SK682003A3

SK682003A3 - Carbamate and thiocarbamate podophyllotoxin derivatives, preparation method and pharmaceutical compositions containing them

Info

Publication number: SK682003A3
Application number: SK68-2003A
Authority: SK
Inventors: Claude Monneret; Emmanuel Bertounesque; Philippe Meresse; Ghanem Atassi; Alain Pierre; John Hickman; Bruno Pfeiffer; Pierre Renard
Original assignee: Servier Lab
Priority date: 2000-06-20
Filing date: 2001-06-19
Publication date: 2003-05-02
Also published as: AU2001269190B2; PT1292597E; FR2810321A1; HUP0301612A2; FR2810321B1; ZA200209639B; WO2001098307A1; ATE261975T1; US6878746B2; DE60102378T2; EP1292597A1; MXPA02012570A; HUP0301612A3; CA2413515A1; DE60102378D1; CN1191257C; CZ2003172A3; PL359460A1; EA200300029A1; US20040101574A1

Description

Karbamátové a tiokarbamátové deriváty podofylotoxínu, spôsob ich prípravy a farmaceutické kompozície s ich obsahom

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka nových karbamátových a tiokarbamátových derivátov podofylotoxínu, spôsobu ich prípravy a farmaceutických kompozícií, ktoré ich obsahujú.

Doterajší stav techniky

Zlúčeniny podľa vynálezu sú derivátmi podofylotoxínu, prírodného lignánu, ktorý je známy kvôli svojmu použitiu pri ošetrovaní rakoviny. Iné syntetické deriváty, ako etopozid a tenipozid sú bežne používané ako chemoterapeutické prostriedky najmä pri ošetrovaní pľúcnej rakoviny malých buniek. Rôzne také zlúčeniny pôsobia inhibovaním katalytickej aktivity topoizomerázy II.

U takých zlúčenín boli uskutočňované rôzne modifikácie, ako sú modifikácie opísané v patentových prihláškach JP 948782, WO 97/13776 a US 3,634,459. Avšak požiadavky terapie proti rakovine volajú po neustálom vývoji nových protinádorových a cytotoxických prostriedkov za účelom získavania liečiv, ktoré sú súčasne viac účinné, viac rozpustné a sú lepšie znášané.

Podstata vynálezu

Popri tej skutočnosti, že zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú nové, majú aj prekvapujúcu účinnosť in vitro a in vivo, lepšiu než je doposiaľ pozorovaná. Prihlasovateľom objavené zlúčeniny majú teda vlastnosti, ktoré ich robia zvlášť užitočnými pri ošetrovaní rakovinových ochorení.

Konkrétnejšie sa potom predložený vynález týka zlúčenín vzorca (I):

(D

kde

Ri predstavuje skupinu zvolenú z vodíka, lineárneho alebo rozvetveného (CiCč)-alkylu, arylu, aryl-(Ci-C6)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, heteroarylu, heteroaryl-(Ci-C6)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Ce)-alkoxykarbonylu, aryloxykarbonylu, aryl-(Ci-Cô)alkoxykarbonylu, v ktorom alkoxylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, heterocykloalkoxykarbonylu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-C6)-alkylsulfonylu, arylsulfonylu, aryl-(Ci-C6)-alkylsulfonylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený alebo skupinu fosfónovú,

R-2 predstavuje atóm kyslíka alebo atóm síry,

R3 predstavuje atóm vodíka, lineárnu alebo rozvetvenú (Ci-Cg)-alkylovú skupinu, cykloalkylovú skupinu alebo aryl-(Ci-Ce)-alkylovú skupinu, v ktorej alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený,

X predstavuje lineárnu alebo rozvetvenú (Ci-Cg)-alkylénovú skupinu,

R₄ predstavuje skupinu zvolenú:

- z aminoskupiny, substituovanej prípadne jednou alebo dvoma identickými alebo rozdielnymi skupinami vybranými z lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Côj-alkylu, arylu a aryl-(Ci-C6)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, zo skupiny vzorca -N(R3)-Xj-OR5, kde R3 je definované ako je tu uvedené vyššie, Xi predstavuje lineárnu alebo rozvetvenú (Ci-Côj-alkylénovú skupinu a R5 predstavuje skupinu zvolenú z vodíka, lineárneho alebo rozvetveného (Cj-Čej-alkylu, arylu, aryl-(Ci-C6)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, .

