CZ2003172A3

CZ2003172A3 - Karbamátové a thiokarbamátové deriváty podofylotoxinu, způsob jejich přípravy a farmaceutické kompozice s jejich obsahem

Info

Publication number: CZ2003172A3
Application number: CZ2003172A
Authority: CZ
Inventors: Claude Monneret; Emmanuel Bertounesque; Philippe Meresse; Ghanem Atassi; Alain Pierre; John Hickman; Bruno Pfeiffer; Pierre Renard
Original assignee: Les Laboratoires Servier
Priority date: 2000-06-20
Filing date: 2001-06-19
Publication date: 2003-05-14
Also published as: AU2001269190B2; FR2810321A1; HUP0301612A2; CN1191257C; ES2217159T3; BR0111854A; DE60102378T2; KR20030025246A; FR2810321B1; PL359460A1; JP3909017B2; CA2413515A1; KR100513575B1; HK1055424A1; DE60102378D1; WO2001098307A1; US6878746B2; JP2004501158A; AR028961A1; HUP0301612A3

Description

Karbamátové a thiokarbamátové deriváty podofylotoxinu, způsob jejich přípravy a farmaceutické kompozice s jejich obsahem

Oblast techniky

Předložený vynález se týká nových karbamátových a thiokarbamátových derivátů podofylotoxinu, způsobu jejich přípravy a farmaceutických kompozic, které je obsahují.

Dosavadní stav techniky

Sloučeniny podle vynálezu jsou deriváty podofylotoxinu, přírodního lignanu, který je znám pro své použití při ošetřování rakoviny. Jiné syntetické deriváty, jako etoposid a teniposid jsou běžně používány jako chemoterapeutické prostředky zejména při ošetřování plicní rakoviny malých buněk. Různé takové sloučeniny působí inhibováním katalytické aktivity topoisomerázy II.

U takových sloučenin byly prováděny různé modifikace, jako jsou modifikace popsané v patentových přihláškách JP 948782, WO 97/13776 a US 3,634,459. Nicméně požadavky terapie proti rakovině volají po neustálém vývoji nových protinádorových a c ytotoxických prostředků s cílem získávat léčiva, která jsou současně více účinná, více rozpustná a jsou lépe snášena.

Podstata vynálezu

Vedle té skutečnosti, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou nové, mají překvapující účinnost in vitro a in vivo, lepší než je dosud pozorovaná. Přihlašovatelem objevené sloučeniny mají tudíž vlastnosti, které je činí pro ošetřování rakovinných onemocnění zvlášť užitečné.

Konkrétněji se pak předložený vynález týká sloučenin vzorce (I):

kde

Ri představuje skupinu zvolenou z vodíku, lineárního nebo rozvětveného (C1-C6)alkylu, arylu, aryl-(Ci-C6)-alkylu, ve kterých alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, heteroarylu, heteroaryl-(Ci-C6)-alkylu, ve kterém alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, lineárního nebo rozvětveného (C1-C6)alkoxykarbonylu, aryloxykarbonylu, aryl-(Ci-C₆)-alkoxykarbonylu, ve kterých alkoxylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, heterocykloalkoxykarbonylu, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C6)-alkylsulfonylu, arylsulfonylu, aryl-(Ci-C6)alkylsulfonylu, ve kterých alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený anebo skupinu fosfonovou,

R2 představuje atom kyslíku nebo atom síry,

R3 představuje atom vodíku, lineární nebo rozvětvenu (Ci-Ce)-alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu nebo aryl-(Ci-C6)-alkylovou skupinu, ve které alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený,

X představuje lineární nebo rozvětvenou (Ci-C6)-alkylenovou skupinu,

R4 představuje skupinu zvolenou:

- z aminové skupiny, substituované případně jednou nebo dvěma identickými nebo rozdílnými skupinami lineárního nebo rozvětveného (Ci-C6)-alkylu, arylu, aryl(Ci-Ce)-alkylu, ve kterých alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený,

- ze skupiny vzorce -N(R3)-Xi-ORs, kde R3 je definováno jak zde uvedeno vpředu, X1 představuje lineární nebo rozvětvenou (Ci-C₆)-alkylenovou skupinu a R₅představuje skupinu zvolenou z vodíku, lineárního nebo rozvětveného (C1-C6)alkylu, arylu, aryl-(Ci-C6)-alkylu, ve kterých alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený,

- ze skupiny vzorce -N(R₃)-X_rNR₆R₇, kde R₃ a Xi jsou definovány jak je zde uvedeno vpředu a R₆ a R₇, které mohou být identické nebo různé, pak každé představuje skupinu zvolenou z vodíku, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)alkylu, arylu, aryl-(Ci-C₆)-alkylu, ve kterých alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený,

- ze skupiny hydroxy,

- z lineární nebo rozvětvené (Ci-C₆)-alkoxylové skupiny,

- ze skupiny aryloxy,

- ze skupiny vzorce -O-X1-OR5, kde R₅ a Xi jsou definovány jak je zde uvedeno vpředu,

