CZ200265A3 - Neurotrofní pyrrolidiny a piperidiny - Google Patents

Description

Neurotrofní pyrrolidiny a piperidiny

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nových pyrrolidinů a piperidinů majících neurotropní účinek. Tyto sloučeniny, spolu s příbuznými sloučeninami a metodami jsou užitečné> při léčbě a prevenci neuronových chorob, jako jsou Parkinsonova choroba, Alzheimerova choroba, mrtvice, násobná skleróza, amyotrofní laterální skleróza, diabetická neuropatie a Bellova paréza.

Dosavadní stav techniky

Neurodegenerativní choroby tvoří celosvětově hlavní hrozbu zdraví společnosti. Jedna z nejvážnějších takových chorob je Alzheimerova choroba („AD), hlavní příčina demence u starších lidí a čtvrtá nejrozšířenější příčina smrti v USA. V USA se odhaduje, že DA postihuje celkem dva až tři miliony lidí a více než 5 % populace starší než 65 let. Ačkoli přesná etiologie AD dosud nebyla definována, nemoc je charakterizována přítomností velkého množství amyloidních plátů a neurofibrilárních spletenin v oblastech mozku zapojených do funkce poznání a degenerací cholinergních neuronů, které vystupují z basálního předního mozku do vnější oblasti a oblasti hippocampu. V současné době není žádná účinná terapie vůči AD. Brinton, R.D. a Yamazaki, R.S., Pharm. Res., 1998, 15, 386-398.

Podobně jako AD, je Parkinsonova choroba („PD) progresivní degenerativní chorobou centrálního nervového systému („CNS). Celoživotní výskyt této nemoci je asi u 2 % populace. U Parkinsonovy choroby degenerace dopaminergních neuronů substanti nigra vede ke snížení úrovní dopaminu v oblasti mozku (corpus striatum) kontrolující vůlí ovladatelý « · pohyb. Proto jsou obvyklé léčby zaměřeny na podávání činidel, jako je L-dopa a bromocriptin, které doplňují úrovně dopaminu v postižených oblastech mozku. Dopaminergní režimy ztrácejí svojí účinnost s postupným odumíráním nervových buněk tak jak nemoc pokračuje. Současně neovládatelné třesyv počátečních stádiích nemoci PD přecházejí do stavu ztíženého pohybu a v koncových stádiích do nehybnosti. Z tohoto důvodu jsou alternativní terapie velmi žádány. Pahwa, R. a Koller, W.C. Drugs Today, 1998, 34, 95-105.

Neurodegenerativní choroby somatosmyslového nervového systému také tvoří třídu oslabujících a potenciálně letálních stavů. Amyotrofní laterální skleróza („ALS) je fatální nemoc charakterizovaná progresivní degenerací vyšších a nižších pohybových neuronů. Ačkoli přesná etiologie ALS není známá, podle všeobecné teorie se předpokládá, že excitotoxicita a/nebo oxidační stres jsou faktory, které přispívají této nemoci. Riluzol je první léčivo, které bylo schváleno a dodáváno na trh proti ALS. Vykazuje antiexcitotoxické vlastnosti a bylo prokázáno, že zvyšuje procento pacientů, kteří přežívají s chorobou ALS. Nicméně, toto léčivo neléčí a klinické zkoušky alternativních léčiv probíhají. Louvel, E., Hughon, J a Doble, A., Trends Pharmacol. Sci, 1997, 18, 196203.

Periferní neuropatie jsou sekundární k počtu matabolických a vaskulárních stavů. Zejména, přibližně 30 % pacientů s diabetes mellitus trpí některou z periferních neuropatií což může působit na malá myelinovaná vlákna, způsobujíce ztrátu vnímání bolesti a vnímání teploty, nebo na velká vlákna, způsobujíce pohybové nebo somatocitlivé poruchy. Farmakokinetické působení je symptomatické a nej lepší způsob léčby a prevence spočívá v udržování normální hladiny glukózy v krvi dietou a podáváním inzulínu. Biessels, G. J. a van Dam,

P.S. Neurosci. Res. Commun., 1997, 20, 1-10.

Podle závažných důkazů deficity určitých bílkovinných růstových faktorů nebo neurotrofních faktorů mohou hrát klíčovou pathoethiologickou úlohu jak v periferních, tak centrálních neurodegenerativních chorobách. Tomlinson, D.R., Fernyhough, P. a Diemel, L.T., Diabets, 1997, 46 (dod. 2) S43S49; Hamilton, G.S., Chem. Ind. (London) 1998, 4 (127-132; Louvel, E., Hugon, J. a Doble, A., Trends Pharmacol. Sci.,

1997, 18, 196-203; Ebadi, M. a kol. Neurochem. Int., 1997, 30, 347-374.

Tyto neurotrofní faktory mohou být rozděleny do dvou strukturních tříd: 1) neurotrofiny, zahrnující nervový růstový faktor („NGF); neurotrofní růstový faktor odvozený od gliální buňky („GDNF); neurotrofní faktor odvozený od mozku („BDNF); neurotropin 3 („NT-3); neurotropin 4/5 („NT-4/5); neurotropin 2 („NT-2); a ciliární neurotropní faktor („CNTF), který je příbuzný cytokinové rodině molekul. Všechny neurotrofní faktory podporují neuritový růst, indukují diferenciaci a potlačují programovanou buněčnou úmrtnost nebo apoptózu v určitých subpopulacích periferních a centrálních neuronů. Například NGF vykazuje trofický účinek na sympatetické a citlivé neurony zádového kořenového ganglionu a cholinergní neurony střední přepážky v CNS, z čehož lze odvodit potenciální terapeutickou užitečnost při AD. CNTF tropicky působí na široký příčný řez neuronů, zhrnující parasympatetické, citlivé, sympatetické, pohybové, cerebelární, hyppokampální a septální neurony. Předmětem zvláštního zájmu je skutečnost, že CNTF částečně zabraňuje atrofii kosterních svalů po nervovém poškození ale nemá žádný účinek na inervované svaly, indikujíce, že CNTF je primárně • · · ·

·· ·· ·· ···· • · · · · · • ·· * · * ····* · • · · · · · · • · · · · · · · · operační v patologickém stavu. Výsledkem je, že CNTF se v současné době zkoumá na své své účinky při muskuloskeletálních chorobách, jako je ALS.

Klinická užitečnost bílkovinných neurotrofních činidel je vážně narušována jejich omezenou biologickou dostupností, zejména v CNS. Proto je nezbytné podávat tato činidla přímo do mozku, aby byl indukován terapeutický účinek, což je relativně nebezpečná a nepohodlná cesta podání.

Chemická činidla

Lyons, W. E. a kol. (Proč. Nati. Acad. Sci., 1994, 91(8) 31915) popisují neurotrofní účinky imunosupresiva FK506, které vykazuje neurotrofní aktivitu v kulturách buněk PC 12 smyslovém ganglionu:

Vertex Pharmaceuticals, lne. („Vertex v patentové přihlášce Jižní Afriky č. 964852 popisuje sloučeniny, které jsou užitečné pro inhibici aktivity rotamázy imunofilinu FKBP12 a stimulují neuritový růst v buněčných kulturách, tyto sloučeniny mají následující strukturu:

• · ···· ·· · ··· • ·· ♦ · · · · • · ··· · ··· · ···· ·· ·· ·· ·· ·*

Patentová přihláška PCT č; WO 92/19593 (Vertex) popisuje řadu sloučenin, které jsou užitečné pro inhibici aktivity rotamázy proteinů vázajících FK506 („FKBP) a které inhibují aktivaci buněk T. Tyto sloučeniny mají následující strukturu:

Patentová přihláška PCT WO 94/07858 (Vertex) popisuje řadu sloučenin, které jsou užitečné jako senzibilizátory pro rakovinové buňky odolné vůči více léčivům pro udržení, zvýšení nebo uchování citlivosti těchto buněk pro vůči terapeutickým nebo profylaktickým činidlům. Tyto sloučeniny mají následující strukturu:

H₃CO'

φφφφ φφ φφ φφφ

Patenty patřící fy Guilford Pharmaceuticals, lne. GPI NIL Holdings, lne. a Johns Hopkins University School of Medicine (kolektivně „Guilford) popisují sloučeniny, které jsou užitečné pro inhibici aktivity imunofilinů FKBP-typu, stimulujíce neuronální růst a regeneraci a které léčí neurologické choroby.

Konkrétně, US patent č. 5 696 135 a přihláška PCT č. WO 96/40140 popisují způsob použití derivátů kyseliny pipekolinové, které jsou příbuzné FK506 a rapamycinu, k léčbě neurologické choroby u zvířat. Tyto sloučeniny jsou popsány jako užitečné pro inhibici aktivity rotamázy u imunofilinu typu FKBP, stimulujíce neuronální růst v kuřecím dorsálním kořenovém ganglionu in vitro a podporujíce obnovu poraněných sciatických nervů u krys.

US patent č. 5 798 355 (Guilford) popisuje způsob použití makrocyklických a acyklických derivátů kyseliny pipekolinové, které inhibují enzymovou aktivitu imunofilinů typu FKB a stimulují neuronální růst a regeneraci.

US patenty č. 5 614 547 a 5 795 908 a PCT přihláška WO 96/40633 (Guilford) popisují řadu N-glyoxylprolylesterových sloučenin, které jsou užitečné pro inhibici aktivity rotamázy imunofilinu FKBP-12, podporujíce neuronální růst a regeneraci a léčí neurologické choroby. Představitelem těchto sloučenin je následující struktura:

O,

O ,0

N

Φ· ··

4 4 I 4 4 • ·· · · • · · · · 4

US patent č. 5 801 197 a přihláška PCT WO 97/16190 popisují řadu neimunosupresivních derivátů kyseliny pipekolinové, které jsou užitečné pro léčbu poškozených nervů u zvířat. Reprezentativní analogy této série jsou následující

US patent č. 5 721 256 (Guilford) popisuje sloučeniny, které jsou užitečné inhibitory aktivity rotamázy FKBP, podporujíce neuronální růst a regeneraci a které způsobují neuronální aktivitu u zvířat. Řada sloučenin tohoto typu je představována následující sloučeninou:

US patent č. 5 801 187 a PCT přihláška č. WO 98/13355 popisují řadu hetereocyklických esterových a amidových sloučenin, které jsou užitečné inhibitory aktivity rotamázy FKBP, podporujíce neuronální růst a regeneraci a které způsobují neuronální aktivitu u zvířat. Řada sloučenin tohoto typu je představována následující sloučeninou:

• · • · ·· • · · · · · « ·· · · • · · · · · • · · · · ···· · · · · ·· ···· • ♦ · · · • · · · • · · ♦ · • · · · · • · · · · · · ·

Přihláška PCT č. WO 98/13343 (Guilford) popisuje řadu hetereocyklických thioesterových a ketonových sloučenin, které jsou užitečné inhibitory aktivity rotamázy FKBP, podporujíce neuronální růst a regeneraci a které způsobují neuronální aktivitu u zvířat. Sloučeniny jsou představovány následující sloučeninou:

Přihláška PCT č. WO 98/29116 (Guilford) popisuje řadu Nvázaných sulfonamidových sloučenin heterocyklických thioesterů, které jsou užitečné inhibitory aktivity rotamázy FKBP, podporujíce neuronální růst a regeneraci a které způsobují neuronální aktivitu u zvířat. Sloučeniny jsou představovány následující sloučeninou:

O • · ·· • ♦ · · • 9 9

···« ·· 99 · · ·

9 *

Přihláška PCT č. WO 98/29117 (Guilford) popisuje řadu Ν'vázaných močovinových a karbamátových sloučenin heterocyklických thioesterů, které jsou užitečné inhibitory aktivity rotamázy FKBP, podporujíce neuronální růst a regeneraci a které způsobují neuronální aktivitu u zvířat. Sloučeniny jsou představovány následující sloučeninou:

Přihláška PCT č. WO 98/37882 (Guilford) popisuje způsob použití karbamátových a močovinových sloučenin s malou molekulou, které jsou užitečné inhibitory aktivity rotamázy imunofilinů typu typu FKBP a které stimulují neuronální růst a regeneraci. Sloučeniny jsou představovány následující sloučeninou:

Přihláška PCT č. WO 98/37885 (Guilford) popisuje sérii Noxidových sloučenin heterocyklických esterů, amidů, thioesterů a ketonů, které jsou užitečné pro inhibicí aktivity rotamázy FKBP, podporujíce neuronální růst a regeneraci a léčí neurologické choroby u zvířat. Sloučeniny jsou představovány následující sloučeninou:

• 4

4444

4 44

4 4 ·

Přihláška PCT WO 98/25590 popisuje řadu tetra- a pentapeptidových sloučenin obsahujících alespoň dva prolinové zbytky, které jsou užitečné pro inhibici aktivity rotamázy cyclofilinu, podporujíce neuronální růst a regeneraci a způsobují neuronální aktivitu u zvířat.

Patenty a publikace patřící Ariad Gene Therapeutics, lne. („Ariad) popisují činidla, která jsou užitečná pro multimerizaci imunofilinů, aplikaci v genové terapii, aktivaci genové transkripce, činnost apoptózy nebo pro vyvolání dalších biologických pochodů v buňkách rostoucích v kultuře nebo v celém organismu.

Konkrétně, PCT přihlášky WO 96/06097, WO 97/31898, WO 97/31899 (Ariad) a Holt, D.A., a kol. (Bioorg. Med. Chem., 1998, 6(8), 1309-1335) popisují sloučeniny, které zahrnují řadu multimerních činidel představovaných následující strukturou:

Φ· 94 Β · · 4 • ·· ·· ··«·

Patenty patřící Cephalon, Inc. a Kyowa Hakko, Kogyo Co., Ltd (kolektivně „Cephalon) popisují neurotrofní činidla s malou molekulou, která mají potenciální klinickou užitečnost při léčbě neurodegenerativních chorob.

Zejména, US patenty č. 2 756 494, 5 621 101 a 5 461 146 a přihlášky PCT č. 96/13506 a WO 94/02488 popisují řadu indolokarbazolových proteinových kinázových inhibitorů, které mají neutropní účinky na centrální cholinergní neurony, na dorsální kořenový ganglion a na míchu, tyto sloučeniny jsou představovány následující strukturou:

O žádném z činidel zde diskutovaných se neuvádí, že má terapeutickou nebo profylaktickou účinnost proti neurodegenerativním účinkům u lidí. Proto existuje silná a dosud nerealizovaná potřeba činidel s takovou účinností.

Stručný popis obrázků

Obrázek 1 ukazuje in vivo biologickou aktivitu sloučeniny 30 podle vynálezu za použití kompresního modelu na faciální nerv u krysy. V tomto modelu způsobí komprese obličejového nervu paralýzu svalu v oblasti vousů na pravé straně. Neošetřený faciální nerv na druhé straně se použije jako vnitřní kontrola. Ošetření sloučeninou 30 demonstruje že pohyb vousů na paralyzované straně se obnoví mnohem rychleji ve srovnání s vehikulem a s vnitřní kontrolou. Regenerační ·· ·«·· ·« ·· ·· ··»· ·« ·♦ »«·« · · · ···· ·* ·**· *·· · · * · · • · · ···· · · · »··· ·· ·* ♦· ·· ···· rychlost v pohybu vousů na paralyzované straně ve srovnání s vehikulem. a vnitřní kontrolou je ukázáno na obrázku.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje sloučeniny obecného vzorce nebo jejich farmaceuticky přijatelnou sůl, kde (a) R¹ se zvolí ze skupiny, kterou tvoří H, COCOR², COOR³ a

SO₂R³' (i) R² se zvolí ze skupiny, kterou tvoří O-Ci_₆ alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci-6 alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci-6 alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, C5-7 cykloalkyl, 2-thienyl, 3-thienyl nebo fenyl, kde fenyl má jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou tvoří H, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen a (ii) R³ je fenylakyl, kde fenyl obsahuje jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou tvoří H, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen;

(b) je čtyř až šesti-členný heterocyklický kruh, kde není více než jeden atomu v kruhu kyslík nebo síra;

je pětičlenný heterocyklický kruh obsahující dva až tři heteroatomy vybrané z N, 0 a S, přičemž alespoň jeden heteroatom je N; a (d)

4<

• · » · • ·'* • « · 4444 ·· •4 «*·· • · · « » 4 • 4 4 4 ··

4« 44

4 4 « • » · • · 4 ·· 4444

i,

A se zvolí ze skupiny, kterou tvoři COO(CH₂)mAr, R (přičemž R¹ jsou stejné nebo různé než R¹ popsané v části (a)), CONR⁴ (CH₂)mAr, (CH₂) _m0 (CH₂) _nAr a (CH_z)_nAr, (i) R⁴ je H nebo Ci-₄ alkyl, (ii) Ar se zvolí ze skupiny, kterou tvoří 2-pyridyl, 3-pyridyl, 4-pyridyl a fenyl, přičemž fenyl má jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou vodík, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen;

(iii) m je 1 až 4; a (iv) n je 0 až 4.

Vynález také poskytuje sloučeninu obecného vzorce

nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, kde R' ' je Ci_₄ alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem.

Vynález také poskytuje sloučeninu obecného vzorce

nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, kde • · • · · · · «

Ja) R¹ se zvolí ze skupiny, kterou tvoří H, COCOR², COOR³ a

SO₂R³' (i) R² se zvolí ze skupiny, kterou tvoří O-Ci_₆ alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci-6 alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci_₆ alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, C₅-₇ cykloalkyl, 2-thienyl, 3-thienyl nebo fenyl, kde fenyl má jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou tvoří H, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen a (ii) R³ je fenylakyl, kde fenyl obsahuje jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou tvoří H, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen;

(b) je čtyř až šesti-členný heteroeyklický kruh, kde není více než jeden atomu v kruhu kyslík nebo síra;

je pětičlenný heteroeyklický kruh obsahující dva až tři heteroatomy vybrané z N, 0 a S, přičemž alespoň jeden heteroatom je N; a (d) B je (CH₂)_nAr nebo ,- kde n je 0-4.

Předkládaný vynález dále poskytuje metodu stimulace neuronálního růstu, která spočívá v tom, že se uvedou v kontakt neurony s účinným množstvím jedné ze sloučenin podle vynálezu. Vynález dále poskytuje farmaceutický, který obsahuje jednu ze sloučenin podle vynálezu a farmaceuticky přijatelný nosič.

• · • · ··· ·

Vynález dále poskytuje metodu léčení subjektu, který trpí chorobou charakterizovanou neuronálním poškozením, způsobeným nemocí nebo traumatem, která zahrnuje podání subjektu terapeuticky účinného množství prostředku podle vynálezu. Konečně vynález poskytuje metodu inhibice napadení subjektu chorobou charakterizovanou neuronálním poškozením, zahrnující podání subjektu profylakticky účinného množství sloučeniny podle vynálezu.

Podrobný popis vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje nové pyrrolidiny a piperidiny mající neurotropní účinek. Tyto sloučeniny, spolu s příbuznými sloučeninami a metodami jsou užitečné při léčbě a prevenci neuronových chorob, jako jsou Parkinsonova choroba, Alzheimerova choroba, mrtvice, násobná skleróza, amyotrofní laterální skleróza, diabetická neuropatie a Bellova paréza.

Konkrétně, vynález poskytuje sloučeninu, mající strukturu nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, kde (a) R¹ se zvolí ze skupiny, kterou tvoří H, COCOR², COOR³ a SO₂R³' (i) R² se zvolí ze skupiny, kterou tvoří O-Ci-6 alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci-6 alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci_₆ alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, C5-7 cykloalkyl, 2-thienyl, 3-thienyl nebo fenyl, kde fenyl má jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, • · · · • · · • · · • · fcfc » · · » · · fcfc kterou tvoří H, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen a (ii) R³ je fenylakyl, kde fenyl obsahuje jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou tvoří H, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen;

(b) i je čtyř až šesti-členný heterocyklický kruh, kde není více než jeden atomu v kruhu kyslík nebo síra;

(c) (d) je pětičlenný heterocyklický kruh obsahující dva až tři heteroatomy vybrané z N, O a S, přičemž alespoň jeden heteroatom je N; a

A se zvolí ze skupiny, kterou tvoří COO(CH₂)mAr, r' (přičemž R¹ jsou stejné nebo různé než R¹ popsané v části (a)), CONR⁴ (CHzímAr, (CH₂) _mO (CH₂) _nAr a (CH₂)_nAr, (i) R⁴ je H nebo C1-4 alkyl, (ii) Ar se zvolí ze skupiny, kterou tvoří 2-pyridyl,

3-pyridyl, 4-pyridyl a fenyl, přičemž fenyl má jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou vodík, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen;

(iii) m je 1 až 4; a (iv) n je 0 až 4.

V jednom provedení má sloučenina podle vynálezu následující strukturu, kde každé R¹ je stejné nebo jsou navzájem různé.

0

Ve výhodném provedení se tato sloučenina zvolí ze sloučenin 4, 14, 30, 31, 35, 38, 43, 44, 55, 56, 58, 60, 62 a 64 .

Vynález také poskytuje sloučeninu obecného vzorce

nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, kde R'' je Ci_₄ alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem.

Vynález také poskytuje sloučeninu obecného vzorce

HN-NH >=0 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, kde (a) R¹ se zvolí ze skupiny, kterou tvoří H, COCOR², COOR³ a SO₂R³' (i) R² se zvolí ze skupiny, kterou tvoří O-Ci-6 alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci-₆ alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci_₆ alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, C₅-₇ cykloalkyl, 2-thienyl, 3-thienyl nebo fenyl, kde fenyl má jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou tvoří H, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen a (ii) R³ je fenylakyl, kde fenyl obsahuje jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou • · · ·

tvoří H, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyi a halogen;

(b)

není je čtyř až šesti-členný heterocyklický kruh, kde více než jeden atomu v kruhu kyslík nebo síra;

(c)

až tři alespoň pětičlenný heterocyklický heteroatomy vybrané z N, 0 jeden heteroatom je N; a kruh obsahující dva a S, přičemž (d) B je (CH₂)_nAr nebo

kde n je 0-4.

Ve výhodném provedení se tato sloučenina vybere ze skupiny, kterou tvoří sloučeniny 24, 26, 37 a 59.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být izolovány a používány jako volné báze. Mohou také být izolovány ve formě farmaceuticky přijatelných solí. Příklady takových solí zahrnují soli odvozené od kyseliny bromovodíkové, jodovodíkové, chlorovodíkové, chloristé, sírové, maleinové, fumarové, jablečné, vinné, citrónové, benzoové, mandlové, methansulfonové, hydroethansulfonové, benzensulfonové, šťavelové, palmitové, 2-naftalensulfonové, p-toluensulfonové, cyklohexansulfamové a cukrové.

Vynález dále poskytuje metodu stimulace neuronálního růstu, která zahrnuje kontakt neuronů s účinným množstvím sloučenin podle vynálezu. Tento kontakt se může provést například in vitro, ex vivo nebo in vivo.

• · · • · · · «<

vynález dále poskytuje farmaceutický prostředek, který obsahuje jednu ze sloučenin podle vynálezu a farmaceuticky přijatelný nosič.

Farmaceuticky přijatelné nosiče jsou odborníkovi známé a zahrnují, nikoli však s omezením, od okolo 0,01 do okolo 0,1 M a výhodně 0,05 M fosfátového pufru nebo 0,8 % fyziologického roztoku. Takové farmaceuticky přijatelné nosiče mohou být vodné nebo nevodné roztoky, suspenze a emulze. Příklady nevodných rozpouštědle jsou propylenglykol, polyethylenglykol, rostlinné oleje, jako olivový olej a injektovatelné organicjké estery, jako je ethyloleát. Vodné nosiče obsahují vodu, ethanol, alkoholicko vodné roztoky, glycerol, emulze nebo suspenze, včetně fyziologického a pufrového media. Orální nosiče mohou být elixíry, sirupy, kapsle, tablety a podobně. Typické pevné nosiče jsou inertní substance, jako laktóza, škrob, glukóza, methylcelulóza, stearát hořečnatý, hydrogenfoforečnan vápenatý, manitol a podobně. Parenterální nosiče zahrnují roztok chloridu sodného, Ringerovu dextrózu, dextrózu a chlorid sodný, laktátové Ringerovy a ztužené oleje. Intreavenózní nosiče zahrnují fluidní a nutriční plnidla, elektrolytová plnidla, jako jsou plnidla založená na Ringerově dextróze a podobně. Mohou být také přítomná konzervační činidla další aditiva, jako jsou například antimikrobiální látky, antioxidanty, chelatační činidla, inertní plyny a podobně. Všechny nosiče mohou být smíseny, pokud je to žádoucí, s dezintegračními činidly, ředidly, granulačními činidly, mazadly, pojivý a podobně, za použití technik, známých ve stavu techniky.

