CZ2011312A3 - Lipofosfonoxiny, jejich príprava a použití - Google Patents
Lipofosfonoxiny, jejich príprava a použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2011312A3 CZ2011312A3 CZ20110312A CZ2011312A CZ2011312A3 CZ 2011312 A3 CZ2011312 A3 CZ 2011312A3 CZ 20110312 A CZ20110312 A CZ 20110312A CZ 2011312 A CZ2011312 A CZ 2011312A CZ 2011312 A3 CZ2011312 A3 CZ 2011312A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- diastereomers
- lipophosphonoxins
- mixtures
- mmol
- compounds
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 63
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 78
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 62
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 25
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- -1 hexadecyloxypropyl Chemical group 0.000 claims description 15
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 14
- ZTWTYVWXUKTLCP-UHFFFAOYSA-L ethenyl-dioxido-oxo-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])(=O)C=C ZTWTYVWXUKTLCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- HRBGUGQWTMBDTR-UHFFFAOYSA-N 2,3,4-tri(propan-2-yl)benzenesulfonyl chloride Chemical compound CC(C)C1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C(C(C)C)=C1C(C)C HRBGUGQWTMBDTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 claims description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 13
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 claims description 11
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 10
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 10
- ZTWTYVWXUKTLCP-UHFFFAOYSA-N vinylphosphonic acid Chemical compound OP(O)(=O)C=C ZTWTYVWXUKTLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1H-imidazole Chemical compound CN1C=CN=C1 MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 8
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000006845 Michael addition reaction Methods 0.000 claims description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 4
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 3
- CQCXMYUCNSJSKG-UHFFFAOYSA-N 1-dimethoxyphosphorylethene Chemical compound COP(=O)(OC)C=C CQCXMYUCNSJSKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 6-(4-aminophenyl)sulfonylpyridin-3-amine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=N1 XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- RDILGKKLAQWJBZ-UHFFFAOYSA-N P(OC)(OC=C)=O Chemical compound P(OC)(OC=C)=O RDILGKKLAQWJBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 claims description 2
- 125000000654 isopropylidene group Chemical group C(C)(C)=* 0.000 claims description 2
- 125000004492 methyl ester group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 claims description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 claims description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 claims description 2
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 claims description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims 1
- XWCIXXXLOAAWPU-UHFFFAOYSA-N prop-1-enylphosphonic acid Chemical compound CC=CP(O)(O)=O XWCIXXXLOAAWPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical class [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 22
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 22
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 14
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 9
- GATNOFPXSDHULC-UHFFFAOYSA-N ethylphosphonic acid Chemical compound CCP(O)(O)=O GATNOFPXSDHULC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 8
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 6
- BORAXZYLMQGYKA-NBOSWCJFSA-N 2-[(3r,4r)-3,4-dihydroxypyrrolidin-1-yl]ethyl-[[(2r,3s,4r,5r)-5-(2,4-dioxopyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]phosphinic acid Chemical compound C1[C@@H](O)[C@H](O)CN1CCP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 BORAXZYLMQGYKA-NBOSWCJFSA-N 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- CJIVCSBYIRBJSG-UHFFFAOYSA-N pyrrolidine-3,3-diol Chemical compound OC1(O)CCNC1 CJIVCSBYIRBJSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 229930185564 liposidomycin Natural products 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 3
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 3
- 229930182764 Polyoxin Natural products 0.000 description 3
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 3
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 3
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- 102100031939 Erythropoietin Human genes 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- FSCNUJMKSQHQSY-UHFFFAOYSA-N Gein Chemical compound COC1=CC(CC=C)=CC=C1OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)CO2)O)O1 FSCNUJMKSQHQSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 2
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 2
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 2
- 241000191984 Staphylococcus haemolyticus Species 0.000 description 2
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- XAKRTGZVYPZHCO-UHFFFAOYSA-O hydroxy-methoxy-oxophosphanium Chemical compound CO[P+](O)=O XAKRTGZVYPZHCO-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 229940037649 staphylococcus haemolyticus Drugs 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N tetradecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCO HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-O triethylammonium ion Chemical compound CC[NH+](CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 2
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- JCZPOYAMKJFOLA-SYPWQXSBSA-N (3R)-pyrrolidine-3,4-diol Chemical compound OC1CNC[C@H]1O JCZPOYAMKJFOLA-SYPWQXSBSA-N 0.000 description 1
- GFDUSNQQMOENLR-PEBGCTIMSA-N 1-[(3ar,4r,6r,6ar)-6-(hydroxymethyl)-2,2-dimethyl-3a,4,6,6a-tetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-yl]pyrimidine-2,4-dione Chemical compound N1([C@@H]2O[C@H](CO)[C@H]3OC(O[C@H]32)(C)C)C=CC(=O)NC1=O GFDUSNQQMOENLR-PEBGCTIMSA-N 0.000 description 1
- GIUODPATGRVYLI-UHFFFAOYSA-N 1-hexadecoxypropan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOC(O)CC GIUODPATGRVYLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002103 4,4'-dimethoxytriphenylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)(C1=C([H])C([H])=C(OC([H])([H])[H])C([H])=C1[H])C1=C([H])C([H])=C(OC([H])([H])[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- CQMJCUWVKZAUGU-UHFFFAOYSA-N COC1C(C(C2=CC=CC=C2)(C2=CC=CC=C2)C2=CC=CC=C2)(OC)OCC1 Chemical compound COC1C(C(C2=CC=CC=C2)(C2=CC=CC=C2)C2=CC=CC=C2)(OC)OCC1 CQMJCUWVKZAUGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPFWJDMDPLEUBD-UHFFFAOYSA-N Polyoxin D Natural products OC1C(O)C(C(NC(=O)C(C(O)C(O)COC(N)=O)N)C(O)=O)OC1N1C(=O)NC(=O)C(C(O)=O)=C1 JPFWJDMDPLEUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006159 Sabouraud's agar Substances 0.000 description 1
- 241000186990 Streptomyces cacaoi Species 0.000 description 1
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical class CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFTYTUAZOPRMMI-CFRASDGPSA-N UDP-N-acetyl-alpha-D-glucosamine Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C)[C@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 LFTYTUAZOPRMMI-CFRASDGPSA-N 0.000 description 1
- LFTYTUAZOPRMMI-UHFFFAOYSA-N UNPD164450 Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(NC(=O)C)C1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 LFTYTUAZOPRMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N acetic acid phenyl ester Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001355 anti-mycobacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- RCTFHBWTYQOVGJ-UHFFFAOYSA-N chloroform;dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClC(Cl)Cl RCTFHBWTYQOVGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000037416 cystogenesis Effects 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000000267 erythroid cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- XHDNNRGTROLZCF-UHFFFAOYSA-N ethenyl(methoxy)phosphinic acid Chemical compound COP(O)(=O)C=C XHDNNRGTROLZCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 229940124307 fluoroquinolone Drugs 0.000 description 1
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTFJIXJJCSYFAL-UHFFFAOYSA-N icosan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCO BTFJIXJJCSYFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 108010051201 lipid I Proteins 0.000 description 1
- ULXTYUPMJXVUHQ-OVTFQNCVSA-N lipid II Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CC[C@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@@H]1[C@@H](NC(C)=O)[C@@H](OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC\C=C(\C)CC\C=C(\C)CC\C=C(\C)CC\C=C(\C)CC\C=C(\C)CC\C=C(\C)CC\C=C(\C)CC\C=C(\C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ULXTYUPMJXVUHQ-OVTFQNCVSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229940049953 phenylacetate Drugs 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- JPFWJDMDPLEUBD-ITJAGOAWSA-N polyoxorim Polymers O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H]([C@H](NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)COC(N)=O)N)C(O)=O)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C(O)=O)=C1 JPFWJDMDPLEUBD-ITJAGOAWSA-N 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 239000012449 sabouraud dextrose agar Substances 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000009105 vegetative growth Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
- C07F9/65586—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system at least one of the hetero rings does not contain nitrogen as ring hetero atom
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Predmetem vynálezu jsou lipofosfonoxiny obecného vzorce I, ve kterém R.sub.3.n.predstavuje obecné vzorce II a III, jejich diastereomery a smesi diastereomeru techto sloucenin, zpusob výroby a použití techto sloucenin jako antibakteriální cinidla nebo aktivní složky desinfekcních prostredku a/nebo selektivních in vitro kultivacních médií.
Description
Dosavadní stav techniky
V současné době roste počet bakterií, které se stávají rezistentní vůči konvenčním léčivům a jsou proto potřeba nové léky pro léčbu nemocí, způsobených těmito odolnými bakteriemi (Davies D., Davies J, Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2010, 74(3), 417; Kesselheim A. S., Outterson K., Health Aff. 2010, 29, 1689).
Nedávno byl popsán silný inhibitor růstu prvoka rodu Giardia, phosphonoxin (1) s výrazně lepší aktivitou než mají používaná léčiva. Phosphonoxin byl navržen jako inhibitor glykosyl transferasy, „syntázy cystické stěny” (cyst wall synthase CWS). CWS katalyzuje syntézu chitinu podobného polysacharidu poly(GalNAc), [póly β-Ι-3-A-acetylgaMtosaminu], který tvoří ze 63 % stěnu buněčné cysty prvoka Giardia. Ačkoli nebyla pozorována specifická inhibice tvorby cyst, phosphonoxin silně inhiboval vegetativní růst (Suk D. H., Rejman D. a spoluautoři, Bioorg. Med Chem. Letters 2007, 17(10), 2811). Molekula phosphonoxinu vykazuje určité strukturní podobnosti s některými typy nukleosidových antimikrobiálních látek: (i) polyoxiny 3, (ii) murayamyciny 4, a (iii) caprazamyciny 5.
Polyoxiny patří do skupiny antifungálních antibiotik izolovaných z Streptomyces cacaoi, které inhibují syntézu chitinu (Isono, K., Asahi K., Suzuki S„ J. Am. Chem. Soc. 1969, 91, 7490; Isono K. se spoluautory, Agricultural Biol. Chem. 1965, 29, 848; Endo A., Kakiki K., Misato J., J. Bacterial. 1970, 104, 189; Ohta N, Kakiki K., Misato, T„ Agric. Biol. Chem. 1970, 34, 1224). Polyoxin D vykazuje silnou strukturní podobnost s difosfo-A-acetyl-D-glukosaminem (UDP-GlcNAc 2), což je v souladu s jeho rolí akompetitivního inhibitoru.
Murayamyciny jsou zástupci v přírodě se vyskytujících 6’-A-alkyl-5’-p-O-aminoribosyl-C-~ glycyluridinových antibiotik (McDonald L. A. se spoluautory; J. Am. Chem. Soc. 2002, 124, 10260). Murayamyciny nesoucí lipofilní postraní řetězec vykazují vynikající aktivitu proti gram-pozitivním bakteriím. Inhibují tvorbu lipidu II a peptidoglykanu a předpokládá se, že jsou inhibitory MurNAc-pentapeptid translokázy (MraY), jež je zodpovědná za tvorbu lipidu I při biosyntéze peptidoglykanu.( Bugg T. D. H., Lloyd A. J., Roper D. L, Infect. Dis. Drug Targets 2006, 6, 85. Kimura K., Bugg Τ. D. Η., Nat. Prod. Rep. 2003, 20, 252; Bouhss A. se spoluautory, J. Mol. Microbiol. 1999, 34, 576; Bouhss A., se spoluautory, FEMS Microbiol. Rev. 2008, 32, 208. Bouhss, A. se spoluautory, FEMS Microbiol. Rev. 2008, 32, 208). Tanino nedávno po^psal syntézu muraymycinového analogu 6, který vykazoval dobrou aktivitu proti methicillin-resistentnímu Staphylococcus aureus (MRSA) a vancomycin-resistentním enterokokům (VRE) (Tanino T. se spoluautory, Med. Chem. Lett. 2010, 1, 258).
Caprazamyciny (CPZ) (5), mezi které patří i liposidomyciny (LPMs) (7) jsou další skupinou v přírodě se vyskytujících 6’-A-alkyl-5’-p-C>-aminoribosyl-C-glycyluridinových antibiotik (Igarashi M. se spoluautory, J. Antibiot. 2003, 56, 580; Igarashi M. se spoluautory, J. Antibiot. 2005, 58, 327). CPZ vykazují výbornou antimykobakteriální aktivitu (MIC= 3,13 gg/mL) a nevykazují významnou toxicitu u myší. CPZ jsou známé silnou inhibicí MraY u E. coli (IC50 = 0,05 gg/mL pro LPMs; Kimura K. se spoluautory, Agric. Biol. Chem. 1989, 53, 1811).
. 1 Phosphonoxin',
UDP-GIcNAc )
OH OH 3 Polyoxiny )
Caprazamyciny
Liposidomyciny
Podstata vynálezu
Tento vynález popisuje nové sloučeniny obecného vzorce I, které vykazují silné antibakteriální účinky zvláště proti gram-pozítivním bakteriím. Výhodou těchto sloučenin je kromě jejich snadné přípravy také modularita jejich struktury, která umožňuje dodatečné přizpůsobení jejich biologických vlastností.
Předmětem vynálezu jsou lipofosfonoxiny obecného vzorce I,
kde Rt je (C8-C22)alkyl či hexadecyloxypropyl, tetradecyloxypropyl, tetradecyloxyethyl, nebo hexadecyloxyethyl, a
R2 je uracil, thymin nebo cytosin.
R3 je vybrán ze skupiny, která zahrnuje sloučeniny obecných vzorců II a III:
kde R4 je H nebo CH2OH, R5 je H nebo OH, je H nebo OH, R7 je H nebo CH2OH, R« je H nebo CH2OH, R9 je H nebo OH, Rw je H nebo OH, Rn je H nebo OH, Rn je H nebo CH2OH, diastereomery a směsi diastereomeru sloučenin obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelné soli a hydráty.
Sloučeniny vzorce I obsahují několik chirálních center (především na atomu fosforu a ve skupině R5). Existence chirálního centra umožňuje sloučenině existovat jako jeden ze dvou možných optických isomeru ((R)- či (S)-enantiomer), nebo jako racemická směs obou. V tomto případě, kdy jsou přítomna i další chirální centra, jsou rovněž všechny vzniklé diastereomery a směsi diastereomerů zahrnuty do rozsahu lipofosfonoxinů obecného vzorce I, popsaných tímto vynálezem.
