CZ291613B6

CZ291613B6 - Nitrilové sloučeniny jako inhibitory tumor necrosis faktoru alfa, farmaceutický prostředek obsahující tyto sloučeniny a použití těchto sloučenin

Info

Publication number: CZ291613B6
Application number: CZ1998609A
Authority: CZ
Inventors: George W. Muller; Mary Shire
Original assignee: Celgene Corporation
Priority date: 1995-08-29
Filing date: 1996-08-29
Publication date: 2003-04-16
Also published as: RU2196134C2; FI980038A0; EP0851857A1; EP1367051A2; EP0957091B1; EP0851857B1; DE69631592D1; US5728845A; SK284144B6; DK0851857T3; AU6963296A; DE69631592T2; CA2230487A1; HK1022692A1; JP2000500118A; KR19990036361A; KR20030097902A; SK27298A3; WO1997008143A1; KR100440874B1

Abstract

Nitrilov slou eniny obecn ho vzorce I, ve kter m Y, R.sup.5.n., R.sup.6.n. a R.sup.7.n. maj °adu v²znam uveden²ch podrobn v popisn sti a n znamen 0, 1, 2 nebo 3, p°edstavuj inhibitory tumor necrosis faktoru alfa a fosfodiester zy. Tyto slou eniny je mo no pou t k pot r n kachexie, endotoxick ho Üoku, retrovirov replikace, astma a z n tov²ch stav . Do rozsahu p°edm tn ho vyn lezu n le uveden slou eniny, farmaceutick² prost°edek obsahuj c tyto slou eniny a pou it t chto slou enin k v²Üe uveden²m · el m. Typickou slou eninou je 3-ftalimido-3-(3,4-dimethoxyfenyl)propionitril.\

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nové skupiny ne-polypeptidových imidů, konkrétně nitrilových sloučenin, kterých je možno použít jako inhibitorů tumor necrosis faktoru ke snižování hladiny TNFa u savců, farmaceutického prostředku obsahujícího tyto sloučeniny a použití těchto sloučenin k uvedeným účelům.

Dosavadní stav techniky

TNFa neboli tumor necrosis faktor-alfa (faktor a nádorové nekrózy) je cytokin, který je primárně uvolňován mononukleámí fagocyty jako reakce na různé imunostimulátory. Jestliže se podává zvířeti nebo člověku, vyvolává zánět, horečku, kardiovaskulární účinky, hemoragii, koagulaci, přičemž akutní fáze odpovídá jevům, které se projevují během akutních infekcí a šokových stavů.

Nadměrná nebo neregulovaná TNFa produkce byla implikována u mnoha chorobných stavů. Mezi tyto stavy je možno zahrnout endotoxemii a/nebo syndrom toxického šoku (viz. publikace Tracey a kol., Nátuře 330, 662-664 (1987) aHinshaw a kol., Circ. Shock 30, 279-292 (1990)); kachexii (viz. publikace Dezube a kol., Lancet, 335(869), 662(1990)); a stresový respirační syndrom u dospělého (Adult Respirátory Distress Syndrome), kde v plicních aspirátech ARDS pacientů byla zjištěna koncentrace TNFa v přebytku 12 000 pg/mililitr (viz publikace Millar a kol., Lancet 2(8665), 712-714 (1989)). Systémová infúze rekombinantního TNFa také vede ke změnám typicky pozorovaných u ARDS pacientů (viz. publikace Ferrai-Baliviera a kol., Arch. Surg. 124(12), 1400-1405 (1989)).

Předpokládá se, že TNFa je zapojen v onemocnění resorpce kostní dřeně, zahrnujících artritis, kde bylo zjištěno, že jestliže je aktivován, potom leukocyty vyvolávají aktivitu vedoucí k resorpci kostí, přičemž data potvrzují, že se TNFa podílí na této aktivitě (viz. publikace Bertolini a kol., Nátuře 319, 516-518 (1986) a Johnson a kol., Endocrinology 124(3), 1424-1427 (1989)). Při dosavadních výzkumech bylo zjištěno, že TNFa stimuluje kostní resorpci a inhibuje tvorbu kosti in vitro a in vivo prostřednictvím stimulace tvorby osteoklastů a aktivace kombinované s inhibicí funkce osteoblastů. Ačkoliv TNFa může být zapojen v mnoha chorobách týkajících se resorpce kosti, včetně artritis, nejdůležitější souvislost s chorobnými stavy je spojení mezi produkcí TNFa nádorovými nebo hostitelskými tkáněmi a s hyperkalcemií spojenou s malignací (viz publikace Calci. Tissue Int. (US) 46(Suppl.), 53-10(1990)). V reakci transplantát versus hostitel (Grafit versus Host Reaction) jsou zvýšené hladiny TNFa v séru spojeny s hlavní komplikací po akutních alogenních transplantátech kostní dřeně (viz. publikace Holler a kol., Blood, 75(4), 1011-1016(1990)).

Cerebrální malárie je letální hyperakutní neurologický syndrom spojený s vysokými krevním hladinami TNFa, přičemž u pacientů s malárií se objevují nejtěžší komplikace. Hladiny TNFa v séru souvisí přímo s nebezpečností choroby a prognózou u pacientů s akutními ataky malárie (viz publikace Grau a kol., N. Engl. J. Med. 320(24), 1586-1591(1989)).

TNFa také hraje roli v oblasti chronických plicních zánětlivých chorob. Ukládání částic oxidu křemičitého vede ksilikóze, což je choroba progresivního respiračního selhání, způsobená fíbrotickou reakcí. Protilátka k TNFa kompletně blokuje plicní fibrózu vyvolanou oxidem křemičitým u myši (viz. publikace Pignet a kol., Nátuře, 344:245-247 (1990)). Vysoké hladiny produkce TNFa (v séru a v izolovaných mikrofázích) byly demonstrovány na zvířecích mode-1 CZ 291613 B6 lech u nichž byla vyvolaná fibróza azbestem a oxidem křemičitým (viz. publikace Bissonnettte a kol., Inflammation 13(3), 329-339 (1989)). Rovněž bylo zjištěno, že alveolámí makrofágy od pulmonámíčh sarkoidozních pacientů spontánně uvolňují masivní množství TNFa ve srovnání s makrofágy od normálních dárců (viz. publikace Baughman a kol., J. Lab. Clin. Med. 115(1), 5 36-42 (1990)).

TNFa je také zapojen do zánětové odezvy, která následuje po reperfuzi, zvané reperfuzní poškození a je hlavní příčinou poškození tkáně po ztrátě krevního toku (viz. publikace Vedder a kol., PNAS 87, 2643-2646 (1990)). TNFa také mění vlastnosti endotheliálních buněk a má různé pro10 koagulační aktivity, jako je vyvolání zvýšení prokoagulační aktivity tkáňového faktoru a potlačení dráhy antikoagulačního proteinu C jakož i pokles regulace exprese trombomodulinu (viz. publikace Sherry a kol., J. Cell. Biol. 107, 1269-1277 (1988)). TNFa má protizánětovou účinnost, které společně s jeho časnou produkcí (během počátečního stavu zánětové příhody) jej činí pravděpodobným mediátorem tkáňového poškození v některých důležitých chorobách zahr15 nujících, ale neomezujících se na ně, jako je například infarkt myokardu, mrtvice a oběhový šok.

Specificky důležitá může být TNFa-vyvolaná exprese adheze molekul, jako je intercelulámí adheze molekul (ELÁM) na endotheliální buňky (viz. publikace Munro a kol., Am. J. Path. 135(1), 121-132 (1989)).