- a ze skupiny vzorce -O-X1- NR₆R7, kde R_6l R7 a Χ_Ί jsou definovány jak je zde uvedeno vpředu, dále jejich isomerů a adičních solí z nich s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou, kde ary! označuje skupinu volenou z fenylu, bifenylu, naftylu, dihydronaftylu, tetrahydronaftylu, indenylu, indanylu a benzocyklobutylu, přičemž každá z těchto skupin případně má jeden nebo více identických nebo rozdílných substituentů volených z halogenu, hydroxyskupiny, lineárního nebo rozvětveného (C1-C6)alkylu, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C6)-alkoxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, aminoskupiny, lineární nebo rozvětvené (Ci-C₆)-alkylaminoskupiny, di-(Ci-C6)-alkylaminoskupiny, ve kterých každý alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, karboxylu, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)alkoxykarbonylu, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C6)-trihalogenalkylu, lineární nebo rozvětvené (Ci-Ce)-alkylkarbonyloxyskupiny, lineární nebo rozvětvené (C1C₆)-alkylkarbonylskupiny a aminokarbonylskupiny, ve které každý podíl amino je případně substituován jednou nebo dvěma identickými nebo různými, lineárními nebo rozvětvenými (Ci-C6)-alkylovými skupinami, ‘heteroaryl označuje aromatickou monocyklickou skupinu, aromatickou bicyklickou skupinu nebo bicyklickou skupinu, ve které je jeden kruh aromatický a druhý je částečně hydrogenovaný, z těchto skupin má každá v kruhu od 5 do 12 členů a v kruhovém systému obsahuje jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z kyslíku,

dusíku a síry a s možností, že uvedený heteroaryl je případně substituován týmiž substituenty jako jsou ty, co jsou popisovány pro případ arylskupiny, 'cykloalkyl označuje monocyklickou nebo bicyklickou skupinu, která je nasycená nebo nenasycená, nemá však aromatický charakter, která obsahuje od 3 do 10 uhlíkových atomů a je případně substituována jednou nebo více identickými či rozdílnými skupinami volenými z halogenu, lineárního nebo rozvětveného (CiCe)-alkylu, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)-trihalogenalkylu, hydroxyskupiny, aminoskupiny, lineární nebo rozvětvené (Ci-Cej-alkylaminoskupiny a di-(Ci-C6)-alkylaminoskupiny, ve kterých každý alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený.

heterocykloalkyl označuje cyklloalkylovou skupinu jak je definována shora, obsahující v kruhovém systému jeden nebo dva heteroatomy vybrané z kyslíku, dusíku a síry a uvedený heterocykloalkyl je případně substituován týmiž substituenty jako jsou ty, co jsou popisovány pro případ cykioalkylskupiny.

Jako isomery jsou míněny enantiomery a diastereoisomery.

Bez toho, že by to mělo představovat omezení, mohou být mezi farmaceuticky přijatelnými kyselinami zmíněny kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná, kyselina octová, kyselina trifluoroctová, kyselina mléčná, kyselina pyrohroznová, kyselina malonová, kyselina octová, kyselina jantarová, kyselina glutarová, kyselina fumarová, kyselina hroznová, kyselina maleinová, kyselina citrónová, kyselina askorbová, kyselina šťavelová, kyselina methansulfonová, kyselina kafrová atd.

Jako farmaceuticky přijatelné zásady, aniž by to představovalo omezení mohou být zmíněny hydroxid sodný, hydroxid draselný, triethylamin, íerc-butylamin atd.

Preferovaným substituentem Ri podle vynálezu je vodíkový atom.

Preferovaným substituentem R₂ podle vynálezu je kyslíkový atom.

Při velmi výhodném provedení jsou preferovanými sloučeninami vynálezu sloučeniny vzorce (I), kde X představuje lineární (C2-C4)-alkylenovou skupinu.

Podle vynálezu preferovanými substituenty R3 jsou vodíkový atom a lineární nebo rozvětvená (Ci-C6)-alkylskupina.

Podle výhodného provedení vynálezu, preferovanými sloučeninami vynálezu jsou sloučeniny vzorce (I), kde R4 představuje skupinu volenou :

• z aminové skupiny, substituované případně jednou nebo dvěma identickými nebo rozdílnými skupinami lineárního nebo rozvětveného (Ci-Ce)-alkylu, • ze skupiny vzorce -N(R₃)-X₁-OR₅, v níž R₃ představuje vodíkový atom nebo lineární nebo rozvětvenou (Ci-Ce)-alkylskupinu a R₅a X, jsou definovány jako u vzorce (I), • a ze skupiny vzorce -O-X1-OR5, v níž X1 a R5 jsou definovány jako u vzorce (I).

U zvlášť výhodného provedení jsou preferovanými sloučeninami vynálezu sloučeniny vzorce (I) v němž R4 představuje skupinu -NíR^-XrORs nebo -O-X_rOR5, v níž R₃ představuje vodíkový atom, X1 představuje lineární (C2-C₄)-alkylenový řetězec a R5 představuje vodíkový atom.

Preferovanými sloučeninami vynálezu jsou:

(5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-c/j[1,3]dioxol-5-yl-2-(dimethylamino)ethyl(methyl)karbamát, (5S,5aS,8aft,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-ď|[1,3]dioxol-5-yl-2-(dímethylamino)ethyl(methyí)karbamát, (5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-c/][1,3]dioxol-5-yl-3-(dimethylamino)propyl-karbamát, (5S,5aS,8aS,9/?)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-c/][1,3]dioxol-5-yl-2-(2-hydroxyethoxy)ethyl-karbamát, (5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-c/][1,3]dioxol-5-yl-2-[(2-hydroxyethyl)amino]ethylkarbamát, (5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-c/][1,3]dioxol-5-yl-2-(dimethylamino)ethyl-karbamát.

