CZ20032617A3 - Očkovací kompozice a způsoby jejího použití - Google Patents

Description

OČKOVACÍ KOMPOZICE A ZPŮSOBY JEJÍHO POUŽITÍ

Tato přihláška částečně navazuje a prohlašuje prioritu U.S. přihlášky pořadové číslo 09/642,913, registrované dne 21. srpna 2000, která prohlašuje výhodu U.S. předběžné přihlášky č. 60/150,514, registrované dne 24. srpna 1999. Obsah obou výše uvedených U.S. předběžných přihlášek se tímto zahrnuje jako odkaz do této přihlášky.

V rámci této přihlášky jsou rozličné odkazy určené podle autorů a plnými citacemi. Popisy těchto publikací jsou tímto jako celek zahrnuty jako odkaz do této přihlášky, aby plněji popsaly stávající stav techniky, ke kterému se tento patent vztahuje.

Oblast techniky

Předložený vynález se týká stabilní', zhutněné, slisované nebo tabletované očkovací kompozice ve formě hutné, pevné formy, která zahrnuje jednu nebo více (lyofilizováných) antigenních složek rozpouštění. Tato stabilní, hutná, uchovává všechny výhodné vlastnosti za mrazu vysušených a činidlo napomáhající očkovací kompozice si svých lyofilizovaných složek, včetně stabilního titru a rozpustnosti, zatímco dále poskytuje kompletní a rychlé rozpuštění v ředidle. Kromě.toho očkovací kompozice předloženého vynálezu obchází nevýhody lyofilizovaných přípravků známého stavu techniky. Vynález také poskytuje způsob imunizace subjektu s použitím stabilní očkovací kompozice pro vytvoření očkovacího roztoku.

• · • · ·· · · · · ·

Dosavadní stav techniky

Je známou skutečností, že biologické materiály v roztocích, například vakcíny, podléhají rozličným vlivům, včetně tepla, oxidačních činidel, solí, pH, světla a proteolitických enzymů.

Pro snížení těchto škodlivých účinků je známo několik způsobů obecně a konkrétněji pro zlepšení stability vakcíny zvláště během skladování. Skladování pod 0° C a až do teploty -70° C v mrazáku je například obecně známým způsobem. Za ještě nižších teplot, například při teplotě kapalného dusíku, lze mnohé biologické materiály, včetně živých buněk úspěšně skladovat mnoho let. Takové způsoby však nejsou vždy praktické v takových situacích, které, například vyžadují očkování volně se pasoucího dobytka.

Lyofilizace nebo vysoušení za mrazu je jiným známým způsobem zachování živých buněk a virů pro použití jako vakcín. Během vysoušení za mrazu se roztok obsahující biologický materiál nejdříve zmrazí: a potom se voda odpaří pomocí sublimace, obvykle za vysokého vakua a při teplotách pod 0° C. Dosavadní přístupy používaly vysoušení za mrazu nebo další techniky pro formulaci virových ivakcín, ale stále narážely na další potíže týkající se přípravy a podávání stabilní konečné dávkové formy.

Například U. S. patent č. 4,251,509 (Hanson a Abegunde) popisuje stabilní virovou vakcínu složenou z částic, která je určena pro perorální podávání volně se pasoucímu dobytku v suchém stavu./ Popsaná dávková forma však není vysušena za mrazu, ale připravena zahuštěním a vysušením vytlačované pasty, aby se vytvořily pelety.

Pro podporu teplotní stability jsou zapotřebí antioxidanty, jejichž výběr bude záviset na konkrétním viru. Takové přípravky • · · · · · · · · ···· · · · ··« mohou být mnohem složitější na přípravu a nejsou zvláště vhodné pro ty situace, kdy se před imunizací požaduje rozpuštění vakcíny.

U.S. patenty číslo 3,458,621 a 3,608,303 (Tint) popisují použití virových přípravků vysušených za mrazu k přípravě tablet pro orální podávání k imunizaci zažívacího ústrojí. Avšak připravené tablety jsou pro orální podávání a jsou opatřeny enterosolventním povlakem pro zpoždění desintegrace. Během testů in vitro se příliš rychle nerozpadaly a zjistilo se, že v podmínkách simulujících podmínky v zažívacích tekutinách se desintegrovaly pouze „během pětadvaceti minut. Kromě toho se doba rozpadu měřila v simulované zažívací kapalině, čímž se nebraly v úvahu účinky enterosolventního povlaku. Tint navíc dále zdůrazňuje, že pokud nejsou tablety „tlakově potažené, budou ztrácet svůj titr, jak se prokázalo srovnáním tlakově potažených a netlakově potažených tablet. Tint poznamenává, že netlakově potažené tablety „nejen že nevyvolávají odpověď protilátky ve všech jednotlivcích negativních na protilátku, ale navíc velikost nárůstu titru byla významně nižší. (Viz odstavec 4, řádek 40).

PCT publikační číslo WO 99/21579 (Seageř a spol.) přiznaný R.P. Scherer Corp. popisuje „rychle se dispergující kompozici pro veterinární vakcínu, například proti newcastlovské chorobě, která se vysuší za mrazu a „volně zhutní. Léková forma se popisuje jako „otevřená síť živné půdy, taková, jako „pěna v pevném stavu citovaná z U.S. patentu č. 4,371,516 (protějšek k UK patentu č. 1,548,022), v protikladu ke komprimované formě nebo tvrdému tabletování. Kromě toho se vakcíny orientují na orální podávání a zaměřují se na zadržování v mukózní tkáni. Pro absorpci na této tkáni slouží adjuvans, poskytující dostatečný čas zádrže. Popisovaná formulace vakcíny nezajišťuje přípravu kapalných lékových forem pro pozdější imunizaci, ani prostředek očkovacího pro snadnou přípravu roztoku pro podávání neposkytuje stabilní lisované nebo pro usnadnění její pozdější aplikace.

stabilního, měřitelného v kapalné dávce, ani pevné tablety lyofilizátu

U.S. patent číslo 5,587,180 (Allen, ml. a spol.) popisuje způsob výroby nosné matrice složené z částic pro rychlé rozpouštění tablet. Způsob nevyužívá vysoušení za mrazu, ale standardní techniky sprejového vysoušení. Nosná matrice složená z částic je vhodná pro podávání dávky vkládané do ústní dutiny. Kromě toho neposkytuje žádný stabilní očkovací přípravek jako roztok vákcíny ve formě kapalné dávky,

U.S. patent č. 5,336,666 (Neway a spol.) popisuje kapalnou vakcínu vysušenou za mrazu, která může mít formu tablety pro rekonstituci v kapalné formě. Vakcína se nicméně omezuje na polární glykopeptid konkrétní baktérie a není kompletně a rychle rozpustná.

Ačkoli vysoušení biologických látek za mrazu lze provádět odborníkovi v technice dobře známými lyofilizačními postupy, aby se získal stabilní očkovací přípravek, je pro ně typické, že titr živého viru není na konci lyofilizace stejný, jako byl v roztoku před lyofilizací. Titraci nelze obecně provádět před lyofilizací, jelikož roztok není stabilní, dokud není vysušen za mrazu. Navíc se titr bude měnit během lyofilizace nepředvídatelně, V důsledku toho stanovení počátečního titru založené na zkušenosti se potvrdí pouze titraci po vysušení za mrazu. Ze všeho výše uvedeného vyplývá, že je téměř nemožné dosáhnout definovaného přesného cílového titru. Jestliže se lyofilizace provádí s lyofilizátém ' již obsaženým v ampulkách, je příznačné, že nelze várku přepracovat a v určitých případech, neodpovídá-li várka specifikaci, musí se celá vyhodit.

···· · · · »·· • ··· · · · · · 9 · · · • · · 9 9 9 9 9 9 9 9 9 99 9

9 9 9 99 9 9 9 9 9

U.S. patent číslo 5,897,852 (Wilderbeek a spol.) se pokouší řešit tento problém s použitím různých „tělísek vysušených za mrazu složených s „lyokuliček, aby se vyrovnaly deficity titru lyofilizovaného koláče. Nicméně každá lyokulička má svůj vlastní titr, což vyžaduje titraci mnohočetných tělísek, aby se získal požadovaný títr. Tímto způsobem se dokonce ani v nej lepším případě nedosahuje přesně požadovaného titru vzhledem k tomu, že se pro dosažení cílového titru používají úhrnná tělíska. Kromě toho je výroba lyokuliček relativně obtížná ve srovnání s přímočařejším vysoušením roztoků za mrazu pro výrobu koláče nebo prášku. Navíc je často nutná specifická matrice, aby se. zabránilo rozpadu lyofilizovaného materiálu na prášek po vysušení. Způsob obecně vyžaduje přípravu oddělených roztoků s odlišnými titry, přísadami a adjuvans. Způsob neřeší problém, že titr várky živého viru je vzácně homogenní a mění se od ampulky k. ampulce, zejména přes plochu chladících tácků v lyofilizačním zařízení. Proto je stanovení počtu lyokuliček potřebných na ampulku vždycky aproximací.

Vysoušení za : mrazu může být také užitečné pro vakcíny obsahující více než jednu imunogenní složku. Například EP 290197A popisuje tetravalentní vakčínu vysušenou za mrazu. Postup popisuje míchání a následné vysoušení za mrazu čtyř očkovacích složek živých virů.

Nevýhoda běžných technik vysoušení za mrazu pro přípravu vakcíny spočívá v tom, že proces je velmi komplexní, zahrnuje mnoho proměnných, což způsobuje neblaze známé potíže s reprodukovatelným provedením, aby se získal přijatelný produkt a jednotnost dávky. Zvláště problematické to je pro veterinární vakcíny, kde se velký počet dávek vysouší za mrazu v jedné ampulce. Méně obvyklý je tento problém pro přípravky humánních vakcín, ačkoli se podobně pociťuje tam, kde je potřebné masové očkování, například v armádě nebo při • · • · · · pandemických infekcích. Pro vakcinaci drůbeže například jedna ampulka obsahuje typicky buď 1000 nebo 2000 dávek a takto je zaregistrována. Před vysoušením za mrazu se provede hrubé stanovení titru materiálu, ale konečný titr lze stanovit pouze po vysušení za mrazu, jelikož během vysoušení za mrazu titr často klesá spíše nepředvídatelně. Navíc surovinu se živým virem nebo baktérií nelze udržet stabilní dostatečně dlouhou dobu, aby se získaly přesné výsledky titru před vysoušením za mrazu.

V praxi to dopadá tak, že kontejner původně obsahující více než 2000 dávek bude po vysoušení za mrazu obsahovat pouze 1900 dávek. V takovém případě by mohla být ampulka prodávaná pouze jako ampulka s 1000 dávkami, jelikož toto je typicky jediná další registrovaná dávka. V takovémto případě může vyjít nazmar 47 % materiálu a může dojít k odpovídajícímu zvýšení nákladů. Tento problém se násobí u kombinovaných vakcín, protože pro charakteristiku celé dávky se musí použít složka s nejnižším titrem. Další nevýhoda při použití ampulí zamýšlených na poskytnutí 2000 jednotlivých dávek, ale prodávaných následně jako ampule na 1000 dávek a použitých na očkování 1000 zvířat spočívá vtom, že takto očkovaná zvířata jsou nutně předávkována. Kromě toho záměrné zvyšování počtu dávek před vysoušením za mrazu není uspokojivou alternativou v případě, kdy některá z dávek se účinněji vysuší. V takovém případě prostě dochází kpromrhání tohoto materiálu.

Tlak na řešení těchto problémů se zvyšuje, jelikož registrační úřady přecházejí v současnosti na registrační systém, ve kterém čísla titrů očkovacích dávek jsou stanovena mezi dobře definovaným dolním a horním limitem. Při velkém počtu proměnných, jak při výrobě, tak při vysoušení za mrazu, bude při velkovýrobě obtížné se trefit do těchto limitů. Jak bylo naznačeno, tento problém bude ještě závažnější, když se • · · ·

I» · · požaduje kombinovaná vakcina.

Výše zmíněné za mrazu vysušené spojené vakcíny mají ještě další nevýhodu, která spočívá v tom, že se musí uchovávat velký počet připravených kombinací. To proto, že rozličné složky ve spojené vakcíně se typicky mísí před vysoušením za mrazu. Pro přípravu celkového rozsahu jedné multikomponentní vakcíny proti například dvěma nemocem, musí být v zásobě tři různé produkty; (1) produkt obsahující vakcínu proti A, (2) produkt obsahující vakcínu proti Ba (3) produkt obsahující vakcínu proti A a proti B. V případě vakcín proti třem nemocem se musí do zásoby připravit sedm různých kombinací vakcín. Pro čtyři nemoci se vyšplhá tento počet na patnáct různých kombinací vakcín. Z toho často plyne potřeba zajistit a udržovat rozsáhlou skladovací kapacitu.

U.S. patenty číslo 5,397,569 a 5,871,748 (Whitfill a spol.) popisují způsob vytvoření aktivní imunity proti viru newcastelské choroby (NDV) u ptačích subjektů in ovo podáváním komplexní vakcíny obsahující živý očkovací virus a neutralizačních protilátek k němu vázaných. Wintfill objevil, že poměr viru k neutralizační protilátce nebo k jejímu fragmentu bude určovat úspěšnost imunizace. Avšak, aby byl takový způsob účinně aplikován proti NDV, musí se zachovat úzký rozsah hodnot tohoto poměru proto, aby imunizace proběhla úspěšně, aniž by se kuřata zabila. Kromě toho nepředvídatelnost ti tru při použití lyofiližované NDV (podobně jako u jiných virových přípravků) znamená, že způsoby, jako je Wintfillův, nejsou snadno aplikovatelné pro NDV. Je proto žádoucí najít způsob, který by zajistil přesnější titry NDV a protilátek pro přípravu takové vakcíny.

Výše uvedené přípravky vakcíny a jejich způsoby výroby mají ještě další nevýhodu spočívající v tom, že povaha samotného • · · • · · ·

4 4 procesu vysoušení za mrazu je náročná na prostor. Lyofilizace vakcíny typicky vyžaduje nejdříve rozdělení rozpustitelné vakcíny do skleněných nádobek. Nádobky jsou potom volně uzavřeny gumovými uzávěry a umístí se na tácky v přihrádkách komory nebo kondenzátoru pro vysoušení za mrazu. Je velice obtížné koncentrovat velmi vysoké dávky rozpustítelného očkovacího materiálu ve velmi malém objemu.

