CZ288038B6 - Způsob přípravy pyridinového derivátu a meziprodukt pro tento způsob - Google Patents
Způsob přípravy pyridinového derivátu a meziprodukt pro tento způsob Download PDFInfo
- Publication number
- CZ288038B6 CZ288038B6 CZ1993106A CZ10693A CZ288038B6 CZ 288038 B6 CZ288038 B6 CZ 288038B6 CZ 1993106 A CZ1993106 A CZ 1993106A CZ 10693 A CZ10693 A CZ 10693A CZ 288038 B6 CZ288038 B6 CZ 288038B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- group
- formula
- compound
- tert
- hydrogen
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D495/04—Ortho-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
- C07D213/63—One oxygen atom
- C07D213/65—One oxygen atom attached in position 3 or 5
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Paper (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Soft Magnetic Materials (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
Řešení se týká způsobu přípravy pyridinového derivátu obecného vzorce I, ve kterém mají obecné symboly specifické významy. Je popsán i meziprodukt pro tento způsob obecného vzorce II. Tento pyridinový derivát může být použit jako referenční látka pro kvantitativní stanovení koncentrace celkových nebo volných pyridinolinových nebo deoxypyridinolinových křížově vazebných faktorů odvozených od degradace kolagenu v biologické tekutině nebo jako antigen pro přípravu protilátek.ŕ
Description
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu přípravy pyridinového derivátu obecného vzorce I, ve kterém mají obecné symboly specifické významy. Je popsán i meziprodukt pro tento způsob obecného vzorce II. Tento pyridinový derivát může být použit jako referenční látka pro kvantitativní stanovení koncentrace celkových nebo volných pyridinolinových nebo deoxypyridinolinových křížově vazebných faktorů odvozených od degradace kolagenu v biologické tekutině nebo jako antigen pro přípravu protilátek.
Dosavadní stav techniky
Sloučeniny obecného vzorce IA
(IA), ve kterém
Xi znamená atom vodíku nebo hydroxy-skupinu a
X2a® znamená chloridový nebo acetátový iont, byla extrahována z moči buď hydrolýzou 6M kyselinou chlorovodíkovou prováděnou při teplotě asi 108 °C po dobu přibližně 24 hodin (viz Eyre a kol., Ann. Rew. Biochem., 1984, 53, 717-748) nebo chromatograficky za použití elučního činidla tvořeného kyselinou octovou (viz. D. R. Eyre a kol., Anal. Biochem. 137, 380-388 (1984)). Uvedené sloučeniny obecného vzorce IA byly popsány jako ukazatel degradace kolagenu při metabolických kostních a chrupavčitých onemocněních na bázi stanovení jejich koncentrace ve vylučované moči po určitou fixní časovou periodu (viz Eyre, Biochemistry, 1984, 23, 1850; Robins a kol., Analytical Biochem., 1988, 169, 197— 203; D. Uebelhart a kol., Bone and Minerál, 1990, 8, 87-96).
V současné době vzrůstá zájem o tyto sloučeniny (označované v literatuře jako pyridinolinové (Xi = OH) a deoxypyridinolinové (Xi = H) křížově vazebné faktory (crosslink)) použitelné jako detektory abnormalit metabolismu pojivových tkání, například pro měření kostní resorpce u lidí.
-1 CZ 288038 B6
Avšak sloučeniny obecného vzorce IA jsou až dosud přírodními sloučeninami získanými extrakcí z moči a jako takové nesplňují požadavky kladené na provádění standardizovaných, reprodukovatelných, spolehlivých a časově nenáročných testů.
Vzhledem k výše uvedenému je snaha získat dobře definované standardní pyridinolinové křížově vazebné faktory.
Je proto cílem vynálezu poskytnout nové pyridinové deriváty a vyvinout způsob jejich přípravy chemickou syntézou, zahrnující přípravu sloučenin obecného vzorce IA, ve v podstatě čisté formě a tím umožnit provádění měření kostních změn za dobře standardizovaných podmínek.
Podstata vynálezu
Vynález se týká způsobu přípravy pyridinového derivátu obecného vzorce I
I CHXj I Z-Rj ve kterém
X znamená skupinu -(CH2)n- kde n znamená celé číslo od 2do 8,
Y znamená skupinu -fCH2)m-, kde m je rovno n-1,
Z znamená skupinu -(CH2)P-, kde p znamená celé číslo od 1do 8,
R4 znamená skupinu OH,
Ri znamená atom vodíku, karboxylovou skupinu nebo její funkční derivát, primární, sekundární nebo terciární amino-skupinu nebo skupinu obecného vzorce a
Rs-CH-Rí(a),
I ve kterém
R5 znamená skupinu -NH2-, skupinu -NHYa nebo NHZa-Yb, kde Ya je ochranná skupina nebo skupina schopná kovalentní reakce santigenem nebo ochrannou skupinou, Za znamená distanční skupinu a Yb znamená ochrannou skupinu nebo antigenovou skupinu nebo biotinylovou skupinu,
Ré znamená skupinu -COOH nebo její funkční derivát,
R2 znamená atom vodíku, karboxylovou skupinu nebo její funkční derivát, primární, sekundární nebo terciární amino-skupinu nebo skupinu obecného vzorce a definovanou výše,
R3 znamená karboxylovou skupinu nebo její funkční derivát, primární, sekundární nebo terciární amino-skupinu nebo skupinu obecného vzorce a definovanou výše,
Xi znamená atom vodíku nebo skupinu OH a
Χ2θ znamená aniont, s výhradou spočívající vtom, že délka řetězce alkylenového zbytku v -Y-je alespoň o jeden uhlíkový atom kratší než délka řetězce alkylenového zbytku v -X-, jehož podstata spočívá v tom, že se sloučenina obecného vzorce II
Y-Rj
ve kterém X, Y, Rb R2 a R4 mají výše uvedené významy, uvede v reakci se sloučeninou obecného vzorce III
X5-CH2-CHX,-Z-R3 ve kterém Xb Z a R3 mají výše uvedené významy a X5 znamená odlučitelnou skupinu, načež se takto získaná sloučenina izoluje ve volné formě nebo ve formě soli.
