CZ2019580A3

CZ2019580A3 - Způsob výroby Everolimu

Info

Publication number: CZ2019580A3
Application number: CZ2019580A
Authority: CZ
Inventors: Jiří Štohandl; Jaroslav František; Lukáš Kuchař
Original assignee: Ratiochem, s.r.o.
Priority date: 2019-09-12
Filing date: 2019-09-12
Publication date: 2021-03-24
Also published as: CZ308817B6

Abstract

Předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy Everolimu ze Sirolimu, který zahrnuje krok a) přeměny sirolimu na 28,40-di-O- (trialkylsilyl) sirolimus, kde alkyly jsou nezávisle vybrány z alkylu C1 až C4; b) selektivní odstranění chránící skupiny 40-OH v 28,40-di-O- (trialkylalkylsilyl) sirolimu za získání 28-O-(trialkylsilyl) sirolimu; c) alkylace 28-O-(trialkylalkylsilyl) sirolimu 2- (trihydrokarbylsilyloxy) ethyltriflátem, přičemž hydrokarbyly mohou být stejné nebo různé a jsou nezávisle vybrány z lineárních nebo rozvětvených alkylů C1-C8 nebo aromatických skupin C6-C10, v přítomnosti báze, za získání 40-O-[2- (trihydrokarbylsilyl) oxy] ethyl-28-0-trialkylsilyl-sirolimu; d) odstranění chránících skupin 40-OH a 28-OH v 40-O-[2-(trihydrokarbylsilyl) oxy] ethyl-28-O-trialkylsilyl-sirolimu za získání Everolimu; případně další čištění získaného Everolimu, např. krystalizací.

Description

Způsob výroby Everolimu

Oblast techniky

Vynález se týká vylepšeného způsobu výroby Everolimu ze Sirolimu.

Dosavadní stav techniky

Everolimus je 40-O-(2-hydroxyethyl) derivát Sirolimu a působí jako mTOR inhibitor. Používá se jako imunosupresivum proti rejekci orgánových transplantátů a při léčbě tumorů, jako například tumoru močových cest, rakoviny ledvin, pankreatu, trávicího ústrojí, plic a rakoviny prsu.

Everolimus

Sirolimus je makrocyklická sloučenina vyráběná známými biosyntetickými postupy a je komerčně dostupná.

Sirolimus

Everolimus se obecně vyrábí syntetickou modifikací Sirolimu. Postupy známé v současné době jsou založeny na alkylaci Sirolimu s použitím 2-(t-butyldimethylsilyl)oxyethyl triflátu, jak popisuje US 5 665 772. Příprava 2-(t-butyldimethylsilyl)oxyethyl triflátu, stejně jako alkylační reakce probíhá v přítomnosti aromatické báze, zejména 2,6-lutidinu. Alkylační reakce probíhá v toluenu. Výsledný 40-O-[2-(t-butyldimethylsilyl)oxy]ethyl sirolimus se poté odchráněním vodnou kyselinou chlorovodíkovou převede na Everolimus. Tento proces vede k tvorbě derivátů dialkylovaného sirolimu jako nežádoucích nečistot, což vyžaduje další čistící kroky. Tento způsob výroby má navíc velmi malé celkové výtěžky.

Dosud byla publikována mnohá vylepšení procesu syntézy everolimu. Většinou se zaměřují na strukturální změny trihydrokarbylsilyloxyethyl triflátu, např. nahrazení

2-(t-butyldimethylsilyl)oxyethyl triflátu 2-[(2,3-dimethylbut-2-yl)dimethyl (nebo difenyl) silyloxy]ethyl triflátem; nahrazení báze použité při přípravě 2-(t-butyldimethylsilyl) oxyethyltriflátu a při alkylaci jinými terciárními aminy odvozenými od pyridinu nebo

CZ 2019 - 580 A3 alifatickými terciárními aminy (WO 2012/103960, WO 2012/103959); nahrazení reakčních rozpouštědel (dichlormethan, ethylacetát, dimethoxyethan, alkany, dimethylformamid, CCL, CHCE, xylen, benzen, ethery); zlepšení purifikačních kroků nebo přidání dalších purifikačních kroků (EP 1518517); stabilizace trihydrokarbylsilyloxyethyl triflátů solemi kovů (WO 2016/020664).