V důsledku toho nádobky, které se typicky používají při vysoušení za mrazu pro hromadné dávky vakcíny vždy obsahují relativně veliký objem kapaliny. Účinné vysoušení za mrazu vyžaduje, aby byl velký povrch kapaliny, která se má lyofilizovat, vystaven kontaktu s vakuem. Jelikož jenom horní vrstva zmražené pelety je v kontaktu' s vakuem, vakcíny se proto vysouší za mrazu v relativně velkých skleněných lahvích nebo nádobkách se širokým dnem. Tyto nádobky jsou někdy vysoké pět centimetrů, kde další dva centimetry výšky jsou zapotřebí pro gumové uzávěry. V důsledku toho je poměr materiálu produktu k prázdnému prostoru v aparatuře vysoušení za mrazu extrémně neefektivní, což vede k menší efektivitě výrobního procesu z hlediska nákladů.

Vzhledem ke konvenčním kompozicím spočívá další nevýhoda očkovacích přípravků vysušených za mrazu, které mají být obsažené ve skleněných nádobkách, v tom, že gumové uzávěry mohou během lyofilizace bránit volnému přenosu molekul vody z nádobky do kondenzátoru. To může zvyšovat parciální tlak sublimujících plynů uvnitř nádobek, a tím snižovat účinnost lyofilizace, jakož i zvyšovat nebezpečí kolapsu lyofilizovaného materiálu. Sklo také brání přenosu tepla, a tím dále ovlivňuje účinnost lyofilizace. Formulace vakcíny, která by vylučovala jak skleněné nádobky, tak uzávěry, s použitím tácků v lyofilizaci by zvyšovala účinnost. Kromě toho je proces vysoušení za mrazu velice náročný na čas. Složky vakcíny jsou typicky udržované těsně pod bodem tání, aby se snížila doba potřebná na sublimaci. Delší vysoušeči doba vede většinou nevyhnutelně ke snížení titru. Skleněné nádobky se svými uzávěry a hliníkovými přebaly jsou obecně vnímány jako břímě. Ve výrobních pojmech mohou představovat více než padesát procent nákladů na konečnou vakcínu. V polních podmínkách se musí do ampulí nastříknout ředidlo a výsledný roztok extrahovat a zředit, pokud je to potřebné pro použití. Představuje to nesnáz, která se ne vždy hodí pro situace v polních podmínkách, jako je například v drůbežárnách. Není ničím neobvyklým pro pracovníky v těchto situacích, že během tohoto postupu si sami vpíchnou injekci. Ještě další nevýhodou takovéhoto balení vakcíny a její . přípravy je, že určitá část koncentrovaného roztoku zůstane v ampulce. V důsledku toho se obecně akceptuje, že je potřebné, aby obsah byl v přebytku pro kompenzaci nehomogenity a ztrát během výroby, a rovněž ztrát, ke kterým dochází během skladování. Skleněné nádobky se musí také bezpečně likvidovat a mohou představovat nebezpečí pro zdraví a životní prostředí.

V důsledku toho použití konvenčně vysušených očkovacích přípravků za mrazu vyžaduje komplikované techniky přípravy, které jsou nákladné a obtížně se aplikují v polních podmínkách. Proto se takové konvenční očkovací přípravky příliš nehodí pro vakcinace v zaostalých zemích, kde ekonomické a terénní podmínky neumožňují nákladné kampaně nebo v případech masových imunizací, které mohou být zapotřebí, například při obraně proti biologickým zbraním nebo při jiných možných katastrofách nebo epidemiích.

Zapotřebí je proto očkovací přípravek, který se vyhýbá použití skleněných ampulek, poskytující pro podávání levnější a objemné alternativní balení. Zapotřebí je také očkovací přípravek a způsob použití, který poskytuje větší přesnost • · · • · · · dávkování a snadnější manipulaci při zachování stability, sterility, rozpustnosti a homogenity jak pro samostatné, tak pro kombinované přípravky. Očkovací přípravek a zlepšený způsob imunizace, který ulehčí přesnější, reprodukovatelnější a účinnější podávání může poskytovat výhody lepšího použití v terénu, zvýšené bezpečnosti, vyšší účinnosti z hlediska nákladů, snížení odpadu a zvýšení přijatelnosti pro životní prostředí.

Podstata vynálezu

Souhrn vynálezu

Předmětem vynálezu je proto očkovací kompozice a způsob imunizace, kterého se dosahuje prostým rozpuštěním pevné, hutné, stabilní formy lyofilizované vakcíny v ředidle, čímž se odstraňuje potřeba skleněných ampulí, přičemž se také umožňuje mnohem větší přesnost dávkování a snadné použití.

Dalším předmětem vynálezu je lyofilizovaná živá nebo inaktivovaná vakcína, která je zhutněná, slisovaná nebo tabletovaná jako hutná, stabilní, pevná látka, která si uchovává svůj potenciál imunizační kapacity během přípravy a po dobu potřebnou pro postačující skladování komerční vakcíny.

Dalším předmětem vynálezu je lyofilizovaná živá nebo inaktivovaná vakcína, která je zhutněná, slisovaná nebo tabletovaná jako hutná, stabilní, pevná látka, která usnadňuje

formulaci	přípravků vakcíny in	ovo a	její použití.
Dalším	předmětem vynálezu	je .	lyofilizovaná živá	nebo
inaktivované vakcína, která	je	zhutněná, slisovaná	nebo

tabletovaná jako hutná, stabilní, pevná látka, která usnadňuje balení vakcíny v kontejnerech, kterými nejsou ampulky, a jeho • · ·· ·· ·· ·· · • ··· · · · · 9 « • · ♦ · · * · « * 9 · · · • «· · » · ·« *. · · » · · · « · · · · · · · ·· « ·· ·· · · «· «» · použití .

Dalším předmětem vynálezu je očkovací kompozice a způsob imunizace s větší flexibilitou při vakcinacích, kterou lze formulovat a použít.

Dalším předmětem vynálezu je očkovací kompozice a způsob imunizace, který snižuje potřebu nadbytku očkovacího materiálu potřebného pro kompenzaci neodmyslitelných nepřesností v titru balené vakcíny vyrobené známými způsoby.

Dalším předmětem vynálezu je očkovací kompozice a způsob imunizace, který umožňuje větší flexibilitu v typech očkovacích přípravků, které lze aplikovat.

Ještě dalším předmětem vynálezu je očkovací kompozice a způsobu imunizace, který usnadňuje přípravu multidávkového očkovacího roztoku a jeho použití.

Dalším předmětem vynálezu je očkovací kompozice a způsob imunizace, který ulehčuje humánní masovou imunizaci.

Dalším předmětem vynálezu je očkovací kompozice a způsob imunizace, který je vhodný a z hlediska nákladů efektivní pro vakcinace v zaostalých zemích, kde náklady a terénní podmínky neumožňují komplikovanou přípravu a nákladné kampaně.

Ještě dalším předmětem vynálezu je očkovací kompozice a způsob imunizace přístupný pro použití při obraně proti biologickým zbraním, kde masová imunizace je nezbytná.

Dalším předmětem vynálezu je sterilního balení zahrnující injekční stříkačku, která obsahuje přípravek ve zhutněné formě, slisovaný nebo tabletovaný jako hutná, pevná látka s obsahem

9 9 9 9

99 9 činidla napomáhajícího rozpouštění.

Dalším předmětem vynálezu je výše uvedené sterilní balení, kde zhutněný, slisovaný nebo tabletovaný pevný přípravek se rychle rozpouští v ředidle, buď v injekční stříkačce nebo v oddělené nádobce.

Jiným předmětem vynálezu je očkovací kompozice a způsob imunizace uskutečněný rozpuštěním pevné, hutné, stabilní formy lyofilizované vakcíny obsažené v sterilním balení s ředidlem, aby se vytvořil očkovací roztok připravený pro aplikaci.

Dalším předmětem vynálezu je lyofilizovaná živá nebo inaktivovaná vakcína, která je zhutněná, slisovaná nebo tabletovaná jako hutná, stabilní, pevná látka vhodná pro humánní aplikaci.

Jiným předmětem vynálezu je lyofilizovaná živá nebo inaktivovaná vakcína, která je zhutněná, slisovaná nebo. tabletovaná jako hutná, stabilní, pevná látka, která dále obsahuje druhou lyofilizovanou složku obsahující neutralizační protilátky proti lyofilizované antigenní složce.

Dalším předmětem vynálezu je způsob výroby lyofilizované vakcíny obsahující neutralizační protilátky, kde potence lyofilizované antigenní složky a lyofilizovaných neutralizačních protilátek se stanoví odděleně, aby se vyrobil očkovací přípravek v poměru každé složky založěném na jejich stanovených potencích.

Ještě dalším předmětem vynálezu je způsob imunizace subjektu in ovo uskutečněný prostým rozpuštěním pevné formy lyofilizované vakcíny obsahující neutralizační protilátky, buď v předpřipravené sterilní injekční stříkačce nebo v oddělené ·» ·· ·* ♦ · « ♦ · · 9

9 99 9 9 999 <« ·· ·· ·· 99 9 nádobce .

Tyto a další předměty lze dosáhnout pomocí předloženého vynálezu, jehož předmětem je stabilní očkovací kompozice obsahující přinejmenším jednu lyofilizovanou antigenní složku, jejíž titr je předem stanoven, a činidlo napomáhající rozpouštění, přičemž očkovací kompozice je ve formě tvrdé tablety. Předmětem předloženého vynálezu je navíc způsob imunizace subjektu proti nemoci zahrnující kroky: rozpuštění očkovací kompozice v ředidle, aby se vytvořil roztok, kde očkovací kompozice obsahuje alespoň jednu lyofilizovanou antigenní složku a činicllo napomáhající rozpouštění, kde očkovací kompozice je ve formě tvrdé tablety a kde očkovací kompozice poskytuje ochranu proti takové nemoci, a podání výsledného roztoku subjektu v množství účinném, aby se subjekt proti nemoci imunizoval.

Vynález se stane ve svých konkrétních rysech jasnější z následujícího podrobného popisu uváženého s odkazy na doprovodné příklady. Následující popis bude pokračovat v diskusi problémů a řešeních nabízených předloženým vynálezem, jak přísluší veterinárním aplikacím. Nicméně to, co následuje, by se žádným způsobem nemělo interpretovat jako omezení pro veterinární aplikace nebo jako neaplikovatelné na humánní vakcinaci.

Podrobný popis vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je stabilní, slisovaná očkovací kompozice obsahující alespoň jednu lyofilizovanou antigenní složku a činidlo napomáhající rozpouštění.

Ve výhodném provedení vynálezu je očkovací kompozice ve formě tvrdé tablety.

«·«» · · ♦ ♦ · * ··«· «··«· « · » · « ·· 9 · # 9 9 · · 9 · ···

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 · 9 9 9

V dalším výhodném provedení vynálezu se kompozice kompletně a rychle rozpouští ve vodě.

Ve výhodném provedení vynálezu je kompozice sterilní.

Ve výhodném provedení vynálezu je činidlem napomáhajícím rozpouštění šumivé činidlo nebo pár činidel, desintegrační a povrchově aktivní látka nebo solubilizér.

V dalším výhodném provedení vynálezu obsahuje šumivý pár sůl a kyselinu.

V dalším výhodném provedení vynálezu představuje šumivým párem je kyselina citrónová a solí je kyselý uhličitan.

V dalším výhodném provedení vynálezu obsahuje očkovací kompozice pojivo a mazivo.

V ještě dalším výhodném provedení vynálezu se kompozice zcela a rychle desintegruje ve vodě.

V dalším provedení vynálezu je aktivním materiálem předtitrovaný lyofilizát, který se před použitím udržuje v suché dusíkové atmosféře při teplotě pod bodem mrazu.

V dalším provedení vynálezu obsahuje lyofilizovaná složka až 80 % hmotnosti kompozice.

V dalším výhodném provedení vynálezu se očkovací kompozice vyznačuje kompletním rozpuštěním během doby kratší než 80 sekund po kontaktu s ředidlem.

V dalším výhodném provedení vynálezu dochází ke kompletnímu rozpuštění očkovací kompozice při poměru ředidla ke kompozici ·· »· « ♦ · • · ·· « · · ·· ·· ·· · « · ♦ · · « ··· « · · · • · · · « « ·« · · mezi 0,5 mL ředidla na 200 mg kompozice a 100 mL ředidla na 400 mg kompozice.

V dalším výhodném provedení vynálezu se stabilita kompozice vyznačuje ztrátou titru, která není větší než rozdíl mezi 10⁹'⁷ EID5o/mL a 10⁹'² EID50/mL po pěti dnech při 37° C.

V dalším výhodném provedení vynálezu se stabilita kompozice vyznačuje ztrátou titru, která není větší než rozdíl mezi 10⁹'⁷ EID5o/mL a 10⁹'³ EID50/mL po devíti měsících při 4° C.

V ještě dalším výhodném provedení vynálezu je antigenní složkou očkovací kompozice celý virus, celá bakterie nebo celý mikroorganismus.

V dalším výhodném provedení vynálezu je antigenní složkou očkovací kompozice živá bakterie nebo živý virus.

Ve výhodném provedení vynálezu očkovací kompozice obsahuje indikátor přítomnosti antigenní složky.

Ve výhodném provedení vynálezu je indikátorem barvivo.

Předmětem tohoto vynálezu je dále stabilní očkovací kompozice obsahující alespoň jednu lyofilizovanou antigenní složku a činidlo napomáhající rozpouštění, kde očkovací kompozice je ve formě trvrdé tablety a antigenní složka obsahuje lipopolysacharid nebo protein, ať už se vyskytující přírodně, rekombinantní nebo modifikovaný.

V dalším výhodném provedení vynálezu je antigenní složkou živý virus vybraný ze skupiny sestávající z: viru nebo bakterie newcastlovské choroby, VH kmene viru newcastlovské choroby, viru infekční burzitidy, viru choroby Gumboro, viru drůbežích »· »* ♦♦ « · ♦ * * · • · ·· « « « « · · · · * · < « « · · · · • · · « · · ·« · • 9 · • · · · « · ·· · • · » ··* neštovic, viru laryngotracheitis, drůbežího viru infekční bronchitidy, kmene Winterfield viru nemoci Gumboro, infekční bronchitidy (IB-H120), viru ovčích neštovic, viru dobytčího moru, spor antraxu, salmonely SPP., E. coli, nebo přimíseniny jednoho nebo více z výše uvedených, ať už se vyskytujících přírodně, rekombinantních nebo modifikovaných.