N-ochranné skupiny, jakými jsou Ya nebo Yb, zahrnují například skupiny popsané v „Protective Groups in Organic Synthesis“, T. W. Greene, J. Wiley and Sons (1981), 219-287; těmito skupinami jsou například acylová skupina, jakou je formylová skupina, acetylová skupina, trifluoracetylová skupina, methoxysukcinylová skupina, hydroxysukcinylová skupina nebo benzoylová skupina, případně substituovaná na fenylovém kruhu, například p-methoxykarbonylovou skupinou, p-methoxylovou skupinou, p-nitro-skupinou nebo p-fenylsulfonamidokarbonylovou skupinou, dále alkoxykarbonylová skupina, jakou je terc.butyloxykarbonylová skupina, izobutyloxykarbonylová skupina nebo methoxykarbonylová skupina, dále allyloxykarbonylová skupina, arylmethoxykarbonylová skupina, jakou je 9-fluorenylmethoxykarbonylová skupina nebo benzyloxykarbonylová skupina, případně substituovaná na fenylovém kruhu p-methoxylovou skupinou, p-nitro-skupinou, o- nebo p-chlor-skupinou, m-fenylovou skupinu nebo 3,4-dimethylovou skupinou, dále tritylová skupina, arylmethylová skupina, jakou je benzylová skupina, případně substituovaná na kruhu p-methoxylovou skupinou, p-nitroskupinou nebo p-chlor-skupinou, a konečně arylsulfonylová skupina, jakou je fenylsulfonylová skupina, případně substituovaná na kruhu p-methylovou skupinou nebo p-methoxylovou skupinou, nebo naftylsulfonylová skupina, případně substituovaná na kruhu například aminovou skupinou nebo dialkylaminovou skupinou, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy.
Příklady funkčních derivátů karboxylové kyseliny jsou halogenidy kyseliny, anhydridy kyseliny (včetně smíšených anhydridů kyselin), aktivované estery, aktivované amidy, atd. Z halogenidů kyseliny se nejčastěji používá chlorid kyseliny. Příklady anhydridů kyseliny zahrnují cyklické anhydridy a smíšené anhydridy, jakými jsou smíšené anhydridy kyseliny dialkylfosforečné, smíšené anhydridy kyseliny dialkylfosforité, atd. Příklady aktivovaných esterů, jakožto významů obecných substituentů Rb R2, R3 nebo Re, zahrnující alkylester, ve kterém alkylový zbytek obsahuje 1 až 8 uhlíkových atomů, například methylester nebo ethylester, kyanomethylester, p
-3CZ 288038 B6 nitrofenylester, ester s N-hydroxysukcinimidem, případně na kruhu substituovaný fenyl- nebo benzylester nebo fluorenylmethylester. Příklady aktivovaných amidů karboxylové kyseliny, jakožto významů obecných substituentů Rb R2, R3 nebo R^, zahrnují amidy s imidazolem, dimethylimidazolem nebo triazolem. Karboxylovými amidovými skupinami ve významech obecných substituentů mohou rovněž být například skupiny -COŇH2, -CONHRa nebo -CONRaRa', které byly definovány výše.
Příklady aniontu Χ2 Θ zahrnují anionty OH, Cl, Br', Γ, CH3COO' a CF3COO'.
Vhodné distanční skupiny ve významu obecného substituentu Za zahrnují například skupinu obecného vzorce b
-Rt-X3- (b), ve kterém
X3 znamená dvojmocnou skupinu odvozenou od funkčního zbytku schopného kovalentní reakce s ochrannou skupinou nebo antigenem a
R7 znamená alkylenovou skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy, případně přerušenou jedním nebo dvěma heteroatomy zvolenými z množiny zahrnující atom kyslíku, atom síry, skupinu CO, skupinu -NHCO-, skupinu-CO-ΝΗ-, -N-alkyl-CO-skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, -CO-N-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, skupinu -NH- a -N-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, dále hydroxy-substituovanou alkylenovou skupinu, ve které alkylenový zbytek obsahuje 1 až 6 uhlíkových atomů, alkenylenovou skupinu se 2 až 6 uhlíkovými atomy, skupinu -CHI
R« nebo skupinu obecného vzorce cti
ve kterém každý z obecných substituentů s a t nezávisle znamená 0, 1, 2 nebo 3, kruh A je případně substituován a R« znamená případně chráněný zbytek, který je připojen k alfauhlíku přirozené nebo nepřirozené alfa-aminokyseliny.
Vhodné skupiny schopné kovalentní reakce s antigenem nebo ochrannou skupinou ve významu obecného vzorce Ya zahrnují například skupinu obecného vzorce bi
-R7-X4 (b0, ve kterém
R7 má výše uvedený význam a
X, znamená funkční zbytek schopný reakce s antigenem nebo ochrannou skupinou.
-4CZ 288038 B6
Příklady významů obecného substituentu X4 zahrnují karboxylovou skupinu, aminovou skupinu nebo její funkční derivát schopný reakce s antigenem nebo ochrannou skupinou. Ve skupině obecného vzorce bj R7 výhodně znamená alkylenovou skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atomy nebo alkenylenovou skupinu se 2 až 6 uhlíkovými atomy.
Antigenovou skupinou se rozumí skupina odvozená od nosičové molekuly, jako je například používána při přípravě protilátek, například bovinní sérový albumin, ovalbumin, thyreoglobulin nebo hemocyanin z kuželnatky (kyehole limpet hemocyanin) nebo od imunostimulační lipoaminokyseliny nebo lipopeptidu, například takové sloučeniny, ve kterých je lipofilní zbytek tripalmitoylovým zbytkem, jak je to například uvedeno G. Jung-em a kol. v Int. J. Peptide Protein Res. 37, 1991, 46-57. Příklady lipopeptidů jsou N-palmitoyl-S-/2,3-bis(palmitoyloxy)(2RS)-propyl/-/R/-cystein (uváděný jako Pam3Cys-OH), Pam3Cys-Ser, Pam3Cys-Ser-(lys)4 a Pam3Cys-Ser-(Glu)4.
Reakce sloučeniny obecného vzorce II se sloučeninou obecného vzorce III v rámci způsobu podle vynálezu může být provedena v aprotickém rozpouštědle, výhodně při teplotě z teplotního rozmezí od okolní teploty do teploty nižší, než je teplota varu reakční směsi.
Sloučeniny obecného vzorce II, které jsou při způsobu podle vynálezu použity jako výchozí látky, jsou rovněž novými sloučeninami a jako takové tvoří rovněž součást vynálezu.
Sloučeniny obecného vzorce II mohou být připraveny způsobem, jehož podstata spočívá v tom, že se
i) odstraní alespoň jedna ochranná skupina z amino-skupiny nebo z karboxy-skupiny sloučeniny obecného vzorce II nebo se aduuje alespoň jedna ochranná skupina na amino-skupinu nebo karboxy-skupinu sloučeniny obecného vzorce II, případně prostřednictvím distanční skupiny, nebo se ii) cyklizuje sloučenina obecného vzorce IV
ve kterém X, Y, Ri a R2 mají výše definované významy a Z2 znamená odštěpitelnou skupinu, načež se takto získaná sloučenina obecného vzorce II, ve kterém Rt znamená skupinu OH, případně eterifikuje na sloučeninu obecného vzorce II, ve kterém Rt znamená alkoxylovou skupinu nebo polyalkylenoxy-skupinu, takto získaná sloučenina obecného vzorce II se izoluje ve volné formě nebo ve formě soli.
