UA65803A

UA65803A - Associated intradermal vaccine against techin's disease and aujeski's disease

Info

Publication number: UA65803A
Application number: UA2003054835A
Authority: UA
Inventors: Andrii Ihorovych Buzun; Valerii Oleksiiovych Holovko; Volodymyr Pylypovych Romanenko; Petro Ivanovych Verbytskyi; Alina Anatoliivna Serchenko; Larysa Vasylivna Buzun
Original assignee: Kharkiv State Zooveterinary Ac
Priority date: 2003-05-27
Filing date: 2003-05-27
Publication date: 2004-04-15

Abstract

The associated intradermal vaccine against Techin's disease and Aujeski's disease contains the inactivated viral suspension with 20-25-fold concentrated antigens of the corresponding pathogens, the adjuvant of the synthetic oil, emulsifier, and urotropin.

Description

Передбачуваний винахід належить до галузі ветеринарної біотехнології, зокрема до засобів профілактики хвороб Тешена і Ауєскі.The intended invention belongs to the field of veterinary biotechnology, in particular to means of prevention of diseases of Teshen and Aujeski.

Для профілактики хвороб Тешена (ХТ) та Ауєскі (ХА) використовують живі та інактивовані вакцини. Живі вакцини проти ХТ готують, наприклад, з культурального ентеровірусу штаму "Перечинський-471" ПІ, а проти ХА - з культурального герпесвірусу свиней штаму "БУК-628" 21, які є непатогеними для свиней, створюють у свиней імунітет відповідно проти ХТ та ХА, їх можна застосовувати для інтрадермального введення. Проте, в сучасних епізоотичних умовах ці препарати не ефективні, бо штам "Переченський-471" імунологічне не відповідає актуальним епізоотичним варіантам збудника, а для профілактики ХА в Євросоюзі та в Україні заборонено використовувати не марковані вірус-вакцини.Live and inactivated vaccines are used to prevent Teshen (HT) and Aujeski (HA) diseases. Live vaccines against HT are prepared, for example, from the cultured enterovirus of the strain "Perechynskyi-471" PI, and against HA - from the cultured swine herpesvirus of the strain "BUK-628" 21, which are non-pathogenic for pigs, create immunity in pigs against HT and HA, respectively , they can be used for intradermal administration. However, in modern epizootic conditions, these drugs are not effective, because the "Perechenskyi-471" strain does not immunologically correspond to the current epizootic variants of the pathogen, and it is forbidden to use unlabeled virus vaccines for the prevention of HA in the European Union and Ukraine.

Інактивовані препарати раніше готували з тканин центральної нервової системи хворих свиней |ЗІ, або і використанням культуральної віральної суспензії з додаванням різних ад'ювантів І4Ї. Відомі сучасні вакцинні препарати з використанням інактивованих вірусів ХТ (5) та ХА б). Проте, по-перше, вони є моновакцинами, а по- друге, - не придатні для інтрадермального щеплення. Крім того, при одноразовому застосуванні через вади рецептури та способи використання вони не дозволяють захищати свинопоголів'я від ХТ та ХА на весь період відгодівлі.Inactivated drugs were previously prepared from the tissues of the central nervous system of sick pigs |ZI, or using a cultured viral suspension with the addition of various adjuvants I4Y. Modern vaccine preparations using inactivated HT (5) and XA b) viruses are known. However, firstly, they are monovaccines, and secondly, they are not suitable for intradermal vaccination. In addition, with one-time use, due to defects in the formulation and methods of use, they do not allow to protect the pig herd from HT and HA for the entire fattening period.

Відома бівалентна вакцина проти хвороби Тешена інактивована культуральна олійна (7|, що може слугувати прототипом передбачуваного винаходу. При її виготовленні використовують епізоотичне актуальний штам "Навля-96" збудника ХТ і штам "Закарпатський", який є актуальним лише на дуже обмеженій території нозоареалуA known bivalent vaccine against Teshen's disease is an inactivated cultured oil (7|), which can serve as a prototype of the intended invention. In its production, the current epizootic strain "Navlya-96" of the causative agent of HT and the "Zakarpatskyi" strain, which is relevant only in a very limited area of the nosoreal area, are used