V ještě dalším provedení vynálezu se antigenní složka vybere ze skupiny sestávající ze: spor antraxu, salmonely SPP, E. coli nebo přimíseniny jedné nebo více z výše uvedených, ať už se vyskytujících přírodně, rekombinantních nebo modifikovaných.

V ještě dalším výhodném provedení vynálezu je antigenní složka živý virus a kompozice dále obsahuje neutralizační protilátky proti viru.

Předmětem tohoto vynálezu je dále způsob imunizace subjektu proti nemoci zahrnující kroky: rozpuštění očkovací kompozice v ředidle, aby se vytvořil roztok, kde očkovací kompozice obsahuje alespoň jednu lyofilizovanou antigenní složku a činidlo napomáhající rozpouštění, kde očkovací kompozice je ve formě tvrdé tablety a kde očkovací kompozice poskytuje ochranu proti takové nemoci, a podávání výsledného roztoku subjektu v množství účinném pro imunizaci subjektu proti této nemoci.

Ve výhodném provedení vynálezu se rozpouš£ěcí krok způsobu imunizace dále vyznačuje kompletním rozpuštěním očkovací kompozice.

V ještě dalším výhodném provedení vynálezu dochází ke kompletnímu rozpuštění během rozpouštěcího kroku způsobu imunizace při poměru rozpouštědla ké kompozici mezi 0,5 mL rozpouštědla na 200 mg kompozice a 100 mL rozpouštědla na 400 mg kompozice.

99· •9 -9 9 ·*

9 99 9 9

99 99· 99 9

99 9 9 99 9

9 9 99 99

9 9 9 9

999 9 »

V dalším výhodném provedení vynálezu se rozpouštěcí krok způsobu imunizace dále vyznačuje kompletním rozpuštěním během méně než 80 sekund po kontaktu s ředidlem.

V dalším provedení vynálezu zahrnuje aplikační krok vpíchnutí roztoku subjektu.

V dalším provedení vynálezu zahrnuje aplikační krok sprejové působení aerosolu vytvořeného z roztoku na subjekt.

V ještě dalším provedení vynálezu zahrnuje aplikační krok podávání roztoku subjektu ve formě očních kapek.

V ještě dalším provedení vynálezu zahrnuje aplikační krok podávání roztoku subjeku perorální cestou.

Ve výhodném provedení vynálezu se způsob imunizace aplikuje na subjekt, kterým je ptačí živočich a nemoc se vybere ze skupiny sestávající z newcastlovské choroby, infekční burzitidy, drůbežích neštovic, laryngotracheitis a infekční bronchitidy drůbeže.

V dalším výhodném provedení vynálezu zahrnuje aplikační krok podávání roztoku subjektu in ovo.

Předmětem tohoto vynálezu je také balení obsahující očkovací kompozici, která přinejmenším obsahuje jednu lyofilizovanou antigenní složku a činidlo napomáhající rozpouštění, kde očkovací kompozice je ve formě tvrdé tablety nebo dále obsahuje indikátor přítomnosti antigenní složky.

Ve výhodném provedení vynálezu je balením bublinkové balení.

V dalším výhodném provedení vynálezu je balením sterilní *♦ • ··· injekční stříkačka.

Předmětem tohoto vynálezu je také sterilní injekční stříkačka obsahující zhutněnou očkovací kompozici, kde očkovací kompozice obsahuje alespoň jednu lyofilizovanou antigenní složku a činidlo napomáhající rozpouštění.

V jednom provedení vynálezu je zhutněnou očkovací kompozicí v sterilní injekční stříkačce slisovaná kompozice.

Ve výhodném provedení vynálezu je slisovaná očkovací kompozice v sterilní injekční stříkačce ve formě tvrdé tablety.

Předmětem tohoto vynálezu je dále způsob imunizace subjektu proti nemoci, který zahrnuje přídavek ředidla do sterilní injekční stříkačky obsahující zhutněnou očkovací kompozici obsahující přinejmenším jednu lyofilizovanou antigenní složku a činidlo napomáhající rozpouštění nebo kde zhutněná očkovací kompozice v sterilní stříkačce se dále vyznačuje tím, že je slisovanou kompozicí nebo kde zhutněná očkovací kompozice v sterilní injekční stříkačce je ve formě tvrdé tablety, tak, že se v injekční stříkačce vytvoří roztok a výsledný roztok se aplikuje subjektu.

Roztoky vzniklé rozpuštěním očkovací kompozice předloženého vynálezu lze aplikovat jakýmkoli vhodným způsobem. Způsob imunizace subjektu proti nemoci podle předloženého vynálezu může využít řadu způsobů pro podávání kapalného roztoku vytvořeného z očkovací kompozice. Příklady způsobů podávání jsou intramuskulární injekce, subkutánní injekce, intravenózní injekce, intraperitoneální injekce, oční kapky, cestou pitné vody, aerosolu nebo nosního spreje. Když zvířetem, které se má ošetřit, je pták, může se jednat o čerstvě vylíhnuté mládě (tj. asi jeden den staré po vylíhnutí), mladého jedinec nebo

99 ·♦ 9· 99 9

999» 99« 9 9 9 « 99 9 999« « 999

99 9 9 « 99 «9« 9 «9«

9999 999« «9 ·

99 99 9« 99 9 dospělého pták. Vakcína předloženého vynálezu může být užitečná pro podávání ptákům in ovo, jak se popisuje v U. S. patentu č. 4,458, 630 (Sharma).

Očkovací kompozici předloženého vynálezu vysušené za mrazu (lyofilizované) s předem stanoveným titrem je nutno rozumět jako přípravku složeného nejméně z jedné očkovací složky vysušené za mrazu s předem stanoveným titrem, pomocných látek a volitelně rozličných přídavných látek, které jsou zhutněné nebo slisované do hutné formy.

Výraz „hutný, jak se zde používá, se vztahuje k očkovací kompozici s hustotou větší než 1,0 g na cm³. Obvykle bude hustota očkovací kompozice větší než 1,5 g na cm³. Rozmezí hustoty očkovací kompozice bude typicky od asi 1,5 g/cm³ do 2,5 g/cm³.

Očkovací kompozice může být zhutněná, slisovaná nebo ve formě tvrdé tablety.

Výraz „zhutněný, jak se zde používá, se vztahuje k očkovací kompozici s hustotou větší než 1,0 g/cm³, ale která nemá měřitelnou tvrdost měřenou jednotkami Strong-Cobb (SCU Strong-Cobb Units) a testovanou na tvrdost na testovacím přístroji pro tvrdost tablet ERWEKA, model TBH20.

Výraz „slisovaný, jak se zde používá, se vztahuje k očkovací kompozici s tvrdostí alespoň 2,0 SCU a výraz „tvrdá tableta se vztahuje k očkovací kompozici ve formě tablety nebo jiné hutné formy s tvrdostí alespoň 3,0 SCU.

Zhutněné, slisované a tvrdé tablety očkovací kompozice lze vyrábět na zařízení MANESTY F3 s jedním razníkem 12 mm ploše zkoseným nebo 6 mm konkávními razníky.

« ·· ·<► «· ·· • · A · · · • · ·> · · « · t ··· · · · ♦ · · • · · A · · · · · A A ·· ·· ·· ·* A· · • · »· ·

Očkovací kompozice ve formě tvrdé tablety se vyráběla za tlaku maximálně čtyři tuny. Tvrdost tablet se testovala ná testovacím přístroje tvrdosti ERWEKA model TBH20, jak se popisuje výše a ve všech případech byla tvrdost vyšší než 3,0

SCU.

„Tabletou se rozumí obvyklá klasická tableta obsahující terapeutické činidlo. Nicméně se rozumí, že taková tableta může také zahrnovat jakoukoli zhutněnou nebo slisovanou hutnou formu, jejíž použití je ve farmaceutické praxi méně časté. Například, aby byly vhodné objemné „brikety, vyžadovala by konečná aplikace velký objem materiálu.

Za přípravek, který se „úplně nebo „rychle rozpadá nebo rozpouští v ředidle se považuje takový přípravek, který je schopen se takto chovat v čisté vodě, i když jeho zamýšlené použití není v čisté vodě, ale spíše v roztoku, např. ve fyziologickém roztoku nebo když na to přijde ve vehikulu, které je jiné než voda.

„Úplným rozpuštěním se rozumí to, že žádná rozpustná složka nezůstane nerozpuštěná. „Rychlým rozpadem nebo rozpuštěním se rozumí, že se rozpad nebo rozpuštění zcela ukončí v průběhu přibližně několika málo minut nebo ještě v kratším čase, když se použije velký objem vody pro malý objem slisované, lyofilizované, očkovací kompozice, např. 100 mL vody na 400 mg šumivé tablety. Čas se prodlužuje tam, kde se objemy ředidla srovnatelně snižují. Stejná tableta může potřebovat 70 sekund s objemem vody 10 mL a 80 sekund ve 2 mL vody.

Výše uvedenou dobou rozpadu nebo rozpuštění je čas potřebný pro rozpuštění nebo rozpad tablety, když se vloží do odměřeného množství vody při laboratorní teplotě bez míchání.

• 4 4* 44 44 44 4

4444 444 444

4 44 4 4 4*4 4 «44

44 44 < 44 444 4 44«

4444 444 4 4 4 4

44 44 44 44 4

Výrazem „stabilní se rozumí, že kompozice předloženého vynálezu si zachovají svou (teoreticky možnou) imunizační kapacitu během přípravy a po dobu požadovanou na skladování komerční vakcíny.

Jak bude demonstrováno na následujících příkladech, očkovací kompozice a způsob imunizace podle předloženého vynálezu má řadu výhod, jak zde byly popsány.

Dále se obecně uvádí příklad způsobu předloženého vynálezu pro přípravu očkovací kompozice obsahující 1000 dávek vakcinační složky. Roztok očkovací složky se lyofilizuje na táckách. Vysušený materiál se přemění na prášek. Stanoví se titr homogenně smíchaného vzorku po vysušení za mrazu, přičemž se lyofilizát udržuje pod atmosférou dusíku v dobře uzavřeném kontejneru při -20° C. Je-li stanovený titr lyofilizovaného materiálu 625 dávek na 100 mg, postačuje navážit 160 mg tohoto materiálu na zhutněný očkovací přípravek, aby se dosáhlo přesně požadovaného titru. Materiál se potom smíchá s volitelnými a/nebo funkčními přísadami a přípravek se lisuje nebo tabletuje. Slisované za mrazu vysušené očkovací přípravky lze potom balit jakýmkoli ze způsobů známých odborníkovi v technice a/nebo popsaným zde.

Výraz pomocná látka je široký pojem pro ředidla nebo vehikula, která se používají pro formulaci očkovací kompozice. Pomocné látky mohou zahrnovat: ředidla nebo plniva, pojivá nebo lepidla, činidla napomáhající rozpouštění, maziva, činidla proti přilnavosti, látky podporující kluznost a tečení, barviva, příchutě, sladidla a adsorbenty.

Plniva tablet.jsou konkrétně substance, které tvoří hlavní objem tablety a primárně se chovají jako nosič. Typická plniva tablet zahrnují, ale neomezují se na síran vápenatý, ·· «« »· ·« ** · • · · · · · · · * « • · »* · · ··· · 9 · · • «· · · · · · * » · · 19 * < · · « ·»»» · · · ·· ·· *# #· 99 9 fosforečnan vápenatý, uhličitan vápenatý, škrob, modifikované škroby (karboxymethylový škrob, atd.), mikrokrystalickou celulosu, laktosu, sacharosu, dextrosu, manitol a sorbitol.

Koncentrace plniva tablet se pohybuje od 0 % do 90 % hmotnosti tablety.

Pojivá působí jako „lepidlo, které udržuje prášek pohromadě, aby se vytvořily granule. Pojivá zahrnují, ale neomezují se na přírodní polymery, například škroby, arabskou gumu, tragakant a želatinu nebo syntetické polymery, například PVP a methyl-, ethyl- a hydroxypropylcelulosu.

Koncentrace pojivá se pohybuje od 0 % do 20 kompozice.

% hmotnosti

Činidla napomáhající rozpouštění podporují rozpustnost očkovací kompozice. Typické příklady zahrnují, ale nejsou omezeny na šumivá činidla, desintegrační činidla, povrchově aktivní látky a sulubilizační činidla.

Desintegrační činidla způsobují rozpad slisovaných tablet. Typické příklady zahrnují, ale nejsou omezeny na škrob, mikrokrystalickou celulosu, vyčištěný vlněný škrob, kyselinu alginovou, sodný škrob glykolované guarové gumy, síťovaný polyvinylpyrolidon (PVP), iontovýměnnou pryskyřici a celulosy, například methyl-, kroskarmelosu sodnou, natriumkarboxymethyla hydroxypropylmethylcelulosa.

Koncentrace činidla napomáhajícího rozpouštění se pohybuje od asi 1 % do 95 % hmotnosti kompozice. ·

Maziva snižují tření mezi materiálem, který se má lisovat, a stěnou lisu během stlačování a vytlačování. Většina maziv jsou ·· «V ·« ·* ·· 9 • « · · ··· ··* • · ·· · · · ·* · · · · • ·· ··· * · · » · · ··· ·«·« · * · · «· * «· ·« ·· ·« 99 9 látky nerozpustné ve vodě a zahrnují stearáty (horečnatý/ vápenatý a sodný), kyselinu stearovou, mastek a vosky. Maziva rozpustná ve vodě zahrnují polyethylenglykoly, benzoát sodný, oleát sodný, acetát sodný, natrium-laurylsulfát a magnesiumlaurylsulfát.

Koncentrace maziva se pohybují od asi 0 % do 5 % hmotnosti kompozice.

Barvící činidla se přidávají pro rozeznávání typu očkovacích přípravků, například ve formě tablet, s estetickými a funkčními záměry, například, ale nikoli jako omezení předloženého vynálezu, barviva popsaná v příkladech A až D, které byly převzaty z izraelského patentu č. 46189.

Koncentrace barvících činidel se pohybují v hodnotách < 1 % hmotnosti přípravku.