Předkládaný vynález dále poskytuje metodu léčení subjektu, postiženého chorobou charakterizovanou neuronálním poškozením, způsobený chorobou nebo traumatem, která zahrnuje podání • · · · subjektu terapeuticky účinného množství sloučeniny podle vynálezu.

··· ·

Výraz „subjekt jak se zde používá, zahrnuje, nikoli však s omezením, jakéhokoli živočicha nebo uměle modifikovaného živočicha. Ve výhodném provedení je subjektem člověk.

Podání farmaceutického prostředku podle vynálezu se může provést za použití jakékoli metody, které jsou odborníkovi známé. Sloučeniny podle vynálezu mohou být podávány například intravenózně, topicky, intramuskulárně, orálně, subkutánně a přímo do cerebrospinální tekutiny nebo do mozku. Ve výhodném provedení se farmaceutický prostředek podle vynálezu podá orálně. Dále podání se může provést tak, že se podá v určitém časovém intervalu několik dávek. Takové dávkovači režimy se mohou stanovit podle obvyklých metod.

Chorob, které jsou charakterizovány neuronálním poškozením je řada a zahrnují, nikoliv však s omezením, následující: Alzheimerova choroba, Pickova choroba, difúzní Lewyho choroba, progresivní supranukleární paralýza (Steel-Richardsonův syndrom) , multisystémová degenerace (Shy-Dragerův syndrom), motorická neuronní nemoc, včetně amyotrofní laterální sklerózy, degenerativní ataxie, kortikální bazální degenerace, komplex ALS-Parkinsonova choroba-demence, subakutní sklerotizující panencefalitida, Huntingtonova choroba, Parkinsonova choroba, synucleionopatie, primární progresivní afazie, striatonigrální degenerace, Machado-Josephova nemoc/spinocerebelární ataxie typu 3 a olivopontocerebelární degenerace, Golles De La Touretteova nemoc, bulbární a pseudobulbární paralýza, spinální a spinobulbární muskulární atrofie (Kennedyho nemoc), primární laterální skleróza, familiální spastická paraplegie, Werding-Hoffmannova nemoc, Kugelberg-Welanderova nemoc, Tay-Sachsova nemoc, Sandhoffova • · ··· · nemoc, familální spastická nemoc, Wohlfart-KugelbergWelanderova nemoc, spastická paraparéza, progresivní multifokální leukoencefalopatie, a prionovy choroby (zanrnující Creutzfeldt-Jakobovu a Gerstmann-StráusslerScheinkerova nemoc, Kuru a fatální familiální insomnie).

Další nemoci zahrnují, avšak bez omezení Binswangerovu nemoc, poranění hlavy a difúzní poškození mozku, poranění míchy, intrakraniální a intravertebrální léze (zahrnující, nikoli však s omezením, kontuzi, pronikání, roztržení, kompresi, a laceraci) mrtvici, která je výsledkem cerebrální ischémie nebo infarktu, embolickou okluzi a trombotickou okluzi a intrakraniální hemoragii jakéhokoliv typu (včetně, nikoli však s omezením, epidurální, subdurální, subarachnoidní a intracerebrální).

Další nemoci jsou, nikoli však s omezením, následující: demyelinační nemoci, jako je násobná skleróza; polyradiculoneuritida (Guillain-Barého syndrom); subakutní demyelinační polyneuropatie; léze mozku indukované akutní roztroušenou encefalomyelitidou, akutní hemoragickou leukoencefalitidou nebo systemickým lupus erythematodes; Behcetův syndrom spojený s multifokálními lézemi mozku, neuropatií a nebo myelopatií; sarkoidózu spojenou s nervovým poškozením nebo atrofii nebo myelopatií; bakteriální nebo virové infekce vedoucí k poškození mozku, míchy, nervovému poškození, meningoradiculitidě a/nebo myelopatií; subakutní kombinovaná degenerace; transverzní myelitida; Leberova dědičná neuropatie; subakutní nekrotická encefalopatie (Leighova nemoc); mitochondriální encefalopatie s demyelinací; metachromatická leukodystrofie; Krabbeho nemoc; Fabryho nemoc; adrenoleukodystrofie; neuromyelitis optica (Devicův syndrom); demyelinační Schwannopathie; kraniální a periferální φ · •φ φφφφ φφ φφ • φ φ φφφ· φφφ φ φ * φ φ «φφφ φ φφφφ φφφ φφφφ φφ φφφφ neuropatie, zahrnující, nikoli však s omezením DéjerineSottasovu neuropatii a její varianty; Charcot-Marie-Toothova nemoc a její varianty; dědičná polyneuropatie, smyslová a motorická neuropatie; axonální neuropatie;

adrenomyeloneuropatie; Refsumova nemoc; neuropatie následkem porfyrie, akutní nebo chronickou intoxinací jedovatými látkami nebo léčivy s axonálním, demyelinačním, smyslovým pohybovým a/neb autonomním postižením; Friedreichova ataxie; ataxietelangiektázie; a metachromatická leukodystrofie; chronická neuropatie, zahrnující, nikoli však s omezením, diabetes mellitus a další metabolické deregulace a deproteinmiázy (metabolické neuropatie, včetně neuropatii v důsledku alkoholismu); a zánětlivé/imunologické postupy (zánětlivé neuropatie, neuropatie spojená s pásovým oparem a leprózní neuritida).

Další nemoci zahrnují, nikoli však s omezením, traumatické neuropatie periferních nebo kraniálních nervů, Bellovu parézu a další faciální nervové neuropatie, trigeminální neuropatii, přídatnou nervovou neuropatii, vagovou neuropatii, vestibulární neuropatii, glosofaryngální neuropatii, neuropatii očního nervu, okulomotorickou neuropatii, násobnou kraniální nervovou paralýzu, plexopatie, kořenové nemoci, idiopatickou brachiální neuritidu, plexitidu, multifokální neuropatii, a neuropatii autonomního nervového sytému.

V jednom provedení vynálezu je léčená choroba způsobená nemocí, která je vybraná ze skupiny, kterou tvoří Parkinsonova choroba, Alzheimerova choroba, mrtvice, násobná skleróza, amyotrofní laterální skleróza, diabetická neuropatie a Bellova paréza. V dalším provedení je léčená choroba způsobená poraněním mozku, míchy nebo perifeních nervů.

ΦΦ φφ φ φ φ φ • Φ φφφφ

Konečně předkládaný vynález poskytuje metodu inhibice vypuknutí choroby u subjektu, kde choroba je charakterizována neuronálním poškozením a kde metoda zahrnuje podání příslušnému subjektu profylakticky účinného množství sloučeniny podle vynálezu.

V jednom provedení je inhibovaná choroba vybraná ze skupiny, kterou tvoří Parkinsonova choroba, Alheimerova choroba, mrtvice, násobná skleróza, amyotrofní laterální skleróza, diabetická neuropatie a Bellova paréza.

Výraz „terapeuticky účinná dávka farmaceutického prostředku podle vynálezu je množství, které je dostatečné zastavit, obrátit nebo redukovat postup choroby.

„Profylakticky účinné množství farmaceutického prostředku je množství dostatečné k inhibici počátku choroby, t.j. eliminuje, zmírňuje nebo zpožďuje počátek nemoci. Metody pro stanovení terapeuticky a profylakticky účinných dávek pro prostředky podle vynálezu jsou známé ve stavu techniky. Účinná dávka pro podání farmaceutického prostředku u člověka může být například určena matematicky na základě výsledků studia u zvířat.

V jednom provedení je terapeuticky a/nebo profylakticky účinná dávka taková dávka, která je dostatečná k dodání od okolo 0,01 mg/kg do okolo 200 mg/kg tělesné hmotnosti sloučeniny podle vynálezu. V dalším provedení je terapeuticky a/nebo profylakticky účinná dávka taková dávka, která je dostatečná k dodání od okolo 0,1 mg/kg do okolo 100 mg/kg tělesné hmotnosti. Ve výhodném provedení je terapeuticky a/nebo profylakticky účinná dávka taková dávka, která je dostatečná k dodání od okolo 1 mg/kg do okolo 30 mg/kg tělesné hmotnosti.

φφ Φ· φ φ φφφ ·

ΦΦΦΦ φ« φφ φφφφ

Vynález bud lépe pochopen na experimentální podrobnosti které následují, ale odborník snadno pozná, že tyto podrobnosti mají pouze ilustrativní charakter pro pochopení vynálezu, který je kompletněji popsán v nárocích, které následují. Dále, v předkládaném popisu je citována řada publikací, které jsou zde uváděny jako odkaz.

Experimentální podrobnosti

I. Obecné metody přípravy

Reprezentativní sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny podle obecných syntetických metod popsaných dále a ilustrovaných následujícími schématy.

V těchto schématech jsou arabské a římské číslice použity zaměnitelně a odkazují na různé sloučeniny. Sloučeniny, kterým je přiřazeno v této sekci arabské číslo, nemají být zaměněny se specifickými sloučeninami označenými arabskými číslicemi v tabulce 1 a jinde v tomto dokumentu.

Schéma 1

Sloučenina la, obecného vzorce:

'N

1a \o [kde | N a mají význam uvedený v tomto dokumentu; Z je (Ci~ C6) alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, (Ci-Cg) alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem nebo (C5-C7) cykloalkyl nebo fenyl; kde fenylový kruh obsahuje jeden až tři substituenty, které jsou nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří vodík, • 4 nižší alkyl, nižší alkoxy, hydroxy a halogen; Y je A a nižší alkoxykarbonyl; a A má význam uvedený v tomto dokumentu] se může připravit reakcí sloučeniny lb obecného vzorce:

44 » 4 4 «

44

4«

CM⁷

OR

1b [kde a mají význam uvedený v tomto dokumentu; R je (Ci

C₆) alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem; Y je A nebo nižší alkoxykarbonyl; a A má význam uvedený v tomto dokumentu] s vhodně chráněným Grignardovým činidlem v inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran nebo diethylether při teplotě v rozsahu od okolo -78 °C do okolo 0 °C po dobu okolo 2 až okolo 6 hodin, v závislosti na reaktivitě oxamátu.

Schéma 2

Alternativně, sloučeniny la a lb, [kde a mají význam uvedený v tomto dokumentu; R je (Ci~

C₆) alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem; Y je A nebo nižší alkoxykarbonyl; a A má význam uvedený v tomto dokumentu; a Z je (Ci-C₆) alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, (Ci-Cg) alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, (C5-C7) cykloalkyl, 2-thienyl, 3-thienyl nebo fenyl; kde fenylový kruh obsahuje jeden až tři substituenty, které jsou nezávisle vybrány ze skupiny, kterou tvoří vodík, nižší alkyl, nižší alkoxy, hydroxy a halogen] se mohou připravit reakcí sloučeniny 2 obecného vzorce ·· ··*· ·· ·· • · · ( · · 9 · · · · · <

» ·· · * · · · * »· 9 99 99 99 99

[kde 'a A mají význam uvedený v tomto dokumentu] s vhodně chráněným chloridem glyoxylové kyseliny nebo alkyloxalylchloridem v inertním rozpouštědle, jako je methylenchlorid po dobu 2 až 6 hodin. Obecně se reakce provede v přítomnosti organického aminu, jako je diizopropylethylamin nebo triethylamin při teplotě od okolo 0 °C do okolo 37 °C.

V případě sloučeniny obecného vzorce la, s definicemi uvedenými shora, tato přeměna se může provést kondenzací sloučeniny obecného vzorce 2 s definicemi uvedenými shora, s vhodně chráněnou kyselinou glyoxylovou v přítomnosti kondenzačního činidla, jako je diizopropylkarbodiimid, dicyklohexylkarbodiimid nebo benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosforečnan (Castrovo činidlo) v inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, dimethylformamid nebo methylenchlorid, při teplotě v rozsahu od okolo 0 °C do okolo 37 °C po dobu od okolo 2 hodin do okolo 24 hodin.

Schéma 3

Sloučenina 3, obecného vzorce

je fenylakyl; substituenty, a A mají význam uvedený v tomto kde fenylový kruh obsahuje jeden které jsou nezávisle vybrány ze dokumentu; a R³ až tři skupiny, kterou » φ * · φ φ • φφ »

ΦΦΦΦ φφφ tvoří vodík, nižší alkyl, nižší alkoxy, hydroxy a halogen] se může připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce 2, s definicemi uvedenými shora, s fenylalkylsulfonylchloridem v inertním rozpouštědle, jako je methylenchlorid, po dobu od okolo 2 hodin až okolo 24 hodin. Obecně se reakce provede v přítomnosti organického aminu, jako je diizopropylethylamin nebo triethylamin při teplotě v rozsahu od okolo 0 °C do okolo 37 °C.

Schéma 4

Sloučenina 2, s definicemi uvedenými shora, se může připravit ze sloučeniny 4 obecného vzorce:

s definicemi uvedenými shora, standardními metodami pro odstranění N-benzyloxykarbonylové skupiny. Takové metody zahrnují katalytickou hydrogenací na katalyzátoru na bázi vzácného kovu, jako je palladium na uhlí v alkoholovém rozpouštědle, po dobu 4 až 24 hodin, obvykle při teplotě místnosti nebo reakcí s bromidem boritým v inertním rozpouštědle, jako je methylenchlorid po dobu 2 až 6 hodin při teplotě od okolo -78 °C do okolo 25 °C nebo reakcí se silnou kyselinou, jako je kyselina bromovodíková v kyselině octové po dobu 2 hodin až 6 hodin při teplotě od okolo 20 °C do okolo 100 °C. V později uváděné metodě se produkt často izoluje jako hydrobromidová sůl.

• 4 ·· « · · tr ♦··· ·«»« «·

Schéma 5

Sloučenina 5a, obecného vzorce:

[kde m, a Ar mají význam uvedený v tomto dokumentu] se může připravit reakcí sloučeniny 5b obecného vzorce:

s definicemi uvedenými shora, s aromatickým nebo heteroaromatickým alkoholem, jako je 3-hydroxypyridin. Reakce se obvykle provede v přítomnosti derivátu azadikarboxylové kyseliny, jako je diethylazodikarboxylát nebo l,l'-(azodikarbonyl)dipiperidin a fosfinový derivát, jako je trifenylfosfin nebo tri-n-butylfosfin v inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran nebo toluen po dobu od okolo 12 hodin do okolo 24 hodin. Reakční teplota je v rozsahu od okolo 20 °C do okolo 65 °C.

Schéma 6

Sloučeniny 6a a 6b obecného vzorce:

,COO(QH₂)_mAr

6a

,CONR⁴(CH₂)_mAr

6b « · • · • · · · ·

[kde ζ|^₎ ^<©_ι R⁴, R je COCOR², COOR³ v tomto dokumentu] obecného vzorce:

m a Ar mají význam uvedený v tomto dokumentu; nebo SO₂R³; a R² a R³ mají význam uvedený se mohou připravit reakcí sloučeniny 6c

[kde i a mají význam uvedený v tomto dokumentu; R je

COCOR², COOR³ nebo SO₂R³; a R² a R³ mají význam uvedený v tomto dokumentu] s arylalkylaminovým nebo arylalkanolaminovým derivátem. Reakce se provede přes meziprodukt acylazid nebo směsný anhydrid přidáním reakčního činidla, jako je difenylfosforylazid, izopropenylchiorformiát nebo izobutylchlorformiát, společně s organickou aminovou bází, jako je triethylamin nebo diizopropylethylamin v inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran nebo dimethylformamid. Může se přidat acylační katalyzátor, jako je dimethylaminopyridin. Reakce se obvykle provede při teplotě v rozsahu od okolo 0 °C do okolo 25 °C po dobu od okolo 12 hodin, do okolo 24 hodin.

Schéma 7

Sloučenina 5b obecného vzorce:

se může připravit redukcí sloučeniny 7

Q.® • · ···· ·· ·· • · · · · · · • · · · · · [kde ^xn , a m mají význam uvedený v tomto dokumentu; a R je nižší alkyl] s redukčním činidlem na bázi kovového hydridu, jako je borohydrid lithný nebo kombinace borohydrid sodný/chlorid lithný. Reakce se obvykle provede v alkoholovém rozpouštědle, jako je ethanol nebo methanol, s nebo bez přidání tetrahydrofuranu, při teplotě v rozsahu od teploty okolo teploty místnosti do teploty okolo 65 °C po dobu od okolo 24 hodin do okolo 72 hodin.

Schéma 8

Sloučenina 6c se může připravit reakcí sloučeniny 8 obecného vzorce:

,COOR'

[kde ^xn^x a V52 mají význam uvedený shora; R je COCOR², COOR³ nebo SO₂R³; a R² a R³ mají význam uvedený v tomto dokumentu a R'je nižší alkyl], s hydroxidem alkalického kovu nebo uhličitanem alkalického kovu, jako je hydroxid lithný, hydroxid sodný nebo uhličitan draselný v směsném vodném rozpouštědlovém systému, jako je terahydrofuran/voda nebo ethanol/voda při teplotě od okolo teploty místnosti do okolo 80 °C po dobu od okolo 3 hodin do okolo 24 hodin.

Schéma 9

Sloučenina 9a, obecného vzorce:

N ^s lCO₂R

9a • · • · · · [kde ^VN a m mají význam uvedený v tomto dokumentu; a R je nižší alkyl] se může připravit kondenzací sloučeniny 9b obecného vzorce:

·· · · ···· · · ···· ·· · ·· ··· · · * · · • · ··· · · · · ·

NH,

9b s definicemi uvedenými shora, s α-bromketoesterem jako je ethylbrompyruvát nebo ethyl γ-bromacetát, v alkoholovém rozpouštědle, jako je ethanol. Reakce se může provést při teplotě v rozsahu od okolo 20 °C do okolo 80 °C po dobu od okolo 2 hodin do okolo 24 hodin.

Schéma 10

Podobně se sloučenina 10a obecného vzorce:

s definicemi uvedenými shora může připravit kondenzací sloučeniny 9b se sloučeninou 10b obecného vzorce:

Br

N

O

10b s definicemi uvedenými shora, v alkoholovém rozpouštědle, jako ·· je ethanol, při teplotě okolo 80 °C po dobu od okolo 3 hodin do okolo 24 hodin.

Schéma 11

Sloučenina 10b s definicemi uvedenými shora se může připravit reakcí sloučeniny 11 obecného vzorce:

s definicemi uvedenými shora, s bromovodíkem, v inertním rozpouštědle, jako je diethylether. Obecně se reakce provede při teplotě od okolo 0 °C do okolo 25 °c dokud vývoj N₂ není kompletní.

Schéma 12

Sloučenina 11 se může připravit ze sloučeniny 12 obecného vzorce:

[kde má význam popsaný shora] reakcí derivátu chloridu kyseliny sloučeniny 12 s diazomethanem nebo trimethylsilyldiazomethanem v přítomnosti organické báze, jako je triethylamin nebo diizopropylethylamin. Reakce se obvykle provede v inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran,

4· ·4 • · Φ ·

Φ · * • 4 acetonitril nebo jejich kombinace při teplotě v rozsahu od okolo 0 °C do okolo 25 °C po dobu od okolo 2 hodin do okolo 24 hodin. Chlorid kyseliny se může získat z odpovídající kyseliny za použití standardních metod popsaných v literatuře, jako je reakce s oxalylchloridem v inertním rozpouštědle, jako je methylenchlorid nebo tetrahydrofuran v přítomnosti katalytického množství dimethylformamidu.

Schéma 13

Sloučenina 13, obecného vzorce:

Λα °^J

[kde N má význam uvedený v tomto dokumentu; a R je nižší alkyl] se může připravit reakcí sloučeniny 12 s aniontem odvozeným od alkylizokyanátu v polárním, inertním rozpouštědle, jako je dimethylformamid po dobu od okolo 12 hodin do okolo 24 hodin. Obvykle se ke generování aniontů použije uhličitan alkalického kovu, jako je uhličitan draselný. K usnadnění reakce se karboxylové kyselina sloučeniny 12 konvertuje na aktivní sloučeninu in šitu, jako je acyla.zid, reakcí s difenylfosforylazidem.

Schéma 14

Sloučenina 14a, obecného vzorce:

/^Ny^(^CH2)nAr

Ó-N

14a • · · ♦

4

4 ·· * · 44 · 44 ·

4 4 4 · · ·

44 44 4 • 4 4 9 4 4 4

4 · 4 4 4 4

4444 4· «4 44 [kde '^N , , a Ar mají význam uvedený v tomto dokumentu; R je

COCOR², COOR³ nebo SO₂R³; a R² a R³ mají význam uvedený v tomto dokumentu] se může připravit spojením sloučeniny 14b obecného vzorce:

^H2^Ny^ (CH₂)nAr HO-N

14b [kde Ar má význam uvedený v tomto dokumentu] se sloučeninou 14c obecného vzorce:

OH

14c [kde ''Ίί má význam uvedený v tomto dokumentu; R je COCOR², COOR³ nebo SO₂R³; a R² a R³ mají význam uvedený v tomto dokumentu] v přítomnosti kopulačního činidla, jako je ve vodě rozpustný karbodiimid, diizopropylkarbodiimid nebo dicyklohexylkarbodiimid v inertním rozpouštědle, jako je diglym nebo dioxan. Obvykle se reakce provede při teplotě od okolo 50 °C do okolo 110 °C po dobu od okolo 5 hodin do okolo 24 hodin.

Sloučenina 14b se může připravit reakcí arylalkylnitrilů s hydroxylaminhydrochloridem v polárním, protickém rozpouštědle, jako je ethanol, v přítomnosti anorganické báze, jako je uhličitan draselný. Obecně se reakce provede při teplotě od okolo 20 °C do okolo 100 °C po dobu okolo 12 hodin do okolo 72 hodin.

Schéma 15 • · · « • · · # · · • · · · · • · · · · · • · · · · ···· · · · ·

Sloučenina 15a obecného vzorce:

'N Λ\ H R ^N~^N 15a [kde R je COCOR², COOR³ v tomto dokumentu; V je nebo SO₂R³; a R² a R³ (CH₂)_nAr nebo maj í význam uvedený a Ar má význam uvedený v se může připravit reakcí tomto dokumentu] sloučeniny 15b, obecného vzorce:

[kde R je COCOR², COOR³ nebo SO2R³; a R² a R³ mají význam uvedený v tomto dokumentu V je (CH2)_nAr nebo

Ř · t

a Ar má význam uvedený v tomto dokumentu] s cyklodehydratačním činidlem, jako je thionylchlorid v pyridinu, hexamethyldisilazan v přítomnosti tetra-n-butylamoniumfluoridu a imidazolu, Et₃N⁺S (O) ₂N~COOMe (Burgessovo činidlo) nebo anhydrid kyseliny trifluormethansulfonové v přítomnosti triethylaminu. V případě thionylchloridu v pyridinu se počáteční reakce s bisacylhydrazinovým derivátem provede při teplotě okolo 0 °C po dobu od okolo 2 hodin do okolo 6 hodin. Následné uzavření oxadiazolu se provede v inertním rozpouštědle, jako je toluen, po dobu od okolo 3 hodin do okolo 24 hodin, při teplotě od okolo 80 °C do okolo 150 °C. Reakce bisacylhydrazinového derivátu s hexamethyldisilazanem se obecně provede v inertním rozpouštědle, jako je toluen nebo chlorbenzen, při teplotě • 4 • 4 v rozsahu od okolo 80 °C do okolo 150 °C po dobu od okolo 6 hodin do okolo 72 hodin. V případě Burgessova činidla se reakce s bisacylhydrazinovým derivátem obecně provede při teplotě místnosti po dobu od okolo 24 hodin do okolo 72 hodin v inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran. Reakce bisacylhydrazinového derivátu s anhydridem kyseliny trifluormethansulfonové a triethylaminem se obecně provede v inertním rozpouštědle, jako je methylenchlorid, tetrahydrofuran nebo diethylether, při teplotě v rozsahu od okolo 0 °C do okolo 25 °C po dobu od okolo 1 hodiny do okolo 24 hodin.