Dalším předmětem vynálezu je příprava nových lipofosfonoxinů. Výchozí surovinou pro přípravu finálních látek jsou nukleosidvinylfosfonové kyseliny obecného vzorce 11 (Schéma 2). Tyto látky se připraví esterifikací methylvinylfosfonátu 9 (Gao, Feng se spoluautory; Chemistry-A European Journal, 2009, 15,9,2064 * 2070), který se připraví podle literatury. Podstatou vynálezu je nový a výhodnější způsob přípravy, který je jednodušší než dříve popsané způsoby a poskytuje dobré výtěžky. V prvním kroku A) se vychází z komerčně dostupného dimethylvinylfosfonátu 8 (viz Schéma 1), který se zahřívá přes noc s 40^ až 70% vodným pyridinem (objem. %) při teplotě od 50 do 80 °C.
O ^p-o-ch3 ' 9
CH, (8)
Schéma 1
O II P-OH i
O ch3
1^·
Vznikly methylvinylfosfonát 9 se v druhém kroku B) ponechá reagovat s nukleosidem'majícím volnou 5 -hydroxylovou skupinu 10 a chráněným v polohách 2’a 3’ skupinou, zvolenou z 2’,3’-— isopropylidenu, 2’,3’-bis(dimethoxytritylu), 2’,3’-dibenzoylu, a2’,3’-diacetylu.
Tato esterifikace se provede pomocí triisopropylbenzensulfonylchloridu (TPSC1) za katalýzy N— methylimidazolem v rozpouštědle, zvoleném ze skupiny, zahrnující acetonitril, dioxan, tetrahydrofuran (THF), dichlorethan, chloroform a dichlormethan. Získaný methylester se isoluje chromatografií na sloupci silikageiu za použití lineárního gradientu etanolu v chloroformu. Methylová esterová skupina se následně odstraní zahříváním s 40 až 70% (objem. %) vodným pyridinem při teplotě 50 až 80 °C přes noc (Schéma 2). Vzniklá vinyl fosfonová kyselina 11 se isoluje chromatografií na sloupci silikageiu za použití lineárního gradientu směsi H1 (ethylacetát:aceton:ethanol:voda, objem, poměry 4:1:1:1) v ethylacetátu.
Schéma 2
V dalším kroku C) se vinylfosfonové kyseliny 11 esterifikují alkoholem pomocí TPSC1 za katalýzy Mmethylimidazolem v rozpouštědle, zvoleném ze skupiny, zahrnující acetonitril, dioxan, THF, dichlorethan, chloroform^ dichlormethan (Schéma 3). Vinylfosfonát 12 se oddělí chromatografií na sloupci silikagelu za použití lineárního gradientu etanolu v chloroformu.
Finálním krokem D) je Michaelova adice sekundárního aminu na vinylovou funkci meziproduktu 12. Reakce se provádí zahříváním v rozpouštědle, zvoleném ze skupiny, zahrnující acetonitril, dioxan, THF, dichlorethan, chloroform, etanol, propanol, isopropanol a nbutanol, pn teplotě 80 až 120 °C po dobu 4 až 12 hodin. Následně se odstraní chránící skupiny na nukleobázi. Produkt se pak izoluje na sloupci silikagelu za použití lineárního gradientu směsi H1 (viz výše) v ethylacetátu (Schéma 4). Pokud je třeba, je produkt I ještě dočištěn pomocí preparativní HPLC na reversní fázi.
Význakem uvedeného způsobu výroby lipofosfonoxinů obecného vzorce I či jejich diastereomerů a směsí takových diastereomerů je skutečnost, že zahřívání přes noc s vodným pyridinem v kroku A) a B) se výhodně provádí při teplotě 60 °C a použitý roztok je s výhodou 60% (objem. %); Michaelova adice v kroku D se s výhodou provádí v n-butanolu zahříváním na 105 °C, nejlépe přes noc.
Význakem je dále to, že esterifikace v krocích B a C se výhodně provádí v dichlormethanu.
Význakem uvedeného způsobu výroby lipofosfonoxinů obecného vzorce I či jejich diastereomerů a směsí takových diastereomerů je dále skutečnost, že chránící skupiny nukleosidu se v kroku D) odstraní ethanolickým roztokem methylaminu nebo vodným amoniakem a v případě použití ribonukleosidu chráněného 2’,3’-isopropylidenovou skupinou se tato výhodně odstraní působením roztoku 0,5 mohr1 chlorovodíku v methanolu při laboratorní teplotě/přes noc.
Předmětem vynálezu jsou dále lipofosfonoxiny obecného vzorce I či jejich diastereomery nebo farmaceuticky přijatelné soli a hydráty, a/nebo směsi takových sloučenin, pro použití jako léčiva.
Předmětem vynálezu jsou také lipofosfonoxiny obecného vzorce I či jejich diastereomery nebo farmaceuticky přijatelné soli a hydráty, a/nebo směsi takových sloučenin, pro použití jako antibakteriální léčiva.
Předmětem vynálezu je i antibakteriální léčivo, obsahující jako účinnou složku lipofosfonoxiny obecného vzorce I či jejich diastereomery nebo farmaceuticky přijatelné soli a hydráty, a/nebo směs takových sloučenin.
Dalším předmětem vynálezu je také použití lipofosfonoxinů obecného vzorce I či jejich diastereomerů nebo farmaceuticky přijatelných solí a hydrátů, a/nebo směsí takových sloučenin, pro přípravu antibakteriálního léčiva.
Předmětem vynálezu je dále použití lipofosfonoxinů obecného vzorce I Či jejich diastereomerů nebo farmaceuticky přijatelných solí a hydrátů, a/nebo směsí takových sloučenin, pro přípravu léčiva k léčení bakteriálních infekcí.
Konečně je předmětem vynálezu použití lipofosfonoxinů obecného vzorce I či jejich diastereomerů nebo farmaceuticky přijatelných solí a hydrátů, a/nebo směsí takových sloučenin, jako účinné složky desinfekčních prostředků a/nebo selektivních kultivačních médií pro in vitro kultivace.
Látky podle předkládaného vynálezu vykazují antibakteriální účinky proti kmenům Enterococcus faecalis, Bacterium subtilis a Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus haemolyticus, Enterococcus faecium, Staphylococcus epidermidis, a to i proti kmenům rezistentním vůči stávajícím antibiotikům.
Látky podle předkládaného vynálezu současně vykazovaly jen velmi malé nebo žádné ovlivnění viability normálních lidských erytroidních buněk kultivovaných in vitro v rozmezí účinných antibakteriálních koncentrací látek. Totéž platí pro jimi indukovanou cytototoxicitu.
Modularita struktury a snadná syntéza spojováním jednotlivých modulů umožňuje rozsáhlé strukturní variace sloučenin podle předkládaného vynálezu, které mohou vést k modulaci jejich biologické aktivity.
Prehlzd
ZPepi^ obrázků na výkresech
Obr. 1A-I znázorňují viabilitu buněk, stanovenou pomocí komerčního testu CellTiter-Blue® Cell Viability Assay (Promega, katalog, č. G8082). Na ose x je logaritmicky vynesena koncentrace testované sloučeniny vmg/ml a na ose y viabilita buněk v % kontrol. IA: sloučenina z příkladu 9, IB: sloučenina z příkladu 10, 1C sloučenina z příkladu 11, ID: sloučenina z příkladu 12, 1E: sloučenina z příkladu 13, 1F sloučenina z příkladu 14, 1G: sloučenina z příkladu 15, 1H: sloučenina z příkladu 16, II: sloučenina z příkladu 17. Na všech obr. jsou svislými přímkami vynesenými souběžně s osou y znázorněny minimální inhibiční koncentrace (= min. baktericidní koncentrace) popsaných bakteriálních kmenů.
Obr. 2A-E znázorňují cytotoxicitu předkládaných sloučenin, stanovenou pomocí komerčního testu CytoTox-ONE™ Homogeneous Membrane Integrity Assay (Promega, katal. č. G7892). Na ose x je logaritmicky vynesena koncentrace testované sloučeniny v mg/ml a na ose y normalizovyná cytotoxicita, uvedená bezrozměrným číslem. 2A: sloučenina z příkladu 9, 2B: sloučenina z příkladu 14, 2C: sloučenina z příkladu 15, 2D: sloučenina z příkladu 16, 2E: sloučenina z příkladu 17. Na všech obr. jsou svislými přímkami vynesenými souběžně s osou y znázorněny minimální inhibiční koncentrace (= min. baktericidní koncentrace) popsaných bakteriálních kmenů.
Příklady provedení vynálezu
Seznam uvedených zkratek:
| DCM TPSC1 IR HR-ESI HR-EI n-BuOH DMTr THF ec50 IC50 | dichlormethan triisopropylbenzensulfonylchlorid infračervené spektrum hmotnostní spektrum ve vysokém rozlišení, používající elektronspray ionizací hmotnostní spektrum ve vysokém rozlišení, používající elektronimpakt ionizaci n-butylalkohol dimethoxytrityl tetrahydrofuran střední účinná (efektivní) koncentrace (vyvolávající 50 % maximálního účinku) inhibiční koncentrace (vyvolávající 50 % maximálního inhibiěního účinku) |
A) Příprava nových sloučenin
Příklad 1
2’3’isopropylidenuridin-5’-yhvinylfosfonát
Ke směsi monomethyl£fosfonátu (9,15 g, 75 mmol), 2’,3’-isopropyliden$uridinu (14 g, 50 mmol) a 1-methylimmidazolu (5,9 ml, 150 mmol) v DCM (500 ml) se přidá TPSC1 (45,43 g, 150 mmol). Reakční směs se pak míchá při laboratorní teplotěVpfes noc. Poté se nejprve extrahuje nasyceným roztokem NaHCO3 (2^x 500 ml), následně 3% vodnou kyselinou citrónovou (2^x 500 ml) a suší nad bezvodým Na2SO4. Organická fáze se za vakua zahustí a monomethyl^sterový meziprodukt, získáný chromatografií na silikagelu za použití lineárního gradientu etúnolu v chloroformu bez detailní charakterizace, se míchá přes noc s 40t70% výhodně 60% (obj. %) vodným pyridinem (500 ml) při teplotě 50r80 °C výhodně 60 °C. Reakční směs se zahustí za vakua, kodestiluje s etúnolem (2> 300 ml) a rozpustí ve stejném rozpouštědle (500 ml). Přidá se Dowex 50 v triethylamoném cyklu (200 ml) a suspenze se míchá po dobu 10 min. Dowex se odstraní filtrací a filtrát se zahustí ve vakuu. Produkt se získá chromatografií na silikagelu za použití lineárního gradientu směsi H1 (ethylacetát:aceton:ethanol:voda, 4:1:1:1, objem, podíly) v ethylacetátu se 48% výtěžkem (11,38 g, 23,93 mmol ) ve formě béžové pěny.
’H NMR (499,8 MHz, CD3OD): 1,35, 1,54 (2 χ q, 2 χ 3H, V= 0,5, (CH3)2C); 3,98 (dd, 2H, Jh.p = 5,3, J5>4· = 3,4, H-5'); 4,35 (m, 1H, H-4'); 4,90 (m, 2H, H-2',3'); 5,74 (d, 1H, JSfi = 8,1, H5); 5,86 (ddd, 1H, JH,P = 46,0, Jcis = 12,3, = 3,1, CHclsIItran =CHP); 5,95 (d, 1H, = 2,5,
Η-Γ); 6,00 (ddd, 1^7^ = 22,8,/^ = 18,7,7^ = 3,1,^ (ddd, 1H,7h>p = 19,7, = 18,7, Jcis = 12,3, =CHP); 7,86 (d, 1H, J6>5 = 8,1, H-6).
t3C NMR (125,7 MHz, CD3OD): 25,53, 27,55 ((CH3)2C); 65,31 (d, JC.P = 4,8, CH2-5’); 82,49 (CH-3); 85,67 (CH-2'); 86,56 (d, 7C>P = 8,0, CH-4'); 93,40 (CH-Γ); 102,98 (CH-5); 114,99 (C(CH3)2); 130,74 (CH2=CHP); 132,70 (d, JC,P = 174,3, =CHP); 143,42 (CH-6); 152,16 (C-2); 166,15 (C-4).
3lP NMR (202,3 MHz, CD3OD): 13,16.
IR vmax(KBr) 3200 (w, br), 2977 (m), 2939 (m), 2803-2100 (s-vw), 1715 (s, sh), 1695 (vs), 1630 (w, sh), 1612 (w, sh), 1469 (m), 1434 (m), 1398 (m), 1384 (m), 1373 (m, sh), 1273 (m), 1214 (s), 1115 (m, sh), 1070 (s, br), 1037 (s), 1018 (m, sh), 995 (w), 765 (w), 517 (w) cm'1. HR-ESI Ci4Hi8O8N2P (M-Hf vypočteno 373,0806; nalezeno 373,0809.
Příklad 2
Tetradecyl-2’3’-isopropylidenuridin-5’-yl4vinylfosfonát, 10c
TPSC1 (4,68 g, 15,45 mmol) se přidá ke směsi vinylfosfonové kyseliny z příkladu 1 (1,93 g, 5,15 mmol), tetradekanolu (2,2 g, 10,31 mmol) a #-methylimidazolu (1,22 ml, 15,45 mmol) v DCM (50 ml). Reakční směs se míchá přes noc. Reakční směs se nejprve extrahuje nasyceným roztokem NaHCO3 (2k 100 ml), následně 3% vodnou kyselinou citrónovou (2pí 100 ml) a suší nad bezvodým Na2SO4. Organická fáze se za vakua zahustí , a finální produkt se získá chromatografií na silikagelu za použití lineárního gradientu eťanolu v chloroformu se 40% výtěžkem (1,17 g, 2,05 mmol) ve formě nažloutlého viskozního oleje.
Směs diastereomerů ~ 6:5 *H NMR (499,8 MHz, CDC13): 0,88 (m, 6H, CH3(CH2)13); 1,20-1,35 (m, 44H, CH3(CH2)nCH2CH2O); 1,350, 1,354, 1,573, 1,576 (4 x q, 4 χ 3H, 47 = 0,7, (CH3)2C); 1,67 (m, 4H, CH3(CH2)nCH2CH2O); 4,03, 4,04 (2 χ dt, 2 χ 2H, JHP = 7,3, Jvjc = 67 CH^CH^hCHjCHjO); 4,19-4,29 (m, 4H, H-5'); 4,35-4,39 (m, 2H, H-41); 4,85, 4,86 (2 χ dd, 2 x 1H, J3;2· - 6,4, Jy# = 3,6, H-3'); 4,88, 4,89 (2 * dd, 2 χ 1H, Jyy = 6,4, = 2,3, H-2’); 5,71,
5,72 (2 χ d, 2 χ 1H, J5>(> =8,1, H-5); 5,77, 5,81 (2 χ d, 2 χ 1H, J^- = 2,3, Η-Γ); 6,03, 6,04 (2 χ ddd, 2 χ 1H, JH,P = 22,9, J^ = 18,6, Jcis = 12,7, =CHP); 6,16, 6,19 (2 χ ddd, 2 χ 1H, JH,P = 51,6, JCis - 12,7, Jgem = 2,0, CHcisHtr.ns=CHP); 6,33, 6,34 (2 χ ddd, 2 χ 1H, JHP = 25,7, J^.. = 18,7, Jgem = 2,0, CHtiSHtrans=CHP); 7,38, 7,43 (2 χ d, 2 χ 1H, J65 = 8,1, H-6); 9,34 (bs, 2H, NH).