zo skupiny vzorca -N(R₃)-Xi-NR₆R7, kde R₃ a Xi sú definované ako je tu uvedené vyššie a každé Rô a R7, ktoré môžu byť identické alebo rôzne, predstavuje skupinu zvolenú z vodíka, lineárneho alebo rozvetveného (CiCéj-alkylu, arylu, aryl-(Ci-Ce)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, zo skupiny hydroxylovej, z lineárnej alebo rozvetvenej (Ci-Cô)-alkoxylovej skupiny, zo skupiny aryloxy, zo skupiny vzorca -O-X1-OR5, kde R5 a Xi sú definované ako je tu uvedené vyššie, a zo skupiny vzorca -O-Χι- NR6R7, kde Ré, R7 a Xi sú definované ako je tu uvedené vyššie, ďalej ich izomérov a ich adičných solí s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou, kde *aryl označuje skupinu zvolenú z fenylu, bifenylu, naftylu, dihydronaftylu, tetrahydronaftylu, indenylu, indanylu a benzocyklobutylu, pričom každá z týchto skupín má prípadne jeden alebo viac identických alebo rozdielnych substituentov volených z halogénu, hydroxyskupiny, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Côj-alkylu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Cô)alkoxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, aminoskupiny, lineárnej alebo rozvetvenej (Ci-Côj-alkylaminoskupiny, di-(Ci-C6)-alkylaminoskupiny, v ktorej každý alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, karboxylu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Côj-alkoxykarbonylu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Cgj-trihalogénalkylu, lineárnej alebo rozvetvenej (Ci-C6)-alkylkarbonyloxyskupiny, lineárnej alebo rozvetvenej (Ci-C6)-alkylkarbonylskupiny a aminokarbonylskupiny, v ktorej každý podiel amino je prípadne substituovaný jednou alebo dvoma identickými alebo rôznymi, lineárnymi alebo rozvetvenými (Ci-C6)-alkylovými skupinami, * heteroaryl označuje aromatickú monocyklickú skupinu, aromatickú bicyklickú skupinu alebo bicyklickú skupinu, v ktorej je jeden kruh aromatický a druhý je čiastočne hydrogenovaný, pričom každá z týchto skupín má v kruhu od 5 do 12 členov a v kruhovom systéme obsahuje jeden, dva alebo tri heteroatómy vybrané z kyslíka, dusíka a síry a s možnosťou, že uvedený heteroaryl je prípadne substituovaný tými istými substituentmi ako sú tie, čo sú opisované pre prípad arylskupiny, *cykloalkyl označuje monocyklickú alebo bicyklickú skupinu, ktorá je nasýtená alebo nenasýtená, nemá však aromatický charakter, ktorá obsahuje od 3 do 10 uhlíkových atómov a je prípadne substituovaná jednou alebo viacerými identickými alebo rozdielnymi skupinami volenými z halogénu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Cô)-alkylu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Cô)trihalogénalkylu, hydroxyskupiny, aminoskupiny, lineárnej alebo rozvetvenej (Ci-Côj-alkylamino-skupiny a di-(Ci-C6)-alkylaminoskupiny, v ktorej každý alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený.

‘heterocykloalkyl označuje cykloalkylovú skupinu ako je definovaná vyššie, obsahujúcu v kruhovom systéme jeden alebo dva heteroatómy vybrané z kyslíka, dusíka a síry a uvedený heterocykloalkyl je prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi ako sú tie, čo sú opisované pre prípad cykloalkylskupiny.

Ako izoméry sú mienené enantioméry a diastereoizoméry.

Bez toho, že by to malo predstavovať obmedzenie, môžu byť medzi farmaceutický prijateľnými kyselinami spomenuté kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná, kyselina octová, kyselina trifluóroctová, kyselina mliečna, kyselina pyrohroznová, kyselina malónová, kyselina jantárová, kyselina glutarová, kyselina fumarová, kyselina hroznová, kyselina maleínová, kyselina citrónová, kyselina askorbová, kyselina šťaveľová, kyselina metánsulfónová, kyselina gáfrová atď.

Ako farmaceutický prijateľné zásady, bez toho, aby to predstavovalo obmedzenie, môžu byť spomenuté hydroxid sodný, hydroxid draselný, trietylamín, Zerc-butylamín atď.

Preferovaným substituentom Ri podľa vynálezu je vodíkový atóm.

Preferovaným substituentom R2 podľa vynálezu je kyslíkový atóm.

Vo veľmi výhodnom uskutočnení sú preferovanými zlúčeninami vynálezu zlúčeniny vzorca (I), kde X predstavuje lineárnu (C2-C4)-alkylénovú skupinu.

Podľa vynálezu preferovanými substituentmi R3 sú vodíkový atóm a lineárna alebo rozvetvená (C]-C6)-alkylskupina.

Podľa výhodného uskutočnenia vynálezu, preferovanými zlúčeninami vynálezu sú zlúčeniny vzorca (I), kde R4 predstavuje skupinu zvolenú :

• z aminoskupiny, substituovanej prípadne jednou alebo dvoma identickými alebo rozdielnymi skupinami lineárneho alebo rozvetveného (CiC₆)-alkylu, • zo skupiny vzorca -N(R3)-X]-ORj, v ktorej R3 predstavuje vodíkový atóm alebo lineárnu alebo rozvetvenú (Ci-C6)-alkylskupinu a Xi a R5 sú definované ako pre vzorec (I), • a zo skupiny vzorca -O-X1-OR5, v ktorej Xi a R5 sú definované ako pre vzorec (I).

Vo zvlášť výhodnom uskutočnení sú preferovanými zlúčeninami vynálezu zlúčeniny vzorca (I) v ktorom R₄ predstavuje skupinu -N(R3)-X]-OR5 alebo

-O-X1-OR5, v ktorej R3 predstavuje vodíkový atóm, Xi predstavuje lineárny (C2-C4)-alkylénový reťazec a R5 predstavuje vodíkový atóm.