Navíc je nyní známo, že TNFa je účinný aktivátor retrovirové replikace, zahrnující aktivaci HTV-1 (viz. publikace Duh a kol., Proč. Nat. Acad. Sci. 86, 5974-5978 (1989); Poli a kol., Proč. Nat. Acad. Sci. 87, 782-785 (1990); Monto a kol., Blood 79, 2670(1990); Clouse a kol., J. Immunol. 142, 431—438 (1989); Poli a kol., AIDS Res. Hum. Retrovirus, 191-197 (1992)). AIDS vzniká z infekce T lymfocytů virem lidské imunodeficience (Human Immunodeficiency 25 Virus - HIV). Byly identifikovány alespoň tři typy nebo kmeny HIV, tj. HTV-1, HIV-2 a HTV-3.

Jako následek HTV infekce se zhoršuje T-buňkami zprostředkovaná imunita a u infikovaných jedinců se projevují těžké oportunní infekce a/nebo neobvyklé neoplazmy. HTV vstup do T lymfocytů vyžaduje T lymfocytovou aktivaci. Další viry, jako je HTV-1, HIV-2 infikují T lymfocyty po T buněčné aktivaci a taková exprese a/nebo replikace virového proteinu je zprostřed30 kována nebo udržována touto T buněčnou aktivací. Jakmile je aktivovaný T lymfocyt infikován

HTV, musí T lymfocyt být dále udržován v aktivním stavu pro zprostředkování HIV genové exprese a/nebo HTV replikace. Cytokiny, zejména TNFa, jsou implikovány v aktivované Tbuňkami zprostředkované expresi a/nebo virové replikaci HTV proteinu tím, že hrají roli v udržování T lymfocytové aktivace. Proto interference s cytokinovou aktivitou jako je prevence nebo 35 inhibice cytokinové produkce, zejména TNFa, u HTV-infikovaných jednotlivců působí omezení udržování T lymfocytů vyvolaného HTV infekcí.

Monocyty, makrofágy a podobné buňky jako jsou Kupferovy a gliální buňky, jsou rovněž zapojeny do udržování HIV infekce. Tyto buňky, podobné T buňkám, představují cíl virové replikace, 40 přičemž hladina virové replikace je závislá na stavu aktivace buněk (viz. publikace Rosenberg a kol., The Immunopathogenesis of HIVInfection, Advances in Immunology, 57 (1989)). V případě cytokinů jako je TNFa, bylo zjištěno, že aktivují HIV replikaci v monocytech a/nebo makrofázích (viz. Poli a kol., Proč. Nati. Acad. Sci., 87, 782-784 (1990)), proto prevence nebo inhibice produkce nebo aktivity cytokinů napomáhá omezení HIV progrese jak je uvedeno výše pro 45 T buňky. Další studie prokázaly, že TNFa působí jako obecný faktor při aktivaci HIV in vitro, přičemž byl navržen jasný mechanismus působení přes jaderný regulační protein nalezený vcytoplazmě buněk (viz. publikace Osbom a kol., PNAS 86, 2336-2340). Tato skutečnost naznačuje, že redukce TNFa syntézy může mít antivirový účinek u HIV infekcí tím, že se sníží transkripce a tím virové produkce.

AIDS virová replikace latentního HTV v T buněčných a makrofágových liniích může být indukována TNFa (viz. publikace Folks a kol., PNAS 86, 2365-2368 (1989)). Molekulární mechanismus vyvolání virové aktivity je naznačen schopností TNFa aktivovat genový regulační protein (NFkB) nalezený v cytoplazmě buněk, kteiý promotoruje HIV replikaci prostřednictvím vazby na

-2CZ 291613 B6 virovou regulační sekvenci (LTR) (viz. publikace Osborn a kol., PNAS 86, 2326-2340(1989)). TNFa v případě kachexie souvisící s AIDS je indikován zvýšenou hladinou INFa v séru a vysokými hladinami spontánní INFa produkce v periferních krevních monocytech u pacientů (viz. publikace Wright a kol., J. Immunol. 141(1), 99-104(1988)).

INFa je zapojen a má jinou roli v různých jiných virových infekcích, jako je například cytomegalovirus (CMV), influenza virus, adenovirus a třída herpes virů, z podobných důvodů jak jsou zde uvedeny.

Prevence nebo inhibice produkce nebo působení TNFa je proto považována za potenciální terapeutickou strategii pro léčení mnoho zánětových, infekčních, imunologických nebo malignantních chorob. Mezi tyto choroby je možno zahrnout, ovšem dále uvedeným výčtem není rozsah nijak omezen, septický šok, sepsi, endotoxický šok, hemodynamický šok a septický syndrom, postischemické reperfuzní poškození, malárii, mykobakteriální infekci, meningitis, psoriasu, kongestivní (městnavé) srdeční selhání, fibrotickou chorobu, kachexii, odmítnutí transplantátu (štěpu), rakovinu, autoimunitní chorobu, oportunistické infekce u AIDS, reumatoidní artritis, reumatoidní spondylitidu, osteoartritidu, jiné artritické stavy, Crohnovu chorobu, ulcerativní kolitidu, roztroušenou sklerózu, systemický lupus erythrematosis, ENL v lepře, poškození ozářením a hyperoxické alveolámí poškození. Snahy směrované k potlačení účinků TNFa byly učiněny v širokém rozsahu od použití steroidů jako je dexametházon a prednisolon do použití jak polyklonálních tak monoklonálních protilátek (viz. publikace Bautler a kol., Science 234, 470-474 (1985; WO 92/11383).

Jaderný faktor kB (NFkB) je pleiotropní transkripční aktivátor (viz. publikace Leonardo a kol., Cell 1989, 58, 227-229). NFkB je zapojen jako transkripční aktivátor do mnoha chorobných a zánětových stavů, přičemž je považován za faktor.regulujíc cytokinové hladiny, včetně INFa, ovšem tímto není rozsah nijak omezen, a také za aktivátor HIV transkripce (viz. publikace Dbaibo a kol., J. Biol. Chem. 1993, 17762-66; Duh a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. 1989, 86, 5974-78; Bachelerie a kol., Nátuře 1991, 350, 709-12; Boswas a kol., J. Acquired Immune Deficiency Syndrome 1993, 6, 778-786; Suzuki a kol., Biochem. And Biophys. Res. Comm. 1993, 193, 277-83; Suzuki a kol. Biochem And Biophys. Res. Comm. 1992, 189, 1709-15; Suzuki a kol., Biochem. Mol. Bio. Int. 1993, 31(4), 693-700; Shakhov a kol. 1990, 171, 35-47; a Staal a kol. Proč. Nati. Acad. Sci. USA 1990, 87, 9943-47). Inhibice NFkB vazby může regulovat transkripci cytokinového genu nebo genů a touto modulací a jinými mechanismy může být vhodná pro inhibování mnoha chorobných stavů. Sloučeniny nárokované v tomto patentu mohou inhibovat působení NFkB v jádru a jsou proto vhodné při léčení mnoha chorob, zahrnujících reumatoidní artritidu, reumatoidní spondylitidu, osteoartritidu, jiné artritické stavy, septický šok, sepsi, endotoxický šok, onemocnění transplantát versus hostitel, chřadnutí, Crohnovu chorobu, ulcerativní kolitidu, sklerózu multiplex, systemický lupus erythrematosis, ENL v lepře, HTV, AIDS a oportunistické infekce v AIDS, přičemž tímto výčtem není rozsah onemocnění nijak omezen.

TNFa a NFkB hladiny jsou ovlivňovány reciproční zpětnou smyčkou. Jak je uvedeno výše, sloučeniny podle předloženého vynálezu ovlivňují hladiny jak TNFa tak NFkB. V současnosti není však známo, jakým způsobem sloučeniny podle předmětného vynálezu regulují hladiny TNFa, NFkB nebo obou.

