CZ291545B6 - Léčivo obsahující aminopurinová antivirová činidla pro léčení a profylaxi latentních virových infekcí Herpes - Google Patents

Abstract

Popisuje se pou it aminopurinov ho antivirov ho inidla vzorce A nebo jeho bioprekurzoru nebo farmaceuticky p°ijateln soli, fosf testeru a/nebo acylovan ho deriv tu pro l en a profylaxi latentn ch infekc zp soben²ch herpes virem.\

Description

Vynález se týká použití aminopurinových látek pro léčení latentních infekcí způsobených viry typu Herpes. V textu předmětného vynálezu se termínem „léčení“ míní případně rovněž profylaxe.

Dosavadní stav techniky

V evropském patentu č. EP-A-141 927 (Beecham Group p.l.c.) se popisuje penciclovir, což je sloučenina strukturního vzorce A:

(A) a soli této sloučeniny, fosfátové estery a acylové deriváty odvozené od této sloučeniny, přičemž tato sloučenina představuje protivirové činidlo. Hydrát sodné soli tohoto pencicloviru je uváděn v evropském patentu č. EP-A-216 459 (Beecham Group p.l.c.). Penciclovir a jeho protivirová účinnost je rovněž uváděna v publikaci: Abstracts of 14th Int. Congress of Microbiology, Manchester, England 7/13 September 1986 (Boyd a kol.), viz Abstract P. Vl 1-5, str.193.

Perorálně účinnými bioprekurzory sloučeniny uvedeného strukturního vzorce A jsou sloučeniny obecného vzorce B :

HO—CH₂—CH—CH₂—OH (B) a soli a deriváty této sloučeniny definované v rámci strukturního vzorce A, ve kterém :

X znamená alkoxyskupinu obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, skupinu NH₂ nebo atom vodíku.

Sloučeniny obecného vzorce B, ve kterém X znamená alkoxyskupinu obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo skupinu NH₂ a které jsou uváděny v evropském patentu EP-A-141 927 a sloučeniny obecného vzorce B, ve kterém X znamená atom vodíku a které jsou uváděny v evropském patentu EP-A-182 024 (Beecham Group p.l.c.), představují výhodné prekurzory léčiva. Jako zejména výhodný příklad sloučenin výše uvedeného obecného vzorce B je možno uvést sloučeniny, ve kterých X znamená atom vodíku a ve kterých dvě OH-skupiny mají formu acetylového derivátu, přičemž tyto sloučeniny jsou uváděny v příkladu 2 evropského patentu EP-A-182 024, označované v textu tohoto vynálezu jako famciclovir.

Sloučeniny strukturního vzorce (A) a (B) a soli a deriváty těchto sloučenin jsou popisovány jako vhodné látky pro léčení infekcí způsobených viry Herpes, jako je například herpes simplex typ 1 a herpes simplex typ 2.

V publikacích podle dosavadního stavu techniky bylo prokázáno, že protivirové léčení je prodlouženo o déle než několik hodin po infekci po výskytu latentního stavu. Po navození stavu latentní infekce může tato infekce recidivovat.

Podstata vynálezu

Podle předmětného vynálezu bylo zjištěno v případě myší, že léčení pomocí famcicloviru může zabránit vytvoření stavu kompetentní latence, jestliže léčení zahájeno 18 hodin (první experiment) až 4 dny (druhý experiment) po infekci. Podle předmětného vynálezu bylo rovněž zjištěno, že latentnímu stavu je možno rovněž zabránit při experimentu, při kterém byly testovány imunologicky ohrožené myši. Potencionální klinickou výhodou je to, že pacient v průběhu čtyřdenního kontaktu může být léčen famciclovirem k zabránění nejenom akutní infekce, ale rovněž i k zabránění vývoje latence a tím předejít recidivě. Kromě toho se předpokládá, že může dojít k mírné přirozené ztrátě latentně infikovaných buněk a opakované infekce mohou být potřebné k udržení zátěže latentně infikovaných buněk vytvořením latentního stavu v nových buňkách. Z tohoto důvodu supresivní léčení famciclovirem během delší časové periody (až několik let) může zabránit tomu, aby se nové buňky staly latentně infikovanými. Výsledkem je potom léčivý účinek, po kterém se u pacienta již nevyskytuje recidiva.

Vzhledem kvýše uvedenému se předmětný vynález týká způsobu léčení latentní infekce způsobené viry herpes u lidí, jehož podstata spočívá v tom, že se lidskému jedinci, potřebujícímu toto léčení, podává účinné množství sloučeniny strukturního vzorce A:

(A) nebo bioprekurzoru nebo farmaceuticky přijatelné soli, fosfátového esteru a/nebo acylového derivátu libovolné výše uvedené formy této sloučeniny.