ХТ. Ці віруси вирощують в одношаровій культурі перещеплюваних клітин тестикул свині (ПТП). Вірусутримуючі культуральні суспензії двох антигенне різних штамів вірусу ХТ - "Закарпатський" та "Навля-96" з вихідною активністю не нижче 1079 ТЦдДвомл інактивують теотропіном (кінцева концентрація 0,06-0,0895) та емульгують у олійному ад'юванті, в складі якого є емульгатор для вакцин 139 (кінцева концентрація 0,5-495). Вакцина є емульсією типу "вода-в-олії" з кінематичною в'язкістю від 6-15спз до 56-96бспз, що залежить від співвідношення олійного ад'юванту та інактивованої вірусної сировини. Позитивний ефект зазначеного вакцинного препарату досягається наступним співвідношенням компонентів, мас. 90:HT. These viruses are grown in a monolayer culture of transplantable porcine testicular cells (PTP). Antiviral culture suspensions of two antigenically different strains of the HT virus - "Zakarpatskyi" and "Navlia-96" with an initial activity not lower than 1079 TCdDvoml are inactivated with teotropin (final concentration 0.06-0.0895) and emulsified in an oil adjuvant, which contains there is an emulsifier for vaccines 139 (final concentration 0.5-495). The vaccine is a "water-in-oil" emulsion with a kinematic viscosity from 6-15 spz to 56-96 bspz, which depends on the ratio of oil adjuvant and inactivated viral raw materials. The positive effect of the indicated vaccine preparation is achieved by the following ratio of components, wt. 90:

Суспензія інактивованого вірусу "Suspension of inactivated virus "

Закарпатський " 12,5-35,0Transcarpathian " 12.5-35.0

Суспензія інактивованого віруса "Suspension of inactivated virus "

Навля-96" 12,5-35,0Navlia-96" 12.5-35.0

Теотропін 0,06-0,08Theotropin 0.06-0.08

Олія вакцинна синтетична (типуSynthetic vaccine oil (type

Магсо! 52 або МЦ) 33,3-50,0Magso! 52 or MC) 33.3-50.0

Емульгатор 139 (ТУ 6-02-011- 1213942-99) 0,5-4,0Emulsifier 139 (TU 6-02-011-1213942-99) 0.5-4.0

Відома також вакцина інактивована проти хвороби Ауєскі |б|, для приготування якої застосовується культуральна суспензія інактивованого збудника, а в якості ад'юванту - біла сажа (аеросил) або гидроокис алюмінію.An inactivated vaccine against Aujeski's disease is also known, for the preparation of which a culture suspension of an inactivated pathogen is used, and white carbon black (aerosil) or aluminum hydroxide is used as an adjuvant.

Але прототипні способи та препарати мають низку недоліків. Дані препарати не розраховані на внутрішньошкірне введення за допомогою безголкових ін'єкторів, як за діапазоном в'язкості вакцинної емульсії, так і щодо дози вакцинного препарату; крім того, їх специфічність поширюється лише на одне захворювання, що обмежує його споживчу цінність.But prototype methods and preparations have a number of disadvantages. These drugs are not designed for intradermal administration using needleless injectors, both in terms of the viscosity range of the vaccine emulsion and in relation to the dose of the vaccine drug; in addition, their specificity applies to only one disease, which limits its consumer value.

Проблема складається в тому, що вакцинну емульсію з в'язкістю більш ніж боспз, як і адсорбований на аеросилі або гідроокису алюмінію вакциний препарат неможливо ввести внутрішньошкірно за допомогою стандартного безтолкового ін'єктору (марки "Шмель", "Овод", "БИ-7" та іншії).The problem is that a vaccine emulsion with a viscosity greater than bospz, as well as a vaccine adsorbed on aerosol or aluminum hydroxide, cannot be injected intradermally using a standard needleless injector (brands "Shmel", "Ovod", "BI-7 " and others).

Використання останнього, як відомо, у декілька разів збільшує продуктивність праці при вакцинації, знижує собівартість протиепізоотичних заходів, збільшує їх надійність і, головне, виключає ятрогенне поширення збудників різних інфекційних хвороб при масовій імунізації свиней.The use of the latter, as is known, increases labor productivity several times during vaccination, reduces the cost of antiepizootic measures, increases their reliability and, most importantly, excludes the iatrogenic spread of pathogens of various infectious diseases during mass immunization of pigs.