Uvedený stupeň i) může být proveden o sobě známým postupem.
Uvedený stupeň ii) může být vhodně proveden v inertním rozpouštědle, výhodně při okolní teplotě. Uvedená cyklizace může být výhodně provedena v přítomnosti báze, jakou je například l,5-diazabicyklo/4.3.0/non-5-en (DBN) nebo l,8-diazabicyklo/5.4.0/undec-7-en (DBU).
-5CZ 288038 B6
Výhodně se při způsobu podle vynálezu použijí odpovídající výchozí látky obecných vzorců II a III pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém
X znamená skupinu -CH2-CH2-, Y znamená skupinu -CH2-, každý z R] a R2 znamená skupinu obecného vzorce a definovanou v nároku 1, ve které R5 znamená skupinu NH2 nebo skupinu NHY'a a R« znamená skupinu -COOH nebo alkoxykarbonylovou skupinu obsahující 2 až 7 uhlíkových atomů, X] znamená atom vodíku nebo skupinu OH, Z znamená skupinu -CH2-CH2a R3 znamená skupinu obecného vzorce a definovanou v nároku 1, ve které R5 znamená skupinu -NH2 nebo skupinu NHY'a a Ré znamená skupinu -CONH-Za-Zb, nebo sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém
X znamená skupinu -CH2-CH2-, Y znamená skupinu -CH2-, Z znamená skupinu -CH2-CH2-, každý zRi a R3 znamená skupinu obecného vzorce a definovanou v nároku 1, ve které R5 znamená skupinu -NH2 nebo skupinu NHY'a a R(, znamená skupinu -COOH nebo alkoxykarbonylovou skupinu obsahující 2 až 7 uhlíkových atomů, X] znamená atom vodíku nebo skupinu OH a R2 znamená skupinu obecného vzorce a definovanou v nároku 1, ve které R5 znamená skupinu -NH2 nebo skupinu NHY'a a R^ znamená skupinu -CONH-Za-Yb, přičemž Y'a znamená ochrannou skupinu amino-funkce, Yb znamená antigenovou skupinu a Za má význam definovaný v nároku 1.
Předmětem vynálezu je také pyridinový derivát obecného vzorce II
ve kterém X, Y, Rb R2 a R4 mají výše uvedené významy, pro použití jako meziprodukt pro provádění způsobu přípravy pyridinového derivátu obecného vzorce I podle vynálezu.
Bylo zjištěno, že lze použít sloučeninu vzorce I, ve které Yb, pokud je přítomen v R5 nebo R«, je odlišný od antigenové skupiny, jako referenční látku pro kvantitativní stanovení koncentrace celkových nebo volných pyridinolinových nebo deoxypyridinolinových křížově vazebných faktorů odvozených od degradace kolagenu v biologické tekutině.
Rovněž bylo zjištěno, že lze použít sloučeninu vzorce I, ve které alespoň jeden z Rb R2 a R3 znamená skupinu obecného vzorce a, ve které R5 znamená skupinu NHZa-Yb nebo R^ znamená skupinu -CONHZa-Yb, kde Yb znamená antigenovou skupinu, jako antigen pro přípravu protilátek.
Vynález bude v následující části popisu blíže objasněn pomocí konkrétních příkladů jeho provedení, které mají pouze ilustrační charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně definován formulací patentových nároků.
-6CZ 288038 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
3-Hydroxy-l-(5-terc.butoxykarbonylamino-5-terc.butoxykarbonylpentyl)-4-(l-terc.butoxykarbonylamino-I-terc.butoxykarbonyl-2-ethyl)-5-(3-terc.butoxykarbonylamino-3terc.butoxykarbonylpropyl)pyridiniumjodid
2,0 g 3-hydroxy-4-(l-terc.butoxykarbonylamino-l-terc.butoxykarbonyl-2-ethyl)-5-(3terc.butoxykarbonylamino-3-terc.butoxykarbonylpropyl)pyridinu a 1,9 g terc.butyl-6-jod-2terc.butoxykarbonylaminohexanoátu ve 25 ml dioxanu se zahřívá na teplotu 110°C po dobu jedné hodiny. Po odpaření se požadovaná sloučenina izoluje chromatograficky na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu, methanolu a amoniaku v objemovém poměru 95:5:0,5.
Hmotové spektrum (FAB): M+ 881.
Příklad 2
3-Hydroxy-l-(5-amino-5-karboxypentyl)-4-(l-amino-l-karboxy-2-ethyl)-5-(3-amino-3karboxypropyl)pyridíniumhydrochlorid
206 mg sloučeniny z příkladu 1 se míchá ve 20 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v objemovém poměru 95:5 po dobu 90 minut. Po přidání diethyletheru se vyloučí surová požadovaná sloučenina, která se potom odfiltruje. Tento produkt se rozpustí ve 2 ml methanolu a získaný roztok se okyselí na hodnotu pH 1 2N roztokem kyseliny chlorovodíkové v diethyletheru. Po odpaření se získaný zbytek přečistí preparativní vysoce účinnou kapalinovou chromatografii (HPLC).
Sloupec: Macherey/Nagel SA5/SCX 5 m 4,6 x 200 mm, eluční činidla: A: 0,02M LiCl,
B: 0,2M LiCl, gradient: A + 0 až 100 % B v průběhu 50 minut, detekce: UV 290 nm.
Frakce obsahující požadovanou sloučeninu se odsolí průchodem sloupcem Bio-Gel P2, 1,97 až 3,94 ok/mm (50-100 mesh), za použití elučního činidla tvořeného vodou. Po lyofilizaci se izoluje čistá požadovaná sloučenina.
Hmotové spektrum (FAB): M+ 413.
Příklad 3
Terc.butylester kyseliny 2-terc.butoxykarbonylamino-4-/3-hydroxy-4-(l-terc.butoxykarbonyll-amino-2-ethyl)-5-pyridinyl/butanové
212 mg 1,13-di-terc.butyl-7-terc.butoxykarbonylaza-2,12-di-terc.butoxykarbonylamino-5,9dioxotridekanodiátu se rozpustí v 10 ml tetrahydrofuranu a k získanému roztoku se přidá 0,26 ml l,8-diazabicyklo/5,4,0/undec-7-enu. Tento roztok se míchá po dobu 15 hodin při okolní teplotě,
-7CZ 288038 B6 načež se odpaří. Reakční směs se rozdělí chromatograficky na sloupci silikagelu, přičemž se jako eluční soustava použije směs methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 96:4.