Schéma 16

Sloučenina 15b se může připravit reakcí směsného anhydridu nebo chloridu kyseliny sloučeniny 14c,

O [kde N má význam uvedený v tomto dokumentu; R je COCOR ,

COOR³ nebo SO₂R³; a R² a R³ mají význam uvedený v tomto dokumentu] se sloučeninou 16a obecného vzorce:

O

Vv

H₂N-NH

[kde V je (CH₂)_nAr nebo R ; a Ar má význam uvedený v tomto dokumentu]. Obecně se reakce provede v inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran nebo methylenchlorid s nebo bez přidání terciární báze, jako je triethylamin nebo diizopropylethylamin, při teplotě od okolo 0 °C do okolo 25 °C po dobu od okolo 6 hodin do okolo 24 hodin. Směsný anhydrid nebo chlorid kyseliny se může získat z odpovídající kyseliny za použití standardních metod popsaných v literatuře, jako je reakce s izobutylchlorformiátem nebo ethylchlorformiátem

φφφφ • φφφ φφφ φ ·♦ v přítomnosti triethylaminu nebo diizopropylethylaminu nebo reakcí s oxalylchloridem v inertním rozpouštědle, jako je methylenchlorid nebo tetrahydrofuran v přítomnosti katalytického množství dimethylformamidu.

V případě sloučeniny 15b, s definicemi uvedenými shora, se tato transformace může provést kondenzací sloučeniny 16a, s definicemi uvedenými shora, se sloučeninou 14c, v přítomnosti kondenzačního činidla, jako je diizopropylkarbodiimid nebo benzotriazol-l-yloxytris(dimethylamino)fosfonium hexafluorfosforečnan (Castrovo činidlo) v inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, dimethylformamid nebo methylenchlorid, pří teplotě v rozsahu od okolo 0 °C do okolo 37 °C po dobu 2 hodin až 24 hodin.

Sloučenina 16a [kde V je (CHž/Ar nebo ; a Ar má význam uvedený v tomto dokumentu] se může připravit z odpovídajícího nižšího alkylesterového derivátu reakcí s hydrazinem v alkoholovém rozpouštědle, jako je ethanol, při teplotě zpětného toku po dobu od okolo 6 hodin do okolo 24 hodin. Alternativně, sloučenina 16a se může připravit z odpovídajícího derivátu karboxylové kyseliny přes meziprodukt trimethylsilylového esteru, reakcí s hydrazinem, v inertním rozpouštědle, jako je methylenchlorid, tetrahydrofuran nebo dimethylformamid, při teplotě v rozsahu od okolo 0 °C do okolo 25 °C po dobu od okolo 1 hodiny do okolo 24 hodin. Silylový ester se může připravit in šitu, metodami, obvykle používané odborníkem, jako je reakce karboxylové kyseliny s N,O-bistrimethylacetamidem při teplotě v rozsahu od okolo 0 °C do okolo 25 °C po dobu od okolo 1 hodiny do okolo 6 hodin.

Schéma 17

• I ♦« • · · · φ · φ φ ·Φ ·

Sloučenina 17, obecného vzorce:

[kde má význam uvedený v tomto dokumentu; R je COCOR²,

COOR³ nebo SO₂R³; a R² a R³ mají význam uvedený v tomto dokumentu] se může připravit reakcí směsného anhydridu nebo chloridu kyseliny sloučeniny 14c

O [kde má význam uvedený v tomto dokumentu; R je COCOR ,

COOR³ nebo SO₂R³; a R² a R³ mají význam uvedený v tomto dokumentu] s okolo 0,5 až okolo 1 ekvivalentem hydrazinmonohydrátu, při teplotě v rozsahu od okolo 0 °C do okolo 25 °C po dobu od okolo 4 hodin do okolo 24 hodin.

Obecně se reakce provádí v inertním rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, methylenchlorid, s nebo bez přidání terciární aminové báze, jako je triethylamin nebo diizopropylethylamin. Směsný anhydrid nebo chlorid kyseliny se může získat z odpovídající kyseliny za použití standardních metod známých v literatuře, jako je reakce s izobutylchlorformiátem nebo ethylchlorformiátem v přítomnosti triethylaminu nebo diizopropylethylaminu nebo reakce s oxalylchloridem v inertním rozpouštědle, jako je methylenchlorid nebo tetrahydrofuran, v přítomnosti katalytického množství dimethylformamidu.

Fenylaikylsulfonylchloridy, používané v přípravě sloučeniny 3, arylalkylaminy a .arylalkanolové deriváty používané v přípravě sloučenin 6a a 6b, sloučeniny obecného vzorce sloučeniny 12, nižší alkylarylalkylkarboxylátové deriváty, používané k syntéze sloučeniny 16a a φφ φφ φ φ φ φ φ φ arylalkylnitrily, používané k přípravě sloučeniny 14b, se mohou snadno získat, pokud nejsou komerčně dostupné, obvyklými syntetickými postupy, v souladu s předchozí literaturou, ze snadno přístupných materiálů za použití standardních reakčních složek a reakčních podmínek.

O

Je třeba vzít v úvahu, že když A je R’ , kde N a R¹ mají význam uvedený v tomto dokumentu, sloučeniny podle vynálezu mohou obsahovat dvě skupiny R¹. Proto mohou být reakce popsané shora provedeny současně na obou skupinách R¹, přidáním dalšího ekvivalentu reakčního činidla k příslušnému substrátu. Dále je možné selektivně modifikovat jednu z R¹ skupin bez modifikace dalších skupin, použitím vhodné chránící skupiny, což je způsob, který je odborníkovi znám.

Jestliže sloučeniny podle vynálezu mají alespoň jedno chirální centrum, mohou existovat jako enantiomery. Pokud sloučeniny bodle vynálezu mají dvě nebo více chirálních center, mohou existovat jako diastereomery. Je třeba vzít v úvahu, že všechny takové izomery a jejich směsi spadají do rozsahu předkládaného vynálezu. Dále, některé krystalické formy pro sloučeniny podle vynálezu mohou existovat jako polymorfy, a jako takové jsou zahrnuty do předkládaného vynálezu. Dále, některé ze sloučenin mohou tvořit solváty s vodou (tj. hydráty) nebo obvyklými organickými rozpouštědly a takové solváty jsou zahrnuty do rozsahu předkládaného vynálezu.

II. Vybrané sloučeniny podle vynálezu

Ve výhodném provedení vynálezu se sloučeniny podle vynálezu vyberou ze skupiny sloučenin, uvedených v tabulce 1 dále.

0 ··

0· 0 • ·· ·

Tabulka 1

/i o>X J 0_Z/ CrO Tj	H	O^NH 0—^	o	A 0	Aí O^NH Yn o—
Sloučenina 1	Sloučenina 2	i Sloučenina 3
		Ά
γΧχΝ		v			Y
Γ\ °T°		1 f°			1 r°
Q>Ai	(	μ'Μν		£
oA 0 i	Λ ΟΑΟ		H	V
Yh		ΊΠ
		u
Sloučenina 4	Sloučenina 5	Sloučenina 6
0		Q			orojO
r\ 1°		r\ r°
			%	Λ	o—
//		X°J
OCH2CH3			X
Sloučenina 7	Sloučenina 8	Sloučenina 9

♦ · ·· ♦ · · ι • 99 · « ·· ·*♦·

ΦΦ ·* φ · φ φ • φφφφ φφ φφ φ φ φ φ

φ φφφφ

Ο-:° VQ Γ ΗΝ-ΝΗ y Λ cA0 Ζ Z	/	.....Q 1 N-N I c/γ0
: Sloučenina 29	Sloučenina 30
°γλ0 °’Ν Ζ	Q^°y^O °γλ0 HN-NH	4O< Λ O
Sloučenina 31	Sloučenina 32	Sloučenina 33
och3 Q~/ Tv“CZ00Hí 0 1 HN-NH OCH3 Z	% z	V Z. N Z °V X ýV-°CH3 h3co OCHs
Sloučenina 34	Sloučenina 35
OyUo ™-NH Z	och3 Qkf °^_HrZ0CHi HN-NH OCH3 Z
Sloučenina 36	Sloučenina 37

• to »·♦· • · * « · · • ·« · .· • · · · · · • « · · · ···· ·· »· • 9 9 · • · · • · · e · · ·· ····

°Ί /	Á°< O	°Á»V och3 h3co 0CH3	9//.....9 0^0 cA0 ii Cr1
Sloučenina 38	Sloučenina 39	Sloučenina 40 1
9a^-q H s-^ H	0 9//.....9 °/o o/° och3 och3	9a/-9
Sloučenina 41	Sloučenina 22	Sloučenina 43
/	Οχ°>-'Ό X n~n i (A*0	9Ά.....Q X N-N i oAd oAo Z ď	9a°>.....Q H N-N H
Sloučenina 44	Sloučenina 45	Sloučenina 46
v·.Lž X	9w/ Vx> 3js s /
Sloučenina 47	Sloučenina 48 :

*» ·· • · · · • ·· • · 11 111

1911 91 ·· ···· *4 · • · 9

11

11 9

91 • 1 · · • · 9 · • · ·«··

CsvV °^zN N °^X°	QZ VQ „ 1 HN-NH y °Z> oZ 7 Z
Sloučenina 49	Sloučenina 50
<λύ.....0 °γΚ N N 0 H3C0 h3co	% Z	Z N_N 1 ^0 o^o	p Ql λζ O 1
Sloučenina 51	Sloučenina 52 ' 1	Sloučenina 53
?s n-n '<0 1 ó°	o< /	QxvQ Zo N-N H /	Ov i n-n j HjCO^Y^'001^ HjCoPQ^OCHj °°^ OCHj
Sloučenina 54	Sloučenina 55	Sloučenina 56 '·
ζΧ°ν»Ό NA// N~N s^° Λ 0 f 0 ó.	% Z	A z Po Pz-Z , W·^/ \ /	Qz °>' O Λ 1 HN-NH V Z °γΖ N
Sloučenina 57	Sloučenina 58	Sloučenina 59 .

/	.....Ο I Ν-Ν 1 0 f	°Ί	0/ νς Α> οΑ
Sloučenina 60	Sloučenina 61
	C-A rf2 Ο 1 ί/	%	Q/ νς 1 ΗΝ-ΝΗ	J^o
	impoond 62	Sloučenina 63

Ϋ'·’Λ Ν' °Α>„ ^Ν-^Ν „Λ ,₀

//° ν, ₀ ί HN-NH ».

°γ4₀

Sloučenina 64

Sloučenina 65

Sloučenina 66 ··· ·· ·· ·· ·· · · · ·

III Specifické syntetické metody

Specifické sloučeniny, které jsou reprezentativní příklady vynálezu se mohou připravit jako takové následujícími příklady. Kvůli zjednodušení přehlednosti jsou sloučeniny podle vynálezu připravené v následujících příkladech identifikovány výrazem „sloučenina a následnou příslušnou číslicí (například „sloučenina 1). Meziprodukty v syntézách sloučenin podle vynálezu jsou označeny jako „referenční příklady. Žádné opatření nebylo provedeno za účelem optimilizace výtěžků získaných při reakcích. Odborník by měl znát, jak zvýšit tyto výtěžky, za použití běžných variací v reakční době, teplotách, rozpouštědlech a/nebo reakčních složkách.

Produkty některých referenčních příkladů se mohou použít jako meziprodukty pro přípravu jedné nebo více sloučenin podle vynálezu. V těchto případech výběr meziproduktů, které se mají použít k přípravě následných sloučenin podle vynálezu závisí na úvaze odborníka.

Příklady provedení vynáleu

Referenční příklad 1

Ke studené (0 °C) suspendované směsi N-karbobenzyloxy-Lprolinu (9,96 g, 40,0 mmol) a seskvilhydrátu uhličitanu draselného (26,50 g, 160,0 mmol) v DMF (60 ml) se přidá • · • · • · · · difenylfosforylazid (12,0 ml, 55,6 mmol) a methylizokyanacetát (7,30 ml, 80,3 mmol). Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se míchá při zhruba teplotě místnosti okolo 20 hodin. Přidá se solanka a reakční směs se filtruje. Filtrát se extrahuje směsí CHCI3/CH3OH (9:1, 150 ml). Organický roztok se promyje H₂O (3x), solankou (4x), suší se nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se do sucha. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu 2% CH₃OH v CHC1₃ a tak se získá oxazol (7,47 g, 56% výtěžek) světle hnědého oleje jako 45:55 směs rotamerů (NMR). CIMS MH⁺ = 331 (100 %). ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1,95 - 2,00 (m, 3H) , 2,30 - 2, 45 (m, 1H) , 3, 45 - 3, 60 (m, 2H) , 3,71 (s, 0,55 x 3H) , 3,82 (s, 1,35H), 4,91 (d, J_ab = 12,82, 1,1H), 5,03 (d, J_ab = 12,82, 0,9H), 5, 45 - 5, 48 (m, 0,45H), 5, 52 - 5, 54 (m, 0,55H), 7,02 (široký s, 1H) , 7,26 - 7,34 (m, 4H) , 8,32 - 8,39 (m, 1H) .

Referenční příklad 2

Ke studenému (0 °C) roztoku methylesteru z referenčního příkladu 1 (7,27 g, 22,6 mmol) ve směsi THF/H₂O (2:1, 270 ml) se přidá hydroxid lithný (594,7 mg, 24,8 mmol). Výsledná směs se přes noc míchá okolo teploty místnosti. Reakční směs se okyselí 4,80 g kyseliny citrónové ve 100 ml vody a extrahuje se CHCI3 (2 x 150 ml). Spojené organické extrakty se suší nad Na₂SO_4/ filtrují se a koncentrují se a tak se získá kyselina karboxylová (6,66 g, 93 %) ve formě bílé šupinkovité pevné látky. CIMS M-l = 315 M-45 = 271 (100 %). NMR (300 MHz, • · ···· · · · · • · · « · · « • · · + · a • · · · · « · • · *· · · ··· ·

DMSO-d₆) , směs rotamerů 45:55, δ 1,95 - 2,05 (m, 3H) , 2,25 2,40 (m, 1H) , 3,35 - 3,60 (m, 2H) , 4,91 (d, J_ab = 12, 82, 0, 55 x

2H) , 5,03 (d, J_ab = 12,82, 0, 45 χ 2H) , 5,45 - 5, 48 (m, 0,45 x

1H) , 5, 52 - 5, 54 (m, 0,55 χ 1H) , 7,00 (široký s, 1H) , 7,20 7,45 (m, 5H), 8,25 - 8,35 (m, 1H).

Sloučenina 1

Ke studenému (0 °C) roztoku kyseliny oxazol-4-karboxylové z referenčního příkladu 2 (632,3 mg, 2,00 mmol) a triethylaminu (0,62 ml, 4,45 mmol) v DMF (2 ml) se přidá difenylfosforylazid (0,48 ml, 2,22 mmol) a 3-aminomethylpyridin (0,22 ml, 2,16 mmol). Výsledná směs se míchá při zhruba teplotě místnosti okolo 1 dne, zředí se vodou (25 ml) a extrahuje se EtOAc (2 x 25 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (6 x 50 ml), suší se nad Na₂SO₄, filtrují se a koncentrují se do sucha. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu 100% EtOAc a tak se získá sloučenina 1 (0,49 g, 60% výtěžek) ve formě bezbarvého nehybného oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 407 (100 %); M + Na = 429 (10 %) . ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆) , směs rotamerů 45:55, δ 1,90 - 2,15 (m, 3H), 2,30 - 2,45 (m, 1H), 3,55 - 3,70 (m, 2H) , 4,45 - 4, 65 (m, 2H) , 4,85 - 5,20 (m, 2H) ,

5, 65 - 5, 70 (m, 0,45 χ 1H) , 5, 75 - 5, 80 (m, 0,55 χ 1H) , 7,0 (široký s, 1H), 7,20 - 7,40 (m, 6H), 8,45 -8,50 (m, 1H), 8,55

- 8, 60 (m, 1H) .

• · • · · · • · <

···» · ·

Sloučenina 2

Heterogenní směs sloučeniny 1 (0,39 g, 0,96 mmol) a 10% paladia na uhlíku (0,05 g) v CH₃OH (25 ml) se míchá při tlaku vodíku 0,3515 MPa 3 hodiny při zhruba teplotě místnosti. Směs se filtruje přes polštářek křemeliny a filtrační koláč se propláchne CH3OH. Spojený filtrát se koncentruje ve'vakuu a tak se získá sloučenina 2 (0,25 g, 96% výtěžek) ve formě nehybného oleje, kterým se zpracuje bez dalšího čištění. MS (smyčka +)

MH⁺ = 273 (100 %) . ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1,8 - 2,2 (m,

4H) , 2, 95 - 3, 05 (m, 1H) , 3,10 - 3,20 (m, 1H) , 4, 55 - 4,70 (m, 2H) , 4,90 (t, J = 7,00 Hz, 1H) , 7,20 - 7, 35 (m, 2H) , 7,60 7,75 (m, 3H) , 8,53 (d, J = 4,13 Hz, 1H) , 8,62 (s, 1H) .

Sloučenina 3

Ke studenému (0 °C) roztoku sloučeniny 2 (0,25 g, 0,91 mmol) a triethylaminu (140 ml, 1,00 mmol) v methylenchloridu ♦ 4 • 44 · · ····· ·· ·· ·«···· (10 ml) se přidá oí-toluensulfonylchlorid (184,2 mg, 0,966 mmol). Po míchání po dobu 6 hodin při teplotě okolo teploty místnosti se na reakční směs působí 35, 6 mg sulfonylchloridu a 30 ml triethylaminu. Reakční směs se zředí methylenchloridem (40 ml), promyje se vodou (2 x 50 ml), suší. se nad síranem sodným, filtruje se a koncentruje se do sucha. Surový produkt se chromatografuje preparativní TLC s 100% EtOAc a tak se získá sloučenina 3 (0,17 g, 44% výtěžek) ve formě karamelové pevné látky. MS (smyčka +) MH⁺ = 427 (100 %) . ^XH NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 1,72 - 1, 80 (m, 1H) , 1,95 - 2,11 (m, 2H) , 2,27 2,36 (m, 1H) , 3,07 - 3,15 (m, 1H) , 3, 44 - 3, 52 (irt, 1H) , 4,27 (d, J_ab = 13,97 Hz, 1H) , 4,41 (d, J_ab = 13,96 Hz, 1H) , 4,44 4.71 (m, 3H) , 5,72 - 5,77 (m, 1H) , 7,28 - 7, 45 (m, 6H) , 7,69 7.72 (m, 2H), 8,53 (d, J = 4,13 Hz, 1H) , 8,62 (s, 1H) .

Sloučenina 4

Ke studenému (0 ’C) roztoku kyseliny oxazol-4-karboxylové z referenčního příkladu 2 (1,26 g, 4,00 mmol), triethylaminu (0,62 ml, 4,445 mmol), DMAP (49,5 mg, 0,405 mmol) a 3pyridylkarbinolu (0,39 ml, 4,02 mmol) v THF (20 ml) se přidá izopropenylchlormravenčan (0,48 ml, 4,39 mmol). Po zahřátí na teplotu okolo teploty místnosti se tmavě žlutá heterogenní reakční směs míchá okolo 20 hodin při zhruba teplotě místnosti. Reakční směs se zředí EtOAc, promyje se vodou a extrahuje se IN vodnou HCI. Okyselený vodný roztok se ·· 9·· · alkalizuje vodným Na₂CC>3 a extrahuje se CHC1₃ (2 x 100 ml) . Roztok CHCI3 se suší nad Na₂SO4, filtruje se a koncentruje se do sucha. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu 100% EtOAc a tak se získá sloučenina 4 (0,61 g, 37% výtěžek) ve formě bezbarvého nehybného oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 408 (100

%) . ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1,98 - 2,10 (m, 3H) , 2,25 -

2,45	(m,	1H) ,	3,50 -	3,70	(m, 2H),	4,86 - 5,39	(m,	4H) ,	5, 59
5, 61	(m,	1H) ,	5, 65 -	5, 85	(m, 1H),	7,05 (široký	s,	1H) ,	7,30
7,35	(m,	5H) ,	7, 66 -	7,80	(m, 2H),	8,58 - 8,71	(m,	2H) .

Referenční příklad 3

K roztoku methylesteru z referenčního příkladu 1 (3,66 g, 11,0 mmol) a chloridu lithného (2,50 g, 58,9 mmol) ve směsi EtOH/THF (4:3; 175 ml) se přidá hydroboritan sodný (2,10 g, 55,0 mmol) ve dvou stejných dávkách. Výsledná heterogenní směs se míchá zhruba 3 dny při přibližně teplotě místnosti. Reakční směs se uhasí vodným roztokem NH₄C1 (200 ml) a extrahuje se CHCI3 (3 x 150 ml). Organický roztok se suší nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se do sucha. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu 3% CH₃OH v CHC1₃ a tak se získá

alkohol	(2,87 g,	86%	výtěžek) ve	formě bezbarvého oleje.	MS
(smyčka	+ ) MH+ =	303	(100 %); /	NMR (300 MHz, DMSO~d6) δ	1, 90
- 2, 10	(m, 1H),	2,15	- 2,40 (m,	3H) , 3, 45 - 3,70 (m, 2H) ,	4,40
- 4,50	(m, 1H),	4, 60	- 4,80 (m,	2H), 4,90 - 5,15 (m, 2H),	5, 20

• 4

4 ·

♦ · 4 44 4

ΙΗ) .

Sloučenina 5

Ph₃P

3-hydroxypyridin

DEAD

THF

OH

C

Ke studenému (0 °C) roztoku oxazol-4-methanolu z referenčního příkladu 3 (2,34 g, 7,74 mmol), trifenylfosfinu (3,05 g, 11,6 mmol) a 3-hydroxypyridinu (1,11 g, 11,7 mmol) v THF (60 ml) se přidá DEAD (1,86 ml, 11,7 mmol). Výsledná směs se přes noc míchá při okolo teplotě místnosti a koncentruje se do sucha. Olej se chromatografuje na silikagelu 3% CH₃OH v CHCI3 a tak se získá surová sloučenina 5, která obsahuje vedlejší produkty. Olej se rozpustí, v CH₂C1₂ (50 ml) a promyje se IN vodnou HCI (5 x 80 ml). Okyselený vodný roztok se alkalizuje směsí NaHCO3/Na₂CO3 a extrahuje se do CHCI3 (3 x 50 ml) . Roztok CHCI3 se suší nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se a tak se získá sloučenina 5 (0,47 g) ve formě oleje, který stáním ztuhne. Sloučenina se použije jako taková bez dalšího čištění. MS (smyčka +) MH⁺ = 380 (100 %) . ¹H NMR (300 MHz, DMSO-dg) směs rotamerů 1:1, δ 1,90 - 2,10 (m, 2H),

2,15 - 2,30 (m, 2H) , 3, 45 - 3, 65 (m, 2H) , 4,40 - 4, 60 (m, ÍH) ,

4,95 - 5, 30 (m, 4H) , 7,10 - 7,25 (m, 2H) , 7,30 (s, 5H) , 7,75 8,00 (m, ÍH) , 8,15 (široký s, 0,5 x ÍH) , 8,25 - 8,30 (m, ÍH) ,

8,40 (široký s, 0,5 x ÍH) .

Sloučeniny 6, 7 a 8 • ·· ·

Heterogenní směs surové sloučeniny 5 (0,43 g) a 10% palladia na uhlí (0,05 g) v CH₃OH (35 ml) se třese pod tlakem vodíku zhruba 0,3515 MPA okolo 6,5 hodiny při zhruba teplotě místnosti. Směs se filtruje přes polštářek křemeliny; filtrační koláč še propláchne CH₃OH. Filtrát se koncentruje ve vakuu a tak se získá zbytek. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu směsí CHC1₃/CH₃OH/NH₄OH (90:9:1) a tak se získá sloučenina 6 (0,10 g) ve formě oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 246 (100 %).

Ke studenému (0 °C) roztoku sloučeniny 6 (0,10 g, 0,41 mmol) a triethylaminu (70 ml, 0,50 mmol) v CH₂C1₂ (10 ml) se přidá ethyloxalylchlorid (70 ml, 0,63 mmol). Reakční směs se míchá okolo 2 hodin, zředí se dalším CH₂C1₂ (50 ml), promyje se vodným NaCI (3 x 50 ml), suší se nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se a tak se získá sloučenina 7 (0,10 g, 71% výtěžek) ve formě oleje, který se v další fázi používá bez dalšího čištění. MS (smyčka) MH⁺ = 346 (100 %) .