Preferovanými zlúčeninami vynálezu sú:

(5₁S',5aS,8aó',9J?)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexahydrofuro[3 ',4':6,7]nafto[2,3-ŕZ][l,3]dioxol-5-yl-2- (di metyl amino) etyl(metyl)karbamát, (5_<S’,5a>S’,8a7?,9J?)-9-(4-hydroxy~3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexahydrofuro[3 ',4':6,7]nafto[2,3-č/][l,3]dioxol-5-yl-2(dimetylamino)etyl(metyl)karbamát, (5ó’,5a₁S',8aiS,9Ä)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexahydrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-ďj[l,3]dioxol-5-yl-3-(dimetylamino)propylkarbamát, (5ó’,5aÓ’,8a₁S’,9J?)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexahydrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-ď][l,3]dioxol-5-yl-2-(2-hydroxyetoxy)etylkarbamát, (5S,5aS,8aS,9J?)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexahydrofuro[3 ',4':6,7]nafto[2,3-í/][l,3]dioxol-5-yl-2-[(2-hydroxyetyl)amino]etylkarbamát, (5ó’,5aó’,8aó',9Ä)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexahydrofuro[3 ',4':6,7]nafto[2,3-č/][l,3]dioxol-5-yl-2-(dimetylamino)etylkarbamát.

Izoméry a adičné soli preferovaných zlúčenín s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou tvoria integrálnu súčasť vynálezu.

Predložený vynález zahrnuje tiež spôsob prípravy zlúčenín vzorca (I) a tento spôsob je charakterizovaný tým, že sa v ňom ako východisková látka používa zlúčenina vzorca (II)

ktorá sa v zásaditých podmienkach podrobí:

- buď pôsobeniu zlúčeniny vzorca (III) :

R'i-X (III), v ktorom Ri predstavuje skupinu zvolenú z lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Ce)-alkylu, arylu, aryl-(Ci-C6)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, heteroarylu, heteroaryl-(Ci-C6)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-C6)-alkylkarbonylu, arylkarbonylu, aryl-(Ci-C6)-alkylkarbonylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, heterocykloalkykarbonylu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-C6)-alkylsulfonylu, arylsulfonylu a aryl-(Ci-C6)-alkylsulfonylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, a X predstavuje atóm vodíka alebo atóm halogénu, za vzniku zlúčeniny vzorca (IV/A):

kde R'i je ako je tu už vpredu definované, alebo pôsobeniu zlúčeniny vzorca (V):

G - L (V), v ktorom G predstavuje konvenčnú chrániacu skupinu pre hydroxylové funkcie a L predstavuje v organickej chémii obvyklú odchádzajúcu skupinu, za vzniku zlúčeniny vzorca (IV/B):

kde G je ako je tu už vpredu definované,

kde T predstavuje skupinu R'i alebo G, ako sú tu už vpredu definované, a táto zlúčenina vzorca (IV) sa v zásaditom prostredí podrobí reakcii so zlúčeninou vzorca (VI):

Ph-O-C(R₂)CI (VI), kde Ph predstavuje prípadne substituovanú fenylovú skupinu a R₂ predstavuje atóm kyslíka alebo atóm síry, za vzniku zlúčeniny vzorca (VII):

kde T, Ph a R₂ sú ako je tu už vpredu definované, a táto zlúčenina vzorca (VII) sa v zásaditom prostredí podrobí reakcii so zlúčeninou vzorca (VIII):

R4-X-NH-R3 (VIII), kde R4, R3 a X sú definované ako pre vzorec (I), za vzniku príslušných zlúčenín vzorca (I/a), čo je zvláštny prípad zlúčenín vzorca (I) alebo zlúčenín vzorca (IX) podľa toho, či T predstavuje skupinu R'i alebo skupinu G,

kde R'i, G, R2, R3, R4 a X sú, ako je tu už vpredu definované, hydroxylová funkcia každej zlúčeniny vzorca (IX) sa konvenčnými metódami organickej chémie zbaví chrániacej skupiny a poskytuje zlúčeniny vzorca (I/b), zvláštny prípad zlúčenín vzorca (I);

kde R2, R3, R4 a X sú definované ako pre vzorec (I), pričom zlúčeniny (I/a) a (I/b) dohromady tvoria zlúčeniny podľa vynálezu a pokiaľ to je nutné, čistia sa tieto zlúčeniny pomocou bežnej techniky čistenia, ak je to žiaduce, môžu byť konvenčnou separačnou technikou rozdelené na svoje rôzne izoméry a pokiaľ sa to požaduje môžu byť konvertované na ich adičné soli s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou.

Zlúčeniny vzorcov (II), (V), (VI) a (VIII) sú buď komerčne dostupné zlúčeniny alebo sa získavajú konvenčnými metódami organickej syntézy.

Zlúčeniny vzorca (I) vykazujú obzvlášť cenné protinádorové vlastnosti. Majú proti bunečným líniám z myších a ľudských nádorov vynikajúcu cytotoxicitu in vitro a sú účinné in vivo. Charakteristické vlastnosti týchto zlúčenín ich oprávňujú na to, aby boli terapeuticky využívané ako protinádorové prostriedky.

Predkladaný vynález sa týka tiež farmaceutických kompozícií obsahujúcich ako účinnú zložku najmenej jednu zo zlúčenín vzorca (I), jej optického izoméru alebo jej adičnej soli s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou, samotnú alebo v kombinácii s jedným alebo viacerými farmaceutický prijateľnými inertnými netoxickými excipientmi alebo nosičmi.

Medzi kompozíciami podľa vynálezu môžu byť predovšetkým spomenuté zvlášť tie, ktoré sú vhodné na orálnu, parenterálnu (intravenóznu, intramuskulárnu alebo subkutánnu), perkutánnu či transkutánnu, nazálnu, rektálnu, perlingválnu, okulárnu alebo respiračnú aplikáciu a najmä tablety alebo dražé, sublingválne tablety, mäkké želatínové kapsuly, tvrdé želatínové kapsuly, čapíky, krémy, masti, dermálne gély, preparáty na injekčné podanie a pitie, aerosóly, očné alebo nosné kvapky atď.