Z odpovídající frakce eluátu se získá požadovaná sloučenina.
Hmotové spektrum (FAB): MH‘ 596.
Příklad 4
1,13-Di-terc.butyl-7-terc.butoxykarbonylaza-2,12-di-terc.butoxykarbonylamino-5,9dioxotridekanodiát, kteiý byl v příkladu 3 použit jako výchozí látka, může být připraven následujícím způsobem.
a) Terc.butyl-2-terc.butoxykarbonylamino-5,6-epoxyhexanoát
Ke 13,8 g terc.butyl-2-terc.butoxykarbonylamino-5-hexenoátu rozpuštěného ve 400 ml methylenchloridu se přidá 13,1 g kyseliny m-chlorperoxybenzoové (90%). Po 18 hodinovém míchání při okolní teplotě se k reakční směsi přidá směs ledu a nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodná fáze se dvakrát extrahuje methylenchloridem. Organické roztoky se sloučí, vysuší a odpaří. Po chromatografii na silikagelu za použití eluční soustavy, tvořené směsí ethylacetátu a hexanu v objemovém poměru 1:2,5 se získá požadovaná sloučenina 4a.
Hmotové spektrum (FAB): MfF 286.
b) l,13-Di-terc.butyl-7-N-benzylaza-5,9-dihydroxy-2,12-di-terc.butoxykarbonylaminotridekanodiát
Směs 1 g sloučeniny 4a a 0,18 ml benzylaminu se zahřívá na teplotu 70 °C po dobu 18 hodin. Reakční směs se potom rozdělí chromatograficky na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí acetonu a hexanu v objemovém poměru 1:2. Z příslušné frakce eluátu se potom získá požadovaná sloučenina 4b.
Hmotové spektrum (FAB): MH+ 710.
c) 1,13-Di-terc .butyl-7-aza-5,9-dihydroxy-2,12-di-terc .butoxykarbonylaminotridekanodiát
9,48 g sloučeniny 4b se rozpustí ve 350 ml ethanolu a získaný roztok se hydrogenuje v přítomnosti hydrogenačního katalyzátoru (1,4 g) tvořeného 10% palladiem na uhlí při okolní teplotě a za normálního tlaku. Hydrogenační směs se potom zfiltruje a filtrát se odpaří. Požadovaná sloučenina 4c se přečistí chromatograficky na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 9:1.
Hmotové spektrum (FAB): MH' 620.
d) 1,13-Di-terc.butyl-7-terc.butoxykarbonylaza-5,9-dihydroxy-2,12-di-terc.butoxykarbonylaminotridekanodiát
K 7,7 g sloučeniny 4c rozpuštěné ve 310 ml tetrahydrofuranu se rychle přidá 4,1 g di-terc.butyldikarbonátu. Rezultující roztok se míchá po dobu 3 hodin při okolní teplotě. Po odpaření se požadovaná sloučenina 4d přečistí chromatograficky na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 6:4.
Hmotové spektrum (FAB): MH+ 720.
-8CZ 288038 B6
e) l,13-Di-terc.butyl-7-terc.butoxykarbonylaza-2,12-di-terc.butoxykarbonylamino-5,9-dioxotridekanodiát
K roztoku 140 ml methylenchloridu a 2,4 ml oxalylchloridu se při teplotě -70 °C po kapkách přidá roztok 4,0 ml dimethylsulfoxidu ve 42 ml methylenchloridu. Po 15 minutách se k tomuto roztoku pomalu při teplotě -70 °C přidá směs 8,0 g sloučeniny 4d v 80 ml methylenchloridu. Po 3 hodinách míchání při teplotě -70 °C se při teplotě -50 °C přidá 15,7 ml triethylaminu. Tato směs se potom nalije na směs ledu a vody. Rozdělí se fáze a vodná fáze se extrahuje (2 krát) diethyletherem. Všechny organické frakce se sloučí, vysuší a odpaří. Zbytek se přečistí chromatograficky na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí hexanu a ethylacetátu v objemovém poměru 6:4, načež se z příslušné frakce eluátu získá požadovaná sloučenina 4e.
Hmotové spektrum (FAB): Mlf 716.
Příklad 5
3-Hydroxy-l-(2-hydroxy-5-amino-5-karboxypentyl)-4-(l-amino-l-karboxy-2-ethyl)-5-(3amino-3-karboxypropyl)pyridiniumhydrochlorid
Opakují se postupy z příkladů 1 a 2 za použití terc.butyl-5-hydroxy-6-jod-2-terc.butoxykarbonylaminohexanoátu.
Hmotové spektrum (FAB): M+ 429.
3-Hydroxy-l-(2-hydroxy-5-terc.butoxykarbonylamino-5-terc.butoxykarbonylpentyl)-4-(lterc.butoxykarbonylamino-l-terc.butoxykarbonyl-2-ethyl)-5-(3-terc.butoxykarbonylamino-3terc.butoxykarbonylpropyl)pyridiniumjodid, hmotové spektrum (FAB): M+ 897.
Příklad 6
3-Hydroxy-1 -/5-terc .butoxykarbony lamino-5-N-( 1 -methoxykarbony l-2-ethyl)karboxamidopentyl/-4-(l-terc.butoxykarbonylamino-l-terc.butoxykarbonyl-2-ethyl)-5-(3-terc.butoxykarbony lamino-3-terc .butoxykarbony lpropy l)pyridiniumj odid
235 mg sloučeniny z příkladu 3 a 230 mg e-jod-N-terc.butoxykarbonylamino(methyl-betaalanyl)lysinu v 1 ml dioxanu se zahřívají na teplotu 120 °C po dobu 30 minut. Po odpaření se požadovaná sloučenina přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 7:3.
Hmotové spektrum (FAB): M+ 910.
Příklad 7
3-Hydroxy-l-/5-terc.butoxykarbonylamino-5-N-(l-karboxy-2-ethyl)karboxamidopentyl/-4(l-terc.butoxykarbonylamino-l-terc.butoxykarbonyl-2-ethyl)-5-(3-terc.butoxykarbonylamino-3-terc.butoxykarbonylpropyl)pyridiniumhydroxid mg sloučeniny z příkladu 6 se rozpustí v 5 ml methanolu a 2 ml 0,2N roztoku hydroxidu sodného a získaný roztok se míchá po dobu 5 hodin při okolní teplotě. Potom se přidá 10 ml vody a 10 ml methylenchloridu, načež se za intenzivního míchání přidává 0,2N kyselina
-9CZ 288038 B6 chlorovodíkové až k dosažení hodnoty pH 2 až 3. Organická vrstva se oddělí, vysuší nad síranem sodným a odpaří. Zbytek se přečistí chromatografícky na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 6:4. Z příslušné frakce eluátu se získá požadovaná sloučenina.