Інша проблема полягає в тому, що у відомих вакцинних препаратів питома концентрація протективних антигенів не дозволяє використовувати прототипні вакцини у дозах менш, як 1,0-2,0см3. Але такий об'єм вакцини неможливо ввести внутришньошкірно стандартним безтолковим ін'єктором.Another problem is that the specific concentration of protective antigens in known vaccine preparations does not allow the use of prototype vaccines in doses less than 1.0-2.0 cm3. But such a volume of vaccine cannot be injected intradermally with a standard blunt injector.

Усі відомі вакцинні препарати є моноспецифічними, тобто застосовуються лише для тешенської хвороби (ентеровірусного енцефаломієліта свиней), або хвороби Ауєскі. Тому для їх застосування в епізоотичному вогнищі необхідно проводити точну диференційну діагностику цих захворювань, а в загрозливих зонах застосовувати ці вакцини роздільно. Це збільшує собівартість протиепізоотичних заходів та розтягує термін їх проведення.All known vaccine preparations are monospecific, that is, they are used only for Teschen disease (porcine enterovirus encephalomyelitis) or Aujesky's disease. Therefore, for their use in an epizootic outbreak, it is necessary to carry out accurate differential diagnosis of these diseases, and to use these vaccines separately in threatened areas. This increases the cost of antiepizootic measures and extends their duration.

Завданням передбачуваного винаходу є створення високорентабельного асоційованого вакцинного препарату проти хвороб Тешена та Ауєскі для масового щеплення свиней, який би забезпечував при внутрішньошкірному застосування за допомогою стандартних безтолкових ін'єкторів їх імунологічний захист проти найбільш важливих наразі збудників нейроінфекцій. Додатковою метою є підвищення рентабельності вакцинного препарату, як на етапі його виробництва, так й на етапі його застосування.The task of the intended invention is to create a highly cost-effective associated vaccine preparation against Teshen and Aujeski diseases for mass vaccination of pigs, which would provide immunological protection against the currently most important pathogens of neuroinfections when administered intradermally using standard needleless injectors. An additional goal is to increase the profitability of the vaccine preparation, both at the stage of its production and at the stage of its use.

Вказана задача досягається тим, що асоційована вакцина інтрадермального застосування проти Вешенської хвороби та псевдо сказу свиней, включаючи ін активовану за інфекційністю віральну суспензію змішану з олійним ад'ювантом, згідно винаходу, містить концентровані в 20-25 разів антигени збудників хвороб Тешена та Ауєскі, уротропін, та рівну кількість ад'юванту з синтетичних олії та емульгатору в наступних співвідношеннях мас. 90:The specified task is achieved by the fact that the associated vaccine for intradermal use against Veschen disease and pseudo rabies of pigs, including an infectively activated viral suspension mixed with an oil adjuvant, according to the invention, contains 20-25 times concentrated antigens of the causative agents of Teschen and Aujeski diseases, urotropin , and an equal amount of synthetic oil adjuvant and emulsifier in the following mass ratios. 90:

Суміш суспензій інактивованих вірусів хвороб Ауєскі і Тешена 33,3-50,0A mixture of suspensions of inactivated Aujeski and Teschen disease viruses 33.3-50.0

Уротропін 0,5-1,0Urotropin 0.5-1.0

Олія вакцинна синтетична (типу 33,3-50,0Synthetic vaccine oil (type 33.3-50.0

Магсо! 52 або МЦ)Magso! 52 or MC)

Емульгатор типу 139 за ТУ 6-02- 011-1213942-99 2,0-3,0Emulsifier type 139 according to TU 6-02-011-1213942-99 2.0-3.0

Суттєвою відмінністю передбачуваного винаходу є використання концентрованого препарату віральної сировини збудників хвороби Ауєскі та хвороби Тешена.A significant difference of the proposed invention is the use of a concentrated preparation of the viral raw material of the causative agents of Aujeski's disease and Teschen's disease.