Očkovací kompozice předloženého vynálezu lze tabletovat způsoby známými odborníkovi v technice, například jak se popisují v monografii Pharmaceutical Dosage Forms. Tablets, druhé vydání, 1989, svazek 1, 2, 3, redakce: H. A. Lieberman,

L. Lachman, J. B. Schwartz.

Ve výhodném provedení se kompozice předloženého vynálezu připravuje jako tvrdá tableta obsahující šumivé činidlo jako látku napomáhající rozpouštění. Jak je zřejmé odborníkům v technice, šumivá tableta musí obsahovat alkalickou složku a kyselou složku, například šumivou_; dvojici, tak že při rozpouštění probíhají příslušné reakce za uvolňování oxidu uhličitého a kyseliny uhličité. Vhodné šumivé komponenty zahrnují skupinu uhličitanových alkalických sloučenin a anorganické nebo organické kyselé sloučeniny.

·· ·· ·* ·· ·· · ···« · * · · · · • · ·· · · ··· · · · · • ·· ··· · · ··· · ···· • · · · ···· · · · ·· ·· ·· ·· ·· ·

Mezi skupinou uhličitanových alkalických sloučenin jsou výhodná šumivá činidla pro použití v kompozicích předloženého vynálezu uhličitan sodný, kyselý uhličitan sodný, uhličitan glycinu, uhličitan draselný, kyselý uhličitan draselný, kalium -dihydrogencitrát a uhličitan vápenatý. Nej výhodnější alkalickou sloučeninou je kyselý uhličitan sodný.

Výhodné kyselé sloučeniny pro použití v kompozicích předloženého vynálezu jsou kyselina citrónová, kyselina adipová, kyselina vinná, kyselina maleinová, kyselina borová, kyselina benzoová, kyselina hydroxybenzoová, kyselina methoxybenzoová, kyselina mandlová, kyselina malonová, kyselina mléčná, kyselina pyrohroznová, kyselina glutarová, kyselina asparagová, kyselina chlorovodíková, kyselina šťavelová, kyselina salicylová, kyselina sukcinová a kyselina octová.

Nejvýhodnější kyselou šumivou složkou je kyselina citrónová.

Navíc k výše popsaným alkalickým a kyselým šumivým přísadám tablety může tabletová kompozice předloženého vynálezu také obsahovat další obvykle používané pomocné látky.

Tabletové kompozice předloženého vynálezu se získávají s použitím v technice známých tabletovacích technik. Obecně lze tabletovací postupy použité pro předložený vynález sumarizovat takto: složky se prosejí, promíchají a přímo lisují do tablet požadované hmotnosti, velikosti, tvrdosti na tabletovacím lisu MANESTY F3.

Šumivé tabletové kompozice předloženého vynálezu lze rozpouštět v obyčejné vodě nebo v prostém fyziologickém roztoku.

Antigenní očkovací složky jsou takové složky, které specificky spouštějí imunitní odpověď proti antigenu nebo • · · · ··· · · · • · · · · ···· · · · · • ·· ··· · · ··· · »·· • · · · · · · · · · · antigenům, ze kterých se očkovací složky odvodily. Původ takovýchto složek může být v jednom viru nebo mikroorganismu, včetně rekombinantních, například antigenní lipopolysacharid a antigenní protein nebo například dva rozličné antigenní proteiny. Mohou také obsahovat antigenní části proteinu nebo polysacharidu. Obecně se o nich mluví jako o subjednotkových složkách. V některých případech očkovací složka obsahuje celý virus nebo mikroorganismus, včetně rekombinantních. Očkovací složkou může být například bakterin nebo živá zesláblá bakterie nebo vir, inaktivovaná bakterie nebo vir nebo mrtvá bakterie nebo vir, včetně rekombinantních a jinak modifikovaných. Výhodně je očkovací složkou živá (modifikovaná nevirulentní nebo částečně virulentní, včetně rekombinované) bakterie nebo vir. Příklady zahrnují, ale nejsou omezeny na bakterii salmonely, virus newcastelské choroby, virus infekční burzitidy (choroby Gumboro), virus infekční bronchitidy, virus pseudovztekliny nebo vakcínu antraxové spory.

Kombinované vakcíny jsou vakcíny obsahující rozličné očkovací složky. Kombinované vakcíny mohou také obsahovat antigenní složky odvozené ze dvou nebo více rozličných virů nebo mikroorganismů.

Možné jsou také komplexnější kombinace. Jako kombinované vakcíny se tudíž označují vakcíny jednoho z výše popsaných typů, jakož i jejich směsi. Mohou také obsahovat jakoukoli ze známých pomocných látek.

Výrazem „balení se rozumí jakékoli balení užitečné pro skladování stabilního, slisovaného, očkovacího přípravku.

Balením může být například, ale ne jako omezení, skleněný nebo plastikový (např. polyethylen s vysokou hustotou) kontejner obecně užívaný pro balení a skladování tablet. Pro • · · • ···

Další formou balení očkovacích přípravků, přípravu vakcíny připravené k použití bude postačovat přidání stabilního, slisovaného, za mrazu vysušeného, očkovacího přípravku do ředidla, aby se přípravek homogenně rozpustil.

slisovaných, za mrazu vysušených, které jsou předmětem vynálezu, je bublinkové balení. Jedním příkladem bublinkového balení jsou plastikové vrstvy s řadami prohlubní (tácky), které obsahují přípravky a jsou za tepla zalepeny hliníkovým fóliovým víčkem výhodně pod suchým dusíkem. Dalším sortimentem bublinkového balení užitečného pro citlivé výrobky jsou tak zvané bublinky hliník/hliník, kde jak tácek tak víčko jsou z hliníku nebo hliníku laminovaného rozličnými plasty. Tím se lze vyhnout použití drahých a prostorově náročných skleněných ampulí, které se obvykle používají pro balení a uchovávání vakcín, pro které případný uživatel obecně nemá využití.

Předložený vynález umožňuje přidat jednu nebo více slisovaných, za mrazu vysušených, očkovacích kompozic přímo z bublinkového obalu do například kbelíku vody, aby se použila v pitné vodě nebo v aerosolovém sprejovém systému pro zajištění úspěšné vakcinace. Obvykle se to provádí na místě, například v drůbežárně. Veterinární vakcinaci lze také provádět rozprašováním, třením do kloaky, vpichem, sprejováním celého těla nebo jako oční kapky. Očkovací roztok získaný podobným způsobem by se mohl alternativně použít pro imunizaci embryí in ovo, jak se popisuje v U. S. patentech č. 5,397, 569 a 5,871,748.

Je zřejmé, ž-e jakékoli zařízení, které lze použít pro uchování slisovaných, pevných látek, lez použít v tomto vynálezu. Ředidlem může být pouze voda nebo na druhé straně komplexní směs tlumivých roztoků a adjuvancií. Závisí to hlavně na tom, které přísady se přidaly do roztoku před lyofilizací nebo k přípravku před lisováním.

Výtěžkem známých způsobů vysoušení za mrazu je koláč obsahující očkovací složku nebo složky v lahvičkách. Jak bylo uvedeno, tento způsob je náročný na prostor a čas. Jestliže se antigenní očkovací složka nebo složky suší za mrazu na táccích pro roztok, potom se během procesu využije celý povrch studených desek v zařízení na vysoušení za mrazu. Navíc lze materiál snadno získat zpátky, pokud by došlo ke kolapsu nebo když na to přijde, pokud se vyskytne jakýkoli jiný problém při procesu sušení za mrazu. To není možné v případě, jsou-li materiálem předem naplněné skleněné nádobky před lyofilizací. Jelikož se nepoužívají prostorově náročné nádobky v této části procesu, lze navíc chladné destičky zaplnit ve vysoké hustotě. Tím podstatně vzrůstá kapacita vysoušecího zařízení za mrazu a je prakticky omezena pouze kapacitou kondenzátoru. V důsledku toho by bylo možné použít mnohem menší vysoušeči zařízení za mrazu pro předložený vynález, aby se dosáhlo stejného výsledku, jako když se použijí nádobky v mnohem větším vysoušecím zařízení.

Ve výhodném provedení se proto očkovací kompozice lisuje ze sterilního, lyofilizovaného, antigenního materiálu, který se vysušil na táccích a potom rozmělnil na prášek a přimísily se k němu přísady napomáhající tabletování a konečnému rozpouštění. Sterilní očkovací kompozice se potom balí pod suchým plynným dusíkem do sterilních bublinkových plátkových obalů s vysokou ochrannou vrstvou proti vlhkosti a plynu.

V jednom výhodném provedení je lyofilizovaným materiálem živý zeslabený virus,

V dalším výhodném provedení přímísenina obsahující kombinaci dříve vysušených virových složek se lisuje na jediný přípravek společně s přísadami napomáhajícími rozpouštění a volitelně • · · · ··· ··· • · · * · ···· · · · · • · * · · · ·· ··· · ···· ···· · · · · · · · •· ·· ·· ·· · · · s těmi adjuvanciemi, které se požadují pro očkování.

Požaduje-li se kombinovaná vakcína, jsou výhody nabízené předloženým vynálezem ještě zřejmější. Postačuje prosté přidání lyofilizátu s předem stanoveným titrem z každého typu antigenní očkovací složky do přípravku před lisováním, aby se získala kombinovaná vakcína s vysoce přesnou dávkou každé složky.

Předložený vynález současně nabízí řešení problému velké skladovací kapacity potřebné pro uchovávání všech možných variant, například tří nebo čtyřsložkové vakcíny.

Místo smísení rozličných složek před vysoušením za mrazu, jak se může vyžadovat pro vysoušení kombinovaných vakcín za mrazu, se každá složka suší za mrazu odděleně. Rozličné složky lze tudíž uchovávat odděleně. Když je potřebné, každou kombinaci lze snadno připravit smísením příslušného množství lyofilizovaného materiálu každé požadované složky do jednoho přípravku, jak se zde popsalo a potom popsaným lisováním a balením směsi.

Umožňuje to například v případě čtyř složkové kombinované vakcíny uchovávat pouze čtyři kontejnery, z nichž každý obsahuje lyofilizovaný materiál jednoho specifického typu vakcíny, aby se podle potřeby mohl složit jakýkoliv jednotlivý nebo kombinovaný očkovací přípravek. Dřívější způsoby by vyžadovaly patnáct- rozličných kontejnerů, každý obsahující prefabrikovanou složku nebo směs.

V ještě dalším výhodném provedení zahrnuje kontejner vakcíny sterilní bublinkové plátky obsahující pevné formy, například sterilní tablety lisované z lyofilizovaného materiálu jedné nebo více očkovacích složek, ke kterým se přimíchalo sterilní činidlo napomáhající rozpouštění v šumivém páru (např. kyselý uhličitan sodný a kyselina citrónová), sterilní pojivo (např. polyvinylpyrrolidon) a sterilní mazivo (např. natrium-stearylfumarát, stearát hořečnatý). Tyto přípravky jednotlivých nebo násobných složek lze potom použít pro snadnou přípravu přesného očkovacího roztoku se známým titrem in šitu. Výše jmenovaná činidla napomáhající rozpouštění, pojivá a maziva slouží jako příklady a nesmí se chápat jako omezení pro očkovací kompozici předloženého vynálezu.

Očkovací kompozice a způsob imunizace zahrnuje v ještě dalším provedení očkovací kompozici se složkami odvozenými ze dvou nebo více antigenních složek. Vakcína založená na složkách z násobných antigenních složek má výhodu v tom, že jedno podání takové vakcíny postačuje k zavedení ochrany proti násobným by být zřejmé, že pro každý vir nebo lze zahrnout každou z několika nemocím. Mělo mikroorganismus rozličných antigenních očkovacích složek.

V ještě dalším provedení lze antigenní složky pro každou vakcínu smíchat v přesných poměrech potřebných pro vytvoření komplexu požadovaného pro imunizaci in ovo, například živé vakcíny Markovy, nemoci, NDV a Gumboro vakcín. Multikomponentní přípravky vakcíny in ovo jsou proto také možné. Dávkovou formu pro takovou kombinaci lze získat podle předloženého vynálezu lisováním směsi antigenních složek pro každou nemoc vysušených za mrazu a požadovaných protilátek spolu s pomocnými činidly pro tabletování. Takový přípravek by potom mohl být použit pro dosažení požadovaného virového imunizačního faktorového komplexu in šitu pomocí rozpuštění přípravku v požadovaném vehikulu a za vyhrazených podmínek přímo před očkováním in ovo.

Kontejner vakcíny může obvykle obsahovat mezi jednou až deseti tisíci dávkami vakcíny nebo více. Kontejnery na jedinou dávku jsou běžné při individuální vakcinaci, jak pro humánní, • · · · · · · • ··· · ···· • ·· · · · ·· · * · · · · ·· · • · ·· · · · · • · · • ··· tak pro veterinární použití.

Vakcína proti viru lidské dětské obrny, vakcína lidského živého za mrazu vysušeného břišního tyfu nebo vakcína psího parvoviru se typicky formulují jako vakcíny pro jednotlivé dávkování. Mělo by být zřejmé, že pro jednu dávku vakcíny jsou zcela aplikovatelné podobné formulační postupy jako se popsaly pro multidávkové vakcíny.

Pro vakcinaci velkých drůbežáren nově vylíhnutých kuřat je obecnou praxí používat kontejner s desetitisíci dávkami vakcíny pro hromadnou vakcinaci proti viru infekční bronchitidy nebo NDV. Pro vakcinaci velkých domácích zvířat, jako je dobytek, například proti viru hovězí rinotracheitidy nebo viru parainfluezy se obecně používají kontejnery s deseti dávkami.

Jednou z výhod očkovacích kompozic připravených podle předloženého vynálezu je, že činidla napomáhající rozpouštění, která mohou být neslučitelná s roztokem vysoušeným za mrazu, lze přidat po lyofilizaci. Tato činidla urychlují proceduru podávání. Neočekávaně jsme zjistili, že použití kyseliny citrónové jako části šumivého páru, o které se předpokládalo, že bude škodlivá pro živé oslabené virové přípravky, neměla významný účinek na titry.

Mělo by být také zřejmé, že neporušenost ochrany kontejneru proti vlhkosti má významný účinek na formulace tohoto typu a mělo by být učiněno vše, aby se ověřilo, že se obalem vytvořila účinná ochrana před vlhkostí. Obzvláště to platí při používání bublinkového plátkového balení a kde vybraná přísada se může destabilizovat za vlhka, jak je tomu v případě kyseliny citrónové.

Předmětem předloženého vynálezu je také způsob imunizace subjektu proti nemoci zahrnující kroky: rozpuštění očkovací • · • ·<

kompozice v ředidle, aby se vytvořil roztok, kde očkovací kompozice obsahuje alespoň jednu lyofilizovanou antigenní složku a činidlo napomáhající rozpouštění, kde očkovací kompozice je ve formě tvrdé tablety a kde očkovací kompozice poskytuje ochranu proti takové nemoci a podávání Výsledného roztoku subjektu v účinném množství, aby se subjekt imunizoval proti nemoci.

