CZ279397A3 - Carlsberg subtilisin variant, cleansing agent in which said variant is comprised and a gene encoding thereof - Google Patents

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká varianty subtilisinu Carlsberg, která je užitečná jako složka čistícího prostředku, čistícího prostředku, který ji obsahuje, a genu, který kóduje tuto novou variantu subtilisinu Carlsberg.

Dosavadní stav techniky

Enzymy tvoří největší třídu přirozeně se vyskytujících proteinů. Každá skupina enzymů obvykle katalýzuje (urychluje reakci s tím, aniž by se současně spotřebovávala) jiný druh chemické reakce. Jedna skupina enzymů, známá jako proteasy, je známa svoji schopností hydrolyzovat (rozkládat sloučeninu na dvě nebo více jednodušších sloučenin za přijetí části H a OH z molekuly vody na obou stranách štěpené chemické vazby) jiné proteiny. Tato schopnost hydrolyzovat proteiny je výhodná pro to, aby se přirozeně vyskytující a proteinovým inženýrstvím připravené proteasy zahrnuly jako přísady do pracích detergentních prostředků. Mnoho skvrn na oděvech je proteinového původu. Proteasy se širokou specifičností mohou podstatným způsobem zlepšit odstraňování těchto skvrn.

Naneštěstí účinné množství těchto proteinů v jejich přirozeném bakteriálním prostředí se často nepřenáší do relativně nepřirozeného prostředí při praní. Konkrétně - takové vlastnosti proteas, jako je tepelná stabilita, stabilita vůči pH, stabilita vůči oxidaci a substrátová specifičnost nejsou nutně optimalizovány pro použití mimo přirozené prostředí enzymu.

Aminokyselinová sekvence proteasy určuje vlastnosti proteasy. Změna aminokyselinové sekvence proteasy může změnit vlastnosti enzymu do různého stupně nebo může dokonce enzym deaktivovat, podle umístění, povahy a/nebo velikosti změny v aminoky2 selinové sekvenci. Bylo použito několik způsobů pro měnění přírodní aminokyselinové sekvence proteas při pokusu zlepšit jejich vlastnosti s cílem zvýšit účinnost proteasy v pracím prostředí. Mezi tyto přístupy patří změna aminokyselinové sekvence, aby se zvýšila tepelná stabilita a zlepšila stabilita vůči oxidaci za zcela různých podmínek.

Přes různé přístupy popsané v oblasti techniky existuje stálá potřeba nových účinných variant proteas užitečných pro čištění různých povrchů.

Předmětem předloženého vynálezu je získat varianty subtilisinu enzymu Carlsberg se zlepšenou hydrolýzou při srovnání s přírodním enzymem.

Předmětem předloženého vynálezu je také získat čistící prostředky, které obsahují tyto varianty subtilisinového enzymu.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká variant subtilisinu Carlsberg s modifikovanou aminokyselinovou sekvencí přírodní aminokyselinové sekvence subtilisinu Carlsberg, která obsahuje oblast první smyčky, oblast druhé smyčky, oblast třetí smyčky, oblast čtvrté smyčky a oblast páté smyčky, při čemž modifikovaná sekvence obsahuje jiné aminokyseliny než ty, které se vyskytují v přírodním subtilisinu Carlsberg (tj. substituce) ve specificky identifikovaných polohách v jedné nebo ve více oblastech smyček, při čemž varianta subtilisinu Carlsberg má sníženou adsorpci na nerozpustný substrát a zvýšenou hydrolýzu nerozpustného substrátu při srovnáni s přírodním subtilisinem Carlsberg. Předložený vynález se také týká genů, které kódují tyto varianty subtilisinu Carlsberg. Předložený vynález se týká také prostředků, které obsahují tyto varianty subtilisinu Carlsberg pro čištění různých povrchů.

Tento vynález se týká subtilisinových enzymů, zvláště subtilisinu Carlsberg, který byl modifikován mutací různých nukleotidových sekvencí, které kódují tento enzym, a tím modifikováním aminokyselinové sekvence enzymu. Modifikované subtilisinové enzymy (zde dále varianty subtilisinu Carlsberg) podle předloženého vynálezu mají sníženou adsorpci na nerozpustný substrát a zvýšenou hydrolýzu nerozpustného substrátu při srovnání s přírodním typem subtilisinu. Předložený vynález se týká také mutovaných genů, které kódují varianty subtilisinu Carlsberg.

Subtilisinové enzymy podle tohoto vynálezu patří do skupiny enzymů známých jako proteasy. Proteasa je katalyzátor, který štěpí peptidové vazby. Jedním typem proteasy je serinová proteasa. Serinová proteasa se odlišuje tím, že má podstatný serinový zbytek v aktivním místě.

Zjištění, že rychlost enzymové hydrolýzy rozpustných substrátů se zvyšuje s koncentrací enzymu, je dobře dokumentována. Zdálo by se tedy pravděpodobné, že u substrátů vázaných na povrch, jako jsou ty, s nimiž se setkáváme při mnoha čistících aplikacích, by se rychlost hydrolýzy zvyšovala se zvyšující se povrchovou koncentrací. Bylo ukázáno, že tomu tak skutečně je [Brode P.F.III a D.S.Rauch, Langmuir, Subtilisin BPN': Activity on an Immobilized Substráte 8, 1325 až 1329 (1992).]. Lineární závislost rychlosti na povrchové koncentraci byla skutečně nalezena pro nerozpustné substráty, jestliže se měnila povrchová koncentrace enzymu [Rubingh D.N., Bauer M.D.: Catalysis of Hydrolysis by Proteases at the Protein-Solution Interface v Polymer Solutions, Blends and Interfaces, I. Noda a D.N.Rubingh (red.), Elsevier, str. 464 (1992).]. Když byla hledána aplikace tohoto principu pro hledání variant proteas, které poskytují lepší provedení čištění, překvapivě jsme nenalezli enzymy, které se adsorbují více a které by poskytovaly lepší provedení. Překvapivě jsme zjistili opak tohoto stavu: snížená adsorpce enzymu na substrát vedla ke zvýšení hydrolýzy substrátu (tj. lepšímu provedeni čištění).

Bez ohledu na teorii se předpokládá, že zlepšené provedení, při srovnání jedné varianty s jinou, je výsledkem skutečnosti, že enzymy, které adsorbují méně, jsou také méně pevně vázány a tedy jsou na povrchu, z něhož má být odstraněn nerozpustný proteinový substrát, mobilnější. Při srovnatelných koncentracích enzymu v roztoku je tato zvýšená pohyblivost dostatečná pro to, aby převážila jakoukoliv výhodu, která pochází od vyšší koncentrace enzymu na povrchu.

Mutace, které jsou zde popsány, jsou navrženy tak, aby se změnila (tj. snížila) adsorpce enzymu na špíně vázané na povrch. U subtilisinu Carlsberg jisté aminokyseliny tvoří vnější smyčky na molekule enzymu. Pro účely diskuse budou tyto smyčky uváděny jako oblast první, druhé, třetí, čtvrté a páté smyčky. Konkrétně - polohy 58 až 65 tvoří oblast první smyčky, polohy 94 až 106 tvoří oblast druhé smyčky, polohy 125 až 132 tvoří oblast třetí smyčky, polohy 153 až 166 tvoří oblast čtvrté smyčky, polohy 186 až 190 tvoří oblast páté smyčky a polohy 199 až 219 tvoří oblast šesté smyčky (polohy jsou očíslovány analogicky k polohám v aminokyselinové sekvenci přírodního subtilisinu Carlsberg sekv. id. č. 1

Ala Gin Thr Val Pro Tyr Gly Ile Pro Leu Ile Lys Ala Asp Lys Val 15 10 15

Gin Ala Gin Gly Phe Lys Gly Ala Asn Val Lys Val Ala Val Leu Asp 20 25 30

Thr Gly Ile Gin Ala Ser His Pro Asp Leu Asn Val Val Gly Gly Ala 35 40 45

Ser Phe Val Ala Gly Glu Ala Tyr Asn Thr Asp Gly Asn Gly His Gly

55 60

Thr His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asp Asn Thr Thr Gly Val 65 70 75 80

Leu Gly Val Ala Pro Ser Val Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Asn 85 90 95

Ser Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Ser Gly Ile Val Ser Gly Ile Glu Trp 100 105 0

Ala Thr Thr Asn Gly Met Asp Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly Ala 5 120 125

Ser Gly Ser Thr Ala Met Lys Gin Ala Val Asp Asn Ala Tyr Ala Arg 130 135 140

Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Ser Gly Asn Ser Gly Ser

145 150 155 160

Thr Asn Thr Ile Gly Tyr Pro Ala Lys Tyr Asp Ser Val Ile Ala Val

165 170 175

Gly Ala Val Asp Ser Asn Ser Asn Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val Gly 180 185 190

Ala Glu Leu Glu Val Met Ala Pro Gly Ala Gly Val Tyr Ser Thr Tyr 195 200 205

Pro Thr Asn Thr Tyr Ala Thr Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Ser Pro 210 215 220

His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys His Pro Asn Leu

225 230 235 240

Ser Ala Ser Gin Val Arg Asn Arg Leu Ser Ser Thr Ala Thr Tyr Leu

245 250 255

Gly Ser Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Glu Ala Ala 260 265

270

Ala Gin

274 (sekv. id. č. 1)

Předpokládá se, že tyto oblasti smyček hrají významnou roli v adsorpci molekul enzymu na peptid navázaný na povrch. Specifické mutace v jedné nebo více oblastech těchto smyček budou mít významný vliv na tuto adsorpci. Bez ohledu na teorii se předpokládá, že oblasti těchto smyček jsou důležité pro adsorpci molekuly subtilisinu Carlsberg z alespoň dvou důvodů. Za prvé, aminokyseliny, které obsahují oblasti smyček, mohou mít těsný kontakt s jakýmkoliv povrchem, kterému je molekula vystavena. Za druhé, blízkost oblastí smyček k aktivnímu místu a vazebné kapse molekuly substilisinu Carlsberg jim dává roli při katalyticky produktivní adsorpci enzymu na substráty vázané na povrch (peptidová/proteinová ušpinění).

Pojem varianta'’ tak, jak se zde používá, znamená enzym s takovou aminokyselinovou sekvencí, která se liší od sekvence přírodní.

Pojem gen mutantu substilisinu Carlsberg tak, jak je zde používán, znamená gen kódující variantu subtilisinu Carlsberg.

Pojem přírodní subtilisin Carlsberg tak, jak se zde používá, se týká subtilisinového enzymu shora uvedené sekv. id. č. 1. Aminokyselinová sekvence subtilisinu Carlsberg je dále popsána Smithem E.L., Delangem R.J., Evansem W.H., Landonem M. a Marklandem F.S.: J. Biol. Chem. 243. 2184 až 2191 (1968), zahrnuté zde jako citace.

Pojem přírodní aminokyselinová sekvence subtilisinu Carlsberg zahrnuje sekv. id., č. 1 stejně jako modifikace této aminokyselinové sekvence jiné než v jakékoliv z poloh 58 až 65, 94 až 106, 125 až 132, 153 až 166, 186 až 190 a 199 až 219.

Pojem hydrofilnějši aminokyselina tak, jak se zde použí7 vá, znamená jakoukoliv jinou aminokyselinu, která má větší hydrof i lnost než dotyčná aminokyselina s odkazem na hydrofilnosti uvedené níže v tabulce 1. Tabulka následujících hydrofilnosti seřazuje aminokyseliny podle klesajícího pořadí zvyšující se hydrofilnosti [viz Hopp T.P. a Woods K.R.: Prediction of Protein Antigenic Determinante from Amino Acids Sequences, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 78, 3824 až 3828 (1981), která je zde zahrnuta jako citace.].

Tabulka 1

aminokyselina	hodnota	hydrolifnosti
Trp			-3,4
Phe			-2,5
Tyr			-2,3
Leu,	Ile		-1,8
Val			-1,5
Met			-1,3
Cys			-i,o
Ala,	His		-0,5
Thr			-0,4
Pro,	Gly		-0,0
Gin,	Asn		0,2
Ser			0,3
Arg+, Lys+	, Glu“,	Asp	3,0

Tabulka l také ukazuje, které aminokyseliny nesou náboj (tato vlastnost je odvozena od pH 8 až 9). Positivně nabitými aminokyselinami jsou Arg a Lys, negativně nabitými aminokyselinami jsou Glu a Asp, zbývající aminokyseliny jsou neutrální. Ve výhodném provedení podle předloženého vynálezu je substituující aminokyselina nabitá buď neutrálně nebo negativně, výhodněji negativně (tj. Glu nebo Asp).

Tak například konstatování substituovat Gin stejně hydro8 filní nebo hydrofilnější aminokyselinou, která je neutrální nebo má negativní náboj” znamená, že Gin by měl být substituován Asn (která je stejně hydrofilní jako Gin) nebo Ser, Glu či Asp (které jsou hydrofilnější než Gin), každá z nich je neutrální nebo má negativní náboj a má větší hodnotu hydrofilnosti než Gin. Podobně konstatování substituovat Pro hydrofilnější aminokyselinou, která je neutrální nebo má negativní náboj znamená, že Pro by měl být substituován Gin, Asn, Ser, Glu nebo Asp.

V jednom provedení podle předloženého vynálezu varianta subtilisinu Carlsberg má modifikovanou aminokyselinovou sekvenci subtilisinu Carlsberg přírodního typu, při čemž přírodní aminokyselinová sekvence obsahuje substituci v jedné nebo ve více polohách v jedné nebo ve více oblastech první, druhé, třetí, čtvrté, páté nebo šesté smyčky, při čemž varianta subtilisinu Carlsberg má sníženou adsorpci na nerozpustný substrát a zvýšenou hydrolýzu nerozpustného substrátu při srovnání s přírodním subtilisinem Carlsberg.

Ve výhodném provedení podle předloženého vynálezu substituující aminokyselina v jedné nebo více polohách v jedné ve ve více oblastech smyček je, s odkazem na tabulku 1, neutrálně nebo negativně nabitá a je stejně hydrofilní nebo hydrofilnější, s výhodou hydrofilnější než aminokyselina v příslušné poloze přírodní aminokyselinové sekvence.

Jestliže k substituci dochází v oblasti první smyčky, pak dochází k substituci v jedné nebo více z poloh 58, 59, 60, 61, 62, 64 nebo 65.

Jestliže	se substituce	vyskytuje	v	poloze	58,	potom	je
substituující	aminokyselinou	Asn, Asp,	Gin, Glu,	Gly	, Pro nebo
Ser.
Jestliže	se substituce	vyskytuje	v	poloze	59,	potom	je
substituující	aminokyselinou	Glu.
Jestliže	se substituce	vyskytuje	v	poloze	60,	potom	je
substituující	aminokyselinou	Asn, Asp,	Gin, Glu,	Pro	nebo Ser.
Jestliže	se substituce	vyskytuje	v	poloze	61,	potom	je

substituující aminokyselinou Asp, Gin, Glu nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 62, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 64, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 65, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v oblasti druhé smyčky, pak se tato substituce vyskytuje v jedné nebo více z poloh 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 nebo 106.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 94, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Met, Pro, Ser nebo Thr.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 95, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 96, potom je substituující aminokyselinou Asn, Gin, Glu nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 97, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 98, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 99, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 100, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 101, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 102, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 103, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 104, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 105, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 106, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.

Jestliže se substituce vyskytuje v oblasti třetí smyčky, pak se tato substituce vyskytuje v jedné nebo více z poloh 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131 nebo 132.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 125, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 126, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 127, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 128, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser nebo Thr.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 129, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 130, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 131, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 132, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v oblasti čtvrté smyčky, pak se tato substituce vyskytuje v jedné nebo více z poloh 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165 nebo 166.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 153, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 154, potom je substituující aminokyselinou Asp, Gin, Glu nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 155, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 156, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 157, potom je substituující aminokyselinou Asp, Gin, Glu nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 158, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 159, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 160, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 161, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 162, potom je substituující aminokyselinou Asp, Gin, Glu nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 163, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 164, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 165, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 166, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.

Jestliže se substituce vyskytuje v oblasti páté smyčky, pak se tato substituce vyskytuje v jedné nebo vice z poloh 186, 187, 188, 189 nebo 190.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 186, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser a Thr.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 187, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 188, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Tyr nebo Val.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 189, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 190, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v oblasti šesté smyčky, pak se tato substituce vyskytuje v jedné nebo více z poloh 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218 nebo 219.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 199, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser nebo Thr.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 200, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 201, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 202, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser nebo Thr.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 203, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 204, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Met, Pro, Ser nebo Thr.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 205, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 206, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 207, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 208, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 209, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 210, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 211, potom je substituující aminokyselinou Asp, Gin, Glu nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 212, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 213, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 214, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser nebo Thr.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 215, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 216, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 217, potom je substituující aminokyselinou Asp, Gin, Glu nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 218, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.

Jestliže se substituce vyskytuje v poloze 219, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Mutantní geny subtilisinu Carlsberg

Zkonstruuje se fagemid (CP) obsahující gen přírodního subtilisinu Carlsberg. PvuII restrikční enzymový fragment o 2800 párech nukleotidů (pn) z plasmidu pUC119 [Vieira J. a Messing J.: Production of Single-Stranded Plasmid DNA, Methods in Enzymology 153. 3 až (1989).] se klonuje do Pvu II místa plasmidu pUBUO (Bacillus Genetic Stock Center, Columbus, Oh. 1E9). pUC119-pUB110 hybridní plasmid se nazve pJMA601. Do Bam H1 restrikčního místa pJMA601 se klonuje polymerasovou řetězovou reakcí amplifikovaný gen subtilisinu Carlsberg poskytující CP. Fagemid CP se transormuje do Escherichia coli ung-kmene J236. Použitím VCSM13 pomocného fágu se vyrobí jednovláknový uráčil obsahující DNA templát [Kunkel T.A., Roberts J.D., Zakour R.A.: Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection, Methods in Enzymology 154. 367 až 382 (1987) podle modifikace popsané v práci Yuckenberg P.D., witney F., Geisselsoder J. a McClary J.: Site-directed in vitro mutagenesis using uracil-containi DNA and phagemid vectors, Directed Mutagenesis - A Practical Approach, M.J. Mc Pherson (red.), str. 27 až 48, (1991); obě práce jsou zde zahrnuty jako odkazy]. Pro výrobu všech mutantů (v podstatě podle Yuckenberga a spol., 1991, viz shora) se použije modifikace místně řízené mutagenese s jediným primerem podle způsobu Zollera a Smithe [Zoller M.J. a Smith M.: Oligonucleotide-directed mutagenesis using M13-derived vectors: an efficient and generál proceduře for the production of point mutations in any fragment of DNA, Nucl. Acids Res. 10, 6487 až 6500 (1982), zahrnuté zde jako odkaz]. Oligonukleotidy se vyrobí DNA syntetizátorem Applied Biosystem lne. 380B. Reakční produkty mutagenese se transformují do Escherichia coli kmen MM294 (American Type Culture Collection E. coli 33625). Všechny mutanty byly potvrzeny DNA sekvenováním a isolovaná DNA byla transformována do Bacillus subtilis expresního kmene BG2036 [Yang M.Y., Ferrari E. a Henner D. J.: Cloning of the Neutrál Protease Gene of Bacillus subtilis and the Use of the Cloned Gene to Create an In Vitro-derived Deletion Mutation, J. Bacteriol. 160_f 15 až 21 (1984).]. U některých mutantů smyček se pro přípravu uracilového templátu používá modifikovaný CP s mutací posuvného stop kodonu v odpovídající smyčce. Byly navrženy oligonukleotidy pro příslušnou čtecí oblast a kódování náhodných substitucí v polo-

hách 58, 59, 60, 61, 62,	64, 65, 94, 106, 125,	95, 96, 97, 98, 99,	100, 130,
101,	102,	103, 104, 105,	126, 127,	128,	129,
131,	132,	153, 154	, 155,	156, 157,	158, 159,	160,	161,	162,
163,	164,	165, 166	, 186,	187, 188,	189, 190,	199,	200,	201,
202,	203,	204, 205	, 206,	207, 208,	209, 210,	211,	212,	213,
214,	215,	216, 217,	218 a/nebo 219 (ekvimolární	a/nebo proměnné

směsi všech čtyř nukleotidů pro všechny tři báze v těchto kodonech). Mutace, které jsou správné pro posuvný stop kodon a poskytují funkční enzym, se identifikují jejich schopností štěpit kasein. Náhodné substituce se stanovují DNA sekvenováním.

Příklad 2

Fermentace

Buňky Bacillus subtilis (BG2036) obsahující mutant subtilisinu, o který se jedná, se nechají růst do mid-log fáze v 1 1 živné půdy LB-glukosa. Naočkují se do fermentoru Biostat ED (B. Braun Biotech, lne., Allentown, Pensylvánie) v celkovém objemu 10 litrů. Fermentační medium obsahuje kvasinkový extrakt, škrob, protipěnivé činidlo, pufry a stopové minerály [viz: Fermentation: A Practical Approach, B. McNeil, L.M. Harvey (red.), 1990.]. Živná půda se během fermentace udržuje na konstantním pH 7,0. Pro antibiotickou selekci mutagenizovaného plasmidu se přidá chloramfenikol. Buňky se nechají růst přes noc při 37 °C do A_6Oo kolem 60 a pak se isolují.

Příklad 3

Čištění

Fermentační živná půda se zpracuje následujícími stupni, aby se získal čistý enzym. Živná půda se zbaví buněk Bacillus subtilis odstřelováním, vyčeří se odstraněním jemných částic 100K membránou (tj. membránou odstraňující částice o větší molekulové hmotnosti než 100 000). Následuje odstřelování na 10K membráně. Prtokovou dialýzou se sníží iontová síla a 0,025M MES pufrem (2-(N-morfolino)ethansulfonová kyselina) se upraví pH na 5,5. Enzym se dále vyčistí tak, že se nanese bučí na chromatografickou kolonu s katexem nebo na chromatografickou kolonu s afinitním adsorbentem. Eluuje se z kolony gradientem NaCl nebo propylenglykolu [viz Scopes R.K.: Protein Purification Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1984), zahrnuté zde jako citace.].

Pro stanovení koncentrace aktivního enzymu ve frakcích získaných gradientovou elucí se použije pNA test [DelMar E.G., Largman C., Brodrick J.W., Geokas M.C.: Anal. Biochem. 99, 316 až 320 (1979), zahrnuto zde jako odkaz.]. Tento test měří rychlost, jakou se uvolňuje p-nitroanilin, když enzym hydrolyzuje syntetický substrát, sukcinyl-alanin-alanin-prolin-fenylalanin-p-nitroanilid (sAAPF-pNA). Rychlost vzniku žluté barvy při hydrolyzační reakci se měří při 410 nm na spektrofotometru. Tato rychlost je úměrná koncentraci aktivního enzymu. Měření absorbance při 280 nm se navíc používá pro stanovení koncentrace celkového proteinu. Poměr aktivní enzym/celkový protein udává čistotu enzymu a používá se pro identifikování frakcí, které se mají spojit jako zásobní roztok.

Abychom se vyhnuli autolýze enzymu během skladování, přidá se ke spojeným frakcím, získaným z chromatografické kolony, stejná hmotnost prolylenglykolu. Po ukončení postupu čištění se čistota enzymového zásobního roztoku zkontroluje SDS-PAGE (gelová elektroforesa na dodecylsulfátpolyakrylamidu). Absolut17 ní koncentrace enzymu se stanoví způsobem titrace aktivních míst použitím inhibitoru trypsinu typu II-T: vaječný bílek krocana dodaný Sigma Chemical Company (St. Louis, Missouri). Změřené konverzní faktory ukáží, které změny, k nimž došlo v různých polohách molekuly enzymu, vedou k enzymové variantě se zvýšenou aktivitou při srovnání s přírodním enzymem na rozpustný substrát pNA.

Při přípravě pro použití se enzymový zásobní roztok eluuje vytěsňovací kolonou se Sephadexem G25 (Pharmacia, Piscataway, New Yersey), aby se odstranil propylenglykol a aby se změnil pufr. MES pufr v enzymovém zásobním roztoku se zamění za O,1M Tris pufr (tris(hydroxymethyl)aminomethan) obsahující 0,01M CaCl₂, pH bylo upraveno HC1 na 8,6. Všechny pokusy se provádějí při pH 8,6 v Tris pufru při teplotě udržované termostatem na 25 °C.

Přiklad 4

Příprava modelového povrchu

Aminopropylsklo s regulovanou velikostí pórů (CPG) od CPG lne. (Fairfield, New Jersey) se použije jako nosič pro kovalentní připojení sAAPF-pNA substrátu získaného od Bachem, lne., Torrence, Kalifornie). Reakce se provádí v dimethylsulfoxidu. Jako kondenzační činidlo se použije hydrochlorid (l-ethyl-3-[3-(dimethylamino)propyl]karbodiimidu (EDC). Po ukončení reakce (sledováno pNA testem) se nadbytek rozpouštědla odstraní, CPG:sAAPF-pNA se promyje dimethylsulfoxidem (DMSO) a dvakrát vodou. Následuje vysušení v sušárně proudem dusíku při 70 °C. Reakční schéma a příprava imobilizovaného substrátu se provádí tak, jak je to popsáno Brodem P.F.III a D.S.Rauchem: Subtilisin BPN': Activity on an Immobilized Substráte, Langmuir 8, 1325 až 1329 (1992), zahrnuto zde jako odkaz.].

CPG povrch bude mít 62 000 ± 7000 pNA molekul/μιη². Plocha povrchu zůstává nezměněna od hodnoty 50,0 m²/g, jaká pro CPG u18 vádí CPG lne. To ukazuje, že tento postup použitý pro přidání sAAPF-pNA na CPG nepoškozuje porézní strukturu (střední průměr je 48,6 nm).

Příklad 5

Test povrchové hydrolýzy

Použitím CPG: sAAPF-pNF lze v jediném pokusu změřit adsorpci varianty enzymu a hydrolýzu peptidu navázaného na CPG. Malé množství zásobního roztoku varianty enzymu se přidá do baňky, která obsahuje Tris pufr a CPG:sAAPF-pNA, z nichž byl odstraněn plyn. Baňka se třepe ručním šejkrem 90 minut, při tom se šejkr v různých časových intervalech zastavuje (například každé 2 minuty během počátečních stadií adsorpční hydrolýzy, například prvních 20 minut, a každých 10 minut na konci pokusu). CPG: :sAAPF-pNF se nechá usadit. Roztok se rozdělí na vzorky. Jak experimentální postup tak výpočet adsorpce a hydrolýzy se provádějí tak, jak popsali Brode a spol., viz shora 1992.

U všech enzymů byla sledována stabilita na autolýzu. Enzymy by neměly vykazovat velké autolytické ztráty během doby pokusu. Adsorpce enzymu může být tedy stanovena měřením vyčerpání roztoku. Rozdíly mezi původní koncentrací varianty enzymu a koncentrací změřené v každém jednotlivém čase udává množství adsorbované varianty enzymu. Množství pNA hydrolyzovaného na povrchu se měří odečtením absorbance vzorku při 410 nm. Celkové množství hydrolyzovaného pNA se vypočte tak, že se sečte množství vzorku a množství zbývající v baňce. Tato hodnota se opraví odečtením množství pNA, které bylo hydrolyzováno Tris pufrem při pH 8,6, když nebyl přítomen žádný enzym. Toto základní hydrolyzační rozmezí bylo 7 až 29 % z celkové hydrolýzy podle účinnosti enzymu.

Příklad 6

Analýza kinetiky rozpustného substrátu

Rychlost hydrolýzy rozpustného substrátu sAAPF-pNF se sleduje měřením zvýšení absorbance jako funkce času při 410 nm na spektrofotometru DU-70. Koncentrace enzymu se udržuje konstantní a připravuje se tak, aby byla v rozmezí 6 až 10 nanomolů, zatímco koncentrace substrátu se pohybuje mezi 90 a 700 μΜ sAAPF-pNF pro každé kinetické stanovení. Absorpční data se stanovují každou vteřinu po dobu 900 sekund. Data se přenesou do zařízení Lotus™ spreadsheet (Lotus Development Corporation, Cambridge, Massachusetts). Analýza kinetických parametrů se provádí standardní Lineweaver Burkovou analýzou, při které data na počátku pokusu (obvykle první minuta) odpovídají lineární regresní křivce, takže dají v_o. Data v_o a s_o se vynesou standardním inverzním způsobem, takže se získá K_H a k_kat.

Příklady variant subtilisinu Carlsberg

Příklady variant subtilisinu Carlsberg podle předloženého vynálezu, které mají sníženou adsorpci na povrchu substrátu a zvýšenou hydrolýzu substrátu na povrchu, jsou uvedeny níže v tabulkách 3 až 36. Při popisu specifických mutací se uvádí nejdříve aminokyselina, která se vyskytuje v přírodním typu, jako druhé je uvedeno číslo polohy a substituující aminokyselina je uváděna jako třetí.

Tabulka 2 smyčka 1 - varianty s jednou mutaci Thr58Asn Thr58Asp Thr58Gln Thr58Glu Thr58Gly Thr58Pro ThrS8Ser Asp59Glu Gly60Asn GlySOAsp Gly60Gln Gly60Glu Gly60Pro Gly60Ser Asn61Asp Asn61Gln Asn61Glu Asn61Ser Gly62Asn Gly62Asp Gly62Gln Gly62Glu Gly62Pro Gly62Ser Gly64Asn Gly64Asp Gly64Gln Gly64Glu Gly64Pro Gly64Ser ThriS5Asn Thr65Asp Thrt55Gln Thr65Glu Thr65Gly Thrt35Pro Thr65Ser

Tabulka 3 smyčka 1 - varianty se dvěma mutacemi

Thr58Gln + Asn61Glu Asn61Asp + Thr65Pro

Thr58Gln + Asp59Glu Thr58Gln + Gly62Ser Gly62Asn + Thr65Pro Thr58Gln + Gly60Asp Thr58Pro + Gly60Glu Asn61Asp + Thr65Ser Asp59Glu + Gly60Gln Asp59Glu + Gly60Pro Gly62Asp + Gly64Gln Asr>61 Ser + Thr€5Pro Thr58Asp + GlySOGIn Gly6OSer + Gly62Gln Asp59Glu + Gly62Pro Gly62Asp + Thr65Gly Asn61Gln + Thrf35Pro Asn61Gln + Gly64Asn GlySOGIn + Gly62Gln Thr58Gly + Asn61Asp Thr58Gln + Gly62Gln Gly60Asn + Gly62Gln GlySOAsn + Gly62Asp Thr58Glu + Gly62Pro Gly64Asp + Thr65Pro Asp59Glu + Thrf55Ser GlySOGIn + Thr65Gln Asp59Glu + Gly62Ser Asn61Glu + Gly64Gln Asp59Glu + GlySOSer GlySOSer + Gly62Ser Thr58Gly + Gly64Glu Thr58Asn + Asn61 Ser Asp59Glu + Thrt55Asn Gly60Asn + Asn61Ser GlySOGIu + Gly62Gln Thr58Pro + Gly62Asp Thr58Ser + Asp59Glu Thr58Asp + Gly62Pro Asr»61Asp + Gly62Pro Thr58Ser + Gly62Ser GlySOAsn + Gly62Ser Gly64Pro + Thr65Asn Gly64Asp + Thr€5Gln Gly64Glu + Thr65Pro Gly64Asn + Thr€5Pro Asn61Ser + Gly64Asp

Tabulka 4 smyčka 1 - varianty se třemi mutacemi

Thr58Pro + GÍy64Ser + Thr65Gly Asn61Glu + Gly62Gln + Thr65Gln Thr58Gln + Gly62Ser + Gly64Pro Asp59Glu + Gly62Asn + Thr€5Pro Thr58Pro + Gly60Glu + Gly64Asn Thr58Asn + Gly64Ser + Thr65Gly Asp59Glu + Asn61Gln + Gly64Ser Thr58Asn + Asn61GIu + Thr65Pro Gly60Pro + Asn61Asp + Thr€5Pro Thr58Glu + Gly62Gln + Gly64Asn Thr58Asn + Gly62Glu + Gly64Pro Thr58Ser + Asp59Glu + Thr€5Asn Thr58Glu + Gly62Asn + Gly64Gln Thr58Pro + Asp59Glu + Gly62Ser Gly60Asn + Asn61Asp + Gly62Asn Gly62Asp + Gly64Ser + Thr65Pro Asp59Glu + GlybOAsn + Thr65Asn Thr58Gly + Gíy60Pro + Thr65Gly Thr58Gln + Gly60Glu + Asn61 Gin GiyGOPro + Asn61Gln + Gly64Asp Thr58Asn + Gly62Asn + Thrf35Pro Thr58Pro + Asp59Glu + Gly64Asn Thr58Pro + Asn61Ser + Gly62Asp Thr58Asp + Gly60Pro + Gly62Asn Thr58Ser + Gly60Pro + Asn61 Asp GlyGOGIn + Gly62Gln + Gly64Pro Asp59Glu + Asn61Gln + Thr65Asn Gly60Asp + Asn61Gln + Thr65Pro Asn61Glu + Gly62Glu + Thr65Pro Thr58Asp + Asp59Glu + Thr65Gln Thr58Glu + Asp59Glu + Thr65Ser ThrSSGIu + Asp59Glu + Thr€5Gly

Tabulka 5 smyčka 1 - varianty se čtyřmi mutacemi

Asp59Glu + Gly60Pro + Gly62Asn + Gly64Gln Thr58Pro + Gly60Pro + Gly62Glu + Thr65Gln Thr58Ser + Gly60Pro + Gly64Gln + Thr€5Pro Thr58Pro + Asp59Glu + Asn61 Ser + Gly62Asn Thr58Glu * Gly60Asn + Gly64Ser + Thr€5Pro Thr58Glu + Gly6OSer + Asn61Gln + Tbr 65Gln Thr58Pro + Asp59Glu + Gly60Asn + Asn61Gln Thr58Gly + Gly60Pro + Gly62Glu + Thr65Ser Gly60Asp + Gly62Ser + Gly64Gln + Thr65Gly Thr58Asn + GlyGOPro + Gly62Ser + Gly64Asp

Thr58Pro + Asp59Glu + Gly60Asn + Gly62Asn Asn61Asp + Gly62Gln + Gly64Pro + Thr65Asn Thr58Asp + Gly60Pro + Gly62Asn + Gly64Ser Thr58Asp + Gly60Gln + Gly62Pro + Thr65Asn Thr58Asn + Asn61Asp + Gly62Glu + Thr65Gly Thr58Ser + Gly60Ser + Asr»61Asp + Gly62Glu Thr58Glu + Asp59Glu + Asn61Gln + Thr65Ser Thr58Asp + Asp59Glu + Gly62Pro + Thr65Gly Gly60Asp + Asn61Asp + Gly62Ser + Thr€5Gly Gly60Glu + Asn61Glu + Gly62Gln + Gly64Pro Thr58Pro + Gly60Asp + Asn61Asp + Gly64Asn Asp59Glu + Gly60Asp + Gly64Gln + Thr65Ser Asp59Glu + Gly60Asp + Gly64Gln + Thr65Pro Thr58Pro + Asp59Glu + GlySOAsp + Gly64Asn Thr58Ser + Asp59Glu + Gly60Asp + Gly62Asn Asp59Glu + Gly60Glu + Asn61Glu + Gly62Ser Thr58Glu + Asp59Glu + GlySOAsp + Thr65Pro Asp59Glu + Gly6OAsp + Gly62Glu + Thr65Pro Thr58Ser + Asp59Glu 4 AsrtGIAsp + Gly62Asp

Tabulka 6 smyčka 2 - varianty s jednou mutaci _

Val 94Asn Val 94Asp Val 94Cys Val 94Gln Val 94Glu Val 94Gly Val 94His Val 94Met Val 94Pro Val 94Sar Val 94Thr Leu 95Ala Leu 95Asn Leu 95Asp Leu 95Cys Leu 95Gln Leu 95Glu Leu 95Gly Leu 95His Leu 95lle Leu 95Met Leu 95Pro Leu 95Ser

Leu 95Thr Leu 95Val Asn 96Asp Asn 96Gln Asn 96Glu Asn 96Ser Ser 97 Asp Ser 97Glu Ser 98Asp Ser 98Glu Gly 99Asn Gly 99Asp Gly 99Gln Gly 99Glu Gly 99Pro Gly 99Ser SerlOOAsp SerlOOGIu Gly101Asn Gly1O1Asp Gly101Gln Gly1O1Glu Gly 101 Pro Gly101Ser Ser102Asp Ser 102 Glu Tyr103Ala Tyr103Asn Tyr103Asp Tyr103Cys Tyr103Gln Tyr103Glu Tyr103Gly Tyr103His Tyr103lle Tyr103Leu Tyr103Met Tyr103Pro Tyr103Ser Tyr103Thr Tyr103Val Ser104Asp Ser104Glu Gly105Asn Gly105Asp Gly105Gln Gly105Glu

Gly105Pro Gly105Ser lle106Ala Ile 106 Asn Ile 106 Asp lle106Cys lle106Gln lle106Glu lle106Gly lle106His lle1O6Leu lle106Met lle106Pro lle106Ser lle106Thr lle106Val

Tabulka 7 smyčka 2 - varianty se dvěma mutacemi

Val 94Gln + SerlOOGIu Asn 96Ser + Gly 99Gln Gly 99Glu + lle106Met Ser 97Asp + Gly105Gln Ser102Glu + Tyr103Asn SerlOOGIu + Ile 106Gly Asn 96Asp + He106Ser Gly 99Ser + SerlOOGIu Gly101Gln + Gly105Ser Asn 96Asp + Gly 99Pro Asn 96Gln + Ser104Asp Leu 95Glu + Tyr103Pro Asn 96Ser + Gly101Asp Leu 95Val + Ser 97Glu Leu 95Ala + Gly 99Pro Val 94Thr ♦ Gly 99Glu Leu 95Gln + lle106Ala Leu 95Pro + lle106Ala Leu 95Val + SerlOOGIu Gly101Gln + Tyr103Gly Asn 96Asp + lle106Pro Leu 95Ser + SerlOOAsp Gly 99Pro + SerlOOAsp Val 94Thr + Leu 95Asp SerlOOGIu + Ile 106Gln SerlOOAsp* Gly101 Pro Leu 95Cys + Gly105Asp

Ser 98Glu + Gly101Ser Gly101Asn + Tyr103Gln Val 94Met + Ser102Glu Gly 99Pro + Gly105Asp Val 94Asn ♦ Ser102Asp Val 94Cys + lle106Thr Val 94Gly + Ser104Asp Val 94Pro + Gly101Pro Val 94Ser + Gly105Glu Val 94Met + Ser 98Asp Va, 94Glr» + Ser104Asp Asn 96Ser + Ser 98Asp Ser104Glu + lle106Gln Val 94Asn + Tyr103Thr Tyr103Ala + Ser104Asp Gly 99Pro + Ser104Glu Leu 95Cys + Tyr103Leu Val 94Gly + Gly 99Ser Gly101Gln + Tyr103Ser Ser 97 Asp + Gly105Pro Ser 98Asp + Gly105Asn Gly 99Gln + SerlOOGIu Gly 99Pro + SerlOOGIu Tyr103lle + Gly1O5Ser SerlOOGIu + Gly 105Pro Asn 96Glu + Tyr103Gly Val 94Met + Gly105Asn Val 94His + Leu 95Glu SerlOOAsp + Tyr1O3Met Leu 95Met + Gly1O1Gln Gly 99Pro + Gly1O1Asp Asn 96Asp + Gly101Asn Val 94Ala + Gly 99Ser

Tabulka 8 smyčka 2 - varianty se třemi mutacemi

Val 94Gln + Leu 95Thr + SerlOOGIu SerlOOGIu + Tyr1O3Met + lle106Thr Ser 97 Asp + Gly1O1Gln + lle106Asn Leu 95Gln + Gly1O5Ser + lle106Gln Leu 95His + Gly 99Gln + SerlOOGIu Val 94His + Leu 95Met + Asn 96Gln Val 94Asn ♦ Ser 97Glu + Tyr103Pro Ser 97 Asp + Gly1O1Ser + TyríO3Met Ser 97Glu + Tyr1O3Met + lle1O6Gln Val 94Thr + Gly 99Pro + Gly105Asp

7.Ί

Leu 95Gly + Ser 98Glu + Tyr103Cys Leu 95Pro + Gly101Asp + Tyr103Gly Leu 95Val + Gly 99Pro + Ser104Asp Leu 95lle + Gly105Ser + lle106Met Ser 97Glu + Gly101Asn + lle106Thr Asn 96Ser + Gly101Asp + Tyr103Asn Val 94Pro + Ser 98Glu + lle106Asn Gly 99Pro + Tyr103Glu + lle106Ser Asn 96Asp + Gly 99Asn + Tyr103Pro Leu 95Gln + Ser 97 Asp + lle106Val Val 94Pro + Ser 98Glu + Tyr103Val Leu 95Asn + Gly101Pro + lle106His Val 94Ala + Leu 95His + SerlOOGIu Val 94Asn + Gly1O1Ser + Ser1O4Asp Val 94Cys + Gly1O5Ser + lle106Thr Leu 95Gly + Gly1O1Asp + lle106Cys Ser1O2Glu + Tyr1O3lle + lle106Gly Val 94Pro + Leu 95Asp + lle106Pro Val 94Pro + Leu 95lle + lle106Cys SerlOOAsp + Gly1O1Asp + lle106Asn Leu 95Glu + Asn 96Glu + Tyr103Pro Gly101Glu + Ser1O2Asp + Tyr1O3Leu Val 94Pro * Gly1O1Asp + Ser1O2Glu Asn 96Asp + Ser 97Asp + Gly 99Pro Ser 97Asp + Ser 98Asp + Gly 99Glu Asn 96Glu + Ser 97Asp + Gly 99Asp Gly 99Glu + SerlOOAsp + Gly1O1Asp Gly 99Glu + SerlOOGIu * Gly1O1Glu Leu 95Gln + Ser102Asp + Gly1O5Asp Asn 96Ser + Ser102Glu + Ser1O4Glu Ser102Asp + Ser1O4Glu + Gly105Pro Ser102Asp * Tyr103Ser + Ser104Glu Val 94Cys ♦ Ser 97Glu + Gly 99Asp Asn 96Asp + Ser 98Glu + lle106Thr Asn 96Asp + Ser 98Asp + IlelOGCys Asn 96Glu + Ser 98Glu + Gly105Asn Ser 98Glu + SerlOOGIu + Ile 106 Ser Ser 98Asp + SerlOOAsp + Gly101 Asn Gly101Asp + Ser102Asp + Ser104Glu Leu 95Glu + Ser 98Asp + Gly101Asp Val 94Ser + SerlOOGIu + Ser102Asp Leu 95Val + Ser 97Glu + SerlOOGIu Asn 96Gln ♦ Ser 97Asp + SerlOOAsp Asn 96Ser + Ser 97Asp + SerlOOAsp Val 94Asp + Gly 99Asn + Ser102Glu Val 94Asp + Ser102Glu + ,le106His Leu 95Asp + Gly 99Glu + Ser102Asp

Val 94Thr + Gly101Asp + Ser104Glu Gly 99Pro + Gly101Asp + Ser104Asp Ser 98Asp + Gly 101 Asp + Tyr103Pro

Tabulka 9 smyčka 2 - varianty se čtyřmi mutacemi

Val 94Met + Leu 95Asn + Ser 98Asp + Gly105Ser Asn 96Ser + Gly101Glu + Tyr103lle + Gly105Asn Leu 95Val + Ser 97Asp + Gly 99Asn + Tyr103lle Leu 95lle + Asn 96Gln + Gly 99Asn ♦ Tyr103Asp Val 94His + SerlOOGIu + Tyr103lle + lle106Met Ser 97Glu + Tyr103lle + Gly1O5Gln + lle106Ala Val 94Thr + Leu 95lle + Ser 97Asp + Gly 99Ser Val 94Thr + Leu 95Cys + Gly 99Asp + lle106Val Leu 95Cys + Ser 98Glu + Gly 99Asn + lle106Met Asn 96Gln + Ser 98Asp + Gly105Asn + lle106Gly Leu 95Thr + SerlOOGIu + Tyr103Val + lle106Pro Val 94Thr + Leu 95Val + Asn 96Glu + Tyr103Asn Val 94His + Leu 95Asn + Gly 99Gln + Gly105Gln Val 94Ala + Leu 95Thr + Ser 98Asp + Tyr103lle Leu 95Val + Gly101Gln + Tyr103Cys + lle106Glu Gly 99Pro + SerlOOGIu + Gly101Ser + Tyr103Thr Leu 95Ala + Gly101Asp + Tyr103Ser + G,y105Asn Gly 99Asn + Tyr103Asp + Gly105Asn + lle106Thr Asn 96Asp + Ser 97 Asp + Gly101Ser + Tyr103Tbr Val 94Ala + Asn 96Glu + Ser 97Asp + Gly105Asn Val 94Cys + Leu 95Gln + Asn 96Glu + Ser 97Glu Val 94Gly + Asn 96Gln + Ser104Glu + Gly105Glu Ser 97Asp + Ser 98Glu + Gly101Asn + Tyr103Val Ser 97Glu + Ser 98Asp + Gly 99Gln + Gly101Gln Leu 95Gly + Asn 96Ser + Ser 97Glu + Ser 98Glu Asn 96Glu + Ser 97Glu + Ser 98Asp + Gly101Pro

Asn 96Asp + Ser 97Asp + Ser 98Asp + Tyr103Leu Asn 96Asp + Ser 97Asp + Ser 98Glu + Tyr103Gly Leu 95Glu + Asn 96Glu + SerlOOAsp + lle106Ala Ser 97 Asp + Gly 99Glu + Tyr103Cys + Gly105Asn Va, 94Gly + Asn 96Ser + Ser 97Glu + Gly 99Asp Asn 96Ser + Tyr103Leu + Ser104Asp + tle106Glu Leu 95Ala + Asn 96Glu + Gly 99Ser + SerlOOAsp Asn 96Asp + Ser 97Glu + SerlOOGIu + lle106Val Val 94Cys + Ser 97Asp + Ser 98Asp + SerlOOAsp Ser 97 Asp + Ser 98Asp + SerlOOGIu + Tyr103Thr Asn 96Glu + Gly 99Glu + Gly101Asp + Tyr103Ala Val 94Asp + Leu 95Ala + Gly101Glu + Ser102Glu Ser 98Glu + Gly 99Pro + SerlOOAsp + Gly101Glu Val 94Glu + Asn 96Gln + Gly101Glu + He106Thr

Asn 96Ser + Ser102Asp + Tyr103Asn + lle106Asp Leu 95Cys + Ser 98Asp + Gly 99Asp + Gly101Asp SerlOOGlú + Gly101Pro + Ser102Glu + He106Ala Val 94Cys + SerlOOGlú + Gly101Pro + Sar1O2Glu Val 94Gln + SeFlOOAsp + Ser102Glu + Tyr1O3,le Ser 97 Asp + SerlOOGlú + Gly1O1Glu + Tyr103Asn Val 94Glu + Asn 96Glu + Gly 99Glu + Gly105Pro Asn 96Gln + SerlOOGlú + Gly1O1Asp lle106Glu Val 94Pro + Leu 95Ala + Ser 97Asp + SerlOOAsp Leu 95Glu + Gly1O1Asn + Ser102Glu + Tyr103lle Val 94Asn + Asn 96Glu + Gly1O1Asp + Gly105Asp Val 94Asp + Gly 99Asn + SerlOOAsp + Ser102Asp Val 94Asp + Leu 95Val + Ser102Asp + Tyr103Ala Leu 95Glu + Gly 99Pro + Ser102Asp + Ser1O4Glu Leu 95Ser + Asn 96Gln + Gly 101 Glu + Ser104Asp Val 94Gln + Asn 96Gln + Gly101Glu + Ser104Glu Gly101Asp + Tyr103Val + Ser104Glu + lla106Val Asn 96Asp + Ser102Asp + Tyr103Gly + Gly105Asp SerlOOGlú + Ser102Asp + Ser104Asp + Gly105Ser Val 94Asp + Ser 97Asp + SerlOOAsp + Gly105Gln