Другою суттєвою ознакою винаходу є застосування у якості інактіванту уротропіну згідно заявки на винахід мМе2002097491 від 01.11.02 І8В|Ї. При цьому уротропін використовується в концентрації, що дозволяє надійно інактивувати інфекційну активність вірусів хвороб Ауєскі та Тешена і одночасно не погіршити їх антігенну активність.The second essential feature of the invention is the use of urotropin as an inactivator according to the invention application mme2002097491 dated November 1, 2002. At the same time, urotropin is used in a concentration that allows reliably inactivating the infectious activity of Aujeski's and Teschen's disease viruses and at the same time not impairing their antigenic activity.

Третьою відмінністю передбачуваного винаходу є застосування емульгатору 139 (ТУ 6-02-011-1213942-99) у об'ємі 2,0-3,095 від загального об'єму цільового продукту; при цьому співвідношення об'ємів антігенвміщуючої сировини:ад'ювант-1!:1. Зменшення кількісного вмісту емульгатору («295) в ад'юванті призводе до розшаровування отриманої емульсії (вона стає нестійкою), а збільшення (3,095) до підвищення в'язкості вакцини більш ніж бОспз, що робить препарат непридатним для внурішньошкірного застосування. Співвідношення ад'юванту та антігенвміщуючої сировини 1:1 є оптимальним, адже застосування кінцевому продукті більших або менших обсягів ад'юванту, порівняно з параметрами, що заявляються, призводить або до погіршення імуногеності вакцини і збільшення її реактогенності, або робить неможливим отримання емульсії типу "вода-в- олії". Параметри, що захищаються, з одного боку, покращують технологічні можливості виробництва вакцини при використанні автоматичних систем її розливу, з іншого боку - більш повно задовольняють потреби споживача, адже вакцина легко водиться тваринам безголковим ін'єктором, незалежно від температури довкілля у діапозоні мінус 10 - плюс 3576.The third difference of the intended invention is the use of emulsifier 139 (TU 6-02-011-1213942-99) in a volume of 2.0-3.095 from the total volume of the target product; at the same time, the ratio of volumes of antigen-containing raw materials: adjuvant-1!:1. A decrease in the quantitative content of the emulsifier ("295") in the adjuvant leads to stratification of the obtained emulsion (it becomes unstable), and an increase (3.095) to an increase in the viscosity of the vaccine more than bOspz, which makes the drug unsuitable for intradermal use. The ratio of adjuvant and antigen-containing raw materials 1:1 is optimal, because the use of larger or smaller volumes of adjuvant in the final product, compared to the declared parameters, leads either to a deterioration of the immunogenicity of the vaccine and an increase in its reactogenicity, or makes it impossible to obtain an emulsion of the type " water-in-oil". The protected parameters, on the one hand, improve the technological capabilities of vaccine production when using automatic systems for its bottling, on the other hand, they more fully satisfy the needs of the consumer, because the vaccine is easily administered to animals with a needle-free injector, regardless of the ambient temperature in the range of minus 10 - plus 3576.

Отже позитивний ефект досягається при наступному співвідношенні компонентів, мас. 90:Therefore, a positive effect is achieved with the following ratio of components, mass. 90:

Уротропін 0,5-1,0Urotropin 0.5-1.0

Магсо! 52 або МЦ) 33,3-50,0Magso! 52 or MC) 33.3-50.0

Приклад. 2-х добову культуру клітин РК-15 у 60 клинських матрасах заражують вірусом хвороби Тешена штам " ХДЗВА-Example. A 2-day culture of RK-15 cells in 60 wedge mattresses is infected with Teshen's disease virus strain "HDZVA-

