CZ2003450A3 - Steroidní hormony jako látky pro transfer - Google Patents

Description

Vynález se týká kompozic obsahujících alespoň jeden steroidní hormon a nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučeninu, přičemž kompozice jsou schopné přenášení farmaceuticky aktivních sloučenin do buněk.

Dosavadní stav techniky:

Přenos farmaceuticky aktivních sloučenin do buněk je cílem farmaceutického průzkumu. Nejenom pro genovou terapii, která zahrnuje transfer rekombinantních genů nebo transgenů do somatických buněk, aby nahradily proteiny s genetickým defektem, nebo aby interferovaly s patologickým postupem nemoci, ale také pro transfer sloučenin jiných než DNA je požadován bezpečný a snadný systém. V současnosti je transfer jiných než DNA sloučenin do buněk zajištěn přes orální, nasální nebo mukosální podávání, subkutánní nebo i.v. aplikaci, nebo podobné. Nicméně v těchto postupech musí být sloučeniny upraveny, aby prošly membránovými barierami, což následně vytváří řadu omezení ve vztahu ke struktuře podávaných sloučeni. Co se týká genových léčebných postupů, odkazuje se na metody shrnuté v PCT/EP00/01368 (podaná 3.března 2000).

Na druhou stranu, klasický model působení hormonů je založen na konceptu vazebné interakce hormonu na intracelulární receptor, umístěný v cytoplasmě nebo jádru (Evans, R., Science, Vol. 240, 559, 1988). Tyto intracelulární receptory zůstávají latentní až do vystavení jejich cílovému hormonu. Když je takto exponován, hormonový receptor změní svou konformaci poté, co je hormon vázán a translokuje v aktivované formě do buněčného jádra, kde se váže jako dimer na hormonové responzivní elementy v oblasti promotoru genů řízených hormony (Beato, M., Cell, Vol. 56, 335, 1989; O'Malley, B., a kol., Biol. Reprod., Vol. 46, 163, 1992). Hormonové ·· ··· ·· ···· • · · • · · • · • ·

responzivní elementy jsou elementy zesilovače transkripce („enhanceru“) obvykle umístěné na 5' bočně připojené oblasti specifického, hormonem indukovaného genu, tj., funkčně jsou spojené na specifický, hormonem indukovaný gen. DNA konstrukty obsahující hormonový responzivní element a sekvenci kyseliny jádra kódující protein, o který je zájem, jsou popsány v patentech US 5 688 677 a 5 580 722 a jsou uvažovány za vhodné pro expresi proteinu, o který je zájem.

Příkladem takových intracelulárních receptorů je steroidní receptor. Steroidní receptory patří do super-rodiny ligand-dependentních transkripčních faktorů charakterizovaných jednotnou molekulární strukturou. Tuto superrodinu definuje centrálně umístěná vysoce zachovaná DNA-vazebná doména. Druhou důležitou a relativně neměnnou oblastí je COOH-koncový ligandvazebná doména. Příkladem takového receptorů je progesteronový receptor zprostředkovaný steroidním progesteronem. Na progesteronovém receptorů působí progesteron jako přirozený agonista, zatímco vykazuje potentní antimineralokortikoidní vlastnosti jak na molekulární tak na systémické úrovni. Kromě klasických účinků na uterus jsou přisuzovány progesteronu podle řady studií proti-epileptické, proti-úzkostné, hypnotické a anestetických vlastnosti. Konkrétně patenty US 4 196 188 a 5 140 021 popisují farmaceutické prostředky obsahující jemně mleté částice progesteronu mající velikost částic menší než 15, resp, 10 pm, suspendované v olejovém nosiči (tak zvaný „mikronizovaný progesteron“), přičemž uvedené prostředky jsou vhodné jako antikoncepce a pro léčení premenstruačního syndromu;

GB 1 535 531 popisuje antialergika a antiastmatika obsahující směsi mikronizovaných antialergicky aktivních steroidů (jako jsou 17-estery βmethasonu a prednisolonu a mikronizované deriváty thymolu);

GB 951 767 popisuje farmaceutické prostředky obsahující směsi derivátů hydrokortisonu a dekongestantů;

Patent US 3 800 038 popisuje farmaceutické přípravky obsahující steroidní hormon ve steroidním lipidovém nosiči, uvedené přípravky volitelně obsahují další farmaceuticky aktivní sloučeniny jako antimikrobiální látky; a

WO 98/42185 popisuje metodu generování myšího modelu na lidskou endometriosu, přičemž tato metoda zahrnuje dávání zdroje mikronizovaného exogenního estrogenu a antibiotika myší samičce s těžkým deficitem imunity.

Nicméně, poměr steroidního hormonu k další farmaceutické sloučenině ve výše uvedených kompozicích nebo metodách není uveden, nebo jsou steroidní hormon a přídavná farmaceutická sloučenina používány v přibližně stejných množstvích.

