CZ283309B6

CZ283309B6 - Lyofilizovaný prostředek obsahující polyhematoporfyrinové ethery /estery a způsob jeho přípravy

Info

Publication number: CZ283309B6
Application number: CS902889A
Authority: CZ
Inventors: Bruce E. Haeger; James R. Lawter; Vijay H. Naringrekar; Michael C. Cucolo
Original assignee: Quadra Logic Technologies Inc.
Priority date: 1989-06-14
Filing date: 1990-06-11
Publication date: 1998-02-18
Also published as: IE902137A1; NO176645B; DK0402637T3; JP3112918B2; DE69029012D1; US5059619A; NO902634D0; RU2019990C1; EP0402637A3; ES2095846T3; KR910000146A; CN1047973A; JPH0331283A; KR0164845B1; PL164744B1; EP0402637A2; DE69029012T2; AU5708990A; PT94344B; NZ233953A

Abstract

Řešení se týká stabilních lyofilizovaných prostředků obsahujících porfyrinové sloučeniny selektivní vůči tumorům, použitelné ve fotodynamické terapii a diagnostice. Lyofilizovaný prostředek je vhodný pro injekční podání. Připravuje se z vodního roztoku polyhemaporfyrinových etherů/esterů, který neobsahuje chlorid sodný, zmrazením a následně se lyofilizuje při zvýšené teplotě až do získání bezpečného obsahu zbytkové vlhkosti, t.j. nižší jako 1 %.ŕ

Description

(57) Anotace:

Farmaceutická kompozice pro použití ve fotodynamické terapii nebo diagnóze pacienta, obsahuje složky polyhematoporfyrin etherů/esterů, které Jsou fototoxické k tumorové tkáni, je v lyofllizované formě a neobsahuje chlorid sodný. Způsob výroby kompozice zahrnuje a) přípravu vodného roztoku složek polyhematoporfyrin etherů/esterů, které jsou fototoxické k nádorové tkáni, a b) lyoíilizaci vodného neizotonického roztoku bez obsahu chloridu sodného.

Farmaceutická kompozice pro použití ve fotodynamické terapii nebo diagnóze a způsob její výroby

Oblast techniky

Předložený vynález se týká lyofilizovaných přípravků, obsahuj ích porfyrinové sloučeniny selektivní k tumorům, které jsou použitelné ve fotodynamické terapii. Zvláště výhodně se předložený vynález týká lyofilizovaných přípravků, obsahujících polyhematoporfyrinový ether/esterový přípravek, nazývaný jako PHOTOFRIN II^R, a způsobů přípravy lyofilizovaného přípravku.

Dosavadní stav techniky

Fotodynamická terapie, používající porfyriny a podobné sloučeniny, je v oboru již určitou dobu známá. Již od roku 1940 je známo, že porfyrin má schopnost fluorescence v tumorových tkáních. U porfyrinů bylo zjištěno, že mohou lokalizovat tumorovou tkáň tím, že absorbují světlo o určitých vlnových délkách při ozáření a umožňují detekovat tumor lokalizací fluorescence. Proto jsou přípravky, obsahující porfyriny, vhodné pro diagnózu a detekci takových tumorových tkání. Dále mohou porfyrinové sloučeniny také rozrušovat tumorovou tkáň, jestliže jsou ozářeny při vhodné vlnové délce, což je umožněno tvorbou jednoduchého kyslíku /Weishaupt K.R., a kol., Cancer Research /1976/ str. 2326-2329/.

Použití těchto sloučenin, absorbujících světlo, zejména sloučenin, podobných porfyrinům, může být uznáváno jako léčení tumorů, jestliže jsou tyto látky podávány systemicky. Použitelnost těchto sloučenin je odvozena od jejich schopnosti se lokalizovat v neoplastické tkáni, zatímco z normální okolní tkáně se odstraní /viz např. Dougherty T.J. a spol.,“Cancer:Principles and Practice of Oncology“ /1982/, V.T.de Vita Jr. A kol., eds., str. 1836 - 1844/.