Tabulka 10 smyčka 3- varianty s jednou mutací ______________

Leu125Asn Leu125Asp Leu125Cys Leu125Gln Leu125Glu Leu125Gly Leu125His Leu 12 51 le Leu125Met Leu125Pro Leu125Ser Leu125Thr Leu125Val Gly126Asn Gly126Asp Gly126Gln Gly126Glu Gly126Pro Gly126Ser Gly127Asn Gly127Asp Gly127Gln

I

Gly127Glu Gly127Pro Gly127Ser Ala128Asn Ala128Asp Ala128Gln Ala128Glu AJa128Gly Ala128His Ala128Pro AI a 128 Ser Ala128Thr Ser129Asp Ser129GkJ Gly130Asn Gly130Asp Gly130Gln Gly130Glu Gly130Pro Gly130Ser Ser131Asp Ser131Glu Thr132Asn Thr132Asp Thr132Gln Thr132Glu Thr132Gly Thr132Pro Thr132Ser

Tabulka 11 smyčka 3- varianty se dvěma mutacemi

Leu125Gln + Ser129Glu Gly130Gln + Thr132Asn Gly126Asp + Gly127Pro Leu125lle + Ser131Glu Gly126Gln + Gly130Ser Gly 126Pro + Thr 132Pro Gly126Asp + Thr132Ser AIa128Gly+ Thr132Ser Leu125Ala + Gly126Glu Leu125Gln + Ser129Asp Gly126Pro + Ser131Asp Gly127Ser + Ser129Glu Gly130Asn + Ser131Glu Leu125Glu + Ala128Gln

Gly126Ser+ Thr132Ser Leu125Ala + Ser129Asp Gly127Pro + Thr132Asp Gly126Pro + Gly130Ser Leu125Ala + Ala128Asp Gly127Gln + Ser131Asp Leu125Ala + Thr132Ser Gly127Pro + Thr132Gly Gly126Glu + Thr132Asn Leu125Gly + Ser129Glu Ala128Thr + Gly130Asp Ala128His + Thr132Asp Leu125Gly + Gly126Asn Gly126Ser + Sar129Glu Leu125Asn + Thr132Asn Gly126Glu + Ala128Gly Sar131Asp + Thr132Gln Sar129Glu + Gly130Pro Gly127Asn + Ser129Asp Leu125Glu + Thr132Asn Gly126Gln + Gly127Glu Ala128Thr + Ser131 Asp Lau125Pro + Ser131 Glu Gly126Pro + Thd32Gly Gly126Gln + Ser129Asp Leu125Gly+ Gly126Ser Gly127Gln + Sar129Asp Gly126Gln + Gly130Glu Gly127Asp + Gly130Asn Leu125Glu + Gly126Ser Leu125lle + Thr132Asp Gly126Asn + Gly127Asp Leu125Cys + Gly126Gln Leu125Glu + Ala128Asn Gly126Gln + Ala128Asn Gly126Asp + Gly130Asn Leu125Ser + Gly130Ser Gly126Asn + Ser129Asp Leu125Sar + Sad31Asp Sad29Asp + Thr132Asn Gly127Glu + Ala128Thr Leu125Thr + Gly130Pro Ala128Pro + Thd32Asp Gly127Sar + Sar131Glu Gly126Asn + Thr132Glu Gly130Asp + Thr132Asn

Tabulka 12 smyčka 3- varianty se třemi mutacemi

Leu125AsřřTGÍýl26Pro + Ser129Glu Gly126Asn + Ser129Asp + Gly130Pro Leu125Ala + Gly126Ser + Ser131Glu Gly127Gln + Ala128Thr + Ser129Glu Leu125Thr + Ser129Asp + Gly130Pro Gly126Pro + AJal28Thr + Thr132Asp Gly126Asn + Gly130Asn + Thr132Gln Leu125Thr + Gly130Gln + Thr132Gln Aia128Gly + Ser129Asp + Thr132Asn Leu125Met + Ala128Gln ♦ Ser129Asp Leu125Gly + Ala128Asp + Gly130Pro Leu125lle + Gly127Ser + Thr132Asp Leu125Val + Gly127Glu + Gly130Ser Gly127Ser + Gly130Asn + Thr132Asn Leu125Thr + Gly126Ser + Ala128Glu Leu125Gln + Gly126Pro + Ser131Glu Leu125Glu + Gly130Asn + Thr132Asn Gly126Asn + Gly127Pro + Ser129Asp Gly126Pro + Gly127Pro + Ala128His Gly127Asn + Ala128His + Ser129Asp Leu125Thr + Gly130Pro + Thr132Ser Leu125Cys + Gly127Gln + Ser129Asp Gly127Asn + Gly130Glu + Thr132Gly Gly127Gln + Gly130Ser + Thr132Asp Leu125Thr + Ser129Asp + Thr132Pro Leu125Cys + Gly127Glu + Gly130Pro Ala128Gly + Ser129Glu + Gly130Gln Gly127Asp + Gly130Ser + Thr132Pro Leu125Pro + Gly126Asn + Gly127Asn Gly126Glu ♦ Ala128Ser + Gly130Ser Leu125Gly + Gly127Pro + Ser129Asp Gly126Gln + Ala128Glu + Gly130Gln Ala128Gly + Gly130Asn + Thr132Asp Leu125Met + Gly126Pro + Gly127Gln Leu125Gln + Ala128Asn + Ser129Asp Gly127Ser + Ala128Asn + Thr132Gly Gly126Gln + Gly127Asp + Gly130Ser Gly127Asp + Ala128Pro + Thr132Pro Leu125His + Ser129Asp + Thr132Pro Leu125lle + Gly126Gln + Thr132Gln Gly126Asp + Gly130Ser + Thr132Asn Gly127Asn + Ser129Glu + Gly130Pro Leu125Pro + Gly127Asp + Gly130Asn Leu125lle + Ala128His + Ser131Asp

Gly126Pro + Ala128His + Thr132Pro Leu125Val + Ala128Gln + Ser129Glu Leu125Ser + Gly126Asp + Thr132Gly Leu125Pro + Gly126Asp + Gly 127 Asp Ala128Ser + Gly130Asp + Ser131Asp Gly130Asp + Ser131Glu + Thr132Asn Gly126Asn + Gly130Asp + Ser131 Glu Gly126Gln + Gly130Asp + Sed 31 Glu Gly130Gln + Sed 31 Glu + Thr132Glu Ala128Thr + Ser131Glu + Thr132Asp Ala128Thr + Sed 31 Asp + Thd32Glu Ala128Pro + Sed31Asp + Thr132Asp Gly127Asp + Ala128Asp + Thd32Gln Leu125Glu + Gly126Glu + Gly130Asn Ala128Asp + Ser129Asp + Gly130Asn Ser129Asp + Gly130Glu + Thr132Pro

Tabulka 13 smyčka 3- varianty se čtyřmi mutacemi

Leu125Asn + Ala128Asn + Sed 31 Glu + Thr132Pro Leu 125 Ala + Gly126Gln + Gly127Pro + Gly130Ser Leu125Pro + Gly126Asn + Gly127Gln + Ala128Pro Leu125Gly + Gly126Asn + Ser129Glu + Gly130Asn Ala128Gly + Gly130Asn + Sed 31 Asp + Thr132Ser Leu125lle + Gly126Pro + Ala128Gly + Thr132Glu Leu125Thr + Gly130Pro + Sed 31 Asp + Thr132Gly Leu125Asp + Gly126Pro + Gly127Ser + Thr132Gln Leu125Gly + Gly126Pro + Gly127Asp + Thr132Pro Leu125Val + Gly127Glu + Gly130Asn + Thr132Asn Leu125Cys + Ala128Pro + Gly130Ser + Sed31Glu Gly126Gln + Gly127Ser + Ala128Thr + Gly130Glu Leu125Gly + Gly127Ser + Gly130Ser + Thr132Gly Leu125Pro + Gly126Ser + Ala128His + Thd32Asn Leu125Val + Gly126Gln + Gly127Pro + Ser129Asp Leu125Cys + Gly130Pro + Sed 31 Asp + Thd32Ser Leu125Gly + Gly127Gln + Ser129Glu + Thr132Ser Leu125Met + Ala128Ser + Gly130Pro + Thr132Gly Leu 125 Ala + Gly126Asp + Ala128His + Thd32Ser Gly127Gln + Gly130Glu + Sed 31 Asp + Thd32Asn Gly126Ser + Gly127Gln + Gly130Glu + Sed 31 Glu Gly127Pro + Gly130Asp + Sed 31 Glu + Thd32Pro Ala128Gly + Gly130Pro + Sed 31 Asp +.Thd32Glu Gly126Asn + Ala128Pro + Sed 31 Asp + Thd32Asp Gly126Gln + Ala128His + Sed31Asp + Thd32Asp Leu125Thr + Gly127Glu + Ala128Asp + Gly130Gln Gly126Asn + Ala128Gln + Sed29Glu + Gly130Asp

Ala128Gly + Sed29Glu + Gly130Glu + Thr132Gln Gly126Gln + Ser129Asp + Gly130Glu + Thr132Asn Gly12SAsn + Ala128Thr + Ser129Glu + Gly130Glu Gly126Ser + Gly 127 Asn + Ser129Glu + Gly130Glu Leu125His + Gly127Glu + Ala128Glu + Sar129Asp Leu125Thr + Gly127Glu + Ala12BAsp + Ser129Glu Gly126Pro + Gly127Glu + Ala128Asp + Ser129Glu Ála128Gly + Ser129Glu + Gly130Asp + Ser131Asp Gly126Gln + Ser129Asp + Gly130Asp + Sed31Asp Gly127Ser + Ser129Glu + Gly130Glu + Ser131 Glu Ala128Gly + Sed29Asp + Gly130Asp + Sed 31 Glu Gly126Asn + Sed29Asp + Gly130Glu + Sed 31 Asp Ala128Asn + Ser129Asp + Gly130Asp + Ser131Asp Gly127Pro + Ser129Glu + Gly130Asp + Sed 31 Glu Gly126Ser + Gly130Asp + Sed 31 Asp + Thr132Glu Leu125Met + Gly127Glu + Ser129Asp + Gly130Asp Gly126Pro + Gly127Asp + Sed29Glu + Gly130Asp Leu125Val + Gly127Glu + Ser129Asp + Gly130Asp Gly127Asp + Ala128Asn + Ser129Asp + Gly130Glu Gly127Glu + Ala128Thr + Sed 29Glu + G»y130Ser Gly127Asp + Ala128His + Ser129Glu + Gly130Ser Gly126Ser + Gly127Glu + Ala128Thr + Ser129Glu Gly126Pro + Gly127Asp + Ala128Asp + Gly130Glu Leu125Gly + Gly126Asp + Gly127Glu + Ser129Glu Gly126Asp + Gly127Glu + Ala128Ser + Ser129Asp Gly127Ser + Ser129Asp + Gly130Gln + Sed31Asp Ala128Gly + Ser129Glu + Gly130Asn + Ser131Glu Leu125Val + Ser129Asp + Ser131Asp + Thr132Ser Leu125Gly + Ala128Gly + Sed29Glu + Ser131Asp Leu125Cys + Gly126Pro + Ser129Glu + Sed 31 Glu Gly127Ser ♦ Ala128Asn + Ser129Asp + Ser131Asp Gly126Asn + Ser129Asp + Ssr131Glu + Thr132Gln Gly126Pro + Ala128Pro + Ser129Asp + Ser131Glu

Tabulka 14 smyčka 4 - varianty s jednou mutaci

Gly153Asn

Gly153Asp

Gly153Gln

Gly153Glu

Gly153Pro

Gly153Ser

Asn154Asp

Asn154Gln

Asn154Glu

Asn154Ser

S8r155Asp

Ser155Glu

Gly156Asn

Gly156Asp

Gly156Gln

Gly156Glu

Gly156Pro

Gly156Ser

Asn157Asp

Asn157Gln

Asn157Glu

Asn157Ser

Ser158Asp

Ser158Glu

Gly159Asn

Gly159Asp

Gly159Gln

Gly159Glu

Gly159Pro

Gly159Ssr

Ser160Asp

Ser160Glu

Thr161Asn

Thr161Asp

Thr161Gln

Thr161Glu

Thr161Gly

Thr161Pro

Thr161Ser

Asn162Asp

A$n162Gln

Asn162Glu

Asn162Ser

Thr163Asn

Thr163Asp

Thr163Gln

Thr163Glu

Thr163Gly

Thr163Pro

Thr163Ser

He164Ala

He164Asn lle164Asp lle164Cys lle164Gln l!a164Glu lla164Gly |le164His lle164Leu lle164Met lle164Pro lle164Ser lle164Thr lle164Val Gly165Asn Gly165Asp Gly165Gln Gly165Glu Gly165Pro Gly165Ser Tyr166Ala Tyr166Asn Tyr166Asp Tyr166Cys Tyr166Gln Tyr166Glu Tyr166Gly Tyr166His Tyr 166lle Tyr166Leu Tyr166Met Tyr166Pro Tyr166Ser Tyr166Thr Tyr166Val

Tabulka 15 smyčka 4 - varianty se dvěma mutacemi

Asn154Ser + Sar155Glu

Gly153Glu + ||e164Aia

Gly159Glu + Gly165Pro Asn154Glu + Gly156Sar Gly156Pro + Gly159Asp Gly153Ser + Ser160Asp Ser155Asp + Gly165Ser lle164Gly + Gly165Glu Gly159Glu + lle164Asn Asn157Gln + Asn162Sar Gly156Asn + Thr161Gln Asn162Glu + Tyr166Gln Asn157Glu + Gly165Gln Asn162Glu + Gly165Gln Gly133Pro + lle164Cys

Thr163Glu + Gly165Asn Gly153Asp + lle164Asn Gly153Ser + Thr161Asp Gly156Asp + Tyr166Gln Gly165Pro + Tyr166Ser G,y153Ser + Asn162Glu Gly159Glu + Tyr166Leu Gly156Asn + Thr161Glu Asn154Gln + Ser158Glu Ser160Asp + Thr161Asn Ser155Glu + Gly165Pro Asn154Ser + Tyr166lle Gly153Asp + Thr161Asn Ser158Asp + Thr161Pro Asn162Glu + Thr163Ser Gly159Gln + Tyr166Cys Thr161Gly + Asn162Ser Gly159Asp + Tyr166Asn Ser160Glu + lle164Thr Ser158Asp + lle164Leu Asn154Ser + Asn157Asp Asn154Asp + Thr161Gln Gly156Ser + Ser160Glu Gly156Gln+ Tyr166lle Gly153Asn + Tyr166Ala Asn154Asp + He164Ser Ser155Asp + Thr163Asn Gly156Glu + Gly159Gln Gly156Ser + Asn162Asp Gly153Ser + Asn157Glu Ser160Glu + Gly165Pro Gly153Pro + Asn157Asp Gly153Gln + Ser160Asp Asn154Gln + Thr163Asn Gly156Ser + Gly159Asp Gly159Asp + Thr161Gln Gly159Ser * Tyr166Glu Asn157Asp + Tyr166Leu Thr161Asp +Asn162Gln Asn162Gln + Gly165Glu Gly156Asp + Asn162Gln Asn154Gln + lle164Gln Asn157Asp + Asn162Ser Asn154Asp + lle164Asn Gly159Asp + Glyl65Pro

Tabulka 16 smyčka 4 - varianty se třemi mutacemi ——————GÍy153Gln + Asn154Ser + Ser155Glu

Gly156Asp + Thr161Pro + Tyr166lla Asn157Glu + Gly159Gln + Asn162Gln Asn154Glu + Asn162Gln + lle164Leu Gly153Pro + Gly159Gln + lle164Asn Asn154Ser + lle164Met + Tyr166Cys Gly159Gln + Ser160Asp + lle164Thr Gly156Asn + Thr161Ser + lla164Cys Gly156Asn + Ha164His + Tyr166Asp Asn157Glu + Asn162Gln + lla164Ala Ser160Asp + Thr163Sar + Ha164Gly Asn154Glu + Thr161Pro + lla164Mat Thr163Asn + Ile 164 Asn + Gly165Pro Asn157Glu + Asn162Gln + lla164Thr Asn162Gln + lle164Thr + Gly165Glu Asn154Gln + Gly159Asp + Tyr166Thr Asn157Gln + Thr161Gly + Thr163Pro Sar158Glu + Thr163Ser + Gly165Ser Gly153Pro + Asn157Asp + Thr163Asn Gly156Pro + Ser158Asp + Gly165Gln Asn157Gln + Thr163Gly + Gly165Pro Ser155Glu + Gly159Ser + Tyr166Thr Gly153Gln + Asn154Gln + Gly165Glu Gly153Gln + Asn154Sar + Gly159Pro Thr161Gly + Asn162Asp + Gly165Asn Sar158Glu + Gly159Ser + Gly165Gln Ser155Asp + Gly159Asn + lla164Ser Asn157Gln + Thr163Gly + Gly165Glu Gly153Ser + Gly159Sar + Asn162Asp Gly153Ser + Ser158Glu + lle164Thr Gly153Asp + Thr161Ser + Gly165Asn Thr161Ser * Ha164Ser + Tyr166Pro Ser155Asp + Gly156Asn + lle164Asn Asn154Glu + Gly159Gln ♦ Tyr166lla Gly153Gln + Gly166Gln + Thr161Asp Gly159Asn + Thr163Asn + Tyr166Ser Ser155Asp + Thr163Pro + lle164Gly Gly153Ser + Ser160Asp + lle164Pro Asn162Glu + Ha164Gln + Tyr166Gln Gly156Glu + Asn157Glu + Thr161Gly Gly159Asp + Ser160Glu + lle164Gln Ser155Asp + Gly156Glu + Thr163Asn Ser155Glu + Gly156Asp + Gly165Ser Ser155Glu + Gly156Asp + lle164Met Ser160Glu + Thr161Asp + Gly165Asn Asn162Asp + Thr163Asp + Gly165Asn

Asn157Asp + Ser158Glu + Thr161Glu Gly159Asp + Thr161Glu + Thr163Pro Gly153Asp + Asn154Ser + Gly165Asp Gly153Glu + Asn162Gln + Gly165Asp Asn154Ser + Thr161Glu + Thr163Asp Ser158Glu + Ser160Asp + Thr163Asn Ser158Glu + Ser160Glu + Thr163Gly Ser158Asp + Ser160Asp + lle164Gly Asn157Asp + Gly159Glu + Thr163Gln Thr163Glu + Gly165Asp + Tyr166Pro Ser160Asp + Asn162Glu + Gly165Asn Asn154Glu + Gly156Asp + Asn157Glu Gly159Asp + Ser160Asp + Asn162Glu Asn154Glu + Ser155Glu + Asn157Asp

Tabulka 17 smyčka 4 - varianty se čtyřmi mutacemi

Gly153Pro + Gly159Ser + Thr163Pro + Gly165Asn Asn154Gln + Asn162Glu + llo164Cys + Gly165Pro Asn154Ser + Asn157Asp + Thr161Gly + lle164Asn Gly159Glu + Thr161Gln + Thr163Asn + Gly165Gln Gly159Ser + Ser160Glu + Thr163Gln + Tyr166lle Gly156Ser + Ser160Glu + Thr161Asn + Gly165Pro Gly153Ser + Gly159Ser + Ser160Asp + Gly165Ser Gly153Asn + Gly159Glu + lle164Cys + Gly165Pro Asn154Ser + Gly156Glu + Thr161Pro + Tyr166His Gly153Ser + Ser160Glu + Gly165Asn + Tyr166Cys Asn157Gln + Tbr163Gly + lle164His + Gly165Gln Asn154Ser + Ser155Glu + Asn162Ser + lle164His Gly156Pro + Asn157Gln + Ser160Glu + Gly165Ser Gly153Gln + Ser155Asp + Thr161Gln * Tyr166Gly Asn157Ser + Thr161Gln + Thr163Asp + lle164Thr Gly153Ser ♦ Ser160Asp + Asn162Gln + Tyr166Thr Gly153Pro + Asn154Gln + Asn157Gln + Ser160Glu Gly156Glu ♦ Asn162Gln + Thr163Ser + Gly165Gln Gly156Asn + Asn157Glu +Thr161Gly + Thr163Ser Gly153Ser + Ser158Glu + Gly159Asp + Thr163Gly Asn154Gln + Ser158Asp + Gly159Asp + Thr163Asn Ser158Asp + Gly159Asp + Thr163Asn + Tyr166Pro Gly159Asp + Ser160Glu + Thr163Ser + Gly165Ser Asn154Glu + Ser155Asp + Thr163Gln + Tyr166Met Gly153Glu + Asn154Asp + Ser155Glu + Gly159Asn Ser158Glu + Gly159Glu + Ser160Asp + Gly165Asn Ser158Asp + Gly159Asp + Ser160Asp + Asn162Gln Asn157Ser + Ser160Asp + Thr161Glu + Asn162Glu Gly156Asn + Ser158Asp + Ser160Glu + Thr161Glu

Gly159Glu + Thr161Asp + Thr163Asn + Tyr166Val Gly156Pro + Gly159Glu + Thr161Asp + Gly165Pro Gly153Glu + Gly156Pro + Gly159Gln + Gly165Asp Gly153Glu + Asn157Gln + Gly159Gln + Gly165Asp Gly153Asn + Ser155Glu + Thr163Glu + lle164Gly Asn157Glu + Ser158Asp + Ser16ÓAsp + Thr161Asn Asn154Ser + Asn157Ser + Sor158Asp + Ser160Glu Ser158Glu + Gly159Gln + Ser160Glu + Thr163Gln Ser158Asp + Ser160Glu + lle164Ala + Tyr166Gln Gly153Pro + Asn157Gln + Ser158Glu + Ser160Asp Gly153Gln + Gly156Pro + Ser158Glu + Ser160Asp Gly156Ser + Asn157Glu + Gly159Glu + lle164Leu Thr163Asp + lle164Cys + Gly165Asp + Tyr166Cys Ser160Asp + Asn162Asp + lle164Asn + Tyr166Thr Asn157Ser + Ser160Glu + Asn162Asp + lle164Met Ser155Glu + Asn157Asp + Asn162Ser + Gly165Pro Gly153Ser + Asn154Glu + Ser155Glu + Asn157Glu Gly153Pro + Asn154Asp + Ser155Asp + Asn157Glu Gly153Gln + Ser158Glu + Ser160Asp + Asn162Glu Asn157Asp + Ser160Glu + Thr161Ser + Asn162Glu Gly156Asp + Asn157Asp + Thr161Ser + Asn162Asp Asn154Gln + Asn157Asp + Ser160Glu + Tyr166Ser Gly153Gln + Gly156Glu + Ser158Glu + Asn162Glu Gly156Glu + Gly159Pro + Thr163Asp + Gly165Asp Ser155GJu + Thr161Ser + Thr163Ser + Gly165Asp Asn154Asp + Thr163Gly + Gly165Glu + Tyr166Ser Ser155Asp + Asn157Glu + Gly159Glu + Gly165Gln Asn162Glu + lle164Ala + Gly165Asp + Tyr166Thr Gly156Gln + Asn162Asp + Gly165Asp + Tyr166Asn Ser155Glu + Ser158Asp + Thr161Asn + Tyr166Met Ser155Glu + Ser158Glu + Gly159Gln + He164Gty

Tabulka 18 smyčka 5 - varianty s jednou mutaci

Ala186Asn

Ala186Asp

Ala186Gln

Ala186Glu

Ala186Gly

Ala186His

Ala186Pro

Ala186Ser

Ala18€Thr

Ser187Asp

Ser187Glu

Phe188Ala

Phe188Asn

Phe188Asp

Phe188Cys

Phe188Gln

Phe188Glu

Phe188Gly

Phe188His

Phe188lle

Pha188Lou

Phe188Mat

Pho188Pro

Ph0l88Sor

Phe188Thr

Ph0l88Tyr

Pha188Val

Sor189Asp

Ser189Glu

Sor190Asp

Sor190Glu

Tabulka 19 smyčka 5 - varianty se dvěma mutacemi

Ala186Asp + Pho188Gln Ala186Gly + Sor187Glu Ala186Gln + Ser187Asp Ala186His + Sor190Glu Ser187Asp + Pho188Cys Sor187Asp + Pho188Thr Phe188Gly + Sor19OGIu Ala186Asn + Phe188Ser Ala186Asp + Ph0l88lla Ala186Sor + Ph0l88Glu Ala186Thr + Pho188Leu Sor187Glu + Ph0l88Sor Sor187Glu + Ph0l88Pro Sor187Asp + Pho188Gln Ala186Thr + Sor190Glu Phe188His + Sor190Asp Ala186Gln + S0r19OAsp Phe188Lou + Ser190Glu Ala186His + Sor190Asp Ala186Pro + Sor187Glu Phe188lle + Sor190Asp Ala186Asp + Phe188Asn Ala186S0r + Ser187Glu Ser187Glu + Ph0l88Lou

Ala186Asn + Phe188,le Phe188Tyr + Ser190Glu Ala186Pro + Sed90Glu Ala186Thr + Pha188Asp Ala186His + Sed 87 Asp Ala186Gln + Phe188Thr Phe188Cys + Ser190Glu Sed87Glu + Phe188Thr Ser187Asp + Phe188Met Ala186Asn + Ser190Asp Phe188Val + Ser190Asp Ala186Pro + Pha188Ser Ala186Asp + Phe188Ser Sar187Glu + Pha188Asn Ala186Thr + Sar187Asp Ala186Thr + Phe188Asn Ala186Gly + Phe188Leu Phe188Asn + Ssr190Glu Ala186Thr + Ser187Glu Ala186Thr + Ser190Asp Ser187Asp + Phe188Ala Ala 186 Asn + Ser187Glu Ala186Gln + Phe188Tyr Phe188lle + Ser190Glu Phe188Thr + Ser190Asp Ala186Ser + Ser187 Asp Phe188Ala + Ser190Asp Phe188Gln + Ser190Glu Ala 186 Gly + Ser190Asp Ala 186 Glu + Phe188Thr Ala186Pro + Phe188Ala Pha188Asn + Ser190Asp Ala186Gly + Phe188Val Phe188Leu + Ser190Asp Ala 186 Asn + Phe188Met Ala186Gln + Phe188Glu

Tabulka 20 smyčka 5 - varianty se třemi mutacemi

Ala186Pro + Phe188Cys + Ser190Glu Ala186Gln + Phe188Val + Sed90Glu Ala186Thr + Phe188Asn + Ser190Glu Ala186Gly + Phe188Gln + Ser190Glu Ala186Pro + Phe188G,n + Ser190Glu Ala186Gln + Phe188Asn + Ser190Asp Ala186Asn + Sed 87 Asp + Phe188Leu

Ala186Gln + Ser187Asp + Phe188Pro Ala186Gln + Ser187Glu + Phe188Met Ala186Pro + Pha188Val + Ser190Glu Ala186His + Pha188Mat + Sar190Asp Ala186Asn + Sar187Glu + Pha188lla Ala186Glr» + Pha188Ala + Sar190Glu Ala186Pro + Phe188Thr + Ser190Asp Ala186Asn + Sar187Glu + Phe188Thr Ala186Ser + Phe188Ala + Sar190Glu Ala186His + Pha188Pro + Sar190Asp Ala186His + Sar187Asp + Phe188Leu Ala186Pro + Sar187Glu + Phe188Val Ala186Asn + Sar187 Asp + Phe188His Ala186Gly + Sed87Glu + Pha188Leu Ala186Pro + Sed87Asp + Phe188His Ala186Gln + Pha188lla + Sed90Asp Ala186Pro + Pha188lle + Sad90Asp Ala186Gln + Phe188Thr + Sed90Asp Ala186Gln + Pha188His + Sed90Glu Ala186Gly + Phe188lle + Sad90Asp Ala186Thr + Ser187Glu + Pha188Tyr Ala186His + Sed 87 Asp + Phe188Ser Ala186His + Sed87Glu + Phe188Ser Ala186His + Phe188Gly + Ser190Glu Ala186Pro 4 Sed87Glu + Phe188Pro Ala186Gln + Sed87Glu + Phe188Tyr Ala186Asn + Phe188Cys + Sed90Asp Ala186Gly + Phe188Gly + Sed90Asp Ala186Gln + Sed87Asp + Phe188Val A1a186Pro + Sed87Glu + Phe188Gly Ala186Glu + Sed87Glu + Phe188lle Ala186Asp + Sed87Glu + Phe188Ala Ala186Asp + Sed87Asp + Phe188Thr Ala166Glu * Sed 87Asp + Phe188Thr Ala186Glu 4 Sed87Glu 4 Phe188Tyr Ala 186Asp 4 Ser187Asp 4 Phe188Ser Ala186Asp 4 Ser187Glu 4 Phe188lle Ala186Pro 4 Sed 87Asp 4 Phe188Asp Ala186Gln 4 Ser187Glu 4 Phe188Glu Ala186Gln 4 Sed87Glu 4 Phe188Asp Ala186Glu 4 Sed87Glu 4 Phe188Asp Ala186Glu 4 Sed 87Asp 4 Phe188Glu Ala186Thr 4 Phe188Asp 4 Sed90Glu Ala186Ser 4 Phe188Asp 4 Sed90Asp Ala186Gly 4 Phe188Asp 4 Sed90Glu Sed 87Asp 4 Phe188Glu 4 Ser190Asp Ser187Glu 4 Pho188Glu + Ser190Asp

Ser187Asp + Phe188Glu + Ser190Glu Ser187Glu + Phe188Glu + Ser190Glu Ala186Glu + Phe188Glu + Ser190Glu Ala186Glu + Phe188Asp + Sar190Asp Ala186Asp + Ser187Asp + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Glu + Ser190Asp

Tabulka 21 smyčka 5 - varianty se čtyřmi mutacemi

Ala186Thr + Ser187Glu + Phe188Glu + Ser190Asp Ala186Gln + Ser187Asp + Phe188Asp + Ser190Asp Ala186Gly + Ser187Asp + Phe188Glu + Ser190Asp Ala186Thr + Ser187Asp + Phe188Glu + Ser190Glu Ala186His + Ser187Glu + Phe188Glu + Ser190Asp Ala186Gln + Ser187Glu + Phe188Glu + Ser190Glu AIa186Thr + Sar187Glu + Phe188Asp + Ser190Asp Ala186Asn + Ser187Glu + Phe188Asp + Ser190Asp Ala186Ser + Ser187Glu + Phe188Glu + Ser190Glu Ala186Asn + Ser187Asp + Phe188Asp + Ser190Asp Ala186Ser + Ser187Asp + Phe188Asp + Ser190Glu Ala186Asn + Ser187Asp + Phe188Asp + Ser190Glu Ala186His + Ser187Glu + Pha188Glu + Ser190Glu Ala186Gln + Ser187Asp + Phe188Glu + Ser190Asp Ala186Gly + Ser187Asp + Pha188Glu + Sar190Glu Ala186Pro + Ser187Asp + Pha188Asp + Ser190Glu Ala186Gly + Ser187Asp + Pha188Asp + Ser190Glu Ala186Ser + Ser187Glu + Phe188Glu + Ser190Asp Ala186Thr + Ser187Asp + Phe188Asp + Ser190Asp Ala186Gly + Ser187Glu + Phe188Asp + Ser190Glu AIa186Gly + Ser187Asp + Phe188Asp + Ser190Asp A1a186Asp + Ser187Asp + Phe188Asn + Ser190Asp Ala186Glu + Ser187Glu + Phe188Tyr + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Asp + Phe188Ser + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Glu + Pha188Gln + Ser190Glu Ala186Glu + Ser187Asp + Phe188Ala + Ser190Glu Ala186Glu + Ser187Glu + Phe188Gly + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Asp + Phe188AIa + Ser190Asp Ala186Glu + Ser187Glu + Phe188Cys + Ser190Glu Ala186Glu + Ser187Asp + Pha188lle + Ser190Asp Ala186Glu + Ser187Glu + Phe188Ala + Ser190Glu Ala186Glu + Ser187Glu + Phe188His + Ser190Asp A1a186Asp + Ser187Asp + Pha188Leu + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Asp + Phe188Gln + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Glu + Pha188Asn + Sér190Asp Ala186Asp + Ser187Asp + Phe188Cys + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Asp + Phe188Thr + Ser190Asp

Ala186Glu + Ser187Glu + Phe188Leu + Ser190Asp Ala186Glu + Sar187Glu + Phe188Leu + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Asp + Phe188Pro + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Glu + Pha188Val + Ser190Asp Ala186Asp + Ser187Asp + Pha188His + Ser190Glu Ala1B6Glu + Sar187Glu + Phe1B8Pro + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Glu + Phe188Ser + Ser190Glu Ala186Glu + Ser187Glu + Phe188Val + Ser190Glu Ala 186 Asp + Ser187Glu + Phe188Gln + Sar190Asp Ala 186 Asp + Ser 187 Glu + Phe188Asn + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Glu + Phe188Gly + Ser190Glu Ala 186Asp + Ser187Asp + Phe188Cys + Ser190Asp Ala186Asp + Ser187Glu + Phe188Tyr + Ser190Glu Ala186Glu + Ser187Asp * Phe188Thr + Ser190Asp Ala186Glu + Ser187Glu * Phe188Thr + Ser190Glu Ala186Glu * Ser187Glu * Phe188Met * Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Asp + Phe188Gly ♦ Ser190Glu Ala 186 Asp + Ser187Glu + Phe188His + Ser190Glu Ala186Asp + Ser187Glu + Phe188Met + Ser190Glu Ala186Glu + Ser187Asp + Phe188Ser + Ser190Asp Ala186Asn + Ser187Glu + Phe188Met + Ser190Asp Ala186Gln + Ser137Asp + Phe188His * Ser190Asp Ala186Asn + Ser187Glu + Phe188Ser + Ser190Glu

Tabulka 22 smyčka 6 - varianty s jednou^ mutaci

Ala 199 Asn Ala199Asp Ala199Gln Ala199Glu Ala199Gly Ala199His Ala199Pro Ala199Ser Ala199Thr Pro200Asn Pro200Asp Pro200Gln Pro200Glu Pro200Gly Pro200Ser Gly201Asn Gly201Asp Gly201Gln Gly201Glu Gly201Pro

Gly201Ser

Ala202Asn

Ala202Asp

Ala202Gln

Ala202Glu

Ala202Gly

Ala202His

Ala202Pro

Ala202Ser

Ala202Thr

Gly203Asn

Gly203Asp

Gly203Gln

Gly203Glu

Gly203Pro

Gly203Ser

Val204Ala

Val2O4Asn

Val204Asp

Val204Cys

Val2O4Gln

Val204Glu

Val2O4Gly

Val2O4His

Val204Met

Val204Pro

Val2O4Ser

Val2O4Thr

Tyr205Ala

Tyr205Asn

Tyr205Asp

Tyr205Cys

Tyr205Gln

Tyr205Glu

Tyr205Gly

Tyr205His

Tyr205lle

Tyr205Leu

Tyr205Mat

Tyr205Pro

Tyr205Ser

Tyr205Thr

Tyr205Val

Sar206Asp

Ser206Glu

Thr207Asn

Thr207Asp

Thr207Gln Thr207Glu Thr207Gly Thr207Pro Thr207Ser Tyr208Ala Tyr208Asn Tyr208Asp Tyr208Cys Tyr208Gln Tyr208Glu Tyr208Gly Tyr208His Tyr208lle Tyr208Leu Tyr208Met Tyr208Pro Tyr208Ser Tyr208Thr Tyr208Val Pro209Asn Pro209Asp Pro209Gln Pro209Glu Pro209Gly Pro209Sar Thr210Asn Thr210Asp Thr210Gln Thr210Glu Thr210Gly Thr210Pro Thr210Ser As n211 Asp Asn211Gln Asn211Glu Asn211Sar Ttir212Asn Thr212Asp

Thr212Gln

Thr212Glu

Thr212Gly

Thr212Pro

Thr212Ser

Tyr213Ala

Tyr213Asn

Tyr213Asp

Tyr213Cys

Tyr213Gln

Tyr213Glu

Tyr213Gly

Tyr213His

Tyr213lle

Tyr213Leu

Tyr213Mat

Tyr213Pro

Tyr213Ser

Tyr213Thr

Tyr213Val

Ala214Asn

Ala214Asp

Ala214Gln

Ala214Glu

Ala214Gly

Ala214His

AIa214Pro

Ala214Ser

Ala214Thr

Thr215Asn

Thr215Asp

Thr215Gln

Thr215Glu

Thr215Gly

Thr215Pro

Thr215Ser

Leu216Ala

Leu216Asn

Lau216Asp

Leu216Cys

Leu216Gln

Leu216Glu

Leu216Gly

Leu216His

Leu216lla

Leu216Met

Leu216Pro

Leu216Ser

Leu216Thr

Leu216Val

Asn217Asp

Asn217Gln

Asn217Glu

Asn217Ser

Gly218Asn

Gly218Asp

Gly218Gln

Gly218Glu

Gly218Pro

Gly218Ser

Thr219Asn

Thr219Asp

Thr219Gln

Thr219Glu

Thr219Gly

Thr219Pro

Thr219Sar

Tabulka 23 smyčka 6 - varianty se dvěma mutacemi

Gly218Gln + Thr219Gln Val204Ala + Thr207Gln Tyr213Val + Gly218Pro Pro209Gly + Tyr213lle Thr215Ser + Thr219Ser Leu216AJa + Asn217Gln Pro209Asp + Thr212Sar Ala199Asn + Leu216lla Asn217Glu + Thr219Asn Tyr208lle + Thr215Asn Ala202Gly + Pro209Glu Gly201Ser + Thr219Gly Thr215Pro + Gly218Ser Tyr205Leu + Leu216His Val204Asn + AI a214 Asn Asn217Ser + Gly218Pro Ala202His + Tyr208Val Gly201Gln ♦ Tyr213Leu Tyr213Cys + Thr219Gly Pro200Asn + Thr210Pro Ala202Asp + Thr219Asn Gly201Pro + Val204Pro Ala214Thr + Thr219Gln Thr207Gln + Leu216Asp Pro200Gln + Tyr213Met Va(2O4Ala + Thr215Glu Thr212Gln + Thr215Asn .

Leu216His + Asn217Glu Ala202Thr + Ala214Asp Val204Pro + Thr207Gln Gly203Asp + Tyr205Leu

Tyr205His + Asn211 Asp Asn211 Gin + Thr212Asn Gly203Pro + Thr219Pro Pro200Gly + Pro209Asp Thr210Asp + Gly218Pro Gly203Asp + Gly218Ser Tyr205Glu + Gly218Pro Thr212Gln + Thr219Pro Ala214Ser + Asn217Glu Ala202Asn + Leu216Ser Val204Thr + Ala214Pro Pro200Asn + Asn211Asp Týr205Gly + Thr219Pro Ala199His + Asn217Sar Gly201 Ser + Asn211 Asp Gly203Ser + Tyr205Ala Ala202Pro + Pro209Glu Tyr213Pro + Gly218Glu Pro200Gly + Ala202Glu Thr210Gly + Asn211Asp Val204Asn + Thr215Asn Pro200Asn + Tyr208Leu Ala202Pro + Ala214Thr Tyr205Cys + Leu216His Leu216Ser + Gly218Gln Thr215Glu + Thr219Gln Tyr205Leu + Pro209Glu Ala214Glu + Thr215Pro Gly203Glu + Gly218Gln Tyr205Cys + Thr212Pro Leu216Asn + Thr219Asn Ala199Ser + Thr219Asn

Gly201Gln + Tyr213Val Gly203Asn + Thr215Gln Pro209Glu + Asn211Gln Ala199Gly + Asn211Asp Ala214Glu + Leu216Mat Val204Pro + Asn211 Asp Ala202Glu + Gly218Gln Tyr208lle + Gly218Glu Tyr205Ser + Leu216Thr Asn211Glu + Tyr213Gly Thr212Asn + Thr219Asn Asn217Asp + Thr219Gln Thr207Asn + Asn217Asp Gly201Ser + Tyr208Gln Thr210Pro + Thr212Gly

Val204Asn + Thr210Gly Ala199His + Tyr208Val Tyr208Gly + Tyr213Val Gly201Pro + Ala214Asp Gly201Gln + Leu216Gly Gly201Gln + Thr207Asn Gly203Asn + Gly218Glu Tyr208Asn + Thr219Sar Thr207Gly + Leu216Glu Gly218Glu + Thr219Asn A)a199Gln + Thr212Glu Thr212Asp + Ala214Gly Gly203Asn + Ala214Ser Asn211Ser + Thr212Gln Pro209Asp + Tyr213Thr Gly201 Qln + Ala202Thr Val2O4Thr + Tyr208Cys Gly201Asn + Ala202Asn Ala199His + Thr210Asp Val204Sar + Thr212Asp Tyr208Ser+ Thr219Gln Tyr205Pro + Thr215Asp Asn211Gln + Gly218Gln Asn217Asp + Gly218Pro Ala202Gln + Thr210Pro Tyr205Asn + Gly218Gln Gly201Gln + Thr219Ser AJa202Asp + Thr207Asn Thr212Gly + Asn217Gln Thr215Asn + Thr219Ser Ala214Glu + Thr215Gly Ttv210Asn + Tyr213Gln Ala199Gln + Tyr205Glu Tyr205His + Thr210Asp Gly201Asn + Gly203Asp Gly203Ser + Pro209Asp Gly201Gln + Thr210Glu Pro209Asn + Thr215Ser Thr215Gln + Thr219Gly Gly201Gln + Thr215Asp Tyr208Gly + Tyr213Pro Gly201 Asn + Tyr213Asn Ala202Pro + Pro209Asn Ala199Thr + Tyr208Mat Thr210Gln + Gly218Asn Thr210Pro + As n211 Asp Asn211Asp + Gly218Pro

Gly201Asn + Tyr205Gly Ala202Gln + Tyr213Glu Ala199His + Ala202Asp Tyr205Ser + Tyr213Glu Gly201Gln + Pro209Asp Ala202Sar + Thr219Gln Lau216Mat + Thr219Asn Val204Ser + Tyr205Ser Val204Thr + Tyr208Sar Gly203Asn +Ala214Thr Thr210Gly + Thr219Asn Pro200Gly + Thr210Pro Ala214Glu + Gly218Pro Pro200Gly + Thr219Gln Ala202Ser + Asn211Asp Ala199Thr + Val204Gln Ala199Gln + Pro200Ser Pro209Sar + Lau216Thr Tyr205Pro + Leu216Ala Gly201Pro + Pro209Gly Thr207Asn + Thr215Glu Pro200Sar + Tyr205Ala Thr210Gln ♦ Asn217Gln Ala199Asn + Gly203Gln Gly201Asn + Thr207Pro Gly203Asp + Tyr208Asn Thr207Asn + Asn211 Asp Tyr205Leu + Gly218Asp Gly203Ser + Thr210Pro Tyr205Cys + Asn211Sar Ala214Glu +Asn217Ser Ala199Pro + Gly201Gln Gly201Asn + Tyr213Mat Tyr205His + Tyr208Gly Gly203Glu + Thr210Sar Thr207Asn + AJa214Sar Tyr205Val + Thr219Sar Val204Asn + Thr207Pro Thr207Ser + Asn211 Asp Tyr205Leu + Gly218Glu Asn211 Ser + Thr219Pro Tyr205Gln + Asn211 Ser Pro200Gly + Val204Asn Ala202Glu + Tyr213His Gly201Pro + Gly218Gln Ala214Asn + Asn217Gln Gly201Asn + As n211 Asp

Pro209Ser + Thr212Gln Gly203Gln + Val204Gln Gly201Gln + Thr215Pro Gly201 Asn + Ala202Ser Thr207Gln + Thr212Asp Val204Gly + Thr212Asp Gly201Asn + Thr210Asp Thr210Asp + Tyr213Cys

Tabulka 24 smyčka 6 - varianty se třemi mutacemi

Pro200Gly + Thr212Ser + Tyr213Met Gly201Pro + Pro209Glu + Thr212Gly Gly203Asp + Val2O4Met + Asn217Gln Pro200Gly + Thr212Ser + Ala214Asp Ala199Gly + Tyr213Asp + Gly218Ser Gly201Asn + Thr207Ser + Thr215Glu Pro200Ser + Ala214Gly + Asn217Glu Ala199Pro + Thr207Ser + Thr210Pro Gly201Asn + Thr210Ser + Asn21 IGlu Gly203Asn + Thr207Asn + Asn217Glu Gly201Asn + Tyr205Pro + Thr207Ser Pro200Asn + Gly201Gln + Gly203Ser Pro200Gln + Asn211Glu + Tyr213Ala Ala202His + Thr212Asp + Tyr213His Ala199Thr + Gly201Asn + Asn211Ser Pro200Ser + Gly201Gln + Pro209Asn Ala202Gly + Tyr205Pro + Asn211Ser Gly203Gln + Tyr205Val + Thr210Pro Gly203Glu + Asn211Gln + Asn217Ser Pro200Asn + Pro209Glu + Asn211Ser Gly201Pro + Thr210Ser + Tyr213Thr Tyr205lle + Leu216Asp + Thr219Gly Pro200Ser + Val204Met + Pro209Asp Tyr205Asp + Thr207Gly + Tyr208Gln Pro200Ser + Thr210Asp + Thr212Pro Gly201Gln + Asn211Asp + Tyr213Gly Tyr208Val + Thr210Gly + Leu216Val Pro209Gly + Thr215Pro + Leu216Ala Val204His + Thr215Glu + Leu216Cys Ala199Pro + Gly203Ser + Thr210Ser Gly201 Asn + Tyr205Met + Thr21QAsp Pro200Gly + Tyr205Cys + Thr212Asn Ala199Pro + Pro200Ser + Leu216Glu Gly201Asn + Tyr205Asp + Tyr213lle Pro200Ser + Ala202G!y + Thr210Asp

Ala202Asn + Val204Ser + Gly218Glu Gly203Gln + Val204Cys + Thr207Sar Val204Cys + Thr207Asn + Thr212Asp Gly201Pro + Gly203Ser + Tyr208Gly Gly203Asn + Tyr208Cys + Lau216Mat Thr210Gln + Thr215Asp + Thr219Ser Pro209Asp + Tyr213Leu + Ala214Thr Ala202Asp + Tyr213Pro + Thr215Gln Thr215Glu + Gly218Ser + Thr219Gln Pro200Gly Val2O4His + Thr207Ser Gly203Ser + Pro209Asp + Thr219Sar Ala202Asn + Thr207Gln + Ala214His Thr207Sar + Ala214Glu + Leu216Ser Pro200Asn + Pro209Asn + Thr210Pro Pro209Gln + Tyr213His + Ala214Thr Thr210Asn + Thr215Pro + Leu216Gln Gly203Gln + Val204Ser + Thr210Glu Pro200Asn + Asn211Gln + Gly218Ser Pro200Gln + Thr207Gln + Leu216Glu Tyr213Pro + Gly218Glu + Thr219Asn Tyr208Cys + Thr210Asp + Thr219Sar Pro200Gln + Tyr205His + Thr219Ser Pro209Asp + Thr212Gln + Thr219Gln Gly201Asn + Val2O4Asn + Thr210Asp Pro200Gly + Tyr208Leu + Thr210Asn Pro200Gln + Thr207Gln + Thr219Gln Tyf205Val + Pro209Sar + Thr210Asp Gly203Pro + Val2O4His + Tyr213Glu Gly203Asn + Pro209Asn + Tyr213His Ala199Asn + Gly201Asn + Lau216Asp Pro209Asp + Tyr213His + Gly218Ser Gly201Sar + Gly203Asp + Asn211Ser Gly203Asn + Val204Cys + Thr212Gly Gly201Pro + Tyr208Met + Leu216Glu Gly201Ser + Val2O4Gln + Leu216His AJa199Gly + Ala202Pro + Leu216Ser Gly203Gln + Tyr205Pro + Thr219Gly Tyr205Gly + Tyr213Val + Asn217Asp Gly201Asn + Ala214His + Thr215Gln Pro200Gly + Ala202Gln + Tyr213Cys Gly203Pro + Tyr208Met + Thr219Pro Pro200Asn + Tyr205Leu + Gly218Glu Pro209Gly + Thr212Glu + Tyr213Thr Pro200Gln + Thr210Pro + Thr219Asn Gly201Sar + Gly218Pro + Thr219Asn Pro200Ser + Gly201Pro + Thr219Gly Thr207Pro + Tyr213Ala + Leu216Glu