Mnoho celulámích funkcí může být zprostředkováno určitou hladinou adenosin-3',5'-cyklického monofosfátu (cAMP). Tyto celulámí funkce mohou přispívat ke vzniku zánětových stavů a nemocí, včetně astma, zánětů a jiných stavů (viz. publikace Lowe and Cheng, Drugs of the Future, 17(9), 799-807, 1992). Při dosavadních výzkumech bylo zjištěno, že zvýšení hladiny cAMP u zánětových leukocytů inhibuje jejich aktivaci a následné uvolňování zánětových mediátorů. Zvýšená hladina cAMP rovněž vede k relaxaci hladkého svalstva dýchacích cest.

-3CZ 291613 B6

Primárním celulámím mechanismem pro inaktivování cAMP je rozrušení cAMP skupinou isoenzymů, které se označují jako cyklické nukleotidové fosfodiesterázy (PDE). Dosud je známo sedm členů této skupiny PDE látek. Například bylo podle dosavadních výzkumů zjištěno, že inhibování PDE, typ IV, je zejména účinné jak pro inhibování uvolňování zánětového mediátoru, tak i relaxace hladkého svalstva dýchacích cest. Takže sloučeniny, které inhibují specificky PDE IV by mohly projevovat požadovaný inhibiční účinek zánětových procesů a relaxace hladkého svalstva dýchacích cest s minimálními nebo nežádoucími vedlejšími účinky, jako jsou například kardiovaskulární účinky nebo účinky proti krevních destičkám. Ovšem až dosud známé a používané PDE IV inhibitory postrádají selektivní účinek při přijatelných terapeutických dávkách.

Podstata vynálezu

Předmětný vynález je založen na zjištění, že skupina ne-polypeptidových imidů, které jsou detailně popsány v popisu předmětného vynálezu, inhibuje účinek THFa.

Podstatu předmětného vynálezu představují nitrilové sloučeniny obecného vzorce I:

(I), ve kterém:

O

II

Y znamená skupinu -CsN nebo “ θ ) m^3 ’ m je 0 až 3,

R⁵ znamená:

(i) dvojvazný zbytek od pyridinové skupiny, pyrrolidinové skupiny, imidazolové skupiny, nafitalenové skupiny nebo thiofenové skupiny, přičemž uvedené dvě vazby jsou na sousedních uhlíkových atomech v kruhu, (ii) dvojvaznou cykloalkylovou skupinu obsahující 4 až 10 atomů uhlíku, nesubstituovanou nebo substituovanou jedním nebo více substituenty, přičemž každý z těchto substituentů je navzájem na ostatních nezávisle vybrán ze souboru zahrnujícího nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluormethylovou skupinu, karbethoxyskupinu, karbmethoxyskupinu, karbpropoxyskupinu, acetylovou skupinu, karbamoylovou skupinu, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovou skupinu, aminovou skupinu substituovanou alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, alkoxyskupinu obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, fenylovou skupinu nebo atom halogenu, (iii) disubstituovanou vinylenovou skupinu substituovanou skupinou vybranou z nitroskupiny, kyanoskupiny, trifluormethylové skupiny, karbethoxyskupiny, karbmethoxyskupiny, karbpropoxyskupiny, acetylové skupiny, karbamoylové skupiny, karbamoylové skupiny substituované alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, dále acetoxyskupiny, karboxyskupiny,

-4CZ 291613 B6 hydroxyskupiny, aminové skupiny, aminové skupiny substituované alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku; dále alkylové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nebo atomu halogenu, (iv) ethylenovou skupinu, nesubstituovanou nebo substituovanou jedním až dvěma substituenty, přičemž každý z těchto substituentů je nezávisle na ostatních vybrán ze souboru zahrnujícího nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluormethylovou skupinu, karbethoxyskupinu, karbmethoxyskupinu, karbpropoxyskupinu, acetylovou skupinu, karbamoylovou skupinu, karbamoylovou skupinu substituovanou alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, acetoxyskupínu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovou skupinu, aminovou skupinu substituovanou alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nebo atom halogenu,

R⁶ znamená skupinu -CO-, -CHy-, -CH₂CO- nebo -SO₂R⁷ znamená:

(i) alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 až 12 atomů uhlíku, (ii) cyklickou nebo bicyklickou alkylovou skupinu obsahující 4 až 12 atomů uhlíku, (iii) pyridylovou skupinu, (iv) fenylovou skupinu substituovanou jedním nebo více substituenty, přičemž každý z těchto substituentů je nezávisle na ostatních vybrán ze souboru zahrnujícího nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluormethylovou skupinu, karbethoxyskupinu, karbmethoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylovou skupinu, karbamoylovou skupinu, acetoxyskupínu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovou skupinu, alkylovou skupinu s přímým řetězcem, rozvětveným řetězcem, cyklickým řetězcem nebo bicyklickým řetězcem obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, alkoxyskupinu s přímým řetězcem, rozvětveným řetězcem, cyklickým řetězcem nebo bicyklickým řetězcem obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, skupinu CH₂R, ve které R znamená cyklickou nebo bicyklickou alkylovou skupinu obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, nebo atom halogenu, (v) benzylovou skupinu substituovanou jedním až třemi substituenty, přičemž každý z těchto substituentů je nezávisle na ostatních vybrán ze souboru zahrnujícího nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluormethylovou skupinu, karbethoxyskupinu, karbmethoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylovou skupinu, karbamoylovou skupinu, acetoxyskupínu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovou skupinu, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, nebo atom halogenu, (vi) naftylovou skupinu, nebo (vii) benzyloxyskupinu, a n má hodnotu 0, 1,2 nebo 3.

Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití těchto nitrilových sloučenin podle vynálezu jako léčiva pro snižování hladiny TNFa u savců.

Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží farmaceutický prostředek obsahující podíl sloučeniny podle vynálezu účinný při jednotlivé dávce nebo vícenásobné dávce k inhibování TNFa.

Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití těchto nitrilových sloučenin podle vynálezu jako léčiva pro inhibování fosfodiesterázy u savců.

-5CZ 291613 B6

Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží farmaceutický prostředek obsahující podíl sloučeniny podle vynálezu účinný při jednotlivé dávce nebo vícenásobné dávce k inhibování fosfodiesterázy.

Sloučeniny podle předmětného vynálezu představují účinné a vhodné inhibitory fosfodiesteráz, zejména PDEΙΠ a PDE IV, a z tohoto důvodu jsou vhodné a použitelné pro léčení nemocí zprostředkovaných těmito fosfodiesterázami.

Výhodné jsou podle vynálezu sloučeniny výše uvedeného obecného vzorce, ve kterém:

Y znamená skupinu -CsN,

R⁵ znamená o-fenylenovou skupinu, ať již substituovanou nebo nesubstituovanou,

R⁶ znamená skupinu -CO- nebo -CHr-,

R⁷ znamená arylovou skupinu, a n je 1.