Tato vylepšení však zlepšila celkové výtěžky pouze v omezené míře a nikdy se zcela nevyvarovala tvorby nežádoucích dialkylovaných nečistot Sirolimu.

Cílem předkládaného vynálezu je poskytnout zlepšený způsob výroby Everolimu ze Sirolimu, který by zabránil tvorbě nežádoucích nečistot a také zlepšil celkové výtěžky reakce.

Podstata vynálezu

Důkladná studie reakcí Sirolimu vynálezci ukázala, že příčiny nízkých výtěžků Everolimu jsou hlavně důsledkem nízké stability výchozího makrolidu a reakčních meziproduktů a nedostatečného rozdílu reaktivity funkčních hydroxylových skupin výchozího makrolidu. Reakcí Sirolimu s trihydrokarbylsilyloxyethyltriflátem, jako například 2-(t-butyldimethylsilyl) oxyethyltriflátem, se získá požadovaný mono alkylovaný produkt spolu s významným množstvím (15-20 %) dialkylovaných nečistot. Minoritní dialkylovaná nečistota je pravděpodobně labilní derivát enolové formy jedné z ketoskupin přítomných v molekule a může být hydrolyzována na Everolimus. Hlavní dialkylovaná nečistota byla identifikována jako 28-0[2-(terc-butyldimethylsilyoxy) ethyl) sirolimus, který nelze snadno přeměnit zpět na výchozí Sirolimus nebo Everolimus. Předkládaný vynález zamezuje tvorbě těchto dialkylovaných nečistot použitím nového činidla pro ochranu skupiny 28-OH.

Předmětem předkládaného vynálezu je tedy způsob výroby Everolimu ze Sirolimu, který zahrnuje kroky

a) přeměnu Sirolimu na 28,40-di-O-(trialkylsilyl)sirolimus, kde alkyly jsou nezávisle vybrány z Cl až C4 alkylů;

b) selektivní odstranění chránění 40-OH skupiny 28,40-di-O-(trialkylalkylsilyl)sirolimu za vzniku 28-O-(trialkylsilyl) sirolimu;

c) alkylaci 28-O-(trialkylalkylsilyl)sirolimu pomocí 2-(trihydrokarbylsilyloxy)ethyltriflátu, přičemž hydrokarbyly mohou být shodné nebo různé a jsou nezávisle vybrány z lineárních nebo rozvětvených alkylů Ci-Cs nebo aromatických skupin Ce-Cio, v přítomnosti báze, za vzniku 40O-[2-(trihydrokarbylsilyl)oxy]ethyl-28-O-trialkylsilyl-sirolimu

d) odstranění chránění 40-OH a 28-OH skupin v 40-O-[2-(trihydrokarbylsilyl)oxy]ethyl-28-Otrialkylsilyl-sirolimu za vzniku Everolimu;

e) případně další přečištění získaného Everolimu, např. krystalizací.

V kroku a) se konverze Sirolimu na 28,40-di-O-(trialkylsilyl) sirolimus dosáhne reakcí Sirolimu se silylačním činidlem obsahujícím odpovídající trialkylsilylovou skupinu. Příklady silylačních činidel jsou Λ/M-bis (trimethylsilyl) močovina, N-(trimethylsilyl) imidazol, trimethylsilylchlorid, triethylsilylchlorid nebo jejich analoga nesoucí odpovídající alkylové skupiny.

Výhodnými silylačními činidly jsou Λ'. A-bis (trimethylsilyl) močovina, N-(trimethylsilyl) imidazol. A'.A'-bis(trimcthylsilyl)močovina je novým činidlem pro trimethylsilylaci obou reaktivních hydroxylových skupin Sirolimu. Její reakce je rychlá, efektivní a kvantitativní.

CZ 2019 - 580 A3

Kromě prevence nežádoucí 28-O-alkylace triflátem brání objemná trialkylsilyloxyskupina v poloze 28 také tvorbě dialkylovaného enol-derivátu, což dále usnadňuje čištění produktu. Pro získání konečného produktu v chromatografické čistotě větší než 99,5 % není tedy zapotřebí žádné pracné chromatografické čištění.

