CZ225394A3

CZ225394A3 - Micro-spheres based on fatty acids and containing enterococci employed for supporting growth of meat and for improving its quality

Info

Publication number: CZ225394A3
Application number: CZ942253A
Authority: CZ
Inventors: William M Rutherford; Jack E Allen; Scott M Dennis; Mark A Hinds; Gregory R Dana
Original assignee: Pioneer Hi Bred Int
Priority date: 1992-03-17
Filing date: 1993-02-03
Publication date: 1995-01-18
Also published as: EP0631616A1; EP0631616A4; WO1993019162A1; RO112896B1; RU94043791A; SK111694A3; JPH07505056A; CA2131790A1; HU9402673D0; HUT67965A; MX9301017A; BG99113A; RU2109052C1; JP2849877B2; SI9300128A; BR9306121A

Description

Mikrosféry na bázi mastných pro použití k podpoře růstu

Dosavadní stav techniky kyselin, obsahující enterokoký, a zlepšeni kvality masa

Prostředky k podpoře růstu ve formě antibiotik se široce používají pro drůbež, zejména kuřata a krůty. Prostředky pro podporu růstu, jako je Stafac^R a BMD^R (bačitracinmethylendisalicylát) jsou známá antibiotika a používají se v subterapeutických dávkách, například 10 g/t a 25 g/t, jako přísady do krmiv za účelem podpory žádoucích charakteristik růstu u drůbeže. Používání antibiotik k tomuto účelu se však stalo v nedávné době předmětem určité kritiky. Jednou z námitek je možnost, že si drůbež časem vyvine toleranci vůči antibiotikům a nakonec již antibiotikum nepůsobí při podpoře růstu příznivě. Další námitky se týkají zdravotních rizik nepřírodních antibiotických přísad a zhoršujících účinků, které mohou mít. Nicméně vzhledem ke svým výhodám se antibiotika dosud běžně používají za účelem zlepšení konverze krmivá, zlepšení složení masa a k podpoře růstu.

Je známo, že určité bakterie při přidání ke krmivu potenciálně příznivý účinek. Tento příznivý účinek spočívá v dodání přirozené střevní mikroflóry. Některé společnosti nabízejí na prodej přímo zkrmované mikrobiální prostředky, které obsahují požadované bakterie. Přímo zkrmované mikrobiální prostředky však představují určité těžkosti při dodržení stability produkt. Typicky se přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek přidává ke krmivu v poměrně nízkém množství, například asi 0,1 %. Nepoužité krmivo nebo krmná přísada, obsahující přímo zkrmovaný mikrobiální přípravek, se však často skladuje na farmách dlouhou dobu. Toto skladování častokrát probíhá za podmínek, v nichž se vyskytuje určitá vlhkost a vysoká teplota. V mnoha případech je přítomno právě dostatečné množství vlhkosti, aby bylo aktivováno zahájení růstu bakterií, ale množství dosud nedostatečné k jeho podpoře.

V důsledku toho bakterie zahynou a aktivita přímo zkrmovaného mikrobiálního přípravku zmizí. V jiných případech antibiotika, přidávaná ke krmivu nebo krmné přísadě, obsahující přímo zkrmovaný mikrobiální přípravek, nepříznivě interagují s bakteriemi, zejména je-li přítomno malé množství.ylhkosti, a bakterie opět hynou. Existuje tedy významný problém dlouhodobé skladovací stability přímo zkrmovaných mikrobiálních pří pravků.

V jiném prostředí, je-li přímo zkrmovaný mikrobiální přípravek přidáván například ke krmivu pro kuřata, je obvyklé materiál peletizovat a přímo zkrmovaný mikrobiální přípravek přidávat před peletizací. Vlhkost z páry, používané při peletizaci, částečně aktivuje bakterie, avšak může při nedostatečném množství vlhkosti způsobit jejich zánik. Bakterie mohou zahynout také v důsledku tepla při peletizaci. Pak je zde také problém kyselého prostředí v žaludku, potenciálně inaktivujícího bakterie, než se reálně dostanou do střev. Existuje tedy trvalá potřeba přímo zkrmovaných mikrobiálních přípravků, které by uvolňovaly mikroorganismy pouze ve správném čase ve střevě a nikoli drive vlivem vlhkosti nebo nepříznivých podmínek pH, jaké existují v trávicím traktu před tenkým střevem.

U drůbeže je zvlášť žádoucí pokud možno dosahovat určitých charakteristik. Patří mezi ně zvýšený hmotnostní přírůstek,, lepší konverze krmivá, složení masa a konečně jednotná hmotnost hejna. Zvýšený hmotnostní přírůstek a lepší konverze krmivá jsou samozřejmě žádoucí pro související úspory, které doprovázejí tyto žádoucí výsledky. Složení masa je důležité proto, že nejvhodnější oblastí pro ukládání tkáně za účelem získání výběrového masa je hruď. Není tedy důležitý pouhý hmotnostní přírůstek, ale i místo, kde se ukládá. Jednotná hmotnost hejna je důležitá proto, že má-1i více ptáků normální velikost, je třeba méně ruční práce a zpracovatel se může více spoléhat na strojní zpracování. Naproti tomu, pokud se ptáci značně liší co do velikosti od velmi malých po velmi velké i při zachování celkové hmotnosti hej na,. vyžadují menší a větší ptáci mnohem více ruční práce a pro nejednotnou velikost nemohou být snadno zpracováváni strojně. Jednotná velikost hejna s vysokým procentem distribuce v rozmezí normální velikosti, umožňující zpracování kuřat normalizovaným zařízením, je tedy žádoucí charakteristikou.

Podobně by byl velkým přínosem přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek, který by byl vhodný nejen pro drůbež, jako jsou kuřata a krůty, ale také vhodný pro prasata.

Primárním účelem vynálezu je nalézt přímo zkrmovaný mi k robiální prostředek pro drůbež, neobsahující antibiotika, který obsahuje pouze mikrosféry na bázi mastných kyselin s obsahem přirozeně se vyskytujících organismů.