,3C NMR (125,7 MHz, CDClj): 14,08 (CH3(CH2)B); 22,64 (CH3(CH2)hCH2CH2O); 25,23, 25,25 ((CH3)2C); 25,43 (CH3(CH2)iiCH2CH2O); 27,08, 27,09 ((CH3)2C); 29,10, 29,30, 29,46, 29,52, 29,59, 29,60, 29,62, 29,64 (CH3(CH2)hCH2CH2O); 30,39 (d, JC>P = 6,2, CH3(CH2)hCH2CH2O); 31,87 (CH3(CH2)I(CH2CH2O); 64,93, 65,01 (d, JCP = 5,5, CH2-5'); 66,47, 66,48 (d, Jc,p = 5,7, CH3(CH2)nCH2CH2O); 80,57, 80,66 (CH-3'); 84,45, 84,53 (CH-2'); 85,26, 85,55 (d, JCjP = 7,0, CH-4'); 93,43, 93,83 (CH-Γ); 102,49, 102,58 (CH-5); 114,54, 114,59 (C(CH3)2); 124,97, 125,02 (d, JC>P = 184,3, =CHP); 136,60, 136,62 (CH2=CHP); 141,47, 141,55 (CH-6); 149,96, 149,99 (C-2); 163,11 (C-4).
3tP NMR (202,3 MHz, CDC13): 18,59, 18,74.
IR WCHCh) 3390 (w), 3170 (w, br), 2957 (s), 2928 (vs), 2856 (s), 1715 (vs), 1695 (vs), 1634 (m), 1616 (m), 1457 (s), 1421 (m), 1399 (m), 1384 (s), 1378 (s), 1240 (vs, br), 1121 (s), 1109 (s), 1070 (vs), 1011 (vs), 988 (s), 973 (s, sh), 860 (s), 544 (m), 512 (m) cm'1.
HR-ESI C2aH48OgN2P [M+H]+ vypočteno 571,31428, nalezeno 571,31445, C2SH47O8N2NaP [M+Na]+ vypočteno 593,29622, nalezeno 593,29616.
Příklad 3
Hexadecyl-2*3’-iSOpropylideiiuridiii-5’-ylí-vinylfosfonát, lOd
O
TPSCI (4,12 g, 13,62 mmol) se přidá ke směsi vinylfosfonové kyseliny z příkladu 1 (1,7 g, 4,54 mmol), hexadekanolu (2,9 g, 12 mmol) a 1-methylimidazolu (1,08 ml, 13,62 mmol) v DCM (50 ml). Reakční směs se míchá přes noc. Reakční směs se nejprve extrahuje nasyceným roztokem NaHCO3 (2:x 100 ml), následně 3% vodnou kyselinou citrónovou (2,’x 100 ml) a suší nad bezvodým Na2SO4. Organická fáze se za vakua zahustí a finální produkt se získá chromatografií na silikagelu za použití lineárního gradientu etánolu v chloroformu s 50% výtěžkem (1,38 g, 2,3 mmol) ve formě bezbarvého viskozního oleje.
Směs diastereomerů — 6:5 *H NMR (499,8 MHz, CDC13): 0,88 (m, 6H, CH3(CH2)15); 1,22-1,35 (m, 52H, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 1,350, 1,354, 1,573, 1,577 (4 x q, 4 x 3H, 0,7, (CH3)2C); 1,67 (m,
4H, CH3(CH2)]3CH2CH2O); 4,03, 4,04 (2 χ dt, 2 χ 2H, JH,p = 7,3, JVK = 6,7, CH3(CH2)13CH2CH2O); 4,19-4,30 (m, 4H, H-5’); 4,35-4,39 (m, 2H, H-4'); 4,85, 4,86 (2 χ dd, 2 x 1H, Jy? = 6,4, J3.4. = 3,6, H-3'); 4,878, 4,8984 (2 χ dd, 2 χ 1H, J?? = 6,4, Λ.r = 2,3, H-2'); 5,71, 5,72 (2 χ dd, 2 χ 1H, Λ.6 = 8,1, J5iNH = 2,2, H-5); 5,78, 5,81 (2 χ d, 2 χ 1H, J^· = 2,3, HΓ); 6,03, 6,05 (2 χ ddd, 2 χ 1H, JH,p = 22,8, = 18,6, Jcis = 12,8, =CHP); 6,12, 6,13 (2 χ ddd, 2 χ 1H, Jh,p = 51,7, = 12,8, Jgem = 2,0, CHcisHt„M=CHP); 6,33, 6,34 (2 x ddd, 2 χ 1H, •7h,p - 24,8, Jtram = 18,6, Jgem = 2,0, CHdjHtnu^CHP); 7,38, 7,43 (2 χ d, 2 χ 1H, J6 S = 8,1, H-6); 9,15,9,18 (2 χ bs, 2 χ 2H, NH).
”C NMR (125,7 MHz, CDC13): 14,08 (CH3(CH2)i5); 22,65 (CH3(CH2)i3CH2CH2O); 25,23, 25,26 ((CH3)2C); 25,43 (CH3(CH2)i3CH2CH2O); 27,08, 27,10 ((CH3)2C); 29,11, 29,32, 29,47, 29,53, 29,60, 29,61, 29,63, 29,65 (CH3(CH2)13CH2CH2O); 30,40 (d, Jc,p = 6,3, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 31,88 (CH3(CH2)i3CH2CH2O); 64,93, 65,00 (d, JCP = 5,5, CH2-5'); 66,47, 66,48 (d, Jc,p = 5,7, CH3(CH2)13CH2CH2O); 80,57, 80,66 (CH-3'); 84,46, 84.54 (CH-21); 85,25, 85,55 (d, Jc,p = 7,1, CH-4'); 93,40, 93,80 (CH-1'); 102,49, 102,57 (CH-5); 114,55, 114,60 (C(CH3)2); 124,99, 125,04 (d, Jc,p = 184,2, =CHP); 136,62, 136,66 (d, Je? = 2.0, CH2=CHP); 141,46, 141,55 (CH-6); 149,92, 149,95 (C-2); 163,05, 163,07 (C-4).
3,PNMR (202,3 MHz, CDC13): 18,59, 18,73.
HR-ESI C30H5|O8N2PNa (M+Na)+ vypočteno 621,32752; nalezeno 621,32778
Příklad 4
X
Oítadecyl-2’3’-isopropylidenuridin-5’-yhvinyIfosfonát, 10e
O
TPSC1 (4,16 g, 13,74 mmol) se přidá ke směsi vinylfosfonové kyseliny z příkladu 1 (2,18 g, 4f58 mmol), oktadekanolu (2,48 g, 9,17 mmol) a 1-methyiimidazolu (1,08 ml, 13,74 mmol) v
DCM (50 ml). Reakční směs se míchá přes noc, poté se nejprve extrahuje nasyceným roztokem NaHCO3 (2^x 100 ml), následně 3% vodnou kyselinou citrónovou (2^x 100 ml) a suší nad bezvodým Na2SO4. Organická fáze se za vakua zahustí finální produkt se získá chromatografií na silikagelu za použití lineárního gradientu etúnolu v chloroformu s 43% výtěžkem (1,23 g, 1,96 mmol) ve formě bezbarvého viskozního oleje.
Směs diastereomerů ~ 6:5 ‘H NMR (499,8 MHz, CDC13): 0,88 (m, 6H, CH3(CH2)17); 1,20-1,40 (m, 60H, CH3(CH2)i5CH2CH2O); 1,350, 1,354, 1,573, 1,576 (4 χ q, 4 χ 3H, 4J= 0.7, (CH3)2C); 1,66 (m, 4H, CH3(CH2)|5CH2CH2O); 4,03, 4,04 (2 χ dt, 2 χ 2H, JH,P = 7,3, Jvic = 6,7, CH3(CH2)i5CH2CH2O); 4,19-4,29 (m, 4H, H-5'); 4,34-4,39 (m, 2H, H-4'); 4,85, 4,86 (2 χ dd, 2 χ 1H, Jyj = 6,4, Λ.4' = 3,7, H-3'); 4,88, 4,89 (2 χ dd, 2 χ 1H, J2^ = 6,4, J2J. = 2,3, H-2’); 5,71, 5,72 (2 χ d, 2 χ 1H, JSy = 8,1, H-5); 5,77, 5,81 (2 χ d, 2 χ 1H, = 2,3, Η-Γ); 6,03, 6,04 (2 χ ddd, 2 χ 1H, Jh,p - 22,9, Jtrans = 18,6, JCjS = 12,7, =CHP); 6,16, 6,19 (2 χ ddd, 2 χ 1H, Jhp = 51,7, Jeis = 12,7, Jgem = 2,0, CHc,sHtra(ls=CHP); 6,33, 6,34 (2 χ ddd, 2 χ 1H, JH>P = 25,6, Jtrans = 18,6, Jgem = 2,0, CHCiSHtrans=CHP); 7,38, 7,43 (2 χ d, 2 χ 1H, - 8,1, H-6); 9,37 (bs, 2H,
NH).
UC NMR (125,7 MHz, CDC13): 14,08 (CH3(CH2)I7); 22,64 (CH3(CH2)I5CH2CH2O); 25,22, 25,25 ((CH3)2C); 25,43 (CH3(CH2)i5CH2CH2O); 27,07, 27,09 ((CH3)2C); 29,10, 29,31, 29,46, 29,53, 29,60, 29,61, 29,63, 29,65 (CH3(CH2)i5CH2CH2O); 30,39 (d, JC,P = 6,2, CH3(CH2)i5CH2CH2O); 31,87 (CH3(CH2)15CH2CH2O); 64,93, 65,01 (d, JC>P = 5,5, CH2-5'); 66,46, 66,47 (d, JC P = 5,7, CH3(CH2)i5CH2CH2O); 80,57, 80,66 (CH-3'); 84,45, 84.53 (CH-2'); 85,27, 85,56 (d, JC,P = 7,0, CH-4'); 93,44, 93,83 (CH-Γ); 102,49, 102,58 (CH-5); 114,53, 114,58 (C(CH3)2); 124,97, 125,01 (d, JC>P = 184,2, =CHP); 136,62, 136,66 (d, JC,P = 2,0, CH2=CHP); 141,47, 141,56 (CH-6); 149,97, 150,00 (C-2); 163,14, 163,16(04).
31P NMR (202,3 MHz, CDC13): 18,59, 18,74.
IR vmax(CHCl3) 3390 (w), 3170 (w, br), 2928 (vs), 2855 (vs), 1716 (vs), 1695 (vs), 1634 (m), 1615 (w), 1457 (s), 1420 (m), 1399 (m), 1385 (s), 1378 (s), 1246 (s, br), 1121 (s), 1110 (s), 1071 (s), 1010 (s), 988 (s), 974 (s, sh), 860 (m), 544 (w), 512 (w) cm‘.
HR-ESIC32 H56 O8 N2 P [M+H]+ vypočteno 627,37688, nalezeno 627,37738.
Příklad 5
Ieósanyl-2\3*-isopropylidenuridin-5’-yhvinylfosfonát, lOf
TPSC1 (4,49 g, 14,82 mmol) se přidá ke směsi vinylfosfonové kyseliny z příkladu 1 (2,35 g, 4,94 mmol), ikosanolu (2,95 g, 9,9 mmol) a 1-methylimidazolu (1,17 ml, 14,82 mmol) v DCM (50 ml). Reakční směs se míchá přes noc, poté se nejprve extrahuje nasyceným roztokem NaHCO3 (φ 100 ml), následně 3% vodnou kyselinou citrónovou (2jyc 100 ml) a suší nad bezvodým Na2SO4. Organická fáze se za vakua zahustí a. finální produkt se získá chromatografií na silikagelu za použití lineárního gradientu etaolu v chloroformu s 34% výtěžkem (1,1 g, 1,68 mmol) ve formě bezbarvého vosku.
Směs diastereomerů ~ 6:5 ‘H NMR (499,8 MHz, CDC13): 0,88 (m, 6H, CH3(CH2)19); 1,20-1,36 (m, 68H, CH3(CH2)i7CH2CH2O); 1,351, 1,354, 1,574, 1,577 (4 χ q, 4 χ 3H, 0,7, (CH3)2C); 1,66 (m,
4H, CH3(CH2)17CH2CH2O); 4,03, 4,04 (2 χ dt, 2 χ 2H, JH,p “ 7,3, Jvic = 6,7, CH3(CH2)17CH2CH2O); 4,19-4,29 (m, 4H, H-5'); 4,35-4,39 (m, 2H, H-4'); 4,84, 4,86 (2 χ dd, 2 x 1H, Jy? = 6,4, Jy 4> = 3,4, H-3'); 4,87,4,89 (2 χ dd, 2 χ 1H, Jyy = 6,4, Λ>Γ = 2,3, H-2'); 5,706, 5,714 (2 χ d, 2 χ 1H, J5,6 = 8,1, H-5); 5,77, 5,80 (2 χ d, 2 χ 1H, = 2,3, H-Γ); 6,03, 6,06 (2 χ ddd, 2 χ 1H, Jh,p = 22,8, J*™ = 18,6, Jcis = 12,7, =CHP); 6,17, 6,19 (2 χ ddd, 2 χ 1H, Jh,p = 51,7, JCjS - 12,7, Jgem = 2,0, CHCjSHtr>ns=CHP); 6,33, 6,34 (2 χ ddd, 2 χ 1H, JHp - 25,6, Jtrans = 18,6, Jgem = 2,0, CHCiSHtranS=CHP); 7,37, 7,43 (2 χ d, 2 χ 1H, J65 = 8,1, H-6); 9,08 (bs, 2H, NH).