Reakce silylačního činidla, jako například N, Ν'-bis (trimethylsilyl) močoviny, se Sirolimem se může výhodně provádět v rozpouštědlech typu esterů nebo v halogenovaných (přednostně chlorovaných) rozpouštědlech, přednostně v Cl-CIO alkyl C1-C4 acyl esterech, halogenovaných C1-C10 alifatických rozpouštědlech, halogenovaných (přednostně chlorovaných) C6-C14 aromatických rozpouštědlech. Příklady vhodných rozpouštědel zahrnují chlorbenzen, dichlorbenzen, dichlormethan, chloroform, ethylacetát, isopropylacetát, butylacetát.

Alkyl v trialkylsilylové skupině je s výhodou methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, terc-butyl. Nej výhodněji alkylovou skupinou je methyl nebo ethyl.

Selektivní odchránění v kroku b) se s výhodou provádí reakcí s methanolem a kyselinou. Mezi vhodné kyseliny patří vodná kyselina sírová, vodná kyselina chlorovodíková, KHSO4, kvartémí tetraalkylamonium hydrogensulfáty, kde alkyl je Ci až Ce alkyl (výhodně butyl) nebo Nbenzyltrimethyl nebo N-benzyltriethyl.

Alkylační reakce v kroku c) se s výhodou provádí v aromatickém rozpouštědle, výhodněji v halogenovaném aromatickém uhlovodíkovém rozpouštědle, ještě výhodněji fluorovaném aromatickém uhlovodíkovém rozpouštědle. Výhodná rozpouštědla jsou vybrána z fluorbenzenu, 1,2-, 1,3-, 1,4-difluorbenzenu, 2-, 3-, 4-fluortoluenu, 2,4-difluortoluenu, 3,4-difluortoluenu, trifluormethylbenzenu a jejich směsí.

Bází použitou v alkylačním kroku c) je výhodně stericky bráněný terciární amin, výhodněji Nalifatický terciární amin. Nejvýhodněji je báze vybrána z benzyldiisopropylaminu, N- (C4-C12 alkyl) diisopropylaminu, N-benzyl-2,6-dimethylpiperidinu, tris (2-ethylhexyl) aminu, jiných alfarozvětvených terciárních aminů (s výjimkou tris(isobutyl)aminu) a jejich směsí.

Použití výhodných rozpouštědel a/nebo bází zlepšuje stabilitu silylovaných reakčních meziproduktů, což dále zlepšuje výtěžky konečného produktu.

V dosavadním stavu techniky byl nejčastěji jako báze používán 2,6-lutidin, ale nezdá se, že by dostatečně stabilizoval reakční meziprodukty. Lépe stabilizující bází je 2,6-di-terc-butyl-4methylpyridin, avšak jeho odstranění z reakční směsi je docela obtížné, protože kvartemizuje reakcí s alkylačním činidlem a jeho pufrovací kapacita pro neutralizaci kyseliny triflové (kyselina trifluormethansulfonová) vznikající během alkylace je poněkud slabá, což vede k částečnému rozkladu výchozího Sirolimu a meziproduktu vznikajícího v reakci, což snižuje výtěžek. Bylo zjištěno, že benzyldiisopropylamin, tris(2-ethylhexyl) amin a zejména vyšší N-alkyl diisopropylaminy (např. N-C4-C12 alkyl diisopropyl aminy) poskytují dostatečnou stabilizaci reakčních meziproduktů, a současně vykazují dostatečnou neutralizační kapacitu kyseliny triflové. Vyšší bazicita, pKa minimálně 10 nebo lépe minimálně 10,5, těchto téměř nekvartemizovatelných aminů zajišťuje lepší neutralizaci kyseliny triflové a zvyšuje rychlost reakce. Všechny tyto vlivy vedou k významnému potlačení rozkladu meziproduktů a ke zlepšení celkového výtěžku Everolimu.

Rychlost rozkladu silylovaných meziproduktů závisí také na chemických a fýzikálních vlastnostech rozpouštědla použitého pro alkylaci. Bylo zjištěno, že halogenované aromatické uhlovodíky jsou stabilizačními rozpouštědly pro silylované meziprodukty Everolimu.

Alkylační reakce v kroku c) se s výhodou provádí při teplotě v rozmezí 30 až 70 ⁰ C, výhodněji 40 až 60 ⁰ C. Optimální reakční doba je mezi 8 a 16 hodinami. Dostatečné reakční rychlosti je dosaženo při teplotě 30 ⁰ C a vyšší, ale nad 70 ⁰ C dochází ke značnému rozkladu. Optimálních

CZ 2019 - 580 A3 výsledků lze získat při 10-16 hodinové reakci při asi 50 ° C.