Nedávno bylo zjištěno, že steroidní hormony, jako např. mikronizovaný progesteron, jsou velice účinnými mediátory pro transfer konstruktů nukleových kyselin skrz buněčné membrány do buněk (PCT/EPOO/01368). Nyní bylo zjištěno, že takové steroidní hormony - zejména, pokud jsou použity ve velkém přebytku - jsou také účinnými mediátory (ne-nukleových kyselin) farmaceuticky aktivních sloučenin pro transport uvedených sloučenin přes buněčné membrány do buněk.

Podstata vynálezu:

Předložený vynález poskytuje:

(1) farmaceutický prostředek obsahující alespoň jeden steroidní hormon a nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučeninu, přednostně v molárním poměru steroidního hormonu ku nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučenině alespoň 50:1;

(2) výhodné provedení výše uvedeného (1), kde steroidní hormon je přírodní mikronizovaný steroidní hormon;

• ·

• · · · ««· · • · · · · · · • · · · · · a (3) použití steroidního hormonu pro přípravu látky/činidla pro transfer nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučeniny do buněk; a (4) způsob transferu nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučeniny do organismu nebo do buněčného systému, přičemž tento postup zahrnuje podávání aktivní sloučeniny do organismu nebo buněčného systému ve směsi se steroidním hormonem.

Podrobný popis vynálezu „Nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučeniny“ (dále zkráceně označované jako „farmaceutické sloučeniny“) se týkají farmaceuticky aktivních sloučenin, které jsou nízkomolekulárními farmaceuticky aktivními sloučeninami (s výjimkou steroidních hormonů) a polymerních struktur, kromě polymerních struktur v podstatě složených z nukleových kyselin, jako jsou konstrukty nukleových kyselin.

Výše uvedená „nukleová kyselina“ značí DNA, cDNA, mRNA, tRNA, rRNA. Nukleová kyselina může být lineární nebo kruhová, zdvojená nebo jednořetězová, a „konstrukt nukleové kyseliny“označuje kompozit prvků nukleové kyseliny ve vztahu kjiné další. „Polymerní struktury“ podle předloženého vynálezu zahrnují polymery v podstatě složené z aminokyselinových zbytků (jako peptidy, proteiny a jiné proteinové struktury), polyhydroxy-sloučeniny (jako karbohydráty, glykoproteiny atd.) polyaminy a podobné.

„Organismus“ se týká vícebuněčné živé entity včetně obratlovců jako jsou savci (zejména lidé, dobytek, hlodavci, psi) a bezobratlých.

„Buněčný systém“ zahrnuje buněčné kultury, jako primární buněčné kultury (zejména ty, které jsou vhodné pro reimplantaci), kmenové buňky, krevní buňky, tkáňové vzorky a celé orgány a immortalizované buněčné kultury.

«„Terapeuticky účinná dávka“ v rozsahu předloženého vynálezu se týká dávky účinné pro léčení nebo prevenci, nebo dávky, která je předem stanovena jako účinná pro léčení nebo prevenci extrapolací údajů získaných in vitro a in vivo. Stanovení terapeuticky účinné dávky je v rozsahu znalostí odborníka v dané oblasti techniky.

Jak bylo uvedeno výše, předmětem předloženého vynálezu je poskytnout nový a vylepšený podávači systém.

Steroidní hormon v prostředku dle provedení (1) a (2) a v léčivu podle provedení (3) zahrnuje syntetické a přírodní steroidní hormony, jako je estrogen, testosteron, glukokortikoid, androgen, thyroidní hormon a progesteron nebo jejich deriváty. Tyto jsou široce dostupné. Progesteron je nej výhodnější. Například přírodní mikronizovaný progesteron je nej výhodnějším progesteronem, který je prodáván ve Francii od roku 1980 pod ochrannou známkou UTROGESTAN ® a ještě je dostupný v Německu pod ochrannou známkou UTROGEST®. Jeho vlastnosti jsou podobné endogennímu progesteronu, konkrétně má anti-estrogenní, gestagenní, mírně antiandrogenní a anti-mineralokortikoidní vlastnosti. Přirozený mikronizovaný progesteron v uvedených značkových produktech je dispergován v matrici popsané dále.