UC NMR (125,7 MHz, CDCIj): 14,10 (CH3(CH2)„); 22,66 (CH3(CH2)i7CH2CH2O); 25,24, 25,26 ((CH3)2C); 25,44 (CH3(CH2)i7CH2CH2O); 27,09, 27,11 ((CH3)2C); 29,12, 29,33, 29,48, 29,55, 29,62, 29,65, 29,67 (CH3(CH2)17CH2CH2O); 30,41 (d, Jc,p = 6,3, CH3(CH2)i7CH2CH2O); 31,89 (CH3(CH2)i7CH2CH2O); 64,92, 64,99 (d, JCP = 5,5, CH2-5'); 66,48, 66,50 (d, Jc,p = 5,7, CH3(CH2)i7CH2CH2O); 80,57, 80,66 (CH-3'); 84,47, 84,56 (CH-2'); 85,25, 85,54 (d, JCP = 7,0, CH-4'); 93,44, 93,83 (CH-Γ); 102,50, 102,59 (CH-5); 114.56, 114,62 (C(CH3)2); 124,98, 125,02 (d, Jc,p = 184,2, =CHP); 136,65, 136,70 (d, JCP = 1,9, CH2=CHP); 141,41, 141,50 (CH-6); 149,90, 149,93 (C-2); 162,92, 162,95 (C-4).
3,P NMR (202,3 MHz, CDC13): 18,59, 18,74.
IR vmax(CHCl3) 3389 (w), 3167 (w, vbr), 2928 (vs), 2855 (s), 1715 (vs), 1695 (vs), 1634 (m), 1615 (w), 1457 (s), 1420 (w), 1399 (m), 1384 (s), 1378 (s), 1249 (s, sh), 1122 (m), 1110 (s), 1078 (s), 1011 (s), 989 (s), 975 (s, sh), 860 (m), 544 (w), 512 (w) cm’1.
HR-ESI C34H60O8N2P [M+H] vypočteno 655,40818, nalezeno 655,40857, C34H59O8N2NaP [M+Na] vypočteno 677,39012, nalezeno 677,39032.
Příklad 6
A;
Hexadecyloxypropyl-2’3’-isopropylidenuridin-5’-yhvinyfosfonát, 10g
O
TPSC1 (5,54 g, 18,3 mmol) se přidá ke směsi vinylfosfonové kyseliny z příkladu 1 (1,8 g, 6,1 mmol), h^xadecyloxypropanolu (1,45 g, 3,05 mmol)a 1 -methylimidazolu (1,45 ml, 18,3 mmol) v DCM (60 ml). Reakční směs se míchá přes noc, poté se nejprve extrahuje nasyceným roztokem NaHCO3 (2^c 100 ml), následně 3% vodnou kyselinou citrónovou (2[k 100 ml) a suší nad bezvodým Na2SO4. Organická fáze se za vakua zahustí ά finální produkt se získá chromatografií na silikagelu za použití lineárního gradientu ethnolu v chloroformu s 71% výtěžkem (1,42 g, 2,16 mmol) ve formě bezbarvého vosku.
Směs diastereomerů — 1:1 *H NMR (500,0 MHz, CDC13): 0,88 (m, 6H, CH3(CH2)i5); 1,23-1,33 (m, 52H, CH3(CH2)I3CH2CH2O); 1,348, 1,352 (2 χ q, 2 χ 3H, = 0,6, (CH3)2C); 1,54 (m, 4H,
CH3(CH2)13CH2CH2O); 1,57 (s, 6H, (CH3)2C); 1,92, 1,94 (2 χ p, 2 χ 2H, Jvic = 6,1, OCH2CH2CH2OCI6H33); 3,38, 3,39 (2 χ t, 2 χ 2H, = 6,7, CH3(CH2)13CH2CH2O); 3,48, 3,49 (2 χ t, 2 χ 2H, Jvíc = 6,1, OCH2CH2CH2OC[6H33); 4,13, 4,15 (2 χ td, 2 χ 2H, Jvic = 6,1, JHP = 4,8, OCH2CH2CH2OCi6H33); 4,20-4,30 (m, 4H, H-5'); 4,34-4,38 (m, 2H, H-4'); 4,85, 4,86 (2 χ dd, 2 χ 1H, J3.2. = 6,5, /3·,4· = 3,6, H-3'); 4,92 (dd, 2H, = 6,5, r = 2,3, H-2'); 5,700, 5,704 (2 χ d, 2 χ 1H, J5,6 = 8,1 H-5); 5,74, 5,76 (2 χ d, 2 χ 1H, = 2,3, Η-Γ); 6,03, 6,05 (2 χ ddd,
X 1H, JH,P = 22,9, /trans = 18,4, Jcis = 12,7, =CHP); 6,16, 6,18 (2 χ ddd, 2 χ 1H, JH,p = 51,8, Jcis - 12,7, Jeem = 1,9, CHcisHtrans^CHP); 6,33, 6,35 (2 χ ddd, 2 χ 1H, JH,p = 25,5, = 18,4, Jgem = 1,9, CHdsHtrans^CHP); 7,34, 7,39 (2 χ d, 2 χ 1H, S = 8,1, H-6).
,JC NMR (125,7 MHz, CDC13): 14,07 (CH3(CH2)i5); 22,62 (CH3(CH2)I3CH2CH2O); 25,19, 25,21 ((CH3)2C); 26,08 (CH3(CH2)i4CH2O); 27,04, 27,06 ((CH3)2C); 29,29, 29,45, 29.55, 29,57, 29,58, 29,63 (CH3(CH2)14CH2O); 30,66, 30,68 (d, Jc,p = 6,4, OCH2CH2CH2OCi6H33); 31,85 (CH3(CH2)I3CH2CH2O); 63,56, 63,57 (d, Jc.p = 5,5, OCH2CH2CH2OC16H33); 64,92, 65,01 (d, Jc,p= 5,5, CH2-5'); 66,32, 66,36 (OCH2CH2CH2OCI6H33); 71,15, 71,16 (CH3(CH2)i4CH2O); 80,60, 80,67 (CH-3*); 84,44, 84,53 (CH-2'); 85,38, 85,62 (d, Jc,p = 7,1, CH-4'); 93,82, 94,12 (CH-Γ); 102,57, 102,64 (CH-5); 114,42, 114,46 (C(CH3)2); 124,75, 124,80 (d, Jc,p = 184,0, =CHP); 136,75, 136,77 (d, JC(p = 1,9, CH2=CHP); 141,43, 141,48 (CH6); 150,16 (C-2); 163,29, 163,32 (C-4).
3,P NMR (202,3 MHz, CDC13): 18,64, 18,80.
IR vmax(KBr) 2925 (vs), 2854 (s), 1709 9vs, sh), 1696 (vs), 1630 (w), 1459 (m), 1421 (m), 1400 (w, sh), 1381 (m), 1270 (m, sh), 1250 (m, sh), 1109 (s), 1078 (s), 1028 (s), 1012 (s), 972 (m, sh), 859 (m), 762 (w), 548 (w), 514 (w) cm’1.
HR-ESIC33H5SO9N2P (M+H)+ vypočteno 657,3874; nalezeno 657,3876.
Příklad 7
4-/V-Benzoyl-2’3’-isopropylidencytidin-5’-yl+vinylfosfonát, 9b
NHBz
Ke směsi monomethylfosfonátu (1,95 g, 16 mmol), 4-y-benzoyl-2’,3’-isopropyliden^cytidinu (3,05g, 7,87 mmol), a 1 -methylimmidazolu (1,9 ml, 23,61 mmol) v DCM,(80 ml) se přidá TPSC1 (7,15 g, 23,61 mmol). Reakční směs se míchá při laboratorní- teplotě «přes noc, poté se extrahuje nasyceným roztokem NaHCO3 (2,Jx 100 ml), následně 3% vodnou kyselinou citrónovou (2fx 100 ml) a suší nad bezvodým Na2SO4. Organická fáze se za vakua zahustí a monomethylesterový meziprodukt, získáný chromatografií na silikagelu za.použití lineárního gradientu efenolu v chlorofomX se bez detailní charakterizace míchá se 40+70% výhodně 60% (objem. %) vodným pyridinem (100 ml) při teplotě 50+80 °C výhodně 60 °C přes noc. Reakční směs se zahustí za vakua, kodestiluje se s eíŽnoIem (2|> 100 ml) a rozpustí se ve stejném rozpouštědle (100 ml). Přidá se Dowex 50 v triethylamonem cyklu (80 ml) a suspenze se míchá po dobu 10 mm. Dowex se odstraní filtrací a filtrát se zahustí ve vaku. Produkt se získá chromatografií na silikagelu za použití lineárního gradientu směsi H1 (ethylacetát:aceton:ethanol:voda 4:1:1:1) v ethylacetátu s 52% výtěžkem (1,95 g, 4,1 mmol) ve formě béžové pěny,
Látka je podle NMR ve formě triefylamonné soli:
H NMR (600,1 MHz, CD3OD); 1,31 (t, 9H, Jvic = 7,3, CH3CH2N); 1,37, 1,57 (2 x q, 2 χ 3H, 4J = 0,7, (CH3)2C); 3,20 (q, 6H, Jvic = 7,3, CH3CH2N); 4,02 (ddd, 1H, = 11,5, JH>P = 6,0, ^5b·4' - 3,4, H-5 b); 4,06 (ddd, 1H, Jgem = 11,5, JH,p = 4,5, = 3,0, H-5'a); 4,50 (m, 1H, H-4');
4,91 (dd, 1H, Jy? = 6,0, Λ,4· = 2,2, H-3'); 4,93 (dd, 1H, = 6,0, J2. r = 2,3, H-2'); 5,86 (ddd,
1H, Jh.p - 46,0, Jcis = 12,4, Jgem = 3,1, CHcisHtrin,=CHP); 6.00 (d, 1H, = 2,3, Η-Γ); 6,01 (ddd, 1H, JH,p = 22,9, <7^ = 18,7, Jgcm = 3,1, CHciJHtrans=CHP); 6,11 (ddd, 1H, JH,p = 19,6, Arans = 18,7, Jcís = 12,4, =CHP); 7,55 (m, 2H, H-m-Ph); 7,62 (bd, 1H, J5,6 = 7,5, H-5) 7,64 (m, 1H, H-p-Ph); 7,98 (m, 2H, H-o-Ph); 8,35 (d, 1H, J6,s = 7,5, H-6).
°C NMR (150,9 MHz, CD3OD): 9,18 (CH3CH2N); 25,45, 27,47 ((CH3)2C); 47,73 (CH3CH2N); 65,09 (d, Jc,p = 4,8, CH2-5'); 82,47 (CH-3’); 87,16 (CH-2'); 87,91 (d, Jc,p = 8,1, CH-4); 95,59 (CH-Γ); 98,54 (CH-5); 114,69 (C(CH3)2); 129,16 (CH-o-Ph); 129,82 (CH-m-Ph); 130,80 (CH2=CHP); 132,71 (d, Jc.p = 174,8, =CHP); 134,05 (CH-p-Ph); 134,78 (C-i-Ph); 147,24 (CH-6); 157,90 (C-2); 164,99 (C-4); 169,02 (CO).
31P NMR (202,3 MHz, CD3OD): 13,02.
HR-ESI C2iH23OgN3P (M-H)+ vypočteno 476,1223; nalezeno 476,1221.
Příklad 8
Hexadecyloxypropyl-4-A-benzoyl-2’3’-isopropylidencytidin-5’-yLvinylfosfonát, lOh
NHBz
TPSC1 (1,24 g, 4,08 mmol) se přidá ke směsi vinylfosfonové kyseliny z příkladu 8 (0,65 g, 1,36 mmol), haxadecyloxypropanolu (0,81 g, 2,7 mmol) a 1-methylimidazolu (0,33 ml, 4,08 mmol) v DCM (20 ml). Reakční směs se míchá přes noc, poté se nejprve extrahuje nasyceným roztokem NaHCO3 (2^x 100 ml), následně 3% vodnou kyselinou citrónovou (2,x 100 ml) a suší nad bezvodým Na2SO4. Organická fáze se za vakua zahustí a finální produkt se získá chromatografií na silikagelu za použití lineárního gradientu etánolu v chloroformu s 78% výtěžkem (0,81 g, 1,06 mmol) ve formě bílé pěny.
Směs diastereomerů ~ 1:1 ’H NMR (600,1 MHz, CD3OD): 0,895 (m, 6H, CH3(CH2)15); 1,24-1,35 (m, 52H, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 1,368, 1,371 (2 χ q, 2 * 3H, = 0,6, (CH3)2C); 1,51 (m, 4H,
CH3(CH2)13CH2CH2O); 1,57 (s, 6H, (CH3)2C); 1,89, 1,91 (2 χ p, 2 χ 2H, Jvjc = 6,1, OCH2CH2CH2OCi6H33); 3,38, 3,39 (2 χ t, 2 χ 2H, Jvic = 6,7, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 3,47 (td, 2H, Jvic“ 6,1, Jh,p= 1,2, OCH2CH2CH2OCi6H33); 3,49 (t, 2H, Jvic = 6,1, OCH2CH2CH2OC16H33); 4,09-4,16 (m, 4H, OCH2CH2CH2OCi6H33); 4,27-4,36 (m, 4H, H-5’); 4,48 (m, 2H, H-4'); 4,91 (dd, 2H, J3- = 6,2, J3-,4· = 3,6, H-3’); 5,06, 5,07 (2 χ dd, 2 χ 1H, J2.,3. = 6,2, J2. r = 1,8, H-2'); 5,87, 5,88 (2 χ d, 2 χ 1H, Jr>2. = 1,8, Η-Γ); 6,145, 6,17 (2 χ ddd, 2 * 1H, Jh,p = 24,0, Jtrans = 18,4, Jcis = 12,8, =CHP); 6,257, 6,261 (2 χ ddd, 2 χ 1H, JH>P = 52,0, Jcis = 12,8, Jgem — 2,1, CHCjSH(nms=CHP); 6,30, 6,31 (2 χ ddd, 2 χ 1H, Jh,p — 26,0, Juans = 18,4, Jgem = 2,1, CHíiSHtrBns=CHP); 7,54 (m, 4H, H-m-Bz); 7,59 (d, 2H, Js>6 = 7,7, H-5); 7,64 (m, 2H, H-pBz); 7,99 (m, 4H, H-o-Bz); 8,16, 8,17 (2 χ d, 2 χ 1H, J6>5 = 7,7, H-5).
°c NMR (150,9 MHz, CD3OD): 14,48 (CH3(CH2)15); 23,75 (CH3(CH2)13CH2CH2O); 25,46, 25,48 ((CH3)2C); 27,27 (CH3(CH2)]4CH2O); 27,43 ((CH3)2C); 30,49, 30,61, 30,78, 30,80, 30,81 (CH3(CH2)i4CH2O); 31,70 (d, JC1P = 6,5, OCH2CH2CH2OCi6H33); 33,09 (CH3(CH2)i3CH2CH2. O); 64,96, 64.98 (d, JC.P = 5,7, OCH2CH2CH2OCi6H33); 66,97, 67,04 (d, JC>P = 5,6, CH2-5’); 67,42, 67,43 (OCH2CH2CH2OCi6H33); 72,10 (CH3(CH2)14CH2O); 82,64, 82,635, 82,644 (CH3’); 86,57, 86,58 (CH-2'); 88,23, 88,30 (d, JC.P = 7,2, CH-4’); 97,60, 97,71 (CH-Γ); 98,51, 98,54 (CH-5); 115,10, 115,11 (C(CH3)2); 125,63, 125,67 (d, JC,P = 183,9, =CHP); 129,25 (CH-o-Bz); 129,83 (CH-m-Bz); 134,14 (CH-p-Bz); 134,70 (C-í-Bz); 138,01, 138.04 (d, JC>P = 1,9, CH2=CHP); 148,26, 148,34 (CH-6); 157,58, 157,60 (C-2); 165,58 (C-4); 169,19 (CO-Bz).