Navíc k systemickému použití pro léčení tumorů má více nedávných publikací specifikované alternativní použití pro porfyrinové sloučeniny. Například použití porfyrinů při léčení kožních chorob bylo popsáno v US patentu č. 4753958. Použití fotosenzitivních sloučenin pro sterilaci biologických vzorků, obsahujících infekční organismy, jako jsou bakterie a viry, bylo uvedeno v US patentu č. 4727027, kde je fotosenzitivní látkou furokumarin a jeho deriváty. Fotosenzitivní porfyriny jsou vhodné při detekci a léčení aterosklerotických plaků, jak je popsáno v US patentech č. 4512762 a 4574682. Dále US patenty č. 4500507 a 4485806 popisují použití radioaktivně značených porfyrinových sloučenin pro zobrazení tumoru.

Fotosenzitivní přípravek, široce používaný při časných stadiích fotodynamické terapie pro detekci i léčbu, obsahuje surový derivát hematoporfyrinu, také nazývaný jako hematoporfyrinový derivát, HpD, nebo Lipson derivát, připravený postupem, popsaným Lipsonem a kol., v J.Natl.Cancer Inst./l961 /26:1 -8. Byla provedena významná práce, která použila tento přípravek a o použití tohoto derivátu při léčení malignity bylo rozsáhle referováno /Cancer Res./1978/38: 2628-2635; J.Natl.Cancer Inst./l979/ 62:231-237/.

Dougherty a spolupracovníci připravili účinnější formu hematoporfyrinového derivátu, příprava byla provedena ultrafiltrací HpD za účelem snížení obsahu látek o nízké molekulové hmotnosti. Tato práce je podstatou US patentu č. 4649151, zde je uvedena jako odkaz v předložené přihlášce, která dále popisuje podrobně metody pro fototerapeutické léčení pacienta za použití zde popsaných prostředků. Tato forma léčiva je komplexní směsí, obsahující porfyrinové jednotky, spojené etherovými můstky /Dougherty T.J. a kol., Adv.Exp.Med.Biol./1983/ 160: 3-13/ a esterovými můstky /Kessel, D. a kol., Photochem.Photobiol. /1987/ 36:463 - 568/. Tato

- 1 CZ 283309 B6 komplexní směs, označená zde jako polyhematoporfyrinové ethery/estery/“PHE“/, je dostupná pod obchodním označením PHOTOFRIN II^Raje podstatou předloženého vynálezu.

PHE může být podáván jako 2,5 mg/ml nebo 5 mg/ml roztok, obsahující PHE v normálním salinickém roztoku. PHE se rychle rozkládá, jestliže je vystaven teplu, a je proto relativně nestabilní při teplotě místnosti. V souladu s tím je tedy třeba roztok uchovávat zmražený pro zachování jeho síly. Navíc roztok má tendenci ke tvorbě částic při vyšších teplotách, což je nežádoucí pro použití pro injekce, pokud není uchováván zmražený a neroztaje přímo před použitím.

Použití takových zmražených roztoků má mnoho nevýhod. Jelikož má být uchováván zmražený, musí být umístěn a uchováván ve zmrazeném stavu, což vyžaduje použití zvláštních podmínek chlazení. Například produkt musí být uložen ve zvláštních kontejnerech za použití suchého ledu nebo podobného chladicího média. To je hlavní nevýhodou společně s cenou a logistikou použití produktu. Do doby použití musí být zmrazený roztok uchováván při -20 °C, což je teplota nižší než jsou pracovní teploty některých mrazniček, pak je nutné zvláštní mrazicí zařízení. Dále musí zmražený produkt projít periodou tání a není proto přímo použitelný pro pacienta.

Je proto potřebný přípravek PHE, který je stabilní při teplotě místnosti po delší časové období, nemusí být uchováván zmražený a proto není třeba žádných zvláštních skladovacích a ukládacích podmínek.