Hmotové spektrum (FAB): M+ 896.
Příklad 8
mg sloučeniny z příkladu 7 se rozpustí v 1 ml Ν,Ν-dimethylformamidu a 12 mg 1-hydroxybenzotriazolu, načež se k získanému roztoku přidá 13 μΐ diizopropylethylaminu (Huenigova báze), 32 mg N-biotinyl-l,4-diaminobutanu ve 2 ml Ν,Ν-dimethylformamidu a 15 mg N,Ndicyklohexylkarbodiimidu. Tato směs se míchá při okolní teplotě po dobu 23 hodin. Po odpaření a chromatografií na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy, tvořené směsí methylenchloridu, methanolu a amoniaku v objemovém poměru 90:10:1, se z příslušné frakce eluátu izoluje požadovaná sloučenina.
Hmotové spektrum (FAB): M+ 1192.
Příklad 9
-10CZ 288038 B6
128 mg sloučeniny z příkladu 8 se rozpustí ve 25 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v objemovém poměru 95:5 a takto získaný roztok se míchá po dobu jedné hodiny při okolní teplotě. Rozpouštědla se potom odpaří a zbytek se přečistí vysoce výkonnou chromatografií (HPL).
Sloupec: Hypersil ODS 4,6 x 250 mm, eluční činidla: A: 100 % H2O, 1 % CF3COOH,
B: 80 % CH3OH, 20 % H2O, 1 % CF3COOH, gradient: A + 20 % B v průběhu 20 minut.
Hmotové spektrum (FAB): M+ 780.
Příklad 10
Desoxypyridinolin-1 -beta-B S A-konjugát mg sloučeniny z příkladu 7 se rozpustí v 0,4 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, načež se k získanému roztoku přidá 3,3 mg N-ethyl-N-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidhydrochloridu a potom ještě 2,3 mg N-hydroxysukcinimidu. Získaný roztok se míchá po dobu 2 hodin při okolní teplotě, načež se k němu přidá 65 mg bovinního sérového albuminu (BSA) ve 2 ml fosfátového pufru (pH=8) a v míchání se pokračuje ještě po dobu 6 hodin. Rozpouštědla se potom odpaří a zbytek se rozpustí v 10 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v objemovém poměru 95:5, načež se získaný roztok míchá po dobu 90 minut při okolní teplotě. Po odpaření se zbytek přečistí chromatograficky na produktu Bio-Gel P 6, 3,94 až 7,87 ok/mm (100-200 mesh), za použití eluční soustavy tvořené směsí vody a kyseliny octové v objemovém poměru 98:2. Získaný „vysoko“ molekulární podíl se izoluje a použije pro imunizaci.
Příklad 11
Desoxypyridinolin-1 -beta-alany 1-KLH-konj ugát
2,5 mg sloučeniny z příkladu 7 se rozpustí ve 2,5 ml Ν,Ν-dimethylformamidu, načež se k získanému roztoku přidá 0,7 mg N-ethyl-N-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidhydrochloridu a potom 0,5 mg N-hydroxysukcinimidu. Tato směs se míchá po dobu 90 minut při okolní teplotě. Potom se přidá 34,2 mg hemocyaninu z kuželnatky (KHL) v 0,5 ml 50% glycerolu a v míchání se pokračuje při okolní teplotě po dobu 36 hodin. Potom se přidá 5 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 95:5 a roztok se míchá ještě po dobu 75 minut při okolní teplotě. Potom se kyselina trifluoroctová a voda odstraní odpařením. Zbytek se promyje (odstřeďováním) několikrát vodou, načež se použije pro imunizaci.
Příklad 12
3-Hydroxy-4-(2-terc.butoxykarbonylamino-2-karboxyethyl)-5-(3-terc.butoxykarbonylamino3-terc.butoxykarbonylpropyl)pyridin
0,5 g sloučeniny z příkladu 3 se rozpustí v 10 ml vody a 10 ml methanolu, načež se k takto získanému roztoku přidá 1 g hydroxidu sodného. Rezultující roztok se míchá po dobu 3 hodin při okolní teplotě a potom zpracuje postupem popsaným v příkladu 8.
-11CZ 288038 B6
Hmotové spektrum (FAB): MFT 540.
Příklad 13
3-Hydroxy—4-/l-terc.butoxykarbonylamino-l-N-(l-ethylmethoxykarbonyl)karboxamido-2ethyl/-5-(3-terc.butoxykarbonylamino-3-terc.butoxykarbonylpropyl)pyridin
320 mg sloučeniny z příkladu 12, 200 mg 1-hydroxybenzotriazolu, 300 mg N,N-dicyklohexylkarbodiimidu a 200 mg beta-alaninmethylesteru se rozpustí v 10 ml tetrahydrofuranu a získaný roztok se míchá přes noc při okolní teplotě. Po odpaření rozpouštědla se zbytek přečistí chromatografícky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v poměru 95:5.
Hmotové spektrum (FAB): MH+ 625.
Příklad 14
3-Hydroxy-l-(5-terc.butoxykarbonylamino-5-terc.butoxykarbonylpentyl)-4-/l-terc.butoxykarbonylamino-l-N-(l-methoxykarbonyl-2-ethyl)karboxamido-2-ethyl/-5-(3-terc.butoxykarbonylamino-3-terc.butoxykarbonylpropyl)pyridiniumjodid
Tato sloučenina se připraví postupem popsaným v příkladu 1.
Hmotové spektrum (FAB): M+ 910.
Příklad 15
3-Hydroxy-l-(5-terc.butoxykarbonylamino-5-terc.butoxykarbonylpentyl)-4-/l-terc.butoxykarbonylamino-l-N-(l-karboxy-2-ethyl)karboxamido-2-ethyl/-5-(3-terc.butoxykarbonylamino-3-terc.butoxykarbonylpropyl)pyridiniumhydroxid
Tato sloučenina se připraví postupem popsaným v příkladu 7.
Hmotové spektrum (FAB): M+ 896.
Příklad 16
Sloučenina z příkladu 15 se kopuluje s BSA nebo KLH stejně jako je to popsáno v příkladech 10 a 11. Rezultující sloučeniny mají buď BSA nebo KLH připojený ke karboxylové skupině bočního řetězce v poloze 4 pyridinového kruhu.
Příklad 17
Kyselina 2-amino-4-/3-hydroxy-4-(l-karboxy-l-amino-2-ethyl}-5-pyridinyl/butanová
K 200 mg sloučeniny z příkladu 3 se přidá 20 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 95:5 a směs se po 90 minutách odpaří.