2-(Trihydrokarbylsilyloxy)ethyltriflát použitý v alkylačním kroku c) je výhodně vybrán z 2(terc-butyldimethylsilyloxy)ethyltriflátu, 2-[(2,3-dimethylbut-2-yl)dimethylsilyloxy] ethyltriflátu, 2-[(2,3-dimethylbut-2-yl)difenylsilyloxy]ethyltriflátu a jejich směsí.

2-(Trihydrokarbylsilyloxy)ethyltriflát se obvykle připravuje reakcí 2-(trihydrokarbylsilyloxy) ethanolu s anhydridem trifluormethansulfonové kyseliny. Jako báze se v této reakci může použít stericky bráněný terciární amin, výhodněji N-alifatický terciární amin, který se potom neodstraňuje z připraveného 2-(trihydrokarbylsilyloxy)ethyltriflátu nebo se může přidat k připravenému 2-(trihydrokarbylsilyloxy)ethyltriflátu, který se tímto během skladování stabilizuje. Nejvýhodněji je báze vybrána z benzyldiisopropylaminu, N-(C4-Ci2 alkyl) diisopropylaminů, Nbenzyl-2,6-dimethylpiperidinu, tris-(2-ethylhexyl) aminu, isobutyldiisopropylaminu a jejich směsí.

Krok d) se s výhodou provádí pomocí KHSOr v methanolu. Toto deprotekční činidlo zvyšuje výtěžek a napomáhá dosažení konečné čistoty produktu, což umožňuje přímé čištění produktu krystalizací, aniž by bylo nutné chromatografické čištění.

Cílem případného dalšího čištění Everolimu v kroku e) je dosažení čistoty uspokojivé pro použití jako aktivní farmaceutické ingredience.

Vylepšený proces je robustní a umožňuje dosáhnout celkových výtěžků čistého Everolimu nejméně 50 %.

Vynález je dále vysvětlen pomocí následujících příkladů, které však žádným způsobem neomezují rozsah vynálezu dle patentových nároků.

Příklady uskutečnění vynálezu

Všechny kroky zahrnující reakce nebo přečištění Sirolimu nebo Everolimu byly prováděny v atmosféře inertního plynu a bez přítomnosti světla.

Příklad 1

Příprava 2-terc-butyldimethylsilyloxyethanolu (TBDMS-ethylenglykol)

Hydrid sodný (60% suspenze v minerálním oleji; 6,5 g (161 mmol)) byl předložen do 1000 ml tříhrdlé baňky s kulatým dnem opatřené teploměrem a přikapávací nálevkou a suspendován v suchém tetrahydrofuranu (THF, 200 ml) pod inertní atmosférou dusíku. Suspenze se ochladila ve vodní lázni na 10 °C. Po kapkách se přidával suchý ethylenglykol (10,0 g; 161 mmol) takovou rychlostí, aby se směs udržovala při teplotě do 20 °C. Reakční směs se míchala při laboratorní teplotě, dokud neustal vývoj vodíku (přibližně 90 minut). Během 90 minut se po kapkách přidal roztok terc-butyldimethylchlorsilanu (24,3 g; 161 mmol) v suchém THF (200 ml). Výsledná směs se míchala při laboratorní teplotě po dobu 2 hodin. Reakce se sledovala pomocí TLC (silikagel; EtOAc/hexan 1:9 v/v.; detekce pomocí 1% aq. KMnOr). Reakční směs se zředila diethyletherem (Et20, 700 ml) a promyla se postupně 10% aq. K2CO3 (3 x 300 ml), solankou (3 x 200 ml) a sušila se nad Na2SO4. Odpařením se získalo 28,7 g surového produktu ve formě nažloutlého oleje. 23,5 g surového produktu se přečistilo sloupcovou chromatografň (silikagel, gradientová eluce, mobilní fáze EtOAc /hexan 1:9 až čistý EtOAc), čímž se získalo 17,7 g bezbarvého oleje. (EtOAc je zkratka ethylacetátu.)

