CZ282139B6 - Způsob výroby přípravku s dieteticko-preventivním a léčebným účinkem na bázi vaječných l-O-alkyl-2-acyl-fosfatidylethanolaminů - Google Patents

Abstract

Řešení se týká způsobu výroby přípravku s dieteticko-preventivním a léčebným účinkem na bázi vaječných alkyl-fosfolipidů (1-0-alkyl-2-acyl-fosfatidylethanolaminů). Přípravek lze použít k prevenci a therapii nádorových onemocnění, zvláště k prevenci nádorových metastáz do jater i jiných orgánů. Biologicky účinný ester-fosfolipid, 1-0-oktadecyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfo-(N-palmitoyl) ethanolamin (t.j. plasmanyl-(N-acyl)-ethanolamin), který je v přípravku obsažen, byl připraven semisyntetickou metodou, která spočívá v N-acylaci vaječných fosfolipidů kyselinou palmitovou za přítomnosti carbonyldiimidazolu při 40 až 45 .sup.o.n.C. K extrakci vaječných fosfolipidů ze žloutků byl použit n-butanol a po zahuštění extraktu ve vaku při 45 .sup.o.n.C byly fosfolipidy sraženy v přebytku acetonu při -5.sup.o.n.C až +5 .sup.o.n.C. ŕ

Description

(57) Anotace:

Způsob výroby přípravku s dieteticko-preventivním a léčebným účinkem na bázi vaječných l-0-alkyl-2acyl-fosfatidylethanolamlnů, který spočívá v N-acylaci izolovaných vaječných fosfatidylethanolaminových fosfolipidů samostatně nebo ve směsi s fosfatidylenolinem kyselinou palmitovou za přítomnosti karbonyldiimidazolu a pyridinu v toluenovém roztoku při teplotě od 40 do 45 °C za vzniku N-acylovaných fosfatidylethanolaminů, které obsahují 1-0-oktadecyl-2-oledyl-SN-glycero-3-fosfo-(N-palmitoyl)ethanolamin, který má selektivní protinádorové účinky. K extrakci vaječných fosfolipidů ze žloutků lze použít s výhodou n-butanol a po zahuštění extraktu ve vaku při 45 °C se fosfolipldy sráží v přebytku acetonu při -5 °C. Přípravek se aplikuje perorálně a je zcela netoxický pro organismus 1 při dlouhodobém denním užívání Jako dietetikum.

Způsob výroby přípravku s dieteticko-preventivním a léčebným účinkem na bázi vaječných l-0-alkyl-2-acyl-fosfatidylethanolaminů

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu výroby nového přípravku s dieteticko-preventivním a léčebným účinkem na bázi přírodních alkyl-fosfolipidů.

Preparát byl izolován z biologického materiálu (žloutků slepičích vajec), ve kterém je obsažen prekurzor biologicky účinného alkyl-fosfolipidu, l-alkyl-2-acyl-fosfatidylethanolamin.

Byla vypracována semisyntetická metoda, která spočívá v acilaci izolovaných vaječných fosfolipidů kyselinou palmitovou za přítomnosti karbonyldiimidazolu, čímž se získá nový alkylfosfolipid s velmi výrazným protinádorovým účinkem, l-0-oktadecyl-2-oleoyl-sn-glycero-3fosfo-(N-palmitoyl)ethanolamin (PNAE(s)), který je netoxický pro normální fyziologické buňky lidského organismu a selektivně lyžuje buněčné membrány nádorových buněk (J. Kára a sp., Cs. patentč. 275396, 1987).

Alkyl-fosfolipidy jsou v posledních deseti letech předmětem intenzivního studia, zvláště s objevem jejich protinádorového účinku. V rostlinných zdrojích nebyly alkyl-fosfolipidy zjištěny. Kromě toho jsou živočišné i rostlinné fosfolipidy zdrojem nasycených a nenasycených mastných kyselin a fosforu. Fosfolipidy jsou jednou ze základních součástí organismu a jsou proto doplňkem racionální výživy.

Dosavadní stav techniky

Protinádorové a radioprotektivní účinky přírodních etherlipidů byly objeveny švédskými autory již v roce 1958 (A. Brohult, Nátuře (Lond.), 181, 1484, 1958). Bylo zjištěno, že alkyl-glyceroly, obsažené voleji zjater grónských žraloků, mají klinicky prokázaný ochranný účinek proti leukopenii. způsobené gama-zářením, a inhibují růst experimentálních nádorů (Hallgren B.: Ether Lipids, Biochemical and Biomedical Aspects (Mangold Η. K., Paltauf F., edit.) str. 261275, Academie Press, New York 1983.