Hmotové spektrum (FAB): MFT 284.
-12CZ 288038 B6
Sloučeniny obecného vzorce I a IA jsou použitelné při stanovení hladin pyridinolinových a deoxypyridinolinových křížově vazebných faktorů odvozených z degradace kolagenu a přítomných v biologických tekutinách, například v moči nebo krevním séru. Mezi stavy, které jsou u lidí a zvířat charakterizovány vysokým stupněm kostní resorpce nebo abnormální rovnováhou mezi kostní tvorbou a kostní resorpcí, jsou například osteoporóza (prořídnutí kostí), Pagetova choroba, vývoj benigních nebo maligních kostních nádorů nebo rakovinové metastázy kostí, osteomalacie (měknutí kostí), primární hyperparathyreoidismus (chorobný stav vyvolaný zvýšenou činností příštítných tělísek), terapie sloučeninami zvyšujícími stupeň kostní resorpce (například glukokortikoidy), osteoartritida (zánět kostí a kloubů) a revmatoidní artritida.
Kvantitativní stanovení hladin těchto křížově vazebných faktorů může být provedeno například použitím imunologických metod, elektrochemické titrace, fyzikální fluorescenční spektroskopie nebo ultrafialové absorbance. Tyto metody mohou být provedeny přímo s tělesnou tekutinou bez jejího čištění nebo až po jejím přečištění, například v případě, kdy tělesná tekutina obsahuje nadměrná množství kontaminujících látek. Způsobem podle vynálezu mohou být stanoveny volné křížově vazebné faktory přítomné v biologických tekutinách nebo křížově vazebné faktory uvolněné hydrolýzou peptidů z degradace kolagenu a přítomné v tělesných tekutinách. Totální hladinou křížově vazebného faktoru se míní celkové množství nebo koncentrace volného křížově vazebného faktoru a hydrolyzovaného křížově vazebného faktoru, přítomné, resp. přítomná v tělesné tekutině.
Výhodně se kvantitativní stanovení pyridinolinových nebo deoxypyridinolinových křížově vazebných faktorů v biologických tekutinách provádí za použití imunologických metod. V souladu s tím se připraví protilátky specifické pro sloučeniny obecného vzorce I nesoucí alespoň jednu antigenovou skupinu, které jsou dále uváděny jak imunogen. Mohou být připraveny buď polyklonální nebo monoklonální protilátky, které jsou imunoreaktivní se sloučeninou obecného vzorce I nesoucí alespoň jednu antigenovou skupinu, ve které X] znamená atom vodíku a/nebo s takovou substituovanou sloučeninou, ve které Xj znamená skupinu OH. V rámci výhodného provedení vynálezu se připraví specifické protilátky, které jsou imunoreaktivní se sloučeninou obecného vzorce I, která nese alespoň jednu antigenovou skupinu a ve které X] znamená atom vodíku.
Jak již bylo uvedeno výše, může být ve sloučeninách obecného vzorce I uvedená antigenová skupina připojena přímo nebo nepřímo v definované poloze: antigenová skupina může být například přítomna v obecném substituentu Rb R2 nebo R3, zejména v obecném substituentu R3 nebo R2. Výhodně je antigenová skupina připojena prostřednictvím distanční skupiny. Sloučeniny obecného vzorce IA připravené způsobem podle vynálezu jsou rovněž použitelné pro přípravu odpovídající sloučeniny obecného vzorce I nesoucí jednu, dvě nebo tři antigenové skupiny, které byly definovány výše.
Uvedená produkce protilátky může být provedena konvenčními technikami zahrnujícími injekci sloučeniny obecného vzorce I nesoucí alespoň jednu antigenovou skupinu do vhodného savčího subjektu, jakým je myš, králík nebo ovce za použití imunologických technik, které jsou v tomto oboru obecně známé (Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Cambell, A. M., 1986, 13, Elsevier). Séra se titrují za účelem stanovení tvorby protilátky vůči imunogenu. Slezinné buňky nebo periferní krevní lymfocyty mohou být izolovány, homogenizovány a potom sloučeny například s rakovinovými buňkami k vytvoření kondenzovaného buněčného hybridu, který produkuje monoklonální protilátky, které jsou imunoreaktivní s požadovanou křížově vazebnou sloučeninou obecného vzorce I podle vynálezu. Příprava monoklonální protilátky může být provedena za použití technik popsaných G. Galfre-m a C. Milstein-em v Meth. Enzymol. 73,1 (1981).
Polyklonální nebo zejména monoklonální protilátky nebo jejich fragmenty, připravené výše uvedenými způsoby nebo ekvivalentními způsoby, mohou být použity při různých imunometrických postupech stanovujících koncentraci pyridinolinových nebo desoxypyridinolinových
-13CZ 288038 B6 křížově vazebných faktorů, odvozených od degradace kolagenu, v biologických tekutinách. Tyto imunometrické postupy zahrnují použití monoklonální protilátky nebo jejího fragmentu kopulovaných s detekovatelným značícím členem. Příklady vhodných značících členů zahrnují například enzymy, koenzymy, inhibitory enzymů, chromofory, fluorofory, chemiluminiscenční látky, paramagnetické kovy, spinové tracery a radionuklidy. Příklady standardních imunometrických postupů vhodných pro vyhodnocení stupně kostní resorpce zahrnují například imunosorpční stanovení s kopulovaným enzymem (ELISA), radioimunologické stanovení (RIA) a sendvičové imunoradiometrické stanovení (IRMA).
Sloučenina obecného vzorce I prostá antigenové skupiny nebo sloučenina obecného vzorce IA připravená podle vynálezu, kde X] znamená atom vodíku nebo skupinu OH, může být použita jako referenční standard pro kvantitativní stanovení koncentrace pyridinolinových nebo deoxypyridinolinových křížově vazebných faktorů odvozených z degradace kolagenu v biologických tekutinách, například při libovolné zvýše uvedených kvantitativních metod stanovení nebo v rámci soupravy použitelné pro takové kvantitativní metody stanovení.