Příklad 2

CZ 2019 - 580 A3

Příprava 2- (terc-butyldimethylsilyloxy)ethyltrifluormethansulfonátu (6) (CF₃SO^O

IK· base

s (6)

TBDMS-ethylenglykol (5 g; 0,0284 mmol; 1 ekv.) se rozpustil v dichlormethanu (150 ml) ve 250ml tříhrdlé baňce s kulatým dnem opatřené teploměrem a přikapávací nálevkou pod atmosférou dusíku a ochladil se na -40 °C. Najednou se přidal benzyldiisopropylamin (6,5 g; 0,0341 mmol; 1,2 ekv.) a poté byl po kapkách během 15 minut přidáván TÍ2O (Tf = triflát; 8,4 g; 4,9 ml; 0,02298 mmol; 1,05 ekv.). Teplota nesmí překročit -30 °C. Reakce byla sledována pomocí TLC (silikagel; EtOAc / hexan 1: 4 v/v; detekce pomocí 1% aq. KMnO4). Sledování reakce pomocí TLC za použití nevodné mobilní fáze bylo zvoleno z důvodu omezené tepelné stability a hydrolýzy meziproduktu (6) ve vodných roztocích. Kompletní konverze nastala po 30 minutách. Reakční směs se zředila 10% roztokem K2CO3 (70 ml). Spodní organická fáze se oddělila a promyla se postupně vodou (70 ml), solankou (70 ml) a sušila se nad Na2SO4. Azeotropické odpařování při 30 °C a 10 torr poskytlo 14,51 g čirého oleje.

Příklad 3

Příprava báze

4.

Diisopropylamin (181 g; 2,5 ekv.) se rozpustil s DCM (750 ml) a ochladil na 0 °C. Benzoylchlorid (100 g; 1 ekv.) se rozpustil s DCM (50 ml) a přidal se po kapkách do reakční směsi. 99% konverze stanovená pomocí HPLC byla dosažena po 1 hodině. Organická fáze se následně promyla postupně IM HC1 (3x500 ml), nasyceným NaHCOs (2x500 ml), H2O (500 ml), solankou (500 ml) a vysušila se nad Na2SO4. Azeotropickým odpařením se získalo 143 g (98 %) produktu.

Komplex boran-dimethylsulfidu (87,8 g; 1,66 ekv.) se rozpustil v THF (900 ml) a zchladil na 0°C. Ν,Ν-diisopropylbenzyl amid (142 g; 1 ekviv.) se rozpustil s THF (900ml) a přidal se po kapkách do reakční směsi. Směs se refluxovala po dobu 2 hodin. Organická fáze se ochladila na 10 °C a po kapkách se přidala 6M HCI (400 ml). THF se odpařil a přidal se 5M NaOH (60 ml). Anorganická fáze se promyla MTBE (3x600 ml). Organická fáze se promyla solankou (600 ml) a vysušila se nad Na2SO4. Produkt po azeotropickém odpaření se rozpustil v petroleteru (600 ml) a EtOAc (30 ml), přidal se silikagel (30 g) a suspenze se míchala po dobu 20 minut. Po odfiltrování silikagelu a odpaření rozpouštědel se získalo 127 g (96 %) produktu.

MS (ESI +), m / z 172,2072 (Μ + H + ion), vypočteno pro CiiH₂₆N: 172,2065.

Příklad 4

CZ 2019 - 580 A3

Silylace sirolimu na 28,40-di-O-(trimethylsilyl)sirolimus (krok a))

Sirolimus (5,0 g; 5,469 mmol; 1 ekv.) se rozpustil pod inertní atmosférou dusíku v iPrOAc (isopropylacetát, 50 ml; sušený nad molekulárním sítem A4). Reakční směs se zchladila na 0 °C a v jedné dávce se přidal N-(trimethylsilyl)imidazol (2,45 g; 3,2 ekv.). Směs se míchala po dobu 1 hodiny při 0 °C. Dosažená 99% konverze byla stanovena pomocí HPLC. Organická fáze se postupně promyla 0,5M HC1 (3 x 50 ml při 0 °C), H2O (50 ml), nasyceným NaHCOs (50 ml), směsí solanka/H2O (50 ml), solankou (50 ml) a sušila se nad Na2SO4. Azeotropickým odpařením se získalo 5,7 g žlutých krystalů.

MS (ESI +), m/z 1075,6654 (M + NH4 + ion), vypočteno pro C57H99N2O13SÍ2: 1075,6686.