Б" (чи "Навля-96") з множинністю 0,1 ТЦдД»холлітина та інкубують при 37"С на протязі 40-48 годин до проявлення перших ознаків цитопатичної дії вірусу. Культуральну рідину зливають і в матраси додають по 7-10см3 води дистильованої стерильної (осмотичний шок для руйнування клітин моношару і звільнення віральних антигенів, одночасно - їх 25 разове концентрування за об'ємом). Потім вміст матрасів заморожують при -2070. Після розморожування вміст матрасів зливають в бутлю відповідного обсягу, відбирають зразок для визначення інфекційної активності, додають до кожних 10дм3 сировини з активністю не менш 10792 ТЦДвомл 50г уротропіну, розчиняючи його шляхом ретельного перемішування та інкубують при 37"С 48 годин.B" (or "Navlya-96") with a multiplicity of 0.1 TCdD"hollitin and incubated at 37"C for 40-48 hours until the first signs of cytopathic effects of the virus appear. The culture liquid is drained and 7-10 cm3 of sterile distilled water is added to the mattresses (osmotic shock to destroy the cells of the monolayer and release viral antigens, at the same time - their concentration 25 times by volume). Then the contents of the mattresses are frozen at -2070. After thawing, the contents of the mattresses are poured into a bottle of the appropriate volume, a sample is taken to determine the infectious activity, 50 g of urotropin is added to every 10 dm3 of raw material with an activity of at least 10792 TCDvoml, dissolving it by thorough mixing and incubated at 37"C for 48 hours.

Аналогично готують вірусвміщуючу сировину вірусу хвороби Ауєскі штамм "Бучач". Вірусвміщуючу сировину концентрують у 25 разів і інактивують уротропіном з розрахунку 100г препарату на кожні тОдмУ3 сировини, як зазначено вище.Similarly, the virus-containing raw material of Aujesky's disease virus strain "Buchach" is prepared. The virus-containing raw material is concentrated 25 times and inactivated with urotropin at the rate of 100 g of the drug for every tOdmU3 of raw material, as indicated above.

Змішують в стерільному реакторі по 20дм3 концентрированих вірус-вміщуючих суспензій штамів "ХДЗВА-Б" (чи "Навля-96") та "Бучач", додають стерилізований автоклавуванням на протязі однієї години при 1,5атм. ад'ювант, який складається з Звл олії МЦ та 2л емульгатору 139. Перемішують 24 години при 200об/хв, зливають з реактору, пропускаючи вакцинну суміш через колоїдний млин (швидкість перемішування 300боб/хв, зазор жорен 0,03) та фасують у ампули чи флакони по 10-25 внурішньошкірних доз (об'єм однієї дози -0,4мл).Mix 20 dm3 of concentrated virus-containing suspensions of strains "KHDZVA-B" (or "Navlya-96") and "Buchach" in a sterile reactor, add sterilized by autoclaving for one hour at 1.5 atm. adjuvant, which consists of Zvl MC oil and 2 liters of emulsifier 139. Stir for 24 hours at 200 rpm, drain from the reactor, passing the vaccine mixture through a colloidal mill (stirring speed 300 bob/min, mill gap 0.03) and pack into ampoules or vials of 10-25 intradermal doses (the volume of one dose is 0.4 ml).

Серологічне дослідження проб сироваток крови свиней, імунизованих однократно, показує наявність віруснейтралізуючих антитіл в титрах 1:8-1:64 до тешовірусу та 1:2-1:32 до вірусу хвороби Ауєскі через 2 місяці після щеплення, тоді як титри сироваток крові цих же свиней до щеплення щодо тешовірусу не перевищують 12, а до вірусу хвороби Ауєскі - 0.Serological examination of blood sera samples of pigs immunized once shows the presence of virus-neutralizing antibodies in titers of 1:8-1:64 to Teshovirus and 1:2-1:32 to Aujeski's disease virus 2 months after vaccination, while titers of blood sera of the same the number of pigs before vaccination for Teshovirus does not exceed 12, and for Aujeski's disease virus - 0.

Отриманні результанти лабораторних та клінічних іспитів свідчать, що вакцина заявленого складу дозволяє при застосуванні 1 раз на рік досягти 10095-го захисту щепленого свинопоголів'я протягом всього циклу вирощування тварини. Ефектність використання передбачуваного винаходу доведено виробничими іспитами вакцинного препарату в Краснокутському районі Харківської області.The obtained results of laboratory and clinical tests show that the vaccine of the declared composition allows, when applied once a year, to achieve 10095th protection of the vaccinated pig herd during the entire cycle of raising the animal. The effectiveness of the use of the proposed invention was proven by production tests of the vaccine preparation in the Krasnokutsky district of the Kharkiv region.

Література:Literature:

ПІ Романенко В.Ф., Сорока В.И., Прус О.Г. Иммуногенность вирусвакциньі против болезни Тешена.PI Romanenko V.F., Soroka V.Y., Prus O.G. Immunogenicity of the virus vaccine against Teshen's disease.