Mezi typické sloučeniny podle předmětného vynálezu náleží následující látky:

R⁶	R⁷
-CO-	3,4-dimethoxyfenylová skupina
-CO-	3-ethoxy-4-methoxyfenylová skupina
-CH₂CO-	3,4-dimethoxyfenylová skupina
-ch₂co-	3-ethoxy-4-methoxyfenylová skupina
-co-	3-propoxy-4-methoxyfenylová skupina
-ch₂co-	3-propoxy-4-methoxyfenylová skupina
-co-	3-cyklopentoxy-4-methoxyfenylová skupina (cyklopentoxyskupina = cyklická C5H9O- skupina)
-ch₂co	3-cyklopentoxy-4-methoxyfenylová skupina
-co-	3,4-dimethoxyfenylová skupina
-co-	3-ethoxy-4-kyanofenylová skupina
-ch₂-	3,4-dimethoxyfenylová skupina
-ch₂-	3-ethoxy-4-methoxyfenylová skupina
-ch₂-	3,4-dimethoxyfenylová skupina

Výše uvedeným termínem alkylová skupina, který je používám v tomto textu, se míní jednovazný nasycený rozvětvený nebo přímý uhlovodíkový řetězec. Pokud není výslovně uvedeno jinak, potom tyto řetězce obsahují od 1 do 18 atomů uhlíku. Jako reprezentativní příklady takovýchto alkylových skupin je možno uvést methylovou skupinu, ethylovou skupinu, propylovou skupinu, izopropylovou skupinu, butylovou skupinu, izobutylovou skupinu, sek.butylovou skupinu, terc.butylovou skupinu, pentylovou skupinu, izopentylovou skupinu, neopentylovou skupinu, terc.pentylovou skupinu, hexylovou skupinu, izohexylovou skupinu, heptylovou skupinu, oktylovou skupinu, nonylovou skupinu, decylovou skupinu, undecylovou skupinu, dodecylovou skupinu, tridecylovou skupinu, tetradecylovou skupinu, pentadecylovou skupinu, hexadecylovou skupinu, heptadecylovou skupinu, oktadecylovou skupinu a podobné další skupiny. V případech, kdy jsou tyto skupiny označována jako „nižší“ alkylová skupina, potom tato alkylová skupina obsahuje od 1 do 6 atomů uhlíku. Stejný počet uhlíkových atomů platí pro základní termín „alkan“ a pro odvozené výrazy jako je například „alkoxyskupina“.

Termínem „cykloalkylová skupina (nebo cyklická alkylová skupina)“, který je používán v tomto textu, se míní jednovazný nasycený cyklický uhlovodíkový řetězec. Pokud není výslovně uvede

-6CZ 291613 B6 no jiiiak, potom tyto řetězce obsahují od 1 do 18 atomů uhlíku. Jako reprezentativní příklady takovýchto cykloalkylových skupin je možno uvést methylovou skupinu, ethylovou skupinu, cyklopropylovou skupinu, cyklobutylovou skupinu, cyklopentylovou skupinu, cyklohexylovou skupinu, cykloheptylovou skupinu, cyklooktylovou skupinu, cyklononylovou skupinu, cyklodecylovou skupinu, cykloundecylovou skupinu, cyklododecylovou skupinu, cyklotridecylovou skupinu, cyklotetradecylovou skupinu, cyklopentadecylovou skupinu, cyklohexadecylovou skupinu, cykloheptadecylovou skupinu, cyklooktadecylovou skupinu, cyklické terpenové skupiny a podobné další skupiny. V případech, kdy se uvádí „nižší“ cykloalkylová skupina, potom tato cykloalkylová skupina obsahuje 3 až 6 atomů uhlíku. Stejný počet uhlíkových atomů platí pro základní termín „cykloalkan“ a pro odvozené výrazy jako je například „cykloalkoxyskupina“.

Tyto sloučeniny podle vynálezu mohou být použity, pod dohledem kvalifikovaných odborníků, pro inhibování nežádoucích účinků TNFa. Uvedené sloučeniny mohou být podávány perorálně, rektálně nebo parenterálně, samotné nebo v kombinaci s jinými terapeutickými činidly, zahrnujícími antibiotika, steroidy atd., přičemž se aplikují na savce potřebující toto léčení. Perorální dávkové formy zahrnují tablety, kapsle, dražé a podobně tvarované, slisované farmaceutické formy. Izotonické solné roztoky, obsahující 20 až 100 miligramů/mililitr mohou být použity pro parenterální podání, které zahrnuje intramuskulámí, intrathekální, intravenózní a intraarteriální způsob podávání. Rektální podání může být provedeno za použití čípků formulovaných z běžných nosičů jako je kakaové máslo.

Dávkové režimy musí být upraveny podle konkrétní indikace, věku, hmotnosti a obecného fyzického stavu pacienta a požadované odezvy, ale obecně se tyto dávky pohybují v rozmezí od asi 1 do asi 1000 miligramů/den podle potřeby v jednom nebo více podáních za den. Obecně může počáteční režim za použití sloučenin podle předmětného vynálezu kopírovat režim, o kterém je známo, že je účinný k interferování TNFa aktivity pro jiné TNFa zprostředkované chorobné stavy. Léčení jednotlivce je třeba pravidelně sledovat pokud jde o počet T buněk a poměry T4/T8 a/nebo měření viremie, jako jsou hladiny reverzní transkriptázy nebo virových proteinů, a/nebo pokud se týče progrese problémů spojených s chorobou zprostředkovanou cytokiny, jako je například kachexie nebo svalová degenerace. Jestliže není vidět po normálním léčebném režimu žádný efekt, potom se zvýší podání činidla, interferujícího s cytokinovou aktivitou, například o padesát procent za týden.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také použity topicky pro léčení nebo profylaxi topických chorobných stavů zprostředkovaných nebo vyvolaných nadměrnou produkcí TNFa, jako jsou například virové infekce, jako například takové, které jsou způsobeny herpes viry nebo virová konjuktivitida, psoriáza, jiné kožní poruchy a nemoci, atd.

Tyto sloučeniny podle vynálezu mohou být také použity ve veterinární léčbě savců jiných než lidí v případě potřeby prevence nebo inhibice produkce TNFa. Pro léčení TNFa zprostředkovaných chorob, ať již terapeuticky nebo profylakticky, v případě zvířat přichází v úvahu takové chorobné stavy jako jsou ty, které byly uvedeny výše, ale zejména virové infekce. Jako příklady těchto chorob je možno uvést virus kočičí imunosuficience, koňskou infekční virovou anemii, kozí infekční virovou anemii, visna virus a maedi virus jakož i jiné lentiviry.

Některé z těchto sloučenin podle vynálezu vykazují centra chirality, přičemž tyto sloučeniny mohou existovat jako optické izomery. Jak racemáty těchto izomerů, tak jednotlivé izomery samotné jakož i diastereoizomery, jestliže u nich existují dvě chirální centra, spadají do rozsahu předmětného vynálezu. Racemáty mohou být použity jako takové nebo mohou být rozděleny na své jednotlivé izomery mechanickým způsobem, jako například chromatografickým způsobem za použití chirálního absorbentu. V alternativním provedení mohou být připraveny jednotlivé izomery v chirální formě nebo odděleny chemicky ze směsi tak, že se vytvoří sůl s chirální kyselinou, jako jsou jednotlivé enantiomeiy 10-kafrsulfonové kyseliny, kafrové kyseliny, alfabromkafrové kyseliny, methoxyoctové kyseliny, vinné kyseliny, diacetylvinné kyseliny, jablečné kyseliny, pyrrolidon-5-karboxylové kyseliny a podobně, a potom je možno uvolnit jednu nebo

-7 CZ 291613 B6 obě oddělené báze, popřípadě opakováním procesu tak, že se získá jeden nebo dva izomery v podstatě prosté druhého izomeru; to znamená ve formě mající optickou čistotu > 95 %.

Prevence nebo inhibice produkce TNFa za pomoci těchto sloučenin podle vynálezu může být sledována použitím běžně známých a obvykle používaných testů prováděných metodami všeobecně známými v tomto oboru z dosavadního stavu techniky. Například TNFa inhibiční test v LPS simulovaném PBMC je možno provést následujícím způsobem:

PBMC izolování : PBMC z normálních donorů byl získán hustotní centrifugací na FicollHypaque. Buňky byly kultivovány v RPMI doplněném 10 % AB + sérum, 2 mM L-glutaminu, 100 U/mililitr penicilinu a 100 pg/mililitr streptomycinu.