Výše uvedeným termínem „acylový derivát“, který je použit v popisu předmětného vynálezu, se míní libovolný derivát sloučeniny strukturního vzorce A, ve které je přítomna jedna nebo více

-2CZ 291545 B6 acylových skupin. Tyto deriváty patří mezi bioprekurzory sloučenin strukturního vzorce A, navíc k derivátům, které jsou biologicky aktivní per se.

Výše uvedená sloučenina strukturního vzorce A se může vyskytovat v některé z forem uvedených v evropském patentu EP-A-216 459 (Beecham Group p.l.c.).

Jako příklad bioprekurzorů, farmaceuticky přijatelných solí a derivátů je možno uvést látky, které jsou uvedeny ve výše citovaných evropských patentech, které jsou zde uváděny jako odkazové materiály.

Zejména zajímavou sloučeninou výše uvedeného obecného vzorce B je 9-(4-acetocy-3-acetoxymethylbut-l-yl)-2-aminopurin, který je znám pod označením famciclovir (FCV), což je velmi dobře absorbovatelná forma pencicloviru (PCV).

Výše uvedené sloučeniny strukturního vzorce A, bioprekurzory, soli a deriváty těchto látek je možno připravit stejnými způsoby, které jsou uvedeny ve výše citovaných evropských patentech.

Tyto uvedené sloučeniny, zejména penciclovir, je možno podávat perorálním způsobem lidem, přičemž tyto látky je možno smíchávat s dalšími látkami do formy sirupu, tablet nebo kapslí. Při přípravě tablet obsahujících tyto sloučeniny může být použito libovolné farmaceuticky přijatelné nosičové látky, která je vhodná pro formulování těchto pevných prostředků, jako je například stearát hořečnatý, škrob, laktóza, glukóza, rýže, mouka a křída. Tyto sloučeniny mohou být rovněž ve formě poživatelných kapslí obsahujících tyto sloučeniny, jako například želatinových kapslí, nebo ve formě sirupu, roztoku nebo suspenze. Mezi vhodné kapalné farmaceuticky přijatelné nosičové látky patří ethylalkohol, glycerol, solný roztok a voda, do kterých je možno přidávat aromatizační a barvicí činidla, čímž se získá forma sirupu. Rovněž se doporučují formulace s pomalým uvolňováním, jako jsou například tablety obsahující enterosolventní povlak.

Pro parenterální podávání se připravují jednotkové kapalné dávkové formy, které obsahují danou sloučeninu a sterilní vehikulum. Použitá sloučenina může být v závislosti na použitém vehikulu a na koncentraci ve formě buďto suspendované nebo rozpuštěné. Parenterální roztoky se běžně připraví rozpuštěním sloučeniny ve vehikulu, načež se sterilizují na filtru a poté se plní do vhodných nádob nebo ampulek, načež se utěsní. Ve výhodném provedení se ve vehikulu rovněž rozpustí různé pomocné látky, jako jsou například lokální anestetika, konzervační přísady a tlumicí činidla. Ke zvýšení stability je možno tuto kompozici po naplnění do nádobek zmrazit a vodu odstranit za použití vakua.

Parenterální suspenze se připraví v podstatě stejným způsobem, pouze s tím rozdílem, že se uvažovaná sloučenina suspenduje ve vehikulu místo aby byla rozpuštěna a potom se sterilizuje vystavením působení ethylenoxidu před suspendováním ve sterilním vehikulu. Ve výhodném provedení se do této kompozice přidává povrchově aktivní činidlo nebo smáčedlo, čímž se usnadní stejnoměrné rozložení sloučeniny podle vynálezu.

Ve výhodném provedení podle vynálezu parenterální formulace představují vodné formulace obsahující sterilní vodu nebo normální slaný roztok o hodnotě pH v okolí 7,4 nebo o hodnotě pH vyšší, a zejména obsahují hydrát sodné soli pencicloviru.

Běžným a zavedeným pravidlem je to, že tyto prostředky jsou obvykle opatřeny psanými nebo tištěnými instrukcemi s návodem na přesné medicínské použití.

Vhodná dávková forma může obsahovat 50 miligramů až 1 gram účinné látky, jako například 100 miligramů až 500 miligramů účinné složky. Tyto dávky mohou být podávány jedenkrát až čtyřikrát denně nebo obvykleji dvakrát až třikrát denně. Účinná dávka použité sloučeniny se obvykle pohybuje v rozmezí od 0,2 miligramy do 40 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti za

-3 CZ 291545 B6 den, a obvykleji v rozmezí od 10 miligramů do 20 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti za den. V případě famcicloviru je dávková jednotka 125 miligramů, 250 miligramů, 500 miligramů nebo 750 miligramů, ve výhodném provedení 125 miligramů nebo 250 miligramů.