Lyofilizáty mohou jinak obsahovat antigenní očkovací složky,

které jsou organismů.	odvozené od	dvou nebo	více	virů nebo mikro-
Předmětem	předloženého	vynálezu je	navíc	očkovací kompozice,
kde očkovací kompozice	a ředidlo	j sou	společně obsaženy

v balení. Takové provedení vynálezu umožňuje způsob imunizace, kdy rozpouštěcí krok pro vytvoření kapalné vakcíny pro podávání se může provádět in šitu v terénu.

Mělo by se rozumět, že balíček vakcíny nebo balení obsahující slisovanou, za mrazu vysušenou, stabilní očkovací kompozici může představovat jakékoli užitečné balení vakcíny. Balení vakcíny zahrnuje v jednoduché formě kontejner s vakcínou obsahující očkovací složky, zabalený společně s instrukcemi v krabici. V komplexnější formě balení vakcíny, by mohl kontejner vakcíny dále obsahovat ředidlo a injekční stříkačku. V dalším provedení se slisovaná lyofilizovaná vakcína balí za sterilních podmínek do zalepených injekčních stříkaček, kde rozpuštění vakcíny se může provést uvnitř sterilní injekční stříkačky. Tímto způsobem velikost šarže předem naplněných injekčních stříkaček není závislá na prostoru, který zaujímají stříkačky v lyofilizéru.

Předmětem tohoto vynálezu je dále sterilní injekční stříkačka obsahující stabilní, slisovanou kompozici, kde slisovaná • 9 9

9 99 kompozice obsahuje činidlo napomáhající rozpouštění.

Předmětem dalšího provedení vynálezu je sterilní injekční stříkačka obsahující stabilní, slisovanou kompozici s činidlem napomáhajícím rozpouštění, kde slisovaná kompozice je ve formě tvrdé tablety.

Předmětem výhodného provedení vynálezu je výše popsaná sterilní injekční stříkačka obsahující tvrdou tabletu, kde se tvrdá tableta úplně a rychle rozpustí v ředidle.

V dalším výhodném provedení je předmětem vynálezu výše popsaná sterilní injekční stříkačka obsahující tvrdou tabletu, kde se slisovaná kompozice vybere ze skupiny sestávající z hormonu, léku nebo vitamínu, které lze podávat injekční cestou.

Předmětem dalšího provedení vynálezu je způsob podávání roztoku vhodného pro injekci subjektu, který zahrnuje přídavek ředidla do kterékoli výše popsané injekční stříkačky, aby se v injekční stříkačce vytvořil roztok vhodný pro injekci a podáni výsledného roztoku subjektu.

Předmětem tohoto vynálezu je také balení obsahující stabilní, slisovanou očkovací kompozici obsahující alespoň jednu lyofilizovanou antigenní složku a činidlo napomáhající rozpouštění, kde balení zahrnuje ampulku.

Ve výhodném provedení vynálezu je ampulka evakuovaná.

V dalším výhodném provedení je ampulka skleněná.

V dalším výhodném provedení vynálezu je balením sáček.

·♦ ·· ·· ·* ·· · • ♦ · ♦ · · · ··· * · · · · · · · · · · · · • ·· ··· · · ··· · ·»· • · · · ···· ·· ' • · · · · · · · ·· ·

Předmětem vynálezu je také způsob imunizace subjektu proti nemoci zahrnující kroky rozpuštění očkovací kompozice, která poskytuje ochranu proti takové nemoci, v ředidle, aby se vytvořil roztok, a podání výsledného roztoku subjektu v účinném množství, aby se subjekt imunizoval proti nemoci, přičemž subjektem je savec.

Ve výhodném provedení vynálezu se savec vybere ze skupiny sestávající z lidského subjektu, hovězího subjektu a ovčího subjektu.

Ve výhodném provedení vynálezu je antigenní složkou očkovací kompozice toxoid tetanu.

Ve výhodném provedení vynálezu je savcem lidský subjekt a lyofilizovanou antigenní složkou očkovací kompozice je toxoid tetanu.

Předmětem vynálezu kompozice obsahující složku a činidlo je dále stabilní, slisovaná, očkovací alespoň jednu lyofilizovanou antigenní napomáhající rozpouštění a druhou lyofilizovanou složku, kde druhá lyofilizovaná složka obsahuje neutralizační protilátky proti lyofilizované antigenní složce.

Předmětem výhodného provedení vynálezu je stabilní, slisovaná očkovací kompozice s druhou lyofilizovanou složkou obsahující neutralizační protilátky, kde antigenní složkou je živý virus vybraný ze skupiny sestávající z: viru newcastelské choroby, viru infekční burzitidy, viru drůbežích neštovic, viru laryngotracheitidy, drůbežího viru infekční bronchitidy, viru ovčích neštovic, viru dobytčího moru nebo přímíseniny jednoho nebo více z výše uvedených, ať už se vyskytujících přírodně, rekombinantních nebo modifikovaných.

• · · · « · · ··· • · ·· · 9 999 9 999 • ·· 999 99 999 9 999 • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 ·· ·« ·« φ» φ

Předmětem dalšího provedení vynálezu je stabilní, slisovaná, očkovací kompizice s druhou lyofilizovanou složkou obsahující neutralizační protilátky produkovaná procesem zahrnujícím kroky (a) lyofilizaci přinejmenším jedné antigenní složky, (b) lyofilizaci neutralizačních protilátek proti antigenní složce odděleně od antigenní složky, (c) určení potence každé z lyofilizované antigenní složky a lyofílizovaných neutralizačních protilátek, (d) smíšení lyofilizované antigenní složky a lyofílizovaných neutralizačních protilátek v poměru stanoveném na základě změřených potencí a (e) slisování směsi lyofilizované antigenní složky, lyofílizovaných neutralizačních protilátek a činidla napomáhajícího rozpouštění, aby se vytvořila stabilní, slisovaná, očkovací kompozice.

Přemětem ještě dalšího provedení vynálezu je způsob výroby stabilní, slisované, očkovací kompozice in ovo obsahující kroky (a) lyofilizaci přinejmenším jedné antigenní složky, (b) lyofilizaci neutralizačních protilátek proti antigenní složce odděleně od antigenní složky, (c) určení potence každé z lyofilizované antigenní složky a lyofílizovaných neutralizačních protilátek, (d) smíšení lyofilizované antigenní složky a lyofílizovaných neutralizačních protilátek v poměru stanoveném na základě změřených potencí a (e) slisování směsi lyofilizované antigenní složky, lyofílizovaných neutralizačních protilátek a činidla napomáhajícího rozpouštění, aby se vytvořila stabilní, slisovaná, očkovací kompozice.

Předmětem výhodného provedení vynálezu je výše uvedený způsob přípravy stabilní, slisované, očkovací kompozice in ovo, kde antigenní složkou je živý virus vybraný ze skupiny sestávající z: viru newcastelské choroby, viru infekční burzitidy, viru drůbežích neštovic, viru laryngotracheitis, infekční bronchitidy, viru Markovy choroby, drůbežího viru kokcidiózy nebo přímíseniny jednoho nebo více z výše uvedených, ať už se ·* ·* ·· ·« ·· · · · · · · · · · 4 * * · · · · · · · · « · · • ·· ··· ·· · · · · ·»· • · · · ···· · · t • · · · · · ·« · · · vyskytujících přírodně, rekombinantních nebo modifikovaných.

Předmětem dalšího provedení vynálezu je způsob imunizace subjektu in ovo proti nemoci zahrnující kroky (a) rozpuštění stabilní, slisované, očkovací kompozice poskytující ochranu proti nemoci, která obsahuje druhou lyofilizovanou složku obsahující neutralizační protilátky, v rozpouštědle, aby se vytvořil roztok a (b) podání výsledného roztoku subjektu in ovo v množství účinném pro imunizaci subjektu proti této nemoci bez nepříznivé reakce.

Ve výhodném provedení výše uvedeného způsobu imunizace subjektu in ovo jsou subjektem ptáci a nemoc se vybere ze skupiny sestávající z newcastelské choroby, infekční burzitidy, drůbežích neštovic, laryngotracheitidy, viru Markovy choroby a drůbeží infekční bronchitidy.

Následující příklady ilustrují přípravu a funkčnost očkovací kompozice předloženého vynálezu, když se použije pro imunizaci subjektu proti rozličným infekčním nemocem. Předkládá se také vyhodnocování stability s analýzami titrů slisované, za mrazu vysušené, tabletové formy pro rozličné očkovací přípravky.

Příklady 12 až 14 se předkládají pro přípravu humánní a zvířecí očkovací kompozice toxoidu tetanu podle předloženého vynálezu.

Příklady se předkládají pro další ilustraci a vysvětlení předloženého vynálezu a neměly by se v žádném ohledu chápat jako omezení. Není-li uvedeno něco jiného, všechny části a procenta v příkladech a jinde ve specifikaci a patentových nárocích, se týkají hmotnosti. Teploty se uvádějí ve stupních Celsia.

·· ·· ·· ·« <« · ···· ♦·· ·*· • « ·· · · ··· · < · · • ·· · · . · * · . . · • · · · ···· ·· « ·* ·· ·· ·· ·· »

Příklady provedení vynálezu

PŘÍKLAD 1

1.1 Příprava tablet obsahujících živý oslabený VH kmen viru newcastelské choroby (dále NDV-VH)

Plodná vajíčka bez specifického patogenu (SPF - specificpathogen-free) se naočkovala NDV a inkubovala známými způsoby pro šíření NDV virů ve vejcích.

Alantoická amiotická kapalina (AAF) se sebrala a čistila pomocí dvacetiminutového odstřeďování při 4000 g.

Lyofilizace v.nádobkách se provedla přesně podle známých, standardních postupů.

Tablety se připravily následujícím způsobem:

k 13,2 g lyofilizátu převedeného na prášek se přidalo:

g kyselého uhličitanu sodného 42 g bezvodé kyseliny citrónové

4,2 g polyvinylpyrrolidonu K-30 0,3 g stearátu hořečnatého

Potom se složky smíchaly a razily se tablety, každá s hmotností 400 mg.

Každá výsledná, takto připravená tableta obsahovala 44 mg lyofilizátu.

1.2 Analýza tablet

Titr SPF vajíček náhodně odebraných vzorků tablet se • 9

9« • · 9 • 9 99 • 9 9 « 9 9

9 9 «

9 • •99 9 9

«9 « « 9 9

9 9 «

99999 ♦ 9 «

9 vyhodnotil a porovnal s nastaveným množstvím lyofilizátu v ampulkách.

NDV-VH/tableta	109'7 EID50 *
NDV-VH/ampulka	109'6 EIDso

* Infekční dávka vajíčka 50 jednotek

Když se tableta přidala do 100 mL vody, rozpuštění se ukončilo v čase kratším než jedna minuta, tj. volným okem nebyly viditelné žádné stopy pevné látky.

Když se tableta přidala do 10 mL vody, rozpuštění se ukončilo v sedmdesáti sekundách.

Když se tableta přidala do 2 mL vody, rozpuštění se ukončilo po osmdesáti sekundách.

V 1 mL vody, ačkoli se dosáhlo úplného rozpuštění, zjistilo se, že šumivá povaha této tablety se neuplatnila při celkové rozpustnosti, která trvala přibližně čtyři minuty.

1.3 Balení a stabilita

Tablety se balily do polyvinylchloridových (PVC) bublinkových plátků a stabilita se testovala při 37° C a zjistilo se, že jsou relativně stabilní po dobu 5, 7 a 9 dnů.

Dny při 37° C	0	5	7	9
NDV-VH/tableta	10M	109'2	109'3	109'4

Skladování při 4° C způsobilo zjevnou změnu v titru a barvě tablet po devíti měsících.

• · * v • · ·· ♦ « « « • · · · *· ·<

·* ·· · · • · ··· • « · · 9 • · · · ·· 99 ₉ • · · • · · ·

9 9 999·

9 9

9

Měsíce při 4° C	0	3	9
NDV-VH/tableta	10M	10^,1	l09ř3
NDV-VH/ampulka	109'6	109'6	109'3

Titry se udávají v jednotkách EID₅₀ na tabletu nebo ampulku vypočtené pro stejné množství aktivního materiálu.

1.4 Test potence tabletovaného NDV-VH v kuřatech

Skupina	NDV-VH	EIDso/dávku	HI 3 týdny P° vakcinaci	Mortalita po imunologickém testu
A	tableta 1	106'8	9,3	2/18
B	tableta 2	IQ6'3	9,2	1/20
C	aitípulka	106'6	9,2	2/19
D	bez vakcinace	— —	1,2	10/10

HI = jednotky inhibice hemaglutinace

A: NDV-VH tableta se rozpustila ve 20 mL sterilní destilované vody a na vakcinaci každého z osmnácti kuřat (4 týdny staré, držené v izolátorech) se použilo 0,02 mL jako očních kapek.

B: Další skupina kuřat se podobně vakcinovala s tabletou VH vakcíny rozpuštěnou ve 40 mL sterilní destilované vody.

C: NDV-VH v ampulce se rozpustila v sterilní destilované vodě, aby poskytla stejnou koncentraci viru jako v případě A.

D; Kontrolní skupina, která nebyla vakcinovaná.

Tři týdny po vakcinaci se ptákům odebrala krev pro titraci protilátek pomocí testu inhibice hemaglutinace (HI) a všechny skupiny se podrobily imunologickému testu s viscerotropní • ·· velogenickou NDV podanou intramuskulárně (i. m.) . Injekce se podávaly při 10⁵'³ EID₅₀/ptáka v Kimron Veterinary Institute (Izraelská veterinární služba).

Výsledky testů naznačují, že se poskytla dobrá ochrana kuřat pomocí všech testovaných očkovacích přípravků.

PŘÍKLAD 2

2.1 Příprava tablet obsahujících NDV-VH

Plodná, SPF vajíčka se naočkovala NDV a inkubovala známými způsoby pro šíření NDV virů ve vejcích.

AAF se sebrala a čistila pomocí dvacetiminutového odstřeďování při 4000 g. Lyofilizace se provedla přesně podle známých standardních postupů.