PBMC suspenze : Léčiva byly rozpuštěny vDMSO (Sigma Chemical), další zředění bylo provedeno v doplněném RPMI. Finální DMSO koncentrace v přítomnosti nebo v nepřítomnosti léčiva v PBMC suspenzích byla 0,25 % hmotnostního. Léčiva byla testována při polovičních log-zředěních, přičemž se vycházelo z koncentrace 50 pg/ml. Léčiva byla přidána do PBMC (10⁶ buněk/mililitr) na 96-ti jímkových platech jednu hodinu před přídavkem LPS.

Buněčná stimulace : PBMC (10⁶ buněk/mililitr) v přítomnosti nebo nepřítomnosti léčiva byl stimulován zpracováním s 1 pg/mililitr LPS ze Salmonella minnesota R595 (List Biological Labs, Campbell, CA). Buňky byly inkubovány při teplotě 37 °C po dobu 18 až 20 hodin. Kapalina nad usazenou byla odvedena a okamžitě testována na TNFa úroveň nebo byla uchovávána ve zmraženém stavu při teplotě -70 °C (po dobu maximálně 4 dní), načež byla testována.

TNFa stanovení : Koncentrace TNFa v kapalině nad usazeninou byla stanovena za použití TNFa ELISA kitů určených pro lidi (Endogen, Boston, MA), přičemž bylo použito návodu výrobce.

Uvedené sloučeniny podle předmětného vynálezu je možno připravit za použití metod, které jsou všeobecně známé a používané pro přípravu nitrilových sloučenin. Obecné reakční schéma je v dalším ilustrováno následujícími rovnicemi:

-8CZ 291613 B6

(3)

ve kterých X znamená CO₂H, CONH₂ nebo CN.

-9CZ 291613 B6

Příklady provedení vynálezu

V následujících příkladech jsou blíže ilustrovány nové nitrilové sloučeniny podle předmětného vynálezu a postup jejich přípravy, přičemž tyto příklady jsou pouze typové a ilustrativní a neznamenají omezení rozsahu tohoto vynálezu, který je dán pouze dále uvedenými patentovými nároky.

Příklad 1

Postup přípravy 3-ftalimido-3-(3,4-diethoxyfenyl)propionitrilu.

Podle tohoto příkladu bylo do použito promíchávané suspenze chlazené na ledové lázni, která obsahovala 3-ftalimido~3-(3,4-diethoxyfenyl)propionamid (v množství 0,96 gramu, což je 2,5 mmol) a 4-methylmorfolin (použito 0,66 mililitru, což je 6 mmol) v DMF (9 mililitrů), přičemž tato suspenze byla udržována pod atmosférou dusíku, načež byl přidán po kapkách thionylchlorid (použito 0,35 mililitru, což je 4,8 mmol). Při promíchávání této reakční směsi při teplotě v rozmezí od 0 do 5 °C po dobu 30 minut a potom při teplotě místnosti po dobu 2 hodin nastal mírný exotermický průběh. Tato reakce byla monitorována metodou vysokotlaké kapalinové chromatografíe HPLC (Waters Nova-Pak/C-18 kolona, 3,9 x 150 milimetrů, 4 mikrometry, 1 mililitr/minutu, 240 nm, 50/50 CH3CN/H3PO4 0,1 % (vodný roztok)). Takto získaná reakční směs byla potom nalita do směsi obsahující hydrogenuhličitan sodný NaHCO₃ (8,5 mililitru) a led (40 gramů) a potom byla promíchávána až do rozpuštění ledu. Tato reakční směs byla potom zfiltrována a pevný podíl byl promyt dostatečným množstvím vody. Tímto způsobem byla získána vlhká pevná látka, která byla rozpuštěna v dichlormethanu CH₂C1₂ (25 mililitrů) a organická vrstva byla oddělena, usušena síranem hořečnatým a zkoncentrována ve vakuu za vzniku lepkavé polopevné látky. Tato pevná látka byla potom přečištěna dvakrát v koloně mžikovou chromatografickou metodou (silikagel, 3 % ethylacetát/methylenchlorid), čímž byla připravena pevná látka, která byla usušena ve vakuu (při 50 °C, < 133 Pa), přičemž tímto shora popsaným postupem byl získán požadovaný produkt ve formě světle žluté pevné látky.

Výtěžek: 0,5 gramu (55 %).

¹HNMR (CDCI3) δ:

7,91 - 7,65 (m, 4H), 7,12 - 6,98 (m, 2H), 6,90 - 6,78 (m, 1H), 5,61 (dd, J = 6,4, 10,3 Hz, 1H), 4,19 - 3,96 (m, 4H), 3,83 (dd, J = 10,3, 16,8 Hz, 1H), 3,26 (dd, J = 6,4,16,8 Hz, 1H), 1,55 - 1,30 (m, 6H);

¹³CNMR(CDC1₃) δ:

167,7, 149,2, 148,9,134,3, 14,7;

131,5, 129,1,123,6,120,2, 116,9,113,2,112,9, 64,7, 64,5,51,1,21,1,

HPLC 98,4%.

Analýza pro C21H20N2O4.

vypočteno: 69,22 % C nalezeno: 69,06 % C

5,53 %H 7,69 %N

5,48 %H 7,58 %N.

-10CZ 291613 B6

Příklad 2

Postup přípravy 3-ftalimido-3-(3,4--dimethoxyfenyl)propionitrilu

Podle tohoto příkladu bylo do použito promíchávané suspenze chlazené na ledové lázni, která obsahovala 3-ftalimido-3-(3,4-dimethoxyfenyl)propionamid (v množství 1,77 gramu, což je 5,00 mmol) a 4-methylmorfolin (použito 1,3 mililitru, což je 12 mmol) vDMF (17 mililitrů), přičemž tato suspenze byla udržována pod atmosférou dusíku, načež byl přidán po kapkách a za použití stříkačky thionylchlorid (použito 0,7 mililitru, což je 9,6 mmol). V dalším postupu nastal mírný exotermický průběh a po 30 minutách chlazení byla chladicí lázeň odstraněna a reakční směs byla potom ještě promíchávána po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Tato reakční směs byla potom nalita do směsi obsahující hydrogenuhličitan sodný NaHCO₃ (17 gramů) a 75 mililitrů ledové vody a tato směs byla promíchávána tak dlouho dokud se led nerozpustil. Tato suspenze byla potom zfiltrována a pevný podíl byl promyt dostatečným množstvím vody. Tímto způsobem byla získána vlhká pevná látka, která byla rozpuštěna v dichlormethanu CH₂C1₂(50 mililitrů) a organická vrstva byla oddělena, usušena síranem sodným a zkoncentrována ve vakuu za vzniku oranžové pevné látky. Tato pevná látka byla potom přečištěna dvakrát v mžikové chromatografícké koloně (silikagel, 5/95 EtOAc/CH₂CÍ₂, vnitřní průměr kolony 50 mililitrů), přičemž tímto shora uvedeným postupem byl získán požadovaný produkt ve formě bílé pevné látky.

Výtěžek: 1,32 gramu (79 %).

‘HNMR (CDC1₃) δ:

7,9 - 7,6 (m, 4H), 7,10 (m, 2H), 6,83 (m, 1H), 5,64 (dd, J = 6,5, 10,2 Hz, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 3,82 (dd, 1H), 3,30 (dd, J = 6,5, 16,8 Hz, 1H);

¹³C NMR (CDC1₃) δ:

167,7, 149,5,149,2, 134,4, 131,5,129,1,123,6,120,1, 116,9, 111,1, 110,7, 56,0,55,9,51,1,21,1.

Analýza pro C₁₉Hi₆N₂O4.0,18 H₂O:

vypočteno: 76,2 % C 4,85 % H 8,25 % Ν nalezeno: 67,23 %C 4,79 %H 8,27 %N.