Dalším primárním účelem vynálezu je nalézt přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek, který obsahuje dva organismy, totiž Enterococcus faecium 301, č. DSM DSM-Nr. 4789, a Enterococcus faecium 202, č. DSM DSM-Nr. 4788. DSM je zkratka ně mecké sbírky bakteriálních kultur Deutsche Sammlung von Mikroorganisměn, umístěné v Braunschweigu, Německo. Tyto organismy budou uloženy v ATCC s uvolněním všech omezení po zprá vě o přípustných nárocích.

Dalším účelem vynálezu je přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek, který u drůbeže poskytuje zvýšený hmotnostní přírůstek, který poskytuje lepší konverzi krmivá, který poskytuje vyšší výtěžek hrudního masa a který poskytuje jednotnou hmotnost hejna v rozmezí normálních velikostí.

Dalším primárním účelem vynálezu je přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek vhodný jako přísada do krmné dávky pro drůbež, obsahující bakterie, které jsou ve formě mikrosfér, s použitím speciální rotační techniky pomocí matrice volných mastných kyselin.

Dalším účelem vynálezu je přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek, který je stabilní po dobu v rozsahu 3 až 6 měsíců bez významného snížení počtu organismů.

Dalším účelem vynálezu je způsob rotačního formování kuliček ze sušených bakterií, který umožňuje dosáhnout jednotné vel i kosti.

Dalším účelem vynálezu jsou kuličky bakterií, sušených na rotačních discích, které jsou volně sypké a snadno zpracovatelné do krmných dávek pro drůbež.

Dalším účelem vynálezu je mikrosféra z mastné kyseliny, obsahující určité bakterie, přičemž tyto kuličky jsou vhodné jako přímo zkrmované mikrobiální prostředky pro drůbež a prasata .

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je způsob a kompozice pro podporu růstu drůbeže a prasat, spočívající v tom, že se k běžné krmné dávce přidá malé, avšak pro podporu růstu účinné množství přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku, který obsahuje sušené mikrosféry Enterococcus faecium 301, č. DSM DSM-Nr. 4789, na bázi mastných kyselin a sušené mikrosféry Enterococcus faecium 202, č. DSM DSM-Nr. 4788, na bázi mastných kyselin, kde jsou mikrosféry výhodně formovány sušením na rotačních discích.

Bylo překvapivě zjištěno, že podpory růstu drůbeže a prasat je možno dosáhnout tak, že se k běžným krmným dávkám přidává určité množství mikrosfér Enterococcus faecium 301, č. DSM DSM-Nr. 4789, na bázi mastných kyselin a určité množství mikrosfér Enterococcus faecium 202, č. DSM DSM-Nr.

4788, na bázi mastných kyselin. Použitou mastnou kyselinou může být kterákoli z volných mastných kyselin C₁₂ až C24, výhodně kyselina stearo/á. Organismy jsou výhodně přítomny v přibližně stejném množství, ale jejich zastoupení se může pohybovat od asi 30 do asi 70 % jednoho z organismů, přičemž zbytek tvoři druhý organismus.

Není přesně známo, proč tyto dva organismy poskytují žádoucí charakteristiky podle vynálezu, zvláště pro drůbež, zejména zvýšený hmotnostní přírůstek, lepší konverzi krmivá, zvýšený výtěžek hrudního masa a zvýšenou jednotnost hmotnosti hejna. Je skutečností, že se tak děje, pokud jsou oba přítomny v takové kombinaci, aby mohly navzájem nějak interagovat, a za předpokladu, že jejich množství je ve výše uvedeném rozmezí. Právě určitou interakcí a vzájemným působením uvedených faktorů se dosahuje žádoucích charakteristik vynálezu, které umožňují významně zlepšit u drůbeže složení, kvalitu a zpracování masa. Podobných výsledků je možno dosáhnout i u prasat, jak je dokumentováno v příkladech.

Množství přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku, přidávaného ke krmné dávce, se muže značně měnit, avšak obvykle by mělo být v rozmezí asi 0,5 až asi 2,0 libry na tunu krmivá, obvykle asi 0,8 až asi 1,2 libry na tunu krmivá a nejčastěji činit asi 1 libru na tunu krmivá. Počet organismů, tj. počet jednotek tvořících kolonii na gram, přítomný v probiotiku, se může rovněž pohybovat v rozmezí asi Ι.ΙΟθ až asi 2.10⁹ CFU/g a výhodně čini asi 2.10⁸ CFU/g.

Jestliže se výše popsaný přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek zvolí pro zkrmování v krmné dávce, chová se kombinace výše uvedených dvou kmenů jako promotor růstu. Nyní používané růstové promotory zahrnují antibiotika, jako je Stafac^R a BMD, Výhod subterapeutických množství antibiotik jako růst podporujících přísad je možno dosáhnout pomocí přirozeně se vyskytujících organismů podle vynálezu, pokud se přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek vyrábí v souladu s vynálezem a přidává ke krmivu způsobem podle vynálezu. Byly dále provedeny určité pokusy, poukazující na to, že společná kombinace přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku a promotoru růstu přesahuje svými výhodami každou z jednotlivých složek, a proto je možno je používat společně, je-li to žádoucí. Ve většině případů je však výhodné používat přimo zkrmovaný mikrobiální prostředek samotný, poněvadž jedním z účelů vynálezu je eliminovat používání růstových promotorů vůbec.

Způsob zpracování organismů není rozhodující, pokud je možno organismy udržet naživu až do dodání zvířatům a uvést do takové formy, že se dobře spojí s krmivém a mají obecně jednotnou velikost, aby bylo možno kontrolovat dávkování.