Vzhledem k výše uvedenému vynález poskytuje:
1) Způsob stanovení abnormalit metabolismu pojivových tkání, například kostní nebo chrupavčité resorpce, kvantitativním stanovením koncentrace celkových nebo volných pyridinolinových nebo desoxypyridinolinových křížově vazebných faktorů odvozených od degradace kolagenu v biologické tekutině za použití sloučeniny obecného vzorce I;
2) způsob stanovení abnormalit metabolismu pojivových tkání, například kostní nebo chrupavčité resorpce, kvantitativním stanovením koncentrace celkových nebo volných pyridinolinových nebo desoxypyridinolinových křížově vazebných faktorů odvozených z degradace kolagenu v biologické tekutině za použití sloučeniny obecného vzorce LA připravené způsobem podle vynálezu;
3) způsob kvantitativního stanovení koncentrace celkových nebo volných pyridinolinových nebo desoxypyridinolinových křížově vazebných faktorů odvozených od degradace kolagenu v biologické tekutině, přičemž tento způsob zahrnuje uvedení do styku biologické tekutiny se specifickými polyklonálními nebo monoklonálními protilátkami, které jsou imunoreaktivní se sloučeninou obecného vzorce I, která nese alespoň jednu antigenovou skupinu a ve které Xi znamená atom vodíku nebo skupinu OH;
4) použití sloučeniny obecného vzorce IA připravené způsobem podle vynálezu nebo sloučeniny obecného vzorce I prosté antigenové skupiny jako standard pro kvantitativní stanovení koncentrace celkových nebo volných pyridinolinových nebo desoxypyridinolinových křížově vazebných faktorů odvozených z degradace kolagenu v biologické tekutině;
5) výše definované polyklonální nebo monoklonální protilátky;
6) buněčnou řadu, která vylučuje uvedené monoklonální protilátky;
7) způsob produkce uvedených monoklonálních protilátek;
8) soupravu pro imunometrické stanovení množství nebo koncentrace celkových nebo volných pyridinolinových nebo desoxypyridinolinových křížově vazebných faktorů odvozených z degradace kolagenu v biologické tekutině, obsahující kompozici obsahující výše definovanou protilátku nebo její imunologicky reaktivní fragment a dodatkové činidlo pro provádění uvedeného imuniometrického stanovení společně s instrukcemi poskytujícími návod k provádění uvedeného stanovení za použití ve funkci standardu sloučeniny obecného vzorce IA připravené způsobem podle vynálezu nebo sloučeniny obecného vzorce I prosté antigenové skupiny, ve které Xj znamená atom vodíku nebo skupinu OH, zejména atom vodíku.
Claims (3)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob přípravy pyridinového derivátu obecného vzorce ICHjI CHXxI Z-Rj ve kterémX znamená skupinu -(CH2)n-, kde n znamená celé číslo od 2do 8,Y znamená skupinu -(CH2)m~, kde m je rovno n-1,Z znamená skupinu -(CH2)P-, kde p znamená celé číslo od 1do 8,R4 znamená skupinu OH,Ri znamená atom vodíku, karboxylovou skupinu nebo její funkční derivát, primární, sekundární nebo terciární amino-skupinu nebo skupinu obecného vzorce aR5-CH-R6(a),I ve kterémR5 znamená skupinu -NH2, skupinu -NHYa nebo NHZa-Yb, kde Ya je ochranná skupina nebo skupina schopná kovalentní reakce s antigenem nebo ochrannou skupinou, Za znamená distanční skupinu a Yb znamená ochrannou skupinu nebo antigenovou skupinu nebo biotinylovou skupinu,Rí znamená skupinu -COOH nebo její funkční derivát,R2 znamená atom vodíku, karboxylovou skupinu nebo její funkční derivát, primární, sekundární nebo terciární amino-skupinu nebo skupinu obecného vzorce a definovanou výše,R3 znamená karboxylovou skupinu nebo její funkční derivát, primární, sekundární nebo terciární amino-skupinu nebo skupinu obecného vzorce a definovanou výše,Xi znamená atom vodíku nebo skupinu OH a-15CZ 288038 B6X2® znamená aniont, s výhradou spočívající v tom, že délka řetězce alkylenového zbytku v -Y- je alespoň o jeden uhlíkový atom kratší než délka řetězce alkylenového zbytku v -X-, vyznačený tím, že se sloučenina obecného vzorce II (II), ve kterém X, Y, Rb R2 a R4 mají výše uvedené významy, uvede v reakci se sloučeninou obecného vzorce IIIX5-CH2-CHXi-Z-R3 (III), ve kterém Xb Z a R3 mají výše uvedené významy a X5 znamená odlučitelnou skupinu, načež se takto získaná sloučenina izoluje ve volné formě nebo ve formě soli.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že se použijí odpovídající výchozí látky obecných vzorců II a III pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I, ve kterémX znamená skupinu -CHr-CH2-, Y znamená skupinu -CH2-, každý z Ri a R2 znamená skupinu obecného vzorce a definovanou v nároku 1, ve které R5 znamená skupinu NH2 nebo skupinu NHY'a a Ré znamená skupinu -COOH nebo alkoxykarbonylovou skupinu obsahující 2 až 7 uhlíkových atomů, X] znamená atom vodíku nebo skupinu OH, Z znamená skupinu -CH2-CH2a R3 znamená skupinu obecného vzorce a definovanou v nároku 1, ve které R5 znamená skupinu -NH2 nebo skupinu NHY'a a R« znamená skupinu -CONH-Za-Zb, nebo sloučeniny obecného vzorce I, ve kterémX znamená skupinu -CH2-CH2-, Y znamená skupinu -CH2-, Z znamená skupinu -CH2-CH2každý zRi a R3 znamená skupinu obecného vzorce a definovanou v nároku 1, ve které R5 znamená skupinu -NH2 nebo skupinu NHY'a a R^ znamená skupinu -COOH nebo alkoxykarbonylovou skupinu obsahující 2 až 7 uhlíkových atomů, Xi znamená atom vodíku nebo skupinu OH a R2 znamená skupinu obecného vzorce a definovanou v nároku 1, ve které R5 znamená skupinu -NH2 nebo skupinu NHY'a a R^ znamená skupinu -CONH-Za-Yb, přičemž Y'a znamená ochrannou skupinu amino-funkce, Yb znamená antigenovou skupinu a Za má význam definovaný v nároku 1.