Isomery a adiční soli preferovaných sloučenin s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou tvoří integrální součást vynálezu.

Předložený vynález zahrnuje také způsob přípravy sloučenin vzorce (I) a tento způsob je charakterizován tím, že se v něm jako výchozí látka používá sloučenina vzorce (II)

která se v zásaditých podmínkách podrobí:

- buď působení sloučeniny vzorce (III):

R'i-X (III), v němž Ri představuje skupinu zvolenou z lineárního nebo rozvětveného (Ci-Ce)alkylu, arylu, aryl-(Ci-C6)-alkylu, ve kterých alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, heteroarylu, heteroaryl-(C₁-C₆)-alkylu, ve kterém alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)-alkylkarbonylu, arylkarbonylu, aryl-(Ci-C₆)-alkylkarbonylu, ve kterých alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, heterocykloalkykarbonylu, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)alkylsulfonylu, arylsulfonylu, aryl-(Ci-C₆)-alkylsulfonylu, ve kterých alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený a X představuje atom vodíku nebo atom halogenu, za vzniku sloučeniny vzorce (IV/A):

MeO ♦ ··«· ·· · ♦ · ···· • · · · · · · · · · • · · · · ··· kde R'-i je jak je zde již vpředu definováno,

- nebo působení sloučeniny vzorce (V):

G - L (V), v němž G představuje konvenční chránící skupinu pro hydroxylové funkce a L představuje v organické chemii obvyklou odcházející skupinu, za vzniku sloučeniny vzorce (IV/B):

kde G je jak je zde již vpředu definováno, přičemž sloučeniny vzorců (IV/A) a (IV/B) tvoří dohromady sloučeniny vzorce (IV):

kde T představuje skupinu R'i nebo G, jak jsou zde již vpředu definovány, a tato sloučenina vzorce (IV) se v zásaditém prostředí podrobí reakci se sloučeninou vzorce (VI):

Ph-O-C(R₂)CI (VI), kde Ph představuje případně substituovanou fenylovou skupinu a R₂ představuje atom kyslíku nebo atom síry, za vzniku sloučeniny vzorce (VII):

«··«· ·· · ······ • · · · · · · ·· · • · ··· ·*·· • · · · ·· · · · * · ··

kde T, Ph a R₂ jsou jak zde již vpředu definováno, a tato sloučenina vzorce (VII) se v zásaditém prostředí podrobí reakcí se sloučeninou vzorce (Vlil):

R4-X-NH-R₃ (Vlil), kde R₄, R₃ a X jsou definovány jako pro vzorec (I), '* za vzniku příslušných sloučeninyvzorce (l/a), zvláštní případ sloučenin vzorce (I) nebo sloučenin vzorce (IX) podle toho, zda T představuje skupinu Rj nebo skupinu

(l/a)

kde Rj, G, R₂, R3, R₄ a X jsou, jak zde již vpředu definováno,

hydroxylová funkce každé sloučeniny vzorce (IX) se konvenčními metodami organické chemie zbaví chránící skupiny a poskytuje sloučeniny vzorce (l/b), zvláštní případ sloučenin vzorce (I):

kde R₂, R3, R4a Xjsou definovány jako pro vzorec (I), přičemž sloučeniny (l/a) a (l/b) dohromady tvoří sloučeniny podle vynálezu a pokud to je nutné, čistí se tyto sloučeniny pomocí konvenční rafinační techniky, je-li to žádoucí, mohou být konvenční separační technikou rozděleny na své různé isomery a pokud se to žádá konvertovány na jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou.

Sloučeniny vzorců (II), (V), (VI) a (Vlil) jsou buď komerčně dostupné sloučeniny nebo se získávají konvenčními metodami organické syntézy.

Sloučeniny vzorce (I) vykazují zvláště cenné protinádorové vlastnosti. Mají proti řadám buněk myších a lidských nádorů vynikající cytotoxicitu in vitro a jsou účinné in vivo. Charakteristické vlastnosti těchto sloučenin je opravňují, aby byly jako protinádorové prostředky terapeuticky využívány.

Předkládaný vynález se týká také farmaceutických kompozic obsahujících jako účinnou složku nejméně jednu ze sloučenin vzorce (I), jejího optického isomeru nebo adiční soli z ní s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou, samotné nebo v kombinaci s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými, inertními, netoxickými excipienty nebo nosiči.

Mezi kompozicemi podle vynálezu mohou být zejména zmíněny zvláště ty, které jsou vhodné pro orální, parenterální (intravenozní, intramuskulární nebo subkutánní), per- či transkutánní, nazální, rektální, perlingvální, okulámí nebo

respirační aplikaci a zejména tablety nebo dražé, sublingvální tablety, měkké želatinové kapsle, tvrdé želatinové kapsle, čípky, krémy, masti, dermální gely, preparáty k injekcím a k pití, aerosoly, oční nebo nosní kapky atd.

