SK284144B6

SK284144B6 - Nitrilová zlúčenina ako inhibítor tumor necrosis faktora alfa, farmaceutický prostriedok obsahujúci túto zlúčeninu a použitie tejto zlúčeniny ako liečiva

Info

Publication number: SK284144B6
Application number: SK272-98A
Authority: SK
Inventors: George W. Muller; Mary Shire
Original assignee: Celgene Corporation
Priority date: 1995-08-29
Filing date: 1996-08-29
Publication date: 2004-10-05
Also published as: CZ60998A3; RU2196134C2; AU716775B2; EP0957091A1; KR19990036361A; NZ318212A; SK27298A3; JP2000500118A; EP0851857A1; EP0957091B1; ES2216059T3; KR100440874B1; FI980038A0; DE69631592T2; EP1367051A2; HUP9901410A2; CA2230487A1; US5728845A; JP2008133303A; KR20030097902A

Description

Oblasť vynálezu

Vynález sa týka novej skupiny nepolypeptidových imidov, konkrétne nitrilových zlúčenín, ktoré je možné použiť ako inhibítory tumor necrosis faktora na znižovanie hladiny TNFa pri cicavcoch, farmaceutického prostriedku obsahujúceho tieto zlúčeniny a použitia týchto zlúčenín ako liečiv na znižovanie hladiny THFa pri cicavcoch, resp. ako liečiv na inhibovanie fosfodiesterázy pri cicavcoch.

Doterajší stav techniky

TNFa alebo tumor necrosis faktor-alfa (faktor a nádorovej nekrózy) je cytokín, ktorý je primáme uvoľňovaný mononukleámymi fagocytmi, ako reakcia na rôzne imunostimulátory. Keď sa podáva zvieraťu alebo človeku, vyvoláva zápal, horúčku, kardiovaskulárne účinky, hemoragiu, koaguláciu, pričom akútna fáza zodpovedá javom, ktoré sa prejavujú v priebehu akútnych infekcií a šokových stavov.

Nadmerná alebo neregulovaná TNFa produkcia bola implikovaná pri mnohých chorobných stavoch. Medzi tieto stavy je možné zahrnúť endotoxémiu alebo syndróm toxického šoku (pozri publikácia Tracey a kol, Náture 330, 662-664 (1987) a Hinshaw a kol., Circ. Shock 30, 279-292 (1990)); kachexiu (pozri publikácia Dezube a kol, Lancet, 335(869), 662(1990); a stresový respiračný syndróm u dospelého (Adult Respirátory Distress Syndróme), kde v pľúcnych ašpirátoch ARDS pacientov bola zistená koncentrácia TNFa v prebytku 12000 pg(mililiter (pozri publikácia Millar a kol., Lancet 2(8665), 712-714 (1989). Systémová infúzia rekombinantného TNFa tiež vedie ku zmenám typicky pozorovaných u ARDS pacientov (pozri publikácia Ferrai-Baliviera a kol, Árch. Surg. 124(12), 1400-1405 (1989).

Predpokladá sa, že TNFa je zapojený v ochorení resorpcie kostnej drene, zahrnujúcej artritídu, kde bolo zistené, že ak je aktivovaný, potom leukocyty vyvolávajú aktivitu vedúcu k resorpcii kostí, pričom údaje potvrdzujú, že sa TNFa podieľa na tejto aktivite (pozri publikácia Bertolini a kol, Náture 319, 516-518 (1986) aJohnson a kol, Endocrinology 124(3), 1424-1427 (1989)). Pri doterajších výskumoch bolo zistené, že TNFa stimuluje kostnú resorpciu a inhibuje tvorbu kostí in vitro a in vivo prostredníctvom stimulácie tvorby osteoklastov a aktivácie kombinovanej s inhibíciou funkcie osteoblastov. Aj keď TNFa môže byť zapojený v mnohých ochoreniach týkajúcich sa resorpcie kostí vrátane artritídy, najdôležitejšia súvislosť s chorobnými stavmi je spojená medzi produkciou TNFa nádorovými alebo hostiteľskými tkanivami a s hyperkalcémiou spojenou s malignáciou (pozri publikácia Calci. Tissue Ing. (US) 46(Suppl.), 53-10(1990)). V reakcii transplantát verzus hostiteľ (Graf) versus Host Reaction) sú zvýšené hľadiny TNFa v sére spojené s hlavnou komplikáciou po akútnych alogénnych transplantátoch kostnej drene (pozri publikácia Holler a kol.,Blood, 75(4), 1011-1016(1990)).

Celebrálna malária je letálny hyperakútny neurologický syndróm spojený s vysokými krvnými hladinami TNFa, pričom u pacientov s maláriou sa objavujú najťažšie komplikácie. Hladiny TNFa v sére súvisia priamo s nebezpečenstvom choroby a prognózou u pacientov s akútnymi atakmi malárie (pozri publikácia G r au a kol., N. Engl. J. Med. 320(24), 1586-1591(1989)).

TNFa zohráva úlohu v oblasti chronických pľúcnych zápalových ochorení. Ukladanie častíc oxidu kremičitého vedie k silikóze, čo je choroba progresívneho respiračného zlyhania, spôsobená fibrotickou reakciou. Protilátka k TNFa kompletne blokuje pľúcnu fibrózu vyvolanú oxidom kremičitým u myší (pozri publikácia Pignet a kol, Náture, 344:245-247 (1990)). Vysoké hladiny produkcie TNFa (v sére a v izolovaných mikrofázach) boli demonštrované na zvieracích modeloch, pri ktorých bola vyvolaná fibróza azbestom a oxidom kremičitým (pozri publikácia Bissonnettte a kol, Inflammation 13(3), 329-339 (1989)). Rovnako bolo zistené, že alveolárne makrofágy od pulmonámych sarkoidóznych pacientov spontánne uvoľňujú masívne množstvo TNFa v porovnaní s makrofágmi od normálnych darcov (pozri publikácia Baughman a kol, J.Lab. Clin, Med 115(1), 36-42 (1990)).

TNFa je tiež zapojený do zápalovej reakcie, ktorá nasleduje po reperfúzii, nazývanej reperfúzne poškodenie a je hlavnou príčinou poškodenia tkaniva po strate krvného toku (pozri publikácia Vedder a kol, PNAS 87, 2643-2646 (1990)). TNFa tiež mení vlastnosti endoteliálnych buniek a má rôzne prokoagulačné aktivity, ako je vyvolanie zvýšenia prokoagulačnej aktivity tkanivového faktora a potlačenie dráhy antikoagulačného proteínu C, ako i pokles regulácie expresie trombomodulínu (pozri publikácia Sherry a kol., J.Cell. Biol. 107,1269-1277 (1988)). TNFa má protizápalovú účinnosť, ktorá spoločne s jeho včasnou produkciou (počas začiatočného stavu zápalovej príhody) ho činí pravdepodobným mediátorom tkanivového poškodenia pri niektorých dôležitých ochoreniach zahrnujúcich, ale neobmedzujúcich sa na ne, ako je napríklad infarkt myokardu, mŕtvica a obehový šok. Špecificky dôležitá môže byť TNFavyvolaná expresia adhézie molekúl, ako je interceluláma adhézia molekúl (ICAM) alebo endoteliálna leukocytová adhézia molekúl (ELAM) na endoteliálne bunky (pozri publikácia Mtmro a kol, Am. J. Path. 135(1), 121-132 (1989)). Navyše je teraz známe, že TNFa je účinný aktivátor retrovírusovej replikácie, zahrnujúci aktiváciu HIV-1 (pozri publikácia Duh a kol., Proc. Nat. Acad. Sci. 86, 5974-5978 (1989); Poli a kol., Proc. Nat. Acad. Sci. 87, 782-785 (1990; Monto a kol., Blood 79, 2670(1990; Clouse a kol., J.Immunol. 142, 431-438 (1989); Poli, a kol, AIDS Res. Hum. Retrovirus, 191-197 (1992)). AIDS vzniká z infekcie T lymfocytov vírusom ľudskej imunodeficiencie (Human Immunodeficiency Vírus - HIV). Boli indetifikované aspoň tri typy alebo kmene HIV, t. j. HIV-1, HIV-2 a HIV-3. Ako následok HIV infekcie sa zhoršuje T-bunkami sprostredkovaná imunita a u infikovaných jedincov sa prejavujú ťažké oportúnne infekcie alebo neobvyklé neoplazmy. HIV vstup do T lymfocytov vyžaduje T lymfocytovú aktiváciu. Ďalšie vírusy, ako je HIV-1, HIV-2 infikujú T lymfocyty po T bunkovej aktivácii a takáto expresia alebo replikácia vírusového proteínu jc sprostredkovaná alebo udržiavaná touto T bunkovou aktiváciou. Akonáhle je aktivovaný T lymfocyt infikovaný HIV, musí T lymfocyt byť stále ďalej udržiavaný v aktívnom stave na sprostredkovanie HIV génovej expresie alebo HIV replikácie. Cytokíny, najmä TNFa, sú implikované v aktivovanej T-bunkami sprostredkovanej expresii alebo vírusovej replikácii HIV proteínu tým, že hrajú úlohu v udržiavaní T lymfocytovej aktivácie. Preto interferencia s cytokínovou aktivitou, ako jc prevencia alebo inhibícia cytokínovej produkcie, najmä TNFa, u HlV-infikovaných jednotlivcov spôsobujú obmedzenie udržiavania T lymfocytov vyvolaného HIV infekciou.