Výhodným prostředkem ke splnění těchto požadavků je zpracování organismů do mikrosfér s matricí z mastné kyseliny. Mikrosféra označuje matrici z mastné kyseliny, do níž jsou zapracovány různé organismy. Liší se od mikrokapsle, v níž jsou vždy zapouzdřeny jednotlivé organismy. V mikrosféře funguje v kompozitu matrice z mastné kyseliny podobně vztahu mezi matricí těsta sušenky a čokoládovými zlomky, kde čokoládové zlomky představují skupiny organismu. Tento postup je popsán v základní přihlášce spolupůvodce Rutherforda et al . Při tomto postupu se bakterie kombinují se zahřátou mastnou kyselinou. Teplota mastné kyseliny a.doba.vystavení bakterií působení mastné kyseliny se reguluje tak, aby se bakterie udržely naživu, avšak aby bylo možno je s mastnou kyselinou promísit. Směs se umístí na rotující disk za vzniku mi krosfér s obsahem bakterií, kde mastná kyselina působí jako matrice. Použitím této metody se dosahuje několika významných výhod. Za prvé se bakterie během zpracování udrží naživu; za druhé proces v kombinaci s technikou rotačního disku umožňuje získat jednotnou velikost mikrosfér pro lepší dávkování. Za třetí umožňuje charakter matrice, tj. mastné kyseliny, tvorbu jedinečných mikrosfér. Kombinace těchto faktorů vede s maximální efektivnosti k vysoce stabilnímu přímo zkrmovanému mikrobiálnímu prostředku.

V procesu podle základní přihlášky je důležité si povšimnout, že vznikají mikrosféry, kde každou kuličku tvoři množství bakterií v matrici z volné mastné kyseliny spise než aby byla každá jednotlivá, bakterie zapouzdřena v povlaku nebo filmu podobné vrstvě mastné kyseliny. To přináší výhody stability a účinnějšího dávkování při zpracování bakterií.

Výhodným materiálem matrice je volná mastná kyselina C₁₂ až C₂4- Je možno používat i směsí mastných kyselin, ale výhodné je používat jednotlivou čistou mastnou kyselinu. Je rovněž výhodné, je-li volnou mastnou kyselinou nenasycená mastná kyselina; nejvýhodnější je kyselina stearová.

Obecně řečeno je důležité, aby mastná kyselina měla teplotu táni nižší než 75 °C, výhodně v rozmezí 40 až 75 °C. Aby mohla účinně působit jako matrice, musí být samozřejmě pevná za teploty místnosti. Těmto požadavkům vyhovují všechny volné mastné kyseliny v mezích dosud uvedené chemické definice.

Za účelem zvýšení stability produktu.se bakterie do produktu obvykle přidávají v lyofi1 izované formě. Pak je možno je oživit přídavkem vlhkosti.

Mikrosféry, vyrobené dále popsaným způsobem, jsou obvykle z asi 50 až více než 90 % hmotnostních tvořeny složkou mastné kyseliny a zbytek je bakteriální kultura. Výhodné rozmezí je asi 60 až asi 75 % mastné kyseliny. Je-li použito příliš málo mastné kyseliny, není matrice vhodná pro ochranu. Naproti tomu při použití přílišného množství je matrice příliš silná a neumožňuje adekvátní uvolňování ve střevě.

Způsob podle vynálezu použivá k vytváření mikrosfér rotačního disku. Technologie rotačního disku spočívá obecně v tom, že se suspenze bakterií a mastné kyseliny dokonale promísi a směs se stejnou rychlostí přivádí na střed rotujícího disku z nerezavějící oceli. Vlivem odstředivé síly je směs vrhána směrem ven a tvoři mikrosféry. Ty se pak sbírají v chladicí komoře, udržované na podmínkách okolí nebo mírně nižších, třídí a připravují k balení.

Zatímco zapouzdřování na rotačních discích je známo, není známo vyrábět mikrosféry, obsažené v matrici bez obklopující slupky, ani použití výroby mikrosfér nebo zapouzdřování u lyofi 1 izovaných bakterií. 0 zapouzdřování s použitím rotačního disku obecně pojednává Johnson et al. ze Southwest Re9 search Institute of San Antonio v Journal of Gas Chromatography, říjen 1965, str. 345-347. Zařízení s rotačním diskem, vhodné pro použití podle vynálezu, je podrobně popsáno v patentu US 4 675 140, uděleném Sparksovi 23.6.1987 a nazvaném Způsob povlékání částic pro kapky kapaliny, na nějž se zde odkazuje. Nejvýhodnější je však postup, popsaný v základní při hlášce.

Je nutno zdůraznit, že rotační tvorba mikrosfér poskytuje zřetelně odlišný produkt jak od běžného rozprašovacího sušení, tak od mikrozapouzdřování. Při běžném rozprašovacím sušení ve věži existuje tendence ke shlukování částic a vzniku nepravidelného povlaku, což významně ovlivňuje stabilitu produktu, snad na úroveň dní až týdnů. Mikrozapouzdřováním vzniká kolem objektu slupka a ukázalo se, že bakterie jsou pak příliš malé, příliš těžko se udržují při životě nebo získávají v jednotné velikosti, aby byly prakticky použitelné. Při výrobě mikrosfér, zejména s použitím prostředků, popsaných v tomto vynálezu, se dosahuje stability získaných bakterií, a to i při vystavení působení vlhkosti a antibiotik, po dobu tří až šesti měsíců a životnost bakterií v částicích s rovnoměrnou distribucí zůstává zachována.

Používají-li se mikrosféry na bázi volných mastných kyselin podle vynálezu v uvedených rozmezích, může rotační disk, nejčastěji o rozměru 4-6, rotovat rychlostí 2000 až 4000 min^-1, výhodně asi 2500 až 3200 min a rychlost podávání může být 50 až 200 g/min. ných znalostí zahrnují použití dvou výše uvedených organismů, 3000 min^_i a rychlost podávání 35 % bakterií a 65 % kyseliny podmínek se získá produkt o ve

Výhodné podmínky podle současkyseliny stearové, použití čtyřpalcový rotační disk, suspenze bakterií, obsahující tearové, 100 g/min. Za těchto i kosti částic 75 až 300 μιτι s výhodnou velikostí pod 250 gm.

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1, 2 a 3 graficky znázorňují stabilitu kmenů s použitím matrice kyseliny stearové.

Obr. 4 představuje graf, znázorňuj i cí... di stři buci hrudního masa při krmných pokusech s přímo zkrmovanou mikrobiální kompozicí podle vynálezu.

Na obr. 5 je graf, znázorňující distribuci tělesné hmotnosti při krmných pokusech s přímo zkrmovanou mikrobiální kompozicí podle vynálezu.