•4 4444

4

4

4 4

Ke studenému (-78 °C) roztoku sloučeniny 7 (0,10 g, 0,29 mmol) v THF (10 ml) se přidá přebytečný 1,1-dimethylpropylmagnesiumchlorid (IM, 1,40 ml) v Et₂O a výsledná směs se míchá okolo 2 hodin při přibližně -78 °C. Reakční směs se uhasí vodným NH4CI (25 ml) a extrahuje se EtOAc (2 x 50 ml). Roztok EtOAc se suší nad Na₂SO4, filtruje se a koncentruje se do sucha. Surový produkt chromatografuje na silikagelu směsí 1:1 EtOAc/hexan a tak se získá sloučenina 8 (55,5 mg, 52% výtěžek) ve formě oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 372 (100 %) . ¹H NMR (300

3, 42

ι-de) směs rotamerů (3 :	1) ,	δ 0, 66 (t,	J = 7	Hz,	0,25
75 (t,	J = 7 Hz, 0,75 x	3H)	, 0,80 (s,	0,25 x	3H)	r
0,25 x	3H), 1,07 (s, 0,	75 x	3H), 1,10	(s, 0,	75 x	3H) ,
59 (m,	2H) , 1,88- 1,98	(m,	2H) , 2,08	- 2,29	(m,	2H) ,
60 (m,	2H), 4,93 (d, J	= 12	Hz, 0, 25 x	1H) ,	4, 99	(d,
,, 0,25	χ 1H), 5,08 (d,	J =	12 Hz, 0,75	χ 1H)	, 5,	18
2 Hz,	0,75 χ 1H), 5,34	- 5,	38 (m, 1H),	7,47	- 7,	54
7,32 -	7,39 (m, 1H) , 8,	18 -	8,20 (m, 1H), 8,	34 -	8, 35

(m, 1H) , 8,35 (s, 0,75 χ 1H) , 8,41 (s, 0,25 χ 1H) .

Referenční příklad 4

Heterogenní směs methylesteru z referenčního příkladu 1 (2,00 g, 6,00 mmol) a 10% paladia na uhlí (0,20 g) v CH₃OH (40 ml) se protřepe v pod tlakem vodíku 0,3797 MPa při zhruba φφ φφφ ·

ΦΦΦ φ » φ φ φφ φφ I Φ Φ I φ φφ teplotě místnosti po dobu zhruba 20 hodin. Směs se filtruje skrz polštářek křemeliny a filtrační koláč se propláchne dalším CH₃OH (75 ml). Spojený filtrát se koncentruje a tak se získá pyrrolidin (1,20 g, 100% výtěžek) ve formě žluté pevné látky. MS (smyčka +) MH⁺ = 197 (100 %) . ^rH NMR (300 MHz, DMSOd₆) δ 2,10 - 2,25 (m, 3H) , 2,40 - 2, 50 (m, 1H) , 3, 40 - 3, 60 (m, 2H) , 3,95 (s, 3H) , 5,40 - 5, 50 (m, 1H) , 7,95 (s, 1H) .

Referenční příklad 5

Ke studené (0 ’C) směsi pyrrolidinu z referenčního příkladu 4 (1,18 g, 6,00 mmol) a triethylaminu (0,94 ml, 6,74 mmol) v CH2CI2 (100 ml), se přidá ethyloxalylchlorid (0,80 ml, 8,70 mmol) v CH2CI2 (25 ml). Výsledná reakční směs se míchá při zhruba teplotě místnosti po dobu okolo 2 hodin, promyje se vodným roztokem NaCl (3 x 75 ml) a suší se nad Na₂SO₄. CH₂C1₂ se filtruje a koncentruje se a tak se získá zbytek, který se čistí chromatografií (eluováním 35% hexanem v EtOAc) a tak se získá oxamát (1,23 g, 72% výtěžek) ve formě oleje, který ztuhne. MS (smyčka +) MH⁺ = 283 (5 %) . / NMR (300 MHz, CDC1₃)

směs	rotamerů 1:1,5,	δ 1,35 (t, J' = 7 Hz,	0, 6	X	3H) ,	1	,20 (t,
J - 7	Hz, 0,4 x 3H),	1,95 - 2,20 (m, 3H),	2,40	-	2,50	(ία, 1H)
3,40	- 3,60 (m, 2H) ,	3, 89 (s, 0,6 x 3H), 3	/1	(S	, 0,	4	x 3H) ,
4,00	- 4,15 (m, 0,4	x 2H), 4,29- 4,40 (m,	0, 6	X	2H)	Z	5,70 -
5, 75	(m, 0, 6 x 1H) ,	5, 90 - 5, 95 (m, 0,4 x	1H) ,	7	,75	(S	, 0, 6 x
1H) ,	7,80 (s, 0,4 x	1H) .

Referenční příklad 6 φφ «φφφ

«·

Ke studenému (-78 °C) roztoku oxamátu z referenčního příkladu 5 (0,87 g, 3,08 mmol) v bezvodém THF (10 ml) se přidá přebytečný 1,1-dimethylpropylmagnesiumchlorid (1M, 4,60 ml, 4,60 mmol) v Et₂O a výsledná směs se míchá okolo 3 hodin při zhruba -78 ’C. Reakční směs se uhasí vodným NH₄C1 (25 ml) a extrahuje se EtOAc (2 x 25 ml). Roztok EtOAc se suší nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se do sucha. Reakce se opakuje 284,5 mg oxamátu a 1,50 ml dimethylpropylmagnesiumchloridu. Spojený organický produkt se chromatografuje na silikagelu směsí 1:1 EtOAc/hexan a tak se získá oxamid (0,95 g, 96% výtěžek) ve formě bezbarvého oleje. MS (smyčka +) MH⁺ =

323	(90 %) . ΣΗ	NMR (3	00 MHz,	CDC13) , směs	rotamerů (3 : 1),	δ
0,70	(t, J - 7	,4 Hz,	0,25	X	3H) , 0,80 (t,	J = 7, 4 Hz, 0,75	X
3H) ,	1,00 (s,	0,25 x	3H) ,	1,	05 (s, 0,25 x	3H) , 1,15 (s, 0,	75
6H) ,	1, 65 - 1,	75 (m,	2H) ,	1,	90 - 2,20 (m,	0,75 x 2H), 2,35	-
2,50	(m, 0,25	x 2H) ,	3,55	-	3,70 (m, 0,75	x 1H), 3,75-3,	80
(m,	0,25 x 1H)	, 3,90	(s,	1H)	, 5,70- 5, 80	(m, 1H) , 7,75 (s	t
0, 75	X 1H), 7,	80 (s,	0,25	X	1H) .

Referenční příklad 7

• · ·♦· · ·· • 44 4

44 4 • 4 4 4 4

4 4 4 ·4· 44

Roztok 4-karbomethoxyoxazolu z referenčního příkladu 6 (0,93 g, 2,88 mmol) a hydroxidu lithného (76,9 mg, 3,21 mmol) ve směsi THF/H₂O (2:1; 30 ml) se zhruba 1 hodinu míchá při okolo 0 °C a zhruba 22 hodin při okolo teplotě místnosti. Reakční směs se promyje Et₂O (2 x 75 ml), okyselí se vodnou kyselinou citrónovou (pH =1,0) a extrahuje se CHCI3 (3 x 50 ml) . Roztok CHCI3 se suší nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se na olej. Tento olej se překryje Et₂O a umístí se do velkého vakuu a tak se získá kyselina karboxylová (0,80 g, 90% výtěžek) ve formě bílé pevné látky. MS (smyčka -) M-l = 307 (100 %) . / NMR (300 MHz, THF-d₆) , směs rotamerů (2,5 : 1), δ 0,70 (t, J = 7,4 Hz, 0,30 χ 3H) , 0,85 (t, J = 7,4 Hz, 0,70 x

3H), 0,92 (s, 0,30 χ 3H) , 0,95 (s, 0,30 χ 3H) , 1,15 (s, 0,70 x

6H) , 1, 45 - 1, 65 (m, 2H) , 1, 90 - 2,20 (m, 3H) , 2, 30 - 2,40 (m,

1H), 3,50 - 3, 65 (m, 2H) , 5, 65 - 5, 73 (m, 0,7 χ 1H) , 5,75 5,80 (m, 0,3 χ 1H) , 7,9 (s, 0,7 χ 1H) , 8,00 (s, 0,3 χ 1H) .

Sloučenina 9

DMAP

Et₃N

3-pyridylkarbinol izoprenylchlorformát

THF

Ke studenému (0 ’C) roztoku kyseliny oxazol-4-karboxylové z referenčního příkladu 7 (0,31 g, 1,00 mmol), triethylaminu (0,17 ml, 1,22 mmol), DMAP (12,1 mg, 0,099 mmol) a 3-pyridylkarbinolu (0,11 ml, 1,13 mmol) v THF (15 ml) se přidá izopropenylchlormravenčan (0,12 ml, 1,10 mmol). Po zahřátí na zhruba teplotu místnosti se tmavě žlutá heterogenní reakční směs míchá při teplotě okolo teploty místnosti přibližně 20 • · ·· · · ·*« · • · · · 9 9 9

99 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9

9999 99 99 99 • · ·♦··

99

I 9 9 4 hodin. Reakční směs se zředí vodou a extrahuje se do CHCI3 (2 x 50 ml) . Roztok CHC1₃ se suší nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se do sucha. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu 3% CH₃OH v CHCI3 a tak se získá sloučenina 9 (222,8 mg, 56% výtěžek) ve formě světle žlutého nehybného oleje. MS

(smyčka +)	MH+ =	400	(100	%) . ΧΗ	NMR	(300	MHz,	DMSO-dg) , směs
rotamerů (3 : 1)	, δ 0	, 62	(t, J =	= 7,4	Hz,	0,25	x 3H) , 0,76 (t,
J = 7,4 Hz	, 0,75	X 3H	), o	<83 (s,	0,25 x 3H) , 0	,86 (s, 0,25 x
3H), 1,11	(s, 0,	75 x	6H) ,	1,44 -	1,49 (m,	0,25	x 2H) , 1,58 (q,
J = 7,41,	7,42,	7, 41	Hz,	0,75 x	2H) ,	1,88	2,	04 (m, 3H), 2,25
- 2,34 (m,	1H) ,	3,34	- 3,	61 (m,	2H) ,	5, 31	- 5,	39 (m, 2H), 5,52
- 5,59 (m,	1H) ,	7, 42	- 7,	46 (m,	1H) ,	7, 89	- 7,	91 (m, 1H), 8,44
(s, 0,75 x	1H) ,	8, 50	(s,	0,25 x	1H) ,	8, 57	(d,	J = 4,56 Hz,

1H) , 8,69 (s, 1H)

Sloučenina 10

Ke studenému (0 °C) roztoku kyseliny oxazol-4-karboxylové z referenčního příkladu 7 (308,2 mg, 1,00 mmol) a triethylaminu (310 ml, 2,22 mmol) v DMF (2 ml) se přidá difenylfosforylazid (480 ml, 1,16 mmol) a 3-aminomethylpyridin (110 ml, 2,16 mmol). Výsledná směs se míchá při zhruba teplotě místnosti okolo 1 dne, zředí se vodou (25 ml) a extrahuje se EtOAc (2 x 50 ml) . Roztok EtOAc se suší nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu (eluováním 5% CH₃OH v CHC1₃) a tak se získá sloučenina 10 (310 mg, 78% výtěžek) ve formě oleje. MS (smyčka + ) MH⁺ »0 *4 0» »40* ► * 4 · · · 0

40 000 » 0 0 0 0 0 »

0 0 »000 »000 00 0» 00 ·· ·· » · · 0 ·0·

0000

399 (100 %) . ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆) , směs rotamerů

1) , δ	0, 65	(t, J = 7	,4	Hz, 0,33 x 3H	), 0,75	(t, J =	7,4
0, 67 x	3H) ,	0,85 (s,	0,33 x 3H), 0,90	(s, 0,33 x 3H),	1,15
0, 67 x	6H) ,	1,45 - 1,	65	(m, 2H), 1,80	- 2, 00	(m, 3H),	2,25
40 (m,	1H) ,	3,40 - 3,	60	(m, 2H), 4,35	- 4, 50	(m, 2H),	5, 60
65 (m,	0, 67	x 1H), 5,	70	- 5,75 (m, 0,	33 x 1H)	, 7,20 -	7,30
2H), 7,	55 -	7,75 (m,	1H)	, 8,50 - 8,65	(m, 2H)	, 8,90 —	9, 00
1H) .

Referenční příklad 8

Heterogenní směs N-CBz-L-prolinamidu (1,12 g, 4,51 mmol) a

2,4-bis(4-methoxyfenyl)-1,3-dithia-2,4-difosfetan-2,4-disulfid (Lawessonovo činidlo; 911,3 mg, 2,25 mmol) v benzenu (20 ml) se míchá přibližně 1 hodinu při zpětném toku. Poté se přidá dalších 933,0 mg Lawessonova činidla a reakční směs se míchá při zpětném toku další zhruba 1 hodinu. Reakční směs se koncentruje a tak se vytěží surový thioamid. Zbytek se rozpustí EtOH (10 ml), působí se na něj ethylbrompyruvátem (300 pl, 1,00 mmol) a mícha se přes noc při zpětném toku. Po ochlazení na teplotu místnosti se na reakční směs působí pevným K₂CO₃, míchá se zhruba 10 minut a koncentruje se. Zbytek se rozpustí CHC1₃ (50 ml), promyje se H₂0 (2 x) , suší se nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu 2% CH₃OH v CHC1₃ a tak se získá thiazol (0,63 g, 39% výtěžek) ve formě světle žlutého oleje.

• 4 »· • · «

MS (smyčka +) MH⁺ = 361 (50 %), M+Na = 383 (100 %) . ^ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-dg) , směs rotamerů, δ 1,23 (t, J = 7,32, 7,66, 3H) , 1,93 - 2,37 (m, 3H) , 3,50 - 3,59 (m, 2H) , 4,30 (q, J = 7,04, 7,05, 7, 08 Hz, 2H) , 4, 94 - 5,22 (m, 3H) , 7, 08 - 7,38 (m, 5H) , 8,32 (s, 0,33H), 8,41 (s, 0, 67H) .

Referenční příklad 9

Roztok ethylesteru z referenčního příkladu 8 (0,55 g, 1,53 mmol) a hydroxidu lithného (37,5 mg, 1,56 mmol) v směsi THF/H₂O (2:1; 6 ml) se míchá při zhruba 0 ’C po dobu přibližně 1 hodiny a při zhruba teplotě místnosti po dobu přibližně 2 hodin. Reakční směs se zředí vodným roztokem NaCI, promyje se CHC1₃ (2 x 15 ml), okyselí se kyselinou citrónovou (427 mg) a poté se extrahuje CHC1₃ (2 x 20 ml). Roztok CHC1₃ se suší nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se a tak se získá kyselina karboxylová (0,51 g, 100% výtěžek) ve formě oleje, který se použije bez dalšího čištění. MS (smyčka -) M-l = 331 (50 %). ¹H

NMR (300 MHz, DMS	!O-de) , δ	1,93 -	- 2,35	(m, 3H),	2,25	- 2,40	(m,
1H) , 3, 39 - 3,50	(m, 2H),	4, 94 -	- 5,21	(m, 3H),	4,94	- 5,22	(m,
3H), 7,04- 7,12	(m, 1H),	7,25 -	- 7,37	(m, 4H),	. 8,33	(s, 1H)	r

13,0 (široký s, 1H) .

Sloučenina 11 • ·

Ke studenému, roztoku kyseliny thiazol-4-karboxylové z referenčního příkladu 9 (0,51 g, 1,53 mmol) a triethylaminu (0,48 ml, 3,44 mmol) v DMF (3 ml) se přidá difenylfosforylazid (376 ml, 1,72 mmol) a 3-aminomethylpyridin (180 ml, 1,77 mmol). Výsledná směs se míchá při okolo teplotě místnosti po dobu zhruba 1 dnu, zředí se vodou (25 ml) a extrahuje se EtOAc (2 x 25 ml). Roztok EtOAc se promyje vodou (6 x 50 ml), suší se nad Na2SO₄, filtruje se a koncentruje se. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu 100% EtOAc a tak se získá sloučenina 11 (0,44 g, 68% výtěžek) ve formě bezbarvého nehybného oleje. MS (smyčka +) MH⁺ - 423 (100 %) M + Na = 445

(10 %	) ·	/ NMR	(300	MHz, C	DC13	) δ	1,90 -	2,05 (m	2	Η) ,	2, 15 -
2,45	(m,	2H) ,	3,45	- 3,70	(m,	2H)	, 4,60	- 4, 65	(m,	2H)	, 4,95 -
5, 25	(m,	3H) ,	5, 65	- 5,85	(m,	ÍH)	z 7,05	(široký	s,	ÍH)	, 7,20 -
7, 40	(m,	5H) ,	7, 66	- 7,70	(m,	ÍH)	, 7,55	- 7, 65	(m,	ÍH)	, 8,00 -
8,05	(m,	ÍH) ,	8,50	- 8, 65	(m,	2H)

Sloučenina 12

Směs sloučeniny v kyselině octové (2 (0,38 g, 0,90 mmol) a 30% bromovodíku ml) se míchá při zhruba teplotě místnosti • · • · ·

po dobu přibližně 2 hodin. Dihydrobromidová sůl produktu se sráží z reakční směsi. K reakční směsi se přidá diethylether a sloučenina 12 (407,8 mg, 100% výtěžek) se sebere filtrací ve formě béžové hygroskopické pevné látky. MS (smyčka +) MH⁺ - 289 (100 %) . / NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1, 95 - 2,25 (m, 3H) , 2,40

- 2,50 (m, 2H) , 3,30 - 3, 40 (m, ÍH) , 3,45 - 3,55 (m, ÍH) , 4,65

- 4,70 (m, 2H), 5,15 - 5,25 (m, ÍH), 7,90 - 8,10 (m, ÍH), 8,40 (s, ÍH) , 8,50 - 8, 55 (m, ÍH) , 8,80 - 8,85 (m, ÍH) , 8,90 (s,

ÍH), 9,15 - 9,30 (m, ÍH) , 9, 35 - 9, 45 (m, ÍH) , 9, 75 - 9, 90 (m,

ÍH) .

Sloučenina 13

Ke studenému (0 ’C) roztoku dihydrobromidové soli sloučeniny 12 (203,0 mg, 0,453 mmol) a triethylaminu (210 ml, 1,50 mmol) v methylenchloridu (4 ml) se přidá atoluensulfonylchlorid (95,0 mg, 0,498 mmol). Po 3 hodinách se k reakční _směsi přidá další DMAP (10 mg), triethylamin (100 ml) a a-toluensulfonylchlorid (44,8 mg). Reakční směs se přes noc míchá. Rozpouštědlo a těkavé podíly se odstraní ve vakuu. Surový produkt se čistí preparativní TLC 5% CH₃OH v CHC1₃ a tak se získá sloučenina 13 (67,6 mg, 34% výtěžek) ve formě béžové pevné látky. MS (smyčka +) MH⁺ = 443 (100 %) . / NMR (300 MHz,

CDC1	3) f	δ	1, 90	-	2,05	(m	, 2H),	2,10 -	2,20	(m, 2H) , 3,30	- 3,50
(m,	2H)	r	4,3 (	s,	2H) ,	4,	60 - 4,	70 (m,	2H) ,	4,85 - 4,95 (	m,
ÍH) ,	7,	10	- 7,	20	(m,	ÍH)	,	- 7,45	(m,	5H), 7,50 - 7,	65 (m,
ÍH) ,	7,	70	- 7,	75	(m,	ÍH)	, 8,05	(s, ÍH)	, 8,	50 - 8,55 (m,	ÍH) ,
8, 60	(s	f	ÍH) .

Referenční příklad. 10

Na roztok N-CBz-chráněného-2-pyrrolidin-4karbomethoxythiazolu z referenčního příkladu 8 (3,33 g, 9,25 mmol) v CH₃CO₂H (10 ml) se působí 30% HBr v CH₃CO₂H (4 ml) a míchá se při přibližně teplotě místnosti po dobu okolo 6 hodin. Vysrážená pyrrolidinthiazoldihydrobromidová sůl se překryje Et₂O a sebere se filtrací. Bílá pevná látka se promyje dalším Et₂O a suší se ve vakuové sušárně přes noc při zhruba teplotě místnosti a tak se získá pyrrolidin ve formě dihydrobromidové soli (2,48 g, 69% výtěžek). MS (smyčka +) MH⁺ = 227 (100 %) . Anal. pro CioH₁₄N₂0₂S.2,0 HBr: Vypočteno C 30, 95,

H 4,15, N 7,22, S 8,26, Br 41,69; Nalezeno C 31,18, H 4,07, N 7,11, S 7,91, Br 41,84. ^τΗ NMR (300 MHz, DMSO~d₆) , δ 1,31 (t, J = 7,12, 7,21, Hz, 3H), 2,03 - 2,21 (m, 3H) , 2,50 - 2,53 (m,

ÍH), 3,33 - 3, 35 (m, 2H) , 4,33 (q, J = 1,04, 7,05, 7, 08 Hz,

2H), 5,10 (t, J = 6, 94, 6, 94 Hz, ÍH) , 8,66 (s, ÍH) , 9,2 - 9,5 (m, 2H) , 9,80 (široký s, ÍH) .

Referenční příklad 11

CICOCOoEt

Et,N

THF

Ke studenému (0 příkladu 10 (1,53 g, °C) roztoku pyrrolidinu z referenčního 5,00 mmol) v CH₂C1₂ (100 ml) se přidá • · » 4 · 4 · · * · »4 · · · · 4 «· 44 ·4 4 triethylamin (1,70 ml, 1,21 mmol) a ethyloxalylchlorid (0,82 ml, 7,34 mmol). Výsledná reakční směs se míchá přibližně 2 hodiny zhruba při teplotě místnosti, promyje se vodným roztokem NaCl (2 x 150 ml), suší se nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se a tak se získá oxamát (1,45 g, 89% výtěžek) ve formě oleje, který se použije bez dalšího čištění. MS (smyčka + ) MH⁺ = 327 (100 %) . / NMR (300 MHz, DMSO-d₆) , směs rotamerů 2:1, δ 1,20 - 1,35 (m, 6H), 1,8 - 2,2 (m, 3H) , 2,30 - 2,45 (m, 1H) , 3, 65 - 3, 80 (m, 2H) , 4, 20 - 4,35 (m, 4H) , 5, 35 - 5, 40 (m, 0,67 x 1H) , 5,59 - 5,61 (m, 0,33 x 1H) , 8,42 (s, 0,67 x 1H) , 8,47 (s, 0,33 x 1H).

Referenční příklad 12

EtO

OEt

Ke studenému (-78 ’C) roztoku oxamátu z referenčního příkladu 11 (1,39 g, 4,26 mmol) v bezvodém THF (25 ml) se přidá přebytek 1,1-dimethylpropylmagnesiumchloridu (1M, 7,80 ml, 7,80 mmol) v Et₂O a výsledná směs se míchá při zhruba -78 °C po dobu přibližně 5 hodin. Reakční směs se uhasí vodným NH₄Cl (25 ml) a extrahuje se EtOAc (2 x 25 ml). Roztok EtOAc se suší nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se do sucha. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu 35% EtOAc v hexanu a tak se získá oxamid (1,01 g, 67% výtěžek) ve formě bílé pevné látky. MS (smyčka +) MS⁺ = 353 (100 %) . ^XH NMR (300 MHz, DMSOd₆) , směs rotamerů 4:1, δ 0,65 (t, J = 7,1 Hz a 1 Hz, 0,20 x 3H), 0,75 (t, J = 7,10 Hz, 7,10 Hz, 0,80 x 3H) , 0,95 (s, 0,10 x 3H) , 0,97 (s, 0,10 x 3H) , 1,15 (s, 0,80 x 6H) , 1,25 (t, J = 7,10 Hz, 7,10 Hz, 3H) , 1,55 - 1, 70 (m, 2H) , 1,85 - 2, 00 (m,

2H) , 2,05 - 2,15 (m, 1H) , 2,25 - 2,40 (m, 1H) , 3,35 - 3, 60 (m, • ·

1H), 4,33 (q, J = 7,04, 7, 05, 7, 08 Hz, 2H)', 5, 30 - 5, 40 (m, 1H), 8,40 (s, 0,80 χ 1H) , 8,45 (s, 0,20 χ 1H) .

Referenční příklad 13

Roztok ethylesteru z referenčního příkladu 12 (0,95 g,

2,70 mmol) a hydroxidu lithného (71,9 mg, 3,00 mmol) ve směsi THF/H₂O (2,5:1; 35 ml) se přibližně 1 hodinu míchá při zhruba 0 C a dalších přibližně 20 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se promyje Et₂O (2 x 50 ml) a okyselí se vodnou kyselinou citrónovou. Sražená kyselina karboxylová se extrahuje CHCI3 (2 x 75 ml) . Roztok CHCI3 se suší nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se a tak se získá kyselina karboxylová (0,81 g,

93% výtěžek) ve formě bílé pevné látky, která se dále používá bez dalšího čištění. MS (smyčka -) M-l = 323. ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) , směs rotamerů 4:1, δ 0,65 (t, J = 7,1 Hz a 1 Hz, 0,20

χ 3H)	, 0,75	(t,	J =	7,10	Hz,	7,10 Hz,	0, 80	χ 3H), 0,95	(s,
0, 10	χ 3H) ,	0, 97	(s,	0, 10	χ 3H), 1,	15	(s,	0,80 χ 6H), 1	,55 -
1,70	(m, 2H)	z 1,	85 -	2,00	(m,	2H) ,	2,	05 -	2,15 (m, 1H) ,	2,25
2,40	(m, 1H)	Z 3,	35 -	3, 60	(m,	1H) ,	5,	30 -	5, 40 (m, 1H),	8,35
(s, 0	, 80 χ 1H) ,	8, 40	(s,	0, 20	χ 1H)	t	13,5	(s, 1H).