Ala199Ser + Thr207Asn + Thr212Asp Thr207Gln + Tyr208lla + Thr210Asp Tyr213Ser + Thr215Gln + Thr219Pro Pro200Gly + Tyr208lle + Ala214Ser Gly201Asn + Pro209Ser + Thr215Asp Pro200Sar + Pro209Asp + Tyr213Mat Tyr208Gly + Thr210Glu + Thr215Ser Ala202Ser + Ala214Asp + Thr219Ser Val204Pro + Pro209Asn + Thr219Asn Thr207Asn + Pro209Asn + Gly218Ser Pro200Gly + Leu216Cys + Gly218Ser Pro209Gly + Leu216Val + Gly218Glu Asn211 Gin + Tyr213Thr + Thr215Ser Tyr213Val + Thr215Glu + Gly218Ser Tyr213Pro + Gly218Gln + Thr219Ser Gly201Pro + Ala202Thr + Val204Cys Ala202Ser + Tyr208Leu + Pro209Asp Tyr208Thr + Thr210Asn + Ala214Thr Tyr205Pro + Pro2C9Ser + Thr215Gln Tyr205Cys + Tyr208Gly + Leu216Glu Ala199Gly + Gly203Asp + Pro209Asn Val2O4Gln + Thr207Gly + Gly218Gln Ala202His + Gly218Asp + Thr219Gln Gly203Asp + Asn211Ser + Leu216Met Pro200Ser + Val2O4Cys + Thr215Glu Thr207Asn + Leu216Pro + Asn217Glu Ala199His + Tyr205His + Thr212Pro Ala199Gln + Gly203Asp + Thr219Gly Ala199His + Pro200Gln + Asn217Asp Va,204Ser + Tyr213Leu + Thr219Gln Val204Ser + Pro209Sar + Leu216Glu Ala202Gly + Pro209Asn + Thr219Asn Thr215Gln + Gly218Asn + Thr219Gln Ala199Pro + Ala214Sar + Leu216Val Gly203Asn + Thr215Asn + Gly218Glu Thr207Pro + Tyr208Ala + Thr219Asn Ala199Ser + Thr210Ser + Gly218Gln Pro209Asn + Thr210Ser + Asn211Ser Gly201Asn + Val204Cys + Tyr213Val Gly201Ser + Val204Sar + Pro209Asn Gly201 Pro + Thr21 OSer + Asn211 Ser Tyr205Gln + Tyr208His + Thr210Asp Tyr208lle + Thr215Ser + Gly218Glu Thr212Glu + Ala214His + Thr215Gln Gly201Asn + Val204Gly + Tyr205Gln Ala199Thr + Pro209Glu + Thr210Ser Pro209G.ly + Thr210Asn + Gly218Glu

Gly203Pro + Pro209Asn + Thr210Asn Gly203Glu + Tyr213Pro + Leu216Thr Ala199Pro + Thr212Glu + Ala214Thr Thr207Gln + Pro209Asn + Thr219Ser AJa199Thr + Tyr2C5Gln + Thr219Pro Val204Met + Ala214Gly + Asn217Glu Gly201Gln + Val204Pro + Thr210Glu Tyr208Leu + Thr212Asp + Gly218Asn Gly201Gln + Tyr205His + Thr210Glu Gly201Pro + Ala214Gly + Thr219Ser Gly203Asp + Tyr205Ala + Tyr208Ser Thr212Pro + Asn217Ser + Gly218Asp Tyr205Asp + Thr207Gly + Tyr208Leu Gly201Pro + Ala202Glu + Leu216Ser Ala202His + Tyr208Pro + Thr215Asp Tyr208Thr + Thr212Glu + Thr219Ser Val204Met + Pro209Gln + Leu216Asp Thr207Pro + Thr210Asn + Tyr213Glu Gly201 Ser + Val204Gln + Asn211 Asp Gly203Gln + Tyr205Asn + Tyr213Ser Ala199Thr + Thr210Asn + Tyr213Glu Tyr208lle * Pro209Ser + Thr212Pro Tyr205Leu + Tyr208Thr + Ala214Glu Pro200Gln + Val204Gln + Ala214Glu Gly203Pro + Asn211 Asp + Asn217Gln Gly201Asn + Gly218Gln + Thr219Pro A!a199Gln + Gly203Gln + Ala214Asp Ala202Thr + Tyr205Cys + Tyr213lle Gly201 Gin + Val204Cys + Asn211 Glu Tyr208Thr + Pro209Gly + Thr215Asp Thr210Glu + Asn211Gln + Tyr213Leu Val204Cys + Tyr208Pro + Thr219Pro Ala202Asp + Gly203Asn + Gly218Asn Ala199Asn + Val2O4Gly + Tyr205Pro Gly203Pro + Val2O4Met + Tyr208His Pro200Gly + Tyr213Pro + Leu216Cys Val2O4Ala + Ala214His + Asn217Glu Ala202Gln + Thr207Asn + Ala214Gly Gly203Ser + Val2O4Gly + Tyr213Thr Asn211Asp + Leu216Cys + Thr219Asn Pro200Asn + Tbr212Gly + Gly218Asn Tyr205His + Tyr208Leu + Thr215Gln Gly203Ser + Tyr205His + Thr219Ser Val204Asn + Thr212Pro + Thr215Asp Thr212Ser + Thr215Ser + Leu216Ala Tyr208Leu + Thr212Glu + Leu216Met Thr207Asn + Tyr208Leu + Leu216Asp

Thr210Gly + Thr212Pro + Asn217Asp Asn211Ser + Ala214Asn + Leu216Glu Thr207Sar + Tyr208Thr + Ala214His Ala202Asp + Val204Ser + Tyr208Thr

Tabulka 25 smyčka 6 - varianty se čtyřmi mutacemi

Pro200Ser + Thr207Sar + Tyr213Cys + Gly218Gln Ala202Gln + Tyr208Cys + Thr210Pro + Tyr213Asn Gly203Asp + Tyr205lla + Thr215Pro + Thr219Ser Gly201Gln + Gly203Gln + Val2O4Asn + Thr207Asn Pro200Ser + Gly201Ser + Ala202Sar + Pro209Glu Gly201Ser + Thr207Pro + Thr215Asp + Thr219Pro Ala202Gln + Asn211Gln + Tyr213Ser + Thr219Asn Gly201Pro * Tyr213Ala + Ala214Pro + Thr215Ser Ala199Gly + Pro200Gly ♦ Ala202Glu + Gly218Pro Tyr205Thr + Tyr208Mat + Thr210Ser + Asn217Gln Gly201Ser + Ala214Ser + Leu216Gly + Gly218Asn Pro200Gln + Gly203Gln + Asn211Glu + Thr215Pro Pro200Ser + Tyr208Leu + Asn211Ser + Gly218Asp Ala199Asn + Pro209Asn + Thr210Ser + Tyr213Mat Ala199His + Gly203Ser + Pro209Asp + Thr212Gln Tyr205Gly + Thr212Gly + Thr215Asn + Asn217Gln Ala199Gln + Tyr208Thr + Thr210Asn + Tyr213Gln Gly203Ser + Pro209Asp + Asn211Ser + Ala214Thr Pro209Asn + Thr215Ser + Gly218Asp + Thr219Gly Ala199Pro + Thr207Gln + Thr210Glu + Thr215Pro Ala202Asn + Val204Gly + Thr207Gly + Thr212Asp Val2O4Thr + Tyr208Leu + Asn211Sar + Asn217Asp Pro200Gly + Tyr205Val + Leu216Asp + Thr219Gly Pro200Gly + Tyr208Ser + Ala214Sar + Thr219Sar Ala199Thr + Gly203Glu + Thr207Asn + Tyr213Cys Pro200Gly + Tyr213Tbr + Asn217Gln + Thr219Pro Gly203Asn + Val204Thr + Thr207Asn + Thr210Ser Ala202Gly ♦ Thr207Gln + Pro209Gln + Thr210Asp Ala199His + Gly201Gln + Tyr205Asp + Tbr219Gln Thr207Ser + Asn211Asp + Tyr213Thr + Leu216Ser Ala1S9Sar + Thr210Glu + Asn211Gln + Leu21611a Gly201Ser + Gly203Ser + Thr212Pro + Ala214Glu Pro200Gly + Gly201Gln + Gly203Gln + Leu216His Ala199Pro + Gly201Gln + Gly203Pro + Thr212Glu Ala199His + Gly201Asn + Val204Thr + Tyr208Ser Val204Thr + Tyr208lle + Ala214Glu + Thr219Pro Ala199Sar + Tyr205Pro + Thr212Ser + Thr219Gln Val2O4Met + Leu216Cys + Asn217Sar + Thr219Gly Gly201Ser + Tyr205His + Pro209Gln + Thr219Ser

Pro200Gln + Pro209Asn + Asn211Asp + Thr219Gly Val204Met + Thr210Gly + Thr212Asp + Ala214Ser Pro200Gly + Thr207Asn + Asn211Glu + Leu216His Tyr208Ala + Thr210Asp + Thr215Gln + Thr219Gly Gly203Asn + Thr207Gln + Pro209Asp + Thr215Gly Ala199Ser + Pro209Glu + Leu216His + Thr219Pro Gly203Asp + Tyr205His + Tyr213Val + Ala214Thr Pro200Asn + Thr212Asn + Leu216His + Gly218Pro Ala199Ser + Pro209Gln + Thr215Gln + Asn217Glu Gly203Asp + Thr207Pro + Thr212Gly + Ala214Gln Gly201Pro + Gly203Gln + Thr207Pro + Ala214Asp Val204Gln + Ala214Asp + Leu216Thr + Gly218Ser Thr207Asn + Tyr208Pro + Pro209Asp + Tyr213Asn Pro209Asp + Asn211Gln + Thr215Gln + Gly218Pro Val204Gln + Asn211Ser + Asn217Gln + Gly218Pro Gly201Gln + Ala202His + Asn217Asp + Gly218Gln Val2O4Thr + Tyr208Leu + Ala214Pro + Gly218Asp Gly201Ser + Thr207Pro + Thr212Ser + Thr215Pro Ala202Gly + Val204Gly + Asn211Glu + Leu216Gly Ala199Ser + Gly201Gln + Ala214Ser + Asn217Sar Ala202Gln + Thr207Pro + Pro209Glu + Tyr213Pro Ala199Thr + Ala202Ser + Val204Ala + Thr207Gln Ala199His + Thr207Ser + Pro209Gln + Ala214Glu Ala202His + Gly203Asp + Val204Pro + Gly218Pro Ala202Asn + Gly203Glu + Val2O4Gln + Thr210Gln Pro200Asn + Val204Gly + Tyr205Gln + Thr207Ser Ala202Glu + Gly203Pro + Thr207Gly + Thr219Gly Gly201Asn + Tyr208Val + Gly218Glu + Thr219Asn Pro200Ser + Gly201Gln + Tyr205Asp + Thr219Gly Pro200Ser + Thr207Gly + Ala214Pro + Thr215Asp Val2O4Ala + Thr207Gln + Asn211Asp + Thr215Pro Ala202Thr + Val204Asn + Thr207Ser + Pro209Asn Ala202Asn + Val204Thr + Thr207Gly + Pro209Sar AIa199Pro + Thr210Gln + Tyr213Cys + Ala214Thr Ala199Pro + Pro200Gln + Ala214Glu + Thr215Asn Pro200Sar + VaI204Gln + Thr207Sar + Leu216Thr Ala199Ser + Thr207Asn + Leu216Gln + Gly218Gln Gly201Ser + Tyr208Ala + Ala214Sar + Leu216Gln Val204Thr + Thr207Ser + Thr215Asp + Asn217Ser Gly201Asn + Thr207Pro + Tyr213Mat + Asn217Asp Val204Ala + Asn211Gln + Thr215Glu + Gly218Ser Pro200Gly + Pro209Ser + Thr212Gly + Asn217Glu Ala199Pro + Tyr205lle + Thr210Gly + Thr219Gly Pro200Gly + Tyr205Ala + Thr212Pro + Tyr213Glu Gly203Ser + Thr212Ser + Leu216Ala + Asn217Asp Gly201Pro + Gly203Gln + Pro209Asp + Thr215Gly Ala202His + Gly203Ser + Tyr208Cys + Gly218Asn

Ala199Pro + Ala202Gln + Val2O4Gly + Thr212Gly Ala199Asn + Pro200Gly + Gly201Gln + Val204Gln Gly201Asn ♦ Gly203Pro + Pro209Ser + Thr215Asp Gly201Asn + Thr210Sar + Tyr213Asp + Leu216Gln Gly203Gln + Val204His + Gly218Gln + Thr219Gly Gly201Asn + Tyr213Val + Ala214Glu + Thr219Gly Ala202Glu -·- Thr207Sar + Thr215Sar + Thr219Sar Gly203Glu + Thr212Asn + Asn217Gln + Thr219Ser Gly203Ser + Thr210Asn + Thr212Glu + Leu216Mat Val2O4Ala + Asn211Asp + Tyr213Mat + Leu216lla Thr207Pro + Tyr208Asn + Tyt213Pro + Leu216Gln Gly201Gln + Gly203Glu + Tyr213Met + Ala214Thr Pro200Gln + Thr212Ser + Tyr213Pro + Thr215Asn Pro200Asn + Val2O4Asn + Ásn211Glu + Tyr213Gln Pro209Ser + Asn211Gln + Asn217Asp + Thr219Asn Pro200Gly + Gly203Asn + Tyr205Val + Tyr208His Ala202Glu + Gly203Pro + Thr212Ser + Gly218Asn Ala202Gln + Val2O4Gly + Pro209Asp + Thr215Asn Tyr208Ala + Asn211 Glu + Thr215Gln + Thr219Sar Tyr208Gln + Tyr213Ala + Leu216Thr + Asn217Asp Ala199Thr + Pro200Gln + Gly201Asn + Asn211Asp Ala199Thr + Pro200Ser + Gly201Asn + Tyr208Gly Val204Ser + Thr207Gly + Thr212Asp + Gly218Gln Pro200Asn + Ala214His + Thr215Gly + Thr219Asn Thr207Ser + Tyr208Ser + Leu216Asn + Gly218Asp Pro200Gly + Gly203Glu + Thr212Gly + Gly218Asn Pro200Ser + Gly201Ser + Tyr208Gln + Thr219Asn Pro200Asn + Gly201Pro + Asn211Glu + Asn217Gln Val2O4Mat + Thr207Asn + Asn217Gln + Thr219Gly Pro200Gly + Gly201Pro + Thr210Glu + Leu216Thr Pro200Asn + Gly203Pro + Val204Gln + Thr219Gln Ala202Asp + Pro209Asn + Tyr213Cys + Leu216Ala Pro200Gln + Gly201Ser + Ala202Glu + Tyr205Gly Thr207Pro + Tyr208Asn + Asn211Ser + Tyr213Ser AJa202Ser + Val204Gly + Thr207Asn + Tyr213Gln Gly201Ser + Gly203Gln + Thr212Ser + Leu216Asp Ala199Thr + Tyr205Mat + Tyr208Val + Ala214Thr Gly201Gln + Ala202Thr * Val2O4Cys + Tyr205Leu Pro200Gln * Tyr205Cys + Thr210Glu + Thr212Asn Pro200Gln + Tyr213Pro + Asn217Glu + Gly218Asn Tyr208Pro + Tyr213His + Ala214Glu + Asn217Ser Pro200Ser + Ala202Gly + Tyr208Val + Thr212Gln Pro200Asn + Tyr205Gly + Pro209Gln + Asn211Ser Tyr205Gly + Asn211Gln + Thr215Gly + Thr219Gly Gly201Asn + Gly203Asn + Thr212Asp + Ala214Gly Val204Pro + Pro209Gly + Thr210Glu + Leu216Pro Tyr205Pro + Tyr213Ala + Gly218Asn + Thr219Pro

Ala199Gln + Val204His + Asn211Asp + Thr215Gly Pro209Gln + Thr215Gln + Asn217Asp + Thr219Asn Gly201Asn + Asn211Glu + Tyr213lle + Asn217Gln Gly201Ser + Thr207Asn + Tyr213Glu + Ala214Gly Ala199Ser + Thr210Asn 4 Thr215Gln + Gly218Pro Val204Asn + Tyr205Thr + Tyr208Met + Thr215Pro Val204Gly + Tyr205Val 4 Thr210Asp + Thr215Gln A)a202Ser 4 Val204Ala 4 Leu216Ser + Asn217Asp Asn211Asp + Thr212Ser 4 Ala214Asn 4 Thr215Gly Ala199His 4 Tyr208Leu 4 Asn217Gln 4 Thr219Asn Ala202Pro 4 Tyr208Cys 4 Leu216Ala 4 Thr219Asn Ala199Gly 4 Pro200Gly 4 Gly201Asn 4 AIa202Asp Pro200Ser 4 Ala202Gln 4 Thr210Gln + Leu216Asp Gly201Gln 4 Gly203Glu 4 Val2O4Gly + Leu216Asn Val204Pro 4 Tyr208Thr 4 Pro209Sar + Asn211Glu Tyr208Thr 4 Thr215Ser 4 Leu216Glu + Gly21BGln Gly201Asn + Tyr205Ser 4 Tyr213Asp + Gly218Pro Ala202Gln 4 Gly203Gln 4 Tyf205lla + Asn217Glu Thr212Sar 4 Tyr213Glu 4 Thr215Ser 4 Leu216Cys Gly203Glu 4 Thr212Pro 4 Tyr213Leu 4 Ala214Ser Pro200Ser + Gly201Gln + Ala202Asp + Thr210Asn Val204Gln 4 Thr210Asp 4 Tyr213Ser 4 Ala214Thr Ala199Pro 4 Gly201Sar 4 Val204Gly + Asn217Gln Pro200Asn 4 Ala202Ser 4 Thr207Gln + Tyr208Mat Pro200Gln 4 Gly203Pro 4 Ala214Glu 4 Gly218Pro Pro200Ser 4 Thr207Gly + Gly218Asn 4 Thr219Gly Gly203Ser 4 Thr207Gln 4 Thr210Gln 4 Asn217Ser Gly20lSer 4 Thr210Glu 4 Asn211Glu + Thr219Asn Thr207Gly + Thr210Asp + Asn211Asp 4 Gly218Pro Pro200Asn 4 Thr210Glu 4 Asn211Glu 4 Thr219Pro Val2O4Ser 4 Thr210Asp 4 Asn211Glu 4 Thr219Asn Ala199Ser + Tyr205Thr 4 Aia214Asp + Thr215Asp Pro200Asn 4- Thr215Asp 4 Lau216Asp 4 Thr219Ser Tyr208Asn 4- Tyr213His +Thr215Asp + Leu216Asp Gly201Ser 4 Asn211Glu 4 Thr212Asp + Ala214His Vai204Thr + Asn211Glu + Thr212Asp 4 Ala214Pro Pro200Gly 4 Thr212Gly 4 Asn217Glu 4 Gly218Asp Thr207Gln 4 Ala214Gly 4 Asn217Glu 4 Gly218Glu Thr207Asn 4 Pro209Gly 4 Asn217Asp 4 Gly218Glu Tyr213Thr 4 Leu216Val 4 Asn217Glu 4 Gly218Glu Ala199Thr 4 Ala202Asp 4 Gly203Glu 4 Gly218Pro Val2O4His 4 Tyr205Asp 4- Thr212Gly 4 Thr215Glu Pro200Ser 4 Tyr205Glu 4 Thr215Glu 4 Leu216Cys Ala202Glu 4 Gly203Asp 4 Asn217Gl0 + Thr219Pro Pro209Glu 4 Asn211Asp 4 Leu216His 4 Thr219Pro Thr207Pro + Tyr208Ser 4 Pro209Glu + Asn211 Asp Val2O4Thr 4 Pro209Asp + Asn211Asp 4 Thr212Pro

Tabulka 26 smyčka 6- varianty s pěti mutacemi_

Pro200Asn + Ala202Asn + Val204Gly + Asn211Asp + Thr219Gly

Pro200Gly + Gly201Pro + Pro209Glu + Asn211Ser + Thr212Gly Pro200Ser + Asn211Gln + Ala214Gly + Asn217Glu + Thr219Asn Gly201Asn + Gly203Ser + Thr207Ser + Tyr213Pro + Thr215Gly Pro200Ser + Tyr205Pro + Tyr208Leu + Asn211 Ser + Gly218Asp Pro200Gly + Pro209Gly + Thr212Asp + Tbr215Asn + Leu216Thr Gly201Gln + AJa202Pro + Thr212Asn + Ala214Gln + Thr215Glu Tyr205Pro + Tyr208Ser + Thr215Asp + Asn217Ser + Thr219Gln Pro200Gly + Thr207Gly + Thr212Gln + Ala214Asn + Thr215Asn Tyr205lle + Thr207Pro + Tyr208Ala + Ala214Gln + Leu216Asn Gly203Pro + Val204His + Thr207Gln + Tyr213Glu + Thr219Ser Tyr205Met * Thr207Gly + Pro209Glu + Thr215Ser + Thr219Asn Pro200Gly + Thr207Gln + Asn211Asp + Thr215Pro + Gly218Ser AIa202His + Gly203Pro + Asn211Glu + Tyr213Gly + Thr219Gln Ala199Gly + Tyr208Val + Thr210Glu + Tyr213Leu + Thr219Gln Ala199His + Pro200Gln + Val2O4Cys + Thr215Asn + Asn217Asp AJa199Gly + Pro200Gln + Tyr205lle + Thr210Gly + Thr215Asp Tyr208Met + Pro209Asn + Thr210Ser + Asn211Ser + Ala214Glu Pro200Asn + Gly201Gln + Pro209Asn + Leu216AJa + Gly218Glu Gly203Gln + Pro209Gly + Thr210Asn + Asn211Ser + Tyr213Val Gly201Pro + Thr207Asn + Thr210Gln + Tyr213His + Ala214Thr Pro200Gln + Gly201Ser + Val2O4Cys + Thr210Asn + Asn217Glu Ala199Pro + Gly203Gln + Tyr205Val + Asn211Asp + Thr215Asn Ala202Asn + Val204Ser + Asn211Ser + Tyr213Asn + Leu216Asp Thr210Glu + Thr212Ser + AJa214Gly + Thr215Gln + Leu216lle Ala199Asn + Ala202Asn + Val204Gly + Tyr205Met + Thr215Asn Thr210Gln + Thr212Pro + Tyr213Thr + Leu216Gln + Asn217Gln Ala199Gln + Pro200Gly + Ala202Pro + Tbr212Gln + Thr215Ser Ala202Gln + Thr207Asn + Thr210Gln + Asn211Glu + Ala214Gly Gly203Gln + Thr207Asn + Pro209Gly + Tyr213Asn + Gly218Asp Val2O4Cys + Tyr205Thr + Thr207Asn + Leu216Thr + Thr219Gln Gly201Gln + Val204His + Tyr208Ser + Thr212Ser + Tbr215Gly Pro200Gln + A)a202Asp + Tyr208Gly + Thr212Sor + Leu216Thr Ala199Ser + Gly201Ser + Asn211Asp + Ala214Thr + Thr219Gly Ala202Gln + Val204Ser + Tyr208Leu + Pro209Asp + Tyr213Gln Ala199Ser + Tyr205Ala + Thr210Glu + Thr212Gly + Leu216Ala Ala199His + Ala202Glu + Thr210Gly + Asn211Gln + Tyr213Pro Ala199Ser + Gly203Glu + Tyr213Met + Leu216AJa + Gly218Ser Gly201Gln + Gly203Ser + Thr207Asn + Gly218Pro + Thr219Pro Ala199Gly + Pro209Asp + Thr212Ser + Leu216Met + Gly218Ser Pro200Ser + Tyr205Ala + Asn211 Ser + Thr2i2Glu + Thr215Pro Pro209Glu + Thr212Gly + Ala214Thr + Leu216Asn + Thr219Pro Gly203Asn + Tyr205Gln + Pro209Asn + Gly218Asn + Thr219Ser

Gly201Asn + Ala202Gln + Gly203Pro + Thr210Gly + Asn217Ser Pro200Ser + Gly201Pro + Tyr208Val + Thr210Gly + Thr212Asn AJa199His + Gly201Gln + Tyr205Glu + Leu216Mat + Gly218Asn Tyr205Ser + Asn211Gln + Thr212Asp + Thr215Ser + Thr219Gly Ala199Thr + Gly201Gln + Ala202Thr + Gly203Glu + Tyr213Pro Ala199Gln + Val2O4Asn + Thr207Asn + Ťyr208Gly + Gly218Sar Ala199His + Gly203Pro + Thr207Gln + Asn211 Asp + Ala214Asn Ala202Ser + Gly203Pro + Tyr205Ser + Thr210Glu + Leu216Asn Thr207Gly + Tyr208Gly + Thr212Asp + Leu216Pro + Thr219Asn Ala202Asp + Val2O4Thr + Tyr208lla + Thr212Asn + Gly218Ser Gly203Gln + Val204Ala + Tyr205Pro + Asn211Gln + Thr215Gln Pro200Ser + Gly203Pro + Thr212Pro + Leu216Met + Gly218Glu Ala199Gly + Gly201Gln + Thr207Ser + Leu216Cys + Asn217Glu Ala199Thr + Tyr205Met + Tyr208Val + Ala214Thr + Leu216lle Ala202Asp + Tyr205Pro + Thr207Ser + Tyr208Thr + Thr210Pro Ala199Gln + Pro200Gln + Thr207Asn + Leu216Val + Gly218Ser Gly201 Ser + Tyr208Met + Asn211 Asp + Ttir212Ser + Thr219Gly Gly203Ser + Thr207Pro + Asn211 Ser + Asn217Asp + Gly218Gln Gly201Pro + Gly203Asp + Tyr208Asn + Thr212Ser + Thr215Asn Ala199Pro + Pro200Ser + Tyr205Asp + Thr212Pro + Leu216Val Tyr208Ala + Tyr213lle + Ala214Gly + Thr215Pro + Asn217Gln Ala199Ser + Pro200Gly + Gly203Asp + Leu216His + Asn217Ser Gly201Pro + Gly203Ser + Val2O4Asn + Leu216Ala + Asn217Asp Val2O4Gln + Tyr208His + Asn211Asp + Tyr213His + Leu216Thr Pro200Gly + Gly201Asn + Val2O4Gln + Tyr208Cys + Thr210Pro Ala202Asn + Tyr205Gln + Pro209Glu + Thr210Gly + Gly218Asn Pro200Gly + Thr207Pro + Tyr208Met + Leu216Val + Asn217Glu Gly201Asn + Tyr205Gln + Thr212Asp + Thr215Pro + Asn217Gln Gly203Glu + Tyr208lle + Asn211Gln + Thr215Ser + Thr219Gly Gly201Asn + Ala202Ser + Gly203Gln + Asn211Gln + Ala214Asn Pro200Gly + Val204Asn + Pro209Gin + Thr210Pro + Thr219Ser Tyr208Leu + Pro209Asn + Thr210Gln + Thr215Asn + Gly218Asn Ala202Ser + Val204Cys + Thr210Asn + Ala214Glu + Thr215Gly Pro200Asn + Gly203Gln + Tyr208Ser + Pro209Gln + Gly218Pro Ala202Thr + Gly203Asp + Tyr205Leu + Thr212Gly + Tyr213Gln Gly203Gln + Val204Pro + Thr210Asp + Gly218Gln + Thr219Gly Tyr208Hís + Thr210Ser + As n211 Asp + Leu216Asn + Asn217Gln Gly201Gln + Tyr205His + Thr210Glu + Tyr213lle + Leu216Ala Pro200Asn + Gly201Ser + AJa202Glu + Gly203Gln + Thr219Ser Ala199Gln + Gly201Asn + Ala202Asp + Thr212Asn + Tyr213Thr Ala199Pro + Val2O4Ser + Tyr213His + Asn217Asp + Gly218Gln Pro200Asn + Gly201Ser + Ala202Pro + Thr207Ser + Ala214Thr Ala199Asn + Gly201Pro + Gly203Asp + Tyr213Cys + Gly218Gln Gly201Gln + Gly203Asn + Val204Thr + Thr210Ser + Thr212Gln Gly201Asn Ala202Pro + Thr210Gln + Asn211Gln + Thr215Gln Pro200Asn + Gly203Glu + Tyr205Val + Thr207Pro + Tyr208Ser Ala199Gln + Gly201Ser + Ala202Pro + Thr207Pro + Asn217Glu

Pro200Gln + Tyr205Met + Thr212Pro + Leu216Glu + Thr219Ser Ala199Pro + Pro200Gln + Ala202Gly + Thr207Gln + Asn217Glu Tyr208Thr + Asn211Sar + Tyr213Gln + Leu216Gly + Thr219Pro Gly203Ser + Val204Thr + Tyr208Ala + Tyr213Pro + Thr219Asn Gly201Asn + Gly203Pro + Val2O4Ala + Asn211Ser + Thr219Gly Gly203Glu + Thr207Sar + Tyr208Ser + Thr215Asn + Leu216Cys Gly201Asn + Tyr208Leu + Asn211Glu + Leu216Gly + Asn217Ser Gly201Pro + Tyr208Val + Thr210Pro + Leu216Gln + Gly218Asn Pro200Asn + Ala202Thr + Thr207Ser + Thr212Ser + Ala214Asp Gly203Glu + Val204Asn + Thr210Pro + Ala214His + Gly218Asn Gly201Ser + Val204Mat + Ala214Gly + Leu216Ser ♦ Thr219Ser Pro200Gly + Tyr208Val + Tyr213His + Leu216Ala + Asn217Glu Thr212Glu + Tyr213Asn + Ala214Thr + Leu216Gln + Gly218Pro Gly203Pro + Val204Asn + Tyr208Cys + Asn217Glu + Thr219Ser Pro200Asn + Gly201Pro + Val204Thr + Leu216Asp + Asn217Gln Tyr205Mat + Tyr208Asn + Pro209Asn + Tyr213lle + Ala214His Gly201Gln + Gly203Pro + Tyi205Cys + Thr210Gln + Asn217Asp Ala202Asn + Gly203Asp + Thr207Gly + Asn211Sar + Thr219Pro Pro200Gly + Gly201Sar * Val2O4Cys + Thr207Gly + Gly218Asp Pro200Sar + Gly203Pro ♦ Tyr208Pro + Thr210Asn + Asn211Glu Pro200Gly + Gly201Gln + Tyr205Leu + Pro209Asn * Ala214His Tyr205Ser + Thr207Gln + Tyr208Ser + Thr212Sar + Thr219Asn Ala202Gly + Asn211 Asp + Thr212Gln + Ala214Thr + Leu216His Ala202Pro + Val204Ala + Pro209Gln + Asn211Sar + Thr212Glu Ala202Gly + Thr207Pro + Pro209Gly + Asn217Ser + Gly218Asp Gly201Gln + Pro209Asn + Thr215Sar + Leu216Thr + Thr219Gly Val204Thr + Tyr208Val + Thr215Asn + Asn217Glu + Gly218Asn Tyr205Gln + Tyr213Pro + Thr215Ser + Leu216Gly + Gly218Gln Gly203Asn + Thr207Ser + Thr210Asn + Asn211 Asp + Lau216Met Tyr208His + Pro209Ser + Leu216Gly + Asn217Glu + Gly218Gln Thr207Ser + Pro209Gly + Asn211Glu + Thr215Ser + Leu216lla Ala199Gly + Ala202Glu + Thr207Pro + Tyr213Val + Ala214Gly Ala199His + Pro200Gly + Gly201Ser + Gly218Asp + Thr219Pro Ala202Glu + Tyr208Ala + Thr212Sar + Tyr213His + Thr219Asn Ala199Thr + Val204Thr + Thr207Asn + Thr210Asn + Tyr213Glu Tyr208Gln + Pro209Gly + Ala214Asn + Thr215Glu + Gly218Asn Tyr208Thr + Tyr213Val + Thr215Asp + Leu216Val + Gly218Gln Thr207Pro + Pro209Ser + Thr210Glu + Asn217Ser + Thr219Pro Pro200Ser + Gly201Gln + Tyr205lle + Pro209Gly + Thr219Gln Val204Met + Thr207Pro + Tyr208Gln + Pro209Asn + Thr215Asp Val204Ala + Pro209Asn + Thr210Gly + Tyr213Asp + Ala214Pro Pro200Ser + Tyr208His + Tyr213Glu + Leu216Cys + Thr219Ser Gly201Gln + Ala202Asp + Tyr205Ala + Leu216Thr + Asn217Gln Ala199Gly + Gly201Asn + Val2O4Gly + Ala214Asn + Thr219Pro Pro200Asn + Ala202Asn + Gly203Gln + Tyr208Asn + Asn217Asp Val204Gly + Tyr205Asp + Asn211Gln + Tyr213Met + Ala214Gly Gly201Asn + Thr207Gln + Pro209Gln + Ala214Asp + Gly218Pro

Pro200Gly + Tyr208Ser + Asn211Asp + Tyr213Ser + Thr219Gly Ala202Thr + Val204Pro + Thr210Ser + Asn211Asp + Leu216Thr Gly203Glu + Val204Mat + Tyr205His + Asn211Gln + Thr219Gln Gly201Gln + Ala202Gly + Val204Ser + Thr207Gln + Asn21 iG!u Gly203Asn + Tyr208Ala + Pro209Asp + Thr212Asn + Thr215Gln Ala199Glr> + Pro200Asn + Tyr205Mat + Asn211Asp + Thr219Gln Val2O4Gln + Tyr208Val + Thr210Pro + Asn211Gln + Leu216Asp Pro200Asn + Val204Pro + Tyr205Gly + Thr210Pro + Ala214Gly Gly201Asn + Tyr205Mat + Tyr213Cys + Lau216lle + Thr219Asn Ala199Gly + Gly201Asn + Gly203Gln + Val204Thr + Pro209Glu Ala199His + Ala202Gly + Pro209Asp + Thr210Asp + Gly218Ser Gly201Gln + Tyr208Sar + Pro209Asp + Thr210Glu + Gly218Sar Ala199Asn + Pro200Ser + Thr212Asn + Ala214Asp ♦ Thr215Glu Ala199His + Pro200Ser + Thr215Gly + Asn217Asp + Gly218Glu Tyr205Thr + Thr207Sar + Asn217Glu + Gly218Asp + Thr219Gly Ala202Thr + Tyr205Glu + Tyr208Thr + Thr215Glu + Leu216Gln Tyr205Asp + Thr212Gly + Thr215Glu + Asn217Ser + Gly216Ser Pro200Gly + Ala202Glu + Val204Ala + Tyr208Leu + Asn217Asp Pro200Gln + Ala202Asp + Tyr205Gly + Tyr213lle + Asn217Asp Pro209Asp + Asn211Asp + Tyr213Thr + Leu216Cys + Thr219Asn Ala202Asn + Val2O4His + Pro209Glu + Asn211Glu + Thr219Asn Pro200Ser + Ala202Asp + Val204Gln + Leu216Glu + Asn217Glu Ala199Gly + Pro200Gln + Ala202Gln ♦ Thr210Glu + Thr212Asp Gly203Asp + Pro209Gly + Tyr213His + Asn217Asp + Gly218Sar Gly203Asp + Val2O4Thr + Tyr208Ala + Tyr213Gln + Thr215Asp Tyr205Pro + Thr207Gly + Pro209Glu + Thr212Asp + Gly218Sar Ala199His + Ala202Glu + Gly203Gln + Asn211Gln + Gly218Asp Ala199Asn + Ala202Glu + Thr207Gln + Thr212Gln + Gly218Asp Ala202Asp + Gly203Asn + Tyr213Val + Leu216lle + Gly218Glu Pro200Gly + Ala202Thr + Tyr208Mat + Ala214Glu + Lau216Asp Gly203Glu + Thr207Gln + Thr212Ser + Ala214Glu + Thr215Glu Val204His + Tyr205Asp + Tyr208Mat 4 Tyr213Glu 4 Asn217Gln Tyr205Gly 4 Tyr213lle 4 Leu216Glu 4 Gly218Glu 4 Thr219Gly Val204Sar 4 Asn211Gln 4 Tyr213Thr 4 Thr215Glu 4 Asn217Glu Tyr208Leu 4 Thr210Gly 4 Thr212Gln 4 Tyr213Glu 4 Thr215Glu Ala202Glu 4 Tyr205Glu 4 Thr210Gly 4 Asn211Gln 4 Leu216Asp Pro200Asn + Thr210Sar + Thr212Asp 4 Tyr213Glu 4 Thr215Asp Ala199Thr 4 Thr207Ser + Thr210Asp 4 Thr212Asn 4 Tyr213Asp Ala202Glu 4 Val204Pro 4 Tyr205Thr 4 Tyr208His 4 Thr215Glu Gly203Glu 4 Tyr208lla 4 Thr210Gln 4 Tyr213Gly 4 Gly218Asp Tyr208Gln 4 Pro209Glu 4 Tyr213Thr 4 Ala214Glu 4 Thr219Gln Tyr205Asp 4 Thr210Ser 4 Thr215Gln 4 Asn217Asp 4 Gly218Glu Gly201Asn 4 Tyr205Glu 4 Tyr208Leu + Asn217Asp 4 Gly218Glu