Příklad 5

Odstranění chránící skupiny 28,40-di-O-(trimethylsilyl) sirolimu (krok b))

Surový produkt z příkladu 4 se rozpustil v MeOH (50 ml). Výsledná směs se ochladila na 0 °C a přidal se hydrogensíran tetrabutylamonný (91 mg; 0,05 ekv.). HPLC potvrdila 95% konverzi po 1 hodině. Reakční směs se zředila MTBE (methylterbutylether; 50 ml), NaHCOs (50 ml) a H2O (50 ml). Vodná fáze se po oddělení promyla MTBE (50 ml). Spojená organická fáze se postupně promyla H2O (50 ml), solankou (50 ml) a vysušila se nad Na2SO4. Odpařením se získalo 5,33 g produktu obsahujícího 90,1% 28-O-(trimethylsilyl)-sirolimu (obsah stanoven pomocí HPLC). Výtěžek počítaný na výchozí Sirolimus byl 89,2%.

MS (ESI +), m / z 1003,6281 (M + NH4 + ion), vypočteno pro C54H91N2O13S1: 1003,6290.

Příklad 6

Silylace sirolimu na 28,40-di-O-(trimethylsilyl)sirolimus (krok a))

CZ 2019 - 580 A3

Sirolimus (5,0 g; 5,49 mmol; 1 ekv.) se rozpustil pod inertní atmosférou dusíku v DCM (dichlormethan, 50 ml; sušený nad molekulárním sítem A4) a v jedné dávce se pňdala bis (trimethylsilyl) močovina (4,47 g; 4 ekv.). Reakční směs se míchala přes noc. Dosažená 99% konverze byla stanovena pomocí HPLC. Organická fáze se přefiltrovala a promyla postupně nasyceným NaHCOs (3x50 ml), H2O (50 ml), solankou (50 ml) a sušila nad Na2SO4. Azeotropickým odpařením se získalo 6,49 g žlutých krystalů.

MS (ESI +), m / z 1075,6647 (M + NH4 + ion), vypočteno pro C57H99N2O13SÍ2: 1075,6686.

Příklad 7

Odstranění chránící skupiny 28,40-di-O- (trimethylsilyl) Sirolimu (krok b))

Surový produkt z příkladu 6 se rozpustil v EtOAc (60 ml). Výsledná směs se ochladila na 0 °C a přidala se 0,5M H2SO4 (10 ml). HPLC potvrdila 97% konverzi po 2 hodinách. Reakční směs se promyla nasyceným NaHCOs (2x50 ml), H2O (50 ml), solankou (50 ml) a sušila se nad Na2SO4. Odpařením se získalo 5,4 g produktu obsahujícího 89 % 28-0- (trimethylsilyl) -sirolimu (obsah stanoven pomocí HPLC). Výtěžek počítaný na výchozí Sirolimus byl 89,3%. MS (ESI +), m / z 1003,6275 (M + NH4 + ion), vypočteno pro C54H91N2O13S1: 1003,6290.

Příklad 8

Alkylace 28-0- (trimethylsilyl) sirolimu (krok c))

28-O-(trimethylsilyl) sirolimus (5,16 g; 5,2314 mmol; 1 ekv.) byl rozpuštěn pod inertní atmosférou dusíku v fluorobenzenu (15,5 ml; sušený nad molekulárním sítem A4), roztok byl vyhřátý na 40 °C a míchal se při této teplotě po dobu 20 minut. V jedné dávce se přidal triflát (6) (17,93 g směsi obsahující 45% BDIPA (benzyldiisopropylamin)). Výsledná směs se míchala při 40 °C pod dusíkovou atmosférou. 98% konverze stanovená pomocí HPLC byla dosažena po 15 hodinách. Reakční směs se ochladila na laboratorní teplotu, přidalo se 50 ml MeOH s K2CO3 (2,1

CZ 2019 - 580 A3 g; 3 ekv. vzhledem k (3)) a směs se míchala po dobu 1 hodiny. Reakční směs se zředila iPrOAc (120 ml) a vodou (60 ml). Organická fáze se oddělila a promyla se postupně vodou (60 ml), nasyceným CaCh (3 x 60 ml), vodou (60 ml) a solankou (60 ml). Organická fáze se promyla 10% K2CO3 (120 ml), 1M kyselinou citrónovou (3x120 ml), H2O (120 ml), 10% K2CO3 (3x120 ml), H2O (120 ml), solankou (120 ml) a sušena nad Na2SO4. Azeotropickým dpařením se získalo 11,97 g žlutého oleje. Získaný olej se zředil MeOH (60 ml) a extrahoval heptanem (120 ml) s vodou (12 ml). MeOH se promyl heptanem (3x120 ml) a sušil nad Na2SO4. Azeotropickým odpařením se získalo 8,4 g žlutého oleje obsahujícího 59,4 % (40-O-[2-(tercbutyldimethylsilyl)oxy]ethyl-28-O-trimethylsilyl-sirolimu) (obsah stanoven pomocí HPLC). Výtěžek alkylačního kroku byl 84 %.