Příklad 3

Postup přípravy 3-(3 '-nitroftalimido)-3-(3 '-ethoxy-4'-methoxyfenyl)propionitrilu.

Při provádění postupu podle tohoto příkladu bylo použito promíchávané suspenze obsahující anhydrid kyseliny 3-nitroftalové (v množství 0,24 gramu, což je 1,13 mmol) a 3-amino-3-(3'ethoxy-4'-methoxyfenyI)propionitril (použito 0,25 gramu, což je 1,13 mmol) v 6 mililitrech kyseliny octové, přičemž tato suspenze byla zahřívána při teplotě varu pod zpětným chladičem po dobu 12 hodin. Kyselina octová byla potom odstraněna ve vakuu a tímto způsobem byla získána oranžová gumovitá látka, která byla rozpuštěna v methylenchloridu (10 mililitrů) a tento podíl byl potom promyt nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (dva podíly po 10 mililitrech). Organická vrstva byla potom oddělena a vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (10 mililitrů). Organické extrakty byly spojeny a tento spojený podíl byl usušen síranem hořečnatým, zfiltrován a zkoncentrován ve vakuu, čímž byl získán žlutý olej. Tento surový produkt byl potom přečištěn v koloně mžikovou chromatografickou metodou (silikagel, 5 % ethylacetát/methylenchlorid) a výsledná pevná látka byla usušena ve vakuu (při

-11 CZ 291613 B6 °C, <133 Pa), přičemž tímto shora uvedeným postupem byl připraven požadovaný produkt ve formě žluté pevné látky.

Výtěžek: 0,25 gramu (56 %).

Teplota tání: 155,5 - 157 °C.

'HNMR (CDC1₃) 6:

8,20 - 8,09 (m, 2H), 8,02 - 7,86 (m, 1H), 7,15 - 7,02 (m, 2H), 6,88 - 6,76 (m, 1H), 5,64 (dd, J = 6,3,10,6 Hz, 1H), 4,09 (q, J = 7 Hz, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,84 (dd, J = 10,6,16,7 Hz, 1H), 3,26 (dd, J = 6,3, 16,7 Hz, 1H), 1,46 (t, J = 7 Hz, 3H);

¹³CNMR(CDC1₃) δ:

165,3, 162,3, 150,1, 148,7, 144,9, 135,7, 133,5, 129,0, 128,1, 127,4, 123,2, 120,3, 116,6, 112,1,

111,5, 64,6, 55,9, 51,9,20,9,14,7.

Analýza pro C₂₀Hi7N₃O₆:

vypočteno: 60,76 %C 4,33 %H 10,63 %N nalezeno: 60,59 %C 4,22 %H 10,65 %N.

Příklad 4

Postup přípravy 3-(3 '-aminoftalimido)-3-(3 '-ethoxy-4'-methoxyfenyl)propionitrilu.

Podle tohoto provedení bylo použito roztoku, který obsahoval 3-(3'-nitroftalimido)-3-(3'ethoxy-4'-methoxyfenyl)propionitril (použito 0,2 gramu, což je 0,5 mmol) ve 30 mililitrech ethylacetátu, přičemž k tomuto roztoku bylo přidáno 0,05 gramu 10% paládia na uhlíkovém katalyzátoru. Takto získaná reakční směs byla hydrogenována v Parr-Shakerově zařízení při tlaku vodíku v rozmezí od 380 kPa do 414 kPa po dobu přes noc. Tato reakční směs byla potom zfiltrována přes celit a získaný filtrát byl zkoncentrován ve vakuu, čímž byl získán žlutý olej. Tento surový produkt byl potom přečištěn v mžikové chromatografické koloně (silikagel, 3 % ethylacetát/methylenchlorid). Výsledná žlutá pevná látka byla potom usušena ve vakuu (při 60 °C, <133 Pa) a tímto shora popsaným způsobem byl získán požadovaný produkt.

Výtěžek: 0,09 gramu (50 %).

Teplota tání: 171 - 172,5 °C.

¹HNMR (CDC1₃) δ:

7,47 - 7,35 (m, 1H), 7,19 - 7,00 (m, 3H), 6,90 - 6,29 (m, 2H), 5,56 (dd, J = 6,6,10 Hz, 1H), 5,24 (s, 2H), 4,09 (q, J = 7 Hz, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,77 (dd, J = 10,16,8 Hz, 1H), 3,27 (dd, J = 6,6,16,8 Hz, 1H), 1,45 (t, J = 7 Hz, 3H);

^l3C NMR (CDC1₃) δ:

169,4, 167,9, 149,6, 148,5, 145,5, 135,5, 132,1, 129,4, 121,3, 120,0, 117,1, 113,0, 112,2, 111,4,

110,6, 64,5, 55,9, 50,7,21,1, 14,7;

-12CZ 291613 B6

HPLČ (Waters Nova-Pak kolona, 3,9 x 150 mm, 4 mikrometry, 1 mililitr/minutu, 240 nm, 40/60, CH₃CN/0,l % H₃PO4(vo<fay)) 4,5 minuty, 100 %.

Analýza pro C2oHi9N₃0₄:

vypočteno: 65,74 % C 5,24 % Η 11,50 % N nalezeno: 65,54 %C 5,23 %H 11,23%N.

Příklad 5

Postup přípravy 3-ftalimido-3-(3'-ethoxy-4'-methoxyfenyl)propionitrilu.

Při provádění tohoto postupu byl oxalylchlorid (použito 0,49 mililitru, což je 5,64 mmol) přidáván po kapkách do promíchávaného roztoku chlazeného na ledové lázni, který obsahoval DMF (0,48 mililitru, což je 6,16 mmol) a acetonitril (10 mililitrů). Při tomto postupu se okamžitě vytvořila bílá sraženina, přičemž vznik tohoto produktu byl doprovázen vývojem plynu. Získaná reakční směs byla promíchávána po dobu 30 minut při teplotě v rozmezí od 2 do 3 °C, načež byl přidáván pomalým způsobem roztok 3-ftalimido-3-(3'-ethoxy-4'-methoxyfenyl)propionamidu (v množství 1,89 gramu, což je 5,13 mmol) v DMF (15 mililitrů). Po 10 minutách byl přidán pyridin a takto vytvořená reakční směs byla promíchávána po dobu 30 minut při teplotě v rozmezí od 2 do 3 °C. Získaná reakční směs byla potom nalita do 60 mililitrů ledu a promíchávána po dobu 20 minut. Tato suspenze byla potom zfíltrována a pevný podíl byl promyt vodou, usušen na vzduchu a potom byl usušen ve vakuu (při 60 °C, < 133 Pa), čímž byl získán požadovaný produkt ve formě bílé pevné látky.

Výtěžek: 1,7 gramu (95 %).

Teplota tání: 135 - 137 °C.

‘HNMR (CDC1₃) 5:

7,86 - 7,71 (m, 4H), 7,08 - 7,05 (m, 2H), 6,84 - 6,81 (m, 1H), 5,63 (dd, J = 6,5, 10,3 Hz, lHj, 4,11 (q, J = 7, Hz, 2H), 3,88 - 3,77 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,32 - 3,23 (m, 1H), 1,45 (t, J = 7 Hz, 3H);

¹³CNMR(CDCI₃) 5:

167,4, 149,0, 147,8, 134,9,

14,6.

130,8, 129,2, 123,5,119,4, 118,2,112,1,111,7, 63,8, 55,4, 50,0, 20,5,

Analýza pro C20H18N2O4:

vypočteno: 68,56 %C 5,18 %H 8,00 %N nalezeno: 68,46 %C 5,37 %H 8,0,2 %N.