Užitočná dávka kolíše podľa veku a hmotnosti pacienta, cesty podávania, povahy a vážnosti ochorenia a aplikácie pridružených ošetrení a je v rozsahu od 0,5 do 500 mg denne pri jednom alebo viac podávaniach.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Nasledujúce príklady vynález objasňujú, avšak žiadnym spôsobom ho neobmedzujú. Použité východiskové látky sú buď známymi produktmi alebo sú produktmi pripravenými podľa známych postupov.

Príprava 1:

(5»S',5a5',8a5,9_JR)-9-(4-{[(benzyIoxy)karbonyl]oxy}-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-r/| [l^jdioxoI-S-yl-ílnitrofenyl karbonát

Krok 1:

4-[(5R,5aS,8aS, 9S)~9-hydroxy-6-oxo-5,5a, 6,8,8a,9-hexahydrofuro[3 4 ':6, 7]nafto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl-2,6-dimetoxyfenyl-benzylkarbonát

0,55 mmol trietylamínu a 0,37 mmol benzyl-chlórmravčanu sa postupne pridalo k roztoku 0,25 mmol (5Ä,5a5,8a5,95)-9-hydroxy-5-(4-hydroxy-3,5dimetoxyfenyl)-5,8,8a,9-tetrahydrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-ď][l ,3]dioxol6(5aZ/)-ónu v 10 ml bezvodého dichlórmetánu pri 0 °C pod argónom. Po miešaní počas 1 hodiny sa reakčná zmes premyla vodou. Organická fáza sa potom vysušila, filtrovala sa a následne sa za zníženého tlaku skoncentrovala. Chromatografia na silikagéli (cyklohexán/etylacetát, 60 : 40) umožnila, že sa izoloval očakávaný produkt.

Krok 2:

(5S,5aS,8aS, 9R)-9-(4-{[(benzyloxy)karbonyl]oxy}-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4' :6,7]nafto[2,3-d] [1,3]dioxol-5-yl-4nitrofenyl karbonát

0,155 mmol bezvodého pyridínu sa pridalo k roztoku 1,71 mmol p-nitrofenyl-chlórmravčanu v 5 ml bezvodého dichlórmetánu. V reakčnej zmesi sa vytvoril biely precipitát. Potom sa pod argónom po kvapkách pridal roztok 0,502 mmol v kroku 1 získanej zlúčeniny v 5 ml dichlórmetánu. Pri okolitej teplote sa reakčná zmes 45 minút miešala a potom sa do reakčnej zmesi nalialo 15 ml vody. Organická fáza sa premyla vodou, vysušila nad MgSO-i, filtrovala sa a za zníženého tlaku sa skoncentrovala. Chromatografia na silikagéli (cyklohexán/etylacetát, 4 : 1) umožnila, že sa izoloval očakávaný produkt. Teplota topenia = 125-130 °C

Príklad 1 (55',5a5,8a»S,9Ä)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyI)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d] [l,3]dioxol-5-yI-2-(dimetylamino)etyl(metyl)karbamát

Krok 1

4-[(5R,5aS, 8aS, 9S)-9-( {[]2-(dimetylamino) etyl] (metyl) amino]-karbonyl}oxy)-6oxo-5,5a, 6,8,8a,9-hexahydrofuro[3 ',4':6, 7]nafto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl]-2,6dimetoxyfenyl-benzylkarbonát

0,228 mmol Ν,Ν,Ν'-trimetyletyléndiamínu a 0,228 mmol trietylamínu sa pri okolitej teplote, pod argónom, postupne pridalo k roztoku 0,171 mmol zlúčeniny z prípravy 1 v 5 ml bezvodého dichlórmetánu. Po jednohodinovom miešaní sa reakčná zmes hydrolyzovala. Potom sa organická fáza premyla vodou, vysušila nad MgSO4, filtrovala sa a za zníženého tlaku sa skoncentrovala. Chromatografia na silikagéli (dichlórmetán/metanol, 97 : 3) umožnila, že sa izoloval očakávaný produkt. Teplota topenia = 102-103 °C

Krok 2 (5S,5aS,8aS, 9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a, 6,8,8a, 9hexahydrofuro[3 ',4':6, 7]nafto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl-2(dimetylamino)etyl(metyl)karbamát %-né paládium na uhlí (90,8 mg) sa pridalo k roztoku 0,138 mmol zlúčeniny získanej v kroku 1 v 8 ml etylacetátu. Reakčná zmes sa 1 hodinu 45 minút miešala v atmosfére vodíka a potom sa filtrovala cez Celit, aby sa odstránil katalyzátor. Filtrát sa potom za zníženého tlaku skoncentroval. Surový zvyšok bol chromatografovaný na silikagéli (dichlórmetán/metanol, 96 : 4) a tak bolo možné izolovať očakávaný produkt. Teplota topenia = 184186°C. Hmotnostné spektrum (ES/MS): m/z = 529 [M + H]\ 551 [M + Nap.

t

Príklad 2 (5>S,5a5',8a/?,9_JR)-9-(4-hydroxy-3,5-dinietoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-rf] [l,3]dioxol-5-yl-2-(dimetylamino)etyl(metyl)karbamát