Na obr. 4 a 5 je znázorněn kontrolní pokus, pokus s použitím antibiotika a pokus s použitím přimo zkrmovaného mikrobiálního prostředku podle vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Vynález je blíže osvětlen na příkladech provedení, které však neomezují jeho rozsah. Příklady jsou popsány v souvislosti s obrázky 1, 2 a 3 na připojených výkresech. Příklady 1 až 4 a obr. 1, 2 a 3 se-vztahují k dřívějšímu vynálezu stejného původce. Přiklad 5 a tabulky 2 až 10 se vztahují ke způsobu podle tohoto vynálezu pro drůbeží přímo zkrmovaný prostředek. Příklad 6 se vztahuje konkrétně na krůty a příklad 7 se vztahuje na prasata.

Příklad 1

Příklad 1 koreluje s obr. 1. Osvětluje stabilitu produktu při použití dvou různých kmenů Enterococcus faecium při teplotách 4 a 27 °C. Na obr. 1 je znázorněna stabilita zapouzdřených kmenů Enterococcus faecium po zapouzdření pomocí zařízení s rotujícím diskem s použitím kyseliny stearové a při hmotnosti kultury 35 %. Tvorba mikrosfér probíhala za výše uvedených podmínek, tj. suspenze bakterií v kyselině stearové 35/65 při teplotě 60 °C s použitím čtyřpalcového rotačního disku s rychlostí otáčení 3000 min^-1 a rychlostí podávání 100 g/min. Kuličky byly vytvořeny, vloženy do teplem zatavených sáčků s parní bariérou a týdně byly destruktivně odebírány vzorky pro stanovení CFU. Je patrné, že produkt podle vynálezu si podržel vynikající počty jednotek tvořících kolonie organismů (CFU) po dobu skladování dosahující až 70 dní .

Příklad 2

Příklad 2 je nutno interpretovat ve spojení s obr. 2. Obrázek znázorňuje stabilitu jednotlivých kmenů ve formě mikrosfér při přimíšení k obvyklému krmivu v přítomnosti tří drůbežích antibiotik. Krmivo mělo slčfzení:

jemně drcená kukuřice 54 % sojová mouka 26 % rybí moučka 2 % fosforečnan divápenatý 1,5 % vápenec 1 % sojový olej 5,5 % obsah vlhkosti 12 %

Byla přidána tři antibiotika v tomto množství: dekochionát 6 % (454 ppm), salinomycin (50 ppm) a sodná sůl monensinu (120 ppm) .

Ke směsi byla přidána kultura v množství, poskytujícím přibližně Ι.ΙΟθ CFU/g krmivá. Krmivo bylo baleno do teplem zatavených sáčků a inkubováno při teplotě místnosti. Týdně byly odebírány vzorky pro stanovení CFU. Graf na obr. 2 ukazuje výbornou stabilitu.

Příklad 3

Příklad 3 je třeba interpretovat ve spojení s obr. 3. Osvětluje stabilitu mikrosfér Enterococcus faecium v krmivu v přítomnosti různých antibiotik. Krmivo bylo tvořeno 60 % jemně drcené kukuřice, 38 % sojové mouky a 2 % vápence s obsahem vlhkosti asi 14 %. Byla přidána kultura do hodnoty přibližně 10^ CFU/g krmivá a směs promísena. Deseti 1 ibrové alikvotní díly byly skladovány v zatavených sáčcích při 20 °C a týdně po dobu 16 týdnů byly odebírány vzorky. Do krmivá

byla zahrnuta antibiotika	v tomto množství:
methylendi sali cylát	bacitracinu 50 g/t
carbadox	50 g/t
chl ortetracykli n	200 g/t
1 asaloci d	/ ’ 30 g/t
lincomycin	100 g/t
neomyci n	140 g/t
oxytetracykli n	150 g/t
sulfamethazi n	100 g/t
tyl osin	100 g/t
vi rgi niamyci n	20 g/t
ASP250	100 g/t
furadox	10 g/t

V tabulce 1 jsou uvedeny minimální doby pro ztrátu 1 log jednotek tvořících kolonie (CFU).

Tabulka 1. Doba v týdnech pro ztrátu 1 log počtu CFU při 20 °C v mačkaném krmivu se 14 % vlhkosti

antibiotikum	doba skladov
1 kontrol a	103
bací traci n	88
carbadox	54
chl ortetracykli n	60
lasalocid	......57. ..
1 i ncomyci n	75
neomyci n	53
oxytetracykli n	59
sulfamethazi n	62
ty1osi n	52
v i rgi ni amyci n	112
ASP250	67
furadox	53

Příklad 4

V příkladu 4 byla stanovována stabilita produktu po peletizaci pro použití v krmivu pro kuřata. Mikrosféry byly vytvořeny za výše uvedených podmínek. V tomto pokusu byly dále použity tyto podmínky:

surový protein, ne méně než 18,0 % surový tuk, ne méně než 5,0 % surová vláknina 6,0 %

S dále uvedenými přísadami a podmínkami byly vyrobeny pelety s antibiotikem (CTC 50 g/t) a bez něho: kukuřice, SBM, syrovátka, sojový olej, fosforečnan divápenatý, vápenec, stopový minerální premix, vitaminový premix, selen, síran měďnatý. Kultura byla přidána v množství přibližně 5.10^

CFU/g krmivá. Teplota kondicionace byla 70 °C a pelety za tryskou měly 78 sáčcích a týdně °C. Pelety byly skladovány v nezatavených byly odebírány vzorky pro stanovení CFU.

V žádném z případu nebyla podmínkami peletizace nepříznivě ovlivněna stabilita produktu. Peletizovaný produkt měl konkrétně stabilitu rovnou stabilitě nepeletizovaného produktu .