Monocyty, makrofágy a podobné bunky, ako sú Kupferové a gliálne bunky, sú tiež zapojené do udržiavania HIV infekcie. Tieto bunky, podobné T bunkám, predstavujú cieľ vírusovej replikácie, pričom hladina vírusovej replikácie je závislá od stavu aktivácie buniek (pozri publikácia Rosenberg a kol., The Immunopathogenesis of HIV Infection, Advances in Immunology, 57 (1989)). V prípade cytokínov, ako je TNFa, bolo zistené, že aktivujú HIV replikáciou v monocytoch a/alebo makrofázach (pozri Poli a kol., Proc. Natl. Acad. Sci., 87, 782-784 (1990)), preto prevencia alebo inhibícia produkcie alebo aktivity cytokínov napomáha obmedzeniu HIV progresie, ako je uvedené pre T bunky. Ďalšie štúdie preukázali, že TNFa pôsobí ako všeobecný faktor pri aktivácii HIV in vitro, pričom bol navrhovaný jasný mechanizmus pôsobenia cez jadrový regulačný proteín nájdený v cytoplazme buniek (pozri publikácia Osborn a kol., PNAS 86, 2336-2340). Táto skutočnosť naznačuje, že redukcia TNFa syntézy môže mať antivírusový účinok u HIV infekcií tým, že sa zníži transkripcia a tým vírusová produkcia.

AIDS vírusová replikácia latentného HIV v T bunkových a makrofágových líniách môže byť indukovaná TNFa (pozri publikácia Folks a kol., PNAS 86, 2365-2368 (1989)). Molekulárny mechanizmus vyvolania vírusovej aktivity je naznačený schopnosťou TNFa aktivovať génový regulačný proteín (NFkB) nájdený v cytoplazme buniek, ktorý promótuje HIV replikáciu prostredníctvom väzby na vírusovú regulačnú sekvenciu (LTR) (pozri publikácia Osborn a kol, PNAS 86, 2326-2340(1989)). TNFa v prípade kachexie súvisiacej s AIDS je indikovaný zvýšenou hladinou TNFa v sére a vysokými hladinami spontánnej TNFa produkcie v periférnych krvných monocytoch u pacientov (pozri publikácia Wright a kol., J. Immunol. 141(1), 99104(1988)).

TNFa je zapojený a má inú úlohu v rôznych iných vírusových infekciách, ako je napríklad cytomegalovírus (CMV), influenza vírus, adenovirus a trieda herpes vírusov, z podobných dôvodov, ako sú tu uvedené.

Prevencia alebo inhibícia produkcie alebo pôsobenia TNFa je preto považovaná za potenciálnu terapeutickú stratégiu na liečenie mnohých zápalových, infekčných, imunologických alebo malígnych chorôb. Medzi tieto choroby je možné zahrnúť: septický šok, sepsu, endotoxický šok, hcmodynamický šok a septický syndróm, postischemické reperfúzne poškodenie, maláriu, mykobakteriálnu infekciu, meningitis, psoriázu, kongestívne (mestnavé) srdcové zlyhanie, flbrotickú chorobu, kachexiu, odmietnutie transplantátu (štepu), rakovinu, autoimunitnú chorobu, oportúnne infekcie u AIDS, reumatoidnú artritídu, reumatoidnú spondylitídu, osteoartritídu, iné artritické stavy, Crohnovu chorobu, ulceratívnu kolitídu, roztrúsenú sklerózu, systémový lupus erythrematosis, ENL v lepre, poškodenie ožiarením a hyperoxické alveolárne poškodenie, týmto vymenovaním však nie je rozsah v žiadnom prípade obmedzený. Snahy smerované k potláčaniu účinkov TNFa boli vykonané v širokom rozsahu od použitia steroidov, ako je dexametazón a prednizolón do použitia tak polyklonálnych, ako i monoklonálnych protilátok (pozri publikácia Beutler a kol., Science 234, 470-474 (1985; WO 92/11383).

Jadrový faktor kB (NFkB) je pleiotropný transkripčný aktivátor (pozri publikácia Leonardo a kol, Celí 1989, 58, 227-229). NFkB je zapojený ako transkripčný aktivátor do mnohých chorobných a zápalových stavov, pričom je považovaný za faktor regulujúci cytokínové hladiny, vrátane TNFa, ale týmto nie je rozsah v žiadnom prípade obmedzený, a tiež za aktivátor HIV transkripcie (pozri publikácia Diabo a kol, J.Biol. Chem. 1993, 17762-66; Duh a kol., Proc. Natl. Acad. Sci, 1989, 86, 5974-78; Bachelerie a kol, Náture 1991, 350, 709-12; Boswas a kol, J. Acquired Immune Deficiency Syndróme 1993, 6, 778-786; Suzuki a kol.

Biochem. And Biophys. Res. Comm. 1993, 193, 277-83; Suzuki a kol. Biochem And Biophys. Res. Comm 1992, 189, 1709-15; Suzuki a kol., Biochem. Mol. Bio. Int. 1993, 31(4), 693-700; Shakhov a kol. 1990, 171, 35-47; a Staal a kol. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87, 9943-47). Inhibícia NFkB väzby môže regulovať transkripciu cytokínového génu alebo génov a touto moduláciou a inými mechanizmami môže byť vhodná na inhibovanie mnohých chorobných stavov. Zlúčeniny nárokované v tomto patente môžu ihibovať pôsobenie NFkB v jadre a sú preto vhodné pri liečení mnohých chorôb, zahrnujúcich reumatoidnú artridídu, reumatoidnú spondylitídu, osteoartridídu, iné artritické stavy, septický šok, sepsu, endotoxický šok, ochorenie transplantát verzus hostiteľ, chradnutic, Crohnovu chorobu, ulceratívnu kolitídu, sklerózu multiplex, systémový lupus erythrematosis, ENL v lepre, HIV, AIDS a oportúnne infekcie v AIDS, pričom týmto vymenovaním nie je rozsah ochorcni v žiadnom prípade obmedzený.

TNFa a NFkB hladiny sú ovplyvňované recipročnou spätnou slučkou. Ako je uvedené, zlúčeniny podľa predloženého vynálezu ovplyvňujú hladiny tak TNFa, ako i NFkB. V súčasnosti nie je však známe, akým spôsobom zlúčeniny podľa predmetného vynálezu regulujú hladinu TNFa, NFkB alebo oboch.

Mnoho celulámych funkcií môže byť sprostredkovaných určitou hladinou adenozín-3',5'-cyklického monofosfátu (cAMP). Tieto celuláme funkcie môžu prispievať ku vzniku zápalových stavov a ochorení vrátane astmy, zápalov a iných stavov (pozri publikácia Lowe and Cheng, Drugs of the Future, 17(9), 799-807, 1992). Pri doterajších výskumoch bolo zistené, že zvýšenie hladiny cAMP zápalových leukocytov inhibuje ich aktivácia a následne uvoľňovanie zápalových mediátorov. Zvýšená hladina cAMP rovnako vedie k relaxácii hladkého svalstva dýchacích ciest.