31P NMR (202,3 MHz, CD3OD): 19,62, 19,72.
IR vmax(CHCl3) 3406 (w), 2928 (s), 2856 (m), 1703 (m), 1670 (s), 1628 (m), 1603 (w), 1554 (m), 1582 (w), 1497 (m, sh), 1480 (vs), 1455 (w, sh), 1400 (m), 1385 (m), 1377 (m), 1301 (m), 1248 (s, sh), 1186 (w), 1158 (m), 1121 (m), 1110 (m), 1078 (s), 1070 (s), 1028 (m), 1003 (m, sh), 989 (m), 909 (w), 865 (w), 842 (vw), 708 (w), 687 (w), 512 (w) cm1.
HR-EI C4oH62N309P (M+H)+ vypočteno 759,4224; nalezeno 759,4225.
Příklad 9
Hexadecyloxypropykuridin-S’-yl-l-iPA^J^-dihydroxypyrrolidin-l-Ayl)ethylfosfonát, 12a
O
Směs J?,7ř-3,4-dihydroxypyrrolidinu (0,12 g, 1,18 mmol) a vinylfosfonátu z příkladu 7 (0,4 g, 0,61 mmol) v n-BuOH (15 ml) se míchá přes noc při teplotě 105 °C. Reakční směs se zahustí ve vakuu a isopropylidenem chráněný meziprodukt se přečistí pomocí chromatografie na silikageiu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v etyíacetátu. Získaná látka se rozpustí v 0,5 mol.1'1 HC1 v methanolu (30 ml) a směs se míchá 4 hodiny při laboratorní teplotě/Finální produkty se získá pomocí chromatografie na silikageiu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v eťýlacetátu s 34% celkovým výtěžkem (152 mg, 0,205 mmol) a je lyofilizován z vody.
Směs diastereomerů ~ 6:5 *H NMR (499,8 MHz, CD3OD): 0,90 (m, 6H, CH3(CH2)15); 1,25-1,38 (m, 52H, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 1,55 (m, 4H, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 1,93 (m, 4H,
OCH2CH2CH2OC,6H33); 2,12-2,25 (m, 4H, CH2P); 2,71 (dd, 4H, Jgem = 10,6, Jvic = 3,0, H2b,5b-pyrr); 2,86-3,00 (m, 4H, CH2N); 3,116, 3,118 (2 χ dd, 2 χ 2H, Jgem = 10,6, Jvic = 5,0, H2a,5a-pyrr); 3,42, 3,43 (2 χ t, 2 χ 2H, Jvic = 6,6, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 3,515, 3,522 (2 χζ2 χ 2H, Jvic = 6,1, OCH2CH2CH2OCi6H33); 4,08 (m, 4H, OCH2CH2CH2OC16H33); 4,11-4,21 (m, 8H, H-3',4’, H-3,4-pyrr); 4,216, 4,218 (2 χ dd, 2 χ 1H, J2.,3. = 5,1, JTX = 4,1, H-2’); 4,26 (ddd, 1H, Jgem = 11,6, Jh,p - 6,8, Js-b.4· = 4,5, H-5'b); 4,30-4,34 (m, 2H, H-5'); 4,36 (ddd, 1H, Jgem = 11,6, Jh,p = 6,6, Js-a.4- = 2,9, H-5'a); 5,751, 5,753 (2 χ d, 2 χ 1H, J5j6 = 8,1, H-5); 5,845 (d, 2H, Jr.2· = 4,1, Η-Γ); 7,70, 7ř73 (2 χ d, 2 χ 1H, J6,5 = 8,1, H-6).
13C NMR (125,7 MHz, CD3OD): 14,47 (CH3(CH2)I5); 23,73 (CH3(CH2)I4CH2O); 24,75, 24,81 (d, JC,P = 139,6, CH2P); 27,28, 30,47, 30,63, 30,76, 30,79 (CH3(CH2)14CH2O); 31,75, 31,78 (d, Jc,p = 6,2, OCH2CH2CH2OCi6H33); 33,06 (CH3(CH2)14CH2O); 50,81, 50,85 (CH2N); 60,95, 60,98 (CH2-2,5-pyrr); 64,86, 64,93 (d, JC>P = 6,7, OCH2CH2CH2OC16H33); 66,52, 66,54 (d, JC,P = 6,2, CH2-5'); 67,49, 67,53 (OCH2CH2CH2OC16H33); 70,79, 70,86 (CH-3'); 72,14 (CH3(CH2)14CH2O); 74,87, 74,93 (CH-2'); 78,12, 78,19 (CH-3,4-pyrr); 83,57, 83,58 (d, JC,P = 6,6, CH-4'); 91,75, 91,85 (CH-11); 103,02 (CH-5); 142,58, 142,64 (CH-6); 152,18, 152,20 (C2); 165.99(04).
31P NMR (202,3 MHz, CD3OD): 31,37, 31,64.
IR vmax(KBr) 3405 (s, vbr), 3063 (w), 2960 (m, sh), 2925 (vs), 2854 (s), 2810 (w, sh), 1696 (vs), 1629 (w, sh), 1466 (m), 1460 (m, sh), 1418 (w), 1384 (m), 1266 (m), 1223 (m), 1111 (s), 1075 (m, sh), 1046 (s, br), 998 (m), 821 (w), 765 (w), 721 (w) cm1.
HR-ESIC34H63O11N3P (M+H)+ vypočteno 720,41947; nalezeno 720,41939.
Příklad 10
Hexadecyloxypropyl4cytidin-5’-yl-2-([3Jř,4/ř]-3,4-dihydroxypyrrolidin-l-/V— yl)ethylfosfonát, 12b
Směs Λ,Λ - 3,4-d i hydroxypyrrol i dinu (0,05 g, 0,49 mmol) a vinylfosfonátu z příkladu 9 (0,34 g, 0,45 mmol) v n-BuOH (10 ml) se míchá přes noc při teplotě 105 °C. Reakční směs se zahustí ve vakuu a isopropylidenem chráněný meziprodukt se přečistí pomocí chromatografie na silikagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v etýlacetátu. Získaná látka se Rozpustí v 8 mol.l’1 ethanolickém ethylaminu (10 ml) a mjchá se přes noc při laboratorní teplotě Reakční směs se zahustí ve vakuu, kodestiluje s eťánolem (2jx 20 ml), rozpustí v 0,5 mol.l’1 methanolické HC1 (10 ml) a směs se míchá 4 hodiny při laboratorní teplotě? Finální produkt se získá pomocí preparativní HPLC na reverzní fázi s 27% celkovým výtěžkem (90,6 mg, 0,120 mmol) a je lyofílizován z vody.
Směs diastereomerů ~ 8:7 'Η NMR (600,1 MHz, CD3OD): 0,90 (m, 6H, CH3(CH2)15); 1,25-1,38 (m, 52H, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 1,55 (m, 4H, CH3(CH2)13CH2CH2O); 1,93 (m, 4H,
OCH2CH2CH2OCi6H33); 2,10-2,18 (m, 4H, CH2P); 2,56 (bm, 4H, H-2b,5b-pyrr); 2,75-2,87 (bm, 4H, CH2N); 3,00 (bm, 4H, H-2a,5a-pyrr); 3,41, 3,43 (2 χ t, 2 χ 2H, Jvic = 6,7, CH3(CH2)]3CH2CH2O); 3,51, 3,53 (2 χ t, 2 χ 2H, Jvic = 6,0, OCH2CH2CH2OC,6H33); 4,04 (m, 4H, H-3,4-pyrr); 4,08-4,23 (m, 10H, H-2',3,,4'-pyrr, OCH2CH2CH2OC16H33); 4,25-4,42 (m, 4H, H-5'); 5,83, 5,84 (d, 2H, J[= 3,0, Η-Γ); 5,93, 5,94 (2 χ d, 2 χ 1H, = 7,6, H-5); 7,77, 7,79 (2 χ d,2 χ 1H, Λ.5 = 7,6, H-6).
C NMR (150,9 MHz, CDjOD): 14,47 (CH3(CH2)IS); 23,75 (CH3(CH2)hCH2O); 25,09, 25,14 (d, JCy = 139,1, CH2P); 27,29, 27,30, 30,49, 30,64, 30,77, 30,80 (CH3(CH2)i4CH2O); 31,76,
31,79 (d, Jc,p 6,3, OCH2CH2CH2OC]6H33); 33,08 (CH3(CH2)i4CH2O); 50,55 (CH2N); 60,99, 61,02 (CH2-2,5-pyrr); 64,71, 64,79 (d, Jc,p = 6,6, OCH2CH2CH2OC16H33); 66,24, 66,31 (d, Jc,p = 6,4, CH2-5'); 67,51, 67,55 (OCH2CH2CH2OCi6H33); 70,52, 70,55 (CH-3'); 72,15 (CH3(CH2)i4CH2O); 75,68, 75,70 (CH-2’); 78,61, 78,66 (CH-3,4-pyrr); 83,13, 83,16 (d, JCP = 6,6, CH-4'); 92,89, 92,90 (CH-Γ); 96,17, 96,18 (C-5); 142,56, 142,64 (CH-6); 158,26, 158,27 (C-2); 167,646,167,653 (C-4).
3*P NMR (202,3 MHz, CD3OD): 32,67, 32,99.
IR MnaxfCHCh) 3341 (m, vbr), 3220 (m, vbr), 2927 (vs), 2855 (s), 1649 (vs), 1609 (m, sh), 1578 (w), 1527 (m), 1494 (m), 1407 (m), 1468 (m), 1459 (m, sh), 1380 (m), 1287 (m), 1240 (m), 1110 (s), 1077 (m), 1046 (s), 1030 (s, sh), 996 (m) cm'1.
HR-ESI C34H64OioN4P (M+H)+ vypočteno 719,4355; nalezeno 719,4357.
Příklad 11
Hexadecyloxypropylfuridin-5’-yl-2-([35,45]-3,4-dihydroxypyrrolidin-l-jV-yi)ethylfosfonát 12e
Směs 5,5-3,4-dihydroxypyrrolidinu (0,26 g, 2,56 mmol) a vinylfosfonátu z příkladu 7 (0,84 g, 1,28 mmol) v n-BuOH (30 ml) se míchá pří teplotě 105 °C přes noc. Reakční směs se zahustí ve vakuu a isopropylidenem chráněný meziprodukt se přečistí pomocí chromatografie na silikagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v et^lacetátu. Získaná látka se rozpustí v 0,5 mol.l HCI v methanolu (40 ml) a směs se míchá 4 hodiny při laboratorní teplotď Finální produkt se získá pomocí chromatografie na silikagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v etýlacetátu s 36% celkovým výtěžkem (344 mg, 0,46 mmol) a je lyofilizován z vody.
Směs diastereomerů ~ 6:5 *H NMR (499,8 MHz, CD3OD): 0,90 (m, 6H, CH3(CH2)I5); 1,25-1,39 (m, 52H, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 1,55 (m, 4H, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 1,95 (m, 4H,
OCH2CH2CH2OCi6H33); 2,37-2,52 (m, 4H, CH2P); 3,16 (bm, 2H, H-2b,5b-pyrr); 3,42 (t, 2H, Jvic = 6,7, CH3(CH2)BCH2CH2O); 3,425 (bm, 2H, H-2b,5b-pyrr); 3,43 (t, 2H, Jvic = 6,7, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 3,515 (m, 4H, CH2N); 3,52, 3,53 (2 χ t, 2 χ 2H, Jvic = 6,1, OCH2CH2CH2OCi6H33); 3,59, 3,92 (2 χ bm, 2 χ 2H, H-2a,5a-pyrr); 4.14 (m, 2H, H-4'); 4,16 (m, 2H, H-3 ); 4,18-4,27 (m, 10H, H-2', OCH2CH2CH2OCI6H33, H-3,4-pyrr); 4,31 (ddd, 1H, Jgem =11,5, JH,P = 7,6, = 5,4, H-5'b); 4,36 (m, 2H, H-5'); 4,40 (ddd, 1H, Jgein = 11,5, JHP =
7,3, J5X4. = 2,9, H-5'a); 5,742, 5,746 (2 χ d, 2 χ 1H, J5>6 = 8,1, H-5); 5,78, 5,80 (2 χ d, 2 χ 1H, Jr,2' = 3,9, H-Γ); 7,68, 7,70 (2 χ d, 2 χ 1H, J6,5 = 8,1, H-6).
,3C NMR (125,7 MHz, CD3OD): 14.45 (CH3(CH2)]5); 23,32 (d, Jc,p = 142,0, CH2P); 23,74 (CH3(CH2)i4CH2O); 27,29, 30,48, 30,64, 30,76,30,79 (CH3(CH2)i4CH2O); 31,70, 31,72 (d, Jc,p = 6,1, OCH2CH2CH2OCi6H33); 33,07 (CH3(CH2)14CH2O); 52,18, 52,22 (CH2N); 60,67, 60,75, 60,98, 61,01 (CH2-2,5-pyrr); 65,33, 65,58 (d, JC,P = 6,7, OCH2CH2CH2OCi6H33); 67,16 (d, Jc^
6,5, CH2-5'); 67,44 (OCH2CH2CH2OCi6H33); 67,45 (d, Jc.p = 4,3, CH2-5'); 67,47 (OCH2CH2CH2OCi6H33); 70,77 (CH-3’); 72,16 (CH3(CH2)i4CH2O); 74,55, 74,60 (CH-2'); 75,67, 75,68, 76,04 (CH-3,4-pyir); 83,29 (d, JC,P = 6,2, CH-4'); 83,40 (d, Jc.p = 5,8, CH-4'); 92,83, 92,85 (CH-F); 103,03, 103,10 (CH-5); 143,12, 143,19 (CH-6); 152,13, 152,14 (C-2); 166,00 (C-4).
3,P NMR (202,3 MHz, CD3OD): 26,79, 27,26.