Užitečná dávka kolísá podle věku a hmotnosti pacienta, cesty podávání, povahy a vážnosti onemocnění a aplikace přidružených ošetření a je v rozsahu od 0,5 do 500 mg denně při jednom nebo více podávání.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady vynález objasňují, avšak žádným způsobem jej neomezují. Použité výchozí látky jsou buď známými produkty nebo jsou produkty připravenými podle známých postupů.

Preparace 1:

(5S,5aS,8aS,9/?)-9-(4-{[(benzyloxy)karbonyl]oxy}-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl-4-nitrofenylkarbonát

Krok 1:

4-[(5R, 5aS, 8aS, 9S)-9-hydroxy-6-oxo-5,5a, 6,8,8a, 9-hexahydrofuro[34 ':6,7]nafto[2,3d][ 1,3]dioxol-5-yl-2,6-dimethoxyfenyl-benzylkarbonát

0,55 mmol triethylaminu a 0,37 mmol benzyl-chlormravenčanu bylo postupně přidáno k roztoku 0,25 mmol (5R,5aS,8aS,9S)-9-hydroxy-5-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)5,8,8a,9-tetrahydrofuro[3\4':6,7]nafto[2,3-ď][1,3]dioxol-6(5aH)-onu v 10 ml bezvodého dichlormethanu při 0 °C pod argonem. Po míchání 1 hodinu byla reakční směs promyta vodou. Organická fáze byla potom vysušena, filtrována a poté za sníženého tlaku zkoncentrována. Chromatografie na silikagelu (cyklohexan / ethylacetát, 60 : 40) umožnila, že byl izolován očekávaný produkt.

·· · 4 · ·

Krok 2:

(5S, 5aS, 8aS, 9R)-9-(4-{[(benzyloxy)karbonyl]oxy}-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo5,5a, 6,8,8a, 9-hexahydrofuro[34 26,7Jnafto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl-4-nitrofenylkarbonát

0,155 mmol bezvodého pyridinu bylo přidáno k roztoku 1,71 mmol p-nitrofenylchlormravenčanu v 5 ml bezvodého dichlormethanu. V reakční směsi se vytvořil bílý precipitát. Potom byl pod argonem po kapkách přidáván roztok 0,502 mmol v kroku 1 získané sloučeniny v 5 ml dichlormethanu. Při okolní teplotě bylo 45 minut mícháno a potom bylo do reakční směsi nalito 15 ml vody. Organická fáze byla promyta vodou, vysušena nad MgSO4, filtrována a za sníženého tlaku zkoncentrována. Chromatografie na silikagelu (cyklohexan / ethyl-acetát, 4:1) umožnila, že byl izolován očekávaný produkt. Bod tání - 125-130 °C

Příklad 1 (5S,5aS,8aS,9/?)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8_s8a,9hexahydrofuro[3'_;4':6,7]nafto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl-2-(dimethylamino)ethyl(methyl )-karbamát

Krok 1

4~[(5R,5aS,8aS,9S)-9-({[[2-(dimethylamino)ethyl](methyl)amino]-karbonyl}oxy)-6-oxo5,5a, 6,8,8a, 9-hexahydrofuro[34 ':6,7]nafto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yf]-2,6-dimethoxyfenyl-benzylkarbonát

0,228 mmol Ν,Ν,Ν'-trimethylethylendiaminu a 0,228 mmol triethylaminu bylo při okolní teplotě, pod argonem, postupně přidáno k roztoku 0,171 mmol sloučeniny z preparace 1 v 5 ml bezvodého dichlormethanu. Po jednohodinovém míchání byla reakční směs hydrolyzována. Na to byla organická fáze promyta vodou, potom vysušena nad MgSCU, filtrována a za sníženého tlaku zkoncentrována. Chromatografie na silikagelu (dichlormetan / methanol, 97 : 3) umožnila, že byl izolován očekávaný produkt. Bod tání - 102-103 °C

9· 9 99 ·»··

9 99 9 9 · · · · » ·

9 9 • · · 9 9 9 9

999 99 99

Krok 2 (5S, 5aS, 8aS, 9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a, 6,8,8a, 9-hexahydrofuro[3',4':6,7Jnafto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl-2-(dimethylamino)ethyl(methyl)-karbamát %-ní palladium na uhlí (90,8 mg) bylo přidáno k roztoku 0,138 mmol sloučeniny získané v kroku 1 v 8 ml ethyl-acetátu. Reakční směs byla 1 hodinu 45 minut míchána v atmosféře vodíku a potom filtrována přes Celit, aby se odstranil katalyzátor. Filtrát byl pak za sníženého tlaku zkoncentrován. Surový zbytek byl chromatografován na silikagelu (dichlormetan I methanol, 96 ; 4) a tak bylo možné izolovat očekávaný produkt. Bod tání = 184-18G°C. Hmotnostní spektrum (ES / MS): m/z = 529[M + Hf, 551 [M + Naf.