Tabulka 27 _smyčka 6- varianty se šesti mutacemi

Pro200Gly + Gly203Asp + Thr210Gln + Thr212Asn + Ala214His + Leu216Asn

Pro200Gly + Thr207Asn + Thr210Gln + Thr212Pro + Thr215Asp + Gly218Pro

Pro200Gln + Gly203Ser + Thr207Asn + Tyr208lle + Pro209Ser + Thr210Glu

Gly203Pro + Tyr205Gly + Tyr208Gly + Asn211Glu + Tyr213Pro + Gly218Gln

Ala199His + Gly201Gln + Gly203Gln + Thr212Pro + Leu216lle + Gly218Asp

Val204Met + Tyr205Thr + Thr207Ser + Tyr213His + Ala214Glu + Thr219Asn

Ala199Thr + Gly201Ser + Gly203Asp + Thr207Pro + Thr210Gly + Thr212Pro

Pro200Gly + Tyr208lle + Asn211Glu + Tyr213Ser + Ala214Ser + Thr215Gln

Ala199Thr + Gly201Gln + Pro209Gln + Thr212Asn + Tyr213His + Thr219Gly

Ala199Gly + Pro200Gly + Gly201Pro + Val204Cys + Thr207Gly + Thr215Gln

Ala199Gly + Pro200Sar + Thr207Pro + Leu216Ala + Asn217Glu + Gly218Asn

Pro200Gln + Val204Met + Asn211Gln + Ala214Gln + Thr215Gln + Leu216Asp

Ala199Ser + Gly203Asn + Thr207Gln + Pro209Asp + Thr215Gly + Leu216His

Gly201Pro + Tyr208lle + Thr210Glu + Ala214Gly + Leu216Val + Thr219Ser

Ala199Gln + Ala202Asn + Pro209Asn + Tyr213Asn + Thr215Gln + Gly218Ser

Pro200Gln + Gly203Pro + Val204Gly + Thr212Pro + Ala214Pro + Thr215Glu

Val204Met + Tyr208Asn + Tyr213Asp + Ala214His + Thr215Gln + Leu216Thr

Ala199Gly + Pro200Asn + Ala202Thr + Val204Ser + Gly218Glu + Thr219Pro

Ala199Ser + Gly201Pro + Gly203Asn + Thr207Ser + Thr212Gly + Thr219Gln

Ala199His + Tyr205Asn + Tyr208Ala + Asn211Gln + Tyr213Asn + Asn217Asp

Tyr205Asp + Thr207Gly + Pro209Asn + Thr210Pro + Tyr213Ser + Leu216Ser

Gly201Gln + Ala202His + Thr207Gly + Pro209Glu + Thr210Ser + Ala214Gly

Pro200Asn + Val204Gln + Tyr205Cys + Thr207Gln + Thr212Gln + Thr219Ser

Pro200Ser + Tyr205Asp + Thr210Ser + Thr215Gln + Leu216Asn +

Asn217Gln

Ala202His + Tyr205Thr + Tyr208His + Thr212Asp + Tyr213lle + Gly218Gln

Gly201Asn + Pro209Glu + Asn211Gln + Thr212Sar + Tyr213Gln + Thr219Gln

Ala199Pro + Pro200Asn + Tyr205Val + Thr210Glu + Lau216Gly + Gly218Asn

Ala199Gln + Pro200Gln + Val204Thr + Tyr208Thr + Leu216Met + Asn217Asp

Val204Met + Thr210Ser + Thr212Asn + Tyr213Cys + Thr215Asn + Thr219Pro

Ala199Gln + Gly201Pro + Ala202His + Thr207Asn + Leu216Val + Gly218Ser

Ala199Thr + Gly203Ser + Tyr205Val + Tyr208Val + Thr210Pro + Ala214Glu

Ala199Asn + Pro200Gln + Tyr205Met + Tyr208Cys + Thr212Glu + Ala214Gln

Ala202Ser + Thr207Gln + Thr210Glu + Asn211Gln + Tyr213lle + Leu216AIa

Ala199Gly + Pro200Gly + Thr207Pro + Tyr213Ser + Leu216Asn + Asn217Ser

Gly201Ser + Ala202Gly + Tyr205Asn + Pro209Gly + Thr210Asn + Asn211Gln

Gly201Ser + Ala202Gly + Gly203Asp + Thr207Asn + Asn211Gln + Thr215Gly

Val204Gln + Tyr205His + Thr207Gln + Tyr208His + Asn211 Asp + Leu216Thr

Ala202Glu + Val204Ser + Tyr205His + Tyr208lle + Ala214Gln + Leu216Gln

Ala199Gly + Gly203Glu + Tyr205Val ř Tyr213His + Ala214Asn + Asn217Ser

Pro200Ser + Gly201Ser + Tyr205Asn + Thr210Ser + Thr212Glu + Gly218Asn

Ala199Thr + Gly201Gln + Pro209Ser + Thr210Asp + Thr215Gly + Leu216Ser

Gly201Pro + Tyr205Thr + Thr207Ser + Tyr213His + Gly218Asp + Thr219Gly

Gly203Glu + Tyr208lle + Asn211Gln + Ala214Gln + Thr215Ser + Thr219Gly

Ala199Gly + Gly203Gln + Thr207Gln + Asn211Asp + Thr215Pro + Thr219Gln

Ala199Pro + Thr207Gly + Pro209Glu + Thr210Ser + Thr212Gly + Leu216Val

Val2O4Asn + Thr207Pro + Asn211Gln + Ala214Hiš + Asn217Glu + Gly218Gln

Ala202Glu + Gly203Ser + Val204Cys + Thr210Gly + Asn211Gln + Ala214Pro

Ala199Asn + Ala202Gln + Gly203Asn + Thr207Pro + Thr212Pro + Thr215Pro

Ala199Thr + Gly203Gln + Thr207Asn + Tyr208Asn + Tyr213Glu + Thr215Gly

Pro200Ser + Ala202Asn + Val204Ser + Tyr205lle + Thr207Gln + Asn211Asp

Pro200Gln + Val204Pro + Tyr208Pro + Pro209Asn + Leu216Glu + Thr219Sar

Pro200Gly + Ala202Gln + Tyr205Thr + Thr210Gln + Asn211Gln + Ala214Asp

Gly203Asn + Pro209Ser + Thr210Glu + Ala214Pro + Gly218Asn + Thr219Asn

Pro200Ser + Gly201Pro + Ala202Thr + Ala214Gly + Leu216Asp + Thr219Ser

Ala202Ser + Tyr205His + Thr212Gln + Thr215Glu + Asn217Gln + Thr219Sar

Ala202Gly + Thr207Asn + Pro209Gly + Thr210Pro + Tyr213Met + Thr215Gly

Pro200Gln + Val204Ser + Thr207Ser + Tyr208Cys + Thr212Asn + Gly218Gln

A!a199Pro + Pro200Gly + Ala202Thr + Thr207Gly + Thr212Glu + Thr219Ser

Ala199His + Gly203Gln + Tyr205Gly + Thr207Ser + Thr210Asn + Thr212Ser

Gly203Glu + Val2O4Asn + Tyr205Pro + Thr210Pro + Ala214His + Gly218Asn

Pro200Gln + Val204Ala + Tyr208Cys + Ala214Gln + Leu216Val + Asn217Glu

Gly201Gln + AIa202Asp + Tyr205Gly + Thr210Gly + Leu216Val + Gly218Ser

Pro200Asn + Gly201Ser + Thr207Gln + Thr212Asp + Tyr213Gly + Thr215Pro

AIa202Asn + Gly203Asp + Val2O4Cys + Thr207Gly + Asn211Ser + Thr219Pro

Ala199Ser + Gly201Ser + Tyr205Ser + Thr207Asn + Tyr213Val + Leu216Ala

Pro200Gln + Tyí205Ser + Thr207Gln + Tyr208Ser + Thr212Ser + Thr219Asn

Pro200Asn + AIa202Gly + Asn211Asp + Thr212Gln + Ala214Thr + Leu216His

Gly201Pro + Gly203Glu + Val2O4Met + Pro209Gly + Asn217Ser + Thr219Ser

Pro200Gly + Gly201Pro + Tyr208Asn + Thr212Ser + Tyr213Leu + Ala214Asn

Ala199Ser + Gly201Pro + Gly203Asn + Asn211Asp + Leu216Cys + Thr219Asn

Gly203Pro + Val204Gly + Thr207Gln + Leu216Gly + Asn217Ser +

Gly218Asn

Val2O4Gln + Thr207Gln + Thr210Gly + Asn211Glu + Ala214Gly + Thr219Pro

Ala202His + Tyr208Asn + Thr210Asn + Leu216Asn + Gly218Pro + Thr219Gly

Gly201Pro + Gly203Asp + Tyr205Met + Thr207Ser + Tyr213Gln + Asn217Gln

Gly201Ser + Ala202Ser + Thr207Asn + Tyr208Gly + Asn211Ser + Leu216Pro

Ala202Gln + Gly203Asn + Val204Met + Tyr208Sar + Thr212Gln + Leu216Asp

Ala199Asn + Ala202Thr + Pro209Glu + Thr210Pro + Asn217Sar + Thr219Gly

Gly203Asn + Tyr208Ser + Asn211Glu + Ala214His + Leu216Met + Gly218Pro

Ala199Ser + Pro200Gln + Val2O4Asn + Tyr208Asn + Thr215Asp + Thr219Gln

Gly201 Asn + Thr207Asn + Tyr208Gln + Pro209Asn + Asn211Asp + Leu216Cys

Pro200Ser + Gly203Asn + Thr207Gln + Thr212Gln + Asn217Asp + Gly218Asn

Val2O4His + Tyr205Ala + Thr210Asn ♦ Thr215Pro + Leu216Val + Asn217Glu

Ala199Pro + Gly201Asn + Ala202Asp + Val204Thr + Thr210Gly + Thr219Ser

Pro200Asn + Ala202Gly + Gly203Glu + Thr207Gln + Tyr208His + Asn211Gln

Pro200Gly + Ala202Asn + Gly203Asn + Thr212Asp + Ala214Ser + Leu216Pro

Ala199Gly + Gly201Pro + Thr207Gly + Pro209Asp + Thr215Asn + Gly218Ser

Gly203Asn + Tyr205Thr + Asn211Asp + Ala214Gly + Gly218Asn + Thr219Gly

Gly201Pro + Val2O4His + Tyr208Cys + Thr215Glu + Leu216Asn + Gly218Pro

Val2O4Ala + Pro209Asn + Thr210Asp + Tyr213Leu + Leu216Sar + Thr219Gly

Ala202Asp + Tyr205Val + Thr207Asn + Thr210Asn + Tyr213Pro + Ala214Asn

Gly201Ser + Thr207Gly + Thr212Pro + Thr215Sar + Leu216Asn + Thr219Gly

Ala199His + Gly203Gln + Tyr205Gln + Tyr208His + Ala214Gln + Thr215Asn

Val2O4Asn + Tyr205lla + Pro209Glu + Thr210Ser + Tyr213Val + Leu216Ser

Ala199Ser + Pro200Ser + Gly201Asn + Val2O4Thr + Thr207Pro + Gly218Glu

Ala199Gly + Pro200Gly + Pro209Gln + Thr215Asp + Leu216Cys + Thr219Gly

Gly201Ser + Gly203Ser + Tyr205Cys + Thr207Gln + Thr212Gly + Ala214Thr

Pro200Asn + Ala202Gln + Pro209Gly + Thr210Asp + Thr215Pro + Gly218Asn

Tyr205Pro + Thr207Gln + Thr210Glu + Tyr213Cys + Leu216Pro + Thr219Sar

Gly201Gln + Tyr205Val + Tyr208Val + Thr210Gln + Thr215Glu + Gly218Asn

Ala199Ser + Tyr208Asn + Asn211Gln + Leu216lle + Asn217Glu + Gly218Pro

Pro200Asn + Gly201Pro + Val204Thr + Tyr205His + Thr215Glu + Leu216Thr

Gly203Pro + Val204His + Pro209Gly + Thr210Glu + Thr215Pro + Gly218Asn

Tyr205Leu + Asn211Gln + Ala214Gln + Lau216Gly + Asn217Asp + Gly218Asn

Ala199Ser + Gly201Gln + Gly203Pro + Tyr208Thr + Thr215Gly + Thr219Asn

Pro209Glu + Thr210Ser + Thr212Sar + Tyr213Pro + Ala214Thr + Thr215Pro

Pro200Ser + Ala202Pro + Gly203Asn + Thr207Pro + Thr210Asp + Tyr213Val

Gly201Asn + Thr207Gly + Pro209Ser + Tyr213Met + Leu216lla + Gly218Asp

Gly201Pro + Val204His + Thr212Gly + Leu216Asn + Asn217Ser + Thr219Gly

Thr212Gln + Ala214Glu + Thr215Ser + Asn217Sar + Gly218Ser + Thr219Asn

Gly203Ser + Tyr205Met + Tyr208Thr + Thr210Asn + Ala214Glu + Leu216lle

Gly201Gln + Tyr208Gln + Thr210Gly + Thr212Gln + Asn217Ser + Thr219Asn

Gly201Gln + Tyr205Cys + Thr212Pro + Tyr213Mat + Leu216Asn + Gly218Gln

Ala202Gln + Tyr205Val + Pro209Gln + Thr210Asp + Asn211Ser + Thr215Gln

Gly201Pro + Val204Pro + Thr207Asn + Asn211Gln + Asn217Glu + Thr219Asn

Ala199Ser + Tyr213Ser + Ala214Thr + Leu216Ser + Asn217Ser + Gly218Glu

Pro200Gln + Gly201Ser + Val2O4Ala + Thr207Gln + Thr210Asn + AJa214Glu

Tyr205Gln + Tyr208Cys + Thr212Gln + Leu216Ser + Gly218Gln + Thr219Ser

Pro200Gly + Gly201Pro + Gly203Pro + Thr207Gln + Thr210Gly +

ΊΌ

Thr219Pro

Ala199Gln + Pro200Gly + Val204Ser + Thr215Glu + Asn217Ser + Thr219Pro

Ala199Ser + Pro200Gln + Gly201Pro + Val204Pro + Thr210Pro + Thr219Gln

Ala202Gln + Thr207Gln + Thr210Glu + Ala214Ser + Thr215Pro + Gly218Gln

Pro200Gln + Ala202Glu + Thr207Pro + Pro209Asn + Thr212Gln + Leu216Val

Gly201Asn + Asn211Glu + Tyr213Cys + Ala214Thr + Thr215Ser + Leu216His

Ala199His + Ala202Gly + Tyr205Ala + Thr207Gly + Asn211Asp + Ala214Gln

Gly203Ser + Thr207Asn + Pro209Glu + Thr210Asp + Asn217Gln + Thr219Gly

Gly201Gln + Val204Met + Thr210Asp + Asn211Asp + Leu216Gln + Gly218Sar

Gly203Pro + Tyr205lla + Tyr208Gln + Asn211 Asp + Thr212Glu + Gly218Gln

Gly203Ser + Tyr205Val + Thr207Asn + Leu216Glu + Asn217Asp + Thr219Ser

Val2O4Ala + Tyr205Pro ♦ Pro209Ser + Leu216Ala + Asn217Asp + Gly218Glu

Pro200Asn + Gly201Ser + Tyr208Thr + Thr215Gln + Asn217Asp + Gly218Asp

Ala202Asn + Tyr208Met + Thr210Gln + Asn211Gln + Asn217Asp + Gly218Asp

Ala199Gln + Ala202Asp + Gly203Glu + fhr207Gln + Tyr208Asn + Asn211Gln

Ala202Asp + Gly203Asp + Thr207Sar + Tyr208Cys + Thr210Asn + Thr215Pro

Ala202Glu + Gly203Asp + Thr207Gly + Tyr208Leu + Leu216Val + Thr219Gln

Pro200Ser + Gly201 Asn + Pro209Asp + Thr210Asp + Asn211Asp + Leu216Ser

Ala199Gln + Val204Gln + Tyr205Asp + Tyr208Leu + Thr210Gln + Thr215Glu

Pro200Gln + Gly203Gln + Tyr205Glu + Thr212Gly + Thr215Glu + Thr219Pro

Pro200Asn + Thr207Sar + Thr210Asp + Asn211Asp + Thr212Glu + Lau216Mat

Ala202Asp + Gly203Asp + Val204Sar + Thr210Sar + Asn217Asp + Gly218Pro

Val204Ser + Thr207Pro + Tyr213His + Thr215Glu + Leu216Asp + Asn217Glu

Val204Gly + Asn211Ser + Ala214Gln + Thr215Glu + Leu216Glu + Asn217Glu

Tyr208lla + Tyr213Ser + Ala214His + Leu216Glu + Asn217Asp + Gly218Asp

Gly203Asp + Thr207Ser + Ala214His + Thr215Asp + Leu216Asp + Thr219Ser

Ala199Ser + Gly201Asn + Thr207Sar + Pro209Glu + Asn211Asp + Thr219Sar

Gly203Glu + Tyr205Glu + Thr210Gly + Tyr213Asn + Ala214Gln + Thr215Asp

Ala199His + Gly203Asp + Val2O4His + Thr212Ser + Asn217Asp + Gly218Pro

Tyr205Glu + Thr210Gly + Asn211Sar + Ala214Asp + Thr215Ser + Asn217Gln

Gly201Asn + Tyr205Asp + Asn211Gln + Thr212Ser + Ala214Glu + Gly218Ser

Ala199Asn + Gly201Asn + Gly203Asp + Tyr208Thr + Thr215Asp + Leu216Thr

Pro200Gly + Tyr208Pro + Pro209Glu + Thr212Asp + Gly218Ser + Thr219Ser

Pro200Asn + Val204Gly + Thr207Asn + Pro209Asp + Thr212Glu + Tyr213Ala

Ala199Pro + Gly203Asp + Tyr205Glu + Pro209Ser + Ala214His + Thr215Asn

Pro200Gly + Gly203Glu + Thr207Sar + Thr215Gln + Asn217Asp + Gly218Asp

Ala202Glu + Gly203Glu + Tyr208Gln + Tyr213Thr + Ala214Sar + Gly218Asp

Pro200Gln + Gly203Asp + Tyr213Asn + Ala214Asp + Thr215Asp + Leu216lla

Ala202Ser + Gly203Ser + Tyr205Glu + Pro209Gly + Thr215Asp + Asn217Glu

Ala202Gln + Thr207Pro + Thr212Asp + Tyr213Pro + AIa214Glu + Thr219Gly

Pro200Ser + Val204Pro + Thr212Asp ♦ Tyr213Ala + Ala214Asp + Thr219Asn

Ala199Ser + Ala202Asp + Val204Pro + Pro209Ser + Thr215Asn + Leu216Asp

Ala199Gly + Ala202Asn + Val2O4Asn + Tyr213Asp + Ala214Glu + Leu216Glu

Ala199Thr + Gly203Gln + Thr210Gln + Thr212Gln + Tyr213Glu + Thr215Glu

Pro200Gln + Gly201Pro + Pro209Asp + Tyr213Glu + Thr215Pro + Gly218Asn

Val204Asn + Tyr205Val + Pro209Asp + Thr212Pro + Tyr213Asp + Ala214Gly

Tyr205L.au + Asn211Glu + Thr212Glu + Tyr213Leu + Ala214Glu + Thr215Gly

Ala199Ser + Ala202Glu + Tyr213Pro + Ala214Gly + Thr215Asp +

Gly218Pro

Pro200Gly + Gly203Asp + Val204His + Thr210Asn + Asn211Gln + Gly218Asp

Gly201Ser + Ala202Gly + Gly203Asp + Ala214Asn + Gly218Glu + Thr219Gly

Ala199Gln + Pro200Ser + Ala202Ser + Thr210Asp + Asn211Glu + Ala214Glu

Ala202Glu + Thr207Ser + Asn211Gln + Ala214Asp + Leu216Glu + Gly218Ser

Ala199Gln + Pro200Ser + Tyr205Asp + Pro209Sar + Thr215Gly + Asn217Glu

Ala199Ser + Tyr205Asp + Tyr213Met + Ala214Thr + Asn217Asp + Thr219Asn

Pro200Gln + Ala202Asn + Gly203Gln + Tyr213Glu + Leu216Glu + Thr219Asn

Ala199Pro + Ala202Gln + Gly203A$n + Thr212Glu + Thr215Asp + Leu216Asp

Ala199Gln + Gly201Gln + Val204Thr + Asn211Asp + Ala214Asp + Thr215Asp

Gly203Gln + Val2O4Met + Asn211Glu + Thr212Ser + Ala214Asp + Thr219Gly

Thr207Gly + Tyr208Val + Thr2:0Gly + Thr215Glu + Leu216Asn + Gly218Asp

Pro200Gly + Val2O4Asn + Thr207Gly + Thr210Glu + Tyr213Val +

AI a214 Asp

Gly203Glu + Thr207Asn + Thr210Gly + Thr212Asp + Thr215Asp + Leu216Gln

Gly203Gln + Val2O4Cys + Pro209Asn + Thr210Ser + Thr212Asp + Thr215Asp

Gly203Asn + Val204Gly + Tyr205Asp + Ala214Glu + Thr215Pro + Gly218Asp___

Tabulka 28 _smyčka 6- varianty se sedmi mutacemi

Pro200Asn + Ala202Gln + Tyr208Cys + Thr210Pro + Tyr213Asn + AI a214 Asn + Thr219Ser

Gly203Pro + Val2O4Gln + Tyr205Gly + Tyr208Gly + Asn211 Glu + Tyr213Pro + Gly218Gln

G,y201Asn + Gly203Gln + Val204Cys + Thr207Ser + Thr212Asp + Thr215Pro + Thr219Gly

Gly203Gln + Val204Gln + Tyr205Pro + Thr212Gly + Tyr213Val + Asn217Asp + Thr219Gly

Gly201Gln + Ala202Gln + Val204Pro + Asn211Asp + Tyr213lle + Leu216Gly+ Gly218Pro

Pro200Gly + Ala202Gln + Val204Pro + Pro209Asn + Tyr213Alá + Asn217Asp + Thr219Pro

Ala199Thr + Gly201Ser + Val204Ser + Thr210Gly + Asn211Asp +

Gly218Ser + Thr219Ser

Gly201Gln + Tyr208Val + Pro209Gln + Asn211Ser + Thr215Pro + Asn217Gln + Thr219Gln

Ala199His + Pro200Gly + Pro209Asn + Thr212Gln + Tyr213lla + Leu216Gln + Thr219Gly

Pro200Gln + Thr210Pro + Asn211Ser + Thr212Gln + Leu216Gln + Asn217Asp + Thr219Pro

Pro200Ser + Val2O4His + Tyr205Ala + Tyr208Ser + Asn211Gln + Ala214His + Thr215Asn

Ala199Ser + Pro200Ser + Gly201Pro + Tyr205Mat + Thr207Pro + Thr210Asp + Thr212Ser

Gly201Gln + Val2O4Ser + Tyr205Asn + Tyr213Ala + Ala214Glu + Thr215Gln + Leu216Thr

Ala199Gln + Val2O4Thr + Thr207Ser + Tyr208Asn + Pro209Asn + Thr212Gln + Gly218Pro

Pro200Asn + Gly203Pro + Thr207Pro + Thr210Gln + Tyr213His + Leu216lla + Gly218Asp

Ala202Gly + Gly203Gln + Val204Gly + Tyr205Ser + Thr212Gln + Asn217Ser + Thr219Gly

Pfo209Gly + Thr210Gln + Asn211Asp + Tyr213Gln + Ala214Ser + Leu216Asn + Asn217Ser

Ala199His + Val204Pro + Tyr205Glu + Pro209Asn + Tyr213Ala + Leu216Thr + Gly218Asn

Ala199Gln + Pro200Asn + Ala202Thr + Gly203Pro + Val2O4Gln + Thr212Ser + Tyr213Gln

Gly201Asn + Ala202Asn + Gly203Asp + Tyr208Thr + Thr212Gln + Tyr213Thr + Gly218Asn

Ala199Thr + Gly203Asp + Val204Thr + Thr207Asn + Thr210Asn + Asn211Ser + Tyr213Val

Pro200Gly + Thr207Pro + Tyr208Met + Pro209Glu + Tyr213His + Thr215Pro + Leu216Gln

Pro200Ser + Gly201Asn + Ala202Asp + Tyr205Cys + Tyr208Ala + Tyr213His+Thr219Asn

Ala199Pro + Val204Met + Thr207Gln + Tyr208Val + Asn211Glu + Ala214Sar + Thr219Ser

Gly201Asn + Tyr205Leu + Tyr208Pro + Thr210Pro + Thr212Asn + Tyr213Leu + Ala214Asn

Pro200Ser + Gly201Pro + Gly203Pro + Val204Asn + Thr207Asn + Ala214Asp + Leu216His

Pro200Gly + Gly201Gln + Val2O4Gln + Thr207Gln + Tyr213His + Ala214Ser+ Gly218Pro

Pro200Gln + Val204His + Pro209Ser + Asn211Ser + Thr212Glu + Tyr213Gly + Ala214Pro

Ala199His + Gly201Gln + Ala202Asn + Thr210Asn + Asn211Ser + A! a214 Asn + Thr219Gln

Pro200Gly + Gly201 Asn + Val2O4Gln + Thr212Gly + Thr215Pro + Asn217Ser + Thr219Pro

Ala199Thr + Val204Thr + Tyr205Gly + Tyr208Mat + Thr210Asn + Tyr213His + Leu216Cys

Pro200Asn + Ala202Asp + Val204Pro + Tyr205Gly + Thr207Asn + Tyr208Cys + Thr210Gln

Thr207Ser + Thr210Ser + Thr212Gly + Ala214Thr + Thr215Asn + Asn217Asp + Thr219Gln

Ala199Ser + Pro200Ser + Gly203Gln + Thr207Ser + Tyr208lle + Asn211Glu + Leu216Met

Ala199Gly + Pro200Asn + Gly201Asn + Gly203Ser + Ala214His + Thr215Asp + Leu216Pro

Pro200Gln + Gly201Ser + Ala202Asp + Thr207Asn + Tyr208Pro + Thr215Gln + Leu216Cys

Val204Thr + Tyr205Pro + Tyr208Thr + Asn211Gln + Thr212Asp + Tyr213Cys + Thr219Asn

Pro200Gln + Ala202Gly + Gly203Asn + Tyr205Mel + Tyr208Val + Tyr213Val + Thr219Asn

Ala199Gly + Pro200Asn + Ala202Pro + Tyr205Asp + Thr207Gln + Thr212Gln + Leu216Cys

Gly201 Pro + Ala202Gly + Val204Thr + Tyr205Pro + Asn211 Glu + Ala214Pro + Thr215Gly

Ala199Gln + Ala202Pro + Val204Met + Tyr205lla + Tyr208lle + Asn217Asp + Thr219Pro

Ala199Thr + Gly203Asn + Tyr208L.eu + Pro209Gly + Tyr213lle + Ala214Glu + Leu216Gly

Gly201Gln + Val2O4Ala + Tyr208Gly + Thr210Gln + Thr215Gln + Asn217Gln + Gly218Asn

Pro200Gln + Gly201Asn + Val204Ser + Tyr205Glu + Tyr213Ser + Ala214Gln + Asn217Gln

Pro200Ser + Gly203Asn ·»· Thr207Gly + Thr210Pro + Tyr213His + Ala214Thr + Thr215Pro

Ala199Asn + Tyr208lle + Pro209Asp + Thr212Gln + Tyr213Ser + Ala214His + Asn217Gln

Ala199Asn + Pro200Gln + Ala202Pro + Val204Cys + Tyr208His + Thr215Gln + Thr219Asn

AIa199Ser + Ala202His + Val204Pro + Thr210Asn + Thr212Pro + Gly218Asp + Thr219Asn

Gly201Pro + Tyr205Glu + Thr210Gly + Asn211Ser + Tyr213Gln + Ala214Thr + Gly218Gln

Ala199Pro + Gly203Gln + Thr207Asn + Asn211Asp + Ala214Gln + Thr215Gly + Thr219Gly

Ala199Gln + Pro200Asn + Thr212Ser + Tyr213Sar + Leu216IIe + Asn217Asp + Thr219Pro

Pro209Asn + Thr212Gln + Ala214Ser + Leu216Gly + Asn217Asp + Gly218Asn + Thr219Asn

Gly201Ser + Gly203Pro + Thr207Ser + Thr212Ser + Ala214His + Asn217Asp + Gly218Gln

Ala199Ser + Pro200Gln + Gly201 Asn + Tyr205Asn + Ala214Ser +

Asn217Asp + Gly218Pro

Ala199His + Ala202Gly + Gly203Glu + Tyr208Gln + Pro209Gln + Leu216Asn + Thr219Ser

Ala199Pro + Thr207Ser + Tyr208Cys + Asn211Gln + Tyr213Gly + Leu216Thr + Thr219Gly

Pro200Gly + Ala202Thr + Tyr205Cys + Thr212Glu + Leu216Thr + Asn217Ser + Gly218Pro

Ala199Thr + Gly203Asn + Tyr208Ser + Pro209Gly + Asn211Sar + Tyr213Pro + Gly218Pro

Ala199Gly + Tyr205Gln + Pro209Asn + Asn211Glu + Ala214His + Thr215Gln + Thr219Asn

Ala199Asn + Pro200Asn + Gly203Pro + Tyr208lla + Pro209Gly + Tyr213Asp + Ala214His

Gly203Asn + Val204Thr + Asn211Gln + Thr212Pro + Thr215Asp + Leu216His + Thr219Gln

Ala199Gln + Gly201Sar + Val204Pro + Tyr205Asn + Pro209Asp + Thr210Gln + Ttir219Asn

Pro200Asn + Gly201Ser + Val204Ser + Tyr205Asp + Thr210Asn + Thr212Pro + Asn217Ser

Pro200Asn + Gly201Asn + Tyr205Asp + Tyr208Pro + Thr215Pro + Asn217Gln + Thr219Gly

Ala199Gln + Gly201Pro + Tyr205lle + Tyr208Asn + Thr215Gly + Gly218Asp + Thr219Pro

Ala199Pro + Gly201Gln + Tyr205Asn + Thr207Ser + Thr210Gly + Tyr213Mat + Ala214Ser

Pro200Asn + Ala202Glu + Val204Thr + Thr207Asn + Tyr208His + Tyr213Gln + Asn217Gln

Gly201Ser + Ala202Asp + Val204Pro + Thr207Gly + Pro209Gln + Tyr213Pro + Gly218Ser

Gly201Asn + Ala202Asn + Tyr205Cys + Thr210Gly + Tyr213Gln + Ala214Pro + Thr219Gly

Pro200Asn + Gly203Ser + Thr207Gly + Thr2WPro + Thr215Asp + Leu216Ser + Gly218Ser

Gly201Gln + Ala202Glu + Tyr208Gly + Thr212Pro + Ala214His + Leu216Thr + Thr219Gln

Ala199Asn + Pro200Gln + Ala202Asn + Tyr205Pro + Thr207Pro + Tyr208Pro + Pro209Asp

Gly201Pro + Ala202Glu + Pro209Ser + Thr212Ser + Thr215Pro + Leu216Cys + Gly218Asn

Ala202Thr + Gly203Asp + Thr207Gln + Tyr208Cys + Ala214Pro + Leu216Gln + Asn217Ser

Gly201Ser + Ala202Asn + Gly203Pro + Tyr205Met + Asn211Ser + Leu216Glu + Gly218Gln

Ala199Gly + Tyr205Gly + Asn211Sar + Thr212Ser + Ala214Gln + Asn217Glu + Thr219Asn

Gly203Gln + Tyr205Gln + Tyr208Met + Pro209Glu + Thr210Glu + Thr215Pro + Thr219Gln

Pro200Gly + Tyr205lle + Thr207Gln + Tyr208Pro + Pro209Asp + Thr210Glu + Leu216Pro

Ala199Pro + Pro200Gly + Gly203Gln + Tyr208Asn + Thr210Asp + Asn211Glu + Leu216Pro

Thr207Asn + Tyr208Gln + Pro209Gly + Ala214Asn + Thr215Glu + Leu216Asp + Gly218Asn

Ala199Thr + Pro200Gln + Thr210Sar + Ala214Gly + Thr215Asp + Leu216Glu + Gly218Gln

Ala202Gln + Gly203Ser + Val204Cys + Tyr213lla + Ala214Pro + Leu216Asp + Asn217Asp

Pro200Gly + Gly203Pro + Tyr205Asp + Tyr208Asn + Thr212Gly + Thr215Asp + Gly218Pro

Ala202Glu + Gly203Glu + Val2O4Cys + Tyr205Pro + Asn217Glu + Gly218Gln + Thr219Pro

Pro200Gly + Ala202Glu + Val2O4Cys + Thr207Asn + Leu216lle + Asn217Glu + Gly218Glu

Ala199Pro + Gly201Pro + Thr207Gln + Tyr208Leu + Thr212Glu + Tyr213Asp + Ala214Asp

Ala199Gly + Gly201Pro + Ala202Pro + Tyr208Ala + Pro209Glu + Asn211Asp + Thr212Gly

Thr207Pro + Pro209Glu + Asn211Glu + Tyr213Met + Ala214Ser + Thr215Gln + Leu216Cys

Gly201Gln + Gly203Glu + Thr207Gln + Tyr208Met + Thr215Asn + Asn217Asp + Thr219Pro

Gly201Asn + Ala202His + Gly203Pro + Tyr205Asp + Thr212Gln + Ala214Glu + Thr219Sar

Val2O4Ser + Thr207Pro + Pro209Glu ♦ Thr212Asp + Tyr213Ser + Leu216Gln + Thr219Pro

Ala199Thr + Thr207Pro + Pro209Glu + Thr212Glu + Tyr213Thr + Lau216Sar + Asn217Sar

Pro200Asn + Tyr205His + Pro209Asp + Thr212Asp + Tyr213Ala + Ala214Pro + Thr219Gly

Ala199Pro + Pro200Gly + Gly201Ser + Val2O4His + Pro209Glu + Thr212Asp + Thr219Gln

Ala199Pro Ala202Gln + Gly203Asp + Thr207Gly + Tyr208Gln + Leu216Glu + Gly218Pro

Gly203Glu + Val204Sar + Tyr208Val + Tyr213Pro + Ala214Asp + Thr215Glu + Leu216Asp

Gly201Gln + Gly203Glu + Val204Gln + Thr207Sar + Thr215Asp + Leu216Ala + Asn217Glu

Ala202Asn + Val2O4Gly + Asn211Ser + Ala214Asp + Thr215Glu + Leu216Glu + Asn217Glu

Ala199His + Pro200Ser + Gly201Gln + Ala202Glu + Leu216lla + Gly218Asp + Thr219Gly

Ala202Gly + Gly203Glu + Val2O4Gln + Thr207Gly + Thr215Gln + Asn217Glu + Gly218Asp

Ala199Asn + Gly203Glu + Thr210Gly + Ala214Asn + Thr215Pro +

Asn217Glu + Gly218Asp

Ala202Pro + Gly203Asn + Tyr205Glu + Asn211Gln + Thr215Gln + Leu216Glu + Thr219Asn

Pro200Gly + Val204Thr + Thr207Ser + Tyr208Cys + Thr210Asp + Asn211Glu + Tyr213Glu

Ala202Glu + Gly203Pro + Val2O4Thr + Thr212Ser + Tyr213Val + Thr215Glu + Asn217Asp

Pro200Gln + Val204Met + Pro209Gly + Thr210Asp + Thr212Asp + Tyr213Asp + Ala214Asp

Ala199His + Pro200Gln + A1a202Gly + Val204Cys + Thr215Glu + Leu216Cys + Asn217Asp

Val2O4Gly + Tyr208Leu + Pro209Glu + Thr210Asn + Tyr213Glu + Ala214Asp + Thr215Sar

Pro200Gly + Gly201Gln + AJa202Ser + Pro209Gly + Thr212Glu + Ala214Asp + Leu216Ala

Gly201Asn + Tyr205His + Tyr208Ser + Tyr213Asp + Ala214Asp + Thr215Ser + Leu216Asp

Gly203Asn + Tyr208Gln + Asn211Gln + Tyr213Asp + Thr215Asp + Asn217Gln + Thr219Gln

Ala202Ser + Thr207Pro + Tyr208Cys + Tyr213Asp + Ala214Ser + Thr215Asp + Lau216Cys

Ala199Thr + Gly201Pro + Tyr205Sar + Thr207Asn + Tyr208lle + Asn211Glu + Tyr213Glu

Ala199Pro + Ala202Ser + Gly203Pro + Tyr208Gly + Asn211Asp + Tyr213Glu + Thr215Gln

Ala199Gln + Pro200Asn + Gly203Asp + Tyr205Glu + Tyr208Asn + Tyr213Mat + Ala214Asp

Gly201Asn + Thr207Pro + Thr210Asp + Asn211Glu + Thr212Glu + Ala214Glu + Leu216Pro

Pro200Gln + G!y201Asn + Gly203Asn * Thr207Asn + Asn211Asp + Thr212Glu + Ala214Glu

Thr210Gly + Asn211Asp + Tyr213Asp + Ala214Asp + Asn217Ser + Gly218Pro + Thr219Asn

AJa199Asn + Gly201Ser + Tyr208Ala + Thr210Glu + Tyr213Glu + Ala214Pro + Leu216His

Ala202Asn + Gly203Asp + Tyr205Gln + Thr212Sar + Thr215Glu + Gly218Asp + Thr219Pro

Pro200Gly + Gly203Glu + Thr207Gln + Ala214Gln + Thr215Asp + Leu216Asn + Gly218Glu

Ala199Ser + Gly201Ser + AJa202Glu + Gly203Gln + Thr207Ser + Thr215Asp + Thr219Ser

Ala202Asp + Tyr205Thr + Thr207Asn + Tyr208Ala + Thr215Glu + Leu216Gln + Gly218Asn

Pro200Asn + Gly203Asp + Val204Pro + Tyr208Cys + Leu216Cys + Asn217Ser + Gly218Glu

Ala199Asn + Pro200Ser + Gly201Asn + Gly203Glu + Val204Gly + Asn211Gln + Gly218Glu

Ala199Thr + Gly201Gln + Ala202Pro + Thr210Asp + Asn211Glu + Ala214Asp + Thr219Asn

Ala199Gly + Pro200Ser + Tyr205Glu + Thr210Pro + Asn211Asp + Tyr213Asp + Thr215Glu

Pro200Ser + Ala202Glu + Thr207Gln + Asn211Ser + Ala214Glu + Asn217Glu + Gly218Asn

Ala202Ser + Val2O4His + Thr207Sar + Thr212Asp + Tyr213Asp + Thr215Asn + Leu216Asp

Gly203Pro + Tyr205Pro + Pro209Asp + Asn211 Asp + Ala214Glu + Thr215Asp + Thr219Gly

Thr207Ser + Pro209Ser + Thr212Glu + Tyr213Glu + Thr215Glu + Lau216Gln + Asn217Asp

Ala199Ser + Pro200Gly + Gly201Ser + Thr212Gly + Ala214Glu + Asn217Glu + Gly218Pro

Gly201Gln + Tyr208Thr + Ala214Asp + Thr215Pro + Leu216Asn + Asn217Glu + Gly218Pro

Ala199Ser + Tyr205Glu + Thr207Ser + Thr210Asn + Tyr213Glu + Ala214Gln + Asn217Asp

Gly203Glu + Pro209Asp + Thr210Asp + Asn211Glu + Ala214Thr + Thr215Gln + Thr219Asn

Alá202Pro 4 Gly203Asp 4 Tyr205Cys 4 Thr212Asp 4 Thr215Pro 4 Leu216Glu + Asn217Asp

Ala199Asn 4 Gly201Pro 4 Ala202Glu 4 Gly203Glu 4 Tyr205Glu 4 Thr207Gly + Thr212Asp

Ala202Asn 4 Thr207Pro 4 Asn211Glu + Thr212Asp 4 Ala214Ser + Thr215Asp 4 Leu216Val

Gly201Gln 4 Ala202Glu 4 Val2O4Ser 4 Tyr205Asp 4 Tyr213Glu 4 Thr215Asn 4 Leu216Thr

Pro200Gly 4 Gly203Asn 4 Tyr205Glu 4 Thr212Glu 4 Tyr213Val 4 Ala214Asn 4 Leu216Glu

Ala202His 4 Thr207Gln 4 Pro209Gln 4 Thr210Gln 4 Thr215Glu 4 Asn217Gln 4 Gly218Glu

Ala199Gly 4 Gly201Gln 4 Pro209Gly 4 Thr212Gly 4 Thr215Glu 4 Asn217Sar 4 Gly218Glu

Gly203Asp 4 Val2O4Met 4 Thr212Asp 4 Tyr213Val 4 Ala214Asp 4 Asn217Glu 4 Thr219Pro

Ala202Asp 4 Gly203Asn 4 Tyr208Met 4 Thr212Asp 4 Asn217Glu 4 Gly218Glu 4 Thr219Gly

Pro200Gln 4 Val204Asn 4 Thr207Gly 4 Thr210Glu 4 Asn211Gln 4 Tyr213Val + Ala214Asp

Gly203Gln 4 Tyr205lle 4 Tyr208His 4 Thr210Asp 4 Ala214Asp 4 Thr215Pro 4 Lau216Val

Gly203Gln 4 Tyr208Ala 4 Pro209Gln 4 Thr210Glu 4 Asn211Gln 4 Ala214Asp 4 Leu216Cys

Gly201Gln 4 Gly203Glu 4 Val2O4Ser 4 Pro209Asn 4 Asn211Glu 4 Tyr213Asp + Thr215Glu

Tyr205Asp 4 Thr207Pro 4 Pro209Sar 4 Thr210Glu 4 Ala214Glu 4

Asn217Ser + Thr219Pro

Ala199Asn + Gly201Sar + Ala202Thr + Gly203Asp + Thr210Pro + Ala214Asp + Gly218Glu

Gly203Glu + Thr207Ser + Tyr208Thr + Pro209Gln + Thr212Glu + Ala214Ser + Thr215Glu

Ala199Pro + Gly201Sar + Val204Gln + Tyr205Asp + Thr212Asp + Leu216Ala + Thr219Pro

Pro200Gln + Tyr208lla + Pro209Glu + Ala214Glu + Leu216Asp + Asn217Ser + Gly218Glu

Ala199Thr + Ala202Glu + Gly203Glu + Thr210Asp + Ala214Ser + Gly218Glu + Thr219Gln

Ala199Thr + Pro200Ser + Ala202Asp + Gly203Asp + Thr210Gly + Thr212Glu + Gly218Glu

Ala199Pro + Ala202Glu + Tyr208Leu + Thr210Asp + Ala214Ser + Leu216Glu + Gly218Asp

Gly201 Asn + Tyr205Ala + Thr207Pro + Thr210Asp + Asn211 Asp + Ala214Asp + Asn217Glu

Ala199Ser + Gly203Gln + Tyr205Gln + Pro209Glu + Thr212Glu + Tyr213Asn + Lau216Asp

Ala199Gln + Pro200Asn + Tyr205Glu + Tyr208Leu + Pro209Glu + Thr210Asp + Tyr213Gly

Pro200Gly 4 Gly203GIu 4 Pro209Glu 4 Thr212Ser 4 Tyr213Pro 4Thr215Asp 4 Asn217Gln

Gly201Pro 4 Tyr205Val 4 Thr207Ser 4 Pro209Asp 4 Ala214Glu 4Asn217Glu 4 Tlir219Gln

Pro200Asn 4 Ala202Thr 4 Pro209Gly 4 Asn211Glu 4 Thr212Glu 4Ala214Asn 4 Leu216Asp

Gly201Ser 4 Thr207Ser 4 Thr212Asp 4 Ala214Pro 4- Lau216Asp 4 Asn217Asp 4 Gly218Pro

Tyr205Asp 4 Thr207Asn 4 Pro209Asp 4 Asn211Glu 4 Thr212Pro 4 Gly218Ser 4 Thr219Pro

Pro200Gly 4 Ala202Asn 4 Gly203Asn 4 Thr210Sar 4 Thr212Glu + Tyr213Asp 4 Asn217Glu

Gly203Pro 4 Pro209Ser 4 Thr212Asn 4 Tyr213Glu 4 Asn217Glu + Gly218Asp 4 Thr219Gln

Ala202Ser 4 Tyr205Ala 4 Pro209Glu 4 Thr210Asp + Lau216Ser + Asn217Asp 4 Gly218Gln

Val204Mat 4 Pro209Asp 4 Thr210Glu 4 Ala214Gln + Leu216Gln + Gly218Asp 4 Thr219Pro

Ala202Glu 4 Val204Mat 4 Thr207Ser 4 Pro209Glu 4- Thr210Glu 4 Thr212Ser 4 Gly218Pro

Pro200Ser 4 Ala202His 4 Thr210Asp 4 Asn211Glu + Leu216Gly + Gly218Asp 4 Thr219Gly

Pro200Gly + Gly201Asn + AIa202Ser 4 Thr210Asp + Asn211Glu + Ala214His 4 Thr215Asp

Pro200Gln 4 Pro209Gly 4 Thr210Glu 4 Asn211Asp 4 Thr212Gln + Tyr213Met 4 Leu216Asp

Pro200Gly + Gly203Glu + Tyr208Thr + Thr210Asp + Asn211Asp + Ala214Thr + Leu216Asn

Gly203Ser + Val2O4Cys + Thr207Asn + Pro209Ser + Thr210Glu + Thr215Glu + Leu216Glu

Aia199Asn + Pro200Asn + Gly201Pro + Gly203Asn + Asn211Asp + Thr215Asp + Leu216Asp

Ala202Thr + Tyr208Met + Pro209Asn + Asn211Glu + Thr212Glu + Ala214Gly + Gly218Glu

Gly203Gln + Val204Cys + Tyr205Gly + Tyr208Pro + Asn211Glu + Thr212Asp + Gly218Glu

Pro200Gln + Ala202Asp + Tyr205Met + Thr212Asp + Tyr213Glu + Gly218Gln + Thr219Gln

Ala199Gln + Gly203Pro + Pro209Asn + Thr210Gln + Thr212Asp + Asn217Asp + Gly218Asp

Gly201Asn + Tyr208Asn + Pro209Ser + Thr212Glu + Tyr213Pro + Asn217Asp + Gly218Asp

Ala199Gln + Gly201Pro + Tyr205Ser + Asn211Glu + Ala214Asn + Asn217Glu + Gly218Glu

Tabulka 29 více smyček - varianty se dvěma mutacemi

Leu 95Gly + Gly203Pro Thr 58Gln + Asn211Glu Asp 59Glu + Leu216Gln Tyr103Cys + Thr212Gly Gly156Glu + Ala202Gln Gly126Gln + Thr215Pro Ser187Glu + Ala214Gly Asn 96Gln + He106Ala Gly101Asp + Tyr205Pro Asn 61 Ser + Gly165Gln Gly 64Gln + Thr132Gly Asp 59Glu + Tyr205Asn SerlOOGIu + Tyr205His Ala128Ser + Thr161Gln Ser15BAsp + Gly203Ser Asn 61Asp + Asn162Ser Thr161Glu + Pro209Gln Gly 62Asp + Pro209Asn lle106Leu + Asn211Asp Tyr103Glu + Gly203Pro Tyr166Pro + Thr215Glu . lle106Leu + Pro209Glu Thr163Pro + Ala202Pro Thr132Gly + Leu216Ser Ser1O4Glu + Phe188Val

Tyr166Asp + Ala186Thr Ser160Glu + Thr215Ser Gly 62Gln + Gly165Asp Leu 95Gln + Ala128Glu Ser 97Glu + Asn211 Ser Leu 95Asn + Phe188Leu Asn157Gln + Thr212Ser Leu125Gln + Gly159Asp Asn211Asp + Tyr213Ala Ser158Asp + Tyr205Cys Ser160Glu + Asn162Gln Ser187Asp + Tyr213Pro Ser158Asp + Leu216Gln Met198Ser + Ala202Asp Gly 99Asn + Ala214Glu Thr 58Asp + Gly130Gln Gly156Glu + Tyr208Pro Gly105Pro + Leu216lle Ser187Asp + Tyr205Gln Thr215Ser + Gly218Asp Gly 60Asn + Ala128Glu Thr 65Gln + Leu125Asn Gly101Gln + Gly218Asp Asn211Ser + Thr212Asp Thr212Gln + Thr215Gly Gly203Glu + Tyr205Gly Thr132Pro + Thr215Ser Tyr103Asp + Gly165Gln Thr 65Pro + Gly203Glu Thr 58Glu + Gly 60Pro Gly153Pro + Leu216Val Asn 96Gln + Pro209Glu Gly 99Asn + Gly153Asn Ala128Asn + Ala2O2His Gly105Glu + Gly130Ser Thr212Gly + Gly218Glu Phe188Val + Tyr205Ser Asn217Glu + Thr219Gly Leu 95Gln + Thr215Asp Val 94Gln + 1hr212Glu Asn 61 Ser + Gly203Asp Ser129Glu + Asn154Gln Gly 62Glu + Thr219Asn Ser129Glu + Asn157Gln Tyr1O3lle + Thr215Pro lle164Thr + Thr215Ser Gly1O1Gln + Tyr208Gln

Asn 61 Gin + Thr212Asp Thr212Asp + Leu216lle Asn211Glu + Leu216His Gly153Glu + Thr163Gln Gly203Asp + Thr215Asn Asn 61 Ser + Thr132Asn Ser158Glu + Gly203Pro Leu 95Asn + Thr215Asn Thr 58Ser + SerlOOAsp lle164Met + Tyr205Ala Ser158Glu + Tyr2O5Met Phe188Leu + Thr212Glu Gly130Pro + Ser190Glu Gly1O1Asp + Gly126Ser Asn 61Ser + Ala186Ser Asn162Gln + Phe188Ser Thr 58Gly + Thr 65Asp Ser129Asp + Thr210Pro Ser129Glu + Gly153Asn Asp 59Glu + Tyr213Thr Asn154Glu + Leu216Gln Ser 97 Asp + Ala199Pro G!y2O3Asn + Gly218Asp Thr 65Ser + Gly126Gln Thr215Gln + Lou216Ala Asn 96Glu + Tyr205His Thr 65Ser + Gly156Asp Ala128Ser + Thr163Gln Thr215Asp + Leu216Val Ser129Glu + Leu216Ala As n211 Asp + Tyr213Leu Val 94Ser + Phe188Val Ser158Glu + Thr212Gln Gly 99Pro + Asn154Gln Gly203Asn + Thr215Gln Ala202Ser + Tyr205Glu Tyr205Val + Asn217Glu Val 94Gly + Thr215Asp Ser1O4Glu + Thr215Gln Gly201Pro + Tyr2O5Glu Asn 96Ser + Gly127Glu Tyr205Thr + Ala214Thr Gly 62Ser + Thr215Gly Thr 65Ser +Asn211Glu Gly153Pro + Gly203Ser Ala128Thr + Leu216Glu Asn 96Glu + Leu216Gln

Thr215Asn + Leu216Ala Asp 59Glu + Ala202Pro Val 94Thr + Leu216Met Ser 97Glu + Thr212Gln Gly101Asp + Ala202Asn Ser129Asp + Ala202Gly Tyr103Ala + Thr132Ser Leu 95Met + Leu216Asp SerlOOAsp + Gly101Pro SerlOOAsp + Thr219Pro Val 94Asn + Thr215Pro Tyr103Asn + Ala128Asp Gly201Asn + Tvr205Asp Thr 58Glu + llelO6Cys Thr 65Glu + Tyr103Pro Val 94Mel + Ser 98Glu Gly203Glu + Thr210Pro Pro209Glu + Gly218Ser Thr161Pro + Gly203Ser Ser 97Glu + Leu125Pro Ala128Asp + Ala199His lle1O6Gly + Ala214Pro Asp 59Glu + Tyr205lle Asn 154 Asp + Tyr2O8His Thr21OAsp + Leu216Val Thr215Asp + Thr219Gln Gly 60Glu + Leu125Ser Ser 97Asp + Gly153Asn Tyr166Pro + Tyr205Gly Ser129Glu + Gly203Gln Gly153Gln + Pro209Gln Gly203Gln + Thr215Gln Asn 61 Glu + Thr212Ser Thr163Asp + Tyr205His Asn154Glu + Tyr166Thr Asn 96Ser + Gly105Asp Phe188Gly + Asn211Ser Gly153Glu + Gly218Asn SerlOOAsp + Thr212Pro Gly126Pro + Gly156Asp Leu125Ser + Thr215Glu Asp 59Glu + Thr 65Gly Gly156Pro + Gly159Asp Thr 58Asp + Ala202Ser Leu 95Met + Gly 99Ser Asn 61 Gin + Tyr205Glu Gly126Asn + Gly159Pro

Leu 95Thr + Gly218Asn Thr65Gln + Leu216Ala Gly130Pro + Gly203Glu Gly 64Gln + Ser 98Glu Gly126Asn + Gly127Gln Thr132Asn + Gly153Asn Thr 58Pro + Gly105Glu Gly130Asp + Ala214His Gly126Glu + Tyr205Pro Tyr103His + Ser129Asp Ser 98Asp + Pro209Ser Asp 59Glu + Tyr205Ser Gly 60Gln + Thr215Asn Pro209Asn + Asn211 Asp Thr132Asp + Ala202Asn Gly218Ser + Thr219Gly Thr 58Asp + Gly203Gln Ile 106 Asp + Ala202Thr Thr161Asn + Ser190Asp Ser129Glu + Thr215Gln Thr212Asn + Leu216Asp Asn 96Gln + Ser158Glu Gly203Pro + Thr215Asp Val 94Asp + Tyr205Asn Ala128Pro + Thr215Asp Gly201Gln + Leu216Pro Thr161Pro + Leu216Cys Gly126Asp + Tyr205Met Ser 97 Asp + Thr212Pro Thr210Asn + Leu216His Ala186Asn + Tyr205Pro Ser131Asp + Phe188Thr Thr132Ser + Leu216Asn Asn 61 Asp + Gly130Pro Leu 95Asn + Thr132Gly SerlOOAsp + Thr215Asn Tyr166Thr +Asn211Gln Thr207Pro + Leu216Thr lle106Ala + Gly165Asp

Tyr205Asn + Thr215Asn Asn 96G,n + Gly218Asn Ser160Asp + Phe188Gly Thr210Gly + Thr212Ser Gly 64Ser + Asn 96Gln Gly1O1Asp + Asn154Gln Gly 64Asn + Asn157Glu Asn157Glu + Gly203Gln

Tyr213Asn + Thr215Ser Gly101Asn + Ala186Asn Ser160Glu + Leu216lle Tyr103His + Ser187Glu Asn 96Sar + Ala214Asn Gly 62Asn + Ser 98Asp lle106Ser + Asn157Glu Thr 65Glu + Thr212Gly Gly 62Asn + Thr215Pro Gly127Ser + Thr210Asp Gly156Ser + Asn217Glu Ser 98Asp + Tyr103Thr Gly127Asn + Gly165Pro Gly153Glu + Leu216Met Ser129Asp ♦ Gly165Pro Asn 61Asp + Thr163Gln Gly126Asn + Tyr205Met Asn157Gln + Thr212Gln Ser190Glu + Thr215Gly Ser129Glu + Gly165Gln Thr65Glu + Gly101Pro Val 94Gln + Gly165Glu Tyr103lle + Ser190Glu Asn217Gln + Gly218Ser Ser 98Glu + Gly 99Asn Ser102Asp + Thr212Ser Thr212Ser + Thr215Asp Gly130Glu + Pro209Asn Ala128Pro + Gly165Pro Asn217Gln + Gly218Asn Leu 12511 i s + Thr163Ser Thr212Asp + Tyr213Ala Thr 65Pro + Thr210Ser Gly105Pro + Ala202Gln Val 94Thr + Ser158Glu Thr132Gly + Tyr205Cys Gly105Gln + Ala214His Gly127Gln + Tyr205Cys Gly127Glu + Gly130Ser Phe188Tyr + Asn211 Ser Gly 64Asn + Phe188Asp Thr212Ser + Leu216Asp Met198His + Gly203Pro Tyr208Val + Thr210Asp Gly165Glu + Tyr205Met Asn 96Gln + Thr132Glu Ser 98Glu + Gly101Pro

Leu125Cys + Thr215Asp Leu125Cys + Gly126Ser Ser190Asp + Thr215Asn Gly 99Gln + Gly153Asp Gly 60Asp + Thr210Ser Ser160Asp + Phe188Leu Val204Gln + Thr215Glu Asn157Glu + Gly203Sar Tyr213Glu + Leu216Cys Asn 61 Gin + Leu216Asp Leu125Gly + Ser155Asp Ala186Pro +Val204Gln lle106Met + Ser160Asp L.eu125lle + Leu216Ser Gly 60Gln + Gly203Asn Gly203Asn + Pro209Glu Gly 60Ser + Gly 62Asp Asn154Glu + Tyr213Gln Asn154Gln + Gly203Asp Asn154Glu + Thr219Gln Thr212Ser + Leu216His Tyr205His + Thr215Asp Gly 60Asp + Gly126Pro Gly203Glu + Leu216Ala Gly156Ser + Gly203Ser Ser155Asp + Gly165Gln Ala202Gly + Thr212Asp Asn157Gln + Tyr213Ser Gly 99Ser + Gly130Ser Gly203Ser + Thr219Asp Gly130Ser +Ala214Asn Thr210Gln + Thr212Asp Asn211Gln+ Thr212Glu Gly153Asn + Thr212Asp Gly153Asp + Tyr205Ser SerlOOGIu + Tyr205Thr Gly126Asn + Asn154Glu Ser190Asp + Tyr205Val Ser1O2Glu+ Tyr166Thr Asn157Ser + Pro209Gly Asp 59Glu + Tyr2O5Leu Ser131 Glu + Thr132Asn Gly127Asp + Leu216Thr Thr21OAsn + Asn217Gln Gly203Ser + Gly218Asp lle106Gln + Gly2O3Asp Thr161Asp + Tyr205Pro

Gly105Pro + Thr212Asp Tyr205Thr + Leu216Cys Asn 96Ser + Ser158Glu Asn 61 Glu + Tyr205Ala Tyr205Ser + Thr212Glu Thr163Gln + Phe188Glu Tyr103Ala + Thr212Asp Gly101Asp + Ala202His Sar155Glu + Gly218Asn Val 94Thr + Thr163Ser Ser102Glu + Asn217Gln Gly159Ser + Ala202Glu Asn154Ser + Tyr166AJa Asp 59Glu + Phtí188Gly Thr163Gln + Gly218Sar Gly153Asn + Tyr205Val Ser129Glu + Leu216Pro Gly126Ser + Thr212Glu Gly203Asp * Leu216Asn Gly126Glu + Thr212Pro Val 94Pro + Ala186Glu Gly165Gln + Thr215Glu Ser129Asp + Gly153Asn Ser 98Glu + Thr215Ser Gly203Ser + Leu216Pro Gly105Asp + Leu216His lle106Met + Thr210Asp Leu216Asn + Asn217Glu Gly127Gln + Leu216Glu Val 04Glu + AJa202Gly Thr132Asn + Leu216His Asp 59Glu + Ala202Asn