IR ymW[(KBr) 3405 (s, vbr), 2694 (w, vbr), 2596 (w, vbr), 2925 (vs), 2854 (s), 1714 (s, sh), 1694 (vs), 1630 (m, sh), 1466 (m), 1458 (m, sh), 1418 (w), 1415 (w), 1385 (m), 1269 (m), 1229 (m, br), 1107 (s), 1053 (m, sh), 1030 (s, br), 1002 (s), 819 (w), 765 (vw), 721 (vw) cm’1. HR-ESI C34H63O]iN3P (M+H)+ vypočteno 720,4195; nalezeno 720,4194.
Příklad 12
HexadecyIoxypropyIturidin-5’-yl-2-([3R,45,55)-3,4-trihydroxypiperidin-lW— yl)ethylfosfonát 12g
Směs 3í,45,55-3,4,5-trihydroxypiperidinu (0,04 g, 0,33 mmol) a vinylfosfonátu z příkladu 7 (0,1 g, 0,16 mmol) v n-BuOH (5 ml) se míchá při teplotě 105 °C přes noc. Reakční směs se zahustí ve vakuu a isopropylidenem chráněný meziprodukt se přečistí pomocí chromatografíe na silikagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v etýlacetátu. Získaná látka se rozpustí v 0,5 mol.l1 HC1 v methanolu (20 ml) a směs se míchá 4 hodiny při laboratorní teplotě'. Finální produkt se získá pomocí chromatografíe na silikagelu za použití lineárního
gradientu soustavy HI v etýlacetátu s 68% celkovým výtěžkem (80 mg, 0,11 mmol) a je lyofilizován z vody.
Směs diastereomerů ~ 7:3 lH NMR (499,8 MHz, CD3OD): 0,90 (m, 6H, CH3(CH2)15); 1,25-1,38 (m, 52H, CH3(CH2)13CH2CH2O); 1.55 (m, 4H, CH3(CH2)I3CH2CH2O); 1,93 (m, 4H,
OCH2CH2CH2OCi6H33); 2,10-2,18 (m, 4H, CH2P); 2,43, 2,54 (2 χ bm, 2 χ 4H, H-2,6-pip); 2,75 (m, 4H, CH2N); 3,42, 3,43 (2 χ ζ 2 x 2H, Jvic = 6,6, CH3(CH2)13CH2CH2O); 3,52, 3,53 (2 χ t,2 χ 2H, Jvic = 6,1, OCH2CH2CH2OCi6H33); 3,68 (bm, 4H, H-3,5-pip); 3.81 (bm, 2H, H-4pip); 4,11-4,22 (m, 10H, H-2',3',4', OCH2CH2CH2OC16H33); 4,23-4,38 (m, 4H, H-5'); 5,746, 5,749 (2 χ d, 2 χ 1H, J5,6 = 8,1, H-5); 5,84 (d, 2H, Jr,2· = 4,1, Η-Γ); 7,71, 7,73 (2 χ d, 2 χ 1H, J6,5 = 8,1, H-6).
,3C NMR (125.7 MHz, CD3OD): 14,45 (CH3(CH2)15); 23,55, 23,65 (d, JC,P = 138,5, CH2P); 23,75 (CH3(CH2)14CH2O); 27,30, 30,49, 30,63, 30,77, 30,80 (CH3(CH2)i4CH2O); 31,79, 31.82 (d, Jc,p = 6,2, OCH2CH2CH2OCiSH33); 33,08 (CH3(CH2)14CH2O); 51,75 (CH2N); 54,40 (CH22,6-pip); 64,72, 64,78 (d, Jc,p = 6,5, OCH2CH2CH2OC16H33); 66,37 (d, JC>P = 6,3, CH2-5'); 67,51, 67,55 (OCH2CH2CH2OCi6H33); 69,67 (CH-3,5-pip); 70,81, 70,83 (CH-3'); 71,83 (CH-4pip); 72,17 (CH3(CH2)14CH2O); 74,97, 75,01 (CH-2'); 83,59, 83,63 (d, JC>P = 6,7, CH-4'); 91,84, 91,92 (CH-1'); 103,00 (CH-5); 142,56, 142,60 (CH-6); 152,18, 152,19 (C-2); 166f05 (C4)31P NMR (202,3 MHz, CD3OD): 32,91, 33,23.
IR vmax(KBr) 3423 (vs, br), 2924 (s), 2854 (m), 1687 (s), 1632 (m), 1466 (m), 1406 (w), 1380 (w), 1264 (m), 1229 (m), 1116 (m), 1072 (m, sh), 1048 (m), 1029 (m), 996 (m, sh), 766 (vw) cm'1.
HR-ESI C35H650nN3P (M+H)+ vypočteno 734,4347; nalezeno 734,4351.
Příklad 13
Hexadecyloxypropyl-uridin-5’-y|_2.([3/?,5/ř]-3,4-dihydroxypiperidin-l-.V-yl)ethylfosfonát 12h
Směs 3í,5R-3,5-dihydroxypiperidinu (0,05 g, 0,42 mmol) a vinylfosfonátu z příkladu 7 (0,25 g, 0,38 mmol) v n-BuOH (5 ml) se míchá při teplotě 105 °C přes noc. Reakční směs se zahustí ve vakuu a isopropylidenem chráněný meziprodukt se přečistí pomocí chromatografie na silikagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v eifylacetátu. Získaná látka se rozpustí v 0,5 mol.l1 HC1 v methanolu (20 ml) a směs se míchá 4 hodiny při laboratorní teplotě Finální produkce získá pomocí chromatografie na silikagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v etýlacetátu s 76% celkovým výtěžkem (230 mg, 0,29 mmol) a je lyofilizován z vody.
Směs diastereomerů ~ 6:4 *H NMR (600,1 MHz, CD3OD): 0,90 (m, 6H, CH3(CH2)I5); 1,25-1,38 (m, 52H, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 1,55 (m, 4H, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 1,70 (bm, 4H, H-4-pip); 1,93 (m, 4H, OCH2CH2CH2OCi6H33); 2,12-2,19 (m, 4H, CH2P); 2,36, 2,57 (2 χ m, 2 χ 4H, H-2,6-pip); 2,66-2,76 (m, 4H, CH2N); 3,42, 3,43 (2 χ t, 2 χ 2H, Jvic = 6,6, CH3(CH2),3CH2CH2O); 3,51, 3,53 (2 χ t, 2 χ 2H, Jvic = 6,1, OCH2CH2CH2OC|6H33); 4,01 (m, 4H, H-3,5-pip); 4,12-4,24 (m, 10H, H-2',3',4', OCH2CH2CH2OC|6H33); 4,24-4,40 (m, 4H, H-5'); 5,751, 5,754 (2 χ d, 2 χ 1H, Js.6 = 8,1, H-5); 5,854, 5,856 (2 χ d, 2 χ 1H, JViT = 4.1, Η-Γ); 7,71, 7,74 (2 χ d, 2 χ 1H, J6i5 = 8,1, H-6).
13C NMR (150,9 MHz, CD3OD): 14,49 (CH3(CH2)15); 23,49, 23,53 (d, JC.P = 138,4, CH2P); 23,75 (CH3(CH2)i4CH2O); 27,29, 27,30, 30,49, 30,65, 30,78, 30,81 (CH3(CH2)i4CH2O); 31,76, 31,83 (d, JC>P = 6,3, OCH2CH2CH2OCi6H33); 33,08 (CH3(CH2)i4CH2O); 40,63, 40,65 (CH2-4pip); 52,02, 52,04 (d, JC>P = 2,0, CH2N); 60,07, 60,10 (CH2-2,6-pip); 64,63, 64,75 (d, JC,P = 6,6, OCH2CH2CH2OCi6H33); 65,58 (CH-3,5-pip); 66,27, 66,52 (d, JC>P = 6,2, CH2-5'); 67,51, 67,54 (OCH2CH2CH2OCi6H33); 70,77, 70,84 (CH-3*); 72,13, 72,15 (CH3(CH2)14CH2O); 74,99, 75,05 (CH-2’); 83,59, 83,60 (d, JC,P - 6,6, CH-4'); 91,65, 91,66 (CH-Γ); 102,99 (CH-5); 142,45, 142,51 (CH-6); 152,16, 152,18 (C-2); 165,99 (C-4).
31P NMR (202,3 MHz, CD3OD): 33,22, 33,53.
IR Vmax(KBr) 3431 (vs, br), 2924 (m), 2853 (w), 1710 (m, sh), 1693 (m), 1631 (m), 1468 (w), 1414 (vw), 1380 (w), 1265 (w, br), 1230 (w, br, sh), 1113 (m), 1060 (m, br), 1032 (m), 1006 (m), 764 (vw) cm'1.
HR-ESI C35H65Oi0N3P (M+H)+ vypočteno 718,4402; nalezeno 718,4402
Příklad 14 ro
I<osanykuridin-5’-yl-2-([37ř,47ř]-3,4-dihydroxypyrrolidin-l-V-yl)ethylfosfonát 12n
Směs A,/?-3,4-dihydroxypyrrolidinu (0,26 g, 2,52 mmol) a vinyl fosfonátu z příkladu 6 (1,1g, 1,68 mmol) v n-BuOH (17 ml) se míchá při teplotě 100 °C přes noc. Reakční směs se zahustí ve vakuu a isopropylidenem chráněný meziprodukt se přečistí pomocí chromatografíe na silikagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v eťýlacetátu. Získaná látka se rqzpustí v 0,5 mol.l HC1 v methanolu (50 ml) a směs se míchá 4 hodiny při laboratorní· teplotěťFinální produkce získá pomocí chromatografíe na silikagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v etýlacetátu s 7oJ% celkovým výtěžkem (840 mg, 1,17 mmol) a je lyofilizován z vody.
Směs diastereomerů ~ 6:5 'H NMR (600,1 MHz, CD3OD): 0,90 (m, 6H, CH3(CH2)i9); 1,25-1,43 (m, 68H, CH3(CH2)i7CH2CH2O); 1,69 (m, 4H, CH3(CH2)i7CH2CH2O); 2,06-2.23 (m, 4H, CH2P); 2,68 (dd, 4H, Jgem = 10,6, Jvic = 2,9, H-2b,5b-pyrr); 2,84-2,97 (m, 4H, CH2N); 3,10 (dd, 4H, Jgem = 10,6, Jvic = 5,0, H-2a,5a-pyrr); 4,07 (m, 4H, H-3,4-pyrr); 4,08-4,13 (m, 4H, CH3(CH2)i7CH2CH2O); 4,13-4,16 (m, 4H, H-3',4’); 4,207, 4,210 (2 χ dd, 2 χ 1H, JTy = 5,0, Λ’,ΐ1 - 4,2, H-2 ); 4,25 (ddd, 1H, Jgen) = 11,6, = 6,8, - 4,4, H-5'b); 4,31 (m, 2H, H-5');
4,35 (ddd, 1H, Jgem = 11,6, JH,p = 6,6, Λν = 2,7, H-5'a); 5,735, 5,743 (2 χ d, 2 χ 1H, J5 6 = 8,1, H-5); 5,84, 5,85 (2 χ d, 2 χ 1H, = 4,2, Η-Γ); 7,71, 7,74 (2 χ d, 2 χ 1H, J6>5 = 8,1, H-6).
13C NMR (150,9 MHz, CD3OD): 14,46 (CH3(CH2)19); 23,75 (CH3(CH2)i7CH2CH2O); 24,85, 24,91 (d, Jc,p = 139,8, CH2P); 26,64, 30,28, 30,29, 30,49, 30,69, 30,73, 30,74, 30,77, 30,79, 30,80 (CH3(CH2)i7CH2CH2O); 31,55, 31,57 (d, Jc,p = 6,0, CH3(CH2)i7CH2CH2O); 33,09 (CH3(CH2)i7CH2CH2O); 50,81, 50,86 (CH2N); 60,98, 61,02 (CH2-2,5-pyrr); 66,52, 66,54 (d, Jc,p = 6,1, CH2-5'); 67,69, 67,73 (d, Jc,p = 7,1, CH3(CH2)17CH2CH2O); 70,80, 70,87 (CH-3'); 74,90, 74,95 (CH-2'); 78,19, 78,26 (CH-3,4-pyrr); 83,60 (d, JCy = 6,5, CH-4'); 91,75, 91,93 (CH-Γ); 102,97, 102,99 (CH-5); 142,65 (CH-6); 152,17,152,20 (C-2); 166,03 (C-4).
31P NMR (202,3 MHz, CD3OD): 31,29, 31,57.
IR vmax(KBr) 3354 (m, vbr), 3063 (m), 2927 (vs), 2855 (s), 1694 (vs), 1630 (w, sh), 1467 (m), 1457 (m, sh), 1388 (m), 1267 (m), 1240 (m, sh), 1108 (m), 1075 (m), 1037 (s, br), 999 (s) cm’1. HR-ESI C35H65Oi0N3P (M+H)+ vypočteno 718,44021, nalezeno 718,44030.
Příklad 15
0^tadecyl+uridiii-5’-yl-2-([3R,4A]-3,4-dihydroxypyrrolidiii-l-Ar-yl)ethylfosfonát 12m
OH OH
Směs 0-3,4-dihydroxypyrrolidinu (0,3 g, 2,94 mmol) a vinylfosfonátu z příkladu 5 (1,23 g, 1,96 mmol) v n-BuOH (20 ml) se míchá při teplotě 100 °C přes noc. Reakční směs se zahustí ve vakuu a isopropylidenem chráněný meziprodukt se přečistí pomocí chromatografie na sihkagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v eťýlacetátu. Získaná látka se ro^ust^ v 0,5 mol.l HC1 v methanolu (50 ml) a směs se míchá 4 hodiny při laboratorní teplotěf Finální produkt, se získá pomocí chromatografie na silikagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v etýlacetátu s 68% celkovým výtěžkem (920 mg, 1,33 mmol) a je lyofilizován z vody.
Směs diastereomerů — 6:5 *H NMR (600,1 MHz, CD3OD): 0,90 (m, 6H, CH3(CH2)17); 1,25-1,43 (m, 60H, CH3(CH2)15CH2CH2O); 1,68 (m, 4H, CH3(CH2)I5CH2CH2O); 2,06-2,19 (m, 4H, CH2P); 2,55 (m, 4H, H-2b,5b-pyrr); 2,73-2,86 (m, 4H, CH2N); 2,99 (m, 4H, H-2a,5a-pyrr); 4,04 (m, 4H, H3,4-pyrr); 4,05-4,13 (m, 4H, CH3(CH2)i5CH2CH2O); 4,13-4,16 (m, 4H, H-3',4'); 4,199, 4,201 (2 x dd, 2 χ 1H, = 4.8, 4,2, H-2'); 4,24 (ddd, 1H, = 11,6, Jh,p 6,7, = 4,2, H5'b); 4,28 (ddd, 1H, Jgem = 11,6, JH,p = 7,4, Λμ' = 2,5, H-5'b); 4,30 (ddd, 1H, Jgem = 11,6, JH.p = 5,2, = 2,7, H-5'a); 4,34 (ddd, 1H, Jgem = 11,6, JH.p = 6,5, Jy^ = 2,7, H-5'a); 5,735, 5,745 (2 x d, 2 χ 1H, J5>6 = 8,1, H-5); 5,85, 5,86 (2 χ d, 2 χ 1H, Jyp = 4,2, Η-Γ); 7,71, 7,74 (2 χ d, 2 χ 1H, J6j5 = 8,1, H-6).