V oboru je známo, že lyofilizace produktu, který je relativně nestabilní ve vodném roztoku, může vést k produktu, který je stabilní a má proto prodlouženou životnost, než ve vodném roztoku. Dále má lyofilizovaný produkt proti produktu v práškové formě tu výhodu, že je rychle rozpustný a snadněji rekonstituovatelný před injekčním podáním. Jinou výhodou lyofilizovaného produktu, nestabilního ve vodném roztoku, je to, že může být připraven a plněn do dávkových obalů v kapalném stavu, sušen při nízkých teplotách, čímž se odstraní nežádoucí tepelné vlivy, a uchováván v suchém stavu, čímž je stabilnější. /Viz Remingtonů Pharmaceutical Sciences, 15. vydání, str. 1483-1485 /1975//. Lyofilizace je tak ideální metodou pro získání přídavku PHE, který není nutno uchovávat zmražený a který má požadovanou stabilitu při teplotě místnosti.

Weinstein a spol., v UP patentu č. 4753958 popisuje topický přípravek, obsahující hematoporfyrinový derivát pro léčení psoriázy a jiných kutánních chorob, který je připraven lyofílizací solného roztoku PHE o koncentraci 5 mg/ml aje rekonstituován ve vhodném topickém vehikulu.

Ačkoliv lyofilizace zmraženého salinického roztoku může být účelná pro přípravu produktu, vhodného pro topickou aplikaci, bylo autory předloženého vynálezu zjištěno, že vznikají určité problémy, když má být lyofilizovaný salinický roztok převeden na prostředek, což je obtížné, a výsledný produkt je nepřijatelný pro injekční podání. Při provedení pokusů o lyofílizací koncentrovaného salinického roztoku, obsahujícího 15 mg/ml PHE a 5,4 % chloridu sodného /množství chloridu sodného, nezbytné pro získání isotonického roztoku po rekonstituci vodou pro injekce na 2,5 mg/ml PHE roztoku/ se vyskytlo částečné vysrážení /vysolení/ PHE aktivní složky. Dále, jako důsledek vysrážení, je provedení filtrace koncentrátu extrémně nesnadné a vyžaduje častou výměnu filtru. Něco aktivní složky se zachytí na filtru. Dále lyofilizovaný produkt není homogenní a obsahuje odděleně chlorid sodný a PHE. Oddělení těchto fází pravděpodobně vzniká během zmražení v důsledku rozdílné krystalizace.

Alternativně salinický roztok, obsahující 2,5 mg/ml PHE, by mohl být lyofilizován, ale lyofilizační proces by byl velmi dlouhý, jelikož by bylo třeba odstranit více vody. Dále by mohly vznikat určité problémy s filtrací a vysrážením během procesů, které jsou způsobeny přítomností chloridu sodného v roztoku.

-2CZ 283309 B6

Je proto potřebné připravit prostředek, obsahující PHE, kteiý je při teplotě místnosti stabilní po prodlouženou dobu a nevyžaduje zmrazení, ale který překonává problémy, spojené a lyofilizací vodného salinického roztoku.

Cílem předloženého vynálezu je poskytnout způsob přípravy přípravku PHE, který je relativně nestabilní ve vodném roztoku, takovým postupem, že se získá produkt, stabilní při teplotě místnosti po prodlouženou dobu.

Cílem předloženého vynálezu je poskytnout PHE přípravek, který je homogenní a vhodný pro injekční podání.

Dalším cílem předloženého vynálezu je poskytnout způsob lyofilizace PHE roztoku, který vylučuje problémy, spojené s lyofilizací PHE salinického roztoku.

Tyto a další objekty a přednosti předloženého vynálezu budou odborníkům zřejmé z následujícího popisu.

Podstata vynálezu

Vynález se týká farmaceutické kompozice pro použití ve fotodynamické terapii nebo diagnóze pacienta, obsahující složky polyhematoporfyrin etherů/esterů, které jsou fototoxické k tumorové tkáni, která se vyznačuje tím, že kompozice je v lyofílizované formě a neobsahuje chlorid sodný.

Uvedená kompozice je ve výhodném provedení kompozice, kde uvedené složky polyhematoporfyrin ethery/estery jsou směsí hematoporfýrinových etherů a esterů.

Výhodně lyofilizovaná, farmaceutická kompozice obsahuje méně než 1 % zbytkové vody.

Dále se vynález týká způsobu výroby lyofílizované kompozice, definované výše, zahrnujícího a) přípravu vodného roztoku složek polyhematoporfyrin etherů/esterů, které jsou fototoxické k nádorové tkáni, a b) lyofilizací vodného neizotonického roztoku, vyznačujícího se tím, že vodný, neisotonický roztok složek neobsahuje chlorid sodný.