Leu 95lle + Tyr205Pro Thr 65Gln + Thr215Pro Ser104Glu + Thr215Asn Ser160Glu + Gly203Pro Gly203Asp + Leu216Pro AJa128Glu + Tyr213Met Ser 98Asp + Leu216Cys Ser158Asp + Thr215Gln Val 94Asp + Thr215Asn Gly127Asp + Asn154Ser Gly126Ser + Gly156Gln Leu125Gly 4 Tlir212Asp Thr210Glu 4 Leu216Asn Asn154Ser 4 Ala202Asn Asn 96Gln 4 Gly126Asn

Gly 64Ser + Gly127Ser

Asn211Ser + Thr212Gly Ser160Asp + Gly218Gln Tyr205Ala + Thr210Glu Thr212Asp + Leu216Ser Ser158Asp + Thr215Ser

Tabulka 33 více smyček - varianty se třemi mutacemi Leu 95GÍy + Gty203Pro + Asn211Glu Thr 58Gln + Asp 59Glu + Leu216Gln Tyr103Cys + Ala202Gln + Thr212Gly Gly126Gln + Gly156Glu + Thr215Pro Asn 96Gln + lle106Ala + Tyr205Pro Asn 61Ser + Gly101Asp + Gly165Gln Gly 64Gln + Thr132Gly + Gly153Glu Ala128Ser + Ser158Asp + Gly203Ser Tyr103Glu + lle106Leu + Gly203Pro Thr163Pro + Ala202Pro + Leu216Ser Ser104Glu + Thr132Gly + Pha188Val Leu 95Asn + Phe188Leu + Asn211Ser Asn162Gln + Ser187Asp + Tyr213Pro Thr 58Asp + Gly130Gln + Tyr208Pro Gly105Pro + Gly156Glu + Leu216lle Gly 60Asn + Thr215Ser + Gly218Asp Thr 65Gln + Leu125Asn + Ala128Glu Asn211Ser + Thr212Asp + Gly218Gln Gly203Glu + Thr212Gln + 7hr215Gly Thr132Pro + Tyr205Gly + Thr215Ser Gly 60Pro + Thr 65Pro + Gly203Glu Asn 96Gln + Gly203Asp + Thr215Gly Gly 99Asn + Gly153Asn + Pro20ÓGIu Gly105Glu + Ala128Asn + Ala202His Tyr205Ser + Thr212Gly + Gly218Glu Gly 99Gln + Asn217Glu + Thr219Gly Leu 95Gln + Ala202Thr + Thr215Asp Ser129Glu + Asn157Gln + Thr219Asn Asp 59Glu + Tyr103lle + Thr215Pro Gly 99Asp + lle164Thr + Thr215Ser Asn 61Gln + Tyr208Gln + Thr212Asp Gly153Glu + Thr163Gln + Thr215Asn Asn 61 Ser + Thr132Asn + Gly203Pro Leu 95Asn + Ser158Glu + Thr215Asn Thr 58Ser + SerlOOAsp + Tyr205Ala

Ser158Glu + Phe188Leu + Tyr205Met Asn 61 Ser + Ala186Ser + Phe188Ser

Asn154Glu + Tyr213Thr + Leu216Gln Ser 97Asp + Ala199Pro + Gly203Asn Thr 65Ser + Gly126Gln + Gly218Asp Tyr205His + Thr215Gln + Leu216Ala Ala128Ser + Thr163Gln + Thr215Asp Val 94Ser + SarlOOAsp + Phe 188 Val Gly 99Pro + Asn154Gln + Gly2O3Asn Asn 96Ser + Thr163Asp + Ala214Thr Tyr166Asp + Tyr205Thr + Ala214Thr Gly 62Ser + Thr 65Ser + Thr215Gly Gly153Pro + Gly203Ser + Thr219Glu Asp 59Glu + AJa202Pro + Leu216Ala Val 941 hr + Thr212Gln + Leu216Met Ser129Asp + Tlir132Ser + Ala202Gly Leu 95Met + Tyr1O3Ala + Leu216Asp Ser1O4Asp + Gly203Asn + Thr215Asn Thr 65Glu + Tyr103Pro + lle106Cys Val 94Met + Ser 98Glu + Thr210Pro Ser 97Glu + Thr161Pro + Gly203Ser Leu125Pro + Ala128Asp + Ala199His Asp 59Glu + Tyr2O5lle + Ala214Pro Ser129Glu + Tyr166Pro + Gly203Gln Gly203Gln + Pro209Gln + Thr215Gln Asn 96Ser + Asn154Glu + Tyr166Thr Gly105Asp + Phe188Gly + Asn211Ser Thr 58Asp + Gly156Pro + Ala202Ser Leu 95Met + Gly 99Ser + Ser131Glu Gly126Asn + Gly159Pro + Tyr205Glu Leu 951hr + Leu216Ala + Gly218Asn Gly105Glu + Glyl30Pro + Leu216Thr Thr 58Pro + Thr132Asn + Gly153Asn Gly 60Gln + Pro209Asn + Thr215Asn Thr132Asp + Ala202Asn + Thr219Gly Thr 58Asp + Gly203Gln + Gly218Ser Ser129Glu + Thr212Asn + Thr215Gln Gly203Pro + Tyr205Asn + Thr215Asp Ala128Pro + Thr215Asp + Leu216Pro Thr161Pro + Gly201Gln + Leu216Cys Gly126Asp + Tyr205Met + Thr212Pro Ser 97Asp + Thr210Asn + Leu216His Ala186Asn + Phe188Thr + Tyr205Pro Asn 61Asp + Thr132Ser + Leu216Asn Leu 95Asn + Thr132Gly + Thr215Asp lle106Asp + Tyr166Thr + Asn2l1Gln lle106Ala + Thr207Pro + Leu216Thr Tyr205Asn + Thr215Asn + Gly218Asn Asn 96Gln + Ser160Asp + Phe188Gly

Gly 64Ser + Giy101Asp + Asn154Gln Thr 58Asn + Gly 64Asn + Asn157Glu Gly101Asn + Ala186Asn + Thr215Sar Gly 62Asn + Asn 96Ser + Ala214Asn Gly130Asp + Phe18BAsn + Gly218Pro Gly 99Ser + Ala128Glu + Lau216Gly Val 94Ala + Pro209Ser + Thr215Asp Leu 95Thr + Gly126Gln + Leu216Gly Asp 59Glu + Gly159Ser + Tyr205Pro Ala199Gly + Ala202Gln + Gly203Gln Ser158Glu + Thr161Gly + Tyr205Asn Thr 58Ser + Ser190Glu + Tyr205Pro Leu 95Asn + Tyr205Ala + Pro209Glu Thr 58Asn + Gly153Pro + Thr210Pro Ala128Gly + Gly203Asn + Tyr205Pro Val 94Cys + Asn157Gln + Tyr205Gln Ser129Glu + Tyr205Asn + Thr215Asn Thr 65Gly + Gly127Asn + Thr212Gln Gly 60Asn + Tyr205Thr + Asn217Gln Gly126Pro + Ala214Pro + Thr215Gly Thr163Gly + Ala202Pro + Thr212Pro Thr 58Pro + Gly130Ser + Ser160Asp Gly153Ser + Asn154Glu + Thr212Gly Leu125Gly + Tyr205Thr + Thr210Glu Tyr103Val + Thr132G!y + Pro200Gln SerlOOGIu + Gly127Asn + Leu216Ala Ser160Glu + Ala186Ser + Tyr205Ser Gly159Ser + Thr163Glu + lle164His Gly101Asp + Tyr166Cys + Gly203Pro Thr 58Asn + Asn 61Glu + Ala214Ser Gly127Glu + Phe188Met + Ala202Gly Asn162Glu + Gly203Ser + Gly218Asn Tyr166Asn + Thr210Glu + Ala214His lle106Asp + Thr212Ser + Thr215Gln Asn162Glu + Ala202Ser + Thr215Asn Tyr103Pro + Ser187Glu + Tyr205Pro Val2O4Thr + Thr212Ser + Thr215Gln SerlOOAsp + Gly101Asn + Leu216His Leu 95Cys + Gly203Ser + Leu216Thr Asn 96Ser + Gly153Glu + Tyr205Pro lle106Pro + Ala202Ser + Thr212Pro Ser102Asp + Gly203Ser + Thr215Ser Leu 95Cys + Ser1O4Glu + Phe188Cys Asp 59Glu + Ala214Gly + Thr215Gly Leu125Cys + Thr212Gly + Thr215Ser Leu125Val + Ala202His + Thr215Pro Gly101Asp + Gly127Asn + Gly203Gln

Thr 58Pro + Gly105Asn + Gly203Glu Tyr166Cys + G!y203Ser + Tyr205Asp Gly126Gln + lle164Val + Leu216His Gly153Ser + Thr215Pro + Leu216Glu Ser160Asp + Gly218Gln + Thr219Asn Asn 61Glu + Asn157Ser + Ala214Ser Gly 62Ser + Ala128Ser + Asn154Asp lle106Gly + Tyr205Val + Thr215Ser Ser160Glu + Asn211Gln + Thr215Pro Thr 65Gly + SerlOOGIu + Thr215Pro Thr 65Ser + Ser1O4Glu + Gly203Pro Asn 61Ser + Ile 106Ser + Thr219Pro Ser102Asp + Gly153Pro + Leu216His Thr 65Glu + Gly126Gln + Gly2O3Ser Ser187Glu + Phe188lle + Leu216Thr Thr132Gln + Gly165Asp + Thr212Ser Ser129Asp + Asn211Ser + Leu216Thr Leu125lle + Asn154Ser + Leu216Met Thr 65Pro + Gly101Pro + Thr212Asp Ihr 65Gln + Leu125Asn + Leu216Met Pro209Gly + Ala214Glu + Thr215Pro Leu125Va! + Tyr205Ser + Leu216His Leu 95Asn + Giy156Asp + Thr212Gln Leu125Pro + Thr210Asp + Thr215Ser Gly1O5Asn + Thr 161 Asn + Tyr205Val Gly126Ser + Ser160Glu + Gly218Asn Val 94Thr + Thr2O7Gly + Thr212Glu Tyr208Gln + Thr212Gln + Gly218Asp Ile 106Asn + Gly159Asn + Phe188Asp Tyr205Mat + Thr212Gln + Tyr213Thr Ser131Asp + Thr132Pro + Tyr213Asn Gly105Ser * Ala128Thr + Thr215Pro Leu 95His + Asn 96Asp + Thr215Gly Gly 60Ser + Gly156Asp + Pro209Asn Asn162Asp + Thr163Asn + Ala199Gly Tyr103Glu + Leu125His + Thr215Ser Gly127Glu + Asn157Gln + Tyr205Leu Asp 59Glu + Gly105Pro + Ala186Asn Ala128Asp + Tyr213His + Leu216His Thr 65Pro + lle106His + Ser131Glu Gly126Gln + Thr161Asp + Ala202Ser Gly 99Gln + Gly126Asp + Thr212Gly Thr 58Asp + Gly159Ser + Thr212Ser Asp 59Glu + Ala186Gly + Gly203Gln Gly 62Glu + Tyr205Ala + Leu216Gln Asn154G!n + Tyr205Ser + Tyr213Met Leu 95Ser + Ser158Glu + Thr212Gly

Tyr166Asn + Tyr205Glu + Leu216Asn Asp 59Glu + Ala128Asn + Gly153Pro Gly 99Asp + Gly 159Asn + Asn211 Ser Gly165Pro + Thr215Gln + Leu216Thr Gly165Asn + Thr215Asn + Leu216Asp Gly 6CAsp + Gly159Asn + Thr212Gln Thr 58Glu + Thr163Gly + Thr210Gln Gly159Ser + Ala186Gly + Ala199Thr Gly2O3Glu + Asn211Gln + Tyr213Gln Gly 99Ser + Asn162Asp + Thr215Gln Thr 65Gly + Ser190Glu + Thr219Ser Val 94Met + Asn162Ser + Ser190Glu Asn 61 Gin + Leu 95Ser + Tyr205Asp Gly126Glu + Gly201Pro + Gly203Ser Thr 58Gly + Thr212Pro + Gly218Glu Ser104Asp + Gly105Ser + Gly159Pro Thr 58Gln + Thr163Gly + Tyr205Pro Gly 60Ser + Thr 65Pro + Thr163Gly Leu125Met + Ser131Glu + Thr210Gly Phe188Gln + Gly201Ser + Ala202Gly Gly203Pro + Leu216Glu + Asn217Gln Gly 62Asn + Gly126Pro + Thr210Asn Gly 60Asn + Ser104Asp + Gly127Gln Ser155Glu + Thr163Pro + Gly203Pro Leu 95Met + Thr132Asp + Asn211Ser Tyr103lle + Gly159Asp + Ala202Gly Gly 101 Gin + Tyr166Pro + Asn21lGln Asn157Ser + Ala202Ser + Thr215Gly Thr132Pro + Ser155Glu + Ala214His Thr132Ser + Thr212Asp + Leu216Gly Gly126Asn + Thr212Asp + Gly218Gln Tyr205Cys + Thr212Pro + Leu216Met Asn 96Gln + Thr163Gln + Leu216Glu Ala202Ser + Tyr205Asn + Gly218Asp Leu 95Asp + Gly126Asn + Ala202Ser SerlOOGIu + lle106Gln + Ala202Gln Thr 58Ser + SerlOOGIu + lle164Leu Gly101Ser + Phe188Asp + Tyr213Gly Ser104Glu + Gly156Gln + Thr212Gly Leu125Val + Gly203Asn + Tyr205Thr Thr163Gln + Thr215Asn + Asn217Glu Gly 99Pro + Gly165Glu + Ala214Gln Met198Ser + Gly203Glu + Tyr213Val Asn 96Ser + Ser 97 Asp + Thr212Ser Ala202Glu + Gly203Ser + Tyr205Gln Gly 64Asn + Asn154Gln + Asn157Glu Thr 65Ser + Gly130Pro + Tyr205Asp

Gly126Gln + Thr161Gln + Pro209Ser Asp 59Glu + Phe188Leu + Leu216Ala Ser131Asp + Thr212Pro + Thr215Gln Val204Pro + Gly218Asn + Thr219Glu Thr 58Ser + Gly203Glu + Thr212Pro Gly 62Gln + Tyr205Gly + Thr212Glu Thr 65Gly + Ser129Asp + Met198Gly Leu 95Cys + Asn162Ser + Ala202Thr Leu125Asp + Tyr205Thr + Leu216Thr Asn157Asp + Tyr205Ser + Leu216Pro Gly156Asn + Gly165Asn + Thr215Glu Ala128Ser + Thr163Glu + Ala199Ser Val 94Ser + Ser187Glu + Thr215Gln Val 94Pro + Thr215Gly + Asn217Glu Val 94Asn + Gly130Glu + Gly203Ser Gly127Gln + lle164Cys + Thr210Gln Ser187Glu + Thr212Gln + Thr215Asn Asn 96Gln + Gly126Gln + Gly203Asp Gly165Asp + Thr210Ser + Tyr213lle Thr 58Gln + Gly153Ser + Asn217Gln Gly203Asp + Tyr205Met + Thr210Ser Ala128Prc + Thr132Glu + Thr215Pro Ser104Glu + Phe188Ser + Thr212Gly Ser104Glu + Asn157Ser + Ala214Ser lle106Cys + Tyr205Glu + Thr215Asn Gly156Gln + Tyr205Pro + Thr219Asp Asn157Glu + Tyr213Thr + Leu216lle Thr 58Ser + Asn162Ser + Ser190Asp

Gly 62Ser + Thr 65Asp + Tyr205lle Leu125Pro + Gly203Asp + Thr212Ser Thr 58Gln + Ser 98Asp + Thr212Pro

Ser 97Asp + Leu125Val + Tyr213lle lle106Leu + Phe188Glu + Thr212Asn Thr 58Pro + Gly153Pro + Asn162Gln Ser190Asp + Thr210Gln + Leu216Ala SerlOOGIu + Thr215Gly + Leu216Met Gly127Glu + Ala128Gln + Thr212Pro Val 94Pro + Gly127Ser + Thr2l5Glu Thr161Asp * Ala199Asn + Tyr213Gln Thr132Pro + Tyr166Leu + Thr212Pro Gly203Gln + Thr215Asn + Leu216Met Gly127Pro + Gly2O3Asp + Tyr205lle Thr163Ser + Tyr205Ala + Pro209Gln Val 94Cys + Thr215Asn + Gly218Pro Gly126Glu + Gly165Pro + Ala202Thr Thr 58Glu + Tyr103Asn + Pro200Gln Phe188Thr + Ala202Asn + Asn217Ser

Gly 60Asp + Leu 95Thr + Tyr205lle Ser102Glu + Ala202Ser + Leu216Gln Gly 99Asn + Ser102Asp + Gly218Gln lle106Ala + Thr132Pro + Asn157Asp Gly203Ser + Tyr205Gln + Thr212Glu Ser 97Asp + lle106His + Asn211Gln SerlOOGIu + Gly201Asn + Tyr205His Thr212Gln + Ala214Glu + Thr215Glu Asn 61 Glu + Gly 62Glu + Gly203Pro Asn211Glu + Thr212Asp + Leu216lle Gly 99Glu + SerlOOAsp + Gly156Pro Ala202Asp + Gly203Glu + Tyr205Pro Ser 97 Asp + Ser 98Glu + Thr163Gln Ala128Thr + Tyr205Asp + Thr215Asp Ser102Asp + Gly105Asp + Leu216Gly Gly127Glu + Gly165Glu + Tyr205Thr Gly203Asp + Tyr205Ala + Asn217Glu Asp 59Glu + Asn 61 Glu + Gly130Ser Gly 60Glu + Ser 97Glu + Gly 99Asn Tyr166Ala + Gly203Glu + Leu216Asp Ser158Asp + Ser160Glu + Tyr205Cys Ser129Asp + Tyr166Glu + Thr215Gln Ser160Asp + Asn162Glu + Thr210Gly Ser129Asp + Ser131Asp + Gly218Asn Asn 61 Gin + Leu 95Asp + Ser 97Asp Gly 62Ser + Leu216Asp + Gly218Glu Asp 59Glu + G,y165Asn + Pro209Glu Leu 95Glu + Gly1O5Glu + Gly203Ser Asn157Glu + Asn162Asp + Thr215Gln Tyr1O3His + Asn162G,u + Ser190Asp Ser 150 Asp + Asn162Glu + Thr163Pro Gly 62G,u + Ser 97Glu + Gly153Gln Gly 99Gln + Asn154Asp + Ser187Glu Ser155Asp + Gly156Asp + Thr219Asp Gly153Ser + Asn154Asp + Gly165Asp Asp 59Glu + Asn 96Glu + Tyr205Ser Asp 59G,u + Asn 96Asp + Leu216lle Ser1O4Asp + Ser131Asp + Thr210Gly Ser 97Glu + Gly1O1Asp + Ala202Asn Asn 96Asp + Ser102Glu + lle106Gly Asn 61Asp + Leu 95Glu + Val2O4Gln Gly156Asp + Thr161Asp + Gly203Ser SerlOOAsp + Tyr1O3Asp + Gly126ASn Thr 65Asp + Tyr205Asp + Thr215Asp Thr 58Asp + Ser 97 Asp + Thr132Gly Thr215Pro + Leu216Asp + Thr219Glu SerlOOGIu + Gly105Glu + Asn162Gln

Ala186Glu + Ala202Glu + Thr215Asp

Asn 61Asp + SerlOOGIu + Asn162Ser Ser1O4Asp + Thr132Glu + Tyr205Met Gly 99Asn + Thr210Asp + Ala214Glu Asn157Asp + Ala186Glu + Thr212Ser Gly 62Asp + Pro209Asn + Asn211 Asp Gly105Pro + Gly153Glu + Asn162Asp Ala186Ser + Thr212Asp + Thr215Asp Gly 99Glu + Ser102Asp + Leu125Gly Gly 62Ser + Gly 99Glu + Ser102Asp Gly126Glu + Ser155Glu + Tyr205Pro Ser158Glu + Phe188Asp + Ala2O2Ser Gly 60Glu + Leu 95Glu + lle106Leu Ala128Asp + Asn154Asp + Thr215Gln Ala128Asp + Asn162Glu ♦ Asn217Ser Asn157Gln + Ser187Glu + Asn217Asp Gly 62Asp + Ser 98Asp + Thr212Glu Gly159Glu + Ser160Asp + Phe188Asp Gly126Asp + Thr210Glu + Asn211Glu Ser1O4Asp + Gly1O5Asp + Ala128Glu Asp 59Glu + Tyr205Glu + Thr215Glu Gly 60Asp + Tyr205Glu + Thr215Asp Asn 61 Glu + Pro209Asp + Thr215Glu Asn 61 Asp + Ser 97Glu + Tyr205Asp Ser102Asp + Gly1O5Glu + Pro209Asp Ser158Asp + Gly203Asp + Thr215Glu Asn157Asp + Gly203Asp + Thr215Asp Gly127Glu + Ser129Glu + Thr215Glu Asn 96Glu + SerlOOAsp + Thr212Glu Ser190Glu + Gly203Glu + Tyr205Glu Ser129Asp +. Phe188Glu + Ser190Asp SerlOOAsp + Ser1O4Glu + Thr212Pro Ser129Glu + Gly153Glu + Asn157Gln Ser 97Glu + Thr212Glu + Ala214Glu SerlOOAsp + Ser1O2Glu + Ser160Asp Asp 59Glu ♦ Ser 97Glu + Asn157Asp Ser 97Glu + Asn157Glu + Ser160Glu Gly101Asn + Leu125Glu + Ser129Glu Gly1O1Glu + Gly130Glu + Thr161Ser Asn154Glu + Ser158Glu + Gly203Gln Val 94Asp + Ser187Asp + Ser190Glu

Tabulka 34 více smyček - varianty se čtyřmi mutacemi

Thr 58Gln + Leu 95Gly + Gly203Pro + Asn211Glu Asp 59Glu + Tyr103Cys + Thr212Gly + Leu216Gln

Gly126Gln + Gly156Glu + Ala202Gln + Thr215Pro Asn 61 Ser + Gly101Asp + Gly165Gln + Tyr205Pro Ser104Glu + Thr132Gly + Phe188Val + Leu216Ser Gly127Glu + Thr212Asn + Thr215Ser + Leu216Gln Leu125Thr + Thr210Gln + Thr212Asp + Thr215Ser Thr132Pro ·«- Gly203Glu + Tyr205Gly + Thr215Gly Asn 96Gln + Gly153Pro + Pro209Glu + Leu216Val Gly 99Asn + Ala128Asn + Gly153Asn + Ala202His Phe188Val + Tyr205Ser + Thr212Gly + Gly218Glu Tyr103lle + Ser129Glu + Asn157Gln + Thr215Pro Leu 95Asn + Ser158Glu + Gly203Pro + Thr215Asn Thr 5BSer + SerlOOAsp + lle164Met + Tyr205Ala Thr 65Ser + Gly126Gln + Gly203Asn + Gly218Asp Asn 96Glu + Tyr205His + Thr215Gln + Leu216Ala Thr 65Ser + Ala128Ser + Gly156Asp + Thr163Gln Asn154Gln + Asn157Glu + Gly203Asn + Thr215Gln Gly 62Ser + Tyr205Thr + Ala214Thr + Thr215Gly Asp 59Glu + Asn 61 Gin + Ala202Pro + Leu216Ala Leu 95Met + Tyr1O3Ala + Thr132Ser + Tyr2O5Asp Ser 97Glu + Leu125Pro + Thr161Pro + Gly203Ser Asp 59Glu + lle106Gly + Tyr205,le + Ala214Pro Ser129Glu + Tyr166Pro + Gly203Gln + Tyr205Gly Asn 61Glu + Gly2O3Gln + Thr212Ser + Thr215Gln Gly153Glu + Phe188Gly + Asn211Ser + Gly218Asn Tyr103Val + Gly126Asn + Pro209Asn + Leu216Asp Ala128Ser + Ser190Glu + Tyr213Ala + Leu216Val Gly127Ser + Asn154Ser + Tyr2O5Leu + Thr212Gln Ala128Glu + Asn154Gln + Asn157Gln + Leu216His Ser155Asp + Gly156Ser + Gly203Ser + Leu216Ala Gly 99Ser + Gly130Ser + Asn157Gln + Tyr213Ser Gly130Ser + Gly203Ser + Ala214Asn + Thr219Asp Asp 59Glu + Asn157Ser + Tyr166Tlir + Pro209Gly Gly203Ser + Thr210Asn + Leu216Thr + Asn217Gln Tyr1O3Ala + Thr163Gln + Ala202His + Thr212Asp Gly 62Glu + Asn154Ser + Tyr166Ala + Phe188Gly Asp 59Glu + Thr163Gln + Tyr205Val + Gly218Ser Val 94Pro + Gly153Asn + Gly165Gln + Thr215Glu Ser 98G,u + Asn154Gln + Gly203Ser + Leu216Pro lle106Glu + Thr132Asn + Ala202Gly + Leu216His Asp 59Glu + Leu 95,le + Ala202Asn + Tyr205Pro Thr 65Gln + Asn 96Gln + Ser1O4Glu + Thr215Pro Leu125Gly + Gly126Ser + Asn154Ser + Gly156Gln Asn 96Gln + Gly126Asn + Gly127Ser + Ala202Asn Gly 64Ser + Ser160Asp + Asn211Ser + Thr212Gly Gly101Pro + Ser158Asp + Thr215Ser + Leu216Ser Val 94Glu + Ala202Ser + Tyr205Ser + Thr212Gly Gly153Ser + Asn154Glu + Thr161Asn + Thr212Gly

Tyr103Val + Leu125Gly + Thr132Gly + Pro200Gln Gly127Pro + Phe188Met + Ala202Gly + Thr215Glu Asn162Glu + Gly203Ser + Ala214His + Gly218Asn Asn 96Glu + Gly 99Pro + Thr132Asn + Thr212Pro Gly101Asn + Tyr205Gly + Tyr213Met + Thr215Asp Leu125Pro + Gly126Asn + AJa202G,y + Gly203Asp Gly 99Pro + Gly127Glu + Tyr205His + Thr212Gln

Tyr103Pro + Tyr166lle + Gly203Ser + Thr207Gly Thr 58Gly + Gly 62Ser + Gly105Glu + Ala128Ser Ila106Gly + Tyr205Val + Thr215Ser + Leu216Asp Asn 61Ser + lle106Ser + Ser190Asp + Thr219Pro Thr 65Glu + Gly126Gln + Gly203Ser + Leu216His Ser187Glu + Phe188lle + Thr212Ser + Leu216Thr

Leu125lle + Asn154Ser + Asn211Ser + Leu216Met Thr 65Gln + Leu125Asn + Pro209Gly + Ala214Glu Leu125Val + Tyr205Ser + Thr215Pro + Leu216His Leu 95Asn + Leu125Pro + Gly156Asp + Thr212Gln Gly126Ser + Ser160Glu + Thr161Asn + Gly218Asn Leu 95Gln + Phe188lle + Ala202His + Thr212Asn Ser104Glu + Thr212Gln + Tyr213Thr + Thr215Pro Ala128Thr + Ser131Asp + Thr132Pro + Tyr213Asn Leu 95His + Ser129Glu + Thr215Gly + Leu216Asn Gly105Pro + Ala128Asp + Tyr213His + Leu216His Gly159Ser + Tyr205Ala + Thr212Gly + Leu216Ala Gly 62Glu + Asn154Gln + Tyr205Ser + Leu216Gln Leu 95Ser + Ser158Glu + Val2O4Gln + Thr212Gly Ser 98Asp + Leu216lle + Asn217Ser + Gly218Asn Leu125Gly + Ala128Gln + Gly203Glu + Pro209Gln Gly105Asn + Tyr166Val + Ala202Asp + Thr215Pra Ser 97 Asp + Ala202Gln + Pro209Gln + Thr215Gly Leu 95Thr + Tyr205lle + Leu216Val + Thr219Ser Gly 99Asn + Ser102Asp + Tyr205Ser + Gly218Gln Thr 65Pro + Gly165Asn + Ala186Pro + Gly201Ser Asn 154 Asp + Gly203Gln + Tyr205Asn + Thr212Asn lle106His + Ala186Gly + Thr212Asn + Leu216Asp Gly126Glu + Gly127Gln + Ala128Asn + Ala202Asn Leu 95Ser + Ala128Gly + Thr161Gln + Asn217Glu Asp 59Glu + Gly101Pro + Aia199Gly + Gly203Ser Asn 61 Asp + Val204Thr + Tyr205Cys + Thr215Ser Gly 101 Asn + Asn162Asp + Phe188Ala + Tyr205His Ala186Thr + Gly203Asp + Thr215Pro + Asn217Ser Tyr103Gln + Phe188Met ♦ Thr210Glu + Thr219Pro Gly 62Asp + Gly126Ser + Leu216Pro + Thr219Asn Gly 60Gln + Tyr205Pro + Thr212Ser + Thr215Asp lle1O6Val + Ser187Glu + Thr212Pro + Thr215Ser Gly159Asp + Asn211Ser + Ala214Gln + Thr219Pro Asn 96Ser + Ser160Asp + Ala214Gln + Leu216Gly

Ser104Asp + Gly203Sar + Tyr205Ser + Thr215Pro Gly153Gln + Pha18BTyr + Thr215Glu + Leu216lla Ser129Asp + Thr132Pro + Thr212Gln + Leu216Thr Ala128Gln + Ala186Asn + Thr215Asp + Gly218Asn Asn 96Asp + Ala202Pro + Tyr205Gln + Pro209Sar Thr132Asp + Gly165Pro + Thr210Pro + Leu216Cys Gly105Pro + Gly130Sar + Thr161Glu + Thr215Pro lle106Cys + Asn157Gln + Tyr205His + Thr212Gln Leu 95Gly + SerlOOGIu + Gly101Pro + Gly126Ser Gly 60Ser + Gly105Asp + Thr132Pro + Tyr205Thr Thr132Sar + lla164Val + Gly203Glu + Gly218Asn Gly203Gln + Thr212Pro + Thr215Asn + Leu216Pro Asn 61 Ser + Val 94Gln + Thr132Asp + Val2O4Gly Gly201Sar + Thr212Gly + Thr215Pro + Leu216Pro Gly153Pro + Sar160Glu + Gly165Gln + Gly218Sar Tyr166lla + Tyr213Sar + Ala214Glu + Gly218Asn Thr132Ser + Thr163Asp + Tyr166Val + Ala199His Thr132Gln + Asn157Sar + Tyr208Gly + 7hr215Asp Gly203Glu + Tyr205lla + Tyr208Pro + Thr215Ser Gly127Ser + Gly165Sar + Tyr213lla + Leu216His Gly156Glu + Pro209Asn + Asn211Sar + Thr212Ser Gly165Gln + Pha188Leu + Ala202His + Thr212Glu Ser102Asp + Gly130Asn + Asn162Ser + Leu216Thr Val 94Cys + Gly156Sar + Tyr2O5Ala + Leu216Ala Gly 99Pro + Tyr103Glu + Pha188His + Leu216Cys Tyr103Gln + Gly126Gln + Gly156Pro + Tyr166Asn Leu125Pro + Gly153Glu + Asn162Ser + Thr215Ser Gly 64Sar + Gly 99Asn + Gly203Asp + Thr210Gln Gly 99Asn + Ala202Pro + Thr212Asn + Gly218Ser Ala128Ser + Gly203Gln + Pro209Glu + Gly218Ser Thr 58Ser + Tyr1O3Gly + Lau125Gly + Tyr205Gly Asn154Glu + Thr161Ser + Asn162Gln + Gly203Gln Gly101Pro + Asn154Ser + Lau216His + Asn217Glu Thr163Asp + Ala186Ser + Tyr205His + Leu216Pro Gly159Glu + Gly2O3Sar + Thr21OGIy + Lau216His Leu125Ser + Thr163Glu + Ala202Pro + Thr210Gln Gly153Pro + Ser155Glu + Thr210Asn + Lau216Cys Gly1O1Asp + Gly126Gln + Tyr166lle + Gly203Pro Ser158Asp + Gly201Asn + Val2O4Asn + Pro209Sar Tyr166Pro + Tyr205Pro + Thr215Asp + Leu216Ala Gly 64Asn + Sar160Asp + Tyr205Lau + Thr215Gly Gly1O1Ser + Thr132Gln + Gly159Pro + Thr161Ser Tyr103Val + Asn154Gln + Gly159Sar + Asn211Asp Gly127Glu + Asn157Ser + Thr161Asn + Thr212Gly Asn 61 Asp + lle164Asn + Pro209Asn + Lau216Val Ser158Asp + Asn162Ser + Tyr205Asn + Thr212Gly Leu125Val + Ala2O2Thr + Pro209Asn + Thr219Pro

Gly 60Asp + Asn154Gln + Gly203Pro + Tyr205Leu Leu125Gln + Asn162Ser + Gly203Asp + Thr215Gly Ser102Asp + Tyr103lle + Tyr205Met + Thr212Gln Gly 99Gln + Ala214Gln + Leu216Ala + Gly218Glu Gly105Asn + Gly156Gln + Gly203Pro + Gly218Asp lle106Ser + Thr212Asn + Lau216Glu + Gly218Gln Asn 96Asp + Tyr166Thr + Gly203Ser + Gly218Pro Ser155Asp + Gly203Gln + Tyr213Thr + Thr215Gly Gly101Ser + Thr212Gly + Thr215Asn + Leu216His Thr 65Sar + Leu 95Asn + Thr132Ser + Asn162Asp Leu 95Met + Thr132Asn + Gly203Asp + Thr215Gly Asn154Ser + Gly203Glu + Thr212Gly + Leu216Ala Gly 60Ser + Ser131Glu + Thr210Ser + Asn217Gln Gly 62Asn + Asn162Gln + Gly203Gln + Thr215Ser Gly 99Ser + Tyr103Ala + Thr210Gln + Thr219Ser Asn162Gln + Gly203Glu + Thr215Gln + Thr219Gly Asn162Gln + Gly165Asn + Leu216lle + Gly218Ser Thr 65Asn + Gly 99Gln + Thr212Ser + Leu216Asp Phe188Val + Ala214Asp + Thr215Asp + Leu216Gln Gly 99Glu + SerlOOAsp + Gly156Pro + Tyr205Gln Val 94Asn + Tyr103Asp + Ser104Asp + Thr215Pro Gly 64Gln + Asn154Asp + Ser155Glu + Leu216Ser Asn154Glu + Ser155Glu + Gly156Gln + Thr215Pro Gly153Pro + Asn157Ser + Tyr205Asp + Thr215Asp Tyr1O3Leu + Phe188Met + Tyr205Glu + Thr215Glu Tyr205Ala + Thr21OGIu + Thr212Asp + Gly218Gln Ala202His + Tyr205Val + Thr210Glu + Thr212Asp Gly2O3Asp + Tyr205His + Thr212Ser + Thr215Asp Gly127Glu + Ser129Asp + Gly153Asn + Thr210Pro Ala128Asn + Tyr166Ala + Gly2O3Asp + Leu216Asp Ser 98Glu + SerlOOGIu + Gly2O3Ser + Asn217Gln Asn 61Asp + Gly 62Pro + Asn 96Asp + Ser 97Glu

Gly159Ser + Thr161Glu + Thr163Glu + lle164His Ser160Glu + Asn162Glu + Asn211Gln + Thr215Pro Asn 61 Asp + Gly 99Asp + Thr161Gly 4 Thr212Pro lle106Val 4 Ala186Asp 4 Ala202Glu 4 Thr215Gln

Asp 59Glu 4 Gly 64Asn 4 Thr 65Glu 4 Tyr213Ser Val 94Pro 4 Thr215Asp 4 Leu216His 4 Asn217Asp Asp 59Glu 4 Gly 127Asn 4 Ala186Pro 4 Pro209Asp Tyr103Glu 4 Ser131Glu 4 Tyr213His 4 Thr215Ser Ser129Asp 4 Thr132Gln + Gly165Asp + Leu216Thr

Tyr205lle 4 Thr212Glu 4 Ala214Glu 4 Thr219Gln

Thr 58Gly 4 Thr212Gln 4 Tyr213Asp .4 Thr215Asp

Asp 59Glu 4 Gly 62Gln 4 Ser 97Glu 4 Tyr205Gly Phe188Asp 4 Tyr208Gln 4 Thr212Gln 4 Gly218Asp Ala186Asp 4 Ala202Asp 4 Gly203Glu 4 Tyr205Pro Asn154Asp + Ser155Asp + Gly165Ser 4 Ser187Asp

100

Ser 97Asp + SerlOOGIu + Gly201Asn + Tyr205His Ser 97 Asp + SerlOOAsp + Gly165Ser + Tyr205Thr Gly105Ser + Asn157Glu + Ser160Glu + Thr215Pro Gly156Asp + Thr161Asp + Ser190Asp + Gly203Ser Thr 65Gly + SerlOOGIu + Leu125Glu + Thr215Pro Gly 62Glu + Ser 97Glu + Gly153Gln + Pro209Gln Gly 62Glu * Asn157Gln + Gly203Gln + Thr21OGIu Asn154Asp + Gly165Glu + Thr212Gly + Gly218Pro Asn162Asp + Gly165Asp + Thr212Gln + Leu216Cys SerlOOGIu + Gly126Glu * Ala186Gln + Tyr205Ala Asn154Ser + Ser158Asp + Ser190Glu + Thr215Gln Ser129Asp + Thr132Asp + Gly203Gln + Thr215Gln Asn 96Ser + Thr163Asp + Tyr166Asp + Ala214Thr Gly 60Glu + Ser 97Glu + Tyr166Asn + Thr210Glu lle106Gln + Asn154Glu + Gly203Asp + Gly218Asp SerlOOGIu + Gly1O5Glu + Asn162Gln + Phe188Ser Ala186Glu + Ala202Glu + Thr215Asp + Asn217Gln Asp 59Glu + Gly 99Asp + lle164Thr + Thr215Ser Ser129Glu + Asn154Glu + Asn162Ser + Gly165Asp Ser104Glu + Thr132Glu + Tyr205Met + Thr215Pro Gly 62Asp + lle106Leu + Pro209Asn + Asn211Asp Asp 59Glu + Ser 98Asp + Gly156Asn + Gly218Asn Asn 96Asp ♦ SerlOOAsp + Ser104Glu * Thr132Asn Ala128Asp + Asn154Asp + Tyr213Met + Thr215Gln Ser131Glu + Gly153Asp + Gly165Asp + Tyr205Gly Gly1O1Asp + Gly105Asp + Gly126Asn + Ser131Glu Ser129Asp + Asn157Glu + Thr163Glu + Thr212Pro Gly 99Asn + Ala128Asp + Asn162Glu + Asn217Ser Ser 98Asp + SerlOOAsp + Ser104Glu + Thr212Pro Asn 96Gln + He106Ala + Gly156Glu + Ser160Asp Gly203Asp + Pro209Glu + Thr215Asp + l.eu216Pro Asn 96Asp + Ser 97Glu + Ser104Asp + Ala214Ser Gly159Asn + Gly165Glu + Leu216Cys + Thr219Asp Gly153Asp + Ser187Asp + Gly203Asn + Leu216Ser Thr 65Glu + Tyr103Pro + Thr215Asp + Asn217Asp Gly 62Asp + Ala202Glu + Thr215Asp + Leu216Ser Thr 65Asp + Gly101Gln + Gly130Ser + Tyr205Asp Asn 61 Ser + Thr 65Asp + Thr132Asn + Tyr205Asp Gly 99Pro + Ser187Glu + Gly203Glu + Thr215Asp Thr 65Ser + GJy126Asp + Thr210Glu + Asn211Glu Asn 96Asp + Thr161Asp + Asn162Glu + Ala202Asn Gly101Glu + lle106Met + Ala214Asp + Thr215Glu Asn 61Asp + Ala186Asp + Ser187Glu + Leu216Pro Ser104Asp + Tyr205Val + Thr215Asp + Leu216Asp Leu 95Asp + Ala202His + Thr215Glu + Leu216Glu Ser129Asp + Gly13OAsp + Thr210Gln + Thr212Asp lle106Glu * Asn162Ser + Asn211Asp + Thr212Glu

101

Thr 58Asp + Asp 59Glu + lla106Glu + Pha188Sar Sar104Asp + Gly105Asp + Ala128Glu + Thr215Gly Gly 99Asp + SarlOOGIu + Thr161Glu + Pro209Gln Gly 99Asp + SarlOOGIu + Ser190Asp + Tyr205His Asp 59Glu + Ala202Asp + Gly203Glu + Lau216Cys Asp 59Glu + Gly 60Glu + Ala128His + Thr215Asp Gly126Asn + Asn154Glu + Sar155Asp + Gly203Asp Sar 97Glu + Sar 98Asp + Sar131Glu + Asr»162Sar Sar 97Glu + Sar 98Glu + Sar104Asp + Asn217Gln Gly156Ser + Sar158Glu + Tyr205Asp + Thr215Asp Asn 61Glu + Sar 97Glu + Ala128His + Tyr205Asp Gly 64Asn + Thr 65Glu + Pho188Tyr + Thr215Glu Tyr103Glu + lle106Glu + Gly203Pro + Gly218Glu Gly 99Glu + Sar102Asp + Leu125Gly + Sar131Glu Sar102Glu + Asn154Glu + Sar190Asp + Tyr205Val Gly127Glu + Gly165Glu + Tyr205Thr + Thr215Glu Val 94Glu »· Gly105Asp + Gly165Pro + Thr212Glu Asn 96Glu + Sar 98Asp + Tyr103Leu + Sar155Asp Asp 59Glu + Asn 61Glu + Gly105Glu + Gly130Sar Asp 59Glu + Asn 61 Asp + Thr 65Gly + Tyr205Glu Leu 95Gln + Tyr103Asp + Gly203Asp + Thr215Asp Asn157Asp + Gly203Asp + Thr215Asp + Thr219Gln Sar 98Glu + Gly203Glu + Thr215Glu + Gly218Sar Sar131Asp + Asn154Gln + Gly203Asp + Thr215Glu Gly101Asn + lla106Glu + Gly159Asp + Thr161Asp Gly127Glu + Sar129Glu + Gly130Sar + Thr215Glu Gly153Gln + Sar155Asp + Pro209Glu + Thr212Asp Gly203Glu + Thr210Asp + Lau216Asp + Gly218Pro Val 94Sar + Sar 98Glu + SarlOOAsp + Pha188Asp Asn 96Asp + SarlOOAsp + Gly153Sar + Asn162Glu

Gly 62Glu + Leu 95Glu + lla106Lau + Thr212Glu Sar160Asp + Asn162Asp + Ala202Glu + Thr215Gln Asn 61Glu + Sar 98Asp + Gly126Glu + Lau216Asn SarlOOAsp ♦ Sar104Asp + Gly105Asn + Tyr205Cys Asn 61Asp + Gly 99Glu + Tyr103Thr + Sar131Asp Val 94Glu + Asn157Asp + Thr163Glu + Tyr205Ala Gly127Asp + Sar131Glu + Thr132Asn + Sar190Asp Gly 60Glu + Gly156Sar + Asn211Asp + Thr212Gln Gly126Asp + Gly156Glu + Ser158Glu + Tyr205Mat Asn157Asp + Tyr205Val + Thr215Asp + Asn217Glu Asp 59Glu + Gly203Glu + Tyr205Asn + Pro209Asp Gly105Glu + Sar131Asp + Gly156Asn + Lau216Pro Asp 59Glu + Sar 97Glu + Asn157Asp + Pha188His Sar 97Asp + SarlOOAsp + Ala202Pro + Thr212Glu Val 94Gly + Sar104Glu + Asn157Asp + Sar160Asp Asn 61Glu + Asn162Glu + Sar190Asp + Thr215Gly Asn 61Asp ♦ Asn 96Glu + Gly127Sar + Gly130Asp

102

Thr 65Glu + Gly165Glu + Phe188Val + Ser190Glu Tyr103Pro + Asn154Glu + Ser158Glu + Tyr205Pro Ser131Glu + Gly156Glu + Tyr166Asp + Ala186Thr Asn 61 Glu + Thr 65Asp + Tyr103Pro + Ser131Asp Gly130Glu + Asn154Asp + Ser187Asp + Tyr208His Ser131 Glu + Thr163Pro + Gly203Glu + Gly216Glu Asp 59Glu + Asn162Asp + Thr163Gln + Thr210Glu Leu125Asp + Gly165Asp + Gly203Asp + Tyr213Gln Gly101Asp + Asn162Asp + Gly165Glu + Leu216Asn Ser155Glu + Ser158Asp + Tyr205Glu + Leu216Pro Gly 60Asp + Tyr205Pro + Thr212Asp + Thr215Glu Ser160Glu + Thr163Asp + Tyr205His + Thr215Asp Thr 58Pro + Asn 61 Glu + Asn154Glu + Asn157Asp Asp 59Glu + Gly 99Sar + Gly153Asn + Thr212Asp Ser 97Glu + Gly101Asp + Thr132Glu + Ala202Asn Thr 58Glu + Asn 61 Asp + Ala186Gly + Sed87Asp Thr 58Glu + Asn 61 Glu + lle106Cys + Thr132Asp Ser158Glu + Gly203Glu + Asn211Gln + Ala214Asp Ser129Asp + Gly203Glu + AJa214Glu + Thr215Sar Ser104Asp + Ser155Glu + Asn157Gln + Asn162Glu Thr 65Glu + Ser160Glu + Tyr205Cys + Thr210Asp Asn 61Asp + Leu 95Glu + Tyr2O5Glu + Leu216Asn SerlOOGIu + Gly127Glu + Thr215Asp + Leu216Pro Ser102Glu + Gly127Glu + Ala128Pro + Asn162Glu Asn 96Asp + Gly105Glu + Asn162Asp + Thr212Gln Ser 98Glu + Gly127Asp + Ser131Glu + Ala202Ser Asp 59Glu + Leu 95Asp + Gly159Asp + Tyr205Val Thr 65Glu + Ser187Glu + Thr215Gln + Gly218Glu Gly156Glu + Gly159Glu + Tyr205Met + Thr215Glu Gly 64Gln + Gly130Glu + Thr132Gly + Gly153Glu Asp 59Glu + Gly 99Glu + Ser129Glu + Tyr205Asn Gly126G!u + Ala186Glu + Gly203Asp + Thr212Pro Thr 58Asp + Tyr103Val + Ser104Glu + Thr132Asp Ser104Glu + Thr132Glu + Ala202Glu + Asn217Gln Ser 98Glu + Thr132Gly + Ser187Glu + Thr219Glu Gly 62Asp + SerlOOAsp + Gly105Asn + Tyr205Val Ser 97 Asp + Ala186Asn + Thr212Glu + Thr215Asp Ser187 Asp + Ala202Gly + Thr212Glu + Thr215Glu Asp 59Glu + Ser 98Glu + Gly153Ser + Asn154Glu Gly126Glu + Thr132Asp + Ser155Asp + Ala202Gly Asp 59Glu + Gly 62Pro + Ser158Glu + Phe188Glu Ser104Asp + Gly130Asp + Tyr205Pro + Thr212Glu Thr 65Pro + Ser102Asp + Gly126Asp + Ala202Asp Gly 62Asp + Ser129Glu +Thr215Asp + Leu216Val Ala128Asp + Asn162Asp + Ala202Ser + Tyr205Glu Ser 97Glu + Thr132Gly + Gly153Asp + Ser187Asp Ser102Asp + Leu125Asp + Gly156Asp + Gly218Asn