Virus NDV-VH se lyofilizoval na tácu. Vysušený prášek se zatavil za nízké vlhkosti do sterilního dvojitého polypropylenového sáčku a udržoval se při -20° C. Vyrobily se šumivé tablety obsahující zvyšující se obsahy suchého prášku. Tablety se připravily podle postupu popsaného v příkladu 1.

Kompozice	Hmotnost (g)	Hmotnost (g)	Hmotnost (g)	Hmotnost (g)
VH vysušený lyofilizací na tácku	1,25 (2,7 %)	2,5 (5,3 %)	5, 0 (10,1 %)	10, 0 (20,3 %)
Kyselý uhličitan sodný	25, 0	25, 0	25, 0	22,0
Bezvodá kyselina citrónová	17, 5	17, 5	17,5	15,4
Polyvinylpyrrolidon K-30	1,75	1,75	1,75	1,75
Stearát hořečnatý	0, 12	0,12	0,12	0,12
Hmotnost tablety	0,5	0, 45	0,38	0,36

• ·

2.2 Analýza tablet

Titry NDV-VH (EID₅₀) v tabletách se získaly titracemi v SPF vaj íčkách.

Procento lyofilizátu/tableta	2,7	5,3	10, 5	20, 3
NDV-VH/tableta	2 Q8- θθ	Q8,25	108'75	1O9'00

Získala se uspokojující lineární závislost mezi koncentracemi aktivní látky a.titry viru.

Když se jedna tableta přidala do 100 mL vody, rozpuštění se ukončilo v čase menším než jedna minuta, t j. volným okem nebyly viditelné žádné stopy pevné látky.

2.3 Balení a stabilita

Tablety se umístily do injekčních stříkaček, které se zabalily do laminátových hliníkových sáčků. Roztok schopný podávání pomocí injekce se připravil nasátím ředidla pro injekci do injekční stříkačky, čímž došlo k úplnému rozpuštění tablety. Výsledné roztoky vhodné pro injekční podávání se použily buď přímo pro individuální vakcinaci nebo alternativně pro hromadnou vakcinaci po dalším zředění ve větším kontejneru. Potom se použila automatická injekční stříkačka.

PŘÍKLAD 3

3.1 Příprava tablet zahrnujících NDV-VH obsahující protilátky proti viru newcastelské choroby (NDA) pro vakcinaci in ovo

Plodná, SPF vajíčka se naočkovala ŇDV a inkubovala známými způsoby pro šíření NDV virů ve vejcích.

• · • ·

AAF se sebrala a odstřeďovala dvacet minut při 4000 g. Lyofilizace se provedla přesně podle známých, standardních postupů a lyofilizovaný materiál se titroval. Stanovila se požadovaná množství NDV a NDA.

Tablety se připravily následujícím způsobem:

k 7,0 g lyofilizátu převedeného na prášek se přidalo:

g kyselého uhličitanu sodného

9,1 g bezvodé kyseliny citrónové 0,9 g polyvinylpyrrolidonu K-30 0,07 g stearátu hořečnatého

Potom se složky smíchaly a razily se tablety, každá s hmotností 500 mg. Každá takto připravená tableta obsahovala 115 mg lyofilizovaného virového přípravku.

3.2 Analýza tablet

Když se jedna tableta přidala do 100 mL vody, rozpuštění se ukončilo během 2,5 minuty, tj. volným okem nebyly viditelné žádné stopy pevné látky.

3.3 Balení i

Tablety se balily do PVC bublinkových obalů.

3.4 Test potence tabletovaného NDV-VH s NDA in ovo

In ovo vakcinace komerčních kuřat na grilování s NDV-VH + NDA. Provedl se imunologický test kuřat vakcinovaných in ovo ve druhém a čtvrtém týdnu po vylíhnutí. Embrya byla injektována na komerční farmě pomocí zařízení Inoveoject (Embrex, USA) v osmnáctém dnu inkubace. Tableta se rozpustila ve 200 mL ředidla Markovy vakcíny a do každého vajíčka se vpíchlo 0,05 • · · · ··· · · · • · · · · ···· · · · · ♦ * · ··· ·· ··· ····« ···· · · · · ·· · • · · · · · ·· ·· · mL. Jak vakcinovaná tak nevakcinovaná kuřata se držela v izolátorech, aby nedošlo k nespecifikované kontaminaci viry NDV.

	HI 2 týdny po vylíhnutí	% mortality po 2 týdnech imunologického testu	HI 4 týdny po vylíhnutí	% mortality po 4 týdnech imunologického testu
vakcinované	5,7	40	4,4	10
nevakcinované	3,4	53	2,5	80

Druhý a čtvrtý týden se ptákům odebrala krev pro detekci protilátek pomocí HI testu a obě skupiny se podrobily imunologickému testu s viscerotropní velogenickou NDV podanou i. m. Injekce se podávaly při 10⁵'³ EIDso/ptáka v Kimron Veterinary Institute (Izraelská veterinární služba) . Výsledky naznačují, že dochází k dobré ochraně kuřat ve čtvrtém týdnu po vylíhnutí.

PŘÍKLAD 4

4.1 Příprava tablet obsahujících živý oslabený virus nemoci Gumboro (dále „MB)

SPF vajíčka se naočkovala virem nemoci Gumboro (MB) a inkubovala známými způsoby pro šíření virů ve vejcích.

Embrya a choríoalantonické membrány se sebraly a virus se extrahoval pomocí homogenizace.

Lyofilizace se provedla přesně podle známých, standardních postupů.

Tablety se připravily následujícím způsobem:

k 10,0 g lyofilizátu převedeného na prášek se přidalo:

• · · · • · · · · * · · · · · · · « · · ···· • · · · · · · · « · * • · ·· ·· · · ·· ·

22,4 g kyselého uhličitanu sodného

15.7 g bezvodé kyseliny citrónové

1.7 g polyvinylpyrrolidonu Κ-3Ό 0,1 g stearátu horečnatého

Potom se složky smíchaly a razily se tablety, každá s hmotností 350 mg.

Každá takto připravená tableta obsahovala 70 mg lyofilizátu.

4.2 Analýza tablet

Titr náhodně odebraných vzorků tablet se vyhodnotil jako 10⁵'⁶ EID₅₀/tabletu.

(Pro očkovací dávku se uvažuje 10²'⁵ EID50) ·

Když se tableta přidala do 100 mL vody, rozpuštění se ukončilo v čase kratším než jedna minuta, tj. volným okem nebyly viditelné žádné stopy pevné látky.

Titry viru v šumivých tabletách a ampulkách:

MB/tablety	10b'6 EID50
MB/ampulky *	10b'b EID50

* Nastaveno na stejné množství imunizační látky

4.3 Balení a stabilita

Tablety se balily do PVC bublinkových plátků a stabilita se testovala při 37° C.

Dny při 37° C	0	5
MB	10b'6	104'9

• ·

PŘÍKLAD 5

5.1 Příprava šumivých tablet obsahujících živý očkovací virus drůbežích neštovic

SPF vajíčka se naočkovala virem nemoci drůbežích neštovic a inkubovala se známými způsoby pro šíření virů ve vejcích.

Embrya a chorioalantonické membrány se sebraly a virus se extrahoval pomocí homogenizace.

Lyofilizace se provedla přesně podle známých, standardních postupů.

Tablety o hmotnosti 700 mg se připravily v podstatě stejným způsobem, jak se popisuje v příkladu 1.

Každá tableta obsahovala 140 mg lyofilizátu.

5.2 Analýza tablet

Titr každé tablety se vyhodnotil v SPF vejcích a byl 10⁶'²⁵ EIDso/tabletu. Když se tableta přidala do 100 mL vody, rozpuštění se ukončilo ve dvou minutách, tj. volným okem nebyly viditelné žádné stopy pevné látky.

PŘÍKLAD 6

6.1 Příprava šumivých tablet obsahujících živý virus laryngotracheitidy (drůbeží)

SPF vajíčka se naočkovala očkovacím virem laryngotracheitidy a inkubovala se známými způsoby pro šíření virů ve vejcích. Embrya a chorioalantonické membrány se sebraly a virus se « · • · • · · • · · · · ···· ·

• · ·· · · · · · · · extrahoval pomocí homogenizace.

Lyofilizace se provedla přesně podle známých, standardních postupů. Tablety o hmotnosti 700 mg se připravily v podstatě stejným způsobem, jak se popisuje v příkladu 1.

Každá tableta obsahovala 140 mg lyofilizátu. Titr každé tablety se vyhodnotil v SPF vejcích a byl 10⁵'⁵³ EID50.

PŘÍKLAD 7

7.1 Příprava šumivých tablet obsahujících živý virus drůbeží infekční bronchitidy

SPF vajíčka se naočkovala virem nemoci drůbeží infekční bronchitidy a inkubovala se známými způsoby pro růst virů ve vejcích. Embrya.a chorioalantonické membrány se sebraly a virus se extrahoval pomocí homogenizace.

Lyofilizace se provedla přesně podle známých, standardních postupů. |

Tablety o hmotnosti 700 mg se připravily v podstatě stejným způsobem, jak se popisuje v příkladu 1.

Každá tableta obsahovala 140 mg lyofilizátu.

7.2 Analýza tablet

Titr každé tablety se vyhodnotil v SPF vejcích a byl 10⁶'¹⁵ EID₅₀/tabletu.

* · ·· • 9 9 ·

PŘÍKLAD 8

8.1 Příprava šumivých tablet obsahujících živý virus kmene Winterfield choroby Gumboro (drůbeží)

SPF vajíčka se naočkovala virem kmene Winterfield choroby Gumboro (drůbeží) a inkubovala se známými způsoby pro šíření virů ve vejcích.

Embrya a chorioalantonické membrány se sebraly a virus se extrahoval pomocí homogenizace.

Lyofilizace se provedla přesně podle známých, standardních postupů.

Tablety o hmotnosti 700 mg se připravily v podstatě stejným způsobem, jak se popisuje v příkladu 1.

Každá tableta obsahovala 140 mg lyofilizátu.

8.2 Analýza tablet

Titr každé tablety se vyhodnotil v SPF vejcích a byl 10⁶'²⁸ EID₅₀/tabletu.

PŘÍKLAD 9

9.1 Příprava šumivých tablet obsahujících živý virus infekční bronchitidy (IB-HI20) + NDV-VH (drůbeží)

SPF vajíčka se naočkovala virem nemoci IB-HI20 nebo NDV-VH a inkubovala se známými způsoby pro šíření virů ve vejcích.

AAF se sebraly a odstřeďovaly se dvacet minut při 4000 g.

·· • · · · · · · · · · • · · · · · · · · · ··· • · · * · · · · · · · · · · · · ···· ···· · · · • · · · · · ·· ·· ·

Lyofilizace se provedla přesně podle známých, standardních postupů.

Tablety o hmotnosti 700 mg se připravily v podstatě stejným způsobem, jak se popisuje v příkladu 1.

Každá tableta obsahovala 140 mg lyofilizátu.

9.2 Analýza tablet

Když se jedna tableta přidala do 100 mL vody, rozpuštění se ukončilo během dvou minut, tj. volným okem nebyly viditelné žádné stopy pevné látky.

Titr každé tablety se vyhodnotil v SPF vejcích a byl 1O⁵'⁸⁰ a 10⁹'⁶⁰ EIDso/tabletu v tomto pořadí pro IB-HI20 a NDV-VH (drůbeží).

| PŘÍKLAD 10

10.1 Příprava šumivých tablet obsahujících živý virus ovčích neštovic

Propagace viru se provedla v buňkách Věro pěstovaných v plastikových válcích.

Lyofilizace se provedla přesně podle známých, standardních postupů.

Tablety o hmotnosti 700 mg se připravily v podstatě stejným způsobem, jak se popisuje v příkladu 1.

Každá tableta obsahovala 140 mg lyofilizátu.

• · · · · · · · * ·

9 99 99 999 9 999 • ·9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 999 ···· · · · · · « « •· · · ·· ·· ·

10.2 Analýza tablet

Titr každé tablety se vyhodnotil jako 10⁵'⁹⁵ TCID₅₀/tabletu. Virus vakcíny ovčích neštovic se titroval ve Věro buňkách.

PŘÍKLAD 11

11.1 Příprava šumivých tablet obsahujících živý očkovací virus dobytčího moru (dobytek)

Propagace viru se provedla v buňkách Věro pěstovaných v plastikových válcích.

Lyofilizace se provedla přesně podle známých, standardních postupů.

Tablety o hmotnosti 700 mg se připravily v podstatě stejným způsobem, jak se popisuje v příkladu 1.

Každá tableta obsahovala 140 mg lyofilizátu.

11.2 Analýza tablet

Titr každé tablety se vyhodnotil jako 10⁴'¹ TCID₅₀/tabletu. Virus vakcíny dobytčího moru se titroval ve Věro buňkách.

11.3 Barevné kódování očkovacích kompozic

Izraelský patent č. 46189 popisuje drůbeží barevně kódovanou virovou vakcínu obarvenou osobitým barvivém, které je bezpečné pro živé tkáně a které nepoškozuje životaschopnost virů. Rozličné vakcíny jsou každá barevně kódovaná prostřednictvím rozličných osobitých barviv. Vhodnými barvivý jsou například amarantové červené barvivo, tartrazínová žlutá, indigová

• · · ·· ·* ·· * • · · · · • ··· · · · · • · ··· ····· karmínová modrá nebo směsi kterýchkoli z nich poskytující osobité zabarvení.

Způsob barvení rozmanitých odlišných typů vakcín (nebo barevné kódování) na rozličné kontrastní barvy je prospěšný proti omylu, kterého se mohou farmáři dopustit tím, že vakcinují své drůbeží hejno odlišným typem vakcíny, než zamýšleli, a tím neochránili hejno proti nemoci, proti které je chtěli ve skutečnosti imunizovat. Takové omyly se obvykle zjistí až příliš pozdě, pokud vůbec, a v různých případech sebou přinesly stížnosti na vakcínu navíc k vážným finančním ztrátám a poškození farmáře. Nicméně chemická barviva, bezpečná jak jen mohou samy o sobě být, přinášejí řadu problémů a rizik, když se kombinují s virovou vakcínou.