Primárnym celulámym mechanizmom na inaktivovanie cAMP je rozrušenie cAMP skupinou izoenzýmov, ktoré sa označujú ako cyklické nukleotidové fosfodiesterázy (PDE). Dosiaľ poznáme sedem členov tejto skupiny PDE látok. Napríklad bolo podľa doterajších výskumov zistené, že inhibovanie PDE, typ IV, je účinné najmä tak na inhibovanie uvoľňovania zápalového mediátora, ako i relaxácie hladkého svalstva dýchacích ciest. Takže zlúčeniny, ktoré inhibujú špecificky PDE IV, by mohli prejavovať požadovaný inhibičný účinok zápalových procesov a relaxácie hladkého svalstva dýchacích ciest s minimálnymi nežiaducimi vedľajšími účinkami, ako sú napríklad kardiovaskulárne účinky alebo účinky proti krvným doštičkám. Ale až dosiaľ známe a používané PDE IV inhibítory nemajú selektívny účinok pri prijateľných terapeutických dávkach.

Podstata vynálezu

Podstatu predmetného vynálezu predstavujú nitrilové zlúčeniny všeobecného vzorca (I)

v ktorom:

O

II

Y znamená skupinu -C=N alebo -C(CH2)_mCH₃, m je O až 3,

R⁵ znamená:

(i) o-fenylénovú skupinu, nesubstituovanú alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi, pričom každý z nich je nezávisle vybratý zo súboru zahrnujúceho nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluórmetylovú skupinu, karbetoxyskupinu, karbometoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylovú skupinu, karbamoylovú skupinu, karbamoylovú skupinu substituovanú alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovú skupinu, aminovú skupinu substituovanú alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alebo atóm halogénu, (i i) dvojväzbový zvyšok pyridínovej skupiny, pyrolidínovej skupiny, imidazolovej skupiny, naftalcnovcj skupiny alebo tiofénovej skupiny, pričom uvedené dve väzby sú na susedných uhlíkových atómoch v kruhu, (iii) dvojväzbovú cykloalkylovú skupinu obsahujúcu 4 až 10 atómov uhlíka, nesubstituovanú alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi, pričom každý z týchto substituentov je navzájom na ostatných nezávisle vybraný zo súboru zahrnujúceho nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluórmetylovú skupinu, karboetoxyskupinu, karbometoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylovú skupinu, karbamoylovú skupinu, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovú skupinu, substituovanú aminovú skupinu, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 10 atómov uhlíka, alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 10 atómov luhlíka, fenylovú skupinu alebo atóm halogénu, (iv) di substituovanú vinylenovú skupinu substituovanú nitroskupinou, kyanoskupinou, trifluórmetylovou skupinou, karboetoxyskupinou, karbometoxyskupinou, karbopropoxyskupinou, acetylovou skupinou, karbamoylovou skupinou, karbamoylovou skupinou substituovanou alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, acetoxyskupinou, karboxyskupinou, hydroxyskupinou, aminovou skupinou, aminovou skupinou substituovanou alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxyskupinou obsahujúcou 1 až 4 atómy uhlíka, alebo atómom halogénu, (v) etylénovú skupinu, nesubstituovanú alebo substituovanú jedným až dvomi substituentmi, pričom každý z týchto substituentov je nezávisle na ostatných vybraný zo súboru zahrnujúceho nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluórmetylovú skupinu, karboetoxyskupinu, karbometoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylovú skupinu, karbamoylovú skupinu, karbamoylovú skupinu substituovanú alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovú skupinu, aminovú skupinu substituovanú alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, alkylovú skupinou obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alebo atóm halogénu,

R⁶ znamená skupinu -CO-, -CH₂-, CH₂CO- alebo -SO₂'’ R⁷ znamená :

(i) alkylovú skupinu s priamym alebo rozvetveným reťazcom obsahujúcim 1 až 12 atómov uhlíka, (ii) cyklickú alebo bicyklickú alkylovú skupinu obsahujúcu 4 až 12 atómov uhlíka, (iii) pyridylovú skupinu, (iv) fenylovú skupinu substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi, pričom každý z týchto substitu entov je nezávisle od ostatných vybraný zo súboru zahrnujúceho nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluórmetylovú skupinu, karboetoxyskupinu, karbometoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylovú skupinu, karbamoylovú skupinu, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovú skupinu, alkylovú skupinu s priamym reťazcom, rozvetveným reťazcom, cyklickým reťazcom alebo bicyklickým reťazcom obsahujúcim 1 až 10 atómov uhlíka, alkoxyskupinu s priamym reťazcom, rozvetveným reťazcom, cyklickým reťazcom alebo bicyklickým reťazcom obsahujúcim 1 až 10 atómov uhlíka, skupinu CH²R, v ktorej R znamená cyklickú, alebo bicyklickú alkylovú skupinu, obsahujúcu 1 až 10 atómov uhlíka, alebo atóm halogénu, (v) benzylovú skupinu substituovanú jedným až tromi substituentmi, pričom každý z týchto substituentov je nezávisle od ostatných vybraný zo súboru zahrnujúceho nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluórmetylovú skupinu, karboetoxyskupinu, karbometoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylovú skupinu, karbamoylovú skupinu, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovú skupinu, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 10 atómov uhlíka, alebo atóm halogénu, (vi) naftylovú skupinu, alebo (vit) benzyloxyskupinu, a n má hodnotu 0, 1,2 alebo 3.

Do rozsahu predmetného vynálezu rovnako patrí použitie týchto nitrilových zlúčenín definovaného všeobecného vzorca ako liečiv na znižovanie hladiny TNFa pri cicavcoch.

Do rozsahu predmetného vynálezu rovnako patrí použitie týchto nitrilových zlúčenín definovaného všeobecného vzorca ako liečiv na inhibovanie fosfodiesterázy pri cicavcoch.

Do rozsahu predmetného vynálezu rovnako patrí farmaceutický prostriedok, ktorého podstata spočíva v tom, že obsahuje podiel definovanej zlúčeniny podľa vynálezu všeobecného vzorca (i) účinný pri jednotlivej dávke alebo viacnásobnej dávke na inhibovanie TNFa.

Do rozsahu predmetného vynálezu rovnako patri farmaceutický prostriedok, ktorého podstata spočíva v tom, že obsahuje podiel definovanej zlúčeniny podľa vynálezu všeobecného vzorca (i) účinný pri jednotlivej dávke alebo viacnásobnej dávke na inhibovanie fosfodiesterázy.

Zlúčeniny podľa predmetného vynálezu predstavujú účinné a vhodné inhibítory fosfodiesteráz, najmä PDE III a PDE IV a z tohto dôvodu sú vhodné a použiteľné na liečenie chorôb sprostredkovaných týmito fosfodiesterázami.

Výhodné sú podľa predmetného vynálezu zlúčeniny uvedeného vzorca, v ktorom :

Y znamená skupinu -C=N,

R⁵ znamená o-fenylénovú skupinu, či už substituovanú alebo nesubstituovanú,

R⁶ znamená skupinu -CO- alebo -CH₂-,

R⁷ znamená arylovú skupinu, a n je 1.