103

Asn 61 Gin + Ser160Glu + Ser190Asp + Gly203Glu Asn 96Asp + Tyr166Asp + Ser190Glu + Leu216Cys Thr 65Asp + Asn162Glu + Tyr205Asp + Thr215Pro Thr 65Asp + Ser 97Glu + Gly105Glu + Leu216Met Val 94Asp + Ser 98Asp + Ser158Asp + Thr215Gln Thr 65Glu + Gly101Asp + Thr215Glu + Gly218Asn Thr 58Asp + Gly156Ser + Asn211Asp + Thr215Glu Gly 99Gln + Gly126Gln + Asn154Asp + Thr161Asp Gly156Asn + Ala186Asp + Thr212Glu + Leu216Asp Ser 97 Asp + lle106Gln + Leu125Asp + Thr215Ser SerlOOGIu + Ser104Glu + Tyr166Ala + Ser187Asp Ser 98Asp + Ser102Glu + Thr215Glu + Leu216Gln Ser129Asp + Thr132Gln + Ser155Glu + Ser160Asp Ser 97Glu + Thr163Asp + Ser187Glu + Thr219Ser Leu125Cys + Ser129Glu + Ser155Glu + Thr215Gly Asn 61 Asp + Gly126Glu + Ala214Asp + Thr219Gln

Thr 58Asn + Gly 64Pro + Thr 65Glu + Val 94Asp Tyr205Leu + Tyr213Asp + Thr215Gly + Asn217Asp Asp 59Glu + Ala202Gln + Thr212Asp + Asn217Asp Asp 59Glu + Ser187Asp + Pro209Asn + Thr212Asp Thr 58Asn + Leu 95Glu + Phe188Asp + Gly203Asp Ser187Glu + Tyr205lle + Thr212Glu + Leu216Glu Ser129Glu + Gly156Gln + Thr212Asp + Leu216Asp Gly101Glu + Ser129Glu + Asn157Glu + Tyr205Thr Gly 60Glu + Leu125Ser + Gly153Glu + Ala202Asp Asn 61 Glu + Phe188Glu + Tyr205Ala + Thr212Glu Asn 61 Glu + Gly153Asn + Gly159Asp + Thr212Asp Thr 65Gly + Tyr205Glu + Asr»211Glu + Lau216Cys Thr 65Glu + Asn 96Glu + Gly156Asp + Leu216Cys

Tabulka 35 více smyček- varianty s pěti mutacemi

Tyr103Cys + Gly156Glu + Ala202Gln + Thr212Gly + Leu216Gln Asn 61 Ser + Gly101Asp + Thr132Gly + Gly165Gln + Tyr205Pro Gly 60Asn + Asn162Gln + Thr212Pro + Tyr213Gln + Asn217Asp Gly 60Ser + Leu 95His + SerlOOGIu + Gly156Pro + Thr215Gly Leu 95lle + Thr163Gln + Tyr205Glu + Tyr213Ala + Thr219Asn Gly159Glu + Phe188Tyr + Gly203Pro + Tyr205Gly + Ala214Thr Gly126Pro + Gly127Gln + Tyr208Asn + Thr212Gln + Leu216Ala Leu 95Gly + Asn162Ser + Gly165Glu + Pro209Gly + Thr210Gly Thr 58Ser + Leu 95Asn + SerlOOAsp + Tyr205Ala + Thr215Asn Asn 61 Ser + SerlOOGIu + Asn162Gln + Phe188Ser + Gly203Ser Tyr103Ser + Thr161Pro + Phe188Gln + Gly201Gln + Leu216Pro Ser 97Asp + Gly 99Pro + Tyr205Pro + Thr210Asn + Leu216His Leu 95Mel + Ser187Asp + Tyr205Val + Thr212Gly + Leu216Asn lle106Asp + Tyr166Thr + Thr207Pro + Asn211Gln + Leu216Thr

104

Asn 96Gln + Ser160Asp + Phe188Gly + Thr215Asn + Gly218Asn Thr 58Pro + Ser 98Asp + Gly130Pro + Tyr205Val + Tyr208Pro Val 94Ala + Gly 99Ser + Ala128Glu + Phe188Asn + Leu216Gly Leu 95Thr + Gly126Gln + Pro209Ser + Thr215Asp + Leu216Gly Ser 98Glu + Asn154Gln + Gly203Ser + Thr215Ser + Leu216Pro Thr 58Asp + Leu125Pro + Ala202Thr + Gly203Pro + Tyr205Val Ala128Asp + Giy153Gln + Ala186His + Ala199Gln + Gly203Asn Asp 59Glu + Gly159Gln + Ala186His + Leu216Ser + Gly218Ser Ala186His + Phe188Gln + Ser190Glu + Pro200Ser + Tyr205Val Val 94Gly + Ser 98Asp + Tyr166Pro + Ala202Gly + Tyr205His

Asn 61 Gin + Tyr103Met + Asn157Asp + Thr161Ser + Gly203Asn Thr 65Gln + Gly203Gln + Pro209Ser + Thr215Gln + Asn217Asp Gly126Ser + Ser160Asp + Thr163Gln + Gly203Sar + Tyr205Gly Tyr103Gln + Gly156Pro + Tyr166Asn + Phe188Tyr + Thr215Glu Val 94Met + Gly 99Asn + Thr212Asn + Tyr213Gly + Thr215Glu Ala128Ser + Ala202Pro + Gly203Gln + Pro209Glu + Gly218Ser Thr 58Ser + Tyr103Gly + Leu125Gly + Tyr205Gly + Gly218Ser Leu125Pro + Asn154Glu + Thr161Sar + Asn162Gln + Gly203Gln Gly 60Asp + Gly 62Pro + Asn 96Ser + Ala186Gly + Thr210Gln Asn 61 Gin + Thr 65Ser + Leu 95Met + Tyr103Gly + Ser104Asp Asn 61 Ser + Gly153Gln + Gly156Gln + Aia202Gly + Asn211Gln Ser102Asp + Gly126Gln + Ala202Asn + Tyr205Leu + Thr212Gly Gly 60Asn + Ser104Asp + Gly105Asn + Thr163Ser + Tyr205Ala Val 94Asn + Gly101Asn + Leu125Asn + Gly130Asp + Leu216Cys Gly159Pro + Gly165Pro + Ala186Thr + Gly201Pro + Leu216Ser Leu 95Cys + Gly130Gln + Thr212Ser + Ala214Asn + Leu216Val Gly 60Glu + Thr161Gly + Gly203Gln + Tyr205lle + Thr212Gly Gly153Ser + Gly159Asn + Ala186Pro + Gly203Ser + Thr219Asn Asp 59Glu + Gly 62Gln + Leu125Ala + Thr215Asn + Asn217Gln Val 94Gly + Leu125Ser + Gly203Glu + Thr215Gln + Leu216Asn Ala186Gln + Ser187Glu + Gly201Gln + Ala202Pro + Gly203Ser Asn157Asp + Gly203Gln + Thr212Pro + Ala214Gln + Leu216Ala Thr 65Ser + Ser 98Asp + Thr161Ser + Gly203Ser + Tyr205Cys Gly 99Asp + Gly165Ser + Met198Cys + Pro209Gly + Thr215Gly Gly153Pro + Tyr208lle + Thr212Ser + Ala214His + Gly218Glu Ser 98Asp + lle106Ala + Tyr166Leu + Ala202Gln + Ala214Thr Gly 99Gln + Ser129Glu + Thr161Asn + Phe188Cys + Tyr205Thr Gly 60Asn + Gly159Gln + Ser160Glu + Thr163Pro + Ala186Gly Asn 96Asp + Gly 99Pro + Val204Ala + Tyr205Val + Asn217Gln Gly 60Ser + Phe188lle + Thr212Asn + Thr215Ser + Leu216Asp Ala128Gly + Thr132Gln + Gly165Gln + Met198Thr + Gly203Glu Asn 96Asp + Asn157Ser + Gly201Asn + Thr212Gly + Thr215Gly Gly 99Asp + Phe188Val + Gly203Asn + Thr207Asn + Leu216Pro Ala128Pro + Thr132Pro + Thr163Pro + Phe188Thr + Thr212Glu Val 94His + Gly105Glu + Ala186Pro + Thr210Gln + Thr212Gly Gly101Pro + Thr132Asp + Asn162Ser + Thr212Gln + Leu216Pro Gly 60Asn + Tyr103Asn + Gly105Gln + lle106Ala + Leu216Gln

105

Gly126Pro + Gly203Pro + Tyr205Val + Thr215Asn + Leu216Ser Thr 58Glu + Thr161Gly + Tyr205Asn + Tyr208Leu + Leu216Thr Gly101Asn + Gly159Pro + Asn162Sar + Ala202Gly + Tyr205Gln Tyr103lle + Gly105Pro + Ala202Gln + Thr210Gln + Leu216Pro Gly 60Asp + Gly153Ser + Thr163Gly + Thr212Pro + Leu216Met Gly101Pro + Ser104Glu + Gly105Pro + Gly153Ser + Tyr205Thr Asn162Asp + Phe188His + Ala199Gly + Thr212Pro + Leu216Pro Ala186Gly + Ala202Pro + Tyr205Met + Thr210Gln + Leu216Val Gly 62Ser + Tyr103Met + Asn154Glu + Thr212Gly + Leu216Met Thr 65Ser + Gly101Pro + Tyr103Leu + Thr161Asp + Thr219Ser Gly1O5Ser + He106His + Ala1B6Thr + Met198Pro + Thr212Pro Thr163Gly + Gly203Asp + Thr212Asn + Leu216His + Asn217Gln Gly126Ser + Thr161Gln + Gly203Pro + Tht210Pro + Leu216Val Thr 65Gln + Ser131Asp + Ala186Gly + Thr215Ser + Leu216Uis Thr132Gln + Asn162Ser + Gly165Asp + Tyr205Gly + Tyr208Cys Gly127Gln + Gly153Glu + Gly203Pro + Thr215Gly + Thr219Gly lle106Met + Leu125Cys + Gly126Ser + Ser131Glu + Gly156Asn Ser 97Glu + Thr132Gly + Pro200Gly + Tyr205Ala + Asn211Ser Thr 65Asp + Tyr166Gln + Gly203Asn + Thr210Sar + Thr212Gln Gly 99Ser + Tyr166Ser + Ser187Glu + Tyr205Gln + Leu216Ser Gly126Ser + Gly130Asn + Thr161Asp + Phe188Val + Thr207Gln Leu 95Pro + Pro200Ser + Tyr205Leu + Thr210Glu + Leu216Cys Tyr103Glu + Gly127Gln + Tyr166Thr + Ala202His + Thr210Ser Thr 58Gly + Ala202Pro + Pro209Gln + Thr212Ser + Ala214Glu Gly 62Gln + Tyr103Thr + Thr163Gly + Ser187Asp + Gly203Gln Gly101Gln + Leu125Glu + Thr132Ser + Gly203Ser + Thr212Gln Asn 96Ser + Ala128His + Ala186Gln + Tyr205His + Thr215Ser Gly1O1Ser + Gly165Asp + Thr210Ser + Thr212Gly + Thr215Gly Gly156Gln + Ala202Gly + Ala214His + Thr215Pro + Leu216Thr Val 94Cys + Gly 99Gln + Gly126Asn + Gly159Pro + Thr219Pro Leu 95Pro + Gly105Pro + Thr161Asp + Gly203Pro + Leu216Asn Gly 60Glu + Asn 61 Gin + Thr 65Gln + Thr210Gly + Leu216Gln Leu125Gly + Ser187 Asp + Phe188Gln + Ala202Asn + Thr212Asn Phe188lle + Gly203Glu + Thr210Gly + Thr212Gln + Leu216Pro

Asp 59Glu + Leu 95lle + lle106Leu + Gly203Gln + Tyr213lle Gly 99Gln + Ala186Pro + Tyr205Gly + Thr215Glu + Gly218Gln Ser 98Glu + Thr161Pro + Ala202Gln + Tyr205Leu + Thr207Gln SedOOGIu + Gly153Asn + Thr163Glfi + Thr212Pro + Leu216Gln Leu 95Ser + lle106Asp + Tyr205Val + Leu216Pro + Thr219Asn Tyr166Val + Ser190Asp + Thr207Gly + Thr212Ser + Leu216Asn Asp 59Glu + Gly105Gln + Thr132Gln + Ala186Ser + Tyr205lle Gly 60Pro + Tyr205lle + Asn211Gln + Leu216lle + Asn217Gln Gly 99Asn + Leu125Thr + Asn157Gln + Asn162Glu + Thr212Gln II θ 106 Ala + Asn162Glu + Tyr166His + Asn211Ser + Thr215Gln Asn154Asp + Phe188Gly + Gly203Pro + Tyr205Ala + Pro209Ser Leu 95Asn + Gly105Glu + Tyr166Ala + Tyr205Leu + Thr212Ser Val 94Ala + Ser131Glu + Thr132Glu + Phe188His + Thr212Gly

106

Gly 64Gln + Gly159Asp + Ser160Glu + Thr215Pro + Leu216Ala Thr 58Glu + Asp 59Glu + Pro209Gln + Thr212Asn + Thr215Gln Asn 96Asp + Ser 97Glu + Tyr205Thr + Ala214Thr + Leu216Ser Asp 59Glu + Gly 60Glu + Gly159Asn + Thr210Pro + Gly218Asn Asp 59Glu + Gly 60Asp + Leu 95Ser + Gly203Pro + Tyr205Ser Tyr1O3lle + Asn154Ser + Tyr205Glu + Ala214His + Thr215Asp Gly1O5Asn + Gly127Gln + Ala202Glu + Gly203Ser + Asn217Glu Asn 61Asp + Thr 65Gln + Ser 97 Asp + Tyr205Ala + Leu216Ser Asn 61Glu + Ser 97Glu + Gly105Gln + Asn162Ser + Thr212Ser Asn 61Asp + Leu 95Ser + Ser 97Glu + Val204Gln + Thr212Gly Tyr1O3His + Asn154Glu + Phe188lle + Ser19OGIu + Thr212Gln Val 94Pro + Asn 96Asp + Ser 98Glu + Tyr103Pro + Thr212Ser Val 94Met + Ser158Asp + Thr161Glu + Gly203Ser + Gly218Ser Gly203Asp + Tyr213Pro + Thr215Asn + Asn217Asp + Gly218Asp Ser160Glu + Asn162Glu + Tyr205Val + Asn211Gln + Thr215Pro Asn 61Asp + Ser 98Glu + Tyr103Cys + Gly203Ser + Tyr213Ala Gly1O1Asn + Tyr103Pro + lle106Asn + Asn157Glu + Thr161Asp Gly130Asn + Ala186Glu + Ala202Glu + Thr215Pro + Thr219Asn Gly126Asp + Ala128Glu + Thr132Ser + Met198Cys + Gly218Ser Val 94Pro + Leu125Gly + Thr215Asp + Leu216His + Asn217Asp Gly 62Ser + lle106Ala + Ala128Thr + Thr215Asp + Asn217Glu Gly105Pro + Ser129Glu + Thri32Asn + Gly165Glu + Asn211Gln Asp 59Glu + Asn 96Asp + Ser 97Glu + Phe188His + Thr210Pro Asn 61Gln + Gly153Glu + Thr163Asp + Gly203Gln + Leu216Ser Asp 59Glu + Thr 65Gly + Leu 95Gly + Ser 97Asp + Tyr166Gly Asn157Asp + Ser160Asp + Asn162Glu + Thr210Gly + Thr212Ser Ser 97Glu + SerlOOAsp + Gly101Ser + Thr207Gln + Thr212Asn Gly 64Ser + Gly203Ser + Thr212Asp + Ala214Asp + Thr215Asp Gly 60Asn + Thr132Asn + Ser155Glu + Gly156Glu + Asn162Asp Gly 99Ser + Tyr103lle + Gly130Gln + Phe188Glu + Thr219Glu Gly156Asp + Thr161Asp + Ser190Asp + Gly203Ser + Ala214Gln Gly1O1Asp + Ser104Asp + Gly127Ser + Thr210Gln + Thr212Gln Gly130Gln + Ser155Asp + Tyr213Mel + Gly218Asp + Thr219Glu Gly 99Ser + Asn154Ser + Gly203Asp + Leu216Asn + Gly218Asp Ser102Glu + Gly130Asp + Ser131Asp + Ala202His + Thr210Asn Gly153Pro + Gly159Asp + Asn162Asp + Ala186Gln + Ala202Gln Asn 96Asp + SerlOOGlú + Gly105Asp + Val204Thr + Thr215Pro Asn162Asp + Gly165Asp + Thr212Gln + Thr215Ser + Leu216Cys Ser155Asp + Gly165Ser + Ser187Glu + Tyt205His + Thr212Gly SerlOOGlú + Gly126Glu + Ala186Pro + Tyr205Asn + Tyr213Gln Gly 62Pro + Ser1O4Glu + Ser131Asp + Thr212Gln + Tyr213Thr Gly203Asp + Tyr205Asn + Asn211Gln + Thr212Gly + Ala214Asp lle106Cys + Asn154Glu + Ala186Glu + Gly203Ser + Leu216Ala Thr 58Pro + Asn 61Asp + Val 94Glu + Asn 96Asp + Gly165Pro Leu 95Glu + Ser 97Glu + Ser1O2Glu + Thr161Ser + Tyr205Leu Thr 58Gly + Ala128Pro + Gly156Asp + Thr161Asp + Gly203Asn Gly 60Ser + Gly126Pro + Thr161Glu + Ser190Glu + Thr212Gly

107

Gly 60Ser + Ser102Glu + Gly105Asp + Sed 31 Glu + Gly203Asn Asn154Gln + Ala186Ser + Tyr213Glu + Leu216Glu + Thr219Pro Gly101Asp + lle106Cys + Gly126Asp + Met198Gln + Thr219Pro Leu 95Gln + Asn154Asp + Ser190Asp + Thr212Gly + Asn217Glu Thr 58Gln + Asn 61GIu + SerlOOAsp + Tyr205Ala + Thr215Gly Asn 61Glu + Gly 99Gln + SerlOOGIu + Tyr103Met + Leu125Ser Ala128Ser + Gly130Ser + Gly159Asp + Thr163Glu + Tyr205Cys

Asp 59Glu + Gly 99Asp + Tyr103lle + lle164Thr + Thr215Ser Leu 95lle + Ser102Asp + Ser131Asp + lle164Val + Leu216lle Asn 96Gln + Thr212Pro + Ala214Asp + Leu216Glu + Thr219Glu lle106Glu + Ser131Asp + Ala202Gly + Tyr205Asn + Thr215Ser lle106Glu + Gly130Ser + Ser131 Asp + Phe188Ala + Tyr205Pro Thr 65Gln + Asn154Asp + Thr215Glu + Leu216His + Asri217Glu Asn 61 Gin + Gly 99Gln + Asn154Glu + Ser158Asp + Ser187Glu Gly101Ser + Gly126Asn + Thr212Glu + Thr215Asp + Leu216Gln Asp 59Glu + Thr 65Pro + Ser 98Asp + Tyr103Pro + Leu125lle Gly153Ser + Ser155Asp + Gly165Asp + Ser187Asp + Asn217Ser SerlOOAsp + Ser102Glu + Gly130Glu + Gly156Pro + Tyr205lle Gly105Ser + Gly153Glu + Thr215Asn + Leu216Asp + Asn217Glu Thr 58Asp + Asn 96Glu + Ala186Gly + Gly203Pro + Thr219Gly Asn154Asp + Ser160Asp + Gly165Ser + Ser190Asp + Ala202Ser Asp 59Glu + Ser 98Glu + Tyr103Asn + Thr132Ser + Pro209Glu Ala128Asp + Asn154Asp + Tyr166Ala + Pro200Gly + Tyr205Met Gly101Gln + Asn157Gln + Gly203Asp + Thr215Gly + Thr219Asp Asn 61 Gin + Gly126Asp + Asn162Glu + Ser190Asp + Thr215Gly Thr 58Gln + Asp 59Glu + Leu 95Gly + Gly203Pro + Asn211Glu lle106Asn + Leu125Val + Ser129Glu + Thr163Asp + Ala214Gly Gly126Gln + Gly127Asp + Ala128Ser + Ser155Asp + Ser158Glu Ser190Glu + Ala202Glu + Thr212Asn + Thr215Gly + Asn217Asp Ser155Glu + Gly156Glu + Ala202Asp + Thr215Gly + Thr219Gln Ser160Glu + Ser190Asp + Gly203Gln + Tyr205Asn + Thr212Asn Gly156Asn + Tyr166Ala + Gly203Glu + Thr212Glu + Leu216Asp Gly 99Gln + Ser102Glu + G»y126Asp + Asn154Glu + Tyr205Asn Thr 65Pro + Glv127Glu + Ser131Glu * Ser155Asp + Tyr205Cys Asn 96Gln + Thr161Gly + Ser19OGIu + Thr210Glu + Asn211Asp Gly130Asn + Ser187Glu + Pro209Gln + Ala214Glu + Thr215Glu Gly101Glu + lle106Met + Thr210Ser + Ala214Asp + Thr215Glu Ser104Asp + Thr210Gly + Thr212Gln + Ala214Glu + Thr215Glu Asn 96Gln + Ser158Asp + Gly159Asp + Thr163Asn + Leu216Glu Asn 96Gln + Ser158Glu + Gly203Pro + Thr215Asp + Leu216Asp Gly127Asn + Gly130Gln + Ser160Glu + Thr215Asp + Leu216Asp Gly 60Asn + Asn 61 Glu + Gly 62Glu + Asn157Asp + Tyr205Ser Gly105Asn + Ala128Glu + Ser129Glu + Gly153Pro + Ala202Asp Thr 58Asp + Tyr103Met +'Gly153Ser + Asn157Glu + Ser158Glu Gly 64Ser + Gly 99Asn + Ser129Asp + Gly130Asp + Asn157Asp Asn154Gln + Ala202Asp + Asn211Glu + Thr212Asp + Leu216lle Gly101Asp + Ser102Glu + Gly159Glu + lle164Cys + Asn217Gln

108

Gly 62Pro + Gly101Asp + Ser102Glu + Ser190Glu + Thr215Asn Thr 58Glu + Asp 59Glu + Gly130Glu + Ala214Gln + Leu216Val Asn 61 Ser + Ser102Glu + Ser160Glu + Thr161Asp + Leu216Val Sar102Asp + Sar160Glu + Thr161Asp + Tyr205Sar + Asn211Gln Gly 62Pro + Ser104Glu + Gly105Asp + Leu125Met + Ala214Asp Val 94Cys + Gly105Asp + Asn162Glu + Thr163Glu + Leu216lle Ser 97Asp + Ser 98Asp + Ala202Asp + Tyr205His + Leu216Thr Gly 62Glu + Asn 96Glu + Gly105Asp + Tyr166Ser + Pro209Gly Val 94Asp + Ala128Asp + Thr132Asn + Gly165Asp + Thr212Ser Ser102Glu + Gly105Glu + Asn154Asp + Gly156Asn + Leu216Gly Tyr103Glu + Gly130Gln + lle164Leu + Thr210Glu + Thr212Asp Asp 59Glu + Asn157Ser + Tyr166Met + Gly203Asp + Asn217Asp Gly 60Gln + Gly130Asn + Ser155Glu + Thr215Glu + Asn217Asp Val 94Thr + Gly 99Asp + Gly153Pro + Tyr205Glu + Ala214Glu Gly101Asn + Ser131Asp + Asn154Gln + Gly203Asp + Thr215Glu Gly101Pro + Gly127Pro + Asn157Glu + Gly203Asp + Thr215Asp Thr 65Gln + Gly153Glu + Gly165Glu + Gly203Asp + Leu216Cys Ser 98Asp + SerlOOGIu + Ala128Gly + Gly159Asp + Gly165Pro Ser 98Asp + SerlOOAsp + Ser187Asp + Gly203Asn + Thr212Ser Ser 98Glu + SerlOOGIu + Ser155Asp + Asn162Ser + Thr210Asn

Asn 96Asp + SerlOOAsp + Gly127Asn + Tyr205Cys + Thr219Asp

Asn 96Asp + SerlOOGIu + Gly159Asp + Tyr205Gln + AJa214Pro Leu 95Gln + Gly 101 Pro + Ser102Asp + Gly153Asp + Tyr166Glu Asn 96Ser + Gly159Asp + Ser190Asp + Tyr205lle + Ala214Gly Thr 65Glu + Ser 97Glu ♦ Gly101Glu + Ala186Pro + Pro200Gly Gly 99Asn + Gly126Asp + Ser158Glu + Ser160Glu + Tyr205Gln Gly 62Glu + Leu 95Glu + lle106Leu + Thr212Glu + Ala214Ser Asn 61 Ser + Gly 99Pro + Ser104Asp + Gly203Asp + Tyr205Asp Gly101Ser + Tyr103AJa + Gly203Gln + Tyr205Asp + Gly218Asp Ser160Asp + Asn162Asp + Phe188Pro + lhr212Glu + Leu216Ser lle106Ser + Ser160Glu + Asn162Glu + Gly203Asp + Leu216Val Val 94Asp + Gly126Asp + Gly130Pro + Thr212Ser + Leu216Asn Thr 65Pro + Ser155Asp + Asn157Asp + Ala186Thr + Leu216Asp SerlOOGIu + Gly105Pro + Ala128Gly + Asn157Asp + Thr163Glu Gly126Glu + Ala166Asp + Ala202Asp + Gly203Gln + Leu216Asn Thr132Gly + Ser160Asp + Ala186Glu + Ala202Asp + Tyr205Gln Tyr103Pro + Ser129Glu + Ala186Glu + Ala202Glu + Thr215Asn Leu125Pro + Ser129Asp + Gly153Glu + Asn162Ser + Leu216lle Asp 59Glu + Thr 65Glu + Gly105Ser + Ser131Asp + Tyr213Ser Gly126Asp + Gly156Glu + Ser158Glu + He164Met + Tyr205Met Asn 96Glu + Tyr103Gly + Leu125Glu + Asn154Glu + Thr163Gln Thr 58Glu + Ala128Ser + Gly156Asp + Thr163Asp + Thr210Gln Gly 99Asp + Leu125Thr + Gly156Glu + Ser158Asp + Gly203Pro Gly101Glu + Gly156Asp + Ser158Asp + Ala202Gln + Pro209Asn Ser131Glu + Gly156Asp + Ser158Glu + Phe188Leu + Gly203Asn Gly 62Ser + Ser129Glu + Asn157Gln + Gly165Asp + Thr215Glu Ser 97Asp + Ser129Glu + Gly165Asp + Thr215Asn + Asn217Ser

109

Ala186Asp + Tyr205Cys + Thr212Asp + Ala214Asp + Thr215Ser

Val 94His + Ser158Glu + Thr212Asp + Ala214Glu + Thr215Gln Leu125Glu + Gly159Pro + Ala186His + Thr212Asp + Ala214Glu Asn 61Asp + Tyr103Gln + Gly105Gln + Leu125Asp + Pro209Asp Gly 99Gln + Gly159Ser + Pro209Asp + Thr2l5Glu + Leu216Ala SerlOOAsp + Ser102Asp + Gly105Asn + Gly203Asp + Asn211Gln Ser 97Glu + SerlOOGIu + Gly165Glu + Phe188Val + Leu216Asn Asn 96Ser + Leu125Asp + Ser129Glu + Tyr205Gln + Thr215Pro Asn 96Glu + Asn157Asp + Gly165Gln + Ser187Asp + Tyr205Val Leu 95Asp + Ser102Asp + Gly203Glu + Val2O4Ser + Leu216Ser Gly 62Glu + Thr 65Gln + Asn157Asp + Asn162Asp + Thr215Gln Ser131Glu + Gly165Asp + Leu216Cys + Asn217Gln + Thr219Asp Val 94Asp + Ser187Asp + Ser190Glu + Tyr205Asn + Thr215Pro Asp 59Glu + Asn 96Gln + Ser187Glu + Ser190Asp + Thr215Asn Ser158Asp + Asn162Asp + Gly203Ser + Leu216Glu + Asn217Ser Gly126Pro + Ser158Asp + Asn162Asp + Thr212Asp + Leu216Thr Ser102Asp + Ser158Asp + Thr163Asp + Met198Gly + Thr207Pro Gly 60Glu + Leu125Val + Ser155Glu + Gly165Glu + Val204Asn Ser131Glu + Asn154Glu + Ser187Glu + Tyr213Val + Asn217Gln Gly 62Asp + Ala128His + Asn154Glu + Ser187Glu + Gly203Ser Asn 61 Gin + Gly 62Pro + Gly105Asp + Gly203Glu + Gly218Asp Ser102Asp + Gly203Glu + Ala214Gly + Thr215Pro + Gly218Asp Asp 59Glu + Asn157Asp + Thr163Pro + Pro209Gly + Thr210Asp Leu125Glu + Asn162Ser + Gly165Glu + Thr212Asp + Thr215Gln lle106Asn + Ser155Glu + Tyr166Val + Ser187Asp + Thr212Asp Gly105Pro + Ser155Glu + Ser187Asp + Tyr205Pro + Thr215Asp Asn 96Glu + Ser155Glu + Ser158Asp + Thr161Pro + Thr215Pro Thr 58Asp + Thr 65Asp + Tyr103Val + Thr132Asp + Phe188Gly Asp 59Glu + Asn 96Glu + Ser190Glu + Gly203Ser + Ala214Ser Ser155Glu + lle164Ser + Ala202Asp + Tyr205Asp + Leu216Pro Tyr103Ala + Ser104Asp + Ser131Asp + Ser160Asp + Tyr213Leu Thr 58Glu + Asn 61 Asp + Ala186Gly ♦ Ser187Asp + Tyr205Ala Asn 96Glu + Ser102Glu + Gly153Asp + Gly203Pro + Asn217Gln Asn 96Glu + Ser102Asp + Gly105Pro + Asn162Glu + Tyr213Val Ser129Asp + Gly153Asn + Gly203Glu + Ala214Glu + Thr215Gln SerlOOGIu + Gly127Glu + Gly203Glu + Tyr205Ala + Tyr213Thr Ser158Asp + Ser190Asp + Gly203Asp + Thr212Pro + Thr2l5Gly Leu 95lle + Thr132Gly + Ser187Asp + Tyr213Asp + Leu216Glu Gly 60Glu + Gly 62Pro + Ala128Glu + Ser155Glu + A!a202Ser Thr 58Asp + Ser 97Asp + Gly153Ser + Gly159Glu + Ala214Thr Asn 61Asp + SerlOOGIu + Gly126Asn + Ser129Asp + Thr219Ser Asp 59Glu + Leu 95Asp + Phe188Glu + Pro209Ser + Gly218Ser Tyr103Glu + Ser187Glu + Thr212Ser + Thr215Gln + Gly218Asp Ser104Glu + Ser190Asp + Tyr205Asn + Tyr208Val + Gly218Asp Ala128Asp + Ser131Glu + Thr161Gln + Tyr205Glu + Leu216Met Ser102Asp + Ala128Glu + lle164Gly + Gly203Asn + Thr212Ser Gly 62Asp + Gly105Glu + Tyr208Ala + Thr210Ser + Thr212Asp

110

Ser 97Glu + Ser102Glu + lle106Ser + Asn157Ser + Leu216Gly Gly 62Asn + Leu 95Mel + Ser 97Asp + Ser102Asp + Asn217Ser Ser102Glu + Leu125Cys + Ser131Asp + Ala202Ser + Asn217Glu Ser102Asp + Ser131Glu + Thr163Asp + Thr207Gly + Thr215Asn Ser 97Asp + lle106Thr + Ala186Asp + Gly203Asp + Thr215Gly Thr 58Asp + Gly127Asp + Ala128Thr + Ser155Asp + Gly203Ser Val 94Gly + Gly127Asp + Ser155Asp + Gly156Gln + Tyr205Glu lle106Glu + Gly126Asp + Gly127Asn + Gly156Glu + Ala202Asn Ser 97Asp + Gly203Pro + Asn211Ser + Thr215Asp + Gly218Glu Gly 99Asp + Ser104Asp + lle106Val + Thr132Asp + Thr215Asn Gly 62Glu + SerlOOGIu + Gly127Pro + Tyr205lle + Thr212Gln Gly 99Glu + Gly126Asp + Ala186Glu + Gly203Ser + Asn217Ser Thr132Asp + Tyr205Glu + Pro209Gln + Thr212Glu + Asn217Ser Ser 97 Asp + Gly127Gln + Ala186Asn + Thr212Glu + Thr215Asp Ser102Asp + Asn154Gln + Thr212Asp + Thr215Asp + Leu216Gly Leu125Gln + Ser129Asp + Asn162Gln + Thr212Glu + Thr215Asp Asp 59Glu + Ser 98Glu + Leu125Gly + Ala128Asn + Ser129Asp Asp 59Glu + Ser 98Asp + Gly156Asn + Ala202Asp + Gly218Asn Asn 61 Ser + Asn157Glu + Gly203Asp + Tyr205His + Thr219Asp lle106Asp + Gly130Asp + Tyr166lle + Ala186Ser + Thr212Asp Asp 59Glu + Gly156Asp + Thr161Asn + Leu216Ala + Gly218Asp Thr 58Asp + Asn 96Glu + Ser131Asp + Phe188Val + Thr215Gly Leu 95Val + Ser155Glu + Tyr166AJa + Ala186Glu Thr210Asp Ser 98Asp + Leu125Cys + Ala128Asp + Thr161Gly + Asn162Glu Asn 96Gln + lle106Ala + Gly156Glu + Ser160Asp + Thr210Glu Asp 59Glu + Tyr166Glu + Tyr205Asn + Thr210Gly + Asn211Glu Asp 59Glu + Gly153Glu + Pro209Ser + Asn211Asp + Thr212Pro Asp 59Glu + Tyr103Gly + Gly153Glu + Ser187Glu + Asn211Gln Asp 59Glu + Thr163Ser + Ser187Glu + Val2O4Thr + Asn217Glu Ser1O4Glu + lle106AJa + Gly156Asp + Gly165Asp + Tyr205Asn Gly126Glu + Ser131Asp + Asn154Ser + Tyr205Ser + Thr215Asp Asp 59Glu + Gly101Gln + Thr212Glu + Ala214Pro + Leu216Asp Asn154Ser + He164Cys + Thr212Asn + Ala214Asp + Gly218Glu Thr 65Glu + He106Asp + Gly127Asn + Thr215Asp + Leu216His Gly 60Gln + Gly 99Asp + Gly127Glu + Tyr205Glu + Thr215Asn Thr 58Gln + Gly 60Glu + lle106Val + Tyr205Glu + Asn211Glu Gly130Pro + Gly159Glu + Phe188Leu + Ser190Glu + Thr212Glu Asn 61Glu + Gly127Asp + Ser190Glu + Tyr205Ala + Leu216Ser Ser187Glu + Pro209Asp + Thr212Asn + Ala214Ser + Thr215Asp Ser155Glu + Tyr166Glu + Gly203Giu + Val204Pro + Thr215Ser Ser 98Asp + Ser102Glu + AJa202Ser + Thr215Glu + Leu216Gln Val 94Asn + Gly101Asn + Leu125Glu + Ser129Glu + Thr212Asp Ser129Asp + Ser155Asp + Ala202His + Gly203Asn + Asn211Ser Asn 96Asp + Tyr103His ♦ Gly105Asn + Ala202Glu + AJa214Glu Leu 95His + Gly 99Gln + Ser190Glu + Ala202Asp + Thr210Asn Gly101Asp + Ala128Glu + Thr132Glu + Gly156Asn + Tyr166lle Gly105Asp + Leu125Asp + Ala202Pro + Gly203Glu + Leu216Gln

111

Gly105Asp + Leu125Glu + Gly203Glu + Thr212Gly + Leu216Cys Gly 62Glu + Val 94Ala + Ser129Asp + Tyr205Asp + Thr212Ser Asn 61Asp + Gly101Glu + Tyr205Glu + Thr215Pro + Leu216His

Ser104Asp + Lau125Glu + Ser190Glu + Asn21lGln + Leu216Asn Gly105Asn + Gly127Asp + Ala128Gly + Ser158Asp + Thr219Glu Ser 97 Asp + Ser155Glu + Ser160Asp + Asn211Gln + Thr215Ser Asp 59Glu + Gly 64Gln + Gly130Glu + Gly153Glu + Tyr205Asn Asn157Asp + Tyr205Leu + Thr212Glu + Thr215Gly + Leu216Glu Thr 58Glu + Gly101Glu + Gly105Pro + Gly130Ser + Tyr166Asp Ser 97Glu + Gly159Asp + Tyr166Ala Ser187Glu + Leu216Val Gly101Asp + Ser131Glu + Thr212Gln + Thr215Asp + Leu216lle Gly153Asn + Asn157Asp + Tyr213Leu + Asn217Ser + Thr219Asp Gly153Asp + Ser158Glu + Tyr205Gly + Leu216Val + Gly218Ser Gly 99Ser + Ser187Asp + Gly203Glu + Pro209Asp + Asn211Gln Leu 95Ala + Ser102Asp + Ser187Glu + Gly203Asp + Thr219Gln Gly 62Asp + Ala128Thr + Ser187Glu + Gly203Glu + Asn211 Ser Gly101Asp ♦ Ala128Thr + Asn154Gln + Phe188Asp + Leu216Glu

Tabulka 36 více smyček- varianty se šesti mutacemi

Tyr103Cys + Thr215Pro	Gly126Gln +	Gly156Glu	+	Ala202Gln	+	Thr212Gly	+
Asn 61 Gin + Tyr205Pro	Gly101Asp	lle106Ala	+	Asn162Ser	+	Gly165Gln	+
Gly126Pro + Leu216Ala	Ala128His +	Ser187Glu	+	Gly203Ser	+	Tyr208Asn	+
Thr 65Ser + Gly218Asp	Gly126Gln +	Gly203Asn	+	Thr215Gln	+	Leu216Ala	+
lle106Ala + Gly165Asp + Leu216Thr	Tyr166Thr	+	Thr207Pro	+	Asn211Gln	+
Ser158Glu + Tyr205Asn	Thr161Gly +	Ala199Gly	+	Ala202Gln	+	Gly203Gln	+
Thr 58Asn + Thr210Pro	Leu 95Asn *	Gly153Pro	+	Tyr205Ala	+	Pro209Glu	+
Gly126Glu + Tyr205Pro	Ala128Gly +	Asn157Gln	+	Gly165Asn	+	Gly203Asn	+
Gly 64Ser + Thr212Gly	Asn 96Gln +	Gly126Asn	+	Gly127Ser	+	Asn211Ser	+
Gly126Asn + Thr219Gln	Ser158Asp +	Gly203Pro	+	Tyr205Met	+	Thr215Gly	+
Leu125Val + Leu216Llis	Gly156Asp +	Tyr205Ser	+	Thr212Gln	+	Thr215Pro	+
Gly105Asn + Gly218Asn	Gly126Ser +	Ser160Glu	+	Thr161Asn	+	Tyr205Val	+
Gly105Ser + Thr215Pro	Ala128Thr +	Thr132Pro	+	Ser160Glu	+	Tyr213Asn	+

112

Asp 59Glu + Gly105Pro + Asn157Gln + Ala186Asn + Tyr213His + Leu216His

Gly 99Gln + Gly126Gln + Asn154Asp + Gly159Ser + Tyr205Ala +

Thr212Gly

Thr 58Gln + Ser104Asp + Gly105Ser + Gly159Pro + Thr163Gly +

Tyr205Pro

Leu125Met + Ser131Glu + Phe188Gln + Gly201Ser + Ala202Gly +

Thr210Gly

Gly 60Asn + Gly 62Asn + Ser104Asp + Gly126Pro + Gly127Gln +

Thr210Asn

Gly101Gln + Asn157Ser + Tyr166Pro + Ala202Sar + Asn211Gln +

Thr215Gly

Ser 97Asp + Gly130Pro + Thr163Pro + Val2O4Thr + Tyr205Cys +

Ala214Pro

Tyr103AJa + Ala128His + Gly153Gln + Asn154Ser + Ser187Glu +

Gly203Ser

Ala128His + Tyr166Pro + Thr207Ser + Thr212Pro + Thr215Pro +

Gly218Glu

Asn157Gln + Ser187Asp + Phe188Ala + Gly203Pro + Tyr205Ser +

Thr212Ser

Val 94Pro + Tyr103Gly + Gly105Gln + Gly126Ser + Ala214Asp +

Thr215Gly

Leu 95Asn + Gly203Pro + Tyr205Met + Thr212Asn + Thr215Gln +

Leu216His

Leu 95His + Tyr166Cys + Ala202Gly + Thr207Gln + Pro209Gly +

Leu216His

Gly 62Ser + Asn 96Gln + Thr132Gln + Gly159Ser + Gly165Pro +

Thr219Glu

Thr132Gln + Asn157Ser + Tyr166Val + Ala199His + Tyr208Gly +

Thr215Asp

Gly127Ser + Gly165Ser + Gly203Glu + Tyr205lle + Tyr208Pro +

Thr215Ser

Gly156Glu + Pro209Asn + Asn211Ser + Thr212Ser + Tyr213lle +

Leu216His

Tyr103Gln + Gly126Gln + Ala128Gln + Gly156Pro + Tyr166Asn +

Ala202Thr

Thr 58Ser + Tyr103Gly + Leu125Gly + Thr161Ser + Asn162Gln +

Tyr205Gly

Gly 60Ser + Gly101Gln + Gly127Asp + Gly203Pro + Pro209Gly +

Thr215Gln

Gly105Gln + Leu125Asn + Ser187Glu + Pro200Gly + Ala214Ser +

Leu216Thr

Asn 61 Glu + Leu 95lle + Asn 96Ser + Tyr166Asn + Thr210Ser +

Gly218Ser

Gly 60Asn + Ser104Asp + Gly105Asn + Thr161Ser + Thr163Ser +

Tyr205Ala

Val 94Gly + Asn162Asp + Gly165Asn + Asn211Gln + Leu216lle +

113

Gly218Ser

Ser 97Glu + Leu216Met	Tyr103Met	+	Gly153Pro	+	Pro200Ser	+	Gly203Ser	+
Thr 65Gln + Leu216Ser	Tyr103Leu	+	Ala128Asp	+	lle164His	+	Tyr205Thr	+
Gly127Glu + Gly218Pro	Phe188Gln	+	Gly203Gln	+	Pro209Asn	+	Leu216Met	+
Gly 62Glu + Thr212Asn	Gly156Asn	+	Asn162Gln	+	Gly201Ser	+	Thr210Pro	+
Gly 60Pro + Gly218Gln	Tyr103Asn	+	Gly127Asn	+	Thr161Gly	+	Thr215Asp	+
Gly 60Asn + Pro209Gln	Gly159Gln	+	Ser160Glu	+	Thr163Pro	+	Ala186Gly	+
Ala202Thr + Thr215Gln	Gly203Ser	+	Tyr205Ala	+	Pro209Glu	+	Thr210Gln	+
Val 94Asn + Leu216Cys	lle106Asp	+	Gly126Pro	+	Tyr205Cys	+	Thr215Ser	+
Val 94Gln + Thr215Ser	G!y105Pro	+	Gly159Asp	+	Ala202Ser	+	Thr210Ser	+
Asn 61 Ser + Ala214Gln	Asn154 Asp	i 4	r Ala186Thr	+	Pro209Ser	+	Tyr213lle	+
Thr 58Pro + Thr219Asn	Gly127Ser	4-	Gly159Ser	+	Ala186Glu	+	Thr215Pro	+
Ala128Gly + Thr219Gln	Ser129Glu	+	Thr132Gln	+	Gly165Gln	+	Met198Thr	+
Val 94Gln + Thr215Asn	Asn157Asp	+	Tyr166Cys	+	Tyr205Ser	+	Thr207Pro	+
Asn 96Gln + Leu216Met	Thr132Glu	+	lle164Ser	+	Thr210Pro	+	Thr212Gln	+
Gly101Asn + Thr210Gln	Tyr103lle	+	Gly159Pro	+	Asn162Ser	+	Ala202Gly	+
Gly 60Asn + Leu216Met	Val 94Gln	+	Ser 97Glu	+	Gly203Gln	+	Tyr205Pro	+
Tyr103Gln + Thr212Ser	Gly130Pro	+	Ser155Glu	+	Gly159Asn	+	Tyr205Pro	+
Asn157Gln + Thr219Ser	Gly203Asp	+	Pro209Ser	+	Thr215Ser	+	Leu216Cys	+
Gly101Pro + Thr219Pro	lle106Val	+	Gly126Glu	+	Ala128His	+	Asn157Ser	+
Gly 64Pro + Ala214Gln	Gly203Ser		Tyr205Pro	+	Pro209Asp	+	Thr210Asp	+
Thr 65Gln + Thr219Asp	Gly203Pro	+	Pro209Gln	+	Thr212Pro	+	Gly218Glu	+
Asn 61Ser + Phe188Ser	Ser104Asp	+	Gly105Asp	+	Asn162Gln	+	Ala186Ser	+
Tyr103Asp +	Ser104Asp	4-	Gly153Ser	+	Asn162Ser	+	Ala202Gly	+

Tyr208Gln

114

Asn154Asp + Ser155Glu + Asn162Ser + Gly203Asn + Pro209Gly + Leu216Asn

Ser 97Glu + Ser 98Glu + Asn157Gln + Ala202Asn + Tyr205Asn + Leu216Met

Thr 65Gln + Gly 99Ser + Thr132Ser + Asn154Asp + Ser155Asp + Ser190Asp

Asn 96Asp + Gly 99Asp + Gly165Pro + Gly203Asn + Thr215Gln + Leu216Thr

Asp 59Glu + Asn 61 Asp + Val 94Asn + Gly101Ser + Asn217Gln + Thr219Ser

Gly101Asn + lle106Gln + Gly130Gln + Gly159Asp + Thr161Asp + Phe188Ser

Ser 98Glu + Gly 99Ser + SerlOOGIu + Tyr103Ala + Gly203Ser + Asn217Gln

Thr 65Gly + Val 94Met + Asn157Asp + Ser190Glu + Leu216Ser + Thr219Ser

Gly130Asn + Ser160Glu + Asn162Glu + Ala186Asn + Gly203Pro + Tyr205Gln

Asn 61 Glu + Leu 95Pro + Ser 98Glu + Leu125Cys + Phe188Cys + Gly203Pro

Ser129Asp + Ser131Asp + Gly203Pro + Tyr205Asn + Thr212Ser + Thr215Gln

Gly1O1Asp + Tyr103Asp + Leu125Thr + Thr161Asn + Thr212Gly + Leu216Asn

Gly105Pro + Ser129Glu + Thr132Asn + Gly165Glu + Ala202Asn + Asn211Gln

Ala186Pro + Phe188Met + Ala202Glu + Gly203Ser + Tyr213Val + Leu216Glu lle106His + Gly130Ser + Tyr205Ser + Thr210Gly + Asn211Asp + Tyr213Asp

Thr 65Asn + Gly203Gln + Pro209Gln + Thr212Asp + Tyr213Glu + Thr215Asp

Gly 62Asn + Asn 96Ser + Tyr103His + Asn162Glu + Ser190Asp + Ala214Asn lle106Asn + Gly156Glu + Gly159Asn + Phe188Asp + Tyr208Gln + Gly218Asp