Vakcinace drůbeže vyžaduje použití živých virových vakcín, ve kterých jsou obsažené kultury živých virů v konečném produktu a jelikož živé viry jsou velice choulostivé a mohou se snadno zkazit, dochází samozřejmě k technickým problémům. Rozličná barvící činidla nebo barviva jsou známá jako chemicky aktivní látky, hlavně mohou chemicky oxidovat nebo redukovat. Živé viry jsou velmi citlivé na změny v prostředí, například na podmínky pH, teplotu, záření, rozličné kovové ionty a jinak mohou být postiženy chemickými činidly, s kterými přijdou do kontaktu. Taková barvící činidla jako methylenová modrá nebo fuchsinová červená či anilinová barviva mohou být pro viry toxická a mohou vést k problémům u kuřat nebo krůt, do kterých by se vpichovala. Je proto nezbytné vybrat taková barviva, která budou bezpečná pro použití v živých tkáních a nebudou poškozovat vitalitu virů, se kterými jsou v kontaktu. Vybraly se čtyři barevné odstíny pro identifikaci čtyř nejpopulárnějších a nejdůležitějších vakcín používaných v současnosti v drůbežářském průmyslu, jmenovitě červená barva pro identifikacj. lentogenního kmene vakcíny newcastelské • 44 • 4 ·· ·♦ • 4 4 4 • 4 44

4 4 ·

4 4 4

4 4 choroby, nebo jak se nazývá v Izraeli Komarov „ptačí kmen, žlutá barva pro identifikaci „kuřecího kmene Komarov-Heifa vakcíny newcastelské choroby, modrá barva pro identifikaci vakcíny proti laryngotracheitidě a zelený odstín pro identifikaci vakcíny proti drůbežím neštovicím.

Jak popisuje izraelský patent č. 46189, zkoušely se rozličné koncentrace těchto barviv a míchaly se přímo s mokrou vakcínou před jejím rozpipetováním do konečných kontejnerů a před tím, než se zbavily vlhkosti (lyofilizovaly se). Provedlo se několik testů, aby se zjistilo, že tato barviva nebudou poškozovat vakcínu.

Rozličné šarže obarvených vakcín se podrobily skladovacím podmínkám při zmtažení a jinak a opakovaně se titrovaly, aby se ověřila koncentrace viru. Dostatečné kontroly vakcíny bez přídavku barviv probíhaly paralelně ke každému testu s obarvenou vakcínou. Obarvené vakcíny se také testovaly přímo na živých ptácích, aby se vidělo, jaký účinek by mohly mít. Opakované testy se všemi čtyřmi typy vakcín a čtyřmi barvivý použitými v těchto experimentech nevykázaly žádný škodlivý účinek na výsledky titrace viru. Injekční testy na živých ptácích a aplikace virové vakcíny jinými cestami, například přes pitnou vodu, způsobem přilepení přes kůži (drůbeží neštovice) a třením do kloaky (pro vakcínu proti laryngotracheitidě) ukázaly, že barvivo nemá škodlivé účinky na ptáky, a když se vpichovalo intramuskulárně, reabsorbovalo se z tkáně a zcela vymizelo během 36 hodin. Izraelský patent č. 46189 popisuje vakcíny testované v terénu na několika hejnech, která se vakcinovala od jednoho dne života a až do prodejního věku těmito obarvenými vakcínami. Tito ptáci se úspěšně prodávaly a vůbec nevykazovaly žádné známky barviva..

Další podrobnosti vynálezu popsaného v izraelském patentu č.

·· ·* ·· 99 99 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 99 9 9 999 9 9 9 9 • · · 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9999

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

99 99 99 99 9

46189 lze snadno nahlédnout ve spojení s popisem v následujících příkladech, které jsou z něho převzaté a které byly vybrané pouze pro ilustraci, aby umožnili odborníkovi v technice použití barevně kódovaných přípravků pro vakcíny a tudíž nepředstavují omezení tohoto vynálezu.

Příklad A

Amarantové červené barvivo se připravilo pro spojení s „ptačí vakcínou Vineland newcastlovské choroby pomocí přípravy koncentrovaného roztoku barviva. Tento koncentrát obsahoval 145 gramů suchého práškového barviva rozpuštěného ve čtyřech litrech destilované vody. Koncentrovaný roztok barviva se krátce po přípravě autoklávoval při 20 psi (1 psi = 6, 895 kPa) po dobu dvaceti minut a uchovával se v neprodyšně uzavřených skleněných lahvích na tmavém místě. Koncentrovaný roztok barviva se přidal v množství 1,33 % do konečné ptačí Vineland vakcíny newcastlovské choroby.

Dosáhly se následující výsledky titraci s obarvenou vakcínou ve srovnání s kontrolní neobarvenou vakcínou:

Titrace dva týdny po lyofiližaci:

bez barviva 10^9,° EIDso/mL s barvivém 10⁹'³ EIDso/mL

Zrychlená titrace:

bez barviva 10⁹*¹ EID₅₀/mL s barvivém 10⁹'³ EIDso/mL

Titrace třicet dnů po lyofiližaci:

bez barviva 10⁹'¹⁶ EIDso/mL s barvivém 10⁹'³ EIDso/mL •9 99 99 99 99 • 9 9 9 9 9 9 9 9 • · ·· · 9999 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 · · · · 9 · · · · ·· ·* ·· 99 99 ·

Títrace tři měsíce po lyofilizaci:

bez barviva 10⁸'⁸⁶ EID₅₀/mL s barvivém 10⁹'³ EID₅₀/mL

Titrace po šesti měsících po lyofilizaci provedena pouze na vzorku s barvivém: 10⁹'¹⁶ EID₅o/mL.

Příklad B • · 9999

Tartrazinové žluté s Vineland vakcínou (mesogenický kmen barvivo se připravilo pro spojení kmene kuřecí newcastlovské choroby

Haifa-Komorov) pomocí přípravy koncentrovaného roztoku barviva. Tento koncentrát obsahoval 200 gramů suchého práškového barviva rozpuštěného ve třech litrech destilované vody. Koncentrovaný roztok barviva se krátce po přípravě autoklávoval při 20 psi (1 psi = 6, 895 kPa) po dobu dvaceti minut a uchovával se v neprodyšně uzavřených skleněných lahvích na tmavém místě. Koncentrovaný roztok barviva se přidal v množství 3 % do konečné newcastlovské drůbeží Vineland vakcíny.

Dosáhly se následující výsledky titrací s obarvenou vakcínou ve srovnání s kontrolní neobarvenou vakcínou:

Výsledky obvyklé titrace vakcíny:

10⁹'⁴ EID50 na mililitr

Výsledky titrovaného vzorku s barvivém 10⁸'⁸ EIDso/mL

Titrace po sedmi dnech inkubace při 37° C: : bez barviva 10^01,3 EID50/mL s barvivém 10⁸'⁸ EID50/mL

Titrace 39 dnů po lyofilizaci:

bez barviva 10⁸'⁶⁶ EIDso/mL ·« «« ·* «· ·· · • · · · · · · ··· * · · · · · · · · · ··« • · · · · · ·· ··· · ···· • · · · · · · · · « « ·· ·· ·· ·· ·· · s barvivém ΙΟ⁸'⁹ EIDso/mL

Titrace 93 dnů po lyofilizaci: bez barviva 10⁸'⁶⁶ EID₅₀/mL s barvivém io⁸'⁶⁶ EIDso/mL

Titrace 7,5 měsíce po lyofilizaci:

bez barviva 10⁸'⁵³ EIDso/mL s barvivém 10⁸'⁷⁶ EID₅₀/mL

Příklad C

Indigové karmínové modré barvivo se připravilo pro spojení s injekcemi Vineland vakcíny laryngotracheitidy pomocí přípravy koncentrovaného roztoku barviva.

Tento koncentrát obsahoval 200 gramů suchého práškového barviva rozpuštěného ve třech litrech destilované vody. Koncentrovaný roztok barviva se krátce po přípravě autoklávoval při 20 psi (1 psi = 6, 895 kPa) po dobu dvaceti minut a uchovával se v neprodyšně uzavřených skleněných lahvích na tmavém místě. Koncentrovaný roztok barviva se přidal v množství 3 % do konečných injekcí Vineland vakcíny laryngotracheitidy.

Dosáhly se následující výsledky titrací s obarvenou vakcínou ve srovnání s kontrolní neobarvenou vakcínou:

Titrace tři týdny po lyofilizaci:

bez barviva ΙΟ⁶'³ EIDso/mL s barvivém iq⁶'¹⁶ EIDso/mL

Zrychlená titrace:

bez barviva 10^5,° EIDso/mL s barvivém 1O⁴'⁸ EID₅₀/mL «· v« • · · · * t »· • « · · ·· • · « « ··» · • · · « ·

Titrace třicet dnů po lyofilizaci: bez barviva 1O⁶'° EID50/mL s barvivém 10⁵'⁸ EID50/mL

Titrace tři měsíce po lyofilizaci:

bez barviva 10⁵'⁶⁶ EID₅o/mL s barvivém 10⁵'⁵ EIDso/mL

Titrace sedm měsíců po lyofilizaci:

bez barviva 10⁵'⁵ EIDso/mL s barvivém 10⁵'⁶ EID₅₀/mL (Představuje to poněkud neobvyklý pokles titru jak pro barvené, tak pro nebarvené vzorky a zrychlené šarže ukázaly větší pokles než o řád, což je možná dané větším obsahem vlhkosti v této šarži.)

Příklad D ¹

Barvivo se zeleným odstínem kódované „P (pro neštovice) se připravilo smíšením indigo-karmínového barviva s tartrazínovým barvivém a použilo se pro spojení s Vineland vakcínou drůbežích neštovic. 100 gramů suché práškové směsi barviv se rozpustilo ve třech litrech destilované vody.

Použil se stejný postup jako v příkladech B a C a roztok se přidal v množství 3 % do konečné vakcíny drůbežích neštovic.

Dosáhly se následující výsledky titrací s obarvenou vakcínou ve srovnání s kontrolní neobarvenou vakcínou:

sedm dní po lyofilizaci:

neobarvená kontrola 10⁵'⁵ EID₅₀/mL vakcína s barvivém 10⁵'⁵ EIDso/mL ·» 44 Λ* 44 44 4 • * · * · · 4 4 4 4

4 44 · · 444 4 4 4 4

44 444 44 444 4 4444

4444 4444 44 4

44 44 44 ·< 4 po třech měsících:

neobarvená kontrola vakcína s barvivém po šesti měsících:

neobarvená kontrola vakcína s barvivém devět měsíců po přípravě neobarvená kontrola vakcína s barvivém

10⁵'⁴ EIDso/mL 10⁵'⁵ EIDso/mL

10⁵'³⁵ EIDso/mL 10⁵'⁴ EIDso/mL

10³'¹ EIDso/mL 10⁵'³ EIDso/mL

PŘÍKLAD 12

12.1 Příprava 100 dávkových tablet obsahujících vakcínu tetanového toxoidu

Kapalný roztok.tetanového toxoidu (Pasteur Merieux Connaught, šarže - JJ, 4750 LF jednotek/mL) se lyofilizoval v ampulkách. Lyofilizovaný prášek se vypočetl tak, aby obsahoval 47.500 LF j ednotek/gram.

Dávka na jednu humánní imunizaci je 4 LF jednotek (Micromedex lne. Healthcare Series Vol. 107).

Stodávkové tablety se připravily jednoduchým razným tabletovacím strojem, takovým jako je jednoduchým razidlem vybavený přístroj MANESTY F3 s 6 mm standardními konkávními razidly podle následujícího složení.

Složení:

• ·

Tabulka 12

Lyofilizovaný prášek tetanového toxoidu	1, 85 g
NaHCO3, bezvodý (Merck, Darmstadt, Německo)	22,9 g
Kyselina citrónová (Gadot, Izrael) suchá	14,0 g
Povidon (PVP)	1,4 g
Stearát horečnatý	o, i g

Suché složky, s výjimkou sterilního tetanového toxoidu se sterilizovaly ozářením gama paprsky.

Nástroje na přípravu se pětačtyřicet minut sterilizovaly parou při 121° C a 15 psi (1 psi = 6,895 kPa).

Tabletovací prášek prošel sítem 30 mesh a pečlivě se promíchal v polypropylenovém sáčku.

Tablety s hmotností 0,2 g se lisovaly pomocí tabletovacího zařízení na tvrdost alespoň 2,0 SCU a okamžitě se balily do sterilizované injekční stříkačky s objemem 10 mL. Injekční stříkačka se okamžitě balila do laminátových hliníkových sáčků pod proudem suchého, sterilního, plynného dusíku. Sáček se zatavil a uchovával při 4° C.

Rozpuštění tablet se zkoušelo otevřením sáčku, nasátím 5 mL sterilní vody s reverzní osmózou (RO) při teplotě 20° C do injekční stříkačky a úplným zatažením pístu injekční stříkačky se směřováním jehly nahoru, aby se umožnil únik plynů vznikajícího v šumivém procesu. Po úplném rozpuštění tablety, tak že lze pozorovat čirou suspenzi, se píst stlačil, aby se vytlačil plyn. Doba rozpouštění byla 35 sekund s pěti mililitry RO vody při teplotě 20° C. Za aseptických podmínek se kapalina převedla do 45 mL RO vody za poskytnutí konečného objemu 50 mL.

···· · ·· · · · • · ·· · · ··· · · · · • ·· ··· ·· ··· · ··· ·· ·· ·· ·· ···

PŘÍKLAD 13

12.1 Příprava 10 dávkových tablet obsahujících vakcínu tetanového toxoidu

Kapalný roztok tetanového toxoidu (Pasteur Merieux Connaught, šarže - JJ, 4750 LF jednotek/mL) se lyofilizoval v ampulkách a sesbíral se v suchém sterilním prostředí do homogenní hromádky. Lyofilizovaný prášek se vypočetl tak, aby obsahoval 47.500 LF j ednotek/gram.

Dávka na jednu humánní imunizaci je 4 LF jednotky (Micromedex lne. Healthcare Series Vol. 107).

Desetidávkové tablety se připravily jednoduchým razným tabletovacím strojem, takovým jako je jednoduchým razidlem vybavený přístroj MANESTY F3 s 6 mm standardními konkávními razidly podle následujícího složení.

Složení:

Tabulka 13

Lyofilizovaný prášek tetanového toxoidu	0,185 g
NaHCO3, bezvodý (Merck, Darmstadt, Německo)	24,5 g
Kyselina citrónová (Gadot, Izrael) suchá	14,0 g
Povidon (PVP)	1,4 g .
Stearát hořečnatý	0,1 g

Suché složky, s výjimkou sterilního tetanového toxoidu se sterilizovaly ozářením gama paprsky.

Nástroje na přípravu se pětačtyřicet minut sterilizovaly parou při 121° C a 15 psi (1 psi = 6,895 kPa).