Výhodné provedení způsobu je charakterizováno tím, že uvedené složky polyhematoporfyrin etherů/esterů tvoří směs hematoporfyrin etherů a esterů.

Způsob přípravy lyofílizované kompozice zahrnuje výhodně stupně

a) přípravy vodného roztoku polyhematoporfyrinových etherů/esterů

b) snížení teploty uvedeného roztoku až do úplného vymražení uvedeného roztoku, a

c) lyofilizací vymrazeného roztoku při zvýšené teplotě do získání produktu s vyhovujícím obsahem zbytkové vlhkosti, a je dále charakterizován tím, že roztok neobsahuje chlorid sodný a, jestliže kompozice obsahuje objemové činidlo, je objemové činidlo neelektrolytové objemové činidlo.

Ve výhodném provedení je způsob charakterizován tím, že vymrazený roztok je lyofilizován při zvýšené teplotě +35 °C až do získání produktu s teplotou +20 °C až +25 °C a pak na této teplotě produktu udržován po 5 hodin.

-3 CZ 283309 B6

Výhodnější provedení způsobu je charakterizováno tím, že lyofílizovaná kompozice má obsah vlhkosti menší než jedno procento, přičemž uvedený způsob zahrnuje další stupeň po udržování teploty produktu na +20 °C až +25 °C, a to zvýšení teploty produktu na +33 °C až +37 °C a udržování uvedené teploty produktu po 6 až 10 hodin.

Ředidlem, použitým pro rekonstituci lyofilizovaného produktu, je výhodně 5% dextróza pro injekce, ale mohou být použita i jiná nesalinická ředidla, jako je sterilní voda.

Jestliže se lyofilizovaný produkt rekonstituuje normálním salinickým roztokem a filtruje za použití 0,2 gm filtrů, je možno pod optickým mikroskopem pozorovat velké množství nežádoucích částic. Nevýznamná tvorba částic je pozorována při rekonstituování produktu dextrózou pro injekce. Proto je žádoucí použít nesalinický roztok.

Předpokládá se, že do přípravku podle předloženého vynálezu mohou být zahrnuty další složky. Tyto zahrnují pufry pro úpravu pH roztoku, smáčecí nebo emulgační činidla, antimikrobiální činidla a/nebo ochranné látky podle potřeby. Tak je možno použít pro hrubý produkt neelektrolytických činidel, jako je mannitol nebo dextróza, pro zlepšení charakteristik lyofilizovaného koláče. Jsou možné další variace mimo výše uvedených, pokud jde o další vhodná vehikula, a tyto variace budou pro odborníky zřejmé. Všechny takové variace jsou v souladu s rozsahem předloženého vynálezu.

Následující příklady přinášejí porovnání lyofilizovaného přípravku s dostupným zmrazeným roztokem. Příklady žádným způsobem neomezují rozsah předloženého vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Koncentrovaný PHE vodný roztok, obsahující přibližně 15 mg/ml polyhematoporfyrin etherů/esterů, se připraví v souladu s postupem, popsaným Doughertym v US patentu č. 4649151. Koncentrát se uchovává zmražený a roztaví se před lyofilizací v lázni studené vody o teplotě 3 °C /± 2 °C/ s postupným tavením. Roztavený koncentrát se pak zváží a nalije do tárované skleněné míchací nádobky, chráněné před světlem. Vsádka se pak míchá do dosažení homogenity·

Když se získá homogenní směs, změří se pH roztaveného surového koncentrátu a upraví se na hodnotu pH 7,2 - 7,8 5% chlorovodíkovou kyselinou nebo 5% vodným roztokem hydroxidu sodného, je-li to žádoucí. Koncentrát se pak sterilně filtruje za použití dvoustupňového filtračního procesu, který zahrnuje 0,45 gm polyvinylidendifluoridový předfiltr, následovaný 0,2 gm sterilním filtrem stejného typu.