Příklad 5

4560 jednodenních kuřecích brojlerú Peterson x Arbor Acres bylo náhodně rozděleno do podlahových posad (tabulka 2) s upravovaným stelivem a krmeno 45 dní. Všichni ptáci, uhynuli během prvních 5 dní, byli nahrazeni ptáky stejného pohlaví z téže dodávky a stejně ošetřenými. Složení základních výživných iniciačních, růstových a útlumových dávek je uvedeno v tabulce 3. Tyto krmné dávky byly formulovány tak, aby obsahovaly 1425 (iniciační), 1450 (růstová) a 1475 (útlumová) kcal ME/lb spolu s 90 g/t monesinu. Iniciační dávka byla podávána od 1. do 21. dne věku, růstová od 21. do 42 dne věku a útlumová od 42. do 49. dne věku. Jako jednotlivé pokusy byly hodnoceny: drcená negativní kontrola (kontrola M); vybrané zapouzdřené přímo zkrmované mikrobiální kultury obsahující Enterococcus faecium 301, č. DSM-Nr. 4789 a Enterococcus faecium 202, č. DSM-Nr. 4788, zapouzdřené mastnou kyselinou pomocí rotačního disku podle příkladu 1 a přítomné jednotlivě v množství 50 % přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku, dodávaného k drcenému krmivu v dávce 1.10$ CFU/g (probiotikum M); peletizovaná negativní kontrola (kontrola P); přimo zkrmovaný mikrobiální prostředek v množství 1.10® CFU/g drceného krmivá, peletizováno (přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek P) a pozitivní kontrola s obsahem 10 g/t virginiamycinu, peletizovaná (Stafac^R 10). Iniciační dávka byla v pokusech, kde byla provedena peletizace, rozdrobena. Pro každou pokusnou dávku bylo použito zdvojeně dvanáct posad s 35 kohoutky a 35 slepi čkami.

Pro každou posadu byla zaznamenávána tělesná hmotnost, spotřeba krmivá a úmrtnost po prvních 5 dnech. Pro každou posadu byla vypočtena konverze krmivá, upravená konverze krmivá a konverze krmivá upravená na tělesnou hmotnostVšechna data byla podrobena rozptylové analýze a rozdíly byly stanoveny pomocí Fisherova LSD.

Před pokusem byl koncentrát přímo zkrmované mikrobiální kultury nastaven uhličitanem vápenatým. Teoretické počty byly

Q u přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku M 1.10° CFU/g produktu a u přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku Ρ 2.10θ CFU/g produktu. Ke stanovení skutečného počtu byl u každého produktu měřen duplicitně vzorek 11 g. Každý vzorek byl potažen standardní metodou Pioneer pro bakterie zapouzdřené kyselinou mléčnou.

Pro každou výrobní fází byla provedena zkouška promíchání. Zkouška byla určena k zajištění rovnoměrné distribuce přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku v příslušném zastoupení v krmivu a zachování jeho životnosti během peletizace. Z každé šarže byly odebírány vzorky v době pytlování; u drcených produktů 4 rovnoměrně rozmístěné vzorky a u peletovaných produktů 10 rovnoměrně rozmístěných vzorků (tj. sáčky 1 , 3, 5..... 35, 37 a 39).

Během 1. a 4. týdne pokusu byly odebrány vzorky nekontaminovaného krmivá ze střídavě umístěných posad; ze zbývajících posad byly odebrány vzorky v 2. a 6. týdnu krmného poku16

SU .

Stejný počet ptáků obojího pohlaví byl usmrcen pro stanovení hmotností hrudního masa, tělesné hmotnosti a hmotnosti a délky tenkého střeva. U každého ptáka byl vypočten výtěžek hrudního masa a poměr hmotnosti a délky střeva.

Všechny údaje byly podrobeny rozptylové analýze a rozdíl byl stanoven pomocí kontrastu a odhadovaných hodnot požadovaných účinků.

Šedesát ptáků z každého pokusu bylo dopraveno na universitu k senzorickému chuťovému hodnocení.

Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek bez ohledu na zpracování zlepšoval (P < 0,05) konverzi krmivá oproti příslušné kontrole, zatímco hmotnostní přírůstek zvyšoval (P < 0,05) proti kontrole pouze u drceného krmivá (tabulka 4). Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek P zlepšoval (P >

0,05) konverzi krmivá oproti Stafacu^R 10, který měl podobnou hodnotu (P > 0,05) jako kontrola P.

Produkt měl požadované složení, pokud jde o zastoupení < kmen (tabulka 5).

Přimo zkrmovaný mikrobiální prostředek byl v krmivu rovnoměrně distribuován. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek M měl požadované zastoupení, zatímco přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek P byl v množství o 1 až 1 1/2 log vyšším než se požaduje pro iniciační a růstovou krmnou dávku (tabulka

6). Vysoké počty u přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředki P byly důsledkem předimenzování produktu k zajištění dostatečného výtěžku organismů po peletizaci.

V případě přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku P odpovídaly vzorky podlahových posad těsně počtům ze zkoušky promíchání (tabulka 7). Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek M však v růstových a útlumových směsích ve 4. a 6. týdnu poklesl o 2 log.

Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek M zvýšil (P < 0,05) proti kontrole M jak hmotnost, tak výtěžek hrudního masa (tabulka 8), zatímco přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek P vykázal zlepšení (P > 0,05) oproti kontrole P. Zlepšení u drceného krmivá souhlasí s výsledky, zjištěnými v dřívějším pokusu. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek P nevykázal podobnou velikost zlepšení výtěžku hrudního masa jako v případě přímo zkrmovaného mikrobiálni ho prostředku M. Toto selhání může být důsledkem lepšího využití energie peletizaci, které ponechává méně prostoru pro zlepšení.

Peletizaci se průměrná hmotnost ptáka oproti drcenému krmivu zvýšila o 96 g. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek zvýšil jednotnost hmotností ptáků (obr. 5) s největším zlepšením u drceného krmivá.

Peletizaci se oproti drcenému krmivu zvýšila průměrná hmotnost hrudního masa o 15 g. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek zvýšil oproti kontrole průměrnou hmotnost hrudního masa a jednotnost (obr. 4) s největším zlepšením u drceného krmivá. Stafac^R 10 vykázal největší zlepšení jednotnosti u peletizovaných krmi v.

Peletizaci se oproti drcenému krmivu zvýšil výtěžek hrudního masa o 0,53 procentních jednotek. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek M vykázal zvýšení o 0,84 procentních jednotek oproti kontrole M, u níž byla velikost podobná výsledku peletizace.