Medzi typické zlúčeniny podľa predmetného vynálezu patria nasledujúce látky :

Ŕ⁵ F

-CO- 3,4-dimetoxyfenylová skupina

-CO- 3-etoxy-4-metoxyfenylová skupina

-CH2CO- 3,4-dimetoxyfenylová skupina

-CH2CO- 3-etoxy-4-metoxyfenylová skupina

-CO- 3-propoxy-4-metoxyfenylová skupina

-ch₂co	3 -propoxy-4-metoxyfenylo vá skupina
-CO-	3 -cyklopentoxy-4-metoxyfenylová skupina (cyklopentoxyskupina = cyklická C5H9O- skupina)
-CH₂CO-	3-cyklopentoxy-4-metoxyfenylová skupina
-CO-	3,4-dimetoxyfenylová skupina
-CO-	3-etoxy-4-kyanofenylová skupina
-CH₂-	3,4-dimetoxyfenylová skupina
-ch₂-	3-etoxy-4-metoxyfenylová skupina
-ch₂-	3,4-dimetoxyfenylová skupina

Uvedeným termínom alkylová skupina, ktorý je používaný v tomto texte, sa mení jednoväzbový nasýtený rozvetvený alebo priamy uhľovodíkový reťazec. Pokiaľ nie je výslovne uvedené inak, potom tieto reťazce obsahujú od 1 do 18 atómov uhlíka. Ako reprezentatívne príklady takýchto alkylových skupín je možné uviesť metylovú skupinu, etylovú skupinu, propylovú skupinu, izopropylovú skupinu, butylovú skupinu, izobutylovú skupinu, sŕÁ’-butylovú skupinu, terc-butylovú skupinu, pentylovú skupinu, izopentylovú skupinu, neopentylovú skupinu, íerc-pentylovú skupinu, hexylovú skupinu, izohexylovú skupinu, heptylovú skupinu, oktylovú skupinu, nonylovú skupinu, decylovú skupinu, undecylovú skupinu, dodecylovú skupinu, tridecylovú skupinu, tetradecylovú skupinu, pentadecylovú skupinu, hexadecylovú skupinu, heptadecylovú skupinu, oktadecylovú skupinu a podobné ďalšie skupiny. V prípadoch keď sú tieto skupiny označované ako „nižšia“ alkylová skupina, potom táto alkylová skupina obsahuje od 1 do 6 atómov uhlíka. Rovnaký počet uhlíkových atómov platí pre základný termín „alkán“ a pre odvodené výrazy, ako je napríklad „alkoxyskupina“.

Termínom „cykloalkylová skupina (alebo cyklická alkylová skupina)“, ktorý je používaný v tomto texte, sa mieni jednoväzbový nasýtený cyklický uhľovodíkový reťazec. Pokiaľ nie je výslovne uvedené inak, potom tieto reťazce obsahujú od 1 do 18 atómov uhlíka. Ako reprezentatívne príklady takýchto cykloalkylových skupín je možné uviesť metylovú skupinu, etylovú skupinu, cyklopropylovú skupinu, cyklohexylovú skupinu, cykloheptylovú skupinu, cyklooktylovú skupinu, cyklononylovú skupinu, cyklodecylovú skupinu, cykloundecylovú skupinu, cyklododecylovú skupinu, cyklotridecylovú skupinu, cyklotetradecylovú skupinu, cyklopentadecylovú skupinu, cyklohexadecylovú skupinu, cykloheptadecylovú skupinu, cyklooktadecylovú skupinu, cyklické terpenové skupiny a podobné ďalšie skupiny, V prípadoch, keď sa uvádza „nižšia“ cykloalkylová skupina, potom táto cykloalkylová skupina obsahuje 3 až 6 atómov uhlíka. Rovnaký počet uhlíkových atómov platí pre základný termín „cykloalkán“ a pre odvodené výrazy, ako je napríklad „cykloalkoxyskupina“.

Tieto zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť použité pod dohľadom kvalifikovaných odborníkov, na inhibovanie nežiaducich účinkov TNFa. Uvedené zlúčeniny môžu byť podávané perorálne, rektálne alebo parenterálne, samotné alebo v kombinácii s inými terapeutickými činidlami, zahrnujúcimi antibiotiká, steroidy atď., pričom sa aplikujú na cicavce, ktoré potrebujú toto liečenie. Perorálne dávkové formy zahrnujú tablety, kapsuly, dražé a podobne tvarované, zlisované farmaceutické formy. Izotonické soľné roztoky, obsahujúce 20 až 100 miligramov/mililiter môžu byť použité na parenterálne podávanie, ktoré zahrnuje intramuskulámy, intratekálny, intravenózny a intraarteriálny spôsob podávania. Rektálne podávanie sa môže uskutočniť s použitím čapíkov formulovaných z bežných nosičov, ako je kakaové maslo.

Dávkové režimy musia byť upravené podľa konkrétnej indikácie, veku, hmotnosti a všeobecného fyzického stavu pacienta a požadovanej reakcie, ale všeobecne sa tieto dávky pohybujú v rozpätí od asi 1 do asi 1000 miligramov/deň podľa potreby v jednom alebo viac podaniach za deň. Všeobecne môže začiatočný režim pri použití zlúčenín podľa predmetného vynálezu kopírovať režim, o ktorom je známe, že je účinný na interferovanie TNFa aktivity pre iné TNFa sprostredkované chorobné stavy, Liečených jednotlivcov je potrebné pravidelne sledovať, pokiaľ ide o počet T buniek a pomery T4/T8 alebo merania virémie, ako sú hladiny reverznej transkriptázy alebo vírusových proteínov, alebo pokiaľ sa týka progresie problémov spojených s chorobou sprostredkovanou cytokínmi, ako je napríklad kachexia alebo svalová degenerácia. Ak nie je vidieť po normálnom liečebnom režime žiaden efekt, potom sa zvýši podávanie činidla interferujúceho s cytokínovou aktivitou, napríklad o päťdesiat percent za týždeň.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu môžu byť tiež použité topicky na liečenie alebo profylaxiu topických chorobných stavov sprostredkovaných alebo vyvolaných nadmernou produkciou TNFa, ako sú napríklad vírusové infekcie, ako napríklad také, ktoré sú spôsobené vírusmi herpesu, alebo vírusová konjunktivitída, psoriáza, iné kožné poruchy a ochorenia, atď.

Tieto zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť tiež použité vo veterinárnej liečbe cicavcov iných ako ľudí v prípade potreby prevencie alebo inhibície produkcie TNFa. Na liečenie TNFa sprostredkovaných chorôb, či už terapeuticky, alebo profylaktický, v prípade zvierat prichádzajú do úvahy také chorobné stavy, ako sú tie, ktoré boli uvedené, ale najmä vírusové infekcie. Ako príklady týchto chorôb je možné uviesť vírus mačacej imunosuficiencie, konskú infekčnú vírusovú anémiu, koziu infekčnú vírusovú anémiu, visna vírus a maedi vírus, ako i iné lentivirusy.

Niektoré z týchto zlúčenín podľa vynálezu majú centrá chirality, pričom tieto zlúčeniny môžu existovať ako optické izoméry. Tak racemáty týchto izomérov, ako i jednotlivé izoméry samotné, ako i diastereoizoméry, ak pri nich existujú dve chirálne centrá, patria do rozsahu predmetného vynálezu. Racemáty môžu byť použité samotné, alebo môžu byť rozdelené na svoje jednotlivé izoméry mechanickým spôsobom, ako napríklad chromatografickým spôsobom použitím chirálneho absorbentu. V alternatívnom uskutočnení môžu byť pripravené jednotlivé izoméry v chirálnej forme alebo oddelené chemicky zo zmesi tak, že sa vytvorí soľ s chirálnou kyselinou, ako sú jednotlivé enantioméry 10-gáforsulfónovej kyseliny, gáfrovej kyseliny, alfabrómgáfrovej kyseliny metoxyoctovej kyseliny, vínnej kyseliny, diacetylvínnej kyseliny, jablčnej kyseliny, pyrrolidón-5-karboxylovej kyseliny a podobne a potom je možné uvoľniť jednu alebo obidve oddelené bázy, prípadne opakovaním procesu tak, že sa získa jeden alebo obidva izoméry v podstate bez druhého izoméru; to znamená vo forme majúcej optickú čistotu > 95 %.

Prevencia alebo inhibícia produkcie TNFa pomocou týchto zlúčenín podľa vynálezu môže byť sledovaná použitím bežne známych a obvykle používaných testov vykonávaných metódami všeobecne známymi v tomto odbore z doterajšieho stavu techniky. Napríklad TNFa inhibičný test v LPS simulovanom PBMC je možné vykonať nasledujúcim spôsobom:

PBMC izolovanie: PBMC z normálnych donorov bol získaný hustotnou centrifugáciou na Ficoll-Hypaque. Bunky boli kultivované v RPMI doplnenom 10 % AB + sérum, 2 mM L-glutamínu, 100 U/mililiter penicilínu a 100 pg/mililiter streptomycínu.