Gly 60Pro + Gly 62Gln + Ala202Asp + Thr215Gly + Leu216Thr + Thr219Glu

Gly153Asp + Gly156Pro + Ser187Glu + Phe188Asp + Gly203Gln + Ala214His

Ala186Glu + Ala202Glu + Tyr205Ala + Tyr213Val + Thr215Asp + Asn217Glu

Asp 59Glu + Asn157Gln + Ala186Thr + Gly203Gln + Pro209Glu + Thr212Asp

Asp 59Glu + Asn 96Glu + Gly 99Glu + Gly1O1Glu + Tyr103His + Tyr205Ser

Gly159Ser + Ser160Glu + Thr163Glu + lle164His + Ala186Ser +

115

Tyr205Ser

Thr 58Asp + Gly 62Asp + Thr132Ser + Asn154Gln + Gly203Pro + Tyr205His

Asn154Ser + Ser158Asp + Ser190Glu + Thr212Gly + Thr215Gln + Gly218Pro

Thr 58Asp + Asn 96Ser + Ser 97Asp + ,le106Pro + Thr132Gly + Thr212Pro

Ser155Asp + Ser160Asp + Asn162Glu + Phe188Gly + Thr210Gly + Thr212Ser

Asp 59Glu + Gly 99Asp + SerlOOAsp + Tyr103lle + lle164Thr + Thr215Ser

Gly127Gln + Ser187Glu + Gly2O3Gln + Thr212Gln + Thr215Asn + Gly218Glu

Gly 60Glu + Ser 97Glu + Gly 99Asn + Tyr166Asn + Thr210Glu + Ala214His

Leu 95Ser + Tyr103Met + Leu125Glu + Gly165Glu + Ser190Glu + Gly218Pro

Asn 96Asp + Ser 97Glu + SerlOOAsp + Ser1O4Glu + Thr132Asn + Leu216His

Leu 95lle + Ser1O4Gki + Ala128Glu + Ser129Glu + Ser131Asp + Asn157Gln

Asp 59Glu + Asn 61Asp + SerlOOGIu + Gly2O3Asn + Tyr205lle + Thr212Gln

Thr 58Asn + Thr132Ser + Asn157Ser + Thr163Glu + Phe188Glu + Tyr205Pro

Ser129Glu + Asn154Glu + Gly156Asn + Asn162Ser + Gly165Asp + Leu216Cys

Gly 60Glu + Gly153Asn + Gly159Ser + Tyr205Asp + Ala214Asp + Thr215Glu ,

Val 94Glu + Ser102Asp * Gly1O5Asp + Ala128Asp + Thr215Gly + Leu216Gly

Gly126Asp + Gly156Glu + lle164Met + Phe188Leu + Ser19OGIu + Tyr205Ala

Gly 62Gln + Ser155Asp + Ser190Asp + Leu216Glu + Asn217Ser + Tbr219Glu

Val 94Cys + Gly203Asp + Val204Asn + Tyr205lle + Thr212Glu + Thr215Asp

Asn 61 Ser + Val 94Gln + Leu 95Gln + Gly203Asp + Thr212Glu + Thr215Asp

Asn 61 Gin + Gly 99Gln + Gly153Gln + Asn154Glu + Ser158Asp + Ser187Glu

Gly 99Glu + Gly101Gln + Gly126Asp + Phe188Met + Tyr2O5Ser + Thr212Pro

Gly1O1Asn + Tyr205Gly + Thr212Asp + Tyr213Met + Thr215Asp + Leu216lle

Gly130Pro + Asn 15-1 Glu + Ser160Glu + Ser187Asp + Ser190Glu + Tyr205Leu

116

Leu125Pro + Asnl54Glu + Thr161Ser + Ala202Glu + Gly203Gln + Leu216Glu

Gly101Asp + lle106Ala + Gly153Asp + Ser190Asp + Leu216Asn +

Thr219Asp

Gly 60Gln + Tyr103Gly + Tyr205Leu +. Thr212Glu + Thr215Glu +

As n217 Asp

Gly 62Gln + Asn154Asp + Ser155Asp + Sar160Asp + Gly165Glu +

Tyr205Met

Gly 62Glu + Asn154Gln + Tyr205Ala + Tyr213Met + Thr215Asp +

Leu216Gln

Asn154Ser + Asn157Asp + Ala202Asp + Gly203Glu + Tyr205Asp +

Thr219Gly

Leu 95Gln + Gly126Glu + Asn154Ser + Gly159Asn + Ser190Asp +

Gly218Asp

Asn 61 Ser + Thr 65Asp + Thr132Asn + Gly203Asp + Tyr205Asp +

Thr215Asn

Asn 61Glu + Leu 95Asp + Ser 97Glu + Thr132Asp + Thr161Pro +

Thr163Ser

Gly126Ser + Ser131Glu + Gly203Glu + Tyr205Ala + Leu216Asp +

Gly218Glu

Gly 60Glu + SerlOOAsp + Gly1O1Asp + lle106His + Gly130Gln +

Ala214His

Gly 62Pro + Gly1O1Asp + Ser102Glu + Gly126Glu + Ser190Glu +

7hr215Asn

Asn 61 Asp + Gly 99Asp + SerlOOGIu + Thr161Glu + Pro209Gln +

Ala214Asn

Thr 58Gln + Asp 59Glu + Leu 95Gly + Gly203Pro + Asn211Glu +

Leu216Gln

Asn 96Gln + Gly156Asp + Gly165Glu + Tyr205Asn + Thr215Asn +

Gly218Asn

Gly 60Pro + Ser102Glu + Tyr1O3Glu + Thr163Glu + Tyr166Asp +

Gly203Ser

Gly127Gln + Gly153Gln + Asn157Glu + Ser160Glu + Thr163Glu +

Asn217Glu

Asn 61 Gin + Ser102Asp + Gly126Asp + Ser155Glu + Ser190Asp +

Ala202Ser

Leu125Pro + Gly156Asp + Phe188Glu + Tyr205Cys + Thr212Gly +

Leu216Asp

Thr 58Gly + Asn 61Glu + Gly126Ser*+ Thr212Pro + Leu216Asp +

Gly218Glu

Val 94Ser + Gly156Asp + Thr161Ser + Thr212Gly + Thr215Asp +

Leu216Glu

Val 94Gly + Gly1O1Glu + Gly159Asp + Ser16ÓAsp + Ala186Pro +

Leu216Pro

Asn 61Asp + Gly 62Glu + Leu125Gln + Asn154Asp + Gly159Asn +

Thr212Gln

Asn 96Gln + Gly1O1Asp + Ser102Glu + Gly159Glu + lle164Cys +

117

Asn217Gln

Thr 58Asp + Asp 59Glu + Ser190Glu + Gly203Gln + Tyr205Cys + Pro209Ser

Gly 62Pro + Gly105Glu + lle106Glu + Asn154Asp + Leu216Gln + Thr219Asn

Val 94Ser + Ala128Asn + Ala202Glu + Gly203Asp + Tyr205Cys + Thr212Asp

Asn 61 Glu + Tyr103Glu + Ser104Glu + Gly203Asn + Thr212Asn + Thr215Pro

Thr 65Ser + Ser 97Asp + Ser 98Glu + Ser104Glu + Thr163Gln + Gly203Pro

Gly126Asp + Ala128Pro + Gly156Asp + Ser160Glu + Thr161Asp + Gly203Asn

Thr 65Gly + SerlOOGIu + Gly101Asn + Leu125Glu + Ser129Glu + Thr215Pro

Asn 61 Glu + Gly159Ser + Ala186Gly + Pro209Asp + Asn211Gln + Thr215Glu

Val 94Ser + SerlOOGIu + Gly1O1Gln + Gly126Asp + Ser131Asp + Gly203Ser

Asn 61Asp + Thr 65Gln + Ser 97Asp + Gly203Glu + Tyr205Ala + Leu216Val

Gly156Ser + Thr215Asp	Ser158Glu	+	Ala186Ser	+	Tyr205Asp	+	Thr212Asp	+
Asp 59Glu + Leu216Cys	Gly 60Glu	+	Tyr205AJa	+	Tyr213Glu	+	Thr215Glu	+
Thr132Ser + Thr215Asn	Thr163Asp	+	Ser190Glu	+	Tyr205Gly	+	Pro209Asp	4
Gly 62Glu + Leu216Val	Asn 96Glu	+	Ser 98Glu	+	Ser155Asp	4	Tyr166Ala	4
Ser160Asp + Gly218Gln	Tyr205Ala	+	Thr210Glu	+	Thr212Asp	+	Leu216Ser	+
Thr 65Pro + Ser131Glu	Leu 95Glu	+	Gly 99Glu		lle106His	4	Leu125Gly	4
Gly 60Glu + Thr215Glu	Thr 65Gly	+	Gly 99Ser	+	Gly203Glu	4	Tyr213Gln	4
Gly 62Asp + Pro209Asp	Asn 96Gln	+	Gly101Glu	+	Leu125Cys	4	Gly127Ser	4
Ser 98Asp + Thr215Asn	SerlOOAsp	+	Ala202Gln	4	Thr210Glu	4	Thr212Gly	+
Ser 98Glu + As n217 Asp	SerlOOAsp 1	+	Ala128Gln	+	Gly130Gln	4	Thr210Gln	+
Leu 95Pro + Thr215Glu	Gly130Asn	+	Ser155Glu	+	Phe188Glu	4	Tyr205Asn	+
Asp 59Glu + Tyr213Gly	Val 94Glu	+	Ser 98Asp	+	Ser1O4Glu	4	Gly126Ser	4
SerlOOAsp + Leu216His	Ser102Asp	+	Gly127Asn	4	Tyr205Asp	4	Thr215Asp	4

118

Gly127Asp + Leu216Thr	Ala186Gly	+	Ser190Glu	+	Tyr205Val	+	Thr212Gln	+
Leu 95Glu + Leu216Ala	Ser 97Glu	+	Ser102Glu	+	Gly159Asp	+	Tyr205Leu	+
Gly 60Glu + Gly203Asn	Asn 61 Glu	+	Leu125Asp	+	Gly165Glu	+	Phe188His	+
Ser102Glu +	Ser104Asp	+	Ala202Thr	+	Gly203Ser	+	Thr212Glu	+

Ala214Glu

Gly 62Glu + Leu 95Glu + lle106Leu + Tyr166lle + Gly203Ser + Thr212Glu

Asn154Ser + Leu216Asn	Ala202Asn	+ Gly203Asp	+	Tyr205Glu	+	Thr210Glu	+
Asn 61 Glu + Gly203Gln	Ser 98Asp	+ Gly 99Ser	+	Gly101Glu	+	Asn 154 Asp	+
Ser160Asp + Thr215Gln	Asn162Asp	+ Ala202Glu	+	Tyr208Thr	+	Asn211Ser	+
Gly101Asp + Thr212Gln	Ser160Asp	+ Asn162Glu	+	Thr163Ser	+	Tyr205Asn	+
Val 94Asn + Thr215Pro	Ser160Glu	+ Asn162Glu	+	Asn211Gln	+	Thr212Asp	+
Thr 58Asn + Leu216Cys	Ser 97Glu	+ Ser155Asp	+	Asn157Asp	+	Thr212Ser	+
Ser104Glu + Leu216Asp	Leu125Thr	+ Ala186Thr	+	Tyr205Glu	+	Pro209Asn	+
Asp 59Glu + Tyr213Val	Gly 64Gln	+ Ser 97Asp	+	SerlOOAsp	+	Ser160Asp	+
Gly101Pro + Asn217Glu	Gly130Asp	+ Asn154Ser	+	Thr215Glu	+	Leu216His	+
Ala186Asp + Thr215Ser	Gly203Asn	+ Tyr205Cys	+	Thr212Asp	+	Ala214Asp	+
Gly 99Asp + Ala214Glu	lle106Gly	♦· Ala128Asn	+	Asn154Gln	+	Thr212Asp	+
Thr 65G,n + Leu216Asp	Asn 96Ser	+ SerlOOAsp	+	Gly126Pro	+	Ala202Asp	+
Thr 65Ser + Thr215Asp	Ser129Asp	+ Gly153Asn	+	Tyr205Leu	+	Tyr213Asp	+
Asn 61Ser + Thr212Gln	Ser104Asp	+ lle106Glu	+	Ala128Asp	+	Thr163Asp	+
Gly105Glu + Leu216Pro	Ser131Asp	+ Gly156Asn	+	Tyr205Ala	+	Thr215Pro	+
Gly 62Asp + Leu216Asp	SerlOOAsp	+ Ala128Asn	+	Tyr166Ala	+	Gly203Asp	+
Gly 60Asn + Tyr205Ser	Asn 61 Glu	+ Gly 62Asp	+	Ser187Glu	+	Ala202Glu	+
Ser 97Glu + Thr215Asp	SerlOOAsp	+ Leu125Asp	+	Gly203Pro	+	Thr207Gln	+
Asn 96Ser + Thr215Gly	Ser 98Asp	+ Ser102Glu	+	Tyr205Gln	+	Thr212Gln	+

119

Gly 64Ser +	Ser 98Glu	+	SerlOOGIu	+	Ser155Asp	+	Ser187Asp	+
Ala199Gln Ser104Asp +	Leu125His	+	Ser129Asp	+	Ser131Asp	+	Ala202Glu	+
Gly218Asn Ser155Glu +	Thr163Glu	+	Ala202Glu	+	Tyr205Glu	+	Thr207Gly	+
Gly218Ser Asn 61Ser +	Thr132Gln	+	Ser155Glu	+	Gly159Asp	+	Thr212Pro	+
Thr215Gln SerlOOGIu +	Gly127Glu	+	Gly130Asn	+	Gly203Asp	+	Thr215Asp	+
Leu216Thr Asn162Asp +	Phe188His	+	Ser190Asp	+	Pro209Glu	+	Thr212Pro	+
Leu216Pro Ser129Glu +	Gly130Asp	+	Gly153Asn	+	Asn162Ser	+	Asn211Glu	+
Ala214Glu Gly 60Asp +	Thr 65Asn	+	Ser 98Asp	+	Gly159Asn	+	Leu216Asp	+
Gly218G«u Gly 62Pro +	Ser131Glu	+	Gly165Glu	+	Tyr205Ser	+	Leu216Thr	+
Thr219Asp Gly 62Glu +	Asn 96Asp	+	SerlOOAsp	+	Thr132Glu	+	Thr215Pro	+
Gly218Pro Thr 58Asn +	Gly105Gln	+	Ser187Asp	+	Ser190Glu	+	Thr212Glu	+
Leu216Pro Gly127Glu +	Ser129Glu	+	Gly153Ser	+	Asn154Glu	+	Thr212Gly	+
Thr215Glu Thr 65Pro +	Ser102Asp	+	Ser1O4Glu	+	Gly126Asp	+	Asn162Ser	+
Ala202Asp Thr 58Asn +	Gly 64Pro	+	Thr 65Glu	+	Val 94Asp	+	Tyr205Asp	+
Thr212Asp Ser102Glu +	Ser1O4Asp	+	Gly203Pro	+	Thr207Pro	+	Thr212Asp	+
Thr215Asp Gly 62Asp +	Ser1O4Glu	+	Gly159Gln	+	Thr210Asp	+	Thr212Pro	+
Leu216Pro Gly1O5Gln +	Gly153Ser	+	Gly156Asp	+	Ala186Glu	+	Ala214Glu	+
Thr215Pro Thr 58Gln +	Leu 95Pro	+	Ser155Glu	+	Gly165Glu	+	Gly203Pro	+
Leu216Glu Gly 99Glu +	Tyr103Pro	+	Asn154Glu	+	Ser158Glu	+	Ser187Glu	+
Tyr205Pro Asn 96Asp +	Ser 97Asp	+	Leu125Val	+	Tyr166Asp	+	Ser190Glu	+
Leu216Cys Leu 95Thr +	Asn 154 Asp	+	Ser187Asp	+	Phe188Asn	+	Thr212Asp	+
Thr215Gly Ser131Glu +	Asn154Glu	+	Ser187Glu	+	Tyr205Gln	+	Tyr213Val	+
Asn217Gln Gly 62Asp +	Ser129Glu	+	Gly2O3Asp	+	Tyr213Leu	+	Thr215Asp	+
Leu216Val Gly1O1Asp +	Ala128Asp	+	Ser155Asp	+	Ser 187 Asp		Thr207Gly	+

120

Thr212Gln

Ser131Asp + Asn162Ser + Gly203Asp + Thr212Ser + Thr215Asn + Gly218Glu

Gly101Gln + Gly130Pro + Gly159Glu + Ser190Glu + Asn211Glu + Thr212Glu

Tyr103Asn + lle106Asp + Tyr166Ala + Ala186Glu + Leu216Pro + Thr219Glu

Asn 96Glu + IlelOGGIu + Ala128Ser + Ser158Asp + Ser160Asp + Ala214Asn

Thr 58Asp + Val 94His + Ser155Glu + Ser158Asp + Gly159Asn + Tyr213Pro

Asp 59Glu + Val 94Pro + Asn 96Asp + Tyr103Pro + Gly159Glu + Leu216Val

Ser 97Asp + Asn154Glu + Asn157Ser + Thr163Glu + Ala202Ser + Asn217Glu

Leu 95Gly + Gly127Asp + Ser131Glu + Asn154Ser + Thr161Asn + Asn162 Asp

Gly 60Asp + Leu125Gly + Gly126Ser + Gly156Gln + Thr212Asp + Thr215Glu

SerlOOGIu + Ala128Glu + Gly165Pro + Phe188Tyr + Gly203Ser + Tyr205Gly

Leu 95Gly + Asn157Asp + Asn162Ser + Gly165Glu + Pro209Gly + Thr210Gly

Ser104Glu + Ser131Glu + Thr132Gly + Gly156Glu + Phe188Val + Leu216Ser

Gly 99Glu + SerlOOAsp + Ala128Glu + Pro209Gly + Thr212Asn + Ala214Glu

Thr 58Asn + Asn 96Glu + Ser102Asp + Tyr103Met + Ser155Asp + Gly156Gln

Leu 95His + Gly126Glu + Gly165Gln + Ser190Glu + Tyr213Asp + Thr215Asp

Gly105Glu + Leu125Cys + Ser129Glu + Gly165Glu + Thr212Ser + Thr219Glu

Ser 98Asp + Ser102Asp + Gly105Asp + Phe188Leu + Tyr205Glu + Thr212Pro

Leu 95Val + Gly 99Asp + Tyr103Val + Gly105Asp + Tyr205Asp + Thr215Asp

Gly159Glu + Gly165Asp + Thr215Ser + Leu216Cys + Asn217Glu + Thr219Asp

Tyr103lle + Ser129Asp + Gly159Asp + Phe188Glu + Ser190Asp + Ala202Gly

Asp 59Glu + Asn 96Asp + Gly105Glu + Asn162Asp + Thr163Gln + Thr212Gln

Gly 99Pro + Gly101Glu + Ser104Glu + Gly153Glu + Asn162Asp + Thr215Gln

121

Asn 61Glu + Thr215Gly	Gly126Asp	+	Gly159Gln	+	Asn162Glu	+	Ser190Asp	+
Gly 99Asp + Ala199Gly	Ser158Asp	+	Asn162Asp	+	Thr163Asn	+	Ser187Glu	+
Asn154Glu + Gly218Pro	Ser155Glu	+	Gly156Gln	+	Thr210Asp	+	Leu216Asp	+
Gly126Asn + Asn217Asp	Ser129Asp	+	Asn162Glu	+	Ala186Ser	+	Ala202Glu	+
SerlOOAsp + Leu216Glu	Gly1O1Asp	+	Ala128Thr	+	Asn154Gln	+	Phe188Asp	+
Asn 61 Ser + Thr219Pro	lle106Ser	+	Ser158Glu	4-	Ser190Asp	+	Tyr205Asp	4-
Thr 58Ser + Tyr205Pro	Val 94Ala	+	Ser 98Glu	+	Ser158Glu	+	Ser190Glu	+
SerlOOGIu + Tyr213Thr	Gly127Glu	+	Asn154Glu	4-	Gly203Glu	+	Tyr205Ala	+
Gly101Glu + Thr219Asp	Leu125Gly	+	Ser155Asp	+	Tyr205Val	+	Leu216Pro	4-
Ser 97Asp + Thr219Asp	Asn157Gln	+	Gly165Ser	+	Tyr205Ser	+	Leu216Asp	4-
Ser 97Glu + Thr215Ser	Ser 98Asp	+	Gly105Glu	+	Gly165Gln	+	Ser190Glu	4-
Gly 60Gln + Ala202Gly	Thr 65Gln	+	Val 94Asp	4-	Leu125Glu	+	Ser131Asp	4-
Tyr166Glu + Leu216Asp	Ser187Asp	+	Ser190Glu	4	Gly203Pro	+	Tyr205Gly	4-
Thr 58Pro + Tyr213His	Val 94Glu	+	Ser 97Asp	+	Gly165Glu	+	Tyr205Ser	+
Gly 62Asp + Thr212Glu	Val 94Ala	+	Ser129Glu	+	Gly203Gln	+	Tyr205Val	+
Tyr103Asn + Thr212Asp	Gly130Glu	+	Ser131Asp	+	Ser155Glu	+	Phe188Met	+
Ser155Asp + Asn217Glu	Gly203Asn	+	Pro209Asp	4-	Thr212Asp	4-	Thr215Ser	4-
Asn 96Glu + Thr215Asp	Ser160Glu	+	Asn162Ser	4-	Asn211Gln	4-	Ala214Glu	4-
Asn 96Glu + Leu216Glu	Ser158Asp	+	Gly159Asp	4-	Thr163Asn	4·	Thr210Pro	4-
Thr 58Asn + Tyr205Asp	Ser129Asp	+	Gly130Glu	+	Gly156Glu	4-	Thr161Ser	4-
Gly153Gln + Leu216His	Ser158Asp	+	Ala202Asp	+	Asn211Glu	+	Thr212Asp	+
Ser1O4Glu + Pro209Glu	Leu125Cys	+	Gly156Pro	4-	Ala202Glu	4-	Gly203Asp	4-
Thr 65Asp + Tyr208Met	SerlOOGIu	+	Gly105Asp	+	Gly127Ser	4-	Gly203Ser	4-

122

Ser 97Asp + Ser 98Asp Leu216Glu	+	Ser158Asp	+	Thr212Gln	+	Thr215Pro	+
Gly 62Gln + Ser 97Glu Thr212Glu	+	Ser 98Asp	+	Gly126Glu	+	Gly130Pro	+
Gly 60Asp + Asn157Glu Leu216lle	+	Tyr205Glu	+	Tyr213Thr	+	Thr215Asp	+
Gly 62Glu + Ser102Asp Ala214Gln		Gly127Glu	+	Ser155Asp	+	Tyr213Pro	+
Thr 58Pro + Asn 96Asp Thr212Ser	+	Gly127Glu	+	Ser155Glu	+	Asn162Ser	+
Gly 62Gln + SerlOOGIu Asn217Glu	+	Gly130Glu	+	Asn154Gln	+	Gly203Glu	+
Asp 59Glu + Gly 62Pro Pro209Asp	+	Phe188Glu	+	Ala202Ser	+	Tyr205Glu	+
Asn 61Glu + Ser 97Glu Tyr205Asp	+	Ala128His	+	Asn162Gln	+	Tyr166Glu	+
lle106Pro + Gly126Pro Thr215Glu	♦-	Gly153Glu	+	Ser158Glu	+	Gly203Glu	+
Ser1O2Glu + Tyr103Pro Ala199Pro	+	Gly105Ser	+	Gly130Glu	+	Ser158Glu	+
Asp 59Glu + Asn 61 Ser Asn211Asp	+	Ser158Asp	+	Thr161Asn	+	Ser190Glu	+
Asn 61 Gin + Ser104Asp Tyr205Ala	+	Gly127Glu	+	Asn157Glu	+	Asn162Glu	+
Val 94Asp + Gly1O5Glu Gly203Gln	+	Gly165Asp	+	Ala186Pro	+	Ala202Asp	+
Asn 61Glu + Val 94Gln Gly165Ser	+	Ser102Asp	+	Leu125Asp	+	Gly159Gln	+
lle106Asp + Ser131Glu Thr215Asn	+	Asn162Glu	+	Ala202Ser	+	Thr212Ser	+
lle106Asp + Ser131Asp Thr219Gln	+	Gly159Asp	+	Gly203Pro	+	Leu216Ala	+
Asn154Gln + Gly159Asp Gly218Asp	+	Ser190Asp	+	Ala214Glu	+	Leu216Pro	+
Asn 61 Asp + Ser158Asp Thr215Glu	+	Gly203Asp	+	Thr212Gln	+	Ala214Gly	+
Gly 62Asp + Thr 65Glu Asn162 Asp	+	Leu 95Met	+	Ser1O4Asp	+	Thr132Gln	+
Asn 96Asp + Ser 98Asp Thr215Asp	+	Gly127Asn	+	Ser129Asp	+	Tyr205Asn	+
Ser 97Asp + Gly126Pro Thr212Glu	+	Thr161Ser	+	Ala186Glu	+	Phe188Glu	+
Gly 60Asn + Ser 98Glu Asn217Glu	+	Gly159Asn	+	Gly203Glu	+	Thr212Asp	+

123

Ser131Asp + Leu216Gln

Asn 61 Glu + Thr210Glu

Thr132Pro + Leu216Glu

SedOOGIu + Leu216Glu

Thr 58Asn + Leu216Asp

Asp 59Glu + Gly203Glu

Ser 98Asp + Thr215Glu

Ser160Asp + Thr219Ser

Ser 98Glu + Asn211Gln

Leu 95Gly + Thr210Glu

Asn 96Glu + Thr212Glu

Asp 59Glu + Tyr205Gly

Gly 62Glu + Ala202Asp

Ser 98Asp + Gly218Glu

Thr 58Asn + Gly203Glu

Asn 61Asp + Thr212Pro

Gly 60Asp + Gly218Asp

Asn 61Asp + Thr215Glu

Asn 61Asp + Ile 164 His

SedOOGIu + Leu216Glu

Leu 95Pro + Thr219Gly

Ser 98Asp + Leu216Asp

Leu 95Val + Leu216Met

Ser190Asp +

Gly105Gln + Gly153Asp +

Gly105Pro +

Ser 98Glu +

Gly 99Gln +

Gly126Gln +

Thr161Asn +

SerlOOAsp +

Ser 98Glu +

SerlOOAsp +

Gly 99Asp +

Thr132Gln +

Ser158Glu +

Gly 62Glu + Gly 99Pro + lle106Pro +

Ser129Glu +

Ser 98Asp +

Ser160Glu +

Gly105Asp +

Ser102Glu +

Ser155Glu +

Gly203Asp +

Ser131Asp +

Asn162Glu +

Asn157Asp + Gly156Glu +

SerlOOAsp +

Thr161Asn +

Thr212Glu +

Ser160Asp +

SedOOGIu +

Asn157Asp +

Ser1O4Glu +

Gly156Glu +

Ser160Asp +

Gly 64Asn + Ser104 Asp + Gly127Glu + Ser131Asp + lle106Ser +

Tyr205Asp +

Thr161Glu +

Leu125Glu +

Tyr166Ala +

Tyr205His +

Met198Gly + Gly203Asn +

Gly203Glu +

Gly203Asp +

Gly101Pro +

Ala202Asn +

Thr215Glu +

Phe188Asp +

Gly101Asn +

Thr163Pro +

Gly127Glu +

Thr163Asp +

Phe188lle +

Asn157Glu +

Gly203Asp +

Ala202Asp +

Thr161Asn +

Ser131Asp +

Thr210Pro +

Tyr205Glu +

Ala128Pro +

Ala186Glu +

Thr215Asp +

Pro209Gly +

Pro209Gln +

Asn211Ser +

Ala214Gln +

Ser102Glu +

Thr212Glu +

Leu216Val +

Val204Pro +

Gly203Asp +

Ala202Pro +

Gly203Asn +

Ala186Pro +

Pro209Asn +

Ser190Glu +

Tyr205Asp +

Leu216lle +

Ala214Gln +

Ser160Glu +

Thr212Ser +

Leu216Asp +

Tyr213Gly +

Thr210Asp +

124

Thr 58Asn + Gly 99Glu + Gly105Glu Tyr205Leu	+ Gly127Glu	+ Ser190Asp +
Asp 59Glu +	Gly 99Glu	+	Leu125Ser	+	Thr212Glu	+	Leu216Asp	+
Gly218Ser Thr 58Gln +	Gly130Glu	+	Thr132Glu	+	Gly203Asn	+	Thr212Glu	+
Asn217Asp
Ser 97Glu +	Gly1z7Gln	+	Ser129Asp	+	Gly156Asp	+	Ser158Glu	+
Asn211Ser
Ser102Glu +	Gly126Glu	+	Gly153Ser	+	Ser190Glu	+	Ala202Thr	+
Asn211Asp
Tyr103Glu +	Leu125His	+	Ser131Glu	+	Gly203Asp	+	Asn211 Asp	+
Thr215Ser
Ser129Asp +	Gly130Gln	+	Gly165Asp	+	Gly203Asp	+	Thr212Glu	+
Leu216Val
Gly127Asn +	Ser131Asp	+	Gly159Glu	+	Tyr205Gln	+	Thr212Asp	+
Ala214Glu Ser 97Glu +	lle106Glu	+	Tyr166Gly	+	Ala202Asp	+	Thr215Ser	+
Leu216Asp
Leu 95Glu +	Leu125His	+	Gly126Asp	+	Tyr205Gln	+	Thr215Asp	+
Thr219Asn
Asp 59Glu +	Ser 97Glu	+	Ala128Asn	+	Thr132Glu	+	Asn157Asp	+
Tyr205Gly Ser 98Asp +	Ser102Asp	+	Ala128His	+	Ser187Glu	+	Thr215Pro	+
Gly218Asp
Thr 58Pro +	Gly130Ser	+	Gly156Asp	+	Ser160Asp	+	Thr212Ser	+
Thr215Glu
Thr 58Ser +	Gly 60Glu	+	Thr 65Asp	+	SerlOOGIu	+	Gly159Glu	+
Leu216His
Ser 97Glu +	SerlOOGIu	+	Asn154Glu	+	Gly203Pro	+	Thr212Asn	+
Thr215Glu
Ser 97Asp +	SerlOOAsp	+	lle106Val	+	Ser155Asp	+	Gly203Pro	+
Thr215Asp Ser 97Glu +	Asn157Glu	+	Ser160Asp	+	Thr210Gln	+	Thr212Asn	+
Asn217Asp Asp 59Glu +	Leu 95Cys	+	Ala128Asn	+	Thr132Gly	+	Gly153Asp	+
Ser187Asp Thr 65Asp +	Leu125Asp	+	Ser190Glu	+	Gly2O3Asn	+	Asn211Asp	+
Thr219Ser
Asp 59Glu +	Asn 96Asp	+	Leu125Cys	+	Thr215Asp	+	Leu216lle	+
Thr219Asp Ser 98Glu +	Gly1O5Asp	+	Leu125His	+	Asn162 Asp	+	Ser190Glu	+
Ala202Ser Gly 60Ser +	Thr 65Glu	+	Ser158Glu	+	Thr163Gly	+	Thr215Pro	+
Leu216Asp
Val 94Glu +	Asn 96Ser	+	Gly101Pro	+	Ser102Asp	+	Ser155Glu	+

Thr212Asp

125

SerlOOGIu + Leu216Ala	Gly 127 Asn	+	Ser129Asp	4	Thr132Glu	4	Asn162Glu	4
Ser 98Glu + Gly218Asp	Ser102Asp	+	Ala202His	4	Thr212Pro	4	Thr215Asp	4
Asn 61Asp + Asn211Gln	Asn 96Asp	-+	Gly165Glu	4	Tyr166Ser	4	Gly203Asp	4
Asn 61Asp + Thr212Pro	Asn 96Glu	+	Gly127Ser	4	Gly13OAsp	4	Gly203Glu	4
Ser 97Glu + Ala214Gln	Gly1O1Asp	+	Ser129Glu	4	Ser158Glu	4	Thr161Ser	4
Gly 62Glu + Gly218Asp	Ser 97Asp	+	Ser129Asp	4	Ala199Pro	4	Leu216Gln	4
Ser129Glu + Tyr205Asp	Asn157Gln	+	Ser187Asp	4	Ser190Glu	4	Gly203Asn	4
Gly156Asn + Thr219Gly	Asn162Gln	+	Ser187Glu	4	Gly203Glu	4	Thr215Gln	4
Ala128Ser + Leu216Thr	Ser187Glu	+	Gly2O3Glu	4	Tyr2O5Leu	4	Thr210Ser	4
Thr 58Gly + Leu216Thr	Thr 65Asp	+	SerlOOGIu	4	Gly1O5Glu	4	Ala128Asp	4
Asp 59Glu + Asn217Asp	Thr 65Gly	+	Gly156Asp	4	Tyr205Glu	4	Leu216Cys	4
Thr 58Pro + Thr212Asn	Asn 96Asp	+	Ser160Asp	4	Ser190Asp	4	Ala202Asn	4
Ser160G,u + Leu216Met	Ser190Asp	4	Tyr205Asp	4	Thr207Pro	4	Thr212Gln	4-
Asn 61 Asp + Leu216Asn	Leu 95Glu	4	Tyr166Asn	4	Tyr205Glu	4	Asn211Glu	4
Ser 98Glu + Tyr205Thr	Ser158Glu	4	Thr163Glu	4	Tyr166Leu	4	Gly203Glu	4
Asp 59Glu + Thr212Pro	Ser1O4Glu	4	Ser158Asp	4	Thr163Glu	4	Phe188His	4
Ser158Asp + Leu216Pro	Thr163Glu	4	Ala202Asp	4	Tyr2O5Cys	4	Thr212Asp	4
Tyr166Glu + Tyr213Pro	Ser190Glu	4	Met198Ser	4	Gly203Asn	+	Asn211Asp	4
Asn 61 Ser + Tyr213Gly	Gly 64Ser	4	Thr 65Asp	+	Ser129Glu	4	Tyr205Glu	4
Ala128Pro + Gly203Glu	Thr132Glu	4	Gly153Ser	t	Asn 154 Asp	4	Gly165Asp	4
Asp 59Glu + Leu216Asp	Thr132Glu	4	Thr163Pro	4	Tyr166lle	4	Thr210Asp	4-
Thr 58Asp + Pro209Glu	Asn 96Gln	4	Ser1O4Asp	4	Gly126Gln	4	Gly203Asp	4
Gly 64Asn + Thr215Glu	Thr 65Glu	4	Gly126Glu	4-	Tyr 166 Ala	4	Phe188Tyr	4

126

Asp 59Glu + Asn 96Asp + Gly105Asn + Gly127Asp + Ser158Glu + Thr215Ser

Ser104Asp + Ser131Asp + Gly159Glu + Phe188Asp + Thr210Gly + Thr212Gln

Val 94Met + Ser104Asp + Gly126Ser + Ser131Glu + Thr210Glu + Thr215Asp

Thr 58Asp + Ser 97Asp + Gly105Asp + Ser187Glu + Met198Thr + Tyr205Val

Val 94Asp + Gly 99Asp + Gly126Asn + Thr163Glu + Gly203Glu + Leu216Cys

Thr 58Glu + Gly 62Glu + Gly105Glu + Gly156Glu + Phe188Thr + Thr212Gly

Thr 58Gln + Gly159Asp + Ser190Glu + Gly203Asp + Tyr205lle + Gly218Ser

Thr 58Pro + Sar131Glu + Tyr166Thr + Tyr205Asp + Thr215Ser + Gly218Asp

Gly 60Asp + Thr161Asp + Gly165Glu + Pro209Gln + Thr215Gly + Thr219Gly

Asp 59Glu + Ser102Asp + Thr161Asp + Asn162Gln + Ser190Glu + Ala202Ser

Leu 95Cys + SerlOOGlú + Ser1O4Glu + Phe188Cys + Tyr205Met + Leu216Asp

SerlOOAsp + Ser1O4Asp + Gly105Asn + Tyr205Cys + Tyr208Asn + Pro209Glu

Gly 64Ser + Thr 65Gln + SerlOOGlú + Ser1O4Glu + SerlOOAsp + Thr2O7Asn

Thr 65Gly + Gly 99Asp + Ala128Glu + Ser155Glu + Gly203Gln + Thr215Asp

Gly 99Asp + Ala128Asp + Ser155Asp + Ala202Glu + Thr210Asn + Leu216Val

Thr 58Asp + Ser 97Asp + Thr132Asp + Thr215Gln + Leu216Asn + Gly218Glu

Thr 58Asp + Ser 97Glu + Gly127Asp + Tyr166Ala + Ala186Ser + Asn217Glu

Thr 65Asp + Thr132Glu + Asn154Asp + Thr212Glu + Leu216Gly + Asn217Ser

Gly 99Gln + Ser131Glu + Thr161Asn + Tyr205Thr + Pro209Asp + Thr215Glu

Tyr103His + Ser131Glu + Gly156Asp + Gly159Glu + Thr212Glu + Leu216Met

Thr 58Gln + Ser 98Asp + Ser1O2Glu + Ala202His + Thr212Pro + Thr215AsD

127

Gly127Glu + Asn162Glu + Phe188Met + Ala202Gly + Gly203Ser + Gly218Asn

128

Čistící prostředky

Podle jiného provedení předloženého vynálezu se účinné množství jedné nebo více enzymových variant zahrne do prostředků, které jsou užitečné pro čištění různých povrchů, které potřebují odstranit proteinové skvrny. Mezi tyto čistící prostředky patří detergentní prostředky pro čištění tvrdých povrchů neomezené formou (např. kapalné nebo granulované), detergentní prostředky pro čištění látek neomezené formou (např. granulované, kapalné nebo ve formě kostek), prostředky pro mytí nádobí (neomezené formou), orální čistící prostředky neomezené formou (např. zubní prášek, zubní pasty a ústní vody), čistící prostředky zubních protéz neomezené formou (např. kapalné, tablety) a čisticí prostředky pro kontaktní čočky neomezené formou (např. kapalné, tablety).

Čistící prostředky vedle shora popsaných variant subtilisinu Carlsberg obsahují také jeden nebo více materiálů čistícího prostředku, které jsou slučitelné s proteasovým enzymem. Pojem materiál čistícího prostředku tak, jak je zde používán, znamená jakoukoliv kapalinu, pevnou látku nebo plynný materiál, které jsou vybrány pro příslušný typ žádaného čistícího prostředku a formu produktu (např. kapalina, granule, kostka, sprej, tyčka, pasta, gel), při čemž tyto materiály jsou také slučitelné s variantou subtilisinu Carlsberg používanou v prostředku. Specifický výběr materiálů čistícího prostředku se snadno provede podle toho, jaký povrch materiálu má být vyčištěn, podle žádané formy prostředku, který se používá pro dané podmínky čištění (např. pro použití jako detergent při praní). Pojem slučitelný tak, jak se zde používá, znamená materiály čistícího prostředku, které nesnižují proteolytickou aktivitu varianty subtilisinu Carlsberg natolik, že tato proteasa není tak účinná, jak je je žádoucí, v situacích, kdy se normálně používá. Specifické příklady materiálů čistících prostředků jsou zde dále uvedeny podrobněji.

Pojem efektivní množství varianty enzymu tak, jak se zde

129 tento pojem používá, znamená takové množství varianty enzymu, které je nutné pro dosažení enzymatické aktivity pro specifický čistící prostředek. Toto efektivní množství snadno odhadne odborník z oblasti techniky a je dáno mnoha faktory, jako je příslušná použitá varianta enzymu, čistící aplikace, specifické složení čistícího prostředku, to, jestli je žádoucí kapalný nebo suchý (např. granulovaný, kostka) prostředek a podobně. Čistící prostředky s výhodou obsahují od 0,0001 % hmotn. do 10 % hmotn., výhodněji od 0,001 do 1 % hmotn., ještě výhodněji od 0,001 do 0,1 % hmotn. jedné nebo více variant enzymů podle předloženého vynálezu. Některé příklady různých čistících prostředků, v nichž se mohou používat varianty enzymu, jsou diskutovány níže podrobněji. Všechny díly, procenta a poměry jsou hmotnostní, pokud není uvedeno jinak.

Pojem čistící prostředky neurčené pro látky tak, jak se zde používá, znamená čistící prostředky pro tvrdé povrchy, čistící prostředky pro mytí nádobí, orální čistící prostředky, prostředky pro čištění zubních protéz a prostředky pro čištěníkontaktních čoček.

Čistící prostředky pro tvrdé povrchy, nádobí a látky

Varianty enzymu podle předloženého vynálezu se mohou používat v rozmanitých detergentních prostředcích, kde je žádoucí vysoké pěnění a dobré odstraňování nerozpustného substrátu. Varianty enzymu se tedy mohou používat s různými konvenčními složkami, takže se získají úplné čistící prostředky pro tvrdé povrchy, prostředky pro myti nádobí, prostředky pro praní látek a podobné. Tyto prostředky mohou být ve formě kapalin, granulí, kostek a podobně. Tyto prostředky se mohou vyrábět jako moderní koncentrované detergenty, které obsahují až 30 až 60 % hmotn. povrchově aktivních činidel.

Čistící prostředky podle vynálezu mohou popřípadě, a s výhodou, obsahovat různá aniontová, neiontová, obojetná atd. povrchově aktivní činidla. Tato povrchově aktivní činidla jsou

130 typicky v prostředcích přítomna v množství od 5 do 35 % hmotn. z hmotnosti prostředků.

Mezi neomezující příklady povrchově aktivních činidel užitečných podle vynálezu patří konvenční alkyl(s 11 až 18 atomy uhlíku)benzensulfonáty a primární a náhodné alkylsulfáty, sekundární (2,3) alkyl(s 10 až 18 atomy uhlíku)sulfáty obecných vzorců CH₃(CH₂)x(CH0S0₃)-M⁺)CH₃ a CH₃ (CH₂) y (CH0S0₃) ’M+) CH₂CH₃, V nichž x a (y+1) znamenají alespoň číslo 7, s výhodou alespoň číslo 9, a M znamená ve vodě rozpustný kation, s výhodou sodný kation, alkyl(s 10 až 18 atomy uhlíku)alkoxysulfáty (zvláště EO 1-5 ethoxysulfáty), alkyl(s 10 až 18 atomy uhlíku)alkylalkoxykarboxyláty (zvláště EO 1-5 ethoxykarboxyláty), alkyl(s 10 až 18 atomy uhlíku)polyglykosidy a jejich odpovídající sulfatované polyglykosidy, estery α-sulfonovaných mastných kyselin s 12 až 18 atomy uhlíku, alkyl(s 12 až 18 atomy uhlíku) a alkylfenolalkoxyláty (zvláště ethoxyláty a směsné ethoxy/propoxy), betainy s 12 až 18 atomy uhlíku a sulfobetainy (sultainy), aminoxidy s 10 až 18 atomy uhlíku a podobné. Výhodnými jsou alkylalkoxysulfáty (AES) a alkylalkoxykarboxyláty (AEC) (Použití těchto povrchově aktivních činidel je také výhodné v kombinaci se shora uvedenými aminoxidovými a/nebo betainovými nebo sultainovými povrchově aktivními činidly, závisí to však na potřebách toho, kdo prostředek vyrábí.). Seznam dalších konvenčních užitečných povrchově aktivních činidel je uveden ve standardních textech. Mezi zvláště užitečná povrchově aktivní činidla patří N-methylglukamidy s 10 až 18 atomy uhlíku, které jsou popsány v USA patentu 5 194 639 Connora a spol., vydaném 16. března 1993, který je zde zahrnut jako citace.

V prostředcích podle vynálezu mohou být zahrnuty různé jiné složky, které jsou užitečné v detergentních čistících prostředcích, včetně jiných aktivních složek, nosičů, hydrotropů, pomocných činidel pro zpracování, barviv nebo pigmentů, rozpouštědel pro kapalné prostředky atd. Jestliže je žádoucí jakýkoliv další inkrement pěnění, mohou se tyto složky podporující pěnění, jako jsou alkolamidy s 10 až 16 atomy uhlíku, zahrnout

131 do prostředků, typicky v množství od 1 do 10 % hmotn. Typickými příklady těchto prostředků podporujících pěnění jsou monoethanol a diethanolamidy s 10 až 14 atomy uhlíku. Výhodné je také použití těchto složek podporujících pěnění s vysoce pěnivými povrchově aktivními činidly, jako jsou shora uvedené aminoxidy, betainy a sultainy. Jestliže je to žádoucí, mohou se pro další pěnění přidat rozpustné hořečnaté soli, jako je MgCl₂, MgSO₄ a podobné, typicky v množstvích od 0,1 do 2 % hmotn.

Kapalné detergentní prostředky podle vynálezu mohou obsahovat vodu a další rozpouštědla a nosiče. Vhodné jsou primární nebo sekundární alkoholy s nízkou molekulovou hmotností, jako jsou například methanol, ethanol, propanol a isopropanol. Pro rozpouštěni povrchově aktivních činidel jsou výhodné monohydroxyalkoholy, mohou se ale používat také polyoly, jako jsou polyoly s 2 až 6 atomy uhlíku a s 2 až 6 hydroxylovými skupinami (např. 1,3-propandiol, ethylenglykol, glycerin a 1,2-propandiol). Tyto prostředky mohou obsahovat od 5 do 90 % hmotn., typicky od 10 do 50 % hmotn. těchto nosičů.

Detergentní prostředky podle vynálezu se budou výhodně připravovat tak, aby během použití ve vodných čistících postupech měla prací voda pH mezi 6,8 a 11,0. Konečné produkty se tedy připravují typicky s tímto rozmezím pH. Mezi způsoby, kterými se reguluje pH na doporučenou hodnotu, patří použití pufrů, alkalií, kyselin atd. Tyto způsoby jsou dobře známy odborníkům z oblasti techniky.

Jestliže se vyrábějí prostředky pro čištění tvrdých povrchů a prostředky pro čištění látek podle předloženého vynálezu, výrobce si může přát používat různé stavební složky v množství od 5 do 50 % hmotn. Mezi typické stavební složky patří 1 až ΙΟμιη zeolity, polykarboxyláty, jako jsou citráty a oxydisukcináty, vrstvené křemičitany, fosforečnany a podobné. Další konvenční složky jsou uvedeny ve standardních předpisech pro výrobu.

132

Podobně si může výrobce přát používat v těchto prostředcích různé další enzymy, jako jsou celulasy, lipasy, amylasy a proteasy, typicky v množstvích od 0,001 do 1 % hmotn. V oblasti pracích detergentních prostředků jsou dobře známy různé detergentní složky a enzymy pečující o látky.

V těchto prostředcích se mohou používat také různá bělící činidla, jako jsou peruhličitany, perboritany a podobné, typicky v množstvích od 1 do 15 % hmotn. Jestliže je to žádoucí, tyto prostředky mohou obsahovat také bělící aktivátory, jako je tetraacetylethylendiamin, nonanoyloxybenzensulfonát a podobné, které jsou také známy v oblasti techniky. Používá se množství typicky od 1 do 10 % hmotn.

V těchto prostředcích se mohou používat také různá činidla uvolňující ušpinění, zvláště typu aniontových oligoesterů, různá chelatační činidla, zvláště aminofosfonáty a ethylediamindisukcináty, různá činidla odstraňující ušpinění hlinkami, zvláště ethoxylovaný tetraethylenpentamin, různá dispergační činidla, zvláště polyakryláty a polyaspartáty, různá zjasňovací činidla, zvláště aniontová zjasňovací činidla, různá činidla potlačující pěnění, zvláště silikony a sekundární alkoholy, různá avivážní činidla látek, zvláště smektitové hlinky a podobná činidla, v množství od 1 do 35 % hmotn. Standardní předpisy a publikované patenty obsahují mnoho podrobných popisů těchto konvenčních materiálů.

V čistících prostředcích se mohou používat také stabilizátory enzymů. Mezi tyto stabilizátory enzymů patří propylenglykol (s výhodou od 1 do 10 % hmotn.), mravenčan sodný (s výhodou od 0,1 do 1 % hmotn.) a mravenčan vápenatý (s výhodou od 0,1 do 1 % hmotn.).

Prostředky pro čištění tvrdých povrchů

Pojem prostředek pro čištění tvrdých povrchů tak, jak se zde tento pojem používá, znamená kapalné a granulované de133 tergentní prostředky pro čištění tvrdých povrchů, jako jsou podlahy, stěny, koupelny a podobné. Prostředky pro čištění tvrdých povrchů podle předloženého vynálezu obsahují efektivní množství jednoho nebo více variant enzymů podle předloženého vynálezu, s výhodou od 0,001 do 10 % hmotn., výhodněji od 0,01 do 5, ještě výhodněji od 0,05 do 1 % hmotn. aktivního enzymu z hmotnosti prostředku. Vedle jednoho nebo více variant enzymů tyto prostředky pro čištění tvrdých povrchů typicky obsahují povrchově aktivní čindilo a ve vodě rozpustnou maskovací složku. V některých specializovaných produktech, jako jsou čistící prostředky na okna ve spreji, však někdy nejsou povrchově aktivní činidla používána, protože mohou způsobit filmové/šmouhovité zbytky na povrchu skla.