Zpracováním přímo zkrmovaným mikrobiálním prostředkem se dosáhlo kratší (P > 0,05) délky tenkého střeva než u obou kontrol a u Stafacu^, vyjádřeno skutečnou délkou, poměrem tělesné hmotnosti i hmotnosti hrudního masa (tabulka 9). Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek M měl menší. (P > 0,05) hmotnost tenkého střeva než kontrola M, vyjádřeno bud' jako skutečná hmotnost nebo procento tělesné hmotnosti nebo hmotnosti hrudního masa. Snížení hmotnosti a délky střeva v případě přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku ukazuje na menší množství energie nutné pro výživu a více energie k dispozici pro růst, což potvrzuje zlepšená konverze krmivá a výtěžek hrudního masa (tabulka 7 až 8).

Ptáci, ošetření přímo zkrmovaným mikrobiálním prostředkem P, neměli v porovnání se Stafacem^ 10 cizí pach (tabulka 10). Ve druhém pokusu bylo zjištěno, že přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek P zlepšil oproti kontrole P chuť stehenního masa. Toto zlepšení však nebylo pozorováno v prvním pokusu.

Tabulka 2. Rozvržení posad ošetření kontrola P prostředek P Stafac^R 10 kontrola M prostředek M čísla posad

2.6.15.17.22.26.104.109.113.117.122.126 4,8,12,16,21,28,105,106,112,118,125,130 5,7,11,18,23,27,101,107,111,116,123,129

3.9.13.20.24.30.102.108.114.119.121.127 1,10,14,19,25,29,103,110,115,120,124,128

Velikost posady 4,2' x 15,5', jedno trubkové krmítko, jedna zavěšená napáječka, borové hobliny jako stelivo, energetický a odparný chladicí systém, dobře izolované topení nuceným oběhem vzduchu, konstrukce se závěsovými přepážkami.

Tabulka 3. Složení složkv	základních krmi v
produkční i ni ci ační	fáze
růstová	útlumov
mletá kukuřice	65,37	% 67,89	74,29
sojová mouka	25,58	23,53	17,83
masokostní moučka	3,00	3,00	3,00
tuk	3,36	3,32	2,59
defluorovaný fosfát	0,95	0,79	0,73
uhličitan vápenatý	0,61	0,62	0,63
sůl	0,35	0,31	0,32
stopové minerály	0,05	0,05	0,05
methi oni n	0,39	0,28	0,33
lysin	0,19	0,06	0,18
vitaminový přemix	0,05	0,05	0,05

Tabulka 4. Produkční údaje pro podlahové posady pel etované_drcené

	kontrol a	★ P	Stafac^ 10	kontrol a	★ M
hmotnost, 1b	4,79^a	4,81^a	4,79^a	4,54^b	4,68^a
konverze krmivá	l,871^b	l,827^a	l,855^ab	l,917^c	l,856^ab
upravená konverze krmi val	l,832^b	l,789^a	l,807^ab	l,887^c	l,812^ab
konverze krmivá upravená na o hmotnost	l,801^b	l,755^a	l,775^ab	l,897^c	l,798^b
úmrtnost, %	4,40	4,64	5,95	3,33	5,60

¹ upravená konverze krmivá = celkové krmivo/(živá hmotnost) konverze krmivá upravená na hmotnost = upravená krmivá - ((hmotnost-4,60)/6) ^abc P < 0,05 * podle vynálezu + mrtvá konverze

Tabulka 5. Kontrola a zajištění ošetřeni_počet QC^ kvality produktu v · počet QA poměr kmenu prostředek P prostředek M

CFU/g produktu 5,75.10⁸ 1,01.10⁸

9,54.10⁷ 9,60.10⁷

SF202:SF301 50:50 57:43 kontrola kvality zajištění kvality * Tabulka 6. Test promíchání krmivá a výtěžek

Drodukční fáze a ošetření	drcené	peletované	výtěžek·'·
	CFU/g	krmivá	% drcen.
i ni ci ační
kontrola P	NA^{1 2}	1,05.10³	-
prostředek P	2,02.10⁶	1,67.10⁶	98,69
Stafac^R 10	NA	6,46.10³	-
kontrola M	2,51.10³	.. ...
prostředek M	1,34.10⁵
růstová
kontrola P	NA	4,86.10²	-
prostředek P	3,89.10⁶	1,09.10⁶	91,62
Stafac^R 10	5,25.10⁴	6,42.10³	-
kontrola M	1,00.10²
prostředek M	1,48.10⁵
útlumová
kontrola P	8,50.10²	1,11.10³	-
prostředek P	7,04.10⁴	4,91.10⁵	117,40
Stafac^R 10	8,80.10³	1,79.10⁴	-
kontrola M	8,92.10²
prostředek M	1,33.10⁵
střed
kontrola P	8,50.10²	8,28.10²	-
prostředek P	8,21.10⁵	9,64.10⁶	118,09
Stafac^R 10	2,15.10⁴	9,05.10³	-
kontrola M	8,72.10²
prostředek M	1,38.10⁵

¹ výtěžek vypočten z dat transformovaných do log₁₀ ² NA = není k dispozici

Tabulka 7. Zajištění kvality v podlahových posadách týden

ošetření	1	2	4	6	střed
			CFU/g krmivá
kontrol a		3,78.10²	3,83.10²	8,60.10²	2,21.10²	4,08.10²
prostředek	P	9,23.10⁵	9,37.10⁵	8,77.10⁵	8,48.10⁵	8,96.10⁵
Stafac^ 10		8,73.10²	1,29.10²	6,46.10²	8,63.10²	8,89.10²
kontrola M		3,46.10²	1,26.10²	2,79.10³	2,00.10²	5,08.10²
prostředek	M	1,43.10⁵	1,25.10⁵	1,75.10³	1,00.10³	2,32.10⁴

Tabulka 8. Hodnocení výtěžku hrudního masa pel etované_drcené kontrol a_P* Stafac^R 10 kontrola M* tělesná hmot-

nost, g	2240,7	2230,1	2195,9	2143,8	2149,9
hmotnost hrudniho masa, g	234,4^a	239,6^a	232,0^a	213,3^b	229,6^a
výtěžek hrudního masa, % tělesné hmotnosti	10,51^a	10,68^a	10,58^a	9,93^b	10,67