PBMC suspenzie: Liečivá boli rozpustené v DMSO (Sigma Chemical), ďalšie zriedenie bolo vykonané v doplnenom RPMI. Finálna DMSO koncentrácia v prítomnosti alebo v neprítomnosti liečiva v PBMC suspenziách bola 0,25 % hmotnostných. Liečivá boli testované pri polovičných log-zriedeniach, pričom sa vychádzalo z koncentrácie 50 pg/ml. Liečivá boli pridané do PBMC (10⁶ buniek/militer) na 96-jamkových plátoch jednu hodinu pred prídavkom LPS.

Bunková stimulácia: PBMC (10⁶ buniek/mililiter) v prítomnosti alebo neprítomnosti liečiva bol stimulovaný spracovaním s 1 pg/mililiter LPS zo Salmonella minnesota R595 (List Biological Labs, Campbell, CA). Bunky boli inkubované pri teplote 37 °C počas 18 až 20 hodín. Kvapalina nad usadeninou bola odvedená a okamžite testovaná na TNFa úroveň alebo bola uchovávaná v zmrazenom stave pri teplote -70 °C (počas maximálne 4 dní), potom bola testovaná.

TNFa stanovenie: Koncentrácia TNFa v kvapaline nad usadeninou bola stanovená s použitím TNFa ELISA kitov určených pre ľudí (Endogen, Boston MV), pričom bol použitý návod výrobcu.

Uvedené zlúčeniny podľa predmetného vynálezu je možné pripraviť použitím metód, ktoré sú všeobecne známe a používané na prípravu nitrilových zlúčenín. Všeobecná reakčná schéma je v ďalšom ilustrovaná nasledujúcimi rovnicami:

w,

v ktorých X znamená CO₂H, CONH₂ alebo CH.

Príklady uskutočnenia vynálezu

V nasledujúcich príkladoch sú bližšie ilustrované nové nitrilové zlúčeniny podľa predmetného vynálezu a postup ich prípravy, pričom tieto príklady sú len typové a ilustratívne a neznamenajú obmedzenie rozsahu tohto vynálezu, ktorý je daný len ďalej uvedenými patentovými nárokmi.

Príklad 1

Postup prípravy 3-ftalimido-3-(3-4-dietoxyfenyl)-propionitrilu

Podľa tohto príkladu bolo použité premiešavanie suspenzie chladenej na ľadovom kúpeli, ktorá obsahovala 3-ftalimido-3-(3,4-dietoxyfenyl)propiónamid (v množstve 0,96 gramu, čo je 2,5 mmólu) a 4-metylmorfolín (použité 0,66 mililitra, čo je 6 mmolov) v DMF (9 mililitrov), pričom táto suspenzia bola udržiavaná pod atmosférou dusíka, následne bol pridaný po kvapkách tionylchlorid (použité 0,35 mililitra, čo je 4,8 mmólu). Pri premiešavaní tejto reakčnej zmesi pri teplote v rozpätí od 0 do 5 °C počas 30 minút a potom pri teplote miestnosti počas 2 hodín nastal mierny exotermický priebeh. Táto reakcia bola monitorovaná metódou vysokotlakej kvapalinovej chromatografie HPLC (Waters Nova-Pak/C-18 kolona, 3,9 x 150 milimetrov, 4 mikrometre, 1 mililiter/minúta, 240 nm, 50/50 CH₃CN/H₃PO₄ 0,1 % (vodný roztok)). Takto získaná reakčná zmes bola potom naliata do zmesi obsahujúcej hydrogenuhličitan sodný NaHCO₃ (8,5 mililitra) a ľad (40 gramov) a potom bola premiešavaná až do rozpustenia ľadu. Táto reakčná zmes bola potom sfiltrovaná a pevný podiel bol premytý dostatočným množstvom vody. Týmto spôsobom bola získaná vlhká pevná látka, ktorá bola rozpustená v dichlórmetáne CH₂C1₂ (25 mililitrov) a organická vrstva bola oddelená, usušená síranom horečnatým a skoncentrovaná vo vákuu za vzniku lepkavej polopevnej látky. Táto pevná látka bola potom prečistená dvakrát v kolóne okamihovou chromatografíckou metódou (silikagél, 3 % etylacetát/metylenchlond), čím bola pripravená pevná látka, ktorá bola usušená vo vákuu (pri 50 °C, < 133 Pa), pričom týmto zhora opísaným postupom bol získaný požadovaný produkt vo forme svetložlej pevnej látky.

Výťažok: 0,5 gramu (55 %). 'HNMR (CDClj) δ

7,91 - 7,65 (m, 4H), 7,12 - 6,98 (m, 2H)

6,90 - 6,78 (m, IH), 5,61 (dd, J = 6,4, 10,3 Hz, IH ) 4,19 - 3,96 (m, 4H), 3,83 (dd, J = 10,3, 16,8 Hz, IH) 3,26 (dd, J = 6,4,16,8 Hz, IH), 1,55 - 1,30 (m, 6H); ”C NMR (CDCI₃) δ :

167,7, 149,2, 148,9, 134,3, 131,5, 129,1,

123,6, 120,2, 116,9, 113,2, 112,9, 64,7,

64,5, 51,1, 21,1, 14,7

HPLC 98,4 %

Analýza pre C₂|H_2ON₂0₄:

Vypočítané: 69,22 % C nájdené: 69,06 % C

5,53% H 7,69% N

5,48% H 7,58% N.

Príklad 2

Postup prípravy 3-ftaIimido-3-(3,4-dimetoxyfenyl)-propionitrilu

Podľa tohto príkladu bol do použitej premiešavanej suspenzie chladenej na ľadovom kúpeli, ktorý obsahoval 3-ftalimido-3-(3,4-dimetoxyfenyl)propiónamid (v množstve 1,77 gramu, čo je 5,00 mmol) a 4-metylmorfolín (použité 1,3 mililitra, čo je 12 mmol) v DMF (17 mililitrov), pričom táto suspenzia bola udržiavaná pod atmosférou dusíka, pridaný po kvapkách a s použitím striekačky tionylchlorid (použité 0,7 mililitra, čo je 9,6 mmol). V ďalšom postupe nastal mierny exotermiený priebeh a po 30 minútach chladenia bol chladiaci kúpeľ odstránený a reakčná zmes bola potom ešte premiešavaná počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Táto reakčná zmes bola potom naliata do zmesi obsahujúcej hydrogenuhličitan sodný NaHCO₃ (17 gramov) a 75 mililitrov ľadovej vody a táto zmes bola premiešavaná tak dlho, pokiaľ sa ľad nerozpustil. Táto suspenzia bola potom sfíltrovaná a pevný podiel bol premytý dostatočným množstvom vody. Týmto spôsobom bola získaná vlhká pevná látka, ktorá bola rozpustená v dichlórmetáne CH,CL (50 mililitrov) a organická vrstva bola oddelená, usušená síranom sodným a skoncentrovaná vo vákuu za vzniku oranžovej pevnej látky. Táto pevná látka bola potom prečistená dvakrát v okamihovej chromatografickej kolóne (silikagél, 5/59 EtOAc/CH₂Cl₂, vnútorný priemer kolóny 50 milimetrov), pričom týmto uvedeným postupom bol získaný požadovaný produkt vo forme bielej pevnej látky. Výťažok: 1,32 gramu (79 %).

'HNMR (CDClj) δ:

7,9 - 7,6 (m,4H), 7,10 (m, 2H), 6,83 (m, IH), 5,64 (dd, J = = 6,5, 10,2Hz, IH), 3,88 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 3,82 (dd, IH), 3,30 (dd, J = 6,5,16,8Hz, IH);

^l3CNMR (CDClj) δ:

167,7, 149,5, 149,2, 134,4, 131,5, 129,1,

123,6, 120,1, 116,9, 111,1, 110,7, 56,0,

55,9, 51,1, 21,1.