Příklad 2 (5S,5aS,8a/?₎9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofurotS^^ejlnaftotŽ.S-ďHI.Sldioxol-S-yl-Ž-tdimethylaminoJethyKmethyl)karbamát

Krok 1

4-[(5R, 5aR, 8aS, 9S)-9-({[[2-(dimethylamino)ethyl](methyl)amino]-karbonyl}oxy)-6-oxo5,5a, 6,8,8a, 9-hexahydrofuro[3', 4 ':6,7]nafto[2,3-d][ 1,3]dioxol-5-yl]-2,6-dimethoxyfenyl-benzylkarbonát

0,184 mmol Ν,Ν,Ν'-trimethylethylendiaminu a 0,184 mmol triethylaminu bylo postupně přidáno k roztoku 0,141 mmol sloučeniny z preparace 1 ve 4 ml bezvodého dichlormethanu. Po 2 hodinách 30 minutách míchání při okolní teplotě pod argonem, byly k reakční směsi přidány 3 ml tetrahydrofuranu a 1 M roztok tetrabutylamoniumfluoridu (0,285 mmol) v tetrahydrofuranu. Po 2 hodinách reakce bylo přidáno 0,3 mmol tetrabutylamonium-fluoridu. 3 hodiny 30 minut bylo uskutečňováno míchání a reakční směs byla pak nalita do vody (15 ml) a zředěna dichlormethanem (10 ml). Vodná fáze byla extrahována dichlormethanem a spojené organické fáze byly promyty s vodou a nasyceným vodným roztokem NaCI a potom vysušeny nad MgSO₄, filtrovány a za sníženého tlaku zkoncentrovány. Chromatografie na silikagelu ·· ·· ·· · ··· ···· · · * · · · • ·· · · · · ·

(dichlormethan / methanol, 97 : 3) umožnila, že byl izolován očekávaný produkt.

Hmotnostní spektrum (DIC / NH₃): m/z = 663 [M + H]⁺.

Krok 2 (5S,5a S, 8aR, 9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a, 6,8,8a, 9-hexahydrofuro[3', 4 ':6,7]nafto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl-2-(dimethylamino)ethyl(methyl)karbamát

Produkt byl získán podle postupu uvedeného v kroku 2 v příkladu 1 a jako substrát byla použita sloučenina získaná shora v kroku 1. Hmotnostní spektrum (DIC/NH₃): m / z = 529 [M + H]\

Příklad 3 (5S,5aS,8aS,9/?)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-f/][1,3]dioxol-5-yl-3-(dimethylamino)propylkarbamát

Produkt byl získán podle postupu uvedeného v příkladu 1, v kroku 1 a 2, za použití dimethylaminopropylaminu jako reagentu v kroku 1 namísto Ν,Ν,Ν'-trimethylethylendiaminu. [a]_D (CHCI3) = -23°, hmotnostní spektrum (DIC / NH₃): m / z = 529 [M + H]\

Příklad 4 (5S,5aS,8aS,9/?)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-tfj[1,3]dioxol-5-yl-2-(2-hydroxyethoxy)ethyl-karbamát,

Produkt byl získán podle postupu uvedeného v příkladu 1, v kroku 1 a 2, za použití 2-aminoethoxyethanolu jako reagentu v kroku 1 namísto Ν,Ν,Ν'-trimethyl· ethylendiaminu. Hmotnostní spektrum (DIC / NH₃): m /z = 683 [Μ + NH₄]⁺.

Příklad 5 (5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydro-furo[3',4':6,7]nafto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl-2-[(2-hydroxyethyl)amino]ethylkarbamát,

Produkt byl získán podle postupu uvedeného v příkladu 1, v kroku 1 a 2, za použití 2aminoethylaminoethanolu jako reagentu v kroku 1 namísto Ν,Ν,Ν’-trimethylethylendiaminu.

Příklad 6 (5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3 ',4 :6,7]nafto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl-2-(dimethylamino)ethyl-karbamát.

Produkt byl získán podle postupu uvedeného v příkladu 1, v kroku 1 a 2, za použití dimethylaminoethylaminu jako reagentu v kroku 1 namísto Ν,Ν,Ν’-trimethylethylendiaminu.

FARMAKOLOGICKÁ STUDIE SLOUČENIN PODLE VYNÁLEZU

Příklad 7

Aktivita in vitro

Sloučeniny podle vynálezu byly testovány na různých lidských a myších buněčných liniích:

- myší leukemie L1210,

- epidermoidální karcinom A-431,

- plicní nemalobuněčný karcinom A549,

- plicní karcinom malých buněk H69,

- karcinom tlustého střeva HT29,

- epidermoidální bukální karcinom KB-3-1.

• ·· · *· ·· ·· · ·· ···· · » · · ·· • ·· · · · · · • · ··· · · ·· · ή κ ······ · · • ···· ·· ·· ··· ··

Buňky byly kultivovány v kompletním RPMI 1640 kultivačním mediu obsahujícím 10 % fetálního telecího séra, 2 mM glutaminu, 50 jednotek / ml penicilinu, 50 μ9 / ml strepromycinu a 10 mM Hepes, pH 7,4. Buňky byly rozmístěny na mikrodesky a byly vystaveny cytotoxickým sloučeninám ve čtyřech zdvojených periodách, to jest 48 hodin nebo 96 hodin. Počet životaschopných buněk byl kvantifikován kolorimetrickým esejem, Microculture Tetrazolium Assay (J. Carmichael a spol., Cancer Res. 47, 936-942 (1987)). Výsledky jsou vyjádřeny jako IC50, cytotoxická koncentrace, která inhibuje proliferaci buněk z 50 %. Při těchto testech poskytuje sloučenina z příkladu 6 tyto hodnoty IC50:

IC50 (μΜ)

	L1210	A-431	A549	H69	HT29	KB-3-1
Příklad 6	0,038	0,071	0,046	0,096	0,121	0,085

Příklad 8

Účinek na buněčný cyklus

Buňky L1210 byly inkubovány 21 hodin při 37°C v přítomnosti testovaných sloučenin o různých koncentracích. Potom byly buňky zafixovány za použití 70 % (obj./obj.) ethanolu, dvakrát promyty v PBS a inkubovány 30 minut při 20°C v PBS, které obsahuje 100 μ9 / ml RNAsy a 50 μ9 / ml propidium jodidu. Výsledky jsou vyjádřeny jako procentický obsah buněk, které se akumulovaly v G2+M fázi po 21 hodinách ve srovnání s kontrolou (kontrola: 20 %). Při koncentraci 100 nM přivodí sloučenina z příkladu 6 v G2+M fázi po 21 hodinách 86 %-ní akumulaci buněk.

Příklad 9

Aktivita in vivo * Protinádorová aktivita sloučenin na leukémii P388

Řada P388 (myší leukemie) byla dodána od National Cancer Institute (Frederick, USA). Nádorové buňky (10⁶ buněk) byly v den 0 naočkovány do peritoneální dutiny samic BDF1 myší (Iffa-Credo, Francie) o hmotnosti od 18 g do 20 g (skupiny po 6 zvířatech). Produkty byly podávány intravenozní cestou v den 1. Protinádorová aktivita se vyjadřuje jako % T/C:

• ·· ·

Střední doba přežití ošetřených zvířat % T/C = -- x WO

Střední doba přežití kontrolních zvířat

Sloučenina z příkladu 6 je vůči leukémii P388 aktivní a vyvolává T/C 203 % při 6,25 mg/kg.

• Protinádorová aktivita sloučenin na Lewisův plicní karcinom:

Lewisův plicní karcinom (LLC) je tuhý nádor, který se spontánně objevuje v plicích C57B1/6 myši a vytrvává při následných transplantacích fragmentů subkutánní cestou. LLC byl získán od Division of Cancer Treatment, Tumor Repository, National Cancer Institute, Frederick, MD, USA. Myši, které byly 4 až 6 týdnů staré, byly získány od Iffa Credo (Lyon, Francie) a na začátku experimentu měly hmotnost od 20 g do 22 g.

První den experimentu (D 0) byly odstraněny nádory a nařezány na fragmenty přibližně o 30 mg, které byly bezprostředně subkutánní cestou transplantovány do B6D2F1 myší. Myši, kterým byly fragmenty implantovány, byly náhodně rozděleny na ošetřované skupiny a kontrolní skupinu (7 zvířat na skupinu).

Parametrem užívaným pro zhodnocení protinádorové aktivity je vzrůst doby přežití. Kromě toho počet přeživších zvířat v každé skupině byl počítán na konci experimentu v den 90.

Produkty byly podávány podle níže uvedeného rozvrhu. Výsledky jsou vyjadřovány jako T/C, vypočtené stejným, způsobem jako v předcházejícím testu:

Produkt	Dávka (mg/kg)	Cesta	Rozvrh	T/C %	Přeživší D 90
Příklad 1	25	intravenozně	D4, 8, 12	165	1/7
Příklad 6	3,12	intravenozně	D4, 8, 12	168	1/7

Příklad 10

Farmaceutická kompozice : injekční roztok

Sloučenina z příkladu.....................................................10 mg

Destilovaná voda pro injekční preparáty........................25 ml • φφφφ ·· · φ φ ···· φ φ · φ φ · φ φφ φ

Claims

7χΟ 2

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučeniny vzorce (I);

kde

Ri představuje skupinu zvolenou z vodíku, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)alkylu, arylu, aryl-(Ci-C6)-alkylu, ve kterém alkýlový podíl může být lineární nebo rozvětvený, heteroarylu, heteroaryl-(Ci-C₆)-alkylu, ve kterém alkýlový podíl může být lineární nebo rozvětvený, lineárního nebo rozvětveného (C1-C6)alkoxykarbonylu, aryloxykarbonylu, aryl-(Ci-C₆)-alkoxykarbonylu, ve kterém alkoxylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, heterocykloalkoxykarbonylu, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)-alkylsulfonylu, arylsulfonylu, aryl-(Ci-C₆)alkylsulfonylu, ve kterém alkýlový podíl může být lineární nebo rozvětvený anebo skupinu fosfonovou,

R₂ představuje atom kyslíku nebo atom síry,

R₃ představuje atom vodíku, lineární nebo rozvětvenu (Ci-Ce)-alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu nebo aryl-(Ci-C₆)-alkylovou skupinu, ve které alkýlový podíl může být lineární nebo rozvětvený,

X představuje lineární nebo rozvětvenou (Ci-C6)-alkylenovou skupinu,

R₄ představuje skupinu zvolenou:

- z aminové skupiny, substituované případně jednou nebo dvěma identickými nebo rozdílnými skupinami lineárního nebo rozvětveného (Ci-Ce)-alkylu, arylu a aryl(Ci-Ce)-alkylu, ve kterém alkýlový podíl může být lineární nebo rozvětvený, • ·