Ветеринария, 1991, Мое7, с.27-28. (2 Наставление по применению сухой культуральной вирусвакциньї из штамма БУК-628 против болезниVeterinaria, 1991, Moe7, p. 27-28. (2 Instructions for the use of a dry cultural virus vaccine from the BUK-628 strain against the disease

Ауески свиней. Ветеринарное законодательство СССР, том 3, изд. "Колос", М. - 1981, с.183-185.Aueski pigs. Veterinary legislation of the USSR, volume 3, ed. "Colossus", M. - 1981, p. 183-185.

ІЗІ Кіороик А. ЕпсерпаІотуєеїйів епгооїїса зт. Іттипівзайоп асіїме. 7уегоіеК. Вог2раму, 1935, 9; 5.73,85, 217 (чех.). 4) Вошигаєп Р., Зеїтев Н. Массіпайоп сепіге Іа таіадіє де Тезспеп амес є мігив де сипйиге. Апіїсогре єї іттипі(е. -IZI Kioroik A. EpserpaIotueiiiv epgooiisa zt. Ittipivzayop asiime. 7uegoieK. Vog2ramu, 1935, 9; 5.73,85, 217 (Czech). 4) Voshigayep R., Zeitev N. Massipayop sepige Ia taiadiye de Tezspep ames ye migiv de sipyige. Apiisogre eyi ittipi(e. -

Апп. Іпві. Равієицг, 1959, 97, Мо4, р.583-589.App. Ipwee Ravieitsg, 1959, 97, Mo4, p. 583-589.

ІБЇ Дудников Л.А., Сергеев О.В., Алипер Т.И., Непоклонов Е.А., Сергеев В.А. Антигенная активность инактивированного препарата болезни Тешена на свиньях в зависимости от адьюванта. Вируснье болезни б.-х. животньїх. Владимир - 1995, с.152.IBI Dudnikov L.A., Sergeev O.V., Aliper T.Y., Nepoklonov E.A., Sergeev V.A. Antigenic activity of the inactivated Techen disease drug in pigs depending on the adjuvant. Viral diseases of the former animal Vladimir - 1995, p. 152.

ІЄЇ Корниенко Л.Е. Разработка технологии изготовления инактитвированной концентрированной вакцинь против болезни Ауески. Автореф. канд. вет. наук. Харьков - 1992.IEI Kornienko L.E. Development of technology for the production of inactivated concentrated vaccines against Aueska's disease. Autoref. Ph.D. Vet. of science Kharkiv - 1992.

І/7 Бузун А.И., Жестерев В.И., Середа А.Д. и др. Бивалентная инактивированная вакцина против болезниI/7 Buzun A.I., Zhesterev V.I., Sereda A.D. etc. Bivalent inactivated vaccine against the disease

Тешена. Патент РФ Мо2196608, 08.02.01.Teshena Patent of the Russian Federation Mo2196608, 02.08.01.

ІЗВЇ Бузун А.І., Головко В.О., П.І. Вербицький та ін. Спосіб інактивації інфекційних агентів для виробництва біопрепаратів. Заявка на винахід Ме2002097491 від 01.11.02. Позитивне рішення від 03.04.03.IZVII Buzun A.I., Golovko V.O., P.I. Verbytskyi et al. The method of inactivating infectious agents for the production of biological preparations. Application for invention Me2002097491 dated 01.11.02. Positive decision dated 04.03.03.

Claims

Associated vaccine for intradermal use against Teschen disease and pseudorabies of pigs, containing an inactivated viral suspension mixed with an oil adjuvant, which is distinguished by the fact that it contains 20-25 times concentrated antigens of the causative agents of Teschen and Aujeski diseases, urotropin and an equal amount adjuvant from synthetic oils and an emulsifier in the following proportions, by weight:

a mixture of suspensions of inactivated Aujeski disease 1 viruses

Teshena 33.3-50.0 urotropin 0.5-1.0 synthetic vaccine oil (type Magsoi 52 or MC) 33.3-50.0 emulsifier type 139 according to TU 6-02-011-1213942-99 2.0 -3.0.