Sloučenina 14

Ke studenému (O °C) roztoku kyseliny thiazol-4-karboxylové z referenčního příkladu 13 (322,2 mg, 1,00 mmol) a triethylaminu (310 ml, 2,22 mmol) v DMF (3 ml) se přidá difenylfosforylazid (250 ml, 1,16 mmol) a 3-aminomethylpyridin (110 ml, 1,08 mmol). Výsledná směs se míchá přibližně 1 den zhruba při teplotě místnosti, zředí se vodným roztokem NaCl (25 ml) a extrahuje se CHC1₃ (3 x 25 ml). Roztok CHC1₃ se suší nad NazSOo filtruje se a koncentruje se do sucha. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu (eluováním 100%

EtOAc) a tak se získá 0,44 g sloučeniny 14 ve formě bezbarvého nehybného oleje. Surový olej se poté chromatografuje na plotnách pro preparativní TLC 5% CH₃OH v CHC1₃ a tak se získá sloučenina 14 (271,8 mg, 66% výtěžek) ve formě bezbarvé skloviny. MS (smyčka +) MH⁺ = 415 (100 %) . ^XH NMR (300 MHz,

DMSO-dg) , směs rotamerů 4:1, δ i	0,64 (t,	J =	- 7,45 Hz,	7,45	Hz,
0,20 x 3H) , 0, 78	(t, J = 7,40 Hz, 7,40	Hz,	0,80 x 3H)	, o,	95
(s, 0,10 x 3H),	0, 97 (s, 0,10 x	3H), 1,	15	(s, 0,80 x	6H) ,	1,45
- 1,65 (m, 2H),	1, 90 - 2,05 (m,	2H), 2,	10	- 2,20 (m,	1H) ,	2,25
- 2,40 (m, 1H),	3,42 - 3,48 (m,	1H), 3,	50	- 3,58 (m,	1H) ,	4, 47
(d, J = 6,28 Hz,	2H) , 5,31- 5,	33 (m, 0	,20	x 1H), 5,37-	5, 40
(m, 0, 80 x 1H),	7,33 - 7,37 (m,	1H), 7,	70	- 7,73 (m,	1H) ,	8,21
(s, 0, 80 x 1H),	8,25 (s, 0,20 x	1H), 8,	44	- 8,46 (m,	1H) ,	8, 54
(široký s, 1H),	9,00 (t, J = 6,	17, 6,20	Hz	, 1H) .

Sloučenina 15 izopropenyl chlorformát

• 4

4 ·· ···· • · · · · · ··· 4 · 4 ·· · • 4 4 4 4 4 444 4 4 • <4 4444 444 •444 44 44 44 44 4444

Ke studenému (O °C) roztoku kyseliny thiazol-4-karboxylové z referenčního příkladu 13 (322,6 mg, 1,00 mmol), triethylaminu (0,17 ml, 1,22 mmol), DMAP (13,0 mg, 0,100 mmol) a 3-pyridylkarbinolu (0,11 ml, 1,13 mmol) v THF (15 ml) se přidá izopropenylchlormravenčan (0,12 ml, 1,10 mmol). Po zahřátí na teplotu místnosti se heterogenní reakční směs míchá při zhruba teplotě místnosti po dobu okolo 20 hodin. Reakční směs se zředí vodou a extrahuje se EtOAc (2 x 25 ml). Roztok EtOAc se suší nad Na₂SO₄, filtruje se a koncentruje se do sucha. Surový produkt se chromatografuje na 4 plotnách pro preperativní TLC 3% CH₃OH v CHC1₃ a tak vzniká sloučenina 15 (240,0 mg, 59% výtěžek) ve formě světle žluté pevné látky. MS

(smyčka +) MH+	= 416	(100	%) · 1	H NMR (300 MHz, DMSO-d6) , směs
rotamerů 4:1,	δ 0,64	(t,	J = 7	,45 Hz, 7,45 Hz, 0,20 x 3H) ,
0,78 (t, J - 7	, 40 Hz	, 7,40 Hz,	0, 80 x 3H), 0,98 (s, 0,10 x
3H) , 1,00 (s,	0, 10 x	3H) ,	1, 14	(s, 0,80 x 3H) , 1,15 (s, 0,80 x
3H), 1,53 - 1,	65 (m,	2H) ,	1, 94	- 1,99 (m, 2H) , 2,05 - 2,15 (m,
1H), 2,31 - 2,	38 (m,	1H) ,	3,44	- 3,56 (m, 2H) , 5,37 (m + s,
3H), 7,42- 7,	4 6 (m,	1H) ,	7, 88	-7,90 (d, J = 7,70 Hz, 1H) ,
8,54 - 8,59 (m	+ s,	2H) ,	8, 69	(s, 1H).

Referenční příklad 14

K roztoku 4-karbomethoxythiazolu z referenčního příkladu 8 (3,64 g, 10,0 mmol) a chloridu lithného (2,12 g, 50,0 mmol) v EtOH (100 ml) a THF (75 ml) se přidá hydroboritan sodný (1,94 g, 51,3 mmol). Po 6 hodinách se k reakční směsi přidá φ φ dalších 224 mg LiCl a 205 mg NaBH₄ a směs se míchá dalších zhruba 18 hodin. Reakční směs se uhasí vodným chloridem amonným a extrahuje se CHC1₃ (3 x 100 ml). Roztok CHC1₃ se suší nad Na2SO₄, filtruje se a koncentruje se do sucha. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu 5% CH₃OH v CHC1₃ a tak se získá alkohol (2,39 g, 75% výtěžek) ve formě bezbarvého oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 319 (100 %) . ^XH NMR (300 MHz, DMSOd₆) , δ 1,85 - 2,05 (m, 3H) , 2,10 - 2,40 (m, 2H) , 2,60 - 2,70 (m, 1H) , 3, 40 - 3, 55 (m, 1H) , 3, 60 - 3, 70 (m, 1H) , 4,65 - 4,75 (m, 2H) , 5, 05 - 5, 30 (m, 3H) , 7,05 (široký s, 1H) , 7,10 (široký s, 1H), 7,20 - 7,40 (m, 3H).

Sloučenina 16

Thiazol-4-methanol z referenčního příkladu 14 (2,17 g,

6,83 mmol) se spojí s trifenylfosfinem (3,38 g, 12,8 mmol), diethylazodikarboxylátem (1,64 ml, 10,4 mmol) a 3hydroxypyridenem (0,97 g, 10,2 mmol) v THF (110 ml) a působí se na něj stejným způsobem jak uvedeno pro přípravu sloučeniny 5. Z reakce se získá surová sloučenina 16 (2,08 g) a hydrazinový vedlejší produkt ve formě oleje. MS (smyčka +) MH⁺

= 396 (100	%) . H	NMR	(300	MHz,	DMSO-dg) , δ 1,85 -	- 2,	05 (m,
3H) , 2,10-	2,40	(m,	1H) ,	3, 40	-3,55 (m, 2H) , 4,	90	- 5,20 (m,
5H) , 7,05 (	široký	s,	1H) ,	7,10	(široký s, 1H) , 7,	30	- 7,60 (m,
5H) , 8,12-	8,15	(m,	1H) ,	8,35	- 8,37 (m, 1H), 9,	00	(s, 1H) .

Sloučenina 17

Směs surové sloučeniny 16 (1,85 g) a 30% HBr v CH₃CO₂H (12 ml) se míchá zhruba 2 hodiny přibližně při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí H₂O (25 ml) a extrahuje se Et₂O (3 x 75 ml). Kyselá vodná vrstva se alkalizuje vodným Na₂CO₃ a vysoce ve vodě rozpustná volná báze se extrahuje CHC1₃ (10 x 100 ml). Vodná vrstva se koncentruje k získání vlhké pevné látky a extrahuje se CHC1₃ (3 x 125 ml). Spojený roztok CHC1₃ se suší (Na₂SO₄), filtruje se a koncentruje se a tak se získá sloučenina 17 (0,55 g) ve formě oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 262 (40 %) . ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆) , δ 1, 67 - 1,84 (m, 2H) , 2,10

- 2,22 (m, 1H) , 2, 82 - 3, 00 (m, 2H) , 3,43 (široký s, 1H) , 4,41

- 4,45 (m, 1H) , 5,16 (s, 2H) , 7,31 - 7,36 (m, 1H) , 7,47 - 7,51 (m, 1H) , 7,55 (s, 1H) , 8,18 (d, J = 4,36 Hz, 1H) , 8,37 (d, J = 2,86 Hz, 1H).

Sloučenina 18

Na sloučeninu 17 (0,55 g, 2,00 mmol), triethylamin (0,69 ml, 4,95 mmol) a ethyloxalylchlorid (0,35 ml, 3,13 mmol) v CH₂C1₂ (100 ml) se působí stejným způsobem jak uvedeno pro přípravu sloučeniny 7 a tak se získá sloučenina 18 (0,33 g, ··

4 4 1 ♦ ♦ ·*»· *· ·♦ • ·4 «

44

4«

4 «

4444 44

4 4 · · » 4 4 4 4

4< 44 4444

46% výtěžek) ve formě oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 362 (100 %).

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) , směs rotamerů 3:2, δ 1,05 (t, J = 7,40 Hz, 7,41 Hz, 0,40 χ 3H) , 1,25 (t, J = 7,41, 7,40 Hz, 0,60 χ 3H), 1,80 - 2,15 (m, 3H), 2,25 - 2,45 (m, 1H), 3,55 - 3,75 (m, 2H) , 4,00 (q, J = 7,12 Hz, 7,13 Hz, 7,10 Hz, 0,4 χ 2H) , 4,30 (q, J = 7,12 Hz, 7,13 Hz, 7,10 Hz, 0,60 χ 2H) , 5,20 (s, 2H), 5, 32 - 5, 39 (m, 0,60 χ 1H) , 5, 40 - 5, 55 (m, 0,40 χ 1H) , 7,32 - 7, 40 (m, 1H) , 7, 45 - 7,52 (m, 1H) , 7,69 (s, 0,60 χ 1H) , 7,75 (s, 0,40 χ 1H), 8,19 (d, J = 4,36 Hz, 1H), 8,38 - 8,39 (m, 1H) .

Sloučenina 19

Na sloučeninu 18 (0,31 g, 0,86 mmol)'a 1,1dimethylpropylmagnesiumchlorid (1M, 2,25 ml, 2,25 mmol) v THF (10 ml) se působí stejným způsobem jak uvedeno pro přípravu sloučeniny 8 a získá se sloučenina 19 (0,17 g, 51% výtěžek) ve formě žlutého oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 388 (100 %) . ¹H NMR

(300	MHz,	DMSO-dg) f směs rotám	erů 4:1, δ	0,65 (t, J	=	7,41	Hz,
7,42	Hz,	0,20 χ 3H), 0,79	(t,	J = 7,37,	7,40 Hz, 0,	80	χ 3H	') ,
0, 93	(s,	0, 10 χ 6H) , 0, 97	(s,	0, 10 χ 6H)	, 1,16 (s,	0,4	:0 X	6H) ,
1, 17	(s,	0,40 χ 6H), 1,63	(q,	J = 7,40,	7,42, 7,45	Hz,	2H)	Z
1, 95	- 1,	97 (m, 2H), 2,07	- 2,	13 (m, 1H)	, 2,26 - 2,	36	(m,	1H) ,
5,20	(s,	2H) , 5,34- 5, 40	(m,	1H) , 7,32	- 7,36 (m,	1H)	, 7,	49 -
7,53	(m,	1H), 7,70 (s, 0,	80 x	1H), 7,76	(s, 0,20 x	1H)	, 8,	19

(d, J = 3,96 Hz, 1H), 8,38 (široký s, 1H).

Referenční příklad 15

Ke studenému (O ’C) roztoku ethylacetoacetátu (65 ml, 510 mmol) v bezvodém Et₂O (100 ml) se přidá brom (26,40 ml, 512,4 mmol). Reakční směs se nechá stát zhruba 1 hodinu při teplotě místnosti, poté se vlije na led a promyje se vodným Na₂CO₃ dokud nezalkalizuje. Roztok Et₂O se promyje solankou a suší se nad CaCl₂ po dobu zhruba 4 dnů. Roztok Et₂O se filtruje a koncentruje se a tak se získá 81,66 g ve formě světle hnědého oleje, který se stabilizuje pevným K₂CO₃. NMR (300 MHz,

CDC1₃) δ 1,50 (t, J = 7, 40, 7,40 Hz, 3H) , 3,70 (s, 2H) , 4,00 (s, 2H) , 4,20 (q, J = 7, 40, 7, 40 Hz, 2H) .

Referenční příklad 16

Roztok N-CBz-prolinthioamidu z referenčního příkladu 8 (4,36 g, 16,5 mmol) a 90% ethyl-Y-bromacetoacetátu z referenčního příkladu 15 (4,80 g, 22,5 mmol) v ethanolu (170 ml) se zhruba 2 hodiny míchá při zpětném toku. Reakční směs se koncentruje do sucha. Zbytek se chromatografuje na silikagelu 1% CH₃OH v CHCI3 a tak se získá thiazol (6,25 g, 100% výtěžek) ve formě oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 375 (40 %) . ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) , δ 1,15 - 1,25 (m, 3H) , 1,80 - 2,10 (m, 3H) , 2,25 - 2,40 (m, 1H) , 3, 35 - 3,55 (m, 2H) , 3,75 (s, 2H) , 4,05 (q, J

0· ··*· = 7,40, 7,42, 7,45 Hz, 2H), 4,95 - 5,20 (m, 3H), 7,10 (široký s, 1H) , 7,25 - 7,40 (m, 5H) .

Referenční příklad 17

Ethylester z referenčního příkladu 16 (3,01 g, 8,00 mmol), chlorid litný (1,72 g, 40,6 mmol) a hydroboritan sodný (1,51 g, mmol) v směsi EtOH/THF (4:3; 175 ml) se spojí a působí se na ně stejným způsobem jak uvedeno pro přípravu produktu referenčního příkladu 14 a tak se získá alkohol (2,40 g, 90% výtěžek) ve formě světle žlutého oleje. MS (smyčka +) MH⁺ - 333 (100 %) . ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d_s) , δ 1,80 - 2,05 (m, 3H) , 2,20

- 2,40 (m, 1H) , 2,80 (t, J = 6, 52, 6, 52 Hz, 2H) , 3,40 - 3,60 (m, 2H) , 3, 65 - 3,70 (m, 2H) , 4,65 (t, 1H (OH), 4,90 - 5, 20.

(m, 3H) , 7,05 (široký s, 1H), 7, 25 - 7,40 (m, 4H) .

Sloučenina 20

Na thiazol-4-ethanol z referenčního příkladu 17 (1,51 g, 4,55 mmol), trifenylfosfin (2,37 g, 9,04 mmol), diethylazodikarboxylát (1,00 ml, 6,35 mmol) a 3-hydroxypyridin (0,60 g, 6,31 mmol) v THF (20 ml) se působí stejným způsobem ·· ·· » · · 4 • ·« ·· ···· ·· »··· ·* jak uvedeno pro přípravu sloučeniny 5 a tak se získá surová sloučenina 20 (0,82 g) ve formě oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 410 (100 %) . ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆) , δ 1,90 - 2, 02 (m, 3H) , 2,20

- 2,40 (m, 1H), 3,15 (t, J = 6, 52, 6, 52 Hz, 2H) , 3,47 - 3,60 (m, 2H) , 4,30 - 4,40 (m, 2H) , 4, 93 - 5,20 (m, 3H) , 7,05 (široký s, 1H), 7,20 - 7,70 (m, 7H), 8,15 (d, J = 4,3 Hz, 1H),

8,28 - 8,32 (m, 1H).

Sloučenina 21

nu. o v \ v f ι x y/ a. .j o ni působí stejným způsobem jaký je uveden

CH3CO2H (5 ml) se přípravu sloučeniny a tak se získá sloučenina 21 (0,85 g) ve formě hygroskopické soli dihydrobromidu. MS (smyčka +) MH⁺ = 276 (100 %) . ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆) , δ 1,90 - 2,20 (m, 3H) , 2,40 2,50 (m, 1H) , 3,25 - 3, 40 (m + t, J = 6,52, 6, 52 Hz, 4H) , 4,60 (t, J = 6, 52, 6, 52 Hz, 2H) , 5,00 - 5,10 (m, 1H) , 7,60 (s, 1H) , 7,95 - 8,05 (m, 1H) , 8,25 - 8,30 (m, 1H) , 8,65 (d, J = 4,3 Hz, 1H) , 8,80 (s, 1H) , 9,10 - 9,25 (široký s, 1H) , 9,75 - 9,90 (široký s, 1H).

Sloučenina 22

00 » 0 0 «

00

0« · < 0000 ··

0« 00«« «4

0 0 0 • · ·

0·· • 0 0

0040

Na sloučeninu 21 (0,78 g, 1,78 mmol), triethylamin (0,63 ml, 4,52 mmol) a ethyloxalylchlorid (0,30 ml, 2,68 mmol) v CH₂C1₂ (25 ml) se působí stejným způsobem, který je popsán pro přípravu sloučeniny 7 a tak se získá sloučenina 22 (0,42 g, 63% výtěžek) ve formě oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 376 (100 %) . ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) , směs rotamerů 3:2, δ 1,20 - 1,30

(m, 3H)	, 1,95 - 2,10	(m, 3H),	2,	25	- 2,45 (m, 1H)	Z 3,	15 (q, J
= 7,40,	7,42, 7,45 Hz	Z 2H), 3,	50	-	3,75 (m, 2H),	4,20	- 4,40
(m, 4H)	, 5,30 - 5,35	(m, 0,60	X	1H)	, 5,50 - 5,55	(m,	0,40 x
1H), 7,	25 - 7,33 (m,	1H) , 7,35-	7,	40 (m, 2H), 8,	15 -	8,18 (m
1H), 8,	20 - 8,22 (m,	1H), (q,	J	= 7	,40, 7,42, 7,4	5 Hz	z 2H) .

Sloučenina 23

MgCI

THF

Na sloučeninu 22 (0,41. g, 1,09 mmol) a 1,1-dimethylpropylmagnesiumchlorid (1M, 3,00 ml, 3,00 mmol) v THF (25 ml) se působí stejným způsobem, který je popsán pro přípravu sloučeniny 8 a tak se získá sloučenina 23 (224,4 mg, 51% výtěžek) ve formě oleje. MS (smyčka +) MH⁺ = 402 (100 %). ¹H NMR (300 MHz, DMSO-dg), směs rotamerů 4:1, δ 0,63 (t, J = 7,41

Hz, 7	,42 Hz, 0,20 x	3H) ,	0, 79	(t,	J = 7	,37, 7,40 Hz,	0,80 x
3H) ,	0, 89 (s, 0,10 x	6H) ,	0, 93	(s,	0, 10	x 6H), 1,15	(s, 0,40 x
6H) ,	1,16 (s, 0, 40 x	6H) ,	1, 59	- 1	z 64 (:	m, 2H) , 1,95	- 2,08 (m,
3H) ,	2,23 - 2,33 (m,	1H) ,	3, 16	(t,	J =	6,30 Hz, 6,30	Hz, . 2H) ,
3,40	-3,57 (m, 2H) ,	4,36	(t,	J =	6, 64,	6, 64 Hz, 2H)	, 5,30 -
5, 37	(m, 1H) , 7,29 -	7,41	(m,	3H) ,	8,16	(d, J = 4,25	Hz, 1H),
8,26	- 8,29 (m, 1H).

Sloučenina 24 ·· ·♦ « · · · • t ·· • · · * • ·<

• · · · • · · «··« ·· φ* ··*« • · · « · · ·· ··*·

Metoda A

K míchanému roztoku (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-2-pyrrolidinkarboxylové kyseliny (4,557 g, 18,89 mmol, připravené jak je popsáno ve WO 96/40633) v tetrahydrofuranu (130 ml) ochlazeném na teplotu okolo -15 °C (MeOH/ledová lázeň) se přidá triethylamin (1,908 g, 2,33 ml, 18,89 mmol) a poté ethylchlorformiát (2,05 g, 1,806 ml, 18,86 mmol). Směs se míchá při teplotě od okolo -15 °C do okolo -10 °C po dobu okolo 30 minut, vysrážená pevná látka se odstraní filtrací a objem filtrátu a promývacích kapalin se upraví přidáním tetrahydrofuranu na cca 170 ml.

K míchanému roztoku směsného anhydridu (85 ml, 9,32 mmol) se při teplotě 0 °C přidá hydrazinmonohydrát (0,48 ml, 9,79 mmol). Směs se míchá a zahřívá se na teplotu místnosti přes noc. Po odstranění rozpouštědla ve vakuu se zbytek čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu za použití 50% ethylacetátu v dichlormethanu jako eluentu a získá se sloučenina 24 (0,64 g, 28,7% výtěžek) jako bezbarvá pevná látka, která se rekrystalizuje ze směsi ether/pentan, teploty tání 177 až 178 °C. CIMS 479 (MH⁺) , 501 (M+Na⁺) . ¹H NMR (300 MHz, CDC1₃ pro hlavní, trans rotamer) 9,06 (široký s, 2H), 4,61 (m, 2H) , 3,50 - 3,46 (m, 4H) , 2,40 - 2,36 (m, 2H) , 2,13 - 1,94 (m, 6H) , 1, 83 - 1, 64 (m, 4H) , 1,25 (každý s, každý 6H) , 0,87 (t, 3H) . IČ (KBr) cm^-1: 3261, 2970, 1706, 1684, 1636. Anal.

·· ·»·« »»·· »· · ···: ··« «·· »· · • » t * · · » · » · · • ·« ··«· · · ·

1·«· ·· ·· ·· ·· ·♦♦·

Vypočteno pro C₂4H₃₈N4O₆: C, 60, 23; H, 8,00; N, 11,71. Nalezeno: C, 60, 30; H, 8, 03; N, 11,58.

Sloučenina 24 se také připraví jak je popsáno v metodě B.

Metoda B

Sloučenina 24 υ

OA

1. EDCHCI, HOBt OH Et₃N, THF

2. NH₂-NH₂

N ž /

K míchanému roztoku 2(S)-1-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)2-pyrrolidinkarboxylové kyseliny (2,4229 g, 10 mmol), připraveném jak je popsáno ve WO 96/40633 v tetrahydrofuranu (50 ml) se přidá postupně při teplotě okolo teploty místnostnosti triethylamin (4,18 ml, 30 mmol), hydrochlorid ethyldimethylaminopropylkarbodiimidu, „EDC.HC1, (1,917 g, 10 mmol) a hydrát hydroxybenzotriazolu (HOBT.H₂O) (1,53 g, 10 mmol). Po 5 minutách se přidá roztok hydrazinu v tetrahydrofuranu (IM, 5 ml, 5 mmol) a směs se míchá okolo 18 hodin. Tetrahydrofuran se odstraní vé vakuu (<35 °) a zbytek se rozpustí v dichlormethanu a promyje se postupně vodou, 1% vodnou HCI a suší se (Na₂SO4) . Po filtraci se dichlormethan odstraní ve vakuu a surový produkt se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu eluováním 1,5% methanolem v dichlormethanu a získá se sloučenina 24 (18% výtěžek) , [oc]²⁵D -95, 8 ⁰ (c = 0,33, CHC1₃) , identická sloučenina ve všech ohledech ke sloučenině získané v metodě A.

Metoda A se použila k přípravě sloučenin 25 až 29.

• · • · · · · ·

Metoda A

Sloučenina 25

Za použití (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-2piperidinkarboxylové kyseliny (připravena v podstatě jak je popsáno pro (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-2pyrrolidinkarboxylovou kyselinu ve WO 96/40633), se izoluje sloučenina 25 jako bezbarvá pevná látka (38% výtěžek), t.t.