Analýza pre C₁₉H₁₆N₂O₄ . 0,18 H₂O:

vypočítané: 76,2% C 4,85% H 8,25% N nájdené: 67,23 % C 4,79 % H 8,27% N

Príklad 3

Postup prípravy 3-(3 -nitroftalimido)3-(3 '-etoxy-4 -metoxyfenyljpropionitrilu

Pri vykonávaní postupu podľa tohto príkladu bola použitá premiešavaná suspenzia obsahujúca anhydrid kyseliny 3-nitrofialovej (v množstve 0,24 gramu, čo je 1,13 mmolu) a 3-amino-3-(3 -etoxy-4 -metoxyfenyl)propionitril (použité 0,25 gramu, čo je 1,13 mmolu) v 6 mililitroch kyseliny octovej, pričom táto suspenzia bola zahrievaná pri teplote varu pod spätným chladičom počas 12 hodín. Kyselina octová bola potom odstránená vo vákuu a týmto spôsobom bola získaná oranžová gumovitá látka, ktorá bola rozpustená v metylénchloride (10 mililitrov) a tento podiel bol potom premytý nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (dva podiely po 10 mililitroch). Organická vrstva bola potom oddelená a vodná vrstva bola extrahovaná metylénchloridom (10 mililitrov). Organické extrakty boli spojené a tento spojený podiel bol usušený síranom horečnatým, sfiltrovaný a skoncentrovaný vo vákuu, čím bol získaný žltý olej. Tento surový produkt bol potom prečistený v kolóne okamihovou chromatografíckou metódou (silikagél, 5 % etylacetát/metylenchlorid) a výsledná pevná látka bola usušená vo vákuu (pri 60 °C, < 133 Pa], pričom týmto zhora uvedeným postupom bol pripravený požadovaný produkt vo forme žltej látky. Výťažok: 0,25 gramu (56 %).

Teplota topenia: 155,5 - 157 °C.

'HNMR (CDClj) δ

8,20 - 8,09 (m, 2H), 8,02 - 7,86 (m, IH)

7,15 - 7,02 (m, 2H), 6,86 - 6,76 (m, IH) 5,64 (dd, J = 6,3,

10.6 Hz, IH)

4,09 (q, J = 7Hz, 2H ) 3,85 (s, 3H), 3,84 (dd, J = 10,6,

16.7 Hz, IH)

3,26 (dd, J = 6,3, 16,7 Hz, IH), 1,46 (t, J = 7Hz , 3H);

¹³CNMR (CDClj) δ:

165,3	162,3,	150,1,	148,7,	144,9,	135,7,
133,5,	129,0,	128,1,	127,4,	123,2,	120,3,
116,6	112,1,	111,5,	64,6,	55,9,	51,9,
20,9,	14,7

Analýza pre vypočítané: nájdené:

C20H17N3O6:

60,76 % C

60,59 % C

4,33 % H

4,22 % H

10,63 %N

10,65% N.

Príklad 4

Postup prípravy 3-(3'-aminoftalimido)-3-(3'-etoxy-4’-metoxyfenyljpropionitrilu.

Podľa tohto vyhotovenia bol použitý roztok, ktorý obsahoval 3-(3 '-nitroftalimido)-3(3 '-etoxy-4 ’-metoxyfenyl(propionitril (použité 0,2 gramu, čo je 0,5 mmol) v 30 mililitroch etylacetátu, pričom k tomuto roztoku sa pridalo 0,05 gramu 10 %-ného paládia na uhlíkovom katalyzátore. Takto získaná reakčná zmes bola hydrogenovaná v ParrShckcrovom zariadení pri tlaku vodíka v rozpätí od 380 kPa do 414 kPa cez noc. Táto reakčná zmes bola potom prefiltrovaná cez celit a získaný filtrát bol skoncentrovaný vo vákuu, čim bol získaný žltý olej. Tento surový produkt bol potom prečistený v okamihovej chromatografickej kolóne (silikagél, 3 % etylacetát(metylenchlorid). Výsledná žltá pevná látka bola potom usušená vo vákuu (pri 60 °C, < 133 Pa) a týmto opísaným spôsobom bol získaný požadovaný produkt.

Výťažok: 0,09 gramu (50 %). Teplota topenia: 171 - 172,5 °C.

'HNMR (CDClj) δ

7,47 - 7,35 (m, 1 H), 7,19 - 7,00 (m, 3H)

6,90 - 6,29 (m, 2H), 5,56 (dd, J = 6,6,10,0 Hz, IH )

5,24 (s, 2H), 4,09 (q, J = 7Hz, 2H), 3,84 (s, 3H)

3,77 (dd, J = 10, 16,8 Hz, IH), 3,27 ( dd, J = 6,6, 16,8Hz, 1H )1,45 (t, J = 7Hz, 3H);

¹³C NMR (CDClj) δ :

169,4,	167,9,	149,6,	148,5	145,5,	135,5.
132,1,	129,4,	121,3	120,0,	117,1,	113,0
112,2,	111,4	110,6	64,5,	55,9,	50,7,
21,1,	14,7;

HPLC (Waters Nova-Pak C₁₈ kolóna, 3,9 x 150 mm, 4 mikrometre, 1 mililiter/minútu, 240 nm, 40/60, CHjCN/0,1 %

H₃PO₄ (vodný), 4,5 minúty 100 %.
Analýza pre	C₂₀H₁₉N₃O₄:
vypočítané:	65,74 % C	5,24 % H	11,50% N
nájdené:	65,54 % C	5,23 % H	11,23 %N.
Príklad 5

Postup prípravy 3-ftalimido-3-(3 '-etoxy-4'-metoxyfenyl)-propionitrilu

Pri vykonávaní tohto postupu bol oxalylchlorid (použité 0,49 mililitra, čo je 5,64 mmolu) pridávaný po kvapkách do premiešavaného roztoku chladeného v ľadovom kúpeli, ktorý obsahoval DMF (0,48 mililitra, čo je 6,16 mmolu) a acetonitril (10 mililitrov). Pri tomto postupe sa okamžite vytvorila biela zrazenina, pričom vznik tohto produktu bol sprevádzaný vývojom plynu. Získaná reakčná zmes bola premiešavaná počas 30 minút pri teplote v rozpätí od 2 do 3 °C, na čo bol pridaný pomalým spôsobom roztok 3-ftalimido-3(3 '-etoxy-4'-metoxyfenyl)propiónamidu (v množstve 1,89 gramu, čo je 5,13 mmolu) v DMF (15 mililitrov). Po 10 minútach bol pridaný pyridín a takto vytvorená reakčná zmes bola premiešavaná počas 30 minút pri teplote v rozpätí od 2 do 3 °C. Získaná reakčná zmes bola potom naliata do 60 mililitrov ľadu a premiešavaná počas 20 minút. Táto suspenzia bola potom sfíltrovaná a pevný podiel bol premytý vodou, usušený na vzduchu a potom bol usušený vo vákuu (pri teplote 60 °C, < 133 Pa), čím bol získaný požadovaný produkt vo forme bielej pevnej látky. Výťažok: 1,7 gramu (95 %).

Teplota topenia: 135 - 137 °C.

'HNMR (CDClj) δ :

7,86 - 7,71 (m, 4H), 7,08 - 7,05 (m, 2H)

6,84 - 6,81 (m, IH), 5,63 (dd, J = 6,5, 10,3 Hz, IH )

4,11 (q, J = 7Hz, 2H), 3,88 - 3,77 (m, IH) 3,84 (s, 3H), 3,32 - 3,23 (m, 1 H) 1,45 (t, J = 7Hz, 3H);

¹³CNMR (CDClj) δ:

167.4, 149,0, 147,8,

123.5, 119,4, 118,2

55,4, 50,0 20,5

134,9 130,8 129,2,

112,1, 111,7, 63,8

14,6,

Analýza pre C₂₀H|₈N₂O₄:

vypočítané: 68,56 % C 5,18% H 8,00% N nájdené: 68,46% C 5,37% H 8,02% N.