- 3. Pyridinový derivát obecného vzorce II (II), ve kterém X, Y, Rb R2 a R» mají významy definované v nároku 1, pro použití jako meziprodukt pro provádění způsobu podle nároku 1.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB929202139A GB9202139D0 (en) | 1992-01-31 | 1992-01-31 | Improvements in or relating to organic compounds |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ10693A3 CZ10693A3 (en) | 1993-12-15 |
| CZ288038B6 true CZ288038B6 (cs) | 2001-04-11 |
Family
ID=10709643
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ1993106A CZ288038B6 (cs) | 1992-01-31 | 1993-01-29 | Způsob přípravy pyridinového derivátu a meziprodukt pro tento způsob |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0556152B1 (cs) |
| JP (1) | JP3544549B2 (cs) |
| AT (1) | ATE210645T1 (cs) |
| AU (1) | AU663909B2 (cs) |
| CA (1) | CA2088396A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ288038B6 (cs) |
| DE (1) | DE69331293T2 (cs) |
| DK (1) | DK0556152T3 (cs) |
| ES (1) | ES2169723T3 (cs) |
| FI (1) | FI104896B (cs) |
| GB (1) | GB9202139D0 (cs) |
| HU (1) | HU214677B (cs) |
| NO (1) | NO180779C (cs) |
| PT (1) | PT556152E (cs) |
| SG (1) | SG43065A1 (cs) |
| SK (1) | SK281137B6 (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5620861A (en) * | 1992-07-31 | 1997-04-15 | Metra Biosystems, Inc. | Method and kit for pyridinium crosslink assay |
| US5736344A (en) * | 1992-12-17 | 1998-04-07 | Metra Biosystems, Inc. | Serum pyridinium crosslinks assay |
| US5756361A (en) * | 1992-12-17 | 1998-05-26 | Metra Biosystems, Inc. | Screening method for periodontal disease |
| US5661039A (en) * | 1995-03-01 | 1997-08-26 | Metra Biosystems, Inc. | Perspiration assay for bone resorption |
| US5723619A (en) * | 1997-01-13 | 1998-03-03 | Bayer Corporation | Method for the synthesis of deoxypyridinoline |
| US5834610A (en) * | 1997-05-06 | 1998-11-10 | Johnson; Gary M. | Conversion of pyridinoline to deoxypyridinoline |
| CN105801688A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-07-27 | 苏州博源医疗科技有限公司 | 脱氧吡啶酚免疫原、抗体和检测试剂及制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59148766A (ja) * | 1983-02-10 | 1984-08-25 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | ピリジン誘導体 |
| US4973666A (en) * | 1987-11-06 | 1990-11-27 | Washington Research Foundation | Peptide fragments containing HP and LP cross-links |
| GB8929366D0 (en) * | 1989-12-30 | 1990-02-28 | Rowett Research Inst | Method to detect connective tissue disorder in humans and animals |
-
1992
- 1992-01-31 GB GB929202139A patent/GB9202139D0/en active Pending
-
1993
- 1993-01-15 HU HU9300108A patent/HU214677B/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-01-26 EP EP93810049A patent/EP0556152B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-26 DE DE69331293T patent/DE69331293T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-01-26 ES ES93810049T patent/ES2169723T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-26 SG SG1996003175A patent/SG43065A1/en unknown
- 1993-01-26 AT AT93810049T patent/ATE210645T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-01-26 DK DK93810049T patent/DK0556152T3/da active
- 1993-01-26 PT PT93810049T patent/PT556152E/pt unknown
- 1993-01-28 NO NO930284A patent/NO180779C/no unknown
- 1993-01-28 SK SK42-93A patent/SK281137B6/sk unknown
- 1993-01-28 FI FI930367A patent/FI104896B/fi active
- 1993-01-29 AU AU32105/93A patent/AU663909B2/en not_active Ceased
- 1993-01-29 JP JP01341493A patent/JP3544549B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-01-29 CA CA002088396A patent/CA2088396A1/en not_active Abandoned
- 1993-01-29 CZ CZ1993106A patent/CZ288038B6/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2169723T3 (es) | 2002-07-16 |
| DK0556152T3 (da) | 2002-04-08 |
| AU663909B2 (en) | 1995-10-26 |
| SK281137B6 (sk) | 2000-12-11 |
| FI930367A (fi) | 1993-08-01 |
| DE69331293D1 (de) | 2002-01-24 |
| JPH0641078A (ja) | 1994-02-15 |
| CZ10693A3 (en) | 1993-12-15 |
| SG43065A1 (en) | 1997-10-17 |
| JP3544549B2 (ja) | 2004-07-21 |
| CA2088396A1 (en) | 1993-08-01 |
| SK4293A3 (en) | 1993-11-10 |
| FI930367A0 (fi) | 1993-01-28 |
| NO180779B (no) | 1997-03-10 |
| FI104896B (fi) | 2000-04-28 |
| DE69331293T2 (de) | 2002-07-18 |
| EP0556152B1 (en) | 2001-12-12 |
| EP0556152A1 (en) | 1993-08-18 |
| HU214677B (hu) | 1998-04-28 |
| NO930284L (no) | 1993-08-02 |
| NO930284D0 (no) | 1993-01-28 |
| HUT70276A (en) | 1995-09-28 |
| GB9202139D0 (en) | 1992-03-18 |
| NO180779C (no) | 1997-06-18 |
| ATE210645T1 (de) | 2001-12-15 |
| AU3210593A (en) | 1993-08-05 |
| HU9300108D0 (en) | 1993-04-28 |
| PT556152E (pt) | 2002-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5688921A (en) | Reagents and methods for the detection and qualification of thyroxine in fluid samples | |
| US5593896A (en) | Reagents and methods for the detection and quantification of thyroxine in fluid samples | |
| US4332784A (en) | Dual isotope assays | |
| CA2769998C (en) | Imatinib immunoassay | |
| JPS59104554A (ja) | 螢光偏光技術を用いる不飽和チロキシン結合性蛋白位置の測定法 | |
| CN101273062A (zh) | 抗25-羟基维生素d的抗体 | |
| Chauveau et al. | Rapid and specific enzyme immunoassay of serotonin | |
| EP0331126A2 (de) | Verfahren zur Bestimmung eines Proteins nach dem Prinzip des Fluoreszenz-Polarisations Immunoassays | |
| JP5232769B2 (ja) | Ｃ−反応性タンパク質についての結合剤 | |
| CZ288038B6 (cs) | Způsob přípravy pyridinového derivátu a meziprodukt pro tento způsob | |
| US6190923B1 (en) | Diethylenetriamine-N,N′,N″-triacetic acid derivatives | |
| CN114560819B (zh) | 取代三嗪化合物、其制备方法及在氨基酸、肽、蛋白、细胞标记中的应用 | |
| US6175016B1 (en) | Pyridine derivatives | |
| JP2005049164A (ja) | ペプチドの高感度測定又は定量のためのラベル化試薬及び方法 | |
| EP0312898A2 (en) | Phenylacetylglutamine (pag) analytical test | |
| FRIEBEL et al. | Semi-reversible cross-linking. Synthesis and application of a novel heterobifunctional reagent | |
| EP2454260B1 (en) | Immunodetection and quantification of pyrazolopyrimidine sedatives | |
| US6291198B1 (en) | Antibody that recognizes pyrazine derivative and method for measuring 1,2-dicarbonyl derivative using said antibody | |
| Fabry et al. | Photoreactive Biotinylated Peptide Ligands for Affinity Labeling | |
| JPS59138958A (ja) | 抗血清 | |
| JPH02304365A (ja) | エラスターゼ１の測定方法 | |
| GB2044450A (en) | Dual Isotope Assays |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20060129 |