Výše uvedený mikronizovaný progesteron má výhody, že tvoří vhodný nosič pro geny nebo konstrukty nukleových kyselin do cílových buněk. Konkrétně synergický účinek dvojího postupu mikronizace a suspenze lipofilní matrice (viz dále), zejména v olejových zbytcích mastných kyselin s dlouhými řetězci, rezultuje ve zvýšení absorpce progesteronu. Bylo demonstrováno, že po orálním podání 100 mg UTROGESTAN ® byly získány po 1-4 hodinách ve většině případů vrcholné hladiny plasmy progesteronu (Padwick, M. L., a kol., Fertil. Steril., Vol. 46, 402, 1986). Později hladiny značně klesaly, ačkoliv pořád byly po 12 hodin zvýšené. Dokonce po 84 hodinách byly hladiny mírně vyšší než základní hodnoty. Kinetická studie potvrdila dřívější práci doložením bio-dostupnosti orálního mikronizovaného progesteronu. Bylo ukázáno, že vrcholný účinek po 2 hodinách byl následován • ·

rychlým poklesem hladiny plasmy progesteronu (Simon, J.A., a kol., Fertil., Steril., Vol., 60, 26, 1993).

Další výhodou použití progesteronu jako nosiče je nízká úroveň nevýhodných vedlejších účinků. Orálně podávaný progesteron nepříznivě neovlivňuje ani plasmové lipidy (Jensen, J. a kol., Am. J. Obstet. Gynecol., Vol. 156, 66, 1987) ani metabolismus karbohydrátů (Mosnier-Pudar, H. a kol., Arch. Mal. Coeur, Vol 84, 1111, 1991). Dále, progesteron neovlivňuje jaterní enzymy (ASAT, ALAT, AFOS), syntézu globulinu spojeného se sexuálním hormonem (SHBG) nebo HDL-hladiny cholesterolu v denních dávkách 200 mg a 300 mg. Ačkoliv hladiny plasmy deoxykortíkosteronu se mohou podstatně zvýšit během léčby UTROGESTANem ®, existují silné indikace, že mineralokortikoidní účinky tohoto progesteronového metabolitu jsou zcela mařeny anti-mineralokortikoidními účinky progesteronu samotného. To je zřejmé ze srovnávací studie (Corvol, P., a kol., v: Progesterone and progestins. RavenPress, New York, 179, 1983) v níž byl orální UTROGESTAN ® schopný antagonizování mineralokortikoidních účinků 9-cc-fluorohydrokortisonu.

V prostředku podle provedení (1) a (2) a v léčivu podle provedení (3) podle vynálezu je molární poměr hormonu k farmaceutické sloučenině alespoň 50:1, přednostně alespoň 250:1, výhodněji alespoň 1000:1, a nej výhodněji alespoň 10 000:1. Bylo zjištěno, že pod poměr 50:1 je transfer farmaceutické sloučeniny do buňky méně účinný.

Odborník znalý oblasti techniky bude očekávat, že složení provedení (1) a (2) a léčiva podle (3) může obsahovat další složky schopné pomáhat při zavádění nukleové kyseliny do buňky za účelem genové terapie (jako jsou matricové sloučeniny zmíněné výše). Konkrétně mohou prostředek a léčivo, zejména jejich hormonální složka, obsahovat následující matricové sloučeniny: glukosu a podobné sloučeniny (jako je D-sorbitol. D-mannitol); solubilizační pomocné prostředky (jako alkoholy, např. ethanol); vícesytné sloučeniny jako je glycerin, polyethylenglykol a polypropylenglykol; neiontové povrchově aktivní sloučeniny, iontové povrchově aktivní • · · ·

sloučeniny jako je lecitin; olejové sloučeniny jako je sezamový olej, arašídový olej, olej sojových semen, kukuřičný olej, atd.; škroby a jejich deriváty, jako cyklodextriny a hydroxyalkylované škroby; stabilizátory jako je lidský sérový albumin, konzervační látky, jako je benzylalkohol a fenol; a podobné. Výhodná matrice obsahuje β-cyklodextrin, glycerin, lecitin a/nebo kukuřičný olej. V případě mikronizovaných steroídních hormonů, jako je mikronizovaný progesteron, jsou míkronizované částice suspendovány v olejovém nosiči, přednostně v olejovém nosiči, s vysokým obsahem glyceridů polynenasycených mastných kyselin, jako je kukuřičný olej, slunečnicový olej nebo olej sojových semen (viz patent US 5 140 021; jehož popis je zde začleněn jako odkaz). Přednostně poměr olej:mikronizovaný steroidní hormon nepřevýší 2,5 ml oleje na gram steroidního hormonu.

Například farmaceutická kompozice steroidního hormonu a farmaceutické sloučeniny podle vynálezu může být poskytnuta orálně lidem nebo zvířatům jako želatinová kapsle. Progesteron uvnitř ní (přednostně v míkronizované formě) může být přítomen v koncentraci 50 až 1000 mg, přednostně 200 až 300 mg rozpuštěných v 35% nebo 40% roztoku β-eyklodextrinu nebo v kukuřičném oleji nebo glycerolu s arašídovým olejem společně s lecitinem.

Alternativně pokud je - díky výběru vhodných matricových složek farmaceutická kompozice jako pasta, tj ve formě podobné gelu, může být aplikována topicky.