Na další souvislosti mezi biologií nádorů a ether-lipidy upozornily práce F. Snydera a spolupracovníků v USA objevem vysoké koncentrace ether-fosfolipidů v membránách nádorových buněk a nepřítomnosti enzymu v nádorových buňkách, štěpícího etherovou vazbu v molekule ether-fosfolipidů (O-alkylglycerolmonooxygenázy) (Soodsma J. F., Piantadosi C., Snyder F., Cancer Res., 30, 309-311, 1970; Snyder F.: Ether Lipids Chemistry and Biology, Acadamic Press, New York 1972).

V roce 1967 byla realizována syntéza analogů alky 1-lysolecithinu (Arnold D., Weltzien H. U., Westphal O., Liebigs Ann. Chem., 709, 234, 1967). Významný protinádorový účinek na experimentálních modelech in vivo byl zjištěn u syntetického analogu lysofosfatidylcholinu, 1-0oktadecyl-2-methoxy-rac-glycero-3-fosfocholinu (preparát ET-I8-OCH3). Tyto práce ukázaly, že přítomnost 1-0-alkyl-etherové skupiny v molekule fosfolipidů je nezbytnou podmínkou pro protinádorový účinek ether-fosfolipidu (Berdel W. E., Blut, 44, 71-78, 1982; Berdel W. E., Bausert W. R. E., Fink U., Rastetter J. and Munder P. G., Anticancer Res., 1, 345-352, 1981; Berdel E. E., Andreesen R., Munder P. G., in Phospholipids and Cellular Regulation, vol. II, str. 41-73, (J. F. Kuo, edit.), CRC Press lne., Florida 1985).

Další syntetické deriváty alkyl-lysofosfatidylcholinu s protinádorovým účinkem byly prezentovány na Prvním mezinárodním sympoziu Ether Lipids in Oncology, konaném

- 1 CZ 282139 B6 v Góttingen (NSR) v roce 1986 (Lipids, 22, No. 11, str. 787-924, 1987). Klinicky se osvědčuje zejména syntetický thioether-derivát fosfatidylcholinu, preparát BM 41.440 (Ilmofosin) t.j. 1hexadecylmercapto-2-methoxymethyl-rac-glycero-3-fosfocholin. Perorální aplikací tohoto thioether-fosfolipidu pacientům po dobu 12 - 15 týdnů bylo dosaženo odstranění nádorových metastáz z jater u šesti pacientů (Herrmann D. B. J. et al., Lipids 22, 962 - 966, 1987; Herrmann D. B. J. et al., Beitráge zur Onkologie, vol. 37, (Eckhardt S., Holzner J. H., Nagel G. A., edit.), str. 224, Karger, Basel 1989).

Tato velmi zajímavá oblast použití ether-fosfolipidů byla dosud omezena jen na syntetická analoga alkyl-lysofosfatidylcholinu. Nedávno jsme však publikovali výsledky, které svědčí o tom, že také přírodní ether-fosfolipidy, odvozené od l-0-alkyl-2-acyl-fosfatidylethanolaminu, neboli plasmanyl-(N-acyl)ethanolaminy (PNAE), izolované z ptačích i savčích ischemických tkání, mají velmi selektivní a významný protinádorový účinek a jsou netoxické pro normální fyziologické buňky (Kára J., Borovička M., Liebel V., Smolíková J., Ubik K., Neoplasma, 33, 187 - 203, 1986; Kára J., Liebl V., Pelzbauer Z.: Highlights of Modem Biochemistry, Proceedings of the 14th Intemational Congress of Biochemistry, Prague, Czechoslovakia, 10-15 July 1988, Vol. 2, 1459-1474, 1989). Nový netoxický alkyl-fosfolipid se selektivním protinádorovým účinkem, plasmanyl-(N-acyl)ethanolamin (PNAE), byl izolován z ischemické tkáně slepičích embryí a z protinádorového biopreparátu cACPL (crude anticancer phospholipids). Tento biopreparát byl lyofilizovaný, žlutý prášek, připravený ze žloutků slepičích vajec, obsahujících ischemická kuřecí embrya. Biopreparát cACPL se vyráběl v letech 1988-1990 pro klinické zkoušky (výrobce fa BIOINTER a.s., Praha) podle našeho patentu (J. Kára et al. Čs. patent č. 276477, 1989). Při dlouhodobém perorálním podávání biopreparátu cACPL (3 x denně 2 gramy po dobu nejméně 2 měsíce) bylo dosaženo podstatné zlepšení klinického stavu zvláště u pacientů s nádorovými metastázami v játrech, současně také s analgetickým účinkem, takže pacienti nepociťovali bolesti a bylo možno zastavit denní dávky morfia.