- ze skupiny vzorce -N(R₃)-Xi-OR₅₎ kde R₃ je definováno jak je zde uvedeno vpředu, Xi představuje lineární nebo rozvětvenou (Ch-Cej-alkylenovou skupinu a R₅ představuje skupinu zvolenou z vodíku, lineárního nebo rozvětveného (CiCe)- alkylu, arylu, aryl-(Ci-C6)-alkylu, ve kterém alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený,

- ze skupiny vzorce -N(R₃)-X₁-NR₆R₇, kde R₃ a Xi jsou definovány jak je zde uvedeno vpředu a každé R₆ a R7, které mohou být identické nebo různé, představuje skupinu zvolenou z vodíku, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)alkylu, arylu, aryl-(Ci-C₆)-alkylu, ve kterém alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený,

- ze skupiny hydroxylové,

- z lineární nebo rozvětvené (Ci-C₆)-alkoxylové skupiny,

- ze skupiny aryloxy,

- ze skupiny vzorce -Ο-Χτ-ORs, kde R₅ a Xt jsou definovány jak je zde uvedeno vpředu,

- a ze skupiny vzorce -O-Xi-NR₆R7, kde R₆, R₇ a Xi jsou definovány jak je zde uvedeno vpředu, dále jejich isomerů a jejich adičních solí s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou, kde 'aryl označuje skupinu volenou z fenylu, bifenylu, naftylu, dihydronaftylu, tetrahydronaftylu, indenylu, indanylu a benzocyklobutylu, přičemž každá z těchto skupin má případně jeden nebo více identických nebo rozdílných substituentů volených z halogenu, hydroxyskupiny, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)alkylu, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)-alkoxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, aminoskupiny, lineární nebo rozvětvené (Ci-C₆)-alkylaminoskupiny, di-(Ci-C6)-alkylaminoskupiny, ve které každý alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, karboxylu, lineárního nebo rozvětveného (C1-C6)alkoxykarbonylu, lineárního nebo rozvětveného (C-i-C6)-trihalogenalkylu, lineární nebo rozvětvené (Ci-C₆)-alkylkarbonyloxyskupiny, lineární nebo rozvětvené (C1C₆)-alkylkarbonylskupiny a aminokarbonylskupiny, ve které každý podíl amino je případně substituován jednou nebo dvěma identickými nebo různými, lineárními nebo rozvětvenými (Ci-C6)-alkylovými skupinami, heteroaryl označuje aromatickou monocyklickou skupinu, aromatickou bicyklickou skupinu nebo bicyklickou skupinu, ve které je jeden kruh aromatický a druhý je částečně hydrogenovaný, přičemž každá z takových skupin má v kruhu od 5 do 12 členů a v kruhovém systému obsahuje jeden, dva nebo tři heteroatomy vybrané z kyslíku, dusíku a síry, přičemž uvedený heteroaryl je případně substituován týmiž substituenty jako jsou takové, jako jsou popisovány pro případ arylskupiny, 'cykloalkyl označuje monocyklickou nebo bicyklickou skupinu, která je nasycená nebo nenasycená, nemá však aromatický charakter, která obsahuje od 3 do 10 uhlíkových atomů a je případně substituována jednou nebo více identickými či rozdílnými skupinami volenými z halogenu, lineárního nebo rozvětveného (CiCe)-alkylu, lineárního nebo rozvětveného (CrCeJ-trihalogenalkylu, hydroxyskupiny, aminoskupiny, lineární nebo rozvětvené (Ci-C₆)-alkylaminoskupiny a di(Ci-C₆)-alkylaminoskupiny, ve kterých každý alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený.

'heterocykloalkyl označuje cyklloalkylovou skupinu jak je definována shora, obsahující v kruhovém systému jeden nebo dva heteroatomy vybrané z kyslíku, dusíku a síry a uvedený heterocykloalkyl je případně substituován týmiž substituenty jako jsou ty, co jsou popisovány pro případ cykloalkylskupiny.

'isomery znamenají enantiomery a diastereoisomery.
2. Sloučeniny vzorce (I) podle nároku 1, kde Ri představuje vodíkový atom, jejich isomery a také jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou.
3. Sloučeniny vzorce (I) podle nároku 1, kde R₂ představuje kyslíkový atom, jejich isomery a také jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou.
4. Sloučeniny vzorce (I) podle nároku 1, kde X představuje (C2-C4)alkylenovou skupinu, jejich isomery a také jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou.
5. Sloučeniny vzorce (I) podle nároku 1, kde R₃ představuje vodíkový atom nebo lineární či rozvětvenou (Ci-Ce)-alkylovou skupinu, jejich isomery a také jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou.
6. Sloučeniny vzorce (I) podle nároku 1, kde R₄ představuje skupinu zvolenou:

• z aminové skupiny, substituované jednou nebo dvěma identickými nebo rozdílnými skupinami lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)-alkylu, • ze skupiny vzorce -N(R₃)-Xi-ORs, v níž R₃ představuje vodíkový atom nebo lineární nebo rozvětvenou (Ci-Ce)-alkylskupinu a Rs a Xi jsou definovány jako u vzorce (I), • a ze skupiny vzorce -O-X1-OR5, v níž X1 a R5 jsou definovány jako u vzorce (I), jejich isomery a také jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou.
7. Sloučeniny vzorce (I) podle nároku 1 nebo nároku 6, kde R₄ představuje skupinu -N(R₃)-Xi-OR5 nebo -O-X1-OR5, v níž R₃ představuje vodíkový atom, X1 představuje lineární (C2-C₄)-alkyIenový řetězec a R5 představuje vodíkový atom, jejich isomery a také jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou.
8. Sloučeniny vzorce (I) podle nároku 1, kterými jsou:

(5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl-2-(dimethylamino)ethyl(methyl)karbamát, (5S,5aS,8aR,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-ď|[1,3]dioxol-5-yl-2-(dimethylamino)ethyl(methyl)karbamát, (5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-cfj[1,3]dioxol-5-yl-3-(dimethylamino)propyl-karbamát, (5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl-2-(2-hydroxyethoxy)ethyl-karbamát, • · · · (5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-ď|[1,3]dioxol-5-yl-2-[(2-hydroxyethyl)arnino]ethylkarbamát, a (5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexa-hydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][1,3]dioxol-5-yl-2-(dimethylamino)ethylkarbamát, a jejich isomery a také jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou.
9. Způsob přípravy sloučenin vzorce (I) vyznačující se tím, že se jako výchozí látka použije sloučenina vzorce (II):

která se v zásaditých podmínkách podrobí:

- buď působení sloučeniny vzorce (III):

R’rX (HI), v němž Ri představuje skupinu zvolenou z lineárního nebo rozvětveného (Οι-Οβ)alkylu, arylu, aryl-(Ci-Ce)-alkylu, ve kterém alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, heteroarylu, heteroaryl-(Ci-C₆)-alkylu, ve kterém alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C6)-alkylkarbonylu, arylkarbonylu, aryl-(Ci-C6)-alkylkarbonylu, ve kterém alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, heterocykloalkykarbonylu, lineárního nebo rozvětveného (Ci-C₆)alkylsulfonylu, arylsulfonylu a aryl-(Ci-C6)-alkylsulfonylu, ve kterém alkylový podíl může být lineární nebo rozvětvený, a X představuje atom vodíku nebo atom halogenu, za vzniku sloučeniny vzorce (IV/A):

• ··φ· · · · *· ···· • · · · · ·· ·· · • · · · · · · · · • · · · · * · · · · · · · kde R'i je jak je zde již vpředu definováno,

- nebo působení sloučeniny vzorce (V):

G - L (V), v němž G představuje konvenční chránící skupinu pro hydroxylové funkce a L představuje v organické chemii obvyklou odcházející skupinu, za vzniku sloučeniny vzorce (IV/B):

kde G je jak zde je již vpředu definováno, přičemž sloučeniny vzorců (IV/A) a (IV/B) tvoří dohromady sloučeniny vzorce (IV):

(iv) kde T představuje skupinu Rj nebo G, jak jsou zde již vpředu definovány, a tato sloučenina vzorce (IV) se v zásaditém prostředí podrobí reakci se sloučeninou vzorce (VI):

Ph-O-C(R₂)CI (VI), kde Ph představuje případně substituovanou fenylovou skupinu a R₂ představuje atom kyslíku nebo atom síry, za vzniku sloučeniny vzorce (VII):

kde T, Ph a R₂ jsou jak zde již vpředu definováno, a tato sloučenina vzorce (VII) se v zásaditém prostředí podrobí reakci se sloučeninou vzorce (Vlil):

R4-X-NH-R3 (Vlil), kde R₄, R₃ a Xjsou definovány jako pro vzorec (I), ► · · · · · takže poskytne příslušné sloučeniny vzorce (l/a), zvláštní případ sloučenin vzorce (I) nebo sloučenin vzorce (IX) podle toho, zda T představuje skupinu R^ nebo skupinu G, (l/a) kde R'i, G, R₂, R3, R4 a X jsou, jak je zde již vpředu definováno, přičemž hydroxylová funkce každé sloučeniny vzorce (IX) se konvenčními metodami organické chemie zbaví chránící skupiny a poskytuje sloučeniny vzorce (l/b), zvláštní případ sloučenin vzorce (I):

kde R₂, R3, R4a X jsou definovány jako pro vzorec (I), přičemž sloučeniny (l/a) a (l/b) dohromady tvoří sloučeniny podle vynálezu a pokud to je nutné, čistí se tyto sloučeniny pomocí konvenční rafinační techniky, je-li to žádoucí, mohou být konvenční separační technikou rozděleny na své různé isomery • 9 999 ·· · 9 9 · ·· 9

9 9 9 · 9 9 9 · · 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 ·

99 999 9999

9999 99 999 99 99 a pokud se to žádá, konvertovány na jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnou kyselinou nebo zásadou.
10. Farmaceutické kompozice vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahují nejméně jednu sloučeninu podle některého z nároků 1 až 8, samotnou nebo v kombinaci s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými inertními netoxickými excipienty nebo nosiči.
11. Farmaceutické kompozice podle nároku 10, obsahující nejméně jednu účinnou složku podle některého z nároků 1 až 8, k použití při ošetřováni rakoviny.