tract of bacteriophages lytic for Salmonella typhimurium | |
KR100447903B1 (ko) | 프로바이오틱 박테리아에 의한 가축에서의 장내 출혈성 이.콜리오 157:에이치 7의 조절 | |
US9861665B2 (en) | Use of UVE bacteria for growth promotion in animals | |
US3984575A (en) | Bacterial compositions for changing the digestive system bacteria in animals | |
WO1994003195A1 (en) | Probiotic for control of salmonella | |
JP2571158B2 (ja) | 卵中へのバクテリアの導入 | |
US3953609A (en) | Method for the growth restriction of undesirable digestive system bacteria in animals and the establishment of lactobacillus lactis NRRL B-5628 | |
US5807546A (en) | Livestock mucosal competitive exclusion culture to reduce enteropathogenic bacteria | |
HUT67007A (en) | Preparations containing biologically activ agent wich are absorbed in the superior intestinal tract of animals | |
Estrada et al. | Administration of Bifidobacterium bifidum to chicken broilers reduces the number of carcass condemnations for cellulitis at the abattoir | |
PT94564A (pt) | Processo para a preparacao de uma composicao bacteriana utilizada em avicultura | |
Kohler et al. | Studies of Escherichia coli in Gnotobiotic Pigs: I. Experimental Reproduction of Colibacillosis | |
Monaghan et al. | Antibiotic resistance and R-factors in the fecal coliform flora of urban and rural dogs | |
REDUCE | Stern et al. | |
MXPA99003314A (en) | Livestock mucosal competitive exclusion culture to reduce enteropathogenic bacteria | |
Nakamura et al. | Prevention of drug‐resistant Escherichia coli colonization in chickens by treatment with a faecal fluid | |
Scott et al. | Experiments on infection of cows with typhoid bacilli | |
Wilson et al. | Swine dysentery control: the effect of Carbadox on the experimentally produced disease. | |
Herbert | Optimization of the Microscopic Detection of Segmented Filamentous Bacteria in Piglets Before, During, and After Weaning | |
Sanford | Ontario. Braxy-like abomasitis in a calf | |
Ibrahim et al. | Campylobacter jejuni infection in Japanese quail (Coturnix Coturnix)“isolation, pathogenicity and public health implications” | |
Cole | Prevalence of Campylobacter in the reproductive tracts and semen of turkeys and strategies to reduce contamination in poultry semen |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20071010 |