Krok 1

4-[(5R,5aR,8aS,9S)-9-( {[[2-(dimetylamino)etyl](metyl)amino]-karbonyl}oxy)6-oxo-5,5a, 6,8,8a, 9-hexahydrofuro[3 46, 7]nafto[2,3-d][ 1,3]dioxol-5-yl]-2,6dimetoxyfenyl-benzylkarbonát

0,184 mmol Ν,Ν,Ν'-trimetyletyléndiamínu a 0,184 mmol trietylamínu sa postupne pridalo k roztoku 0,141 mmol zlúčeniny z prípravy 1 v 4 ml bezvodého dichlórmetánu. Po 2 hodinách 30 minútach miešania pri okolitej teplote pod argónom, sa k reakčnej zmesi pridali 3 ml tetrahydrofuránu a 1 M roztok tetrabutylamónium-fluoridu (0,285 mmol) v tetrahydrofuráne. Po 2 hodinách reakcie sa pridalo 0,3 mmol tetrabutylamónium-fluoridu. 3 hodiny 30 minút sa vykonávalo miešanie a reakčná zmes sa potom naliala do vody (15 ml) a zriedila sa dichlórmetánom (10 ml). Vodná fáza sa extrahovala dichlórmetánom a spojené organické fázy sa premyli s vodou a nasýteným vodným roztokom NaCI a potom sa vysušili nad MgSC>4, filtrovali sa a za zníženého tlaku sa skoncentrovali. Chromatografia na silikagéli (dichlôrmetán/ metanol, 97 : 3) umožnila, že sa izoloval očakávaný produkt. Hmotnostné spektrum (DIC/NH₃): m/z = 663 [Kí + H]⁺.

Krok 2 (5S, 5aS, 8aR,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a, 6,8,8a, 9hexahydrofuro[3 ', 46, 7]nafto[2,3-d][ 1,3]dioxol-5-yl-2(dimetylamino)etyl(metyl)karbamát

Produkt sa získal podľa postupu uvedeného v kroku 2 v príklade 1 a ako substrát sa použila zlúčenina získaná vyššie v kroku 1. Hmotnostné spektrum (DIC/NH3): m/z = 529 [M + H]\

Príklad 3 (5Ó',5aS,8a5,9j¹?)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-rf] [l,3]dioxoI-5-yl-3(dimety la m in o) p ropy 1 karbamát

Produkt sa získal podľa postupu uvedeného v príklade 1, v kroku 1 a 2, s použitím dimetylaminopropylamínu ako reagentu v kroku 1 namiesto Ν,Ν,Ν’trimetyletyléndiamínu. [a]d (CHCI3) = -23°, hmotnostné spektrum (DIC/NH3): m/z = 529 [M + HJ⁺.

Príklad 4 (5>S',5aS,8a»S',9.R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-tZ] [l,3]dioxo!-5-yl-2-(2-hydroxyetoxy)etylkarbamát

Produkt sa získal podľa postupu uvedeného v príklade 1, v kroku 1 a 2, s použitím 2-aminoetoxyetanolu ako reagentu v kroku 1 namiesto Ν,Ν,Ν¹trimetyletyléndiamínu. Hmotnostné spektrum (DIC/NH3): m/z = 683 [M + NH₄]\

Príklad 5 (5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexahydrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl-2-[(2hydroxyetyl)amino]etylkarbamát

I ' ¹

Produkt sa získal podľa postupu uvedeného v príklade 1, v kroku 1 a 2, s použitím 2-aminoetylaminoetanolu ako reagentu v kroku 1 namiesto Ν,Ν,Ν'trimetyletyléndiamínu.

Príklad 6 (5S,5aS,8aS,9R)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-5,5a,6,8,8a,9hexahydrofuro[3',4' :6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioxol-5-yl-2-(dimetylamino)etylkarbamát.

Produkt sa získal podľa postupu uvedeného v príklade 1, v kroku 1 a 2, s použitím dimetylaminoetylamínu ako reagentu v kroku 1 namiesto Ν,Ν,Ν¹trimetyletyléndiamínu.

Farmakologická štúdia zlúčenín podľa vynálezu

Príklad 7

Aktivita in vitro

Zlúčeniny podľa vynálezu boli testované na rôznych ľudských a myších bunečných líniách:

myšia leukémia L1210, epidermoidálny karcinóm A-43 1, pľúcny nemalobunkový karcinóm A549, pľúcny karcinóm malých buniek H69, karcinóm hrubého čreva HT29, epidermoidálny bukálny karcinóm KB-3-1.

Bunky boli kultivované v kompletnom RPMI 1640 kultivačnom médiu obsahujúcom 10 % fetálného teľacieho séra, 2 mM glutamínu, 50 jednotiek/ml penicilínu, 50 pg/ml streptomycínu a 10 mM Hepes, pH 7,4. Bunky boli rozmiestnené na mikroplatne a boli vystavené cytotoxickým zlúčeninám v štyroch zdvojených periódach, to je 48 hodín alebo 96 hodín. Počet životaschopných buniek bol potom kvantifikovaný kolorimetrickou skúškou, Microculture Tetrazolium Assay (J. Carmichael a spol., Cancer Res. 4Ί, 936942 (1987)). Výsledky sú vyjadrené ako IC50, cytotoxická koncentrácia, ktorá inhibuje proliferáciu buniek na 50 %. Pri týchto testoch poskytuje zlúčenina z príkladu 6 tieto hodnoty IC50:

IC₅₀ (μΜ)

	L1210	A-431	A549	H69	HT29	KB-3-1
Príklad 6	0,038	0,071	0,046	0,096	0,121	0,085

Príklad 8

Účinok na bunečný cyklus

Bunky L1210 boli inkubované 21 hodín pri 37°C v prítomnosti testovaných zlúčenín rôznych koncentrácií. Potom boli bunky zafixované s použitím 70 % (obj./obj.) etanolu, dvakrát premyté v PBS a inkubované 30 minút pri 20°C v PBS, ktoré obsahuje 100 pg/ml RNAzy a 50 μg/ml propidium jodidu. Výsledky sú vyjadrené ako percentuálny obsah buniek, ktoré sa akumulovali v G2+M fáze po 21 hodinách v porovnaní s kontrolou (kontrola:

%). Pri koncentrácii 100 nM spôsobí zlúčenina z príkladu 6 v G2+M fáze po hodinách 86 %-nú akumuláciu buniek.

Príklad 9

Aktivita in vivo * Protinádorová aktivita zlúčenín na leukémiu P388

Línia P388 (myšej leukémie) bola dodaná od National Cancer Inštitúte (Frederick, USA). Nádorové bunky (10⁶ buniek) boli v deň 0 naočkované do peritoneálnej dutiny samíc BDF1 myší (Iffa-Credo, Francúzsko) s hmotnosťou od 18 g do 20 g (skupiny po 6 zvieratách). Produkty boli podávané intravenóznou cestou v deň 1. Protinádorová aktivita sa vyjadruje ako % T/C:

Stredná doba prežitia ošetrených zvierat % T/C = -------------------------------- x 100

Stredná doba prežitia kontrolných zvierat

Zlúčenina z príkladu 6 je voči leukémii P388 aktívna a vyvoláva T/C 203 % pri 6,25 mg/kg.

• Protinádorová aktivita zlúčenín na Lewisov pľúcny karcinóm:

Lewisov pľúcny karcinóm (LLC) je tuhý nádor, ktorý sa spontánne objavuje v pľúcach C57B1/6 myši a pretrváva pri následných transplantáciách fragmentov subkutánnou cestou. LLC bol získaný od Division of Cancer Treatment, Tumor Repository, National Cancer Inštitúte, Frederick, MD, USA. Myši, ktoré boli vo veku 4 až 6 týždňov, boli získané od Iffa Credo (Lyon, Francúzsko) a na začiatku experimentu mali hmotnosť od 20 g do 22 g.

V prvom dni experimentu (D 0) boli odstránené nádory a narezané na približne 30 mg fragmenty, ktoré boli bezprostredne subkutánnou cestou transplantované do B6D2F1 myší. Myši, ktorým boli fragmenty implantované, boli náhodne rozdelené na ošetrované skupiny a kontrolnú skupinu (7 zvierat na skupinu).

Parametrom používaným na zhodnotenie protinádorovej aktivity je vzrast doby prežitia. Okrem toho počet zvierat, ktoré prežili bol v každej skupine počítaný na konci experimentu v deň 90.

Produkty boli podávané podľa nižšie uvedeného rozvrhu. Výsledky sú vyjadrované ako % T/C, vypočítané rovnakým spôsobom ako v predchádzajúcom teste:

Produkt	Dávka (mg/kg)	Cesta podania	Rozvrh	T/C %	Prežívajúce D 90
Príklad 1	25	intravenózna	D 4, 8, 12	165	\Π
Príklad 6	3,12	intravenózna	D 4, 8, 12	168	1/7

Príklad 10

Farmaceutická kompozícia : injekčný roztok

Zlúčenina z príkladu

Destilovaná voda pre injekčné preparáty........................

mg ml

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

PP ¢#-2003

1. Zlúčeniny vzorca (I):

kde

Ri predstavuje skupinu zvolenú z vodíka, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Có)- alkylu, arylu, aryl-(Ci-C6)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, heteroarylu, heteroaryl-(Ci-C6)alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, lineárneho alebo rozvetveného (C]-C6)-alkoxykarbonylu, aryloxykarbônylu, aryl-(C]-C6)-alkoxykarbonylu, v ktorom alkoxylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, heterocykloalkoxykarbonylu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-C6)-alkylsulfonylu, arylsulfonylu, aryl-(Ci-Cô)alkylsulfonylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený alebo skupinu fosfónovú,

R2 predstavuje atóm kyslíka alebo atóm síry,

R3 predstavuje atóm vodíka, lineárnu alebo rozvetvenú (Ci-Côj-alkylovú skupinu, cykloalkylovú skupinu alebo aryl-(Cj-C6)-alkylovú skupinu, v ktorej alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený,