^ab P < 0,05 •A¹ , podle vynalezu

Tabulka 9. Hmotnost a délka střeva
peletované kontrol a	drcené	k a M
* P	Stafac^R 10	kontrol
tělesná hmot-
nost, g 2240,7 2230,1	2195,9	2143,8	2149,9
hmotnost hrudního
masa, g 234,4^a	239,6^a	232,0^a	213,3^b	229,6^a
hmotnost TS, g	92,6 _y	93,3	93,4	.91,4	87,4
délka T S, i n	76,3	75,3	76,6	76,1	75,3
TS, g/in	1,21	1,23	1,22	1,20	1,16
hmotnost TS, g/100	g
tělesné hmotnosti	4,17	4,18	4,27	4,29	4,08
délka TS, i n/100 g
tělesné hmotnosti	3,47	3,40	3,53	3,61	3,53
hmotnost TS, g/100	g
hmotnosti hrudního
masa	40,19	39,70	40,97	43,96	38,69
délka TS, in/100 g
hmotnosti hrudního
masa	33,41^a	32,27^a	33,72^a	36,89^b	33,41

^ab P < 0,05 * podle vynálezu TS tenké střevo

Tabulka tkáň stehno hrudní

10. Chuťové panelové hodnocení

	počet	správných	i denti fi kácí
Dorovnání skupin	pokus 1	pokus 2	souč
Stafac^R 10	vs. kontrola P	6	3	9
Stafac^R 10	vs. XINOC P	3	4	7
prostředek	P vs. kontrola P	2	8*	10
Stafac^R 10	vs. kontrola P	2	6	8
Stafac^R 10	vs. XINOC P	1	3	4
prostředek	P vs. kontrola P	5	4	9

hodnotitelé byli schopni detekovat jednotlivý vzorek ve statisticky významném (P < 0,05) počtu případů ¹ počet správných identifikací jednotlivého vzorku nutný pro významnost na úrovni 5 % byl 7 pro n=10 a 11 pro n=20

Byl proveden pokus s brojlery ke stanovení účinnosti přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku v drceném a peletizovaném krmivu. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek bez ohledu na zpracování zlepšoval (P < 0,05) konverzi krmivá oproti odpovídající kontrole a současně zvyšoval (P < 0,05) přírůstek hmotnosti oproti kontrole pouze u drceného krmivá. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek P zlepšoval (P >

0,05) konverzi krmivá oproti Stafacu^R 10, který měl podobný výsledek (P > 0,05) jako kontrola P. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek M zvyšoval (P < 0,05) proti kontrole M jak hmotnost, tak výtěžek hrudního masa, zatímco přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek P vykázal zlepšení (P > 0,05) oproti kontrole P. Práci ošetření přímo zkrmovaným mikrobiálním n _v , prostředkem P neměli oproti ošetření Stafacem^ 10 cizí příchuť .

- 25 Příklad 6

144 smíšených krmných prasat (průměrná počáteční hmotnost 41,5 lb) bylo náhodně rozděleno podle hmotnosti a pohlaví do kotců ( tabulka 11) s břidlicovou podlahou a krmeno 119 dní. Složení základní růstové a konečné dávky je uvedeno v tabulce 12. Růstové dávky byly podávány do průměrné hmotnosti kotců 120 lb a pak do porážky následovaly konečné dávky. Všechny dávky až do 75 lb tělesné hmotnosti obsahovaly Mecadox^R (50 g/t) a pak do 120 lb živé hmotnosti 100 g/t chlortetracykli nu. Ošetření zvířat bylo jednak negativní (kontrola) a jednak vybranými přimo zkrmovanými mikrobiálními kulturami ve formě mikrosfér, podávanými v množství 1.10⁴CFU/g krmivá. Všechny dávky krmivá byly podávány v drcené formě. Pro každé experimentální krmivo bylo použito šest zdvojených kotců po 12 krmných prasatech.

Po příchodu do výzkumného zařízení byl Ivomec^R proti vnitřním a vnějším parazitům, nech byl podán Safeguard^R proti hlístům.

prasatům podán Po čtyřech týdPro jednotlivé kotce byly zaznamenány tělesné hmotnosti, spotřeba krmivá a úmrtnost. Pro každý kotec byla vypočtena konverze krmivá.

Před pokusem byl koncentrát kultury ve formě mikrosfér nastaven uhličitanem vápenatým. Teoretický počet byl 2.10⁷CFU/g produktu. Ke stanovení skutečného počtu byl u produktu zkoumán duplicitně lig vzorek. Vzorek byl potahován standardní potahovací metodou pro bakterie v mikrosférách s kyselinou mléčnou.

Navíc byl duplicitně testován lg vzorek k ověřeni počtu a složení kmenů v produktu.

Pro každé ošetření byly jednou týdně odebírány vzorky a testovány na bakterie v mikrosférách s kyselinou mléčnou.

U produktu byl potvrzen požadovaný počet organismů (tabulka 14).

Výtěžek jednotlivých kotců se pohyboval od 1.10^ do 1,6.10⁵ CFU/g krmivá (tabulka 15). Oba extrémní vzorky byly přiřazeny k chybám při odběru nebo potahování. Zbytek vzorků byl rovnoměrně rozložen kolem cílové hodnoty 1.10^ CFU/g krmi va.

Produkt ve formě mikrosfér oproti kontrole po 28 dnech zlepšoval (P > 0,05) hmotnostní přírůstek a konverzi krmivá (tabulka 13). V prvním týdnu pokusu byla prasata postižena nástupem TGE. To spolu s dobou nutnou k adaptaci trávicího traktu prasat na produktu může být důvodem 28denního zpoždění pozorované odpovědi. Z výsledků je patrné, že mikrosféry přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku podle vynálezu stejně jako pro kuřata a krůty fungují účinně i pro prasata.