K zabránění výskytu kompetentní latence se ve výhodném provedení léčení provádí co možná nejdříve po kontaktu s virem, ve výhodném provedení v intervalu 18 hodin, i když je přijatelný časový interval do čtyř dnů. Léčebná perioda se obvykle pohybuje od 3 do 14 dnů, obvykleji od 5 do 10 dnů, nejčastěji asi 7 dnů.

V případě léčení opakující se nemoci je léčebná perioda až 5 let, jako například až 1 rok, dva roky, 3 roky, 4 roky a 5 let.

Předmětný vynález se rovněž týká použití sloučeniny výše uvedeného strukturního vzorce A nebo bioprekurzoru této sloučeniny nebo farmaceuticky přijatelné soli, fosfátového esteru a/nebo acylového derivátu libovolné z výše uvedených forem, pro přípravu léčiva vhodného pro použití při léčení latentní infekce způsobené viry typu herpes. Toto léčení může být prováděno způsobem, který byl popsán ve shora uvedeném textu.

Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží farmaceutický prostředek, používaný pro léčení latentní infekce virů typu herpes, který obsahuje účinné množství sloučeniny výše uvedeného strukturního vzorce A nebo bioprekurzoru této sloučeniny, nebo farmaceuticky přijatelné soli, fosfátového esteru a/nebo acylového derivátu libovolné z výše uvedených forem, a farmaceuticky přijatelnou nosičovou látku. Tyto prostředky je možno připravit metodami, které jsou popsány v dalším popisu.

Sloučenina strukturního vzorce A a její léčivé prekurzory vykazují synergický protivirový účinek v kombinaci s interferony, takže vzhledem k výše uvedenému do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží léčení za použití kombinace produktů obsahujících tyto dvě uvedené složky, které se podávají současně nebo postupně stejnými nebo rozdílnými metodami. Tyto produkty jsou popisovány v evropském patentu EP-A-271 270 (Beecham Group p.l.c.).

Příklady provedení vynálezu

Použití aminopurinových antivirových činidel pro léčení a profylaxi latentních virových infekcí herpes a testy použité pro zjištění této účinnosti budou blíže popsány v následující části, která nijak rozsah předmětného vynálezu neomezuje.

Pokusy na myších infikovaných virem HSV-1

Při provádění těchto testů byla u myši navozena kutánní infekce inokulováním ušních boltců virem HSV-1 (SCI6), přičemž byl pozorován účinek perorálně podaného famcicloviru na latentní virovou infekci.

K testování byly použity samičky myší BALB/c (Bantin and Kingman, Kingston, Hulí, Velká Británie) o stáří 3 až 4 týdny, které byly po jednom týdnu inokulovány. Virové suspenze (10 μΐ) obsahující 5 χ 10⁴ p.f.u. byly inokulovány do kůže levého ušního boltce. Tloušťka kůže byla u jednotlivých myší měřena denně za pomoci přístroje Engineers micrometre screw gauge (vizNash a kol., 1980, J. Gen. Virol. 48, 351-357). Tyto myši byly potom uchovávány po dobu 3 měsíců (experiment 1) nebo čtyř měsíců (experiment 2) a potom byly obětovány. Potom byl odstraněn trojitý ganglion a ganglion cervikálního dorzálního kořene a tyto byly společně kultivovány. Kultury, které vykazovaly replikaci viru byly zaznamenány jako pozitivní.

-4CZ 291545 B6

Experiment 1

Při prvním prováděném experimentu byly myši ošetřovány 18 hodin a léčení bylo zakončeno 10 dní po infekci.

Ze 24 neošetřených kontrolních myší vykázalo 12 latentní infekci ve trojitém ganglionu (TG) a 20 vykázalo latentní infekci ganglionu cervikálního dorzálního kořene (DRG). Všechny kontrolní myši v počtu 24 kusů vykazovaly buďto TG nebo DRG latenci. Žádná z myší ošetřených FCV nevykazovala žádnou latenci.

Experiment 2

Při druhém prováděném experimentu bylo antivirové léčení zahájeno první, druhý, třetí, čtvrtý nebo pátý den po infekci (p.i.) a toto léčení bylo zakončeno 10 dní po infekci (p.i.). sloučeniny byly podávány ad libitum v pitné vodě v množství 1 miligram/mililitr (přibližně 100 miligramů/kilogram/den).

Získané výsledky jsou uvedeny v následující tabulce. (Poznámka: skupiny 1 a 2 měly stejný léčebný režim, ale výsledky byly zjišťovány odděleně).