Príklad 6

Postup prípravy l-(ľ-oxo-izoindolín)-l-(3',4'-dimetoxyfenyl)propionitrilu

Podľa tohto postupu sa použila na ľadovom kúpeli chladená a premiešaná suspenzia, ktorá obsahovala l-(ľ-oxoizoindolín)-1 -(3 ',4'-dimetoxyfenyl)propionamid (použité 1,7 gramu, čo je 5,00 mmol) a 4-metylmorfolín (1,3 mililitra, čo je 12 mmol) v DMF (20 mililitrov), ktorá bola udržiavaná pod atmosférou dusíka, pričom k tejto suspenzii bol pridaný po kvapkách a s použitím striekačky tionylchlorid (v množstve 0,7 mililitra, čo je 9,6 mmol). Potom nastala mierna exotermická reakcia, pričom po 1 hodine bol chladiaci kúpeľ odstránený a reakčná zmes bola premiešavaná počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. Táto reakčná zmes bola potom naliata do 100 mililitrov ľadového kúpeľa a premiešavaná tak dlho, pokiaľ sa všetok ľad nerozpustil. Takto získaná suspenzia bola sfiltrovaná a pevná látka bola premytá dostatočným množstvom vody. Získaný pevný produkt bol prečistený dvakrát v okamihovej chromatografickej kolóne (silikagél, 1/9 a 24(76 etylacetát/dichlórmetán). Týmto spôsobom bol získaný pevný materiál, ktorý bol usušený vo vákuu a takto bol získaný požadovaný produkt vo forme oranžovej pevnej látky.

Výťažok: 0,97 gramu (60 %). Teplota topenia: 119 — 121 °C.

HNMR (CDClj) δ:

7,94 - 7,85 (m, IH), 7,61 - 7,30 (m, 3H)

7,05 - 6,85 (m, 3H), 5,73 (t, J = 7Hz, IH )

4,46 (d, J = 16,7Hz, IH), 4,19 (d, J = 16,7Hz,lH ) 3,89 (s, 3H) 3,86 (s, 3H), 3,23 (m, 2H)

-(ľ-oxoizoindolin)-1 -(3 '-etoxy-4 '-metoxyfenyl)-propionamid (použité 1,2 gramu, čo je 2,8 mmol) a 4-metylmorfolinu (0,75 mililitra, čo je 6,8 mmol) v DMF (10 mililitrov), ktorá bola udržiavaná pod atmosférou dusíka, pričom k tejto suspenzii bol pridaný po kvapkách a s použitím striekačky tionylchlorid (v množstve 0,4 mililitra, čo je 5,5 mmol). Potom nastala mierna exotermická reakcia, pričom po 1 hodine bol chladiaci kúpeľ odstránený a reakčná zmes bola premiešavaná počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. Táto reakčná zmes bola potom naliata do 100 mililitrov ľadového kúpeľa a premiešavaná tak dlho, pokiaľ sa všetok ľad nerozpustil. Takto získaná suspenzia bola sfiltrovaná a pevná látka bola premytá dostatočným množstvom vody. Získaný pevný produkt bol prečistený v okamihovej chromatografickej kolóne (silikagél, 1,5/8,5 etylacetát/dichlórmetán). Týmto spôsobom bol získaný pevný materiál, ktorý bol usušený vo vákuu a takto bol získaný požadovaný produkt vo forme pevnej látky farby slonoviny.

Výťažok: 0,57 gramu (60 %) Teplota topenia: 125 - 125,5 °C

HNMR (CDClj) δ :

7,88 (d, J = 7Hz, IH), 7,60 - 7,30 (m, 3H)

7,05 - 6,80 (m, 3H), 5,71 (t, J = 6,9 Hz, IH)

4,45(d, J = 14Hz, IH), 4,20 - 4,00 (m, 3H) 3,87 (s, 3H), 3,23 (m, 2H) 1,44 (t, 7Hz, 3H);

14,6 ^l3C NMR (CDClj) δ :

149,7,	148,8,	141,2	131,9	131,8,
128,2,	123,9	122,9,	117,4	112,4
64,6	55,9	51,6	47,3,	21,1,

Analýza pre C₂₀H₂oN₂03:

vypočítané: 71,4% C 5,919% H 8,33% N nájdené: 71,11 %C 5,91 %H 8,17 %N.

Príklad 8

Tablety, každá obsahujúca 50 miligramov účinnej zložky, môžu byť pripravené nasledujúcim spôsobom :

Zložky (na 1000 tabliet) účinná zložka laktóza pšeničný škrob polyetylénglykol 6000 mastenec stearát horečnatý demineralizovaná voda

50,0 gramov

50,7 gramov

7,5 gramov 5,0 gramov 5,0 gramov

1,8 gramov zvyšok ¹³C NMR (CDClj) δ :

168,5	149,5,	149,4,	141,1	131,9	131,8
128,7,	128,2	123,9	122,9	119,1,	117,4
111,2	111,0	56,0	55,9,	51,6,	47,3,

21,1

Analýza pre vypočítané: nájdené:

j₉H₁₈N₂O₃:

70,79 % C

70,26 % C

5,63 % H

5,56 % H

8,69 % N

8,47 % N.

Príklad 7

Postup prípravy 1-(1-oxoizoindolín )-l-(3'-etoxy-4'-metoxyfenyl)propionitrilu

Podľa tohto postupu sa použila na ľadovom kúpeli chladená a premiešavaná suspenzia, ktorá obsahovala 1Pevné zložky sa najprv pretlačia sitom s rozmermi oka 0,6 milimetra. Potom sa zmieša účinná zložka, laktóza, mastenec, stearát horečnatý a polovica škrobu. Ďalšia polovica škrobu sa suspenduje v 40 mililitroch vody a táto suspenzia sa pridá do vriaceho roztoku polyetylénglykolu v 100 mililitroch vody. Výsledná pasta sa pridá k práškovým zložkám a zmes sa granuluje, ak je to nutné za prídavku vody. Granulát sa suší cez noc pri teplote 35 °C, pretlačí sa sitom s rozmermi ôk 1,2 milimetra a zlisuje sa za vzniku tabliet približne s priemerom 6 milimetrov, ktoré sú z oboch strán konkávne.

Príklad 9

Tablety obsahujúce každá 100 miligramov účinnej zložky môžu byť pripravené nasledujúcim spôsobom:

Zložky (na 1000 tabliet) účinná zložka 100,0 gramov laktóza 100,0 gramov pšeničný škrob 47,0 gramov stearát horečnatý 3,0 gramov

Všetky pevné zložky sa najprv pretlačia sitom s rozmermi ôk 0,6 milimetra. Potom sa zmieša účinná zložka, laktóza, stearát horečnatý a polovica škrobu. Druhá polovica škrobu sa suspenduje v 40 mililitroch vody a táto suspenzia sa pridá do 100 mililitrov vriacej vody. Výsledná pasta sa pridá k práškovým zložkám a zmes sa granuluje, ak je to nutné za prídavku vody. Granulát sa suší cez noc pri teplote 35 °C, pretlačí sa sitom s rozmermi ok 1,2 milimetra a zlisuje pri vzniku tabliet s priemerom približne 6 milimetrov, ktoré sú z obidvoch strán konkávne.

Príklad 10

Tablety, obsahujúce každá 75 miligramov účinnej zložky, môžu byť pripravené nasledujúcim spôsobom :

Zložky na (1000 tabliet)

účinná zložka	75,0 gramov
manitol	230,0 gramov
laktóza	150,0 gramov
mastenec	21,0 gramov
glycín	12,5 gramov
kyselina stearová	10,0 gramov
sacharín	1,5 gramov
5 % roztok želatíny	zvyšok

Všetky pevné zložky sa najprv pretlačia sitom s rozmermi ôk 0,25 milimetra. Manitol a laktóza sa zmiešajú, granulujú za prídavku roztoku želatíny, pretlačia sitom s rozmermi ôk 2 milimetre, sušia sa pri teplote 50 °C a opäť sa pretlačia sitom s rozmermi ôk 1,7 milimetra. Účinná zložka, glycín a sacharín sa starostlivo premiešajú, pridá sa manitol, laktózový granulát, kyselina stearová a mastenec a všetko sa starostlivo premieša a zlisuje za vzniku tabliet s približným priemerom 10 milimetrov, ktoré sú z oboch strán konkávne a majú zárez na rozlomenie na homej strane.