• · · · • ·· · • · · · ·

Tabletovací prášek prošel sítem 30 mesh a pečlivě se promíchal v polypropylenovém sáčku.

Tablety s hmotností 0,2 g se lisovaly pomocí tabletovacího zařízení na tvrdost alespoň 2,0 SCU a okamžitě se balily do sterilizované injekční stříkačky s objemem 10 mL. Injekční stříkačka se okamžitě balila do laminátových hliníkových sáčků pod proudem suchého, sterilního, plynného dusíku. Sáček se zatavil a uchovával při 4° C.

Rozpuštění tablet se zkoušelo otevřením sáčku, nasátím 5 mL sterilní vody s reverzní osmózou (RO) při teplotě 20° C do injekční stříkačky a úplným zatažením pístu injekční stříkačky se směřováním jehly nahoru, aby se umožnil únik plynů vznikajícího v šumivém procesu. Po úplném rozpuštění tablety, tak že lze pozorovat čirou suspenzi, se píst stlačil, aby se vytlačil plyn.

Doba rozpouštění byla 37 sekund s pěti mililitry RO vody při teplotě 20° C.

PŘÍKLAD 14

12.1 Příprava jednodávkových tablet obsahujících vakcínu tetanového toxoidu

Kapalný roztok tetanového toxoidu (Pasteur Merieux Connaught, šarže - JJ, 4750 LF jednotek/mL) se lyofilizoval v ampulkách a sesbíral se v suchém sterilním prostředí do homogenní hromádky. Lyofilizovaný prášek se vypočetl tak, aby obsahoval 47.500 LF jednotek/gram.

Dávka na jednu humánní imunizaci je 4 LF jednotky (Micromedex lne. Healthcare Series Vol. 107).

• · · · • · ·· • 9 9 9 9

9 9 9 9

9 99 9 9 9 9

999 9999

Tablety na jedinou dávku se připravily jednoduchým razným tabletovacím strojem, takovým jako je jednoduchým razidlem vybavený přístroj MANESTY F3 s 6 mm standardními konkávními razidly podle následujícího složení.

Složení:

Tabulka 14

Lyofilizovaný prášek tetanového toxoidu	0,0185 g
NaHC03, bezvodý (Merck, Darmstadt, Německo)	24,7 g
Kyselina citrónová (Gadot, Izrael) suchá	14,0 g
Povidon (PVP)	1,4 g
Stearát hořečnatý	o, i g

Suché složky, s výjimkou sterilního tetanového toxoidu se sterilizovaly ozářením gama paprsky.

Nástroje na přípravu se pětačtyřicet minut sterilizovaly parou při 121° C a 15 psi (1 psi = 6,895 kPa) .

Tabletovací prášek prošel sítem 30 mesh a pečlivě se promíchal v polypropylenovém sáčku.

Tablety s hmotností 0,2 g se lisovaly pomocí tabletovacího zařízení na tvrdost alespoň 2,0 SCU a okamžitě se balily do sterilizované injekční stříkačky s objemem 5 mL. Injekční stříkačka se okamžitě balila do laminátových hliníkových sáčků pod proudem suchého, sterilního, plynného dusíku. Sáček se zatavil a uchovával při 4° C.

Rozpuštění tablet se zkoušelo otevřením sáčku, nasátím 0,5 mL sterilní vody s reverzní osmózou (RO) při teplotě 20° C do injekční stříkačky a úplným zatažením pístu injekční stříkačky • · · · ··· ··· • · ·· · ···· · ··· • · · · · · * · ··· · ··· ···· · · · · · · · se směřováním jehly nahoru, aby se umožnil únik plynů vznikajícího v šumivém procesu. Po úplném rozpuštění tablety, tak že lze pozorovat čirou suspenzi, se píst stlačil, aby se vytlačil plyn.

Doba rozpouštění byla 38 sekund s půl mililitrem RO vody při teplotě 20° C.

Výslednou stabilní, slisovanou, očkovací kompozici podle předloženého vynálezu, sterilní balení, například injekční stříkačka obsahující očkovací tabletu lze snadno použít v terénu, a tím eliminovat kroky navíc a materiály potřebné pro přípravu vakcíny a vakcinovat subjekt.

Očkovací kompozice předloženého vynálezu poskytuje výhodu ulehčené přípravy a podávání vakcíny, protože její formulace umožňuje balení za sterilních podmínek do například sterilní injekční stříkačky, ve které lze její rozpuštění provést s použitím standardních manipulačních postupů vhodných pro injekce. V důsledku toho má v sterilní injekční stříkačce jednou zabalená očkovací tableta podle předloženého vynálezu zajištěnou úplnou sterilní cesta od výroby k aplikaci. Poskytuje to zřetelnou výhodu proti způsobu balení tablet v bublinkových obalech, kde je tableta vystavena nesterilnímu prostředí při kontaktu s ředidlem.

Touto technikou lze efektivně manipulovat s očkovacími tabletami pro jednu, jakož i pro násobné dávky.

Očkovací kompozice předloženého vynálezu může snadno tvořit vakcínu vhodnou pro parenterální aplikaci, což umožňuje, aby očkovací kompozice nebyla jen živou vakcínou, ale také inaktivovanou. Jak se například uvádí výše, mrtvé očkovací složky mohou být buď inaktivované celé buňky nebo viry,

subjednotková vakcína, ať už rekombinantní nebo geneticky nemodifikovaná, či toxoid.

Výše navržené způsoby jsou vhodné pro prevenci pro zvířata, jakož i pro lidi.

Balení očkovací kompozice předloženého vynálezu, například ve formě tablety v sterilním balení, např. injekční stříkačka, pro uchovávání a následné rozpuštění a aplikaci pomocí injekce, není navíc vhodné pouze pro očkovací materiál. Tuto techniku lze použít pro další materiály vhodné pro injekci, jako jsou hormony, léky, vitamíny atd.

Způsoby popsané ve specifikaci pro výrobu stabilní, slisované kompozice obsažené ve sterilním balení poskytují následující výrobní výhody: aktivní látka je přesně prověřena/analyzována před lisováním nebo tabletováním, distribuce table do, například otevřeného válce injekční stříkačky se snadno provádí kontinuálně a mnoho látek lze slisovat do tablety ve stlačeném objemu. Lyofilizované materiály lze zahrnout do tablety a lze uchovat jejich charakteristiky, jak ukazují výše uvedené příklady. Do kompozice se navíc přidává činidlo napomáhající rozpouštění, jak je tomu v případě šumivých tablet, aby se umožnilo kompletní a/nebo rychlé rozpuštění bez jakéhokoli závažnějšího účinku na aktivní látky.

Injekční stříkačky s tabletami lze balit do sáčků v suchém, sterilním, plynném dusíku. Zaručuje to prodlouženou životnost při uchovávání produktu.

Záměrem výše uvedeného popisu je naučit běžného odborníka v technice, jak vynález praktikovat, a není jeho úmyslem podrobně uvádět všechny takové evidentní modifikace a variace, které budou zřejmé zkušenému odborníkovi po jeho přečtení.

• · · 9 9 · • · ··· · 9 9 9 • ·· · · 9 99999 • · · 9 9 9 « • · ·· 9 9 9

Nicméně se zamýšlí, že všechny takové evidentní modifikace a variace se zahrnují do rámce předloženého vynálezu, který je definován následujícími patentovými nároky.

Claims (21)

1. Stabilní, slisovaná, očkovací kompozice vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu lyof ilizovanou antigenní složku, druhou lyofilizovanou složku a činidlo napomáhající rozpouštění, kde druhá lyofilizovaná složka obsahuje neutralizační protilátky proti lyofilizované antigenní složce.

2. Stabilní, slisovaná, očkovací kompozice podle nároku 1 vyznačující se tím, že se vyrábí postupem zahrnujícím kroky:

a) lyofilizaci přinejmenším jedné antigenní složky,

b) lyofilizaci neutralizačních protilátek proti antigenní složce odděleně od antigenní složky,

c) stanovení potence každé z lyofilizované antigenní složky a lyofilizovaných neutralizačních protilátek,

d) smísení lyofilizované antigenní složky a lyofilizovaných neutralizačních protilátek v poměru stanoveném na základě potencí získaných v kroku c) a

e) lisování směsi lyofilizované antigenní složky a lyofilizovaných neutralizačních protilátek s alespoň jedním činidlem napomáhajícím rozpouštění, aby se vytvořila stabilní, slisovaná, očkovací kompozice.

3. Způsob výroby stabilní, slisované, očkovací kompozice in ovo vyznačující se tím, že. zahrnuje kroky:

a) lyofilizaci přinejmenším jedné antigenní složky,

b) lyofilizaci neutralizačních protilátek proti antigenní složce odděleně od antigenní složky, • · · · · · · · · · • · ·· φ · ·ΦΦ · φ · • · · ··· φ φ φ · φ φ φφ • · φ φ φ φ ·· · ·

c) stanovení potence každé z lyofilizované antigenní složky a lyofilizovaných neutralizačních protilátek,

d) smísení lyofilizované antigenní složky a lyofilizovaných neutralizačních protilátek v poměru stanoveném na základě potencí získaných v kroku c) a

e) lisování směsi lyofilizované antigenní složky a lyofilizovaných neutralizačních protilátek s alespoň jedním činidlem napomáhajícím rozpouštění, aby se vytvořila stabilní, slisovaná, očkovací kompozice in ovo.

4. Způsob imunizace subjektu in ovo proti nemoci vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:

a) rozpuštění očkovací kompozice podle nároku 1, která poskytuje ochranu proti takové nemoci, s ředidlem, aby se vytvořil roztok a

b) podání výsledného roztoku subjektu in ovo v účinném množství,, aby se subjekt proti nemoci imunizoval bez nepříznivé reakce.

5. Způsob podle nároku 4, kde subjektem je ptačí subjekt a nemoc se vybere ze skupiny sestávající z newcastelské choroby, infekční burzitidy, drůbežích neštovic, laryngotracheitidy, viru Markovy choroby, kokcidiózy a infekční bronchitidy drůbeže.

6. Stabilní, slisovaná, očkovací kompozice podle nároku 2 vyznačující se tím, že antigenní složka je živý virus vybraný ze skupiny sestávající z viru newcastelské choroby, viru infekční burzitidy, viru drůbežích neštovic, viru laryngotracheitidy, viru infekční bronchitidy drůbeže, víru ovčích neštovic, viru dobytčího moru nebo příměsi jedné nebo více z výše uvedených virů, ať už

9 9 9 9 9 • · 99 9

9 9 9 9 9 9

9 9 9 · 9 · • 999 • · přírodně se vyskytujících, rekombinantních nebo modifikovaných.

7. Způsob výroby stabilní, slisované, očkovací kompozice in ovo podle nároku 3 vyznačující se tím, že antigenní složkou je živý virus vybraný ze skupiny sestávající z viru newcastelské choroby, viru infekční burzitidy, viru drůbežích neštovic, viru laryngotracheitidy, viru infekční bronchitidy drůbeže, viru Markovy choroby, agenta kokcidiózy nebo příměsi jedné nebo více z výše uvedených, ať už přírodně se vyskytujících, rekombinantních nebo modifikovaných.

8.

Sterilní slisovanou slisovaná rozpouštění injekční kompozici kompozice stříkačka obsahující stabilní, vyznačující se tím, že obsahuje činidlo napomáhající

9. Sterilní injekční stříkačka podle nároku 8 vyznačující se tím, že slisovaná kompozice je ve formě tvrdé tablety.

10. Sterilní injekční stříkačka podle nároku 9 vyznačující se tím, že tvrdá tableta se v ředidle zcela a rychle rozpustí.

11. Sterilní injekční stříkačka podle nároku 9 vyznačující se tím, že se slisovaná kompozice vybere ze skupiny sestávající z hormonu, léku a vitamínu vhodných pro injekční aplikaci.

12. Způsob podávání roztoku vhodného pro injekce subjektu vyznačující se tím, že zahrnuje přídavek ředidla do injekční stříkačky podle nároku 8, aby se ve stříkačce • · ·· · · ♦·· · · · « • ·· ··· ·· · · · · · r · * • · · · ···· · « · ·· ·· ·· ·· _Φ· » vytvořil roztok vhodný pro injekci a podání výsledného roztoku subjektu,

13. Způsob podávání roztoku vhodného pro injekce subjektu vyznačující se tím, že zahrnuje přídavek ředidla do injekční stříkačky podle nároku 9, aby se ve stříkačce vytvořil roztok vhodný pro injekci a podání výsledného roztoku subjektu.

14. Stabilní, slisovaná, očkovací kompozice obsahující alespoň jednu lyofilizovanou antigenní složku a činidlo napomáhající rozpouštění vyznačující se tím, že antigenní složkou je toxoid tetanu.

15. Způsob imunizace lidského subjektu proti nemoci vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:

a) rozpuštění stabilní, slisované, očkovací kompozice, která poskytuje ochranu proti takové nemoci, obsahující alespoň jednu lyofilizovanou složku toxoidu tetanu a činidlo napomáhající rozpuštění, v ředidle, aby se vytvořil roztok a

b) podání výsledného roztoku lidskému subjektu v množství účinném pro imunizaci lidského subjektu proti nemoci.

16. Sterilní injekční stříkačka obsahující zhutněnou očkovací kompozici vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu lyofilizovanou antigenní složku a činidlo napomáhající rozpouštění.

17. Sterilní injekční stříkačka podle nároku 16 vyznačující se tím, že zhutněná očkovací kompozice je slisovaná očkovací kompozice.

• A AA

A A A A A A « A A * A A

18. Injekční stříkačka podle nároku 17 vyznačující se tím, že slisovaná očkovací kompozice je ve formě tvrdé tablety.

19. Způsob imunizace subjektu proti nemoci vyznačující se tím, že zahrnuje přídavek ředidla do injekční stříkačky podle nároku 16, 17 nebo 18, aby se v stříkačce vytvořil očkovací roztok a podání výsledného očkovacího roztoku subjektu.

20. Způsob imunizace subjektu proti nemoci vyznačující se tím, že zahrnuje přídavek ředidla do injekční stříkačky podle nároku 17, aby se v stříkačce vytvořil očkovací roztok a podání výsledného očkovacího roztoku subjektu.

21. Způsob imunizace subjektu proti nemoci vyznačující se tím, že zahrnuje přídavek ředidla do injekční stříkačky podle nároku 18, aby se v stříkačce vytvořil očkovací roztok a podání výsledného očkovacího roztoku subjektu.