Příklad 6

Postup přípravy l-( 1 '-oxo-izoindolin)-l-(3 ',4'-dimethoxyfenyl)propionitrilu.

Podle tohoto postupu bylo použito na ledové lázni chlazené a promíchávané suspenze, která obsahovala l-(l'-oxoizoindolin)-l-(3',4'-dimethoxyfenyl)propionamid (použito 1,7 gramu, což je 5,00 mmol) a 4-methylmorfolin (1,3 mililitru, což je 12 mmol) v DMF (20 mililitrů), která

-13CZ 291613 B6 byla udržována pod atmosférou diišíku, přičemž ktéto suspenzi byl přidán po kapkách a za použití stříkačky thionylchlorid (v množství 0,7 mililitru, což je 9,6 mmol). Poté nastala mírně exotermická reakce, přičemž po 1 hodině byla chladicí lázeň odstraněna a reakční směs byla promíchávána po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Tato reakční směs byla potom nalita do 100 mililitrů ledové lázně a promíchávána tak dlouho, dokud se veškerý led nerozpustil. Takto získaná suspenze byla zfíltrována a pevná látka byla promyta dostatečným množstvím vody. Získaný pevný produkt byl přečištěn dvakrát v mžikové chromatografické koloně (silikagel, 1/9 a 24/76 ethylacetát/dichlormethan). Tímto způsobem byl získán pevný materiál, který byl usušen ve vakuu a takto byl získán požadovaný produkt ve formě oranžové pevné látky.

Výtěžek: 0,97 gramu (60 %).

Teplota tání: 119-121 °C.

’HNMR (CDC1₃) δ:

7,94 - 7,85 (m, 1H), 7,61 - 7,30 (m, 3H), 7,05 - 6,85 (m, 3H), 5,73 (t, J = 7 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 4,19 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,86 (s, 3H), 3,23 (m, 2H);

^I3CNMR(CDC1₃) δ:

168,5, 149,5, 149,4, 141,1, 131,9, 131,8, 128,7, 128,2, 123,9, 122,9, 119,1, 117,4, 111,2, 111,0, 56,0, 55,9,51,6, 47,3,21,1.

Analýza pro Ci₉Hi8N₂O₃:

vypočteno: 70,79 %C 5,63 %H 8,69 %N nalezeno: 70,26 % C 5,56 %H 8,47 %N.

Příklad 7

Postup přípravy l-(r-oxoizomdolin)-l-(3'-ethoxy-4'-methoxyfenyl)propionitrilu.

Podle tohoto postupu bylo použito na ledové lázni chlazené a promíchávané suspenze, která obsahovala l-(l'-oxoizoindolin)-l-(3'-ethoxy-4'-methoxyfenyl)propionamid (použito 1,2 gramu, což je 2,8 mmol) a 4-methylmorfolin (0,75 mililitru, což je 6,8 mmol) v DMF (10 mililitrů), která byla udržována pod atmosférou dusíku, přičemž k této suspenzi byl přidán po kapkách a za použití stříkačky thionylchlorid (v množství 0,4 mililitru, což je 5,5 mmol). Poté nastala mírně exotermická reakce, přičemž po 1 hodině byla chladicí lázeň odstraněna a reakční směs byla promíchávána po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Tato reakční směs byla potom nalita do 100 mililitrů ledové lázně a promíchávána tak dlouho, dokud se veškerý led nerozpustil. Takto získaná suspenze byla zfíltrována a pevná látka byla promyta dostatečným množstvím vody. Získaný pevný produkt byl přečištěn v mžikové chromatografické koloně (silikagel, 1,5/8,5 ethylacetát/dichlormethan). Tímto způsobem byl získán pevný materiál, který byl usušen ve vakuu, a takto byl získán požadovaný produkt ve formě pevné látky barvy slonoviny.

Výtěžek: 0,57 gramu (60 %)

Teplota tání: 125 - 125,5 °C.

’HNMR (CDC1₃) δ:

7,88 (d, J = 7 Hz, 1H), 7,60 - 7,30 (m, 3H), 7,05 - 6,80 (m, 3H), 5,71 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 14 Hz, 1H), 4,20 - 4,00 (m, 3H), 3,87 (s, 3H), 3,23 (m, 2H), 1,44 (t, 7 Hz, 3H);

-14CZ 291613 B6 ¹³C NMR (CDCI3) δ:

168,5, 149,7, 148,8, 141,2, 131,9, 131,8, 128,6, 128,2, 123,9, 122,9, 119,2, 117,4, 112,4, 111,5, 64,6, 55,9,51,6, 47,3,21,1, 14,6.

Analýza pro C20H20N2O3:

vypočteno: 71,4 %C 5,91 %H 8,33 %N nalezeno: 71,11 %C 5,91 %H 8,17 %N.

Příklad 8

Tablety, každá obsahující 50 miligramů účinné složky, mohou být připraveny následujícím způsobem:

Složky (na 1000 tablet)

účinná složka	50,0 gramů
laktóza	50,7 gramů
pšeničný škrob	7,5 gramů
polyethylenglykol 6000	5,0 gramů
mastek	5,0 gramů
stearát hořečnatý	1,8 gramů
demineralizovaná voda	zbytek

Pevné složky se nejprve protlačí sítem o rozměru oka 0,6 milimetru. Potom se smísí účinná složka, laktóza, mastek, stearát hořečnatý a polovina škrobu. Další polovina škrobu se suspenduje ve 40 mililitrech vody a tato suspenze se přidá do vroucího roztoku polyethylenglykolu ve 100 mililitrech vody. Výsledná pasta se přidá k práškovým složkám a směs se granuluje, je-li to nezbytné za přídavku vody. Granulát se suší přes noc při teplotě 35 °C, protlačí se sítem o rozměru ok 1,2 milimetru a slisuje se za vzniku tablet přibližně o průměru 6 milimetrů, které jsou z obou stran konkávní.

Příklad 9

Tablety, obsahující každá 100 miligramů účinné složky, mohou být připraveny následujícím způsobem:

Složky (na 1000 tablet)

účinná složka laktóza pšeničný škrob stearát hořečnatý

100,0 gramů 100,0 gramů 47,0 gramů 3,0 gramů

Všechny pevné složky se nejprve protlačí sítem o rozměru ok 0,6 milimetru. Potom se smísí účinná složka, laktóza, stearát hořečnatý a polovina škrobu. Druhá polovina škrobu se suspenduje ve 40 mililitrech vody a tato suspenze se přidá do 100 mililitrů vroucí vody. Výsledná pasta se přidá k práškovým složkám a směs se granuluje, je-li to nezbytné za přídavku vody. Granulát se suší přes noc při teplotě 35 °C, protlačí se sítem o rozměru ok 1,2 milimetru a slisuje za vzniku tablet o průměru přibližně 6 milimetrů, které jsou z obou stran konkávní.

-15CZ 291613 B6

Příklad 10

Tablety, obsahující každá 75 miligramů účinné složky, mohou být připraveny následujícím způsobem:

Složky (na 1000 tablet)

účinná složka manitol laktóza mastek glycin kyselina stearová sacharin 5% roztok želatiny

75,0 gramů 230,0 gramů 150,0 gramů 21,0 gramů 12,5 gramů 10,0 gramů 1,5 gramů zbytek

Všechny pevné složky se nejprve protlačí sítem o rozměru ok 0,25 milimetru. Manitol a laktóza se smísí, granulují za přídavku roztoku želatiny, protlačí sítem o rozměru ok 2 milimetry, suší se při teplotě 50 °C a opět protlačí sítem o rozměru ok 1,7 milimetru. Účinná složka, glycin a sacharin se pečlivě promísí, přidá se manitol, laktózový granulát, kyselina stearová a mastek a vše se pečlivě promísí a slisuje za vzniku tablet o přibližném průměru 10 milimetrů, které jsou z obou stran konkávní a mají zářez pro rozlomení na horní straně.