Po ukončení filtrace koncentrátu se do 30 ml nádobek umístí vhodný objem tak, aby bylo dosaženo hodnoty 75 mg na nádobku. Nádobky se pak umístí do lyofilizační komory. Sterilní koncentrát se zmrazí na teplotu produktu -35 °C nebo nižší na dobu nejméně 2 hodin. Pak se lyofilizuje při teplotě +35 °C, dokud teplota produktu nedosáhne +20 °C až +25 °C, a udržuje se na této teplotě 5 hodin. Komora se pak vyrovná s atmosférickým tlakem vpuštěním bezvodého dusíku, nádobky se uzavřou, vyjmou z komory a utěsní.

Před použitím ve fotodynamické terapii pacienta se obsah skleněné nádobky rekonstituuje 30,0 ml 5% dextrózy pro injekce.

-4CZ 283309 B6

Příklad 2

Lyofílizovaný PHE s obsahem vlhkosti méně než 1 %, stanoveným metodou Karl Fischera, se připraví postupem podle příkladu 1 s přídavným stupněm. Po uchovávání produktu při teplotě +20 °C až +25 °C po dobu 5 hodin se teplota produktu zvýší na +33 °C až +37 C a produkt se při této teplotě uchovává po dobu 6-10 hodin. Komora se pak vyrovná s atmosférickým tlakem jako v příkladu 1 a nádobky se uzavřou a utěsní.

Příklad 3

Lyofílizovaný PHE se připraví postupem podle příkladu 1. Testuje se pak stabilita produktu při různých teplotách a časových intervalech za použití vysokotlaké kapalinové chromatografie /HPLC/ za následujících podmínek:

Mobilní fáze A: směs 1:1:1 tetrahydrofuranu, methanolu a vody, obsahující 0,02 % ledové kyseliny octové, pH upraveno na 5,0 až 5,1 NaOH.

Mobilní fáze B: 90% tetrahydrofuran ve vodě.

Kolona: Ultrasphere ODS, 5 pm částice, velikost 150 x 4,6 mm /Beckman/.

Teplota: okolí

Průtoková rychlost: 1,0 ml/minutu.

Objem nástřiku: 20 mel

Způsob detekce: UV absorbance při 410 nm.

Program mobilní fáze: 100% mobilní fáze A, dokud protoporfyrinový pík není kompletně eluován /asi 9,5 až 13 minut/,

- lineární program pro 100% mobilní fázi B po dobu jedné minuty,

-100% mobilní fáze B, dokud PHE není kompletně eluován /asi 16 až 25 minut/,

- lineární program pro 100% mobilní fázi A po dobu tří minut,

- stabilizace 100% mobilní fází A nejméně po dobu 5 minut mezi nástřiky.

Výsledky jsou uvedeny dále v tabulce 1.

-5CZ 283309 B6

Tabulka 1

Lyofilizovaný PHE

Obsah PHE, plošná procenta HPLC

Podmínky	1	2	šarže 3	4	5
počáteční	100,00	100,00	100,00	100,00	100,00
-20 °C, 6 m	95,2	95,6	98,7	-	-
3 °C, 3 m	95,2	95,6	100,09	101,0	100,2
3 °C, 6 m	93,9	92,8	98,0	-	-
23 °C, 1 m	95,2	93,7	98,9	96,5	96,6
23 °C, 3 m	93,4	93,3	93,5	94,7	94,7
23 °C, 6m	93,0	93,7	93,0	-	-
37 °C, 1 m	93,2	92,7	93,6	93,4	92,6
37 °C, 3 m	90,1	89,9	89,7	92,4	91,4

V tabulce 2 jsou uvedeny hodnoty stability, zjištěné HPLC pro zmražený PHE roztok za stejných podmínek:

Tabulka 2

PHE zmražený roztok

Obsah PHE, plošná procenta HPLC

Podmínky šarže

	1	2	3
počáteční	100,	100	100
-20 °C, 6m	92,9	101,3	-
+5 °C, 3 m	83,2	93,4	85,2
5 °C, 6 m	81,4	86,9	84,1
5 °C, 9 m	77,1	81,9	77,9
25 °C, 3 m	82,4	91,2	83,8
25 °C, 6 m	86,4	93,9	87,8
25 °C, 9 m	77,1	91,5	88,8

Výsledky v tabulkách 1 a 2 dokazují, že lyofilizovaný přípravek PHE podle předloženého vynálezu vykazuje vyšší a konzistentnější stabilitu, než zmražený roztok, a udržuje si svoji účinnost po dobu nejméně 6 měsíců při teplotě místnosti.