15C NMR (150,9 MHz, CDjOD): 14,47 (CH3(CH2)n); 23,75 (CHj(CH2)l5CH2CH2O); 25,13, 25,17 (d, Jc,p = 139,3, CH2P); 26,65, 30,28, 30,29, 30,49, 30,68, 30,69, 30,72, 30,73, 30,78, 30,79, 30,80 (CH3(CH2)15CH2CH2O); 31,55, 31,57 (d, Jc,p = 6,0, CH3(CH2)i5CH2CH2O); 33,09 (CH3(CH2)15CH2CH2O); 50,55, 50,57 (d, Jc.p = 1.1, CH2N); 61,01, 61,04 (CH2-2,5-pyrr); 66,34, 66,42 (d, Jc,p = 6,3, CH2-5'); 66,60, 67,62 (d, Jc,p = 6,8, CH3(CH2)15CH2CH2O); 70,80, 70,88 (CH-3'); 74,96, 75,02 (CH-2’); 78,63, 78,68 (CH-3,4-pyrr); 83,63, 83,65 (d, JC,P = 6,7, CH-4'); 91,56, 91,74 (CH-Γ); 102,95, 102,98 (CH-5); 142,55, 142,57 (CH-6); 152,18, 152,22 (C-2); 166,03 (C-4).
3IP NMR (202,3 MHz, CD3OD): 32,12, 32,43.
IR VmaxtCHCh) 3374 (m, vbr), 3063 (m), 2927 (vs), 2855 (s), 1694 (vs), 1630 (m, sh), 1467 (s), 1457 (s, sh), 1388 (m), 1267 (s), 1239 (m, sh), 1109 (s), 1074 (s), 1040 (s, br), 997 (s) cm'1. HR-ESIC33H61O10N3P (M+H)+ vypočteno 690,40891, nalezeno 690,40891.
Příklad 16
Hexadecyl+uridin-5’-yl-2-([3^,47?]-3,4-dihydroxypyrrolidin-l-7V-yl)ethylfosfonát 121
Směs Λ,Λ-3,4-dihydroxy pyrrol idinu (0,36 g, 3,45 mmol) a vinylfosfonátu z příkladu 4 (1,38 g, 2,3 mmol) v n-BuOH (20 ml) se míchá při teplotě 100 °C přes noc. Reakční směs se zahustí ve vakuu a isopropyl idenem chráněný meziprodukt se přečistí pomocí chromatografie na silikagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v efylacetátu. Získaná látka se rozpustí v 0,5 mol.1'1 HC1 v methanolu (50 ml) a směs se míchá 4 hodiny při laboratorní teplotěf Finální produkce získá pomocí chromatografie na silikagelu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v etýlacetátu s 38% celkovým výtěžkem (566 mg, 0,86 mmol) a je lyofilizován z vody.
Směs diastereomerů ~ 1:1 ’H NMR (600,1 MHz, CD3OD): 0,90 (m, 6H, CH3(CH2)i5); 1,24-1,43 (m, 52H, CH3(CH2)13CH2CH2O); 1,68 (m, 4H, CH3(CH2)13CH2CH2O); 2,06-2,18 (m, 4H, CH2P); 2,55 (m, 4H, H-2b,5b-pyrr); 2,73-2,86 (m, 4H, CH2N); 2,99 (m, 4H, H-2a,5a-pyrr); 4,04 (m, 4H, H3,4-pyrr); 4,05-4,12 (m, 4H, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 4,12-4,16 (m, 4H, H-3’,4'); 4,198, 4,200 (2 χ dd, 2 χ 1H, /2 ,3- = 5,1, /2U. = 4,1, H-2·); 4,24 (ddd, 1H, = 11,6, /H,P = 6,5, /5-b,4. = 4,2, H5'b); 4,28 (ddd, 1H, /gem = 11,6, /H,p = 7,2, = 2,4, H-5'b); 4,30 (ddd, 1H, /gem = 11,6, /HjP =
5,2, /5-3,4· = 2,7, H-5'a); 4,34 (ddd, 1H, /gem = 11,6, /H(P = 6,6, = 2,8, H-5’a); 5,73, 5,74 (2 χ d, 2 χ 1H, Jy6 = 8,1, H-5); 5,85, 5,86 (2 x d, 2 χ 1H, /r>2< = 4,1, Η-Γ); 7,71, 7,74 (2 χ d, 2 χ 1H, /6,5 = 8,1, H-6).
UC NMR (150,9 MHz, CD3OD): 14,46 (CH3(CH2)i5); 23,75 (CH3(CH2)|3CH2CH2O); 25,14, 25,19 (d, /c,p = 139,3, CH2P); 26,65, 30,27, 30,28, 30,50, 30,68, 30,69, 30,72, 30,73, 30,78, 30,81 (CH3(CH2)13CH2CH2O); 31,55, 31,57 (d, /C<P = 6,0, CH3(CH2)I3CH2CH2O); 33,09 (CH3(CH2)13CH2CH2O); 50,55, 50,59 (d, /C>P = 1,0, CH2N); 61,02, 61,05 (CH2-2,5-pyrr); 66,34, 66,42 (d, /C,P = 6,3, CH2-5'); 66,60, 67,63 (d, /C,P = 6,8, CH3(CH2)i3CH2CH2O); 70,81,
70,89 (CH-3'); 74,96, 75,02 (CH-2'); 78,65, 78,69 (CH-3,4-pyrr); 83,64, 83,66 (d, Jc,p = 6,6, CH-4'); 91,58, 91,76 (CH-1'); 102,94, 102,98 (CH-5); 142,57, 142,58 (CH-6); 152,18, 152,22 (C-2); 166,04 (C-4).
31P NMR (202,3 MHz, CD3OD): 32,33, 32,63.
IR i/max(CHCl3) 3376 (m, br), 3062 (w), 2927 (vs), 2855 (s), 1693 (vs), 1632 (w, sh), 1466 (m), 1459 (m, sh), 1388 (m), 1267 (s), 1237 (m, sh), 1109 (s), 1074 (s), 1039 (s, br), 997 (s) cm1.
HR-ESI C3|H570ioN3P (M+H)+ vypočteno 662,37761, nalezeno 662,37759.
Příklad 17
Tetradecyl+uridin-5’-yl-2-([3Jř,47ř]-3,4-dihydroxypyrrolidin-l-jV-yl)ethylfosfonát 12k
OH OH
Směs ^3,4-dihydroxypyrrolidÍnu (0,42 g, 4,10 mmol) a vinylfosfonátu z příkladu 2 (1,17 g, 2,05 mmol) v n-BuOH (20 ml) se míchá při teplotě 100 °C přes noc. Reakční směs se zahustí ve vakuu a isopropylidenem chráněný meziprodukt se přečistí pomocí chromatografie na silikageiu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v etýlacetátu. Získaná látka se rozpustí v 0,5 mol.l HCI v methanolu (50 ml) a směs se míchá 4 hodiny při laboratorní teplotěf Finální produkce získá pomocí chromatografie na silikageiu za použití lineárního gradientu soustavy H1 v etylacetátu s 66% celkovým výtěžkem (862 mg, 1,36 mmol) a je lyofilízován z vody.
Směs diastereomerů ~ 6:5 ‘H NMR (600,1 MHz, CD3OD): 0,90 (m, 6H, CH3(CH2)13); 1,25-1,43 (m, 44H, CH3(CH2)11CH2CH2O); 1,68 (m, 4H, CH3(CH2)iiCH2CH2O); 2,06-2,19 (m, 4H, CH2P); 2,56 (m, 4H, H-2b,5b-pyrr); 2,74-2,88 (m, 4H, CH2N); 3,00 (m, 4H, H-2a,5a-pyrr); 4,04 (m, 4H, H3,4-pyrr); 4,06-4,13 (m, 4H, CH3(CH2)nCH2CH2O); 4,13-4,16 (m, 4H, H-3',4'); 4,200, 4,202 (2 χ dd, 2 χ 1H, = 5,0, JTy = 4,0, H-2'); 4,24 (ddd, 1H, Jgem = 11,6, JH,p = 6,7, J5 b,4- = 4,3, H5'b); 4,29 (ddd, 1H, Jgem = 11,6, P = 7,2, = 2,4, H-5'b); 4,31 (ddd, 1H, Jgem = 11,6, JH P =
5,0, J^· = 2,6, H-5'a); 4,35 (ddd, 1H, Jgem = 11,6, JH,p = 6,6, = 2,8, H-5'a); 5,736, 5,745 (2 x d, 2 χ 1H, J5 6 = 8,1, H-5); 5,85, 5,86 (2 χ d, 2 χ 1H, JV2· = 4,0, Η-Γ); 7,71, 7,74 (2 χ d, 2 χ 1H, Jů 5 = 8,1, H-6).
I3C NMR (150,9 MHz, CD3OD): 14,46 (CH3(CH2)I3); 23,75 (CH3(CH2)nCH2CH2O); 25,11 (d, Jc.p = 139,5, CH2P); 25,16 (d, Jc.p = 139,0, CH2P); 26,65, 30,27, 30,28, 30,50, 30,68, 30,71, 30,72, 30,78, 30,80, 30,82 (CH3(CH2)UCH2CH2O); 31,55, 31,57 (d, JC(P = 6A CH3(CH2)nCH2CH2O); 33,09 (CH3(CH2)nCH2CH2O); 50,57, 50.60 (d, JCP = 1.0, CH2N); 61,01, 61,03 (CH2-2,5-pyrr); 66,36, 66,42 (d, Jc.p = 6,3, CH2-5'); 66,60, 67,63 (d, JC,P = 6,8, CH3(CH2)nCH2CH2O); 70,81, 70,88 (CH^); 74,95, 75,01 (CH-2'); 78,60, 78,65 (CH-3,4pyrr); 83,63, 83,64 (d, Jc.p = 6,6, CH-4'); 91,57, 91,75 (CH-Γ); 102,95, 102,98 (CH-5); 142,56, 142,57 (CH-6); 152,18, 152,22 (C-2); 166,03 (C-4).
31P NMR (202,3 MHz, CD3OD): 32,08, 32,38.
IR vmax(CHCI3) 3374 (m, vbr), 3063 (w), 2927 (vs), 2855 (s), 1694 (vs), 1630 (w, sh), 1467 (m), 1459 (m, sh), 1388 (m), 1267 (m), 1238 (m, sh), 1109 (m), 1074 (m), 1040 (s, br), 997 (s) cm'1.
HR-ESI C29H530ioN3P (M+H)+ vypočteno 634,34631, nalezeno 634,34635.
B) Antibakteriální aktivita
Antibakteriální aktivita se měří pomocí standardní mikrodiluční metody, určující minimální inhibiční koncentraci (MIC) testovaného vzorku, která vede k inhibici bakteriálního růstu. Pro testy se použijí jednorázové mikrotitrační destičky. Vzorky se rozpustí v infuzní živné půdě z mozku a srdce (HiMedia Laboraties Pvt. Ltd., Česká republika) a Mueller-Hintonově bujónu (HiMedia Laboraties, viz výše) na výslednou koncentraci v rozmezí od 200 1,5625 pg/ml. Destičky se inokulují standardním množstvím testované bakterie - hustota inokula v jamce odpovídá 105'6 CFU/ml (jednotek vytvářejících kolonie/ml). Hodnoty MIC se odečtou po 24/48 hodinách inkubace při 37 °C jako minimální inhibiční koncentrace testované látky, při které je inhibován růst bakterie. Minimální baktericidní koncentrace (MBC) je charakterizována jako minimální koncentrace vzorku nutná k docílení nevratné inhibice, tedy k usmrcení bakterie po uplynutí definované doby inkubace. MBC se určí inokulační metodou. Pomocí aplikátoru se odebere 10 μΐ z jamky mikrotitrační destičky s definovanou koncentrací testované látky a inokuluje se na povrch krevního agaru (Trios, Česká republika) a Sabouraudova agaru (Trios, ČR). MBC se určí jako nejnižší koncentrace, která inhibuje viditelný růst použité bakterie.
Standardní referenční bakteriální kmeny (Enterococcus faecalis CCM 4224, Staphylococcus aureus CCM 4223) pocházejí z České sbírky mikroorganismů (CCM) Masarykovy univerzity Brno. Streptococcus agalactiae, Bacillus subtilis pocházejí z fakultní nemocnice Olomouc.
Testované mikroorganismy byly uchovávány v kryobankách (ITEST plus, Česká republika) při -80 °C.
Tabulka 1
Minimální inhibičm koncentrace některých z nově připravených lipofosfonoxinů proti panelu referenčních bakteriálních kmenů
| P ri? ’ MIC | pg/ml — | |||
| Sloučenina r připravená v příkladu | E.faecalis CCM 4224 | .. S. aureus CCM 4223 | Á/ . ;-Λ· ; , - ' /. ,· B.subtilis | S.agalactiae |
| 9 | 12,5 | * | 6,25 | 3,125 |
| 10 | 6,25 | 25 | 3,125 | 3,125 |
| 11 | 12,5 | - | 6,25 | 6,25 |
| 12 | - | - | 12,5 | |
| 13 | - | - | 6,25 | |
| 14 | - | - | - | 6,25 |
| 15 | 6,25 | 25-12,5 | 12,5-6,25 | 3,125 |
| 16 | 6,25 | 12,5-6,25 | 3,125 | 1,5625 |
| 17 | 12,5 | 25-12,5 | 6,25 | 6,25 |
Tabulka 2
Minimální inhibičm koncentrace některých z nově připravených lipofosfonoxinů proti panelu resistentních bakteriálních kmenů
| ________________ MIC | pg/ml | |||
| Sloučenina připravená v příkladu | S. aureus MRS A 4591 | 5. haemolyticus 16568 | E. faecium VanA 419/ana | S. epidermidis KM® |
| 9________ | - | - | 6,25 | 3,125 |
| 10 | - | - | 6,25 | 6,25 |
| 11 | - | - | 6,25 | 6,25 |
| 12 | - | - | - | |
| 13 | - | - | - | |
| 14 | - | - | ||
| 15 | - | - | 6,25 | 6,25 |
| 16 | 12,5 | 25-12,5 | 3,125 | 3,125 |
| 17 | 25 | 12,5 | 12,5 | 12,5 |
*Multirezistentní bakteriální kmeny izolované z klinického materiálu pacientů Fakultní nemocnice Olomouc: MRSA - methicilin-rezistentní Staphylococcus aureus 4591, Staphylococcus haemolyticus (fluorochinolon-rezistentní kmen) 16568, Enterococcus faecium (vankomycin-rezistentní kmen) VanA 419/ana, Staphylococcus epidermidis (methicilinrezistentní kmen) 8700/B
Ve všech případech byla hodnota minimální inhibiční koncentrace (MIC), což je koncentrace testované látky v médiu, při které byl ze 100 % inhibován růst testované bakterie rovna hodnotě minimální baktericidní koncentrace (MBC), což je koncentrace, při které došlo k 100% usmrcení testované bakterie. Hodnota MBC byla testována tak, že bakterie testovaná na MIC byla přeočkována do media, které neobsahovalo inhibitor a byl sledován případný růst.