První preparáty z oplozených slepičích vajec, zvané Cancerolyt, byly empiricky připraveny M. Borovičkou a zkoušeny na experimentálních nádorech již v roce 1967. Chemický charakter komponenty s protinádorovým účinkem, obsažené v biopreparátu, nebyl však v té době znám.

V roce 1982 jsme zahájili další výzkum protinádorových účinků tohoto biopreparátu. Výsledkem byl objev nového alkyl-fosfolipidu, který byl identifikován jako l-0-oktadecyl-2-oleoyl-snglycero-3-fosfo-(N-palmitoyl)ethanolamin. Tento nový alkyl-fosfolipid působí selektivně cytolyticky na lidské nádorové buňky v tkáňových kulturách a způsobuje destrukci buněčných membrán nádorových buněk, jak bylo potvrzeno experimentálními důkazy s použitím rastrovací elektronové mikroskopie (Kára J., Liebl V., Pelzbauer Z.: Highlights of Modem Biochemistry, Vol. 2, 1459-1474, 1989). Permeabilita buněčných membrán normálních fyziologických buněk nebyla za stejných podmínek změněna.

Chemická struktura alkyl-fosfolipidu PNAE byla potvrzena jednak semisyntézou (Kára J., Liebl V., Dědková V., Bejšovcová L., Čs. patent č. 275396, 1987), jednak německými autory, kteří použili k parciální syntéze alkyl-fosfolipidu PNAE biotechnologickou metodu metabolismu syntetických alkyl-etherů glycerolu v tkáňových kulturách rostlinných buněk (Apte S. S., Weber N„ Mangold Η. K., FEBS Letters 256, 104-106, 1990).

Experimentálním studiem jsme získali také důležitý nový poznatek, že protinádorová aktivita preparátu PNAE(s) in vivo na modelech experimentálních nádorů je zvyšována kalciovými ionty. Tumoricidní účinek preparátu PNAE(s), aplikovaného intraperitoneálně. myším C57B1/10 se sarkomem Mcll, je velmi významně zvýšen současnou perorální aplikací kalcium glukonátu v pitné vodě (Kára J., Konovalova A. L., Krasnova M. A., Liebel V., Bejšovcová L., Neoplasma 40,213 -217, 1993).

-2CZ 282139 B6

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je způsob výroby přípravku s dieteticko-preventivním a léčebným účinkem na bázi přírodních alkyl-fosfolipidů, spočívající vtom, že izolované fosfatidylethanolaminové fosfolipidy, samostatně nebo ve směsi s fosfatidylcholinem, ze žloutků neoplodněných slepicích vajec, které obsahují prekurzor l-0-oktadecyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfo-ethanolamin, jsou acylovány kyselinou palmitovou v přítomnosti karbonyldiimidazolu v ekvimolámím poměru v toluenovém roztoku a v přítomnosti pyridinu při teplotě od 40 °C do 45 °C. Získané Nacylované fosfatidylethanolaminy, které obsahují alkyl-fosfolipid s význačným selektivním protinádorovým účinkem, který byl chemicky charakterizován jako 1 -0-oktadecyl-2-oleoyl-snglycero-3-fosfo-(N-palmitoyl)ethanolamin (zkráceně PNAE(s)), se izolují po odpaření rozpouštědel na rotační vakuové odparce při 45 °C vysrážením v přebytku acetonu při teplotách od-15°C do +5 °C.

Ve výhodném provedení se výchozí fosfatidylethanolaminové fosfolipidy, obsahující prekurzor l-0-oktadecyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfo-ethanolamin, připraví ze žloutků neoplodněných slepicích vajec tak, že se nejdříve izoluje směs fosfolipidů a neutrálních lipidů extrakcí nativních nebo zmražených žloutků n-butanolem při 20 °C až 37 °C a po oddělení bílkovin filtrací a zahuštění extraktu ve vakuu při teplotě do 45 °C se fosfolipidy oddělí od neutrálních lipidů srážením v přebytku acetonu při teplotě od -5 °C do +5 °C a z oddělených fosfolipidů se dále izolují preparativní chromatografií fosfatidylethanolaminy, oddělené od fosfatidylcholinu na koloně silikagelu v soustavě n-butanol: voda, gradient od 5 % H?O do 10 % H?O v n-butanolu.