180 až 181 °C (ether/pentan) . CIMS 507 (MH⁺) , 529 (M+Na⁺) . ^XH NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotametr) 8,07 (širokým, 2H), 5,17 (d, 2H), 4,29 - 4,08 (m, 2H), 3,39 (d, 4H), 2,89 (t, ÍH), 2,40 - 2,05 (m, 3H), 1,89 - 1,44 (m, 10H), 1,23 a 1,22 (každý s, každý 6H) , 0,90 (t, 6H) . IČ (KBr) cm'¹: 3309, 2969, 1699, 1646, 1610. Tínal. Vypočteno pro C₂₆H₄₂N₄O₆: C, 61,64; H, 8,36; N, 11,06. Nalezeno: C, 61,45; H, 8,58; N, 10,76.

Sloučenina 26

Za použití (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-2azetidinkarboxylové kyseliny (připravena v podstatě jak je popsáno pro (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-2pyrrolidinkarboxylovou kyselinu ve WO 96/40633), se izoluje • · sloučenina 26 jako průhledná lepivá pěna (35% výtěžek), t.t. < 58 °C, [a]²⁵D = -93,4 ° (CHC1₃) . CIMS 451 (MH⁺) , 473 (M + Na⁺) . / NMR (CDCI3 směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 9,70 (široký s, 2H) , 5,02 (d, d, 2H) , 4,34 - 4,18 (m, 4H) , 2,85 2,73 (m, 2H) , 2,61 - 2,49 (m, 2H) , 1,84 - 1,73 (m, 6H) , 1,25 a 1,23 (každý s, každý 6H) , 0,84 (t, 6H) . IČ (KBr) cm’¹: 3498, 3247, 2972, 1703, 1636.

Sloučenina 27

Za použití (3S)-2-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-1,2,3,4tetrahydroizochinolinkarboxylové kyseliny (připravena v podstatě jak je popsáno pro (2S)-1-(1,2-dioxo-3, 3dimethylpentyl)-2-pyrrolidinkarboxylovou kyselinu ve WO 96/40633), se izoluje sloučenina 27 jako bezbarvá pevná látka (41% výtěžek, ether/pentan) , t.t. 108 až 110 °C; [oc]²⁵D = -55,12 ⁰ (CHCI3) . CIMS 603 (MH⁺) , 625 (M+Na). ¹H NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer) 7,22 - 7,03 (m, 8H) ,

5,25 - 4, 95 (m, 2H) , 4,51 - 4,25 (m, 4H) , 3,16 - 3,10 (m, 2H) , 1,72 - 1,66 (m, 2H), 1,22 a 1,21 (každý s a každý 6H), 0,89 (t, 6H) . IČ (KBr) cm¹: 3219, 2969, 1701, 1639. Anal. Vypočteno pro C₃₄H4₂N₄O6: C, 67,75; H, 7,02; N, 9,30. Nalezeno: C, 67, 54; H, 7,04; N, 9, 13.

Sloučenina 28

Za použití (4R)-3-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-4thiazolidinkarboxylové kyseliny (připravena v podstatě jak je popsáno pro (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-2pyrrolidinkarboxylovou kyselinu ve WO 96/40633), se izoluje sloučenina 28 jako bezbarvá pěna (38% výtěžek), t.t. 77 až 82 °C (ether/pentan); °C; [a]²⁵D = -15,6 ⁰ (c = 0, 276, CHC13) . CIMS 515 (MH⁺) , 537 (M+Na⁺) . ¹H NMR (CDC13, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer) 8,93 (široký s, 2H) , 5, 05 - 4, 98 (m, 2H, 4,54 - 4,43 (m, 4H) , 3,59 - 3,54 (m, 2H) , 3,25 -3,21 (9m,

2H) , 1,78 - 1,74 (m, 4H), 1,25 a 1,23 (každý s, každý 6H),

0,88 (t, 3H) . IČ (KBr) cm^-1: 3270, 2970, 1703, 1642, 1418. Anal. Vypočteno pro C22H₃₄N₄O6: C, 51,34; H, 6,66; N, 10,89. Nalezeno: C, 51,52; H, 6,67; N, 11,06.

Sloučenina 29

O·

Za použití (2S)-l-benzyloxykarbonyl-2-pyrrolidinkarboxylové kyseliny se izoluje sloučenina 29 jako bezbarvá pěna nedefinovaného rozsahu tání; [ct]²⁵D = -56 ° (CHC1₃) . CIMS

495 (MH⁺) , 518 (M + Na⁺) . ¹H NMR (CDC1₃, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 9,11 (široký s, 2H) , 7,36 (široký s, • ·

4Η), 4,41 (široký s, 2H) , 3, 55 - 3, 44 (m,

8H) . IČ (KBr) cm¹ 3496, 1704, 1499, 1420,

10H) , 5,23 4H) , 2,36 1358.

9 m, 1,94 (m,

Sloučeniny 28 a 29 se v metodě C.

také připraví jak je popsáno

Sloučenina 28

Metoda C

K roztoku (4R)-3-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-4thiazolidinkarboxylové kyseliny (1,63 g, 6,29 mmol) v dichlormethanu (100 ml) ochlazenému v ledové lázni se přidá během 20 minut roztok oxalylchloridu (0,72 ml, 8,25 mmol) v dichlormethanu. Směs se míchá při teplotě místnosti zhruba dvě hodiny, rozpouštědlo se odpaří ve vakuu při < 40 °C. Po sušení zbytku ve vakuu po dobu okolo 1 hodiny se zbytek rozpustí v suchém tetrahydrofuranu (50 ml). K tomuto roztoku se za míchání při okolo 0 °C přidá během 30 minut směs IM roztoku hydrazinu v tetrahydrofuranu (3,15 ml, 3,15 mM) a triethylaminu (1,32 ml, 9,47 mM) a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Po 24 hodinách se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi IN vodnou kyselinu chlorovodíkovou a dichlormethan. Organická vrstva se suší (Na₂SO₄) a odpaří se ve vakuu. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografii na silikagelu eluováním 2% methanolem v dichlormethanu a získá se sloučenina 28 (1,18 g, 73% výtěžek), [ot]²⁵D = -15,6 ⁰ (c - 0,276, CHCI3) , identické ve všech směrech s autentickým vzorkem získaným jak je popsáno v metodě

A.

Sloučenina 29

O

N

²⁹ mmol) v dichlormethanu >lo 0 °C se přidá pod dusíkem

K roztoku Z-prolinu (10 g, 40, (100 ml), ochlazeném na teplotu okc během 20 minut oxalylchlorid (4,19 ml, 48 mmol) a poté dimethylformamid (3 kapky). Směs se míchá okolo 2 hodin při teplotě místnosti, potom se odpaří ve vakuu do sucha a opět se suší ve vysokém vakuu po dobu okolo 30 minut. Zbytek se rozpustí v suchém tetrahydrofuranu (THF, 160 ml) a tento roztok se přidá během okolo 2 minut k 1M roztoku hydrazinu v tetrahydrofuranu (40 ml, 40 mM) a směs se míchá při teplotě okolo 18 hodin. Směs se odpaří do sucha ve vakuu. Zbytek se přenese do ethylacetátu (300 ml) a promyje se postupně 1% vodným roztokem HCI a vodou, organická vrstva se suší (Na₂SO₄) , filtruje se a odpařením ve vakuu se získá bezbarvý olejovitý zbytek. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu eluováním 2% methanolem v dichlormethanu a získá se sloučenina 29 (8,8 g, 88,7% výtěžek), [a]²⁵D = -56,1 ° (c = 1,0, CHCI3) , jako bezbarvá pěna, identická s autentickým vzorkem získaným jak je popsáno v metodě A.

Sloučenina 30 se připraví jak je popsáno v metodách D, E a

F.

Sloučenina 30

Metoda D • 4

4444

4

30

K intenzivně míchané ledem chlazené kaši sloučeniny 24 (0,567 g, 1,185 mmol) v suchém etheru (40 ml) se přidá pyridin (0,12 ml, 3,35 mmol) a poté thionylchlorid (0,120 ml, 1,66 mmol) . Směs se míchá při okolo 0 °C po dobu zhruba 2 hodin a potom se vysrážené pevné látky odstraní filtrací, promyjí se rychle suchým etherem a spojené filtráty se odpaří do sucha ve vakuu při teplotě < 40 °C. Zbytek (0,6235 g pěny) se rozpustí v suchém toluenu (25 ml) a zahřívá se při zpětném toku pod dusíkem po dobu okolo 3 hodin. Zbytek získaný odpařením toluenu ve vakuu se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu/CH₂Cl₂. Eluováním 1% methanolem v methylenchloridu se získá sloučenina 30 (0,354 g, výtěžek 63,6 %) jako bezbarvá pevná látka, která se rekrystalizuje ze směsi ether/pentan, t.t. 123 až 124 °C; [a]²⁵D = -74,6 ° (c = 0,8, CHC1₃) . CIMS 461 (MH⁺) , 483 (M + Na⁺) . ¹ H NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans izomer) 5,32 (d, d, J = 3,0, 7,6), 3,59 (m, 4H), 2,33 - 2,07 (m, 8H), 1,80 - 1, 65 (m, 4H) , 1,23 a 1,20 (každý s, každý 6H) , 0,86 (t, 6H) . IČ (KBr) cm'¹: 2972, 1704, 1641. Anal. Vypočteno pro C24H36N4O5: C, 62, 59; H, 7,88; N, 12,16. Nalezeno: C, 62, 68; H 7,75; N, 12,14.

Sloučenina 30 Metoda E • ·

K roztoku sloučeniny 24 (0,112 g, 0,234 mM) v chlorbenzenu (10 ml) se přidá hexamethyldisilazan (0,123 ml, 0,585 mM), imidazol (10 mg), tetrabutylamoniumfluorid (10 mg) a směs se zahřívá při zpětném toku pod dusíkem okolo 72 hodin. Chromatografickým čištěním surového produktu se získá sloučenina 30, která je identická s autentickým vzorkem jak je popsáno v metodě D (čhromatografie na tenké vrstvě, hmotnostní spektrální data).

Sloučenina 30

Metoda F

O O N-N

30

K roztoku sloučeniny 24 (0,2018 g, 0,42 mmol) v tetrahydrofuranu (10 ml) se přidá vnitřní sůl (methoxykarbonylsulfamoyl)triethylaminhydroxidu (Burgessovo činidlo, celkem 0,3014 g, 1,265 mmol) ve třech dávkách, každá dávka přidána po okolo 30 minutách. Směs se potom míchá při teplotě místnosti po dobu okolo 72 hodin. Po odstranění rozpouštědla ve vakuu a mžikovou chromatografií zbytku se získá sloučenina 30, která je identická s autentickým vzorkem popsaným v metodě D (čhromatografie na tenké vrstvě, hmotnostní spektrální data).

·· ♦·· ·

Referenční příklad 18 //

CN HjNOHHCI K₂CO₃/ EtOH

N-^/Z

N-OH

Směs 3-(3-pyridyl)propionitrilu (7,5 g, 56,75 mM), hydroxylaminhydrochloridu (5,915 g, 85,12 mM) a bezvodého uhličitanu draselného (15,686 g, 113,5 mM) v ethanolu (200 ml) se míchá a zahřívá při zpětném toku pod dusíkem okolo 64 hodin. Po ochlazení se pevné látky odstraní filtrací a filtráty se odpaří ve vakuu do sucha a získá se viskózní jantarový olej ovitý zbytek (8,95 g) . Triturací s dichlormethanem (300 ml) a filtrací a následným odstraněním dichlormethanu ve vakuu se získá velmi viskózní olejovitý zbytek (5,84 g). Podíly nerozpustné v dichlormethanu se rozpustí v methanolu, filtrují se a odpaří ve vakuu a získá se viskózní, polotuhý zbytek amidoximu (3,09 g); CIMS 166 (MH⁺) .

Sloučenina 31

K roztoku (2S)-1-(1,2-dioxyo-3,3-dimethylpentyl)-2pyrrolidinkarboxylové kyseliny (4,557 g, 18,89 mmol, připravena jak je popsáno ve WO 96/40633; 2,02 g, 8,37 mmol) v di'(ethylenglykol) monomethyletheru (diglym, 30 ml) se postupně přidá amidoxim z referenčního příkladu 18 (1,383 g, 8,37 mmol) a hydrochlorid 1-(dimethylaminopropyl)ethylkarbodiimidu, „EDC (3,21 g, 16,743 mmol) a směs se míchá

44 44 4444 • · 4 · 4 4 · ·

44 4 4 4 44 4

444 4 444 4 4 • · · 4 4 4 4 444

4444 44 44 44 44 4444 a zahřívá v olejové lázni na okolo 50 °C po dobu okolo 20 hodin a potom při teplotě okolo 110 °C po dobu okolo 5 hodin. Po ochlazení se reakční směs rozdělí mezi vodu a dichlormethan, organická vrstva se suší (Na₂SO₄) a odpaří se ve vakuu a získá se viskózní zbytek (3,727 g) . Čištěním chromatografií soustavou silikagel/dichlormethan a eluováním s 1% methanolem v dichlormethanu se získá sloučenina 31 jako viskózní olej (0,39 g, 12,5% výtěžek). CIMS 371 (MH⁺) . / NMR (CDC1₃, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 8,47 (s, 2H), 7,52 (d,

1H, J = 7, 6), 7,24 - 7,20 (m, 1H) , 5,32 (d, d, 1H) , 3,64 (t,

2H) , 3,06 (m, 4H) , 2, 42 - 2,33 (m, 1H) , 2,19 - 2,06 (m, 3H) ,

1,82 - 1,61 (m, 2H), 1,24 a 1,22 (každý s, každý 3H) , 0,87 (t,

3H), IČ (KBr) cm¹: 2970, 1704, 1645, 1580, 1425. Anal.

Vypočteno pro C₂oH₂₆N₄0₃: C, 64,84; H, 7,07; N, 15,12. Nalezeno:

C, 64, 43; H, 6, 95; N, 14, 89.

Referenční příklad 19

CO₂Et h₂nnh₂

Vihnh₂

Směs ethyl 3-(3-pyridyl)propionátu (5,92 g, 33,08 mM) , bezvodého hydrazinu (20 ml, velký přebytek) a ethanolu (100 ml) se zahřívá při zpětném toku pod dusíkem okolo 18 hodin. Rozpouštědlo se odstraní odpařením ve vakuu a zbytek se trituruje s etherem a ochladí se. Krystalická pevná látka se sebere a promyje se malým množstvím etheru a získá se hydrazid jako krystalická pevná látka, teploty tání 87 až 90 °C. CIMS 166 (MH⁺) . ^ΧΗ NMR (DMSO) δ 9,04 (s, 1H) , 8,43 - 8,39 (m, 2H) , 7,61 (d, 1H) , 7,32 - 7,28 (m, 1H) , 2,83 (t, 2H) , 2,35 (t, 2H) . IČ (KBr) cm'¹: 3325, 3231, 3004, 1667, 1630. Anal. Vypočteno • Φ φφ φφ φφ » Φ Φ 4 φφφφ φ ί pro C8H11N3O: C, 58,17; Η, 6,71; Ν, 25, 44. Nalezeno: C, 57, 94; Η, 6,49; Ν, 25, 28.

Sloučenina 32

Za použití postupu metody A, ale s využitím jednoho ekvivalentu monoacylhydrazinu referenčního příkladu 19 místo nesubstituovaného hydrazinu se získá sloučenina 32 (73% výtěžek) jako bezbarvá pevná látka, t.t. 90 až 92 °C (ether/pentan) . CIMS 389 (MH⁺) . ^ΧΗ NMR (směs rotamerů, CDC1₃) δ (pro hlavní, trans rotamer) 9,3 (s, 1H, 8,83 (s, 1H), 8,44 (s,

2H), 7,54 (d, 1H), 7,27 - 7,18 (m, 1H), 4,59 - 4,56 (m, 1H),

3,48 (t, 2H), 2,99 (2H) , 2,57 (t, 2H) , 2, 09 - 1,92 (m, 4H) ,

1,80 - 1, 63 (m, 2H) , 1,23 (s, 3H) , 1,20 (s, 3H) , 0,86 (t, 3H) .

IČ (KBr) cm^-1: 3258, 2971, 1703, 1637. Anal. Vypočteno pro C₂oH₂₈N₄0₄.0,5 H₂O: C, 60, 44; H, 7,35; N, . 14,10. Nalezeno: C,

60, 67; H, 7, 07; N, 14,32.

Sloučenina 33

Za použití postupu metody F a sloučeniny 32 jako substrátu se získá sloučenina 33 (71,6% výtěžek) jako bezbarvý viskózní ·« ··«»· ·· ·· • · · ·· · · · · olej . CIMS 371 (MH⁺) . ¹H NMR (CDC1₃, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 8,49 (d, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,26 - 7,22 (m, 1H), 5,30 (t, 2H), 3,15 (s, 4H), 2,35 - 2,04 (m, 4H), 1,77 - 1,59 (m, 3H), 1,23 (s, 3H) , 1,21- (s, 3H) , 0,86 (t, 3H) .

Anal. Vypočteno pro C20H26N4O3: C, 64, 84; H, 7,07; N, 15,12. Nalezeno: C, 64, 45; N, 15,12.

Sloučenina 34 _nu I.CICOOEt/ ^0H Et₃N

ΜβΟ q ²- MeO-0^_NHNH

MeO

Za použití metody A, ale s použitím jednoho ekvivalentu 3(3, 4,5-trimethoxyfenyl)propionylhydrazidu místo hydrazinu se získá sloučenina 34 (81,4% výtěžek) jako bezbarvá, sklovitá pěna. CIMS 478 (MH⁺) . ^XH NMR (CDC1₃, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 9,06 (široký s, 1H), 7,99 (široký s,

1H), 6,42 (s, 2H), 4,61 (m, 1H) , 3,84 (s, 6H) , 3,82 (s, 3H),

3,48 (t, 2H) , 2,93 (t, 2H) , 2,54 (t, 2H) , 2,38 - 2,35 (m, 1H) ,

2,06 - 1,93 (m, 3H) , 1, 80 - 1, 65 (m, 2H) , 1,24 (s, 3H) , 1,21 (s, 3H) , 0,86 (t, 3H) , IČ (KBr) cm^-1: 3273, 2970, 1703, 1639, 1127 .

Sloučenina 35

Μ 4«

4 4

44

4

4

4444 44 «4 4 4*·

4 4

4 4 4 4

4 4 4

4 4

·

4444

Za použití postupu metody F a s použitím sloučeniny 34 jako substrátu se získá sloučenina 35 (99% výtěžek), jako bezbarvý viskózní olej. CIMS 460 (MH⁺) . ¹H NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 5,31 (d, d, 1H), 3,85 (s, 6H), 3,82 (s, 3H) , 3,61 - 3,59 (m, 1H) , 3,25 - 3, 00 (m,

4H) , 2, 40 - 2,25 (m, 1H) , 2,25 - 1, 90 (m, 4H) , 1, 80 - 1, 60 (m, 2H), 1,23 (s, 3H) , 1,21 (s, 3H) , 0,86 (t, 3H) . IČ cm¹: 2968, 1702, 1644, 1590, 1508, 1459, 1423, 1127. Anal. Vypočteno pro C24H33N3O6.0, 6 H₂O: C, 61,29; H, 7,33; N, 8,93. nalezeno: C,

61,29; H, 7,17; N, 8,93.

Sloučenina 36

O^:

Za použití postupu metody A s (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3dímethylpentyl)-2-piperidinkarboxylovou kyselinou (připravena v podstatě jak je popsáno pro (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3dimethylpentyl-2-pyrrolidinkarboxylovou kyselinu ve WO 96/40633) a za použití hydrazidu z referenčního příkladu 19 místo hydrazinu se získá sloučenina 36 (71,5% výtěžek) jako bezbarvá pěnovitá pevná látka, t.t. 48 až 52 °C. CIMS 403 (MH⁺) . ¹H NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamerů) 8,64 (s, 1H), 8,47 - 8,43 (m, 3H), 7,56 - 7,53 (m, 1H), 7,25 - 7,20 (m, 1H) , 5,17 (d, 1H) , 3,39 (d, 1H) , '3,03 2,98 (m, 2H) , 2,61 - 2,55 (m, 2H) , 2,30 - 2,20 (m, 1H) , 1,85 1,51 (m, 8H), 1,23 (s, 3H), 1,22 (s, 3H), 0,89 (t, 3H). IČ (KBr) cm¹: 3272, 2969, 1701, 1638, 1445. Anal. Vypočteno pro C21H30N4O4: C, 61,84; H, 7,56; N, 13,74. Nalezeno: C, 61,88; H,

7,40; N, 13,70.

44

4 9 4·

4 4 *

4 4 4 4

4 4 4 4

V 44 4444 • 4 4«

4 · 4 · · ·· · ·

4 4 4 · 4

4 4 4 4 ···· 44 44

Sloučenina 37

Za použití postupu metody A s (2S).-1-(1,2-dioxo-3,3dimethylpentyl)-2-piperidinkarboxylovou kyselinou (připravena v podstatě jak je popsáno pro (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3dimethylpentyl-2-pyrrolidinkarboxylovou kyselinu ve WO 96/40633) a za použití 3-(3,4,5-trimethoxyfenyl)propionylhydrazidu místo hydrazinu se získá sloučenina 37 (98% výtěžek) jako čirá sklovitá pevná látka, t.t. 52 až 55 °C. CIMS 492 (MH⁺) . ¹H NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamerů) 8,25 (široký s, 1H), 7,71 (široký s, 1H), 6,43 (d, 2H), 5,17 (d, 1H), 3,85 (s, 6H), 3,83 (s, 3H), 3,38 (m, 1H),

3,0 - 2,90 (m, 2H) , 2,50 - 2, 40 (m, 2H) , 2,33 (široký t, 1H) , 1,8 - 1,6 (m, 8H) , 1,24 (s, 3H) , 1,23 (s, 3H) . IČ (KBr) cm'¹:

3293, 2967, 2941, 1701, 1640, 1591, 1459, 1127. Anal.

Vypočteno pro C25H37N3O7.0, 75 H₂O: C, 59,45; H, 7,68; N, 8,32. Nalezeno: C, 59, 47; H, 7,55; N, 8,36.

Sloučenina 38

se

Za použití postupu získá sloučenina 38 metody F a sloučeniny 36 jako substrátu jako bezbarvý olej (96% výtěžek). CIMS

• ·

385 (MH⁺) . ¹H NMR (CDC1₃, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 8,49 (d, 2H) , 7,56 (d, 1H) , 7,27 - 7, 22 (m, 2H) , 5,93 (d, 1H), 3,21 - 3,11 (m, 4H) , 2,35 (d, 1H) , 2,0 - 1,50 (m,

8H) , 1,24 (s, 3H) , 1,21 (s, 3H) , 0,90 (t, 3H) , IČ (KBr) cm^-1: 2967, 2942, 2877, 1700, 1644, 1585, 1434. Anal. Vypočteno pro C21H2SN4O3: C, 65, 60; H, 7,34; N, 14,57. Nalezeno: C,. 65, 37; H, 7,43; N, 14,41.

Sloučenina 39

Za použití postupu metody F a sloučeniny 37 jako substrátu se získá sloučenina 39 (64,8 % výtěžek) jako bezbarvý viskózní olej. CIMS 474 (MH⁺) . ¹H NMR (CDC1₃, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 6,42 (s, 2H), 5,93 (d, 1H), 3,84 (s,

6H) , 3,82 (s, 3H) , 3,40 (široký d, 1H) , 3, 25 - 3,00 (m, 4H) , 2,36 široký d, 1H) , 2,0 - 1,50 (m, 8H) , 1,24 (3H) , 1,22 (s,

3H) , 0,90 (t, 3H) . IČ (KBr) cm'¹: 3502, 2966, 2942, 1772, 1700, 1644, 1590, 1509, 1462, 1240, 1128. Anal. Vypočteno pro C₂5H35N₃O₆.2 H₂O: C, 58,92; H, 7,71; N, 8,25. Nalezeno: C, 59, 05;

H, 7,45; N, 8,57.