Povrchově aktivní složka, jestliže je přítomna, může být obsažena v tak malém množství, jako je 0,1 % hmotn. z hmotnosti prostředků podle vynálezu, typicky však tyto prostředky obsahují od 0,25 do 10, výhodněji od 1 do 5 % hmotn. povrchově aktivního činidla.

Prostředky budou typicky obsahovat od 0,5 do 50, s výhodou od l do 10 % hmotn. detergentní složky.

Výhodné pH by mělo být v rozmezí od 8 do 12. Jestliže je nutné upravovat pH, mohou se pro úpravu pH používat konvenční činidla, jako je hydroxid sodný, uhličitan sodný nebo kyselina chlorovodíková.

V prostředcích mohou být zahrnuta rozpouštědla. Mezi užitečná rozpouštědla patří, ale nejsou na ně omezena, glykolethery, jako je monohexylether diethylenglykolu, monobutylether diethylenglykolu, monobutylether ethylengylkolu, monohexylether ethylenglykolu, monobutylether propylenglykolu, monobutylether dipropylenglykolu a dioly, jako je 2,2,4-trimethyl-l,3-pentandiol a 2-ethyl-l,3-hexandiol. Jestliže se používají, pak jsou tato rozpouštědla typicky přítomna v množství od 0,5 do 15, s výhodou od 3 do 11 % hmotn.

134

Pro usnadnění rychlejšího odpařování prostředku z povrchů, jestliže tento povrch není opláchnut po plné aplikaci prostředku na povrch, se mohou v předložených prostředcích používat vysoce těkavá rozpouštědla, jako je isopropanol nebo ethanol. Jestliže se používají, pak jsou těkavá rozpouštědla v prostředcích typicky přítomna v množství od 2 do 12 % hmotn.

Provedení prostředku pro čištění tvrdých povrchů podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.

135

Příklady 7 až 12

Kapalné prostředky pro čištění tvrdých povrchů složka příklad č.:

	7	8	9	10	11	12
Thr58Asn	0,05	0,50	0,02	0,03	0,10	0,03
Thr58Glu +	-	-	-	-	0,20	0,02
Asn61Glu
EDTA**	-	-	2,90	2,90	-	-
citrát sodný alkyl(s 12 at.					2,90	2,90
uhlíku)benzen-
sulfonát sod-
ný	1,95	-	1,95	-	1,95	-
alkyl(s 12 at. uhlíku)sulfát sodný (ethoxy)sulfát	-	2,20	-	2,20	-	2,20
(s 12 at. uhlí-
ku) sodný*** dimethylamin-		2,20		2,20		2,20
oxid (s 12 at. uhlíku)	—	0,50		0,50		0,50
kumensulfonát
sodný	1,30	-	1,30	-	1,30	-
hexylkarbitol***	6,30	6,30	6,30	6,30	6,30	6,30
voda****		doplnit do	100 % hmotn	•

** tetrasodná sůl ethylendiamindioctové kyseliny *** monohexylether diethylenglykolu **** všechny prostředky mají pH upraveno na hodnotu 7

V příkladech 7 až 10 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedehé v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituovat za

136

Thr58Asn s v podstatě podobnými výsledky.

V příkladech 11 až 12 se jakékoliv kombinace variant subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituují za Thr58Asn a Thr58Gln + Asn61Glu s v podstatě podobnými výsledky.

Příklady 13 až 18

Sprejové prostředky pro čištění tvrdých povrchů a pro odstraňování plísní v domácnosti

složka	příklad č.:
13	14	15 16	17	18
Val94Ala	0,50	0,05	0,60 0,30	0,20	0,30
Leul25Asn +
Glyl26Pro +
Serl29Glu	-	-	-	0,30	0,10
oktylsulfát
sodný	2,00	2,00	2,00 2,00	2,00	2,00
dodecylsulfát
sodný	4,00	4,00	4,00 4,00	4,00	4,00
hydroxid sodný	0,80	0,80	0,80 0,80	0,80	0,80
křemičitan (Na)	0,04	0,04	0,04 0,04	0,04	0,04
parfém	0,35	0,35	0,35 0,35	0,35	0,35
voda		doplnit	do 100 % hmotn.

Produkt má pH kolem 7.

V příkladech 13 až 16 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituovat za Val94Ala s v podstatě podobnými výsledky.

V příkladech 17 až 18 se jakékoliv kombinace variant subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, sub137 stituují za Val94Ala a Leul25Asn + Glyl26Pro + Serl29Glu s v podstatě podobnými výsledky.

Prostředky pro mytí nádobí

V jiném provedení podle předloženého vynálezu prostředky pro mytí nádobí obsahují jednu nebo více variant enzymů podle předloženého vynálezu. Pojem prostředek pro mytí nádobí tak, jak se zde používá, znamená všechny formy prostředků pro čištění nádobí včetně, ale bez omezení na ně, granulovaných a kapalných forem. Provedení prostředku pro mytí nádobí podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.

138

Příklady 19 až 24

Prostředky pro mytí nádobí

složka	příklad č.:
19	20	21	22	23	24
Glyl53Asn Alal86Asp +	0,05	0,50	0,02	0,40	0,10	0,03
Phel88Gln	-	-	-	-	0,40	0,02
N-methylgluka- mid s 12 až 14 atomy uhlíku ethoxy(l)sul-	0,90	0,90	0,90	0,90	0,90	0,90
fát s 12
atomy uhlíku	12,00	12,00	12,00	12,00	12,00	12,00
2-methylunde- kanová kys. ethoxy(2)kar-	4,50	4,50	4,50	4,50	4,50	4,50
boxylát s 12 atomy uhlíku	4,50	4,50	4,50	4,50	4,50	4,50
alkohol(s 12
atomy uhlíku)ethoxylát	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00
aminoxid s 12
atomy uhlíku	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00	3,00
kumensulfonát
sodný	2,00	2,00	2,00	2,00	2,00	2,00
ethanol	4,00	4,00	4,00	4,00	4,00	4,00
hořečnaté ionty	0,20	0,20	0,20	0,20	0,20	0,20
(jako MgCl2) vápenaté ionty	0,40	0,40	0,40	0,40	0,40	0,40
(jako CaCl2)
voda		doplnit do	100 % hmotn.

Produkt má pH upraveno na hodnotu 7

139

V příkladech 19 až 22 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituovat za Glyl53Asn s v podstatě podobnými výsledky.

V příkladech 23 až 24 se jakékoliv kombinace variant subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituují za Glyl53Asn a Alal86Asp + Phel88Gln s v podstatě podobnými výsledky.

Prostředky pro čištění látek

V jiném provedeni podle předloženého vynálezu prostředky pro čištění látek obsahují jednu nebo více variant enzymů podle předloženého vynálezu. Pojem prostředek pro čištění látek tak, jak se zde používá, se týká všech forem detergentních prostředků pro čištění látek, včetně, ale bez omezení na ně, granulovaných a kapalných prostředků a prostředků ve formě kostek. Výhodnými prostředky pro čištění látek jsou ty prostředky, které jsou v kapalné formě.

Granulované prostředky pro čištění látek

Granulované prostředky pro čištění látek podle předloženého vynálezu obsahují efektivní množství jedné nebo více variant enzymů podle předloženého vynálezu, s výhodou 0,001 až 10, výhodněji 0,005 až 5, výhodněji 0,01 až 1 % hmotn. aktivního enzymu z hmotnosti prostředku. Vedle jedné nebo více variant enzymů granulované prostředky pro čištění látek typicky obsahují alespoň jedno povrchově aktivní činidlo, jednu nebo více stavebních složek a v některých případech bělící činidlo.

Provedení granulovaných prostředků pro čištění látek podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.

140

Příklady 25 až 28

Granulovaný prostředek pro čištění látek příklad č.:

25

26

27

28

Pro200Asn	0,10	0,20	0,03	0,05
Gly203Asp + Tyr205Ala + Tyr208Ser	-	-	0,02	0,05
lineární alkyl(se 13 atomy uhlíku)	-
benzensulfonát	22,00	22,00	22,00	22,00
fosfát (jako sodná sůl trifosfo-
rečnanu)	23,00	23,00	23,00	23,00
uhličitan sodný	23,00	23,00	23,00	23,00
křemičitan sodný	14,00	14,00	14,00	14,00
zeolit	8,20	8,20	8,20	8,20
chelatační činidlo (diethylentri-
aminpentaoctová kyselina)	0,40	0,40	0,40	0,40
síran sodný	5,50	5,50	5,50	5,50
voda	doplnit do	100 % ]	hmotn.

V příkladech 25 až 26 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituovat za Pro200Asn s v podstatě podobnými výsledky.

V příkladech 27 až 28 se jakékoliv kombinace variant subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné substituují za Pro200Asn a Gly203Asp + Tyr205Ala + Tyr208Ser s v podstatě podobnými výsledky.

141

Příklady 29 až 32

Granulovaný prostředek pro čištění látek příklad č.:

29

30

31

32

Pro200Asn + Ala202Asn + Val204Gly +	0,20	0,03	0,05
Asn211Asp + Thr219Gly	0,10
Leu95Gly + GlY203Pro	-	-	0,02	0,05
alkyl(s 12 atomy uhlíku)-
benzensulfonát	12,00	12,00	12,00	12,00
zeolit A (1 až 10 gm)	26,00	26,00	26,00	26,00
2-butyloktanová kyselina	4,00	4,00	4,00	4,00
sodná sůl sekundárního (2,3)alkyl-
(s 12 až 14 atomy uhlíku)sulfátu	5,00	5,00	5,00	5,00
citrát sodný	5,00	5,00	5,00	5,00
optické zjasňovadlo	0,10	0,10	0,10	0,10
síran sodný	17,00	17,00	17,00	17,00
voda a minoritní složky	doplnit do	100 % ]	hmotn.

V příkladech 29 až 30 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituovat za Pro200Asn + Ala202Asn + Val204Gly + Asn211Asp + Thr219Gly s v podstatě podobnými výsledky.

V příkladech 31 až 32 se jakékoliv kombinace variant subtilisinu Carlsberg uvedené va tabulkách 3 až 36 substituují za Pro200Asn + Ala202Asn + Val204Gly + Asn211Asp + Thr219Gly a Leu95Gly + GlY203Pro s v podstatě podobnými výsledky.

142

Příklady 33 až 36

Granulovaný prostředek pro čištění látek složka příklad č.:

33

34

35

36

Thr58Gln + Asp59Glu + Leu216Gln 0,10	0,20	0,03	0,05
Pro200Asn + Ala202Gln + Tyr208Cys +
Thr210Pro + Tyr213Asn +
Ala214Asn + Thr219Ser	-	0,02	0,05

lineární alkyl(se 13 atomy uhlíku)-

benzensulfonát	22,00	22,00	22,00	22,00
fosfát (jako sodná sůl trifosfo-
rečnanu)	23,00	23,00	23,00	23,00
uhličitan sodný	23,00	23,00	23,00	23,00
křemičitan sodný	14,00	14,00	14,00	14,00
zeolit	8,20	8,20	8,20	8,20
chelatační činidlo (diethylentri-
aminpentaoctová kyselina)	0,40	0,40	0,40	0,40
síran sodný	5,50	5,50	5,50	5,50
voda	doplnit do	100 % 1	hmotn.

V příkladech 33 až 34 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, mimo jiné, substituovat za Thr58Gln + Asp59Glu + Leu216Gln s v podstatě podobnými výsledky.

V příkladech 35 až 36 se jakékoliv kombinace variant subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36 substituují za Thr58Gln + Asp59Glu + Leu216Gln a Pro200Asn + Ala202Gln + Tyr208Cys + Thr210Pro + Tyr213Asn + Ala214Asn + Thr219Ser s v podstatě podobnými výsledky.

143

Příklady 37 až 40

Granulovaný prostředek pro čištění látek

složka	příklad č.:
37	38	39	40
Asp59Glu + Gly60Pro + Gly62Asn +
Gly64Gl	0,10	0,20	0,03	0,05
Leul25Ala	-	-	0,02	0,05
alkyl(s 12 atomy uhlíku)-
benzensulfonát	12,00	12,00	12,00	12,00
zeolit A (1 až 10 pm)	26,00	26,00	26,00	26,00
2-butyloktanová kyselina	4,00	4,00	4,00	4,00
sodná sůl sekundárního (2,3)alkyl-
(s 12 až 14 atomy uhlíku)sulfátu	5,00	5,00	5,00	5,00
citrát sodný	5,00	5,00	5,00	5,00
optické zjasňovadlo	0,10	0,10	0,10	0,10
síran sodný	17,00	17,00	17,00	17,00
voda a minoritní složky	doplnit do	100 % ]	hmotn.

V příkladech 37 až 38 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, mimo jiné, substituovat za Asp59Glu + Gly60Pro + Gly62Asn + Gly64Gl s v podstatě podobnými výsledky.

V příkladech 39 až 40 se jakékoliv kombinace variant subtilisinu Carlsberg uvedené va tabulkách 3 až 36 substituují za Asp59Glu + Gly60Pro + Gly62Asn + Gly64Gl a Leul25Ala s v podstatě podobnými výsledky.

144

Příklady 41 a 42

Granulované prostředky pro čištění látek příklad č.:

složka

	41	42
lineární alkylbenzensulfonát	11,4	10,70
lojový alkylsulfát	1,80	2,40
alkylsulfát se 14 až 15 atomy uhlíku	3,00	3,10
7krát ethoxylovaný alkohol se 14 až 15 atomy
uhlíku	4,00	4,00
llkrát ethoxylovaný lojový alkohol	1,80	1,80
dispergační činidlo	0,07	0,1
silikonová kapalina	0,80	0,80
citrát trojsodný	14,00	15,00
kyselina citrónová	3,00	2,50
zeolit	32,50	32,10
kopolymer kyseliny maleinové s kys. akrylovou	5,00	5,00
diethylentriaminpentamethylenfosfonová kys.	1,00	0,20
Glyl27Glu + Asnl62Glu + Phel88Met + Ala202Gly	+
Gly203Ser + Gly218Asn	0,30	0,30
lipasa	0,36	0,40
amylasa	0,30	0,30
křemičitan sodný	2,00	2,50
síran sodný	3,50	5,20
pólyvinylpyrrolidon	0,30	0,50
perboritan	0,5	1
fenolsulfonát	0,1	0,2
peroxidasa	0,1	0,1
minoritní složky	doplnit	do 100

145

Příklady 43 a 44

Granulované prostředky pro čištění látek

složka	příklad č.:
43	44
lineární alkyl(s 12 at. uhlíku)benzensulfonát	6,5	8,0
síran sodný	15,0	18,0
zeolit A	26,0	22,0
nitriltriacetát sodný	5,0	5,0
polyvinylpyrrolidon	0,5	0,7
tetraacetylethylendiamin	3,0	3,0
kyselina boritá	4,0	-
perboritan	0,5	1
fenolsulfonát	0,1	0,2
Gly218Glu + Thr219Glu	0,4	0,4
plnidla (např. křemičitany, uhličitany,
parfémy, voda)	doplnit	do 100

146

Příklad 45

Kompaktní granulovaný prostředek pro čištění látek složky % hmotn.

alkylsulfát 8,0 alkylethoxysulfát 2,0 směs 3krát a 7krát ethoxylovaných alkoholů s a 45 atomy uhlíku 6,0 amid mastné polyhydroxykyseliny 2,5 zeolit 17,0 vrstevnatý křemičitan/citrát 16,0 uhličitan 7,0 kopolymer kyseliny maleinové s kyselinou akrylovou 5,0 polymer uvolňující ušpinění 0,4 karboxymethylcelulosa 0,4 poly(4-vinylpyridin)-N-oxid 0,1 kopolymer vinylimidazolu a vinylpyrrolidonu 0,1 PEG2000 0,2 Pro209Glu 0,5 lipasa 0,2 celulasa 0,2 tetraacetylethylendiamin 6,0 peruhličitan 22,0 ethylendiamindijantarová kyselina 0,3 potlačovatel pěnění 3,5 dvojsodná sůl 4,4'-bis(2-morfolino-4-anilino-l,3,5triazin-6-ylamino)stilben-2,2'-disulfonové kyseliny 0,25 disodium-4,4*-bis(2-sulfostyryl)bifenyl 0,05 voda, parfém a minoritní složky do 100

147

Příklad 46

Granulovaný prostředek pro čištění látek

složka	%	hmotn.
lineární alkylbenzensulfonát		7,6
alkylsulfát se 16 až 18 atomy uhlíku		1,3
7krát ethoxylovaný alkohol se 14 až 15	atomy uhlíku	4,0
kokosový alkyl-dimethyl-hydroxyethyl-amoniumchlorid	1,4
dispergační činidlo		0,07
silikonová kapalina		0,8
citrát trojsodný		5,0
zeolit 4A		15,0
kopolymer kyseliny maleinové a kyseliny akrylové	4,0
diethylentriaminpentamethylenfosfonová	kyselina	0,4
perboritan		15,0
tetraacetylethylendiamin		5,0
smektitová hlinka		10,0
poly(oxyethylen) (mol. hmotn. 300 000)		0,3
Thr58Pro + Gly64Ser + Thr65Gly		0,4
lipasa		0,2
amylasa		0,3
celulasa		0,2
křemičitan sodný		3,0
uhličitan sodný		10,0
karboxymethylcelulosa		0,2
zjasňovací činidla		0,2
voda, parfém, a minoritní složky	do	100

148

Příklad 47

Granulovaný prostředek pro čištění látek lineární alkylbenzensulfonát 6,92 lojový alkylsulfát 2,05

7krát ethoxylovaný alkohol se 14 až 15 atomy uhlíku 4,4

3krát ethoxylovaný alkyl(s 12 až 15 atomy uhlíku)ethoxysulfát 0,16 zeolit 20,2 citrát 5,5 uhličitan 15,4 křemičitan 3,0 kopolymer kyseliny maleinové s kyselinou akrylovou 4,0 karboxymethylcelulasa 0,31 polymer uvolňující ušpinění 0,30

Val94Gln + SerlOOGIu 0,2 lipasa 0,36 celulasa 0,13 tetrahydrát perboritanu 11,64 monohydrát perboritanu 8,7 tetraacetylethylendiamin 5,0 diethylentriaminpentamethylfosfonová kyselina 0,38 síran hořečnatý 0,40 zjasňovací činidlo 0,19 parfém, silikon, potlačovatelé pěnění 0,85 minoritní složky do 100

Kapalné prostředky pro čištění látek

Kapalné prostředky pro čištění látek podle předloženého vynálezu obsahují efektivní množství jedné nebo více variant enzymů podle předloženého vynálezu, s výhodou od 0,005 do 5, výhodněji od 0,01 do 1 % hmotn. aktivního enzymu z hmotnosti

149 prostředku. Tyto kapalné prostředky pro čištění látek dále typicky obsahují aniontové povrchově aktivní činidlo, mastnou kyselinu, ve vodě rozpustnou detergentní stavební složku a vodu.

Provedení kapalného prostředku pro čištění látek podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.

Příklady 48 až 52

Kapalné prostředky pro čištění látek

složka	přiklad č.:
48	49	50	51	52
Leul25Ala + Glyl26Glu	0,05	0,03	0,30	0,03	0,10
Glyl53Glu + Ilel64Ala	-	-	-	0,01	0,20
sodná sůl alkyl(s 12 až 14
atomy uhlíku)sulfátu sod-
ného	20,00	20,00	20,00	20,00	20,00
2-butyloktanová kyselina	5,00	5,00	5,00	5,00	5,00
citrát sodný	1,00	1,00	1,00	1,00	1,00
alkohol(s 10 atomy uhlíku)-
ethoxylát (3)	13,00	13,00	13,00	13,00	13,00
monoethanolamin	2,50	2,50	2,50	2,50	2,50
voda/propylenglykol/ethanol
(100:1:1)	doplnit	do 100 %	hmotn	•

V příkladech 48 až 50 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituovat za Leul25Ala + Glyl26Glu s v podstatě podobnými výsledky.

V příkladech 51 až 52 se jakékoliv kombinace variant subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36 substituuji za Leul25Ala + Glyl26Glu a Glyl53Glu + Ilel64Ala s v podstatě

150 podobnými výsledky.

Příklady 53 až 57

Kapalné prostředky pro čištění látek

složka	přiklad č.:
53	54	55	56	57
Phel88Ser	0,05	0,03	0,30	0,03	0,10
Alal86Gln + Serl87Glu +
Phel88Asp	-	-	-	0,01	0,20
sodná sůl alkyl(s 12 až 14
atomy uhlíku)sulfátu sod-
ného	20,00	20,00	20,00	20,00	20,00
2-butyloktanová kyselina	5,00	5,00	5,00	5,00	5,00
citrát sodný alkohol(s 10 atomy uhlíku)-	1,00	1,00	1,00	1,00	1,00
ethoxylát (3)	13,00	13,00	13,00	13,00	13,00
monoethanolamin	2,50	2,50	2,50	2,50	2,50
voda/propylenglykol/ethanol
(100:1:1)	doplnit	do 100 %	hmotn	•

V příkladech 53 až 55 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituovat za Phel88Ser s v podstatě podobnými výsledky.

V příkladech 56 až 57 se jakékoliv kombinace variant subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36 substituují za Phel88Ser a Alal86Gln + Serl87Glu + Phel88Asp s v podstatě podobnými výsledky.

151

Příklady 58 a 59

Kapalný prostředek pro čištění látek

složka	příklad č.:
58	59
alkenyl(s 12 až 14 atomy uhlíku)jantarová	kys.	3,0	8,0
monohydrát kyseliny citrónové		10,0	15,0
alkylsulfát s 12 až 15 atomy uhlíku sodný 2krát ethoxylovaný sulfát sodný alkoholu		8,0	8,0
s 12 až 15 atomy uhlíku		-	3,0
7krát ethoxylovaný alkohol s 12 až 15 at.	uhlíku	-	8,0
5krát ethoxylovaný alkohol s 12 až 15 at.	uhlíku	8,0	-
diethylentriaminpenta(methylenfosfonová) :	kys.	0,2	-
kyselina olejová		1,8	-
ethanol		4,0	4,0
propandiol		2,0	2,0
Thr58Ser + SerlOOAsp + Ilel64Met + Tyr205Ala	0,2	0,2
pólyvinylpyrrolidon		1,0	2,0
potlačovatel pěnění		0,15	0,15
NaOH		do pH	7,5
perboritan		0,5	1
fenolsulfonát		0,1	0,2
peroxidasa		0,4	0,1
voda a minoritní složky	doplnit do 100

V příkladech 58 a 59 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituovat za Thr58Ser + SerlOOAsp + Ilel64Met + Tyr205Ala s v podstatě podobnými výsledky.

152

Příklady 60 až 62

Kapalné prostředky pro čištění látek

složka	příklad č.:
60	61	62
kyselina citrónová	7,10	3,00	3,00
mastná kyselina	2,00	-	2,00
ethanol	1,93	3,20	3,20
kyselina boritá	2,22	3,50	3,50
monoethanolamin	0,71	1,09	1,09
1,2-propandiol	7,89	8,00	8,00
kumensulfonát sodný	1,80	3,00	3,00
mravenčan sodný	0,08	0,08	0,08
NaOH	6,70	3,80	3,80
silikonové protipěnivé činidlo	1,16	1,18	1,18
Asn61Glu	0,0145	-	-
TyrlO3Cys + Glyl56Glu + ALa202Gln +
Thr212Gly + Leu216Gln	-	0,0145	-
GlylO5Asn + Glyl26Ser + Serl60Glu +
Thrl61Asn + Tyr205Val + Gly218Asn	-	-	0,0145
lipasa	0,200	0,200	0,200
celulasa	-	7,50	7,50
polymerní odstraňovač ušpinění	0,29	0,15	0,15
protipěnivá činidla	0,06	0,085	0,085
zjasňovací činidlo Brightener 36	0,095	-	-
Zjasňovací činidlo Brightener 3	-	0,05	0,05
alkybenzensulfonová kyselina s 12 atomy
uhlíku	9,86	-	-
sulfát alkyl(s 12 až 15 atomy uhlíku)po-
lyethoxylátu (2,5)	13,80	18,00	18,00
glukosamid s 12 atomy uhlíku	-	5,00	5,00
alkyl(s 12 až 13 atomy uhlíku)polyetho-
ethoxylát (9)	2,00	2,00	2,00
voda, parfém a minoritní složky	doplnit do	100

153

Prostředky pro čištění látek ve formě kostek

Prostředky pro čištěni látek ve formě kostek podle předloženého vynálezu vhodné pro ruční praní ušpiněných látek obsahují efektivní množství jedné nebo více variant enzymů, s výhodou od 0,001 do 10, výhodněji od 0,01 do 1 % hmotn. z hmotnosti prostředku.

Provedení prostředku pro čištění látek ve formě kostek podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.

154

Příklady 63 až 66

Prostředky pro čištění látek ve formě kostek příklad č.:

siozKa	63	64	65	66
Thr207Glu	0,3	-	0,1	0,02
Leul25Ile + Serl31Glu	-	-	0,4	0,03
sodná sůl alkyl(s 12 až 16
atomy uhlíku)sulfátu	20,00	20,00	20,00	20,00
N-methylglukamid s 12 až 14 atomy
uhlíku	5,0	5,0	5,0	5,00

alkyl(s 11 až 13 atomy uhlíku)-

benzensulfonát sodný	10,0	10,0	10,0	10,00
uhličitan sodný	25,0	25,0	25,0	25,00
difosforečnan sodný	7,0	7,0	7,0	7,00
trifosforečnan sodný	7,0	7,0	7,0	7,00
zeolit A (0,1 až 10 pm)	5,0	5,0	5,0	5,00
karboxymethylcelulosa	0,2	0,2	0,2	0,20
polyakrylát (mol. hmotn. 1400)	0,2	0,2	0,2	0,20
kokosový monoethanolamid	5,0	5,0	5,0	5,00
zjasňovací činidlo, parfém	0,2	0,2	0,2	0,20
síran vápenatý	1,0	1,0	1,0	1,00
síran hořečnatý	1,0	1,0	1,0	1,00
voda	4,0	4,0	4,0	4,00
plnidlo*	doplnit do	100 %	hmotn.
Vybere se z vhodných materiálů,	jako je	CaC03, ta lek,	hlinka,

křemičitany a podobné.

V příkladech 63 až 64 se varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiní), substituují za Thr207Glu s v podstatě podobnými výsledky.

155

V příkladech 65 až 66 se jakékoliv kombinace variant subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituují za Thr207Glu a Leul25Ile + Serl31Glu s v podstatě podobnými výsledky.

Příklady 67 až 70

Prostředky pro čištění látek ve formě kostek

složka	příklad č.:
67	68	69	70
Pro200Ser + Ala214Gly + Asn217Glu	0,3	-	0,1	0,02
Glyl01Asp+ Alal28Asp + Serl55Asp +
Serl87Asp + Thr207Gly +
Thr212Gln	-	0,3	0,4	0,03
sodná sůl alkyl(s 12 až 16
atomy uhlíku)sulfátu	20,00	20,00	20,00	20,00
N-methylglukamid s 12 až 14 atomy
uhlíku	5,0	5,0	5,0	5,00
alkyl(s 11 až 13 atomy uhlíku)-
benzensulfonát sodný	10,0	10,0	10,0	10,00
uhličitan sodný	25,0	25,0	25,0	25,00
difosforečnan sodný	7,0	7,0	7,0	7,00
trifosforečnan sodný	7,0	7,0	7,0	7,00
zeolit A (0,1 až 10 Mm)	5,0	5,0	5,0	5,00
karboxymethylcelulosa	0,2	0,2	0,2	0,20
polyakrylát (mol. hmotn. 1400)	0,2	0,2	0,2	0,20
kokosový monoethanolamid	5,0	5,0	5,0	5,00
zjasňovací činidlo, parfém	0,2	0,2	0,2	0,20
síran vápenatý	1,0	1,0	1,0	1,00
síran hořečnatý	1,0	1,0	1,0	1,00
voda	4,0	4,0	4,0	4,00
plnidlo*	doplnit do	100 %	hmotn.

Vybere se z vhodných materiálů, jako je CaC0₃, talek, hlinka

156 křemičitany a podobně.

V příkladu 67 se varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituují za Pro200Ser + Ala214Gly + Asn217Glu s v podstatě podobnými výsledky.

V příkladu 68 se varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituují za Pro200Ser + Ala214Gly + Asn217Glu a GlylOlAsp + Alal28Asp + Serl55Asp + Serl87Asp + Thr207Gly + Thr212Gln s v podstatě podobnými výsledky.

V příkladech 69 až 70 se jakékoliv kombinace variant subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituují za Val203Glu a GlylOOGlu + Ile207Ser s v podstatě podobnými výsledky.

Další čistící prostředky

Vedle shora uvedených prostředků pro čištění tvrdých povrchů, pro mytí nádobí a pro čištění látek může být do různých čistících prostředků, kde je žádoucí hydrolýza nerozpustného substrátu, zahrnuta jedna nebo více variant enzymů. Mezi takové další čistící prostředky patří, ale bez omezení jenom na tyto, orální čistící prostředky, prostředky pro čištění zubních protéz a prostředky pro čištění kontaktních čoček.

Orální čistící prostředky

V jiném provedení podle předloženého vynálezu se do prostředků užitečných pro odstraňování proteinových znečištěnin ze zubů nebo zubních protéz zahrne farmaceuticky přijatelné množství jedné nebo více variant enzymů podle předloženého vynálezu. Pojem orální čistící prostředky tak, jak je zde používán, znamená prostředky pro čištění zubů, zubní pasty, zubní gely, zubní prášky, ústní vody, ústní spreje, ústní gely, žvý157 kácí gumy, pastilky, sáčky, tablety, biogely, profylaktické pasty, zubní léčivé roztoky a podobné. Orální čistící prostředky podle předloženého vynálezu s výhodou obsahují od 0,0001 do 20 % hmotn. jedné nebo více variant enzymů podle předloženého vynálezu, výhodněji od 0,001 do 10 % hmotn., ještě výhodněji od 0,01 % do 5 % hmotn. z hmotnosti prostředku, a famaceuticky přijatelný nosič. Pojem farmaceuticky přijatelný tak, jak se zde používá, znamená, že léčivá látka, léčivý přípravek nebo inertní složky, které tento pojem popisuje, jsou vhodné pro použiti v kontaktu s tkáněmi člověka a nižších živočichů bez nepatřičné toxicity, neslučitelnosti, nestability, dráždění, alergické odpovědi a podobných, při odůvodněném poměru prospěch/ /riziko.

Farmaceuticky přijatelné orální čistící nosné složky orálních čistících složek budou v orálních čistících prostředcích typicky obvykle obsaženy v množství od 50 do 99,99 % hmotn., s výhodou 65 až 99,99, výhodněji 65 až 99 % hmotn. z celkové hmotnosti prostředku.

Farmaceuticky přijatelné nosné složky a případné složky, které mohou být zahrnuty v orálních čistících prostředcích podle předloženého vynálezu, jsou dobře známy odborníkům z oblasti techniky. Rozmanité typy prostředků, nosných složek a případných složek užitečných pro orální čistící prostředky jsou popsány v USA patentu 5 096 700 Seibela, vydaném 17. března 1992, v USA patentu 5 028 414 Sampathkumara, vydaném 2. července 1991, a v USA patentu 5 028 415 Benedicta, Bushe a Sunberga, vydaném 2. července 1991. Všechny jsou zde uvedeny jako citace.

Provedení orálního čistícího prostředku podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.

158

Příklady 71 až 74

Prostředek pro čištění zubů

složka	příklad číslo:
71	72	73	74
Thr212Gln	2,000	3,500	1,500	2,000
sorbitol (70% (hmotn.)
vodný roztok	35,000	35,000	35,000	35,000
PEG-6*	1,000	1,000	1,000	1,000
křemičitanové dentální**
abrasivo	20,000	20,000	20,000	20,000
fluorid sodný	0,243	0,243	0,243	0,243
oxid titaničitý	0,500	0,500	0,500	0,500
sodná sůl sacharinu	0,286	0,286	0,286	0,286
alkylsulfát sodný (27,9%
(hmotn.) vodný roztok)	4,000	4,000	4,000	4,000
ochucovací činidlo	1,040	1,040	1,040	1,040
karboxyvinylový*** po-
lymer	0,300	0,300	0,300	0,300
karegenan****	0,800	0,800	0,800	0,800
voda	doplnit do	100 %	hmotn.

* PEG-6 znamená polyethylenglykol s mol. hmotn. 600.

** Vysrážený oxid křemičitý identifikovaný jako Zeodent 119 od

J.M.Hubera.

Carbopol od B.F.Goodrich Chemical Company.

**** Karagenan lota od Hercules Chemical Company.

V příkladech 71 až 74 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituovat za Thr212Gln v podstatě podobnými výsledky.

159

Příklady 75 až 78

Prostředek ústní vody

složka	75	příklad 76	číslo: 77	78
Val204Asn + Thr215Asn	3,00	7,50	1,00	5,00
SDA 40 alkohol	8,00	8,00	8,00	8,00
ochucovací činidlo	0,08	0,08	0,08	0,08
emulgační čindilo	0,08	0,08	0,08	0,08
fluorid sodný	0,05	0,05	0,05	0,05
glycerin	10,00	10,00	10,00	10,00
sladidlo	0,02	0,02	0,02	0,02
kyselina benzoová	0,05	0,05	0,05	0,05
hydroxid sodný	0,20	0,20	0,20	0,20
barvivo	0,04	0,04	0,04	0,04
voda	doplnit do	100 %	hmotn.

V příkladech 75 až 78 se varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituují za Val204Asn + Thr215Asn s v podstatě podobnými výsledky.

160

Příklady 79 až 82

Prostředek ve formě pastilky

složka	příklad číslo:
79	80	81	82
Tr65Asp + Thrl32Glu +
Asnl54Asp + Thr212Glu	+
Leu216Gly + Asn217Ser	0,01	0,03	0,10	0,02
sorbitol	17,50	17,50	17,50	17,50
manitol	17,50	17,50	17,50	17,50
škrob	13,60	13,60	13,60	13,60
sladidlo	1,20	1,20	1,20	1,20
ochucovací činidlo	11,70	11,70	11,70	11,70
barvivo	0,10	0,10	0,10	0,10
kukuřičný sirup	doplnit do	100 % hmotn.

V příkladech 79 až 82 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituovat za TrpSAsp + Thrl32Glu + Asnl54Asp + Thr212Glu + Leu216Gly + Asn217Ser s v podstatě podobnými výsledky.

161

Příklady 83 až 86

Prostředek ve formě žvýkačky

složka	příklad číslo:
83	84	85	86
Tyrl03Ala	0,03	0,02	0,10	0,05
krystaly sorbitolu	38,44	38,40	38,40	38,40
základ přírodní gumy*
Paloja-T	20,00	20,00	20,00	20,00
sorbitol (70% vodný roztok)	22,00	22,00	22,00	22,00
manito1	10,00	10,00	10,00	10,00
glycerin	7,56	7,56	7,56	7,56
ochucovací činidlo	1,00	1,00	1,00	1,00

* dodáván L.A.Dreyfus Company

V příkladech 83 až 86 lze varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituovat za TyrlO3Ala v podstatě podobnými výsledky.

Prostředky pro čištění zubních protéz

V jiném provedení podle předloženého vynálezu prostředky pro čištění zubních protéz mimo ústní dutinu obsahují jednu nebo více variant enzymů. Tyto prostředky pro čištění zubních protéz obsahují efektivní množství jedné nebo více variant enzymů, s výhodou od 0,0001 do 50 % hmotn. jedné nebo více variant enzymů, výhodněji od 0,001 % do 35 %, ještě výhodněji od 0,01 % do 20 % hmotn. z hmotnosti prostředku, a nosič pro čištění zubní protézy. V oblasti techniky jsou dobře známy různé formy prostředků pro čištění zubních protéz, jako jsou efervescentní tablety a podobné (viz například USA patent 5 055 305 Younga, který je zde zahrnut jako citace). Obvykle obsahují jednu nebo více variant enzymů pro odstraňování proteinových skvrn ze zubních protéz.

162

Provedení prostředku pro čištění zubních protéz podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.

Příklady 87 až 90

Dvouvrstvá efervescentní tableta pro čištění zubních protéz

složka	příklad číslo:
87	88	89	90
kyselá vrstva:
Leu216Pro	1,0	1,5	0,01	0,05
kyselina vinná	24,0	24,0	24,00	24,00
uhličitan sodný	4,0	4,0	4,00	4,00
kyselina sulfamová	10,0	10,0	10,00	10,00
PEG 20,000	4,0	4,0	4,00	4,00
hydrogenuhličitan sodný	24,5	24,5	24,50	24,50
persíran draselný	15,0	15,0	15,00	15,00
pyrofosforečnan sodný	7,0	7,0	7,00	7,00
pyrogenní oxid křemičitý	2,0	2,0	2,00	2,00
TAED*	7,0	7,0	7,00	7,00
ricinoleylsulfosukcinát	0,5	0,5	0,50	0,50
ochucovací činidlo	1,0	1,0	1,00	1,00
alkalická vrstva:
monohydrát perboritanu
sodného	32,0	32,0	32,00	32,00
hydrogenuhličitan sodný	19,0	19,0	19,00	19,00
EDTA	3,0	3,0	3,00	3,00
trifosforečnan sodný	12,0	12,0	12,00	12,00
PEG 20,000	2,0	2,0	2,00	2,00
persíran draselný	26,0	26,0	26,00	26,00
uhličitan sodný	2,0	2,0	2,00	2,00
pyrogenní oxid křemičitý	2,0	2,0	2,00	2,00
barvivo/ochucovací činidlo	2,0	2,0	2,00	2,00

Tetraacetylethylendiamin

163

V příkladech 87 až 90 se varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituují za Leu216Pro s v podstatě podobnými výsledky.

Prostředky pro čištění kontaktních čoček

V jiném provedení podle předloženého vynálezu prostředky pro čištění kontaktních čoček obsahují jednu nebo více variant enzymu podle předloženého vynálezu. Tyto prostředky pro čištění kontaktních čoček obsahují účinné množství jedné nebo více variant enzymů, s výhodou od 0,1 do 50, výhodněji od 0,01 do 20, ještě výhodněji od 1 do 5 % hmotn. jedné nebo více variant enzymu z hmotnosti prostředku a nosič pro čištění kontaktních čoček. Různé formy prostředků pro čištění kontaktních čoček, jako jsou tablety, kapaliny a podobné, jsou dobře známy z oblasti techniky (viz například USA patent 4 863 627 Daviese, Meakena a Reese, vydaný 5. září 1989, znovuvydaný USA patent 36 672 Huthe, Lama a Kiraiho, znovuvydaný 24. května 1988, USA patent 4 609 493 Scháfera, vydaný 2. září 1986, USA patent 4 690 793 Ogunbiyiho a Smithe, vydaný 1. září 1987, USA patent 4 614 549 Ogunbiyiho, Riedhammera a Smithe, vydaný 30. září 1986, a USA patent 4 285 738 Ogata, vydaný 25. srpna 1981; všechny jsou zde zahrnuty jako odkazy) a jsou obecně vhodné pro zahrnutí jedné nebo více variant enzymů podle předloženého vynálezu pro odstraňování proteinových skvrn z kontaktních čoček.

Provedení prostředku pro čištění kontaktních čoček podle předloženého vynálezu je ilustrováno následujícími příklady.

164

Příklady 91 až 94

Enzymatický roztok pro čištění kontaktních čoček

složka	91	příklad číslo:	94
92	93
Alal99Thr + Val204Gln	0,01	0,5	0,1	2,0
glukosa neiontové povrchově aktivní činidlo (kopolymer polyoxyethylen/polyoxypro-	50,0	50,0	50,0	50,0
pylen) aniontové povrchově aktivní činidlo (sodná sůl sufrikesteru polyoxyethy-	2,00	2,0	2,0	2,0
lenalkylfenyletheru)	1,00	1,0	1,0	1,0
chlorid sodný	1,00	1,0	1,0	1,0
borax voda	0,30	0,3 doplnit	0,3 do 100	0,3

V příkladech 91 až 94 se varianty subtilisinu Carlsberg uvedené v tabulkách 3 až 36, mimo jiné, substituují za Alal99Thr + Val204Gln s v podstatě podobnými výsledky.

I když jsou popsána příslušná provedení předmětu vynálezu, odborníkovi z oblasti techniky bude zřejmé, že lze udělat různé změny a modifikace předmětu vynálezu, aniž by se tyto odchýlily od ducha a rozsahu vynálezu. Připojené patentové nároky jsou myšleny tak, že pokrývají všechny tyto modifikace, které jsou v rozsahu vynálezu.

Claims (9)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Varianta subtilisinu Carlsberg s modifikovanou aminokyselinovou sekvencí přírodní aminokyselinové sekvence subtilisinu Calsberg, která obsahuje oblast první smyčky, oblast druhé smyčky, oblast třetí smyčky, oblast čtvrté smyčky, oblast páté smyčky a oblast šesté smyčky, tyto modifikované aminokyselinové sekvence obsahují substituci v jedné nebo ve více polohách v jedné nebo více oblastech smyček, při čemž

   A) jestliže se substituce vyskytuje v oblasti první smyčky, pak se tato substituce vyskytuje v jedné nebo ve více z poloh 58, 59, 60, 61, 62, 64 nebo 65, při čemž

   a) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   58, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser,

   b) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   59, potom je substituující aminokyselinou Glu,

   c) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   60, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   d) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   61, potom je substituující aminokyselinou Asp, Gin,

   Glu nebo Ser,

   e) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   62, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   f) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   64, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Pro nebo Ser, a

   g) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   65, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Gly nebo Ser,

   B) jestliže se substituce vyskytuje v oblasti druhé smyčky, pak se tato substituce vyskytuje v jedné nebo více Z poloh 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 nebo 106, při čemž

   166

   a) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   94, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Met, Pro, Ser nebo Thr,

   b) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   95, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val,

   c) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   96, potom je substituující aminokyselinou Asn, Gin, Glu nebo Ser,

   d) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   97, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu,

   e) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   98, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu,

   f) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   99, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   g) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   100, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu,

   h) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   101, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   i) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   102, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu,

   j) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   103, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val,

   k) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   104, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu,

   1) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   167

   105, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Pro nebo Ser, a

   m) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   106, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn,

   Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Leu, Met, Pro, Ser,

   Thr nebo Val,

   C) jestliže se substituce vyskytuje v oblasti třetí smyčky, pak se tato substituce vyskytuje v jedné nebo více Z poloh 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131 nebo 132, při čemž

   a) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   125, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn,

   Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Met, Pro, Ser,

   Thr nebo Val,

   b) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   126, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asp,

   Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   c) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   127, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   d) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   128, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser nebo Thr,

   e) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   129, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo

   Glu,

   f) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   130, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   g) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   131, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo

   Glu, a

   h) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   132, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser,

   D) jestliže se substituce vyskytuje v oblasti čtvrté smyčky, pak se tato substituce vyskytuje v jedné nebo více

   168

   Z poloh 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165 nebo 166, při čemž

   a) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   153, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   b) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   154, potom je substituující aminokyselinou Asp, Gin, Glu nebo Ser,

   c) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   155, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu,

   d) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   156, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   e) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   157, potom je substituující aminokyselinou Asp, Gin, Glu, Ser,

   f) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   158, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu,

   g) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   159, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   h) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   160, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu,

   i) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   161, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser,

   j) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   162, potom je substituující aminokyselinou Asp, Gin, Glu nebo Ser,

   k) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   163, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser,

   l) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   164, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn,

   169

   Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val,

   m) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   165, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Pro nebo Ser, a

   n) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   166, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn,

   Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro,

   Ser, Thr nebo Val,

   E) jestliže se substituce vyskytuje v oblasti páté smyčky, pak se tato substituce vyskytuje v jedné nebo více z poloh 186, 187, 188, 189 nebo 190, při čemž

   a) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   186, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser a Thr,

   b) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   187, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo

   Glu,

   c) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   188, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn,

   Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro,

   Ser, Thr, Tyr nebo Val,

   d) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   189, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo

   Glu, a

   e) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   190, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo

   Glu, a

   F) jestliže se substituce vyskytuje v oblasti šesté smyčky, pak se tato substituce vyskytuje v jedné nebo více z poloh 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218 nebo 219, při čemž

   a) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   199, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp,

   Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser nebo Thr,

   b) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   170

   200, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly nebo Ser,

   c) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   201, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   d) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   202, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser nebo Thr,

   e) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   203, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser,

   f) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   204, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Met, Pro, Ser nebo Thr,

   g) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   205, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val,

   h) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   206, potom je substituující aminokyselinou Asp nebo Glu,

   i) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   207, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser,

   j) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   208, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val,

   k) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   209, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly nebo Ser,

   l) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   210, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser,

   m) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   211, potom je substituující aminokyselinou Asp, Gin,

   171

   Glu nebo Ser,

   n) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   212, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser,

   o) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   213, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val,

   p) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   214, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser nebo Thr,

   q) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   215, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser,

   r) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   216, potom je substituující aminokyselinou Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val,

   s) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   217, potom je substituující aminokyselinou Asp, Gin, Glu nebo Ser,

   t) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   218, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser, a

   u) jestliže se substituce vyskytuje v poloze

   219, potom je substituující aminokyselinou Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser, při čemž varianta subtilisinu Carlsberg má sníženou adsorpci na nerozpustný substrát a zvýšenou hydrolýzu nerozpustného substrátu při srovnání s přírodním subtilisinem Carlsberg.
2. 2. Varianta subtilisinu Carlsberg podle nároku 1, při čemž jedna nebo více substitucí se nachází v oblasti první smyčky.
3. 3.

   Varianta subtilisinu Carlsberg podle nároku 1, při čemž

   172 jedna nebo více substitucí se nachází v oblasti druhé smyčky.
4. 4. Varianta subtilisinu Carlsberg podle nároku 1, při čemž jedna nebo více substitucí se nachází v oblasti třetí smyčky.
5. 5. Varianta subtilisinu Carlsberg podle nároku 1, při čemž jedna nebo více substitucí se nachází v oblasti čtvrté smyčky.
6. 6. Varianta subtilisinu Carlsberg podle nároku 1, při čemž jedna nebo více substitucí se nachází v oblasti páté smyčky.
7. 7. Varianta subtilisinu Carlsberg podle nároku 1, při čemž jedna nebo více substituci se nachází v oblasti šesté smyčky.
8. 8. Čistící prostředek, který je vybrán ze skupiny sestávající z prostředku pro čištění tvrdého povrchu, prostředku pro mytí nádobí, ústního čistícího prostředku, zubního čistícího prostředku, čistího prostředku pro kontaktní čočky a čistícího prostředku látek, vyznačující se t í m, že tento čistící prostředek obsahuje variantu subtilisinu Carlsberg podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 a nosič čistícího prostředku, čistící prostředek s výhodou znamená prostředek pro čištění tvrdých povrchů nebo prostředek pro čištění látek, tento prostředek s výhodou obsahuje alespoň 5 % hmotn. povrchově aktivního činidla a alespoň 5 % hmotn. stavebních složek, vztaženo na hmotnost prostředku, s výhodou tento prostředek dále obsahuje takové materiály čistícího prostředku, které jsou vybrány ze skupiny sestávající z rozpouštědel, pufrů, enzymů, činidel pro odstraňování ušpinění, činidel pro odstraňování ušpinění hlinkou, dispergačních činidel, zjasňovacích činidel, potlačovatelů pěnění, avivážních činidel látek, zesilovačů

   173 pěnění, stabilizátorů enzymů, bělících činidel, barviv, parfémů a jejich směsí.
9. 9. Gen mutantu subtilisinu Carlsberg, který kóduje variantu subtilisinu Carlsberg podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7.