Kompozice provedení (1) podle vynálezu může být připravena smísením farmaceutické sloučeniny s hormonem. Přednostně je vodný roztok farmaceutické sloučeniny (pokud je sloučeniny rozpustná v takových vodných systémech) přidán do olejové suspenze obsahující hormon za míchání při teplotě okolí.

Dávka nesteroidní sloučeniny je závislá na stavu, který má být léčen, charakteristice pacienta a uvažovaném výsledku, kterého má být dosaženo. Stanovení dávky je ve sféře znalého odborníka.

·· ···· φφ ·φφφ

Farmaceutický prostředek a léčivo podle předloženého vynálezu mohou být podávány orálně, rektálně, intravenosně, intramuskulárně, subkutánně, topicky nebo sliznicí (včetně bukálního, nosního spreje). Přednost se dává orálnímu podávání (mikronizované disperze hormonu). Podávání může být systémické nebo vedené přímo na konkrétní tkáň.

Provedení (3) a (4) vynálezu umožňují použití steroidního hormonu pro přípravu Činidla pro transfer nesteroidní farmaceuticky účinné sloučeniny do organismu, a pro metodu transferu nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučeniny do organismu nebo buněčného systému, který zahrnuje podávání účinné sloučeniny do organismu nebo do buněčného systému. Ve výhodném provedení je aktivní sloučenina zapouzdřena ve steroidním hormonu. Vhodné steroidní hormony jsou jmenovány výše. Preferovaným steroidním hormonem v uvedených provedeních podle vynálezu je přírodní mikronizovaný steroidní hormon, zvláště přírodní mikronizovaný progesteron. Ve výhodném provedení je mikronizovaný hormon solubilizován/dispergován v lipofilní matrici, jak je uvedeno výše. Dávka a typ podávání je v rozsahu znalostí odborníka znalého dané oblasti.

Preferovanými směsmi steroidních hormonů a farmaceuticky aktivních sloučenin podle předloženého vynálezu jsou množství progesteronu obsažená v kapsli UTROGEST® (totiž 100 mg progesteronu) s méně než 4 pmol, přednostně méně než 0,5 pmol, ještě výhodněji méně než 0,1 μηιοί farmaceuticky aktivní sloučeniny vybrané z, ale neomezující se na ně, enzymů, inhibitorů enzymů, růstových hormonů, cytokinů, cytostatik, krevních faktorů srážlivosti a imuno-modulátorů.

Claims (12)

1. Farmaceutická kompozice vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden mikronizovaný steroidní hormon a nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučeninu, přičemž molární poměr steroidního hormonu ku nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučenině je alespoň 50:1.

2. Kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že steroidní hormon je zvolen z estrogenu, testosteronu, glukokortikoidu, androgenu, thyroidního hormonu a progesteronu a jejich derivátů, a přednostně progesteronu.

3. Kompozice podle nároku 1 nebo 2 vyznačující se tím, že steroidní hormon je přírodní mikronizovaný steroidní hormon.

4. Kompozice podle nároků 1 až 3 vyznačující se tím, že nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučenina je nízkomolekulární sloučenina nebo polymerní sloučenina v podstatě složená z aminokyselinových zbytků.

5. Kompozice podle nároků 1 až 4 vyznačující se tím, že molární poměr steroidního hormonu ku nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučenině je alespoň 250:1, přednostně alespoň 1000:1, a nejvýhodněji alespoň 10000:1.

6. Kompozice podle nároků 1 až 5 vyznačující se tím, že dále obsahuje lipofilní matrici.

7. Kompozice podle nároků 1 až 6 vyznačující se tím, že farmaceuticky aktivní sloučenina je zapouzdřena ve steroidním hormonu a/nebo kde kompozice je vhodná pro přenášení farmaceuticky aktivních sloučenin do buněk.

• · « « · * • · ··· ·

8. Použití steroidního hormonu pro přípravu léčiva pro přenos nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučeniny do organismu, přičemž v léčivu je molární poměr steroidního hormonu ku nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučenině alespoň 50:1.

9. Použití podle nároku 8, kde steroidní hormon je přírodní mikronizovaný steroidní hormon, přednostně přírodní mikronizovaný progesteron.

10. Použití podle nároku 9, kde přírodní mikronizovaný steroidní hormon je solubilizován v lipofilní matrici.

11. Metoda transferu nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučeniny do organismu nebo do buněčného systému, která zahrnuje podání aktivní sloučeniny do organismu nebo buněčného systému ve směsi se steroidním hormonem, přičemž molární poměr steroidního hormonu ku nesteroidní farmaceuticky aktivní sloučenině je alespoň 50:1.

12. Metoda podle nároku 11, kde farmaceuticky aktivní sloučenina je zapouzdřena do steroidního hormonu.