Příklad 4

Lyofilizovaný PHE přípravek byl připraven podle příkladu 1 a testován na obsah částic za použití HIAC počítače.

-6CZ 283309 B6

Byly získány následující výsledky:

Tabulka 3

Lyofilizovaný PHE

Částicová analýza*

Počet částic na nádobku /30 ml/, šarže č. /u stability/

Podmínky	šarže	5
1	2	3	4
Počáteční			-	200	300
3 °C, 3m	-	-	-	400	300
3 °C, 6m	4600	1400	500	-	-
23 °C, 3m	-	-	-	400	400
23 °C, 6m	5700	1500	600	-	-

Všechny hodnoty udávají částice >10 gm.

*Měření byla provedena přístrojem HIAC.

Částicová analýza zmraženého roztoku za použití Coulter počítače je uvedena v tabulce 4.

Tabulka 4

Zmražený roztok PHE

Částicová analýza*

Počet částic na nádobku /30 ml/, šarže č. /u stability/

Podmínky	šarže	3
1	2
Počáteční		1163
-20 °C, 6m	2039	4184	605
+5 °C, 3 m	6372	16664	4555
5 °C, 6 m	9565	28768	7160
5 °C, 9 m	19406	42730	21104
25 °C, 3 m	14059	18457	10519
25 °C, 6 m	10211	5332	9742
25 °C, 9 m	32197	14338	23501

*Měření bylo provedeno počítačem Coulter.

Vyhodnocení výše uvedených údajů prokazuje, že lyofilizovaný produkt vykazuje množství částicových útvarů v hodnotách pod hodnotami, udávanými v USP pro injekce, v množství ne vyšším než 10 000 částic větších nebo rovných 10 pm na nádobku, přičemž zmrazený roztok vykazuje výraznou tvorbu částic při teplotách nad -20 °C v intervalech tak nízkých, jako jsou 3 měsíce.

Příklad 5

Lyofilizovaný PHE, připravený postupem podle příkladu 1, byl testován na biologickou účinnost za použití postupu, popsaného T.Doughertym a kol., J.Nat.Cancer Inst. 55:115. Podle tohoto postupu byly SMT-F tumory z „donorových“ DBA/2HA implantovány DBA/2HA myším pro testování. Po implantaci bylo vybráno deset myší s tumory rozměrů 4 mm x 4 mm až 6 mm x 6 mm a bylo jim intraperitoneálně injektováno 4,2 mg/kg PHE roztoku, připraveného rekonstituováním lyofilizovaného PHE 5% dextrózou ve vodě. Dvacetčtyři hodiny po dávce byly tumory ozařovány třicet minut xenonovou are lampou za použití červeného světla 630 nm ze vzdálenosti, která odpovídá světelné intenzitě 157,5 mW/cm², odečteno na měřicím přístroji. Vyhovující výsledky jsou interpretovány jako neviditelný nebo nehmatatelný tumor u 50 % nebo více z deseti testovaných myší 7 dní po ozařování. Výsledky biostudie za použití rekonstituovaného lyofilizovaného PHE jsou uvedeny dále v tabulce 5.

Tabulka 5

Biostudie lyofilizovaného PHE

Výsledky biostudie, číslo šarže při stanovení stability

	1	2	3	4	5
počátek	vyh.^x	vyh.	vyh.	vyh.	vyh.
-20 °C, 6 m	vyh.	vyh.	-	-	-
3 °C, 3 m	vyh.	vyh.	-	vyh.	vyh.
3 °C, 6 m	vyh.	vyh.	vyh.	-	-
23 °C, 1 m	vyh.	vyh.	vyh.	vyh.	vyh.
23 °C, 3 m	vyh.	vyh.	-	vyh.	vyh.
23 °C, 6 m	vyh.	vyh.	vyh.	-	-
37 °C, 1 m	vyh.	vyh.	vyh.	vyh.	vyh.
37 °C, 3 m	vyh.	vyh.	-	vyh.	vyh.