Ve výhodném provedení se vlastní účinná látka, t.j. l-0-oktadecyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfo(N-palmitoyl)ethanoIamin, obsažený v N-palmitoyl-fosfatidylethanolaminové frakci fosfolipidů, převede do finální lékové formy přípravku smísením se sušenými vaječnými žloutky z normálních slepičích vajec ve hmotnostním poměru 1 : 1 nebo 1 : 4, pro perorální použití.

Po předcházející chromatografické purifikaci alkyl-fosfolipidu PNAE(s) se připraví léková forma PNAE(s) ve formě injekcí nebo čípků.

Ve výhodném provedení se připraví perorální léková forma alkyl-fosfolipidu PNAE(s) ve formě suspenze v rostlinném oleji a také pro zevní aplikaci na kůži k prevenci a terapii kožních nádorů.

Ve výhodném provedení se ze směsi fosfatidylethanolaminů s fosfatidylcholinem neizolují fosfatidylethanolaminy, ale směs fosfolipidů se acyluje přímo kyselinou palmitovou za přítomnosti karbonyldiimidazolu. Vzniklá směs N-acylovaných fosfatidylethanolaminů a fosfatidylcholinu obsahuje biologicky účinný alkylfosfolipid PNAE(s) se selektivním protinádorovým účinkem. Tato směs v suspenzi v rostlinném oleji se aplikuje perorálně ve formě želatinových kapslí.

Chemické charakteristiky, infračervené spektrum, chromatografické hodnoty R_f v různých systémech rozpouštědel a také protinádorová účinnost na experimentálních myších nádorech i na tkáňových kulturách lidských nádorových buněk potvrzují shodnost vlastností alkyl-fosfolipidu PNAE(s) s vlastnostmi přírodního alkyl-fosfolipidu PNAE, který jsme dříve izolovali a charakterizovali (J. Kára a spolupracovníci, Neoplasma 33, 187-205, 1986).

Na základě našeho experimentálního studia farmakokinetiky a metabolismu alkyl-fosfolipidu 10-oktadecyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfo-(N-^uC-palmitoyl)ethanolaminu, který se kumuluje hlavně v játrech myší při. opakovaných intravenózních dávkách (Kára J., Zimakova I. N., Serebrjakova A. E., Dědková V., Zolotarjov A. E., J. Cancer Res. Clin. Oncology, 120, 662-667, 1994), je možno indikovat použití semisyntetického alkyl-fosfolipidu PNAE(s) k prevenci vzniku nádorových metastáz v játrech u pacientů, operovaných na kolorektální karcinomy. Netoxičnost, selektivní protinádorový účinek a farmakokinetika alkyl-fosfolipidu PNAE(s) tomuto

- j CZ 282139 B6 preventivnímu použití perorálního přípravku v klinice ideálně vyhovují. Prevence vzniku lidských nádorů je jedním z hlavních úkolů onkologie.

Ve srovnání s biopreparátem cACPL, připravovaným podle našeho patentu č. 276477 z oplodněných slepicích vajec, má nový přípravek tyto přednosti:

1/ Obsah protinádorového alkyl-fosfolipidu PNAE(s) v přípravku je standardní a definovaný a je řádově vyšší nežli obsah přírodního alkyl-fosfolipidu PNAE v biopreparátu cACPL.

2/ Semisyntetický přípravek není kontaminován bakteriemi. Při této technologii se slepičí vejce vůbec neinkubují při 37 °C, a proto zde nehrozí pomnožení bakteriální mikroflóry. Sušené vaječné žloutky, které jsou použity pro perorální formu přípravku, jsou před sušením sterilizovány pasterizací.

3/ Vyšší účinnost proti nádorovým buňkám, čistota a netoxičnost perorálního přípravku indikují jeho dieteticko-preventivní použití k prevenci nádorových metastáz do jater zvláště u pacientů po operaci kolorektálního karcinomu. Tento netoxický přípravek vzhledem ke svému celosystémovému působení v organismu by mohl umožnit prevenci vzniku lidských nádorů i v jiných orgánech, (plíce, mozek, mízní uzliny, močový měchýř). Přípravek je možno použít léčebně také v kombinaci s imunoterapií a hypertermií.