Príklad 11

Tablety, obsahujúce každá 10 miligramov účinnej zložky, môžu byť pripravené nasledujúcim spôsobom :

Zložky (na 1000 tabliet) účinná zložka laktóza kukuričný škrob polyetylénglykol 6000 mastenec stearát horečnatý demineralizovaná voda

10,0 gramov

328.5 gramov

17.5 gramov 5,0 gramov 25,0 gramov 4,0 gramu zvyšok

Pevné zložky sa najprv pretlačia sitom s veľkosťou ôk 0,6 milimetra. Potom sa homogénne premieša účinná zlož ka laktóza, mastenec, stearát horečnatý a polovica škrobu. Druhá polovica škrobu sa suspenduje v 65 mililitroch vody a táto suspenzia sa pridá do vriaceho roztoku polyetyléngylkolu v 260 mililitroch vody. Výsledná pasta sa pridá k práškovým zložkám a celá zmes sa premieša a granuluje, ak je to nutné za prídavku vody. Granulát sa suší cez noc pri teplote 35 °C, pretlačí sa sitom s veľkosťou ôk 1,2 milimetra a zlisuje sa za vzniku tabliet s priemerom približne 10 milimetrov, ktoré sú z oboch strán konkávne a majú zárez na rozlomenie na homej strane.

Príklad 12

Želatínové kapsuly so suchou náplňou, obsahujúce každá 100 miligramov účinnej zložky, môžu byť pripravené nasledujúcim spôsobom:

Zloženie (na 1000 kapsúl) účinná zložka mikrokryštalická celulóza laurylsulfát sodný stearát horečnatý

100,0 gramov

30,0 gramov 2,0 gramov 8,0 gramov

Laurylsulfát sodný sa preoseje do účinnej zložky cez sito s veľkosťou ôk 0,2 milimetra a tieto dve zložky sa intenzívne miešajú 10 minút. Potom sa cez sito s veľkosťou ôk 0,9 milimetra pridá mikrokryštalická celulóza a celok sa opäť mieša počas 10 minút. Nakoniec sa pridá stearát horečnatý cez sito s veľkosťou ôk 0,8 milimetra a po ďalších 3 minútach miešania sa zmes zavedie po častiach predstavujúcich 140 miligramov (každý podiel) do želatínových kapsúl so suchou náplňou s veľkosťou 0 (pretiahnutá).

Príklad 13

Roztok pre injekcie alebo infúzny roztok s koncentráciou 0,2 % môže byť pripravený nasledujúcim spôsobom:

5,0 gramov

22,5 gramov 300,0 gramov do 2500,0 mililitrov účinná zložka chlorid sodný fosfátový pufer pH 7,4 demineralizovaná voda

Účinná zložka sa rozpustí v 1000 mililitroch vody a sfiltruje sa cez mikrofilter alebo sa suspenduje v 1000 mililitroch vody. Pridá sa roztok pufra a objem celej zmesi sa upraví vodou na 2500 mililitrov. Na prípravu dávkových jednotkových foriem sa každý podiel s objemom 1,0 mililitra alebo 2,5 mililitra zavedie do sklenených ampuliek (každá obsahuje 2,0 miligramu alebo 5,0 miligramu účinnej zložky).

Claims

1. Nitrilová zlúčenina všeobecného vzorca (I): v ktorom

O

II

Y znamená skupinu -ON alebo -C(CH_z)_mCH₃,, mje O až 3,

SK 284144 Β6

R⁵ znamená:

(i) o-fenylénovú skupinu, nesubstituovaná alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi, pričom každý z nich je nezávisle vybratý zo súboru zahrnujúceho nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluórmetylovú skupinu, karbetoxyskupinu, karbometoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylová skupinu, karbamoylovú skupinu, karbamoylovú skupinu substituovanú alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovú skupinu, aminovú skupinu substituovanú alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alebo atóm halogénu, (ii) dvojväzbový zvyšok pyridínovej skupiny, pyrolidínovej skupiny, imidazolovej skupiny, naftalénovej skupiny alebo tiofénovej skupiny, pričom uvedené dve väzby sú na susedných uhlíkových atómoch v kruhu, (iii) dvojväzbovú cykloalkylovú skupinu obsahujúcu 4 až 10 atómov uhlíka, nesubstituovaná alebo substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi, pričom každý z týchto substituentov je navzájom od ostatných nezávisle vybraný zo súboru zahrnujúceho nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluórmetylovú skupinu, karboetoxyskupinu, karbometoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylová skupinu, karbamoylovú skupinu, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovú skupinu, substituovanú aminovú skupinu, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 10 atómov uhlíka, alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 10 atómov uhlíka, fenylovú skupinu alebo atóm halogénu, (iv) disubstituovanú vinylenovú skupinu substituovanú nitroskupinou, kyanoskupinou, trifluórmetylovou skupinou, karboetoxyskupinou, karbometoxyskupinou, karbopropoxyskupinou, acetylovou skupinou, karbamoylovou skupinou, karbamoylovou skupinou substituovanou alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, acetoxyskupinou, karboxyskupinou, hydroxyskupinou, aminovou skupinou, aminovou skupinou substituovanou alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxyskupinou obsahujúcou 1 až 4 atómy uhlíka, alebo atómom halogénu, (v) etylénová skupinu, nesubstituovaná alebo substituovanú jedným až dvomi substituentmi, pričom každý z týchto substituentov je nezávisle od ostatných vybraný zo súboru zahrnujúceho nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluórmetylovú skupinu, karboetoxyskupinu, karbometoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylová skupinu, karbamoylovú skupinu, karbamoylovú skupinu substituovanú alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovú skupinu, aminovú skupinu substituovanú alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 3 atómy uhlíka, alkylovú skupinou obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alebo atóm halogénu,

R⁶ znamená skupinu -CO-, -CH₂-, CH₂CO- alebo -SO₂',

R⁷ znamená:

(i) alkylovú skupinu s priamym alebo rozvetveným reťazcom obsahujúcim 1 až 12 atómov uhlíka, (ii) cyklickú alebo bicyklickú alkylovú skupinu obsahujúcu 4 až 12 atómov uhlíka, (iii) pyridylovú skupinu, (iv) fenylovú skupinu substituovanú jedným alebo viacerými substituentmi, pričom každý z týchto substituentov jc nezávisle od ostatných vybraný zo súboru zahrnujúceho nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluórmetylovú skupinu, karboetoxyskupinu, karbometoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylovú skupinu, karbamoylovú skupinu, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovú skupinu, alkylovú skupinu s priamym reťazcom, rozvetveným reťazcom, cyklickým reťazcom alebo bicyklickým reťazcom obsahujúcim 1 až 10 atómov uhlíka, alkoxyskupinu s priamym reťazcom, rozvetveným reťazcom, cyklickým reťazcom alebo bicyklickým reťazcom obsahujúcim 1 až 10 atómov uhlíka, skupinu CH²R, v ktorej R znamená cyklickú, alebo bicyklickú alkylovú skupinu, obsahujúcu 1 až 10 atómov uhlíka, alebo atóm halogénu, (v) benzylovú skupinu substituovanú jedným až tromi substituentmi, pričom každý z týchto substituentov je nezávisle od ostatných vybraný zo súboru zahrnujúceho nitroskupinu, kyanoskupinu, trifluórmetylovú skupinu, karboetoxyskupinu, karbometoxyskupinu, karbopropoxyskupinu, acetylová skupinu, karbamoylovú skupinu, acetoxyskupinu, karboxyskupinu, hydroxyskupinu, aminovú skupinu, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxyskupinu obsahujúcu 1 až 10 atómov uhlíka, alebo atóm halogénu, (vi) naftylovú skupinu, alebo (vii) benzyloxyskupinu, a n má hodnotu 0, 1,2 alebo 3.

2. Nitrilová zlúčenina podľa nároku 1 na použitie ako liečivo na znižovanie hladiny TNFa pri cicavcoch.

3. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa t ý m , že obsahuje podiel zlúčeniny podľa nároku 1 účinný pri jednotlivej dávke alebo viacnásobnej dávke na inhibovanie TNFa.

4. Nitrilová zlúčenina podľa nároku 1 na použitie ako liečivo na inhibovanie fosfodiesterázy pri cicavcoch.

5. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa t ý m , že obsahuje podiel zlúčeniny podľa nároku 1 účinný pri jednotlivej dávke alebo viacnásobnej dávke na inhibovanie fosfodiesterázy.