Referenční příklad 20

1.

ch₂ci₂,dmf vy

2. tmschn₂ • « · · · • · · · I · · • · · • ·

K roztoku N-karbobenzyloxy-L-prolinu (2,0 g, 8,0 mmol) v bezvodém methylenchloridu (20 ml) se při 0 °C pod dusíkem přidá po kapkách oxalylchlorid (1,22 g, 9,6 mmol) a poté 2 kapky DMF. Roztok se míchá po dobu okolo 3 hodin, zahřeje se na teplotu okolo 25 °C a potom se zahustí. Vzniklý chlorid kyseliny se rozpustí ve směsi THF:acetonitril (1:1, 20 ml) a zpracuje se při teplotě okolo 0 °C a pod dusíkem s triethylaminem (0,87 g, 8,6 mmol). Roztok se míchá okolo 10 minut a po kapkách se přidá trimethylsilyldiazomethan (2,0 M roztok v hexanech, 7,8 ml). Roztok se míchá po dobu okolo 2 hodin při teplotě okolo 0 °C, zahřeje se na teplotu okolo 25 °C a míchá se dalších 17 hodin. Roztok se zředí ethylacetátem, promyje se nasyceným NaHCCb a vodou, suší se (MgSO₄) a zahustí se. Surový zbytek se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu, eluováním 40% ethylacetátem v pentanu a získá se diazoketon (1,15 g, 53% výtěžek) jako žluto-oranžový olej. ¹H NMR (CDC1₃; směs cis-trans amidových rotamerů) : δ 1,88 - 2,09, 2,17 - 2,38 (2 širokým, 4H); 3,58 (m, 2H) , 3,81, 4,03, 4,17 (s, AB kvartet, 2H, J = 4,0), 4,61 (m, 1H) , 5,13 (m, 2H) , 7,32 (m, 5H) .

Referenční příklad 21

K roztoku N-karbobenzyloxy-L-prolin-cc-diazoketonu z referenčního příkladu 20 (1,0 g, 3,6 mmol) v bezvodém diethyletheru (10 ml) se pod dusíkem přidává po kapkách nasycený roztok HBr v diethyletheru, dokud se nezastaví • · • · 9 · · · · · · · · ··· · · · ·· * : : ί * ί ί ···· ·· «· ·· ·· ···· uvolňování dusíku. Roztok se míchá okolo 1 hodiny při teplotě okolo 25 °C, potom se promyje nasyceným NaHCO₃, vodou a nasyceným NaCI, suší se (MgSO₄) a zahustí. Surový materiál se čistí sloupcovou chromatografii na silikagelu eluováním 40% ethylcetátem v pentanu a získá se bromketon (0,49 g, 42% výtěžek) jako čirý olej. ^XH NMR (CDC1₃; směs cis-trans amidových rotamerů) : δ 1, 84 - 2, 30 (široký m, 4H); 3,58 (m, 2H); 4,32 (m, 1H); 5,17 (m, 2H); 5,28 (t, 1H); 7,35 (m, 5H) .

Sloučenina 40

K roztoku thioamidu z referenčního příkladu 8 (0,40 g, 1,15 mmol) v bezvodém ethanolu (15 ml) se přidá po kapkách Nkarbobenzyloxy-L-prolin-a-brommethylketon z referenčního příkladu 21 (0,49 g, 1,5 mmol) v bezvodém ethanolu (2 ml). Vzniklý roztok se zahřívá při zpětném toku pod dusíkem po dobu okolo 3 hodin. Roztok se ochladí na teplotu okolo 25 °C a zahustí se. Vzniklý zbytek se přenese do směsi diethyletheru a NaHCO₃. Vodná fáze se oddělí a extrahuje se několikrát diethyletherem. Organické vrstvy se spojů., suší se (MgSO₄) a koncentrují. Surový materiál se čistí sloupcovou chromatografii na silikagelu eluováním 40% ethylacetátem v pentanu a získá se sloučenina 40 (0,51 g, 69% výtěžek) jako čirý olej . ^XH NMER CDC1₃; směs cis-trans amidových rotamerů) : δ 1,93 (m, 4H); 2,20 (široký m, 4H); 3,61 (široký m, 4H); 5,18 (široký m, 6H); 6, 74, 6, 85 (s, s, 1H); 7,13 (m, 2H); 7,27 (m,

4H); 7,39 (m, 4H) .

• · · · ,· · ·

Sloučenina 41

θΡ^Γ3' CHoC^ 0°C -> 25°C

(0,48 g, 0,97 mmol) v bezvodém se při teplotě okolo 0 °C přidá po

K roztoku sloučeniny methylenchloridu (20 ml) kapkách 1,0 M roztok BBr3 v methylenchloridu (5 ml). Roztok se míchá po dobu okolo 1 hodiny při teplotě okolo 0 °C a potom se zahřívá na teplotu okolo 25 °C a míchá se okolo 2 hodiny.

Reakce se zakončí přidáním po kapkách vody (25 ml). Vrstvy se oddělí a organická fáze se extrahuje s vodou. Spojené vodné se alkalizují na pH 11 přidáním (po kapkách) IN NaOH a potom se zahustí. Vzniklé soli se filtrují a za odsávání se promyjí ethylacetátem. Organický filtrát se suší (MgSO₄) a koncentruje a získá se sloučenina 41 (0,067 g, 31% výtěžek) jako žlutý olej. ¹H NMR (CDC1₃) : δ 1,88 (m, 6H); 2,17 (m, 1H); 2,31 (m, 1H); 3,05 (m, 2H); 3,16 (m, 2H); 4,24 (m, 1H); 4,57 (m, 1H); 6,99 (s, 1H) .

Sloučenina 42

Cl

OCR,

ý.....O

NEt₃, ch₂ci₂

->~

O.

O'

OCHa

• · • · • · • ·

K roztoku sloučeniny 41 (0,067 g, 0,30 mmol) v bezvodém methylenchloridu (5 ml) se přidá při teplotě okolo 0 °C triethylamin (0,13 g, 1,28 mmol). Směs se míchá okolo 15 minut a po kapkách se přidá roztok methyloxalylchloridu (0,10 g,

0,84 mmol) v methylenchloridu (2 ml). Roztok se míchá okolo 1,5 hodiny při teplotě okolo 0 °C a potom se promyje vodou, suší se (MgSO₄) a po zahuštění se získá sloučenina 42 (0,115 g, 97% výtěžek) jako žlutý olej. ¹H NMR (CDC1₃; směs 4-cis-tran amidových rotamerů) δ 1,96 - 2,48 (překryté série širokých m, 8H); 3,62 - 4,00 (série překrytých širokých m, 4H); 3,67 3,72, 3,91 (2 překryté s, s, s, série překrytých s, 6H); 5,44, 5,71 (široký m, 2H); 6, 91, 6, 93, 6, 98, 7, 07 (s, s, s, s, 1H) .

Sloučenina 43

OCH₃

K roztoku sloučeniny 42 (0,115 g, 0,29 mmol) v bezvodém THF (5 ml) se při teplotě okolo -78 °C přidá dimethylpropylmagnesiumchlorid (1,0 M roztok v diethyletheru, 0,754 ml). Roztok se míchá okolo 3 hodin při teplotě okolo -78 °C a potom se vlije do nasyceného roztoku chloridu amonného (25 ml) a směs se extrahuje s ethylacetátem. Organické fáze se spojí, suší (MgSO₄) a zahustí. Surový zbytek se čistí sloupcovou chromatografii na silikagelu, eluováním 40% ethylacetátem v pentanu a získá se sloučenina 43 (0,075 g, 55% výtěžek) jako bílá pevná látka, t.t. 127 až 129 °C. ¹H NMR (CDC1₃; směs cistrans amidových rotamerů) δ 0,60 - 1,02 (série překrytých s a m, 10H), 1,12 - 1,21 (série překrytých s, 8H); 1,66 (m, 4H);

1,88 - 2,29 (překrytý široký m, 8H); 3,38 - 3,70 (široký m, 4H) 5, 15, 5, 29, 5, 37, 5, 42 (m, m, m, m, 2H); 6,81, 6,84, 6,91, 6,96 (s, s, s, s, 1H) . Anal. vypočteno pro C25H37N3O4S: C, 63,13; H, 7,84; N, 8,83. Nalezeno: C, 63,13; H, 7,84; N, 8,33. Nalezeno:

C, 62,94; H, 7,80; N, 8,67.

Sloučenina 44

44

Za použití metody F a sloučeniny 25 jako substrátu se získá sloučenina 44 (63% výtěžek) ve formě bezbarvé pevné látky, t.t. 102 až 105 °C (ether/pentan). CIMS 489 (MH⁺) . ¹H NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 5,98 (d, 2H), 3,46 - 3,17 (m, 4H) , 2,33 (d, 2H) , 1, 94 - 1,40 (m, 12H), 1,25 a 1,21 (každý s, každý 6H) , 0,87 (t, 6H) , IČ (KBr) cm^-1; 1702, 1639, 1578, 1550, 1441. Anal. Vypočteno pro C₂6H4oN₄0₅.0, 6 H₂O: C, 62, 53; H, 8,32; N, 11,22. Nalezeno: C, 62,52; H, 8,09; N, 11,14.

Sloučenina 45

Za použití postupu metody D a sloučeniny 29 jako substrátu se získá sloučenina 45 (68% výtěžek) jako viskózní olej; [a] = 87,4 ° (CHCls) . CIMS 477 (MH⁺) , 499 (M + Na⁺) . ^ΤΗ NMR (CDC13, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 7,35 - 7,19 (m, 10H), 5,20 - 5,0 (m, 6H) , 3, 80 - 3,40 (m, 4H) , 2,40 - 1,85 (m, 8H). IČ (KBr) cmm¹: 3584, 2956, 1705, 1584, 1498, 1446, 1410, 1355, Anal. Vypočteno pro C26H28N4O5.0,25 H2O: C, 64,92; H, 5,97; N, 11,65. Nalezeno: C, 64,92; H, 5,88; N, 11,81.

Sloučenina 46

Metoda G

Roztok sloučeniny 45 (3,06 g, 6,46 mmol) v methanolu (125 ml) se hydrogenuje nad katalyzátorem 10% Pd/C (580 mg) při tlaku vodíku okolo 0,1055 MPa po dobu okolo 4 hodin. Katalyzátor se odstraní filtrací přes polštářek křemeliny a filtráty se odpaří do sucha ve vakuu a získá se bezbarvý, velmi viskózní olej (1,28 g, 95% výtěžek). CIMS 209 (MH⁺) . ^ΧΗ NMR (CDCI3) δ 4,46 (q, 2H) , 3,17 - 3,01 (m, 4H) , 3,17 - 3,01 (m, 6H) , IČ (čistý) cm'¹: 3313, 2966, 2875, 1651, 1584, 1410, 1337, 1170, 1084.

Sloučenina 47 • ·

Ν

0' .Ο

Za použití postupu metody D s větším přebytkem pyridinu a thionylchloridu (22 a 11 ekvivalentů) a sloučeniny 27 jako substrátu se získá sloučenina 47 (80% výtěžek) jako bezbarvá pěna, [a] = -55, 12 ⁰ (c = 0, 254, CHC13) CIMS (585 (MH⁺) . ^XH NMR (CDC13, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 7,22 6,91 (m, 8H) , 6,15 - 6,10 (m, 2H) , 4,41 (m, 2H) , 3,45 - 3,20 (m, 4H), 1,81 - 1,69 (m, 4H), 1,25 a 1,22 (každý s, každý 6H), 0,90 (t, 6H) . IČ (KBr) cm^-1: 2969, 2928, 2879, 1702, 162, 1586, 1556, 1499, 1429, Anal. Vypočteno pro C34H42N4O5.0,5 C₅Hi₂: C, 70,76; H, 7,58; N, 8,92. Nalezeno: C, 70,93; H, 7,38; N, 8,92.

Sloučenina 48 Metoda H

K roztoku sloučeniny 46 (0,107 g, 0,514 mmol) v dichlormethanu (10 ml) se postupně přidá diizopropylethylamin (2,87 ml, 1,65 mmol), diizopropylkarbodiimid (0,323 ml), 1-hydroxy7-azabenzotriazol (0,280 g, 2,06 mmol) a thiofen-2-glyoxylová kyselina (0,320 g, 2,056 mmol) v dichlormethanu (5 ml). Směs se míchá pod argonem při teplotě místnosti okolo 20 hodin. Směs se odpaří do sucha ve vakuu, zbytek se přenese do * · · ·

dichlormethanu (20 ml) a potom se promyje postupně 5% vodnou kyselinou chlorovodíkovou, vodou a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se suší (Na₂SO₄) , filtruje a po odpaření do sucha se získá zbytek. Surový produkt se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu eluováním 1% methanolem v dichlormethanu a získá se sloučenina 48 (65% výtěžek) jako pevná pěna, t.t. 74 až 76 °C. CIMS 485 (MH⁺) 507 (M+Na⁺) . ¹H NMR (CDC1₃, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 8, 05 - 7,96 (m, 2H) , 7,81 - 7,74 (m, 2H) , 7,21

- 7,11 (m, 2H), 5,46 - 5,42 (m, 2H), 3,87 - 3,66 (m, 4H), 2,47

- 1,99 (m, 8H) . IČ (KBr) cm^-1: 3092, 2955, 2310, 1658, 1584, 1561, 1513, 1441, 1406, 1353, 1252, 1167. Vypočteno pro C₂₂H₂oN₄0₅S₂: C, 54,53; H, 4,16; N, 11,56. Nalezeno: C, 54,49; H, 4,08; N, 11,34.

Sloučenina 51

Metoda I

K ledem chlazenému míchanému roztoku sloučeniny 46 (0,431 g, 2,071 mmol) a triethylaminu (0,65 ml, 4,66 mmol) v dichlormethanu (20 ml) se přidá během 30 minut pod argonem methylchloroxoacetát (0,54 ml, 5,8 mmol) v dichlormethanu (9 ml). Směs se míchá při teplotě okolo 0 °C po dobu dalších 2 hodin a potom se promyje solankou (3x50 ml), organická vrstva se suší (Na₂SO₄) filtruje a po odpaření do sucha ve vakuu se získá sloučenina 51 jako pěna (0,815 g, 95% výtěžek). CIMS 381 (MH⁺) , 4 03 (M+Na⁺) .

Sloučenina 49 t *

100 • Φ ·· « ♦ · *

K roztoku sloučeniny 51 (0,375 g, 0,986 mmol) v tetrahydrofuranu (7 ml), míchanému a chlazenému pod argonem na teplotu okolo -78 °C se přidá po kapkách a během 15 minut etherový roztok cyklohexylmagnesiumbromidu (1 ml 2M, 2 mmol). Po dalším míchání při teplotě okolo -78 °C po dobu okolo 3 hodin se reakční směs dále zpracuje nalitím do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a extrakcí s ethylacetátem, sušením organické vrstvy (Na₂SO₄) , filtrací a odpařením do sucha ve vakuu. Získaný surový produkt se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu eluováním 0,75% methanolem v dichlormethanu a získá se sloučenina 49 (29 mg, 5,8% výtěžek), jako bezbarvá pevná látka, t.t. 132 až 133 °C. CIMS 485 (MH⁺) , 507 (M+Na⁺) . ¹H NMR (CDCI3, směs rotamerů) 5,33 5,27 (m, 2H) , 3, 88 - 3,59 (m, 4H) , 2,44 - 1, 69 (m, 20H) , 1,38 - 1,00 (m, 6H) , IČ (KBr) cm¹: 2880, 2927, 2852, 1706, 1641, 1582, 1560, 1445. Anal. Vypočteno pro C₂6H₃6N₄0₅.0, 35 H₂O: C, 63,61; H, 7,54; N, 11,41. Nalezeno: C, 63, 96; H, 7,59; N, 11,08

Sloučenina 50

4444

101

44

44444« 4· «4 444 4 « *

4««· 444 4 «

44 4444 444 • 444 44 44 44 44 4444

Za použití postupu metody A, ale s jedním ekvivalentem hydrazidu N-karbobenzyloxyprolinové kyseliny (CAS # 53137-6314) na místo hydrazinu se získá sloučenina 50 jako bezbarvá pevná látka (56% výtěžek), t.t. 145 až 146 °C. CIMS 443 (MH⁺ CO), 487 (MH⁺) , 485 (M-H) . [a] = -96,1 °C (c = 0, 254, CHC1₃) .

NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer): 9,05 (široký s, ÍH), 8,98 (široký s, ÍH), 7,36 (s, 5H), 5,23 - 5,11 (m, 2H) , 3,70 - 3,40 (m, 4H), 2,41 (široký s, 2H), 2,30 - 1,80 (m, 6H), 1,79 - 1,42 (m, 2H), 1,25 a 1,22 (každý s, každý H),

0,87 (t, 3H) . IČ (KBr) cm^-1: 3307, 3272, 2966, 2884, 1731,

1699, 1651, 1444. Anal. Vypočteno pro C25H₃₄N₄O₆: C, 61,71; H, 7,04; N, 11,51. Nalezeno: C, 62, 09; H, 7,20; N, 11,28.

Sloučenina 52

Za použití metody D se sloučeninou 28 jako substrátem se získá sloučenina 52 jako viskózní mazlavý materiál (75,8% výtěžek) . CIMS 433 (MH⁺) , 455 (M + Na⁺) . ^XH NMR (směs rotamerů, CDCI3) δ (pro hlavní, trans rotamer) 5, 86 - 5, 53 (d, 2H) , 4,48

- 4,35 (m, 2H) , 4,27 - 4,14 (m, 2H) , 2, 93 - 2,80 (m, 2H) , 2,73

- 2,50 (m, 2H) , 1, 84 - 1, 60 (m, 4H) , 1,21 (s, 12H) , 0,82 (t,

6H) . IČ (KBr) cm^-1: 2970, 2880, 1704, 1651, 1583, 1564, 1461,

1423, 1385.

Sloučenina 53 « · · · · ·

Za použití metody D se sloučeninou 50 jako substrátem se získá sloučenina 53 jako bezbarvý viskózní olej (89% výtěžek). CIMS 469 (MH⁺), 491 (M+Na⁺) , [a] = -92,7 ° (c = 0, 246, CHC13) . Z NMR (CDC13, směs rotamerů) δ (pro hlavní, trans rotamer) 7,36 7,20 (m, 5H) , 5, 20 - 5, 03 (m, 2H) , 3, 70 - 3, 50 (m, 2H) , 2,40 1,80 (m, 4H), 1, 80 - 1, 60 (m, 2H) . IČ (čistý) cm^-1: 2968, 2881, 1702, 1641, 1584, 1411, 1356. 7\nal. Vypočteno pro C25H₃₂N₄O₅: C, 64,09; H, 6,88; N, 11,96. Nalezeno: C, 64,20; H, 6,87; N, 11,83.

Sloučenina 54

Za použití postupu metody I, ale s a-toluensulfonylchloridem na místo chloroxoacetátu se získá sloučenina 54 (59% výtěžek) jako bezbarvá pevná látka, t.t. 144 až 145 °C. CIMS 517 (MH⁺) , 539 (M+Na⁺) . ¹H NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans izomer) 7,49 - 7, 46 (m, 4H) , 7, 40 - 7,37 (m,6H), 5,04 (q, 2H), 4,41 (q, 4H) , 3,39 - 3,31 (9 m, 2H) , 3,14 - 3,07 (m, 2H) , 2,33 - 2,12 (m, 4H) , 2,09 - 1,94 (m, 4H) . IČ (KBr)cm' ¹: 1574, 1554, 1495, 1455, 1410, 1332, 1140. Anal. Vypočteno pro C₂₄H₂₈N₄O₅S₂: C, 55, 80; H, 5,46; N, 10,84. Nalezeno: C, 55, 73; H, 5,42; N, 10,76.

• · · · • 9 9 9

99

9 9 9

9 9

999 9 99

103

9 99 9 9

Sloučenina 55

Η

Za použití postupu metody G se sloučeninou 53 jako substrátem se získá sloučenina 55 jako bezbarvý viskózní olej (90% výtěžek), [a] = -35,5 ⁰ (c = 0,414, CHC13) . CIMS 335 (MH⁺) , 357 (M+Na⁺) . ¹H NMR (CDC13, směs rotamerů) δ (pro hlavní rotamer) 5, 32 (dd, 2H) , 4,46 (m, 2H) , 3,61 (dt, 4H) , 3,36 3,03 (m, 4H), 2,40 - 1,60 (m, 6H), 1,24 a 1,21 (každý s, každý 3H) , 0,86 (t, 3H) . IČ (čistý) cm'¹: 3342, 2969, 2880, 1703,

1642, 1586, 1586, 1428. Anal. Vypočteno pro Ci7H₂6N₄O₃: C, 61,06; H, 7,84; N, 16,75. Nalezeno: C, 60, 75; H, 7,64; N, 16,68.

Sloučenina 56

. ₍ i-Pr₂NEt, HOAt ,O„ V j DIPCDI, CH₂CI₂

N-N

.....Q

Η₃ΟΟγ^Λ^ΟΗ

H&c/S ° ^H3^CCr T ^0CH3 H3CO' OCH₃ OCH₃

OCH₃

OCH₃

Za použití postupu metody H, ale s 3,4,5-trimethoxyfenylglyoxylovou kyselinou místo thiofen-2-glyoxylové kyseliny se získá sloučenina 56 ve formě bezbarvé pevné látky, t.t. 79 až 83 °C (56% výtěžek), [a] - -0?9 ⁰ (c - 0,260, CHC1₃) . CIMS 653 (MH⁺) , 675 (M+Na⁺) . ¹H NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer) 7,34 (s, 4H), 5,41 (d, d, 2H), 3,95 (s, 6H), • · • · ^1V~ ··«««· · * · · · • « · 9 9 9· 999

9999 99 99 99 ·· ····

3,93 (s, 12H), 3,68 (t, 4H), 3,48 - 2,20 (m, 8H). IČ (KBr) cm ^x: 2944, 2839, 1770, 1715, 1677, 1650, 1583, 1416, 1330, 1126. Anal. Vypočteno pro C32H36N4O11: C, 58,89; H, 5,56; N, 8,58. Nalezeno: 58, 64; H, 5,75; N, 8,35.

Sloučenina 57

O

NEt₃, CH₂CI₂ >-

Za použití postupu metody I, ale se sloučeninou 55 jako substrátem a s α-toluensulfonylchloridem místo methylchloroxoacetátu se získá sloučenina 57 jako viskózní olej (72% výtěžek), [a] = -28,6 (c = 0,49, CHC1₃) . CIMS 489 (MH⁺) , 511 (M+Na⁺) . ¹H NMR (CDC1₃, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer (7,49 - 7, 46 (m, 2H) , 7, 38 - 7,36 (m, 4H) , 5,39 - 5,32 (m, 1H) , 5,10 - 5,06 (m, 1H) , 4,39 (q, 2H) , 3,71 - 3,58 (m,

2H) , 3,40 -3,31 (m, 1H) , 3,11 - 3,00 (m, 1H) , 2,38 - 1,92 (m,

9H), 1,79 - 1,59 (m, 2H), 1,23 a 1,20 (každý s, každý 3H),

0,84 (t, 3H) . IČ (čistý) cm¹: 2971, 2881, 1703, 1644, 1584, 1562, 1427, 1342. Anal. Vypočteno pro C^NAS: C, 59, 00; H, 6,60; N, 11,47. Nalezeno: C, 59, 24; H, 6,58; N, 11,39.

Sloučenina 58

• ·

105

ΦΦ ·· • φ φ · • φφ φφφ * φ · φφφφ ·*

9 «

ΦΦΦ Φ Φ ·

9 9 4

Φ· *·

Za použití postupu metody F se sloučeninou 28 jako substrátem se získá sloučenina 58 (44% výtěžek) jako bezbarvý viskózní olej. [a] = -12 ⁰ (c = 0, 308, CHC13) CIMS 497 (MH⁺) , 519 (M+Na⁺) . ¹H NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer) 5, 90-5, 83 (m, 2H) , 4, 64 - 4, 48 (m, 4H) , 3,53 - 3,34 (m, 4H), 1,74 (m, 4H), 1,26 a 1,23 (každý s, každý 6H), 0,88 (t, 6H); IČ cm^-1 2966, 1798, 1651. Tínal. Vypočteno pro C22H32N₄OsS2: C, 53,20; H, 6,49; N, 11,28. Nalezeno: C, 53, 36; H, 6, 58; N, 10, 64 .

Sloučenina 59

Et₃N

Za použití postupu metody C, ale s (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3dimethylpentyl)-2-pyrrolidinkarboxylovou kyselinou (připravena jak je popsáno ve WO 96/40633) místo (4R)-3-(1,2-dioxo-3,3dimethylpentyl)-4-thiazolidinkarboxylové kyseliny a nikotinového hydrazidu na místo hydrazinu se získá sloučenina 59 jako bezbarvá pevná látka, t.t. 161 až 163 °C (42% výtěžek). CIMS 361 (MH⁺) , 383 (M+Na⁺) . ^ΧΗ NMR (CDC1₃) δ 9,06 (d, 1H) , 8,74 (m, ÍH) , 8,14 (d, ÍH), 7,37 (m, ÍH), 4,68 (m, 1Ή), 3,52 (t,

2H) , 2,39 (m, ÍH) , 2,14 (m, 2H) , 2,00 (m, ÍH) , 1,81 - 1,61 (m, 4H) . IČ (KBr) cm¹: 3296, 2965, 2883, 1702, 1664, 1640, 1590, 1518. Anal. Vypočteno pro CigH₂₄N₄O₄: C, 59, 99; H, 6,71; N, 15,55 Nalezeno: C, 59, 88; H, 6,63; N, 15,38.