Vynález může být poměrně snadno realizován v průmyslové výrobě. Celý technologický postup je jednoduchý, bezodpadový a zdravotně nezávadný z hlediska hygieny provozu. Bližší podrobnosti vyplývají z příkladu provedení, který způsob podle vynálezu pouze ilustruje, ale nijak neomezuje.

Příklad provedení vynálezu

1. Extrakci celkových lipidů (t.j. neutrálních lipidů a fosfolipidů) ze zmrazených vaječných žloutků slepičích vajec (např. výrobek fy. BONECO a.s., Benešov u Prahy), lze s výhodou provést s použitím n-butanolu. Toto rozpouštědlo je pro výrobní účely z hygienických a ekologických důvodů vhodnější, nežli obvykle používaná směs chloroformu a methylalkoholu podle Folcha. Sražené bílkoviny se odfiltrují a fosfolipidy se oddělí od neutrálních lipidů po oddestilování n-butanolu v rotační vakuové odparce (při teplotě 45 °C až 50 °C) vysrážením fosfolipidů v přebytku acetonu při teplotě -15 °C až +5 °C.

2. K rozdělení a izolaci fosfolipidů PE (fosfatidylethanolaminy) a PC (fosfatidylcholin) je možno s výhodou použít chromatografické dělení na vrstvě silikagelu v preparativní koloně promýváním n-butanolem se stoupajícím gradientem H₂O v butanolu (od 5 % H₂O do 10 % H₂O v n-butanolu). Ze silikagelové vrstvy se eluují nejdříve zbytky neutrálních lipidů se stopou cholesterolu bezvodým n-butanolem, pak fosfatidylethanolaminy (PE) v gradientu 5 % H₂O až 10 % H₂O v n-butanolu, a nakonec fosfatidylcholin (vaječný lecithin), který je na silikagel pevněji vázán. Použití n-butanolu k tomuto preparativnímu dělení a izolaci PE fosfolipidů je technologicky výhodné také pro snadnou regeneraci n-butanolu destilací v rotační vakuové odparce. Vaječný lecithin (PC) je výhodným vedlejším produktem uvedeného dělení fosfolipidů.

3. Fosfatidylethanolaminové fosfolipidy (PE) z vaječných žloutků, obsahující molekulární species 1 -0-alkyl-2-acyl-PE, l-0-alkenyl-2-acyl-PE a 1-, 2-diacyl-PE, se použijí kN-acylaci kyselinou palmitovou a karbonyldiimidazolem v ekvimolámím poměru v přítomnosti bezvodého pyridinu v toluenovém roztoku při teplotě 45 °C po dobu šesti hodin. N-acylace fosfatidylethanolaminů probíhá za uvedených podmínek s výtěžkem 95 % až 100 % teorie. Produkt této syntézy, t.j. N-palmitoyl-fosfatidylethanolaminové fosfolipidy (zkráceně N-acylPE), obsahující alkyl-fosfolipid PNAE(s), se izoluje po odpaření toluenu a pyridinu ve vakuové

-4CZ 282139 B6 rotační odparce vnášením koncentrovaného roztoku odparku v toluenu po částech do přebytku acetonu při -5 °C za stálého míchání. Sražené N-acyl-PE fosfolipidy se ponechají v acetonu při teplotě -15 °C (mrazící box) několik hodin (přes noc), izolují se odstředěním nebo filtrací při nízké teplotě (-5 °C) a vysuší se odpařením zbytků acetonu ve vakuové rotační odparce. Účinnost N-acylace se průběžně kontroluje chromatografií alikvotu N-acyl-PE na tenké vrstvě silikagelu a detekcí fosfolipidů na chromatogramu 5%-ním roztokem kyseliny fosfomolybdenové v ethylalkoholu (spray chromatogramu a zahřátí na 80 °C v sušárně).

4. Příprava perorální formy preparátu se provede smícháním a homogenizací N-acyl-PE fosfolipidů se sušenými vaječnými žloutky, sterilizovanými pasterizací a sušenými sprejováním do horkého vzduchu, v různých hmotnostních poměrech (od 1 : 1 do 1 : 4). Směs se plní do želatinových kapslí pro perorální použití.