X predstavuje lineárnu alebo rozvetvenú (Ci-C6)-alkylénovú skupinu,

R.4 predstavuje skupinu zvolenú:

z aminoskupiny, substituovanej prípadne jednou alebo dvoma identickými alebo rozdielnymi skupinami zvolenými z lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Cô)-alkylu, arylu a aryl-(Ci-C6)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, zo skupiny vzorca -N(R3)-Xi-OR5, kde R3 je definované ako je tu uvedené vyššie, Xi predstavuje lineárnu alebo rozvetvenú (Ci-Cg)alkylénovú skupinu a R5 predstavuje skupinu zvolenú z vodíka, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Cô)-alkylu, arylu a aryl-(Ci-Có)alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, zo skupiny vzorca -N(R₃)-X]-NR6R7, kde R₃ a Xi sú definované ako je tu uvedené vyššie a každé Rô a R7, ktoré môžu byť identické alebo rôzne, predstavuje skupinu zvolenú z vodíka, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Cój-alkylu, arylu, aryl-(Ci-C6)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, zo skupiny hydroxylovej, z lineárnej alebo rozvetvenej (Ci-Cg)-alkoxylovej skupiny, zo skupiny aryloxy, zo skupiny vzorca -O-X1-OR5, kde R5 a Xi sú definované ako je tu uvedené vyššie, a zo skupiny vzorca -O-X1-NR6R7, kde Rg, R7 a Xi sú definované ako je tu uvedené vyššie, ďalej ich izoméry a ich adičné soli s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou, kde aryl označuje skupinu zvolenú z fenylu, bifenylu, naftylu, dihydronaftylu, tetrahydronaftylu, indenylu, indanylu a benzocyklobutylu, pričom každá z týchto skupín má prípadne jeden alebo viac identických alebo rozdielnych substituentov volených z halogénu, hydroxyskupiny, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Ce)-alkylu, lineárneho alebo rozvetveného (C]-C6)-alkoxylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, aminoskupiny, lineárnej alebo rozvetvenej (Ci-Cô)alkylaminoskupiny, di-(C]-C6)-alkylaminoskupiny, v ktorej každý alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, karboxylu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Cô)-alkoxykarbonylu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-C6)-trihalogénalkylu, lineárnej alebo rozvetvenej (Ci-Côj-alkylkarbonyloxyskupiny, lineárnej alebo rozvetvenej (Ci-Ce)-alkylkarbonylskupiny a aminokarbonylskupiny, v ktorej každý podiel amino je prípadne substituovaný jednou alebo dvoma identickými alebo rôznymi, lineárnymi alebo rozvetvenými (Ci-Ce)alkylovými skupinami, * heteroaryl označuje aromatickú monocyklickú skupinu, aromatickú bicyklickú skupinu alebo bicyklickú skupinu, v ktorej je jeden kruh aromatický a druhý je čiastočne hydrogenovaný, pričom každá z takých skupín má v kruhu od 5 do 12 členov a v kruhovom systéme obsahuje jeden, dva alebo tri heteroatómy vybrané z kyslíka, dusíka a síry, pričom uvedený heteroaryl je prípadne substituovaný tými istými substituentmi ako sú tie, čo sú opisované pre prípad arylskupiny, *cykloalkyl označuje monocyklickú alebo bicyklickú skupinu, ktorá je nasýtená alebo nenasýtená, nemá však aromatický charakter, ktorá obsahuje od 3 do 10 uhlíkových atómov a je prípadne substituovaná jednou alebo viacerými identickými alebo rozdielnymi skupinami volenými z halogénu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Ce)-alkylu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-C6)-trihalogénalkylu, hydroxyskupiny, aminoskupiny, lineárnej alebo rozvetvenej (Ci-Cfi)-alkylaminoskupiny a di-(Ci-Cô)-alkylaminoskupiny, v ktorej každý alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, heterocykloalkyl označuje cykloalkylovú skupinu ako je definovaná vyššie, obsahujúcu v kruhovom systéme jeden alebo dva heteroatómy vybrané z kyslíka, dusíka a síry a uvedený heterocykloalkyl je prípadne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi ako sú tie, čo sú opisované pre prípad cykloalkylskupiny, 'izoméry znamenajú enantioméry a diastereoizoméry.
2. Zlúčeniny vzorca (I) podľa nároku 1, kde Ri predstavuje vodíkový atóm, ich izoméry a tiež ich adičné soli s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou.
3. Zlúčeniny vzorca (I) podľa nároku 1, kde R₂ predstavuje kyslíkový atóm, ich izoméry a tiež ich adičné soli s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou.
4. Zlúčeniny vzorca (I) podľa nároku 1, kde X predstavuje (C2-C4)alkylénovú skupinu, ich izoméry a tiež ich adičné soli s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou.
5. Zlúčeniny vzorca (I) podľa nároku 1, kde R3 predstavuje vodíkový atóm alebo lineárnu či rozvetvenú (Ci-Côj-alkylovú skupinu, ich izoméry a tiež ich adičné soli s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou.
6. Zlúčeniny vzorca (I) podľa nároku 1, kde R₄ predstavuje skupinu zvolenú:

<» z aminoskupiny, substituovanej jednou alebo dvoma identickými alebo rozdielnymi skupinami lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Cŕ)alkylu, o zo skupiny vzorca -N(R₃)-Xi-OR5, v ktorej R₃ predstavuje vodíkový atóm alebo lineárnu alebo rozvetvenú (Ci-Cg)-alkylskupinu a X] aRí a sú definované ako pre vzorec (I), • a zo skupiny vzorca -O-Xi-ORs, v ktorej Xi a R5 sú definované ako pre vzorec (I), ich izoméry a tiež ich adičné soli s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou.
7. Zlúčeniny vzorca (I) podľa nároku 1 alebo nároku 6, kde R4 predstavuje skupinu -N(R₃)-Xi-OR5 alebo -O-X1-OR5, v ktorej R₃ predstavuje vodíkový atóm, Xi predstavuje lineárny (C2-C4)-alkylénový reťazec a R5 predstavuje vodíkový atóm, ich izoméry a tiež ich adičné soli s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou.
8. Zlúčeniny vzorca (I) podľa nároku 1, ktorými sú:

(5S',5a>S^,,8a₁S’,97?)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3 ',4':6,7]nafto[2,3-íZ][l,3]dioxol-5-yl-2(dimetylamino)etyl(metyl)karbamát, (55,5a5,8aÄ,9Ä)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3 ',4':6,7]nafto[2,3-ď][l,3]dioxol-5-yI-2(d i mety lamí no) etyl (mety ljkarbamát, * (55,5a5’, 8a5,97?)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-ď][ l,3]dioxol-5-yI-3(dimetylamino)propylkarbamát, (55,5a5,8a5,97?)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3 ',4':6,7]nafto[2,3-í/][ l,3]dioxol-5-yl-2-(2hydroxyetoxy)etylkarbamát, (5>S',5a5',8a5,97^)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-íZ][l,3]dioxol-5-yl-2-[(2hy dr oxy ety 1) amino] etylkarbamát, a (55,5aó',8aó’,9Ä)-9-(4-hydroxy-3,5-dimetoxyfenyl)-8-oxo-

5,5a,6,8,8a,9-hexahydrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-ŕZ][l,3]dioxol-5-yl-2(d i metyl amino) etylkarbamát, a ich izoméry a tiež ich adičné soli s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou.
9. Spôsob prípravy zlúčenín vzorca (I) vyznačujúci sa tým, že sa ako východisková látka použije zlúčenina vzorca (II):

ktorá sa v zásaditých podmienkach podrobí:

- buď pôsobeniu zlúčeniny vzorca (III):

R*i-X (III), v ktorom Ri predstavuje skupinu zvolenú z lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Cé)-alkylu, arylu, aryl-(Ci-C6)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, heteroarylu, heteroaryl-(Ci-Ce)-alkylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-C6)-alkylkarbonylu, arylkarbonylu, aryl-(Ci-C6)-alkylkarbonylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, heterocykloalkykarbonylu, lineárneho alebo rozvetveného (Ci-Cô)-alkylsulfonylu, aryisulfonylu a aryl-(Ci-C6)-alkylsulfonylu, v ktorom alkylový podiel môže byť lineárny alebo rozvetvený, a X predstavuje atóm vodíka alebo atóm halogénu, za vzniku zlúčeniny vzorca (IV/A):

kde R'i je ako je tu už vpredu definované, alebo pôsobeniu zlúčeniny vzorca (V):

G - L (V), v ktorom G predstavuje konvenčnú chrániacu skupinu pre hydroxylové funkcie a L predstavuje v organickej chémii obvyklú odchádzajúcu skupinu, za vzniku zlúčeniny vzorca (IV/B):

kde G je ako tu je už vpredu definované, pričom zlúčeniny vzorcov (IV/A) a (IV/B) tvoria dohromady zlúčeniny vzorca (IV):

kde T predstavuje skupinu R'i alebo G, ako sú tu už vpredu definované, a táto zlúčenina vzorca (IV) sa v zásaditom prostredí podrobí reakcii so zlúčeninou vzorca (VI):

Ph-O-C(R₂)C1 (VI), kde Ph predstavuje prípadne substituovanú fenylovú skupinu a R₂ predstavuje atóm kyslíka alebo atóm síry, za vzniku zlúčeniny vzorca (VII):

kde T, Ph a R₂ sú ako tu už vpredu definované, a táto zlúčenina vzorca (VII) sa v zásaditom prostredí podrobí reakcii so zlúčeninou vzorca (VIII):

R4-X-NH-R3 (VIII), kde R4, R3 a X sú definované ako pre vzorec (I), takže poskytne príslušné zlúčeniny vzorca (I/a), zvláštny prípad zlúčenín vzorca (I) alebo zlúčeniny vzorca (IX) podľa toho, či T predstavuje skupinu R'i alebo skupinu G, (l/a) kde R'i, G, R2, R3, R4 a X sú, ako je tu už vpredu definované, pričom hydroxylová funkcia každej zlúčeniny vzorca (IX) sa konvenčnými metódami organickej chémie zbaví chrániacej skupiny a poskytuje zlúčeniny vzorca (I/b), zvláštny prípad zlúčenín vzorca (I):

H kde R₂, R3, R4 a X sú definované ako pre vzorec (I), pričom zlúčeniny (I/a) a (I/b) dohromady tvoria zlúčeniny podľa vynálezu a pokiaľ to je nutné, čistia sa tieto zlúčeniny pomocou konvenčnej rafinačnej techniky, ak je to žiaduce, môžu byť konvenčnou separačnou technikou rozdelené na svoje rôzne izoméry a pokiaľ sa to žiada, konvertované na ich adičné soli s farmaceutický prijateľnou kyselinou alebo zásadou.
10. Farmaceutické kompozície, vyznačujúce sa tým, že ako účinnú zložku obsahujú najmenej jednu zlúčeninu podľa niektorého z nárokov 1 až 8, samotnú alebo v kombinácii s jedným alebo viacerými farmaceutický prijateľnými inertnými netoxickými excipientmi alebo nosičmi.
11. Farmaceutické kompozície podľa nároku 10, obsahujúce najmenej jednu účinnú zložku podľa niektorého z nárokov 1 až 8, na použitie pri ošetrovaní rakoviny.