·»·· » ·· • · ·

106

Sloučenina 60

Burgessovo činidlo/THF

Za použití postupu metody F se sloučeninou 59 jako substrátem se získá sloučenina 60 jako bezbarvá pevná látka (79% výtěžek), t.t. 96 až 97 °C. CIMS 343 (MH⁺) , 365 (M+Na⁺) . 0

NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer) 9,25 (d, 1H), 8,78 (m, 1H), 8,34 (dd, 1H), 7,47 (m, 1H), 5,43 (d, d, 1H) , 3,67 (t, 2H) , 2, 47 - 2,08 (m, 2H), 1,26 a 1,23 (každý s, každý 3H) , 0,87 (t, 3H) . IČ (KBr) cm'¹: 2969, 2883, 1701, 1638, 1431. Anal. Vypočteno pro C18H22N4O3: C, 63,14; H, 6,48; N, 16,36. Nalezeno: C, 62,91; H, 6,37; N, 16,27.

Sloučenina 61

1. CICO₂í-Bu, Et₃N,THF

2. NH₂-NH₂

°<°

Za použití postupu metody A, s (2S)-1-(1,2-dioxo-3, 3dimethylbutyl)-2-pyrrolidinkarboxylovou kyselinou (připravena jak je popsáno pro (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-2pyrrolidinkarboxylovou kyselinu ve WO 96/40633) jako substrátem se získá sloučenina 61 jako bezbarvá pevná látka (28% výtěžek), t.t. 108 až 110 °C. CIMS 451 (MH⁺) , 473 (M+Na⁺) ,

4· ··

Φ · • ··

107

449 (Μ-Η) . [α] = 116,1 ° (c = 0,274, CHC1₃) . ^ΧΗ NMR (CDC13, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer) 9,11 (s, 2H), 4,62 (m, 2H) , 3,47 (t, 4H) , 2,50 - 2, 37 (m, 2H) , 2,15 - 1,85 (m, 4H) , 1,29 (s, 18H) . IČ (KBr) cm¹: 3279, 2976, 2879, 1707, 1639, 1446. Anal. Vypočteno pro C22H34N4O6.0,35 H2O: C, 57, 84; H, 7,66; N, 12,26. nalezeno: C, 58,10; H, 7,75; N, 11,98.

Sloučenina 61

Za použití postupu metody B, s (2S)-1-(1,2-dioxo-3, 3dimethylbutyl)-2-pyrrolidinkarboxylovou kyselinou (připravena jak je popsáno pro (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-2pyrrolidinkarboxylovou kyselinu ve WO 96/40633) jako substrátem a použitím N-methylmorfolinu (NMM) jako bází místo triethylaminu, „EtsN se získá sloučenina 61 (73% výtěžek), která je identická ve všech ohledech se sloučeninou získanou způsobem A.

Sloučenina 62

Za použití postupu metody D se sloučeninou 61 jako substrátem se získá sloučenina 62 (42,5% výtěžek), t.t. 138 až . ^XH NMR (CDC1₃, směs 5, 34 - 5, 29 (m, 2H),

108

141 °C [α] = -82,5 °C (c = 0, 282, CHC1₃) rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer)

3, 63 - 3, 55 (m, 4H) , 2, 40 - 2,00 (m, 8H) , 1,27 (s, 18H) . IČ (KBr) cm^-1: 2958, 1705, 1636, 1582, 1560, 1438. Analýza vypočteno pro C22H₃₂N₄O₅: C, 61,09; H, 7,46; N, 12,95. Nalezeno: C, 61,05; H, 7,44; N, 12,88.

Sloučenina 62

i-Pr₂NEt. HOAt DIPCDI, CH₂CI₂

---►

O

Za použití postupu metody H, ale s dimethylpyrohroznovou kyselinou místo thiofen-2-glyoxylové kyseliny se získá sloučenina 62 (0,030 g, 13,5% výtěžek), která je identická v každém ohledu se sloučeninou získanou v metodě D.

Sloučenina 63

Za použití postupu metody A, ale s (2R)-1-(1,2-dioxo-3,3dimethylpentyl)-2-piperidinkarboxylové kyseliny jako substrátem (připravena jak je popsáno pro (2S)-1-(1,2-dioxo3,3-dimethylpentyl)-2-pyrrolidinkarboxylovou kyselinu ve WO 96/40633) místo (2S)-1-(1,2-dioxo-3,3-dimethylpentyl)-2pyrrolidinkarboxylové kyseliny a izobutylchlorformiátu místo • · · ·

109 ethylchlorformiátu se získá sloučenina 63 jako bezbarvá pěnovitá pevná látka (37% výtěžek), t.t. 179 až 180. [α] = +101 ⁰ (c = 0,474, CHC1₃) . CIMS 479 (MH⁺) , 501 (M+Na⁺) .· Y NMR (CDCI3, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer) 9,13 (široký s, 2H) , 4,61 (dd, 2H) , 3,49 (m, 4H) , 2, 39 - 2,34 (m, 2H), 2,16 - 1,86 (m, 6H) , 1,84 - 1,61 (m, 4H) , 1,25 a 1,21 (každý s, každý 6H) , 0,87 (t, 6H) . IČ (KBr) cm^-1: 3263, 2970, 2880, 1705, 1684, 1636, 1614, 1567, 1444. Anal. Vypočteno pro C24H36N4O5: C, 60,23; H, 8,00; N, 11,71. Nalezeno: C, 59, 96; H,

7, 92; N, 11,55.

Sloučenina 64

Za použití postupu metody D se sloučeninou 63 jako substrátem se získá sloučenina 64 jako pevná látka barvy slonoviny (85% výtěžek), t.t. 123 až 124 °C. [ot] = +72,2 ⁰ (c = 0,248, CHCI3) . CIMS 461 (MH⁺) , 483 (M+Na⁺) . ¹H NMR (CDC13, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer) 5,32 (dd, 2H), 3,68 3,53 (m, 4H) , 2,41 - 2,02 (m, 8H) , 1, 63 - 1,58 (m, 4H) , 1,23 a 1,20 (každý s, každý 3H) , 0,86 (t, 6H) . IČ (KBr) cm'¹: 2973, 1705, 1639, 1554, 1463, 1432, 1383, 1096. Anal. Vypočteno pro C24H36N₄O₅: C, 62, 59; H, 7,88; N, 12,16. Nalezeno: C, 62, 74; H,

7,81; N, 12, 10.

Sloučenina 65

Za použití postupu metody B, ale s pikolylhydrazidem místo hydrazinu se získá sloučenina 65 jako pevná látka slonové barvy (71% výtěžek), t.t. 182 až 185 °C. [a] = -67,0 ° (c =

0,26, CHC1₃) . CIMS 361 (MH⁺) , 383 (M+Na⁺) . ^XH NMR (CDC1₃, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer) 10,00 (široký s, 1H),

9, 39	(široký s,	ÍH) ,	8,57	(d, ÍH), 8,15 (d, ÍH) , 7,86 (dt,
ÍH) ,	7,48 - 7,44	(m,	ÍH) ,	4,75 - 4,71 (m, ÍH) , 3,53 - 3, 47 (m,
2H) ,	2,52 - 2,39	(m,	ÍH) ,	2,34 - 1, 88 (m, 4H) , 1, 85 - 1, 67 (m,
4H) ,	1,28 a 1,24	(každý s,	každý 3H), 0,89 (t, 3H). IČ (KBr)

cm^-1: 3270, 2972, 2880, 1703, 1640. Anal. Vypočteno pro Ci₈H₂4N₄O4.0,5 H₂O: C, 58,52; H, 6,82; N, 15,17. Nalezeno: C, 58,53; H, 6,44; N, 14,90.

Sloučenina 66

Burgessovo činidlo/THF

Za použití postupu metody F se sloučeninou 65 jako substrátem se získá sloučenina 66 jako bezbarvá krystalická pevná látka (75% výtěžek), t.t. 70 až 72 °C. CIMS 343 (MH⁺) ,

365 (M+Na⁺) . [a] = 36,8 ° (c = 0, 280, CHC1₃) . / NMR (CDC1₃, směs rotamerů) δ (pro hlavní trans rotamer) 8,77 (d, ÍH) , 8,23 (d,

ÍH), 7,89 (d, t ÍH), 5,45 (dd, ÍH), 3,76 - 3,62 (m, 2H), 2,44 • · « · • · <

• ·♦ ·· • · · ·

111

- 2,05 (m, 4H), 1,86 - 1,63 (m, 2H), 1,27 a 1,23 (každý s, každý 3H) , 0,87 (t, 3H). IČ (KBr) cm'¹: 2973, 1701, 1636, 1588, 1562, 1552, 1463, 1441. Anal. Vypočteno pro C18H22N4O3.0,25 H₂0: C, 62,32; H, 6,54; N, 16,15. Nalezeno: C, 62,24; H, 6,38; N,

16, 36.

IV. Biologické zkoušky a aktivita

Výsledky in vitro aktivity příkladů 1 a 4 jsou uvedeny v tabulce 2. Příklady 2 a 3 podrobně uvádějí způsoby použité pro přípravu buněčných kultur použitých v příkladu 4. Výsledky in vitro aktivity příkladu 5 jsou uvedeny v tabulce 3.

Výsledky in vivo aktivity příkladu 6 jsou uvedeny na obrázku 1.

A. In vitro biologická aktivita

Příklad 1

Kultura dorsálního kořenového ganglionu (kultura DRG)

DRG z novorozených 1 den starých krys se rozřežou a umístí se do PBS v ledu. Po opláchnutí sterilním plátovým mediem se DRG přenesou do prázdných jamek 6-jamkové plotny povlečené směsí polyornithinu a lamininu (Becton Dickinson Labware) za použití zakřivených lékařských kleští. Potom se do každé jamky opatrně přidají 3 ml plátového média, aby nedošlo k poškození DRG. Plátové medium tvoří Leibovitzovo medium L-15 (Gibco) plus 0,6 % glukózy, 33 mM KC1, 10 % FCS, 10 mM Hepes a směs penicilin/streptomycin/glutamin. Po inkubaci přes noc při teplotě okolo 37 °C v 5% CO₂ se toto medium nahradí 3 ml na každou jamku zkušebního media [Leibovitzovo medium L-15 plus 0,6 % glukózy, 1 % FCS, 1 % doplňkového N-2, 10 μΜ ara-C, 10 mM Hepes a směs penicilin/streptpmycin/glutamin] obsahující buď « ·

112 vehikulum (DMSO, 1/200 000), pozitivní kontrolu (2-4 ng/ml NGF) nebo testovanou sloučeninu (50 až 250 nM). Všechna media se připravují denně čerstvá. DRG se mikroskopicky zkoumají na neuritový růst 1 až 5 den. Při optimálních podmínkách léčba vehikulem neindukuje neuritový výrůstek z DRG. Pokus se pokládá za pozitivní (+) jestliže sloučenina podle vynálezu indukuje neurity > 1 průměru DRG

B. Zkouška buněčných kultur

Příklad 2

Primární buňky krysího hypocampu

Buňky Z mozku 18 denních krysích embryí se rozřežou a oddělí se trypsinem (1 mg/ml) a triturují se. Buňky se očkují 30 000 buňkami/jamku v 96 jamkových plotnách vyplněných 100 μΐ MEM a 10 % FBS. 7. den v kultuře se buňky fixují 4% paraformaldehydem a provede se imunofluorescence.

Příklad 3

Buňky lidského neuroblastomu M17

Buňky lidského neuroblastomu M17 jsou kultivovány v EMEM a Ham F12 v poměru 1:1 s lxNEAA a 10 % FBS. Kulturní prostředí obsahuje lx antibiotikum PSN, které se mění každý druhý den a buňky jsou převáděny do fáze log blízko konfluence.

I ·· · *· ·« · · · ·

113

Tabulka 2

In vitro neurotrof/i aktivita

Cmpd	DRG	Odezva v buňkách tkáňové kultury u krys	Odezva v buňkách M17
1	-	NA	103
3	-	NA	NA
4	+	111,123	134,111
8	NT	NA	NA
9	NT	NA	NA
10	NT	NA	NA
11	+	NA	NA
13	-	NA	102
14	NT	116	112,108
15	NT	NA	NA
19	NT	109	110
24	+,+,+,+,-	119,104,108	123
25	NT	108	111
26	NT	133	NA
27	NT	NA	, NA
28	NT	NA	NT
29	NT	NA	NA
30	+.+,+,+,+	161,118,130	112,103
31	+.+,+,+.+,+.-	124	111
32	NT	NA	103
33	NT	112	104
34	NT	113	106
35	NT	126	106
36	NT	NA	110
37	NT	130	111
38	NT ·	129	105
39	NT	NA	112
43	NT	120	108

v • ·

44	NT	NA	118
45	NT	NA	. NA
46	NT	NA	NA
47	NT	NA	NT
48	NT	113	NT
49	NT	NA	NT
50	NT	110	NT
51	NT	107	NT
52	NT	110	NT
53	NT	NA	NT
54	NT	113	NT
55.	NT	116	NT
56	NT	118,116	NT
57	NT	NA	NT
58	NT	142.	NT
59	NT	116	NT
60	NT	114	• NT
62	NT	120	NT
63	NT	110	.. NT
64	NT	122	NT

+ = Pozitivní výsledky pro každý pokus - = negativní výsledky pro každý pokus NA = neaktivní

NT = netestováno ·· ·· • · · <

115 ···· ··

Příklad 4

Zkouška růst neuritů

Kultury se inkubují v normálním koňském seru (1:50; Vector Labs) po dobu 20 minut, opláchnou se a potom se inkubují s primární protilátkou (microtupule associated-protein 2, anti-myší ΜΆΡ-2; 1:1000; Chemicon) po dobu okolo 2 hodin při teplotě místnosti. Po primární protilátce se kultury opláchnou a inkubují se s fluoresceinovým anti-myším IgG (absorbován krysou; 1:50; Vector Labs) po dobu okolo 1 hodiny. Po fluorescenční inkubaci se kultury opláchnou a odečítají se v PBS na fluorescenčním plotnovém čtecím zařízení (excitace: 485 nm; emise: 530 nm). Sloučenina se pokládá za aktivní, jestliže odezva na neuritový růst je větší než střední odezva na kontrolu ošetřenou DMSO ve stejné plotně. Odezva na testovanou sloučeninu se uvádí jako procento kontroly ošetřené DMSO. Poměr signálu k šumu je konzistentní: fluorescence u kontrolních jamek s DMSO je alespoň dvakrát větší než u slepých jamek.

Příklad 5

Vazebná zkouška na nikotinový acetylcholinový receptor

Vazba ³H-cytisinu na neuronální nikotinové acetylchinolinové receptory se provede za použití surových synaptických membránových preparátů z kůry mozečku u krys, striáta a hippocampu. Čerstvé nebo zmražené membrány se homogenizují v 50 objemech 10 mM HEPES (N-2hydroxyethylpíperazin-N'-2-ethansulfonová kyselina, pH 7,4) a odstředí se při 42 000 g. Frakce P₂ se resuspendují v 25 objemech (například 1 g tkáně v 25 ml) media obsahujícího pufr » · • · • · * ·

Na⁺-HEPES (10 mM, pH 7,4), 5 mM MgClžz 0,01 práškového hovězího sérum albuminu (BSA) a 100 mM NaCl. K vyvolání vazebné^reakce se sloučenina podle vynálezu (100 μΐ) , pufrové inkubační medium Na-HEPES (400 μΐ), ³H-cytisin (250 μΐ) a suspenze biologických membrán (250 μΐ) pipetují do testovací zkumavky, obsah se smíchá a inkubuje se při teplotě okolo 23 °C po dobu okolo 40 minut. Vazebná reakce se zakončí filtrací za použití Brandel Cell Harvester; množství vázaného ³H-cytisinu pro každý vzorek se kvantifikuje za použití kapalného scintilačního čítače Wallac LKB 1205 Betaplate. Všechny sloučeniny se sledují při 10 μΜ ve čtyřech exemplářích. Nespecifická vazba se stanoví za použití 10 μΜ (+)-epibatidinu k blokování všech vazeb ³Hcytisinu k α-4,β-2 nikotinovému acetylcholinovému receptorů (oc4P2nAChR) . Aktivita každé testované sloučeniny se vypočte následovně: po korekci na nespecifickou vazbu se vypočte procento inhibice specifické vazby (celková vazba minus nespecifická vazba). Každá aktivní sloučenina se dále testuje při pěti koncentracích ke generování křivky inhibicekoncentrace. Hodnoty IC50 se vypočítají provedením nelineární regresní analýzy dat za použití standardního regresního programu.

Tabulka 3

Afinita vazby (IC50 nM) testovaných sloučenin k nikotinovému acetylcholinovému receptorů.

Slouč. IC50 (nm)

801

63,8

Předkládaný vynález poskytuje způsoby použití sloučenin 6 a 17 a farmaceutických prostředků které je obsahují, k léčení

117

Parkinsonovy choroby a Alzheimerovy choroby, úzkosti, chorob v deficitu hyperaktivity soustředění, „ADHD, Turrentova syndromu, závislosti na kouření a bolesti.

C. In vivo biologická aktivita

Příklad 6

Model komprese obličejového nervu u krysy

Krysy Long-Evans se anestetizují směsí ketamin (60 mg/kg)/xylazin (6 mg/kg). Faciální nerv se obnaží a mechanicky se stlačí lékařskými kleštěmi v blízkosti spánkové kosti, zatímco protilehlá neobnažená strana slouží jako kontrola.

V tomto modelu způsobí komprese faciálního nervu paralýzu svalu v oblasti vousového svalu, což snižuje pohyblivost vousů na poškozené straně, která se projevuje ihned po odeznění anastezie. Krysy dostávaly testovanou sloučeninu v množství 20 mg/kg dvakrát denně po dobu 15 dnů po chirurgickém zákroku. Kontrolní krysy dostávaly pouze vehikulum. V každé zkoušce se testovalo 3 až 8 krys. Obnova pohybu vousů po podání sloučenin podle vynálezu se zaznamenávala denně v různém časovém bodě, do dvou týdnů, jak je ukázáno na obrázku 1.

Claims (27)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sloučenina obecného vzorce

   A

   R nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, kde (a) R¹ se zvolí ze skupiny, kterou tvoří H, COCOR², COOR³ a

   SO₂R³' (i) R² se zvolí ze skupiny, kterou tvoří O-Ci-_S alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci_₆ alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci-6 alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, C₅-₇ cykloalkyl,
2. 2-thienyl,
3. 3-thienyl nebo fenyl, kde fenyl má jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou tvoří H, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen a (ii) R³ je fenylakyl, kde fenyl obsahuje jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou tvoří H, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen;

   (b) ^N je čtyř až šesti-členný heterocyklický kruh, kde není více než jeden atomu v kruhu kyslík nebo síra;

   je pětičlenný heterocyklický kruh obsahující dva až tři heteroatomy vybrané z N, 0 a S, přičemž alespoň jeden heteroatom je N; a φφ ·Φ

   I Φ ·
4. 4

   119

   Φ Φ ΦΦΦΦ (d) A se zvolí ze skupiny, kterou tvoří COO(CH₂)mAr, (přičemž R¹ jsou stejné nebo různé než R¹ popsané v části (a)), CONR⁴ (CH₂) mAr, (CH₂) _m0 (CH₂) _nAr a (CH₂)_nAr, (i) R⁴ je H nebo C1-4 alkyl, (ii) Ar se zvolí ze skupiny, kterou tvoří 2-pyridyl, 3-pyridyl, 4-pyridyl a fenyl, přičemž fenyl má jeden až tři substituenty nezávisle vybraně ze skupiny, kterou vodík, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen;

   (iii) m je 1 až 4; a (iv) n je 0 až 4.

   Sloučenina podle nároku 1,'mající strukturu

   Sloučenina podle nároku 1, mající strukturu

   Sloučenina podle nároku 1, mající strukturu

   99 99

   9 9 9 · · *

   120

   9 9 99

   99 ·9

   9 9 9 9

   9 9 ·

   9 · ·

   9 9 9

   99 9999
5. 5. Sloučenina podle nároku 1, mající strukturu
6. 6. Sloučenina podle nároku 1, mající strukturu
7. 7. Sloučenina podle nároku 1, mající strukturu

   Sloučenina podle nároku 1, mající strukturu
8. 9. Sloučenina podle nároku 1, mající strukturu

   X

   121 • · < ·η· ·· ·♦ ♦· kde R¹ jsou stejné nebo navzájem různé.
9. 11. Sloučenina podle nároku 9, mající strukturu
10. 12. Sloučenina podle nároku 9, mající strukturu
11. 13. Sloučenina podle nároku 9, mající strukturu

    .....G “ 1 í
12. 14. Sloučenina podle nároku 9, mající strukturu

    0 0 0 0 • · · «00« ·0 ·« 0000
13. 15. Sloučenina podle nároku 9, mající strukturu

    QxvQ
14. 16. Sloučenina podle nároku 9, mající strukturu
15. 17. Sloučenina podle nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, kde R'' je (C1-C4) alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem.
16. 18. Sloučenina mající strukturu

    HN-NH >=⁰ fc · 9 • »·

    123 fcfc·· ·· ·· ·· • fcfc · fc · · · · · fcfc · · · ♦ · fc · · · · · · «· ·· ·· fc··· fc· ···· nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, kde (a) R¹ se zvolí ze skupiny, kterou tvoří H, COCOR², COOR³ a

    SO₂R³' (i) R² se zvolí ze skupiny, kterou tvoří O-Ci_₆ alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci_₆ alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, Ci_₆ alkenyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem, C5-7 cykloalkyl, 2-thienyl, 3-thienyl nebo fenyl, kde fenyl má jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou tvoří H, nižší alkyl,, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen a (ii) R³ je fenylakyl, kde fenyl obsahuje jeden až tři substituenty nezávisle vybrané ze skupiny, kterou tvoří H, nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxyl a halogen;

    (b)

    Ic) ^N je čtyř až šesti-členný heterocyklický kruh, kde není více než jeden atomu v kruhu kyslík nebo síra;

    je pětičlenný heterocyklický kruh obsahující dva až tři heteroatomy vybrané z N, O a S, přičemž alespoň jeden heteroatom je N; a (d) B je (CH₂)_nAr nebo n _t kde n je 0-4.

    R¹
17. 19. Sloučenina podle nároku 18 mající strukturu

    O.P ^HN’^NH

    I UN-NU N

    0P0 • ·

    99 ···9

    124 .· :

    ···· ·
18. 20. Sloučenina podle nároku 18 mající strukturu

    99 99

    9 9 · 9

    9 9 9

    9 9 9 9

    9 9 9

    99 9999
19. 21. Sloučenina podle nároku 18 mající strukturu
20. 22. Sloučenina podle nároku 18 mající strukturu
21. 23. Způsob stimulace neuronálního růstu, vyznačuj ící se t i m, že se uvedou v kontakt neurony s účinným množstvím sloučeniny podle nároku 1, 17 nebo 18.
22. 24. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1, 17 nebo 18 a farmaceuticky přijatelný nosič.
23. 25. Způsob léčení subjektu, který trpí chorobou charakterizovanou neuronálním poškozením, způsobeným nemocí nebo poraněním, vyznačující se tím, že se

    0000 00 podá subjektu terapeuticky účinného množství prostředku podle vynálezu podle nároku 24.

    00 0000

    125

    00 ' 0*

    0 0· *

    0 0 · • 0 ·

    0 0 0

    00 0000
24. 26. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že choroba je způsobena nemocí a je vybrána ze souboru, který zahrnuje Parkinsonovu chorobu, Alzheimerovu chorobu, mrtvici, násobnou sklerózu, amyotrofní laterální sklerózu, diabetickou neuropatii a Bellovu parézu.
25. 27. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tím, že choroba je způsobena poraněním mozku, míchy nebo periferních nervů.
26. 28. Způsob inhibice napadení subjektu chorobou charakterizovanou neuronálním poškozením, způsobeným nemocí, vyznačující se tím, že se podá subjektu profylakticky účinné množství farmaceutického prostředku podle nároku 24.
27. 29. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že choroba je vybrána ze souboru, který zahrnuje Parkinsonovu chorobu, Alzheimerovu chorobu, mrtvici, násobnou sklerózu, amyotrofní laterální sklerózu, diabetickou neuropatii a Bellovu parézu.