Příklad 2: N-acylace směsi fosfolipidů PE a PC

Fosfolipidy PE a PC se extrahují z vaječných žloutků n-butanolem a srazí se bezvodým acetonem, jak uvedeno v bodě 1 (příklad 1). Směs fosfolipidů PE. a PC v toluenovém roztoku se N-acyluje kyselinou palmitovou v přítomnosti karbonyldiimidazolu a pyridinu, jak bylo uvedeno v bodě 3 (příklad 1). Fosfolipidy N-acyl-PE ve směsi s PC se izolují po odpaření toluenu a pyridinu ve vakuové rotační odparce srážením v přebytku acetonu při -5 °C, jak bylo uvedeno v bodě 3 (příklad 1). Získaná směs fosfolipidů N-acyl-PE a PC může být použita k přípravě perorálního preparátu suspendováním fosfolipidů v rostlinném oleji s použitím ultrazvukové vodní lázně. Uvedená suspenze fosfolipidů v rostlinném oleji se plní do želatinových kapslí pro perorální použití.

Claims (6)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Způsob výroby přípravku s dieteticko-preventivním a léčebným účinkem na bázi přírodních alkyl-fosfolipidů, vyznačující se tím, že izolované fosfatidylethanolaminové fosfolipidy samostatně nebo ve směsi s fosfatidylcholinem ze žloutků neoplodněných slepičích vajec, které obsahují prekurzor l-0-oktadecyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfo-ethanolamin, jsou acylovány kyselinou palmitovou v přítomnosti karbonyldiimidazolu v ekvimolámím poměru v toluenovém roztoku a v přítomnosti pyridinu při teplotě od 40 °C do 45 °C po dobu šesti hodin; získané N-acylované fosfatidylethanolaminy, které obsahují alkyl-fosfolipid s význačným selektivním protinádorovým účinkem, který byl chemicky charakterizován jako l-0-oktadecyl-2oleoyl-sn-glycero-3-fosfo-(N-palmitoyl)ethanolamin, zkráceně PNAE(s), se izolují po odpaření rozpouštědel na rotační vakuové odparce při 45 °C vysrážením v přebytku acetonu při teplotách od-15°C do +5 °C.
2. 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že výchozí fosfatidylethanolaminové fosfolipidy, obsahující prekurzor l-0-oktadecyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfo-ethanolamin. se připraví ze žloutků neoplodněných slepičích vajec tak, že se nejdříve izoluje směs fosfolipidů a neutrálních lipidů extrakcí nativních nebo zmražených žloutků n-butanolem při 20 °C až 37 °C a po oddělení bílkovin filtrací a zahuštěním extraktu ve vakuu při teplotě do 45 °C se fosfolipidy oddělí od neutrálních lipidů srážením v přebytku acetonu při teplotě od -5 °C do +5 °C a z oddělených fosfolipidů se dále izolují preparativní chromatografií fosfatidylethanolaminy, oddělené od fosfatidylcholinu na koloně silikagelu v soustavě n-butanol : voda, gradient od 5 % H₂O do 10 % H₂O v n-butanolu.

   - 5 CZ 282139 B6
3. 3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se vlastní účinná látka, t.j. 10-oktadecyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosfo-(N-palmitoyl)ethanolamin, obsažený v N-palmitoylfosfatidylethanolaminové frakci fosfolipidů, převede do finální lékové formy přípravku smísením se sušenými vaječnými žloutky z normálních slepičích vajec ve hmotnostním poměru 1 : 1 nebo 1 : 4, pro perorální použití.
4. 4. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se připraví léková forma účinné látky PNAE(s) ve formě injekcí nebo čípků, po předcházející chromatografické purifíkaci alkyl-fosfolipidu PNAE(s).
5. 5. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se připraví perorální léková forma účinné látky PNAE(s) ve formě suspenze v rostlinném oleji a také pro zevní aplikaci na kůži k prevenci a terapii kožních nádorů.
6. 6. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se ze směsi fosfatidylethanolaminů s fosfatidylcholinem neizolují fosfatidylethanolaminy, ale směs fosfolipidů se acyluje přímo kyselinou palmitovou za přítomnosti karbonyldiimidazolu; vzniklá směs N-acylovaných fosfatidylethanolaminů a fosfatidylcholinu obsahuje biologicky účinný alkyl-fosfolipid PNAE(s) se selektivním protinádorovým účinkem.