Tabulka 11. Rozvržení kotců, pokus 670-9102 ošetření_;_čísla kotců kontrola 3, 4, 6, 9, 11, 12 přímo zkrmovaný prostředek 1, 2, 5, 7, 8, 10

Velikost kotce 4,62' x 16,0', jedno čtyřotvorové krmitko Smidley, jedna sací napáječka, teplota kontrolována zkrápěním, částečně břidlicová podlaha a upravená budova s otevřenou přední stěnou

Tabulka 12. Složení základních krmiv produkční fáze _S1 ožky ___růstová útlumová %

mletá kukuřice		76,30	82,20
sojová mouka		21,25	15,50
fosforečnan divápenatý		1,05	0,90
uhličitan vápenatý		. 0,85 ..	0,85
sůl		0,30	0,30
vitaminový a minerální přemix	0,25	0,25
Tabulka 13. Produkční údaje	pro kotce, pokus 760-	-9102
kontrol a	přímo zkrmovaný prostředek
14. den
přírůstek hmotnosti, lb	9,6	9,2
konverze krmivá	2,439	2,483
úmrtnost, %	1,41	1,39
28. den
přírůstek hmotnosti, lb	26,3	27,9
konverze krmi va	2,405	2,212
úmrtnost, %	2,82	1,39
42. den
přírůstek hmotnosti, lb	45,8	46,8
konverze krmivá	2,497	2,428
úmrtnost, %	2,82	2,78
56. den
přírůstek hmotnosti, lb	69,1	71,5
konverze krmivá	2,507	2,457
úmrtnost, %	4,23	2,78
70. den
přírůstek hmotnosti, lb	89,4	91,2
konverze krmivá	2,735	2,674
úmrtnost, %	5,63	2,78

84. den přírůstek hmotnosti, lb konverze krmivá úmrtnost, %

98. den přírůstek hmotnosti, lb konverze krmivá úmrtnost, %

112. den přírůstek hmotnosti, lb konverze krmivá úmrtnost, %

119. den přírůstek hmotnosti, lb konverze krmivá úmrtnost, %

e.

111,0 112,0

2,904 2,882

5,63 2,78

129,9 134,7

3,071 2,988

5,63 2,78

152,2 154,7

3,164 3,134

5,63 2,78

162,4 165,6

3,217 3,177

5,63 4,17

Tabulka 14. Kontrola a zajištění kvality produktu.

pokus

670-9102

produkt	počet 0C počet QA	poměr kmenů
přímo zkrmovaný prostředek	CFU/g produktu mi krobi ální 4,3.10⁷	SF202:SF301

* Tabulka 15. Zajištění kvality v kotcích, pokus 670-9102 _datum_ kontrola přímo zkrmovaný prostředek

3.5.91	1,7.10³	7,4.10³
8.5.91	1,8.10⁴	1,6.10⁵
22.5.91	0	1,0.10¹
30.5.91	0	2,6.10³
5.6.91	2,0.10²	2,2.10⁴
12.6.91	. 1,0.10¹	2,0.10⁴
19.6.91	0	9,6.10³
26.6.91	6,7.10²	5,6.10³
3.7.91	4,9.10²	3,2.10³
10.7.91	5,2.10¹	3,0.10⁴
17.7.91	1,0.10²	4,5.10³
24.7.91	0	1,0.10⁴
31.7.91	0	1,2.10⁴
7.8.91	0	6,4.10⁴
14.8.91	0	7,7.10³
21.8.91	0	1,2.10⁴
28.8.91	0	9,1.10³
4.9.91	0	2,9.10⁴
18.9.91	0	8,9.10³
25.9.91	0	5,5.10³
střed	9,5.10°	8,4.10³

Nové patentové nároky

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob podpory růstu zvířat, vyznačující se tím, že se ke krmivu přidá při podpoře růstu účinné množství přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku, tvořeného v podstatě sušenými životaschopnými stabilními mikrosférami Enterococcus faecium 301, č. ATCC 550.59, na bázi mastné kyseliny a sušenými životaschopnými stabilními mikrosférami Enterococcus faecium 202, č. ATCC 53519, na bázi mastné kyseliny.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že mikrosféry mastné kyseliny se vytvářejí pomocí rotačního disku.
3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že přimo zkrmovaný mikrobiální prostředek je tvořen asi 30 až asi 70 % jedněch a zbytek tvoří druhé z uvedených mikrosfér na bázi mastné kyseliny.
4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, kyselinou je volná mastná kyselina C₁₂ až C₂4.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačujici se tím, kyselinou je kyselina stearová.

že mastnou že mastnou
6. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tim, že množství přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku, přidávané ke krmivu, je asi 0,5 liber až asi 2,0 lb/t krmivá.
7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že množství přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku je asi 0,
8 až asi 1,2 lb/t krmivá.

Nové patentové nároky - 31 ⁴ 8. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že počet organismů přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku je asi * 1.10⁵ až asi 2.10⁸ CFU/g.
9. Způsob podle nároku 8, vyznačující se tím, že počet organismů přímo zkrmovaného mikrobiálního prostředku je asi 1.10⁵ CFU/g.
10. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že zvíře tem je kuře.
11. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že zvíře tem je prase.
12. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek pro podporu růstu zvířat, vyznačující se tím, že je tvořen v podstatě su šenými životaschopnými stabilními mikrosférami Enterococcus faecium 301 ATCC č. 55059 na bázi mastné kyseliny a sušenými životaschopnými stabilními mikrosférami Enterococcus faecium 202 ATCC č. 53519 na bázi mastné kyseliny.
13. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek podle nároku

12, vyznačující se tím, že mastnou kyselinou je volná mastná kyselina C^ až ^4.
14. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek podle nároku

13, vyznačující se tím, že volnou mastnou kyselinou je kyselina stearová.
15. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že zvířetem je kuře.
16. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek podle nároku

Nové patentové nároky

- 32 12, vyznačující se tím, že zvířetem je prase.
17. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že Enterococcus faecium 301 a Enterococcus faecium 202 jsou přítomny v asi stejných množstvích.
18. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že obsahuje asi 20 až asi 30 % jednoho a zbytek tvoří druhý z uvedených organismů Enterococcus faecium 301 a Enterococcus faecium 202.
19. Přímo zkrmovaný mikrobiální prostředek podle nároku 16, vyznačující se tím, že mikrosféry Enterococcus faecium 301 a Enterococcus faecium 202 jsou přítomny v asi stejných množství ch.