*vyhovující

Výsledky biostudie PHE zmraženého roztoku za použití stejného postupu, jako je výše uvedený, jsou uvedeny v tabulce 6.

-8CZ 283309 B6

Tabulka 6

PHE zmražený roztok, biostudie

Výsledky biostudie pro šarže

Podmínky	1	2	3
počátek	vyh.^x	vyh.	-
-20 °C, 3 m	-	-	vyh.
-20 °C, 6 m	nevyh.“	vyh.	-
-20 °C, 9 m	nevyh.	Vyh.	nevyh.
5 °C, 3 m	vyh.	vyh.	nevyh.
5 °C, 6 m	nevyh.	nevyh.	nevyh.
5 °C, 9 m	vyh.	nevyh.	vyh.
25 °C, 3 m	nevyh.	vyh.	vyh.
25 °C, 6 m	nevyh.	nevyh.	nevyh.
25 °C, 9 m	vyh.	nevyh.	nevyh.

Srovnáním výsledků z tabulek 5 a 6 je zřejmé, že lyofilizovaný PHE podle předloženého vynálezu si udržuje svoji biologickou aktivitu v testech in vivo v intervalu nejméně 6 měsíců při teplotě místnosti, přičemž zmražený roztok vykazuje značnou variabilitu v biologické aktivitě za stejných podmínek.

Příklad 6

Lyofilizovaný PHE, obsahující mannitol jako zahušťovací činidlo, se připraví podle příkladu 1 přidáním takového množství mannitolu, které je rovno hmotnosti PHE, k roztátému koncentrátu ve skleněné míchací nádobce.

Příklad 7

Lyofilizovaný PHE, obsahující dextrózu jako zahušťovací činidlo, se připraví podle příkladu 6 s tím, že se mannitol nahradí dextrózou.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutické kompozice pro použití ve fotodynamické terapii nebo diagnóze pacienta, obsahující složky polyhematoporfyrin etherů/esterů, které jsou fototoxické k tumorové tkáni, vyznačující se tím, že kompozice je v lyofilizované formě a neobsahuje chlorid sodný.
2. Kompozice podle nároku 1, kde uvedené složky polyhematoporfyrin ethery/estery jsou směs hematoporfyrinových etherů a esterů.

-9CZ 283309 B6
3. Lyofílizovaná farmaceutická kompozice podle nároku 1, obsahující méně než 1 % zbytkové vody.
4. Způsob výroby lyofilizované kompozice podle nároku 1, zahrnující a) přípravu vodného roztoku složek polyhematoporfyrin etherů/esterů, které jsou fototoxické k nádorové tkáni, a b) lyofilizaci vodného neizotonického roztoku, vyznačující se tím, že vodný, neisotonický roztok složek neobsahuje chlorid sodný.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že uvedené složky polyhematoporfyrin etherů/esterů tvoří směs hematoporfyrin etherů a esterů.
6. Způsob přípravy lyofilizované kompozice podle nároku 1, zahrnující stupně

a) přípravy vodného roztoku polyhematoporfyrinových etherů/esterů,

b) snížení teploty uvedeného roztoku až do úplného vymražení uvedeného roztoku, a

c) lyofilizaci vymrazeného roztoku při zvýšené teplotě do získání produktu s vyhovujícím obsahem zbytkové vlhkosti, vyznačující se tím, že roztok neobsahuje chlorid sodný a, jestliže kompozice obsahuje objemové činidlo, je objemové činidlo neelektrolytové objemové činidlo.
7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že vymrazený roztok je lyofilizován při zvýšené teplotě +35 °C až do získání produktu s teplotou +20 °C až +25 °C, a pak na této teplotě produktu udržován po 5 hodin.
8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že lyofílizovaná kompozice má obsah vlhkosti menší než jedno procento, přičemž uvedený způsob zahrnuje další stupeň po udržování teploty produktu na +20 °C až +25 °C, a to zvýšení teploty produktu na +33 °C až +37°C a udržování uvedené teploty produktu po 6 až 10 hodin.