MS (ESI +), m / z 1161,7405 (M + NH4 + ion), vypočteno pro C62Hi₀9N₂Oi4SÍ2: 1161,7417.

Příklad 8a

Alkylační krok se prováděl v trifluormethylbenzenu (místo fluorbenzenu, stejný objem).

Výtěžek byl v podstatě stejný.

Příklad 8b

Alkylační krok se prováděl v 1,4-difluorbenzenu (místo fluorbenzenu, stejný objem).

Výtěžek byl v podstatě stejný.

Příklad 8c

Alkylační krok se prováděl v 1,2-difluorbenzenu (místo fluorbenzenu, stejný objem).

Výtěžek byl v podstatě stejný.

Příklad 8d

Alkylační krok se prováděl za použití tris(2-ethylhexyl) aminu (místo N-benzyldiisopropylaminu, stejného molámího množství) jako báze. Výtěžek byl v podstatě stejný.

Příklad 8e

Alkylační krok se prováděl za použití N-benzyl-2,6-dimethylpiperidinu (místo Nbenzyldiisopropylaminu, stejné molámí množství) jako báze.

Výtěžek byl v podstatě stejný.

Příklad 9

Příprava everolimu

CZ 2019 - 580 A3

TBDMS-TMS-everolimus (40-0- [2- (terc-butyldimethylsilyl) oxy] ethyl-28-0-trimethylsilylsirolimus) z příkladu 8 (1,52 g, 1,328 mmol, 1 ekv.) bzl rozpuštěn v acetonitrilu / H2O (19:1) (35 ml). Výsledná směs se ochladila na 0 °C a přidal se KHSO4 (0,18 g, 1 ekv.). HPLC potvrdila 99,9% konverzi po 1 hodině. Přidal se 10% K2CO3 a míchal se po dobu 5 minut. Poté se přidal iPrOAc (50 ml) a voda (50 ml). Organická fáze se promyla vodou (50 ml) a solankou (50 ml) a sušila se nad Na2SO4. Azeotropickým odpařením se získalo 2,6 g žlutého oleje. Přidal se methanol (25 ml), heptan (50 ml) a voda (5 ml). Metanol se oddělil a promyl heptanem (3 x 50 ml). K metanolové fázi se přidal iPrOAC (50 ml), voda (50 ml) a solanka (10 ml). Oddělená organická fáze se promyla solankou (50 ml) a sušila se nad Na2SO4. Odpařením se získalo 1,88 g bílé pevné látky obsahující 60,4% produktu (Everolimus, obsah stanoven pomocí HPLC). Výtěžek deprotekčního kroku byl 89,1%.

MS (ESI +), m / z 975,6149 (M + NH4 + ion), vypočteno pro C53H87N2O14: 975,6157.

Příklad 10

Krystalizace

Surový Everolimus připravený podle příkladu 9 (4,83 g obsahující 70,8% everolimu) se rozpustil v EtOAc (10 ml), zahřál se na 30 °C a poté se po kapkách přidával heptan (22 ml) do vzniku zákalu a poté očkován krystaly Everolimu. Směs se dále míchala při 30 °C po dobu 2 hodin. Potom se pomalu ochladila na 25 °C a míchala se po dobu 1 hodiny, pak se pomalu ochladila na 10 °C, míchala se po dobu 30 minut. Krystaly se odfiltrovaly a promyly chladnou směsí EtOAc/hexan (1:2). Výtěžek krystalizace: 84 %. Matečný louh obsahoval isomer C (téměř zcela odstraněn z odfiltrovaných krystalů) a Everolimus v poměru přibližně 1:2. Rekrystalizace Everolimu se provedla stejným způsobem.