Tabulka 3
Stanovení maximální bezpečné koncentrace některých z nově připravených lipofosfonoxinů na základě stanovení viability normálních lidských erytroidních progenitorů pomocí testu CellTiter
Blue (Promega Corp., Madison, USA):
| Sloučenina připravená v příkladu | [Max. bezpečná koncentrace] pg/ml | IC50 pg/ml |
| 9 | 62 | 93 |
| 10 | 31 | 46 |
| 11 | 31 | 40 |
| 12 | 62 | 141 |
| 13 | 15 | 45 |
| 14 | 15 | 29 |
| 15 | 31 | 38 |
| 16 | 31 | 44 |
| 17 | 31 | 47 |
Tabulka 4
Cytotoxicity některých z nově připravených lipofosfonoxinů:
| Sloučenina připravená v příkladu | [Max. bezpečná koncentrace] pg/ml | EC50 pg/ml |
| 9 | 125 | 436 |
| 14 | 125 | 185 |
| 15 | 62 | 170 |
| 16 | 62 | 237 |
| 17 | 125 | 302 |
Cytotoxicita u normálních lidských erytroidních progenitorů byla stanovena pomocí testu CytoToxOne (Promega Corp., Madison, USA)
Metody stanovení buněčné viability a cytotoxicity
Lidské nezralé erytroidní progenitory izolované z pupečníkové krve byly kultivovány v bezsérovém mediu StemSpan (StemCell Technologies) v přítomnosti stem cell faktoru (SCF, 100 μg/ml), erytropoetinu (EPO 33,34 nkat /ml) a dexamethasonu (1 pmoLF1) (Panzenbock et al. 1998). Buňky byly rozplněny do 384-jamkových destiček (Corning, katal. č. 3657) v hustotě 2^000 buněk/2(jp/jamku a k buňkám byly přidány lipofosfonoxiny z jednotlivých příkladů. Po 48 hodinách inkubace ve 37 °C a 5% CO2 byla stanovena viabilita buněk pomocí komerčního testu CellTiter-Blue® Cell Viability Assay (Promega, katal. č. G8082). Cytotoxicita byla stanovena po 4 hodinách ve 37 °C a 5% CO2 pomocí komerčního testu CytoTox-ONE™ Homogeneous Membrane Integrity Assay (Promega, kat. č. G7892). Fluorescenční intenzita byla měřena na detektoru (čtečce) EnVision, Perkin Elmer a naměřená data analyzována pomocí softwaru Prism 5 (GraphPad Software, lne.).
Průmyslová využitelnost
Lipofosfonoxiny podle tohoto vynálezu mohou být jako antibakteriální činidla účinnou složkou farmaceutických prostředků pro léčení bakteriálních infekcí, součástí desinfekčních prostředků, a/nebo selektivních kultivačních médií.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (10)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Lipofosfonoxiny obecného vzorce I,O R2IIkde substituentRi je (C8-C22)alkyl či hexadecyloxypropyl, tetradecyloxypropyl, tetradecyloxyethyl nebo hexadecyloxyethyl aR2 je uracil, thymin nebo cytosin,R3 je vybrán ze skupiny, která zahrnuje sloučeniny obecných vzorců II a III:přičemž R4 je H nebo CH2OH, R5 je H nebo OH, je H nebo OH, R7 je H nebo CH2OH, R8 je H nebo CH2OH, R9 je H nebo OH, Ri0 je H nebo OH, Rh je H nebo OH, Ri2 je H nebo CH2OH, diastereomery a směsi diastereomerů sloučenin obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelné soli a hydráty.
- 2. Způsob přípravy lipofosfonoxinů obecného vzorce I podle nároku 1 či jejich diastereomerů a směsí takových diastereomerů, vyznačující se tím, že zahrnuje kroky, při nichž seA) dimethylvinylfosfonát zahřívá přes noc s 40¼ až 70% (objem. %) vodným pyridinem při teplotě od 50 do 80 °C za vzniku methylvinylfosfonátu 9O /—P-OH /7 i Z O ch3B) methylvinylfosfonát 9 esterifikuje nukleosidem 10chráněným v polohách 2’a 3‘ skupinou, zvolenou z 2’,3’-isopropylidenu, 2',3’-bis(dimethoxytritylu), 2’,3’-dibenzoylu či 2’,3’-diacetylu, majícím volnou 5‘-hydroxylovou skupinu, přičemž Ri je jak uvedeno v nároku 1, za přítomnosti triisopropylbenzensulfonylchloridu a katalýzy N-methylimidazolem v rozpouštědle, zvoleném ze skupiny, zahrnující acetonitril, dioxan, tetrahydrofuran, dichlorethan, chloroform a dichlormethan; takto získaný methylester se isoluje chromatografií na sloupci silikagelu za použití lineárního gradientu etanolu v chloroformu a následně se methylesterová skupina odstraní zahříváním přes noc s 40^ až 70% (objem. %) vodným pyridinem při teplotě 50 až 80 °C za vzniku vinylfosfonové kyseliny 11kde Ri je jak uvedeno v nároku 1, která se isoluje chromatografií na sloupci silikagelu za použití lineárního gradientu směsi ethylacetát:aceton:ethanol:voda o objemových poměrech 4:1:1:1, v ethylacetátu;C) vinylfosfonová kyselina 11 esterifikuje alkoholem za pomoci tríisopropylbenzensulfonylchloridu a katalýzy V-methylimidazolem v rozpouštědle, zvoleném ze skupiny, zahrnující acetonitril, dioxan, tetrahydrofuran, dichlorethan, chloroform a dichlormethan a vzniklý vinylfosfonát 12kde R] a R4 jsou jak uvedeno v nároku 1, se oddělí chromatografií na sloupci silikagelu za použití lineárního gradientu efanolu v chloroformu;D) provede Michaelova adice sekundárního aminu na vinylovou funkci vinylfosfonátu 12 zahříváním v organickém rozpouštědle, zvoleném ze skupiny, zahrnující acetonitril, dioxan, tetrahydrofuran, dichlorethan, chloroform, eťanol, propanol, isopropanol a n-butanol při teplotě 80 až 120 °C po dobu 4 až 12 hodin, následně se odstraní chránící skupina na nukleobázi; produkt se pak izoluje na sloupci silikagelu za použití lineárního gradientu směsi ethylacetát:aceton:ethanol:voda o objemových poměrech 4:1:1:1 v ethylacetátu; popřípadě se dočistí pomocí preparativní vysoce účinné chromatografie na reversní fázi.
- 3. Způsob výroby podle nároku 2 lipofosfonoxinů obecného vzorce I popsaných v nároku 1 či jejich diastereomerů a směsí takových diastereomerů. vyznačující se tím, že zahřívání přes noc s vodným pyridinem v kroku A) a B) se výhodně provádí při teplotě 60 °C a použitý roztok je s výhodou 60%r(objem. %; Michaelova adice v kroku D se s výhodou provádí v n-butanolu zahříváním na 105 °C, nejlépe přes noc.
- 4. Způsob výroby podle nároku 2 lipofosfonoxinů obecného vzorce I popsaných v nároku 1 či jejich diastereomerů a směsí takových diastereomerů, vyznačující se tím, že esterifikace v krocích B a C s výhodně provádí v dichlormethanu.
- 5. Způsob výroby podle nároku 2 lipofosfonoxinů obecného vzorce I popsaných v nároku 1 či jejich diastereomerů a směsí takových diastereomerů, vyznačující se tím, že chránící skupiny nukleosidu se v kroku D) odstraní ethanolickým roztokem methylaminu nebo vodným amoniakem a v případě použití ribonukleosidu chráněného 2’,3’isopropylidenovou skupinou se tato výhodně odstraní působením roztoku 0,5 moLf1 chlorovodíku v methanolu při laboratorní teplotě*přes noc.
- 6. Lipofosfonoxiny obecného vzorce I podle nároku 1 či jejich diastereomery nebo farmaceuticky přijatelné soli a hydráty, a/nebo směsi takových sloučenin, pro použití jako léčivo.
- 7. Lipofosfonoxiny obecného vzorce I podle nároku 1 či jejich diastereomery nebo farmaceuticky přijatelné soli a hydráty, a/nebo směsi takových sloučenin, pro použití jako antibakteriální léčivo.
- 8. Antibakteriální léčivo, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku lipofosfonoxiny obecného vzorce I podle nároku 1, či jejich diastereomery nebo farmaceuticky přijatelné soli a hydráty, a/nebo směsi takových sloučenin.
- 9. Použití lipofosfonoxinů obecného vzorce I podle nároku 1, či jejich diastereomerů nebo farmaceuticky přijatelných solí a hydrátů, a/nebo směsí takových sloučenin, pro přípravu antibakteriálního léčiva.
- 10. Použití lipofosfonoxinů obecného vzorce I podle nároku 1, či jejich diastereomerů nebo farmaceuticky přijatelných solí a hydrátů, a/nebo směsí takových sloučenin, jako účinné složky desinfekčních prostředků nepoužívaných k terapeutickým účelům, a/nebo selektivních kultivačních médií pro in vitro kultivace.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20110312A CZ303569B6 (cs) | 2011-05-26 | 2011-05-26 | Lipofosfonoxiny, jejich príprava a použití |
| EP12169491.3A EP2527351B1 (en) | 2011-05-26 | 2012-05-25 | Lipophosphonoxins, method of their preparation and use |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20110312A CZ303569B6 (cs) | 2011-05-26 | 2011-05-26 | Lipofosfonoxiny, jejich príprava a použití |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2011312A3 true CZ2011312A3 (cs) | 2012-12-12 |
| CZ303569B6 CZ303569B6 (cs) | 2012-12-12 |
Family
ID=46177348
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20110312A CZ303569B6 (cs) | 2011-05-26 | 2011-05-26 | Lipofosfonoxiny, jejich príprava a použití |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP2527351B1 (cs) |
| CZ (1) | CZ303569B6 (cs) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017186200A1 (en) | 2016-04-28 | 2017-11-02 | Ustav Organicke Chemie A Biochemie Av Cr, V.V.I. | Lipophosphonoxins of second generation, and their use |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ2019769A3 (cs) | 2019-12-12 | 2021-09-22 | Ăšstav organickĂ© chemie a biochemie AV ÄŚR, v. v. i. | Lipofosfonoxiny třetí generace, jejich příprava a použití |
| CZ2020316A3 (cs) | 2020-06-04 | 2021-12-15 | Karlova Univerzita | Nanovlákenný materiál zejména pro topické použití při terapiích |
-
2011
- 2011-05-26 CZ CZ20110312A patent/CZ303569B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2012
- 2012-05-25 EP EP12169491.3A patent/EP2527351B1/en not_active Not-in-force
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017186200A1 (en) | 2016-04-28 | 2017-11-02 | Ustav Organicke Chemie A Biochemie Av Cr, V.V.I. | Lipophosphonoxins of second generation, and their use |
| US11135237B2 (en) | 2016-04-28 | 2021-10-05 | Ustav Organicke Chemie A Biochemie Av Cr, V.V.I. | Lipophosphonoxins of second generation, and their use |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2527351B1 (en) | 2013-12-11 |
| EP2527351A1 (en) | 2012-11-28 |
| CZ303569B6 (cs) | 2012-12-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0934325B1 (en) | Mycophenolic bisphosphonate compounds | |
| EP0820461B1 (en) | Aryl-ester phosphoramidate derivatives of 2',3'-didehydronucleosides | |
| US20140315851A1 (en) | Vitamin b6 derivatives of nucleotides, acyclonucleotides and acyclonucleoside phosphonates | |
| CZ541288A3 (cs) | 4' -fosfátu epipodofyllotoxinglukosidů, způsob jejich výroby a farmaceutický prostředek s jejich obsahem | |
| EP2725029A1 (en) | New antibacterial compounds and biological applications thereof | |
| AU2017239508B2 (en) | Pantothenate derivatives for the treatment of neurologic disorders | |
| EP3386995A1 (en) | Cyclic phosphates and cyclic phosphoramidates for the treatment of neurologic disorders | |
| CZ2011312A3 (cs) | Lipofosfonoxiny, jejich príprava a použití | |
| CN106661075A (zh) | 二磷酸和三磷酸前体药物 | |
| Della-Felice et al. | The phosphate ester group in secondary metabolites | |
| CZ20012284A3 (cs) | Organické sloučeniny fosforu a jejich pouľití | |
| KR20190032423A (ko) | 신경성 장애 치료용 판테테인 유도체 | |
| US20210220383A1 (en) | Lipophosphonoxins of second generation, and their use | |
| US7638505B2 (en) | Organophosphoric derivatives useful as anti-parasitic agents | |
| Rao et al. | Synthesis and bioactivity of phosphorylated derivatives of stavudine | |
| WO2017100849A1 (en) | 6-oxopurine phosphoribosyl transferase inhibitors | |
| Mills et al. | Synthesis of potent Ins (1, 4, 5) P3 5-phosphatase inhibitors by modification of myo-inositol 1, 3, 4, 6-tetrakisphosphate | |
| US10954262B2 (en) | Tunicamycin analogues | |
| Varalakshmi et al. | Nucleoside substituted perhydro-1λ5-[1, 3, 2] diazaphospholo [1, 5-a] pyridine-1-thione analogues: Synthesis and evaluation of antiviral and antimicrobial activities | |
| JP2004513177A (ja) | ｄ４Ｔのアリールホスフェート誘導体 | |
| JP2014062070A (ja) | 新規な抗酸菌生育阻害剤 | |
| KR20020043255A (ko) | 하이그로마이신 ａ 전구물질 | |
| Gupta et al. | EVALUATION OF ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF PHOSPHATE ESTERS BY WELL DIFFUSION METHOD | |
| JP2012246253A (ja) | 新規な抗酸菌生育阻害剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20220526 |