Přikladli

Tablety, obsahující každá 10 miligramů účinné složky, mohou být připraveny následujícím způsobem:

Složky (na 1000 tablet) účinná složka laktóza kukuřičný škrob polyethylenglykol 6000 mastek stearát horečnatý demineralizovaná voda

10,0 gramů

328,5 gramů

17,5 gramů

5,0 gramů

25,0 gramů 4,0 gramů zbytek

Pevné složky se nejprve protlačí sítem o velikost ok 0,6 milimetru. Potom se homogenně promísí účinná složka, laktóza, mastek, stearát hořečnatý a polovina škrobu. Druhá polovina škrobu se suspenduje v 65 mililitrech vody a tato suspenze se přidá do vroucího roztoku polyethylenglykolu ve 260 mililitrech vody. Výsledná pasta se přidá k práškovým složkám a celá směs se promísí a granuluje, je-li to nezbytné za přídavku vody. Granulát se suší přes noc při teplotě 35 °C, protlačí se sítem o velikosti ok 1,2 milimetru a slisuje se za vzniku tablet o průměru přibližně 10 milimetrů, které jsou z obou stran konkávní a mají zářez pro rozlomení na horní straně.

-16CZ 291613 B6

Příklad 12

Zelatinové kapsle se suchou náplní, obsahující každá 100 miligramů účinné složky, mohou být připraveny následujícím způsobem:

Složení (na 1000 kapslí) účinná složka mikrokrystalická celulóza laurylsulfát sodný stearát hořečnatý

100,0 gramů

30,0 gramů 2,0 gramů 8,0 gramů

Laurylsulfát sodný se proseje do účinné složky přes síto o velikosti ok 0,2 milimetru a tyto dvě složky se intenzivně mísí 10 minut. Potom se přes síto o velikosti ok 0,9 milimetru přidá mikrokrystalická celulóza a celek se opět mísí po dobu 10 minut. Nakonec se přidá stearát hořečnatý přes síto o velikosti ok 0,8 milimetru a po dalších 3 minutách míchání se směs zavede po částech představujících 140 miligramů (každý podíl) do želatinových kapslí se suchou náplní o velikosti 0 (protáhlá).

Příklad 13

Roztok pro injekce nebo infúzní roztok o koncentrace 0,2 % může být připraven následujícím způsobem:

účinná složka 5,0 gramů chlorid sodný 22,5 gramů fosfátový pufř pH 7,4 300,0 gramů demineralizovaná voda do 2500,0 mililitrů

Účinná složka se rozpustí v 1000 mililitrech vody a zfiltruje se přes mikrofiltr nebo se suspenduje v 1000 mililitrech vody. Přidá se roztok pufřu a objem celé směsi se upraví vodou na 2500 mililitrů. Pro přípravu dávkových jednotkových forem se každý podíl o objemu 1,0 mililitr nebo 2,5 mililitru zavede do skleněných ampulí (každá obsahuje 2,0 miligramy nebo 5,0 miligramů účinné složky).

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

5 1. Nitrilová sloučenina obecného vzorce I:

ve kterém:

O

II ίο Y znamená skupinu-C=N nebo “C(CH2)_mCHj, m je 0 až 3,

R⁵ znamená:

(i) dvojvazný zbytek od pyridinové skupiny, pyrrolidinové skupiny, imidazolové skupiny, naftalenové skupiny nebo thiofenové skupiny, přičemž uvedené dvě vazby jsou na sousedních uhlíkových atomech v kruhu,

20 (ii) dvoj vaznou cykloalkylovou skupinu obsahující 4 až 10 atomů uhlíku, nesubstituovanou nebo substituovanou jedním nebo více substituenty, přičemž každý z těchto substituentů je navzájem na ostatních nezávisle vybrán ze souboru zahrnujícího nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluormethylovou skupinu, karbethoxyskupinu, karbmethoxyskupinu, karbpropoxyskupinu, acetylovou skupinu, karbamoylovou skupinu, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu,

25 aminovou skupinu, aminovou skupinu substituovanou alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, alkoxyskupinu obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, fenylovou skupinu nebo atom halogenu, (iii) disubstituovanou vinylenovou skupinu substituovanou skupinou vybranou z nitroskupiny,

30 kyanoskupiny, trifluormethylové skupiny, karbethoxyskupiny, karbmethoxyskupiny, karbpropoxyskupiny, acetylové skupiny, karbamoylové skupiny, karbamoylové skupiny substituované alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, dále acetoxyskupiny, karboxyskupiny, hydroxyskupiny, aminové skupiny, aminové skupiny substituované alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku; dále alkylové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny

35 obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nebo atomu halogenu, (iv) ethylenovou skupinu, nesubstituovanou nebo substituovanou jedním až dvěma substituenty, přičemž každý z těchto substituentů je nezávisle na ostatních vybrán ze souboru zahrnujícího nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluormethylovou skupinu, karbethoxyskupinu, karbmethoxyskupi-

40 nu, karbpropoxyskupinu, acetylovou skupinu, karbamoylovou skupinu, karbamoylovou skupinu substituovanou alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovou skupinu, aminovou skupinu substituovanou alkylovou skupinou obsahující 1 až 3 atomy uhlíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, nebo atom halogenu,

- 18CZ 291613 B6

R⁶ znamená skupinu -CO-, -CH₂-^, -CH₂CO- nebo -SO₂R⁷ znamená:

(i) alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 až 12 atomů uhlíku, (ii) cyklickou nebo bicyklickou alkylovou skupinu obsahující 4 až 12 atomů uhlíku, (iii) pyridylovou skupinu, (iv) fenylovou skupinu substituovanou jedním nebo více substituenty, přičemž každý z těchto substituentů je nezávisle na ostatních vybrán ze souboru zahrnujícího nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluormethylovou skupinu, karbethoxyskupinu, karbmethoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylovou skupinu, karbamoylovou skupinu, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovou skupinu, alkylovou skupinu s přímým řetězcem, rozvětveným řetězcem, cyklickým řetězcem nebo bicyklickým řetězcem obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, alkoxyskupinu s přímým řetězcem, rozvětveným řetězcem, cyklickým řetězcem nebo bicyklickým řetězcem obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, skupinu CH₂R, ve které R znamená cyklickou nebo bicyklickou alkylovou skupinu obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, nebo atom halogenu, (v) benzylovou skupinu substituovanou jedním až třemi substituenty, přičemž každý z těchto substituentů je nezávisle na ostatních vybrán ze souboru zahrnujícího nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluormethylovou skupinu, karbethoxyskupinu, karbmethoxyskupinu, karbpropoxyskupinu, acetylovou skupinu, karbamoylovou skupinu, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovou skupinu, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, nebo atom halogenu, (vi) naftylovou skupinu, nebo (vii) benzyloxyskupinu, a n má hodnotu 0,1, 2 nebo 3.
2. Nitrilová sloučenina podle nároku 1 pro použití jako léčivo pro snižování hladiny TNFa u savců.
3. Farmaceutický prostředek, v y z n a č u j í c í se t í m , že obsahuje podíl sloučeniny podle nároku 1 účinný při jednotlivé dávce nebo vícenásobné dávce k inhibování TNFa.
4. Nitrilová sloučenina podle nároku 1 pro použití jako léčivo pro inhibování fosfodiesterázy u savců.
5. Farmaceutický prostředek, v y z n a č u j í c í se t í m , že obsahuje podíl sloučeniny podle nároku 1 účinný při jednotlivé dávce nebo vícenásobné dávce k inhibování fosfodiesterázy.