Claims

1. Způsob výroby Everolimu ze Sirolimu, vyznačující se tím, že zahrnuje kroky

a) převedení Sirolimu na 28,40-di-O-(trialkylsilyl)sirolimus, kde alkyly jsou nezávisle vybrány z alkylu Ci až C4;

b) selektivní odstranění chránící skupiny 40-OH v 28,40-di-O-(trialkylalkylsilyl)sirolimu za získání 28-O-(trialkylsilyl)sirolimu;

c) alkylaci 28-O-(trialkylalkylsilyl)sirolimu 2-(trihydrokarbylsilyloxy)ethyltriflátem, přičemž hydrokarbyly jsou stejné nebo různé a jsou nezávisle vybrány z lineárních nebo rozvětvených CiC₈ alkylů nebo Ce-Cio aromatických skupin v přítomnosti báze, za vzniku 40-O-[2(trihydrokarbylsilyl)oxy]ethyl-28-O-trialkylsilyl-sirolimu;

d) odstranění chránících skupin 40-OH a 28-OH v 40-O-[2-(trihydrokarbylsilyl)oxy]ethyl-28-Otrialkylsilyl-sirolimu za vzniku Everolimu;

2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že získaný Everolimus se přečistí, například krystalizací.

3. Způsob podle nároku 1, vyznačuj ící se tím, že krok a) se provádí reakcí se silylačním činidlem vybraným z N,N'-bis(trimethylsilyl)močoviny, N-(trimethylsilyl)imidazolu, trimethylsilylchloridu, triethylsilylchloridu, s výhodou v esterech a chlorovaných rozpouštědlech.

4. Způsob podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že selektivní odstranění chránící skupiny v kroku b) se provádí pomocí methanolu a kyseliny, s výhodou vybrané z vodné kyseliny sírové, vodné kyseliny chlorovodíkové, KHSO4, kvartémího tetraalkylamoniumhydrogensulfátu, kde alkyl je alkyl Ci až Ce nebo N-benzyltrimethyl nebo Nbenzyltriethyl.

5. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se alkylační reakce v kroku c) provádí v aromatickém rozpouštědle.

6. Způsob podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se alkylační reakce v kroku c) provádí v halogenovaném aromatickém uhlovodíkovém rozpouštědle, výhodně ve fluorovaném aromatickém uhlovodíkovém rozpouštědle.

7. Způsob podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se alkylační reakce v kroku c) provádí v rozpouštědle vybraném z fluorbenzenu, 1,2-difluorbenzenu, 1,4difluorbenzenu, 4-fluortoluenu, 2,4 -difluortoluenu, trifluormethylbenzenu a jejich směsí.

8. Způsob podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že bází použitou v alkylačním kroku c) je stericky chráněný terciární amin, výhodněji N-alifatický terciární amin.

9. Způsob podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že báze použitá v alkylačním kroku c) je vybrána z benzyldiisopropylaminu, N-(C4-Ci2 alkyl) diisopropylaminu, Nbenzyl-2,6-dimethylpiperidinu, tris(2-ethylhexyl)aminu a jejich směsí.

10. Způsob podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že báze použitá v alkylačním kroku c) má pak minimálně 10 nebo minimálně 10,5.

11. Způsob podle některého z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se alkylační reakce v kroku c) provádí při teplotě v rozmezí 30 až 70 °C.

CZ 2019 - 580 A3

12. Způsob podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že 2(trihydrokarbylsilyloxy)ethyltriflát použitý v alkylačním kroku c) je vybrán z 2-(tercbutyldimethylsilyloxyjethyltriflátu, 2-[(2,3-dimethylbut-2-yl)dimethylsilyloxy]ethyltriflátu, 25 [(2,3-dimethylbut-2-yl)difenylsilyloxy]ethyltriflátu a jejich směsí.

13. Způsob podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že dále zahrnuje krok přípravy 2-(trihydrokarbylsilyloxy)ethyltriflátu reakcí 2-(trihydrokarbylsilyloxy)ethanolu s anhydridem trifluormethansulfonové kyseliny, buď v přítomnosti stericky bráněného terciárního ίο aminu nebo s následným přidáním stericky bráněného terciárního aminu k připravenému 2(trihydrokarbylsilyloxy)ethyltriflátu.

14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že stericky chráněný terciární amin je vybrán z benzyldiisopropylaminu, N-benzyl-2,6-dimethylpiperidinu, tris(2-ethylhexyl)aminu ajejich směsí.

15. Způsob podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že krok d) se provádí za použití KHSO4 v methanolu.