Tabulka

Antivirová terapie (dny)	Latence (skupina 1) TG +ve/8	DRG +ve/8	Latence (skupina 2) TG +ve/8	DRG +ve/8
Lt	Rt	Lt	Rt	Lt	Rt	Lt	Rt
žádná	8	4	8	5	8	6	8	2
5 až 10	4	0	4	0	2	0	2	0
4 až 10	2	0	2	0	0	0	0	0
3 až 10	0	0	0	0	0	0	0	0
2 až 10	0	0	0	0	0	0	0	0
1 až 10	0	0	0	0	0	0	0	0

Tabulka (pokračování)

Antivirová terapie (dny)	Latence celkem, % myší s ganglionem vir +ve, 120 den (n= 16) L/RTG + DRG	Akutní stav celkem, % myší s ganglionem vir +ve, 8 den (n = 8) L/RTG + DRG
žádná	100	100
5 až 10	38	100
4 až 10	13	100
3 až 10	0	0
2 až 10	0	0
1 až 10	0	0

Po čtyřech měsících bylo možno latentní virus reaktivovat v explantátech ganglionu (ipsilaterální a kontralaterální trojitý a dorzální kořen) u všech 16 kontrolních myší. Latentní virus ale nabylo možno reaktivovat v ganglionech FCV-léčených myší, s výjimkou ipsilaterálního ganglionu, a

-5CZ 291545 B6 pouze v případě, kdy se zahájení terapeutického léčení zpozdilo na 4. den p.i. (2/16) nebo 5. den

p.i. (6/16).

Podobné výsledky byly získány v případě, kdy byly sloučeniny podávány dvakrát denně žaludeční sondou o dávce 50 miligramů/kilogram/dávku.

Experiment 3

Při provádění tohoto experimentu byla u myší navozena imunosuprese pomocí cyklosporinu A (CyA) v intervalu dne -2 do dne +10 (den 0 je den infekce). Skupiny myší tvořily jedna neošetřená skupina (kontrolní skupina) a ošetřená skupiny famciclovirem podávaným perorálně o dávce 50 miligramů/kilogram dvakrát denně 22 hodin po infekci až 5,5 dne nebo 10,5 dne. Gangliony byly potom prozkoumány na reaktivaci infekčního viru po 1 měsíci nebo po 4 měsících, přičemž získané výsledky jsou uvedeny v následující tabulce.

	LTG (n = 6)	RTG (n = 6)	LDR (n = 6)	RDR (n = 6)
Kontrolní	6	4	6	3
FCV	0	0	0	0

Pokusy na myších infikovaných virem HSV-2

Při provádění těchto testů byla u myší navozena kutánní infekce inokulováním ušních boltců virem HSV-2 (Bry), přičemž byl pozorován účinek perorálně podaného famcicloviru na latentní virovou infekci. Ošetřování bylo prováděno za použití dávky 50 miligramů/kilogram dvakrát denně po dobu 5 dní 22 hodin po infekci.

V následující tabulce je uveden počet myší ve skupinách s pozitivní latentní infekcí v trojitém ganglionu nebo v ganglionu cervikálního dorzálního kořene.

skupina	Počet myší s +ve ganglionem/ počet testovaných myší	% myší s přinejmenším jedním +ve ganglionem
Levý Pravý T/G T/G	Levý CDR	Pravý CDR
Kontrolní	10/10 10/10	10/10	6/10	100
famciclovir	0/10 0/10	0/10	0/10	0

Příloha 1

Seznam použitých zkratek:

+ve	pozitivní
CyA	Cyklosporin A
FCV	famciclovir
PCV	penciclovir
DRG	ganglion dorzální dráhy
TG nebo T/G	ganglion trigeminu
RTG	pravý ganglion trigeminu
LTG	levý ganglion trigeminu

Claims (5)

1. Použití sloučeniny aminopurinu vzorce A: (A) nebo jejího bioprekurzoru nebo farmaceuticky přijatelné soli, fosfátesteru a/nebo acylového derivátu kterékoli výše uvedené formy, při výrobě léčiva pro potlačení vzniku nebo reaktivace latentní infekce viry herpes u člověka, určeného pro podávání nejméně 18 hodin po infekci.

2. Použití podle nároku 1, kde léčivo je určeno pro léčení latentní infekce herpes simplex typu 1.

3. Použití podle nároku 1, kde léčivo je určeno pro léčení latentní infekce herpes simplex typu 2.

4. Použití podle kteréhokoli z nároků 1, 2 nebo 3, kde sloučeninou je famciclovir.

5. Použití podle nároku 4, kdy jednotková dávka léčiva obsahuje 50 mg až 1 g famcicloviru.