CZ20021610A3

CZ20021610A3 - Substituované pyrroly jako antiproliferativní činidla pro léčbu zhoubných nádorů

Info

Publication number: CZ20021610A3
Application number: CZ20021610A
Authority: CZ
Inventors: Nader Fotouhi; Norman Kong; Emily Aijun Liu; Allen John Lovey; John Guilfoyle Mullin Jr.
Original assignee: F. Hoffmann-La Roche Ag
Priority date: 1999-10-12
Filing date: 2000-10-02
Publication date: 2002-10-16
Also published as: CN1155595C; KR20020038817A; MXPA02003667A; EP1224181B1; HRP20020262B1; PT1224181E; TWI230708B; ZA200202231B; MA26830A1; AU7911600A; BR0014680A; CN1378545A; HUP0203558A2; YU25202A; AU781732B2; EP1224181A1; CA2385071A1; ES2210005T3; WO2001027106A1; PL357441A1

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká některých substituovaných pyrrolů, které jsou antiproliferativními činidly. Tyto sloučeniny a jejich farmaceuticky přijatelné soli jsou použitelné při léčbě nebo kontrole buněčných proliferativních onemocnění, zejména zhoubných nádorů.

Vynález se také týká farmaceutických prostředků obsahujících takové sloučeniny a jejich použití pro léčbu a/nebo prevenci zhoubných nádorů, zejména léčbu nebo kontrolu solidních nádorů.

Dosavadní stav techniky

Nekontrolovaná buněčná proliferace je znakem zhoubných nádorů. Buňky zhoubných nádorů mají obvykle nějakou formu poškození genů, které přímo nebo nepřímo řídí buněčný cyklus. Antiproliferativních činidel se týká rozsáhlý výzkum. Ačkoliv byla identifikována mnohá činidla mající antiproliferativní aktivity, mají tato činidla různé nedostatky, včetně špatné rozpustnosti, molekulární komplexity atd., která je činí nevhodnými nebo nevýhodnými pro terapeutické použití u lidských pacientů. Trvá potřeba sloučenin s malou molekulou, která by mohly být snadno syntetizovány a které by byly účinné jako terapeutická činidla pro léčbu zhoubných nádorů a které by byly vhodné pro kontinuální infusi pacientům. Proto je předmětem předkládaného vynálezu poskytnutí takových sloučenin, stejně jako farmaceutických prostředků obsahujících takové sloučeniny.

Definice

Jak jsou zde použity, máji následující termíny uvedené významy.

Alkyl označuje nasycený alifatický uhlovodík s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 až 15, výhodně 1 až 10, atomů uhlíku. Alkylová skupina může být substituovaná, jak je konkrétně uvedeno dále. Dále může alkylový řetězec obsahovat

A kromě atomů uhlíku jeden nebo více heteroatomů. Výhodné jsou nižší alkylové skupiny obsahující od 1 do 6, výhodně 1 až 4 atomy uhlíku. Mezi typické nižší alkylové skupiny patří methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, terc.butyl, 2-butyl, pentyl, hexyl a podobně.

Alkenyl označuje nenasycený alifatický uhlovodík s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 až 15, výhodně 1 až 10, nejlépe 1 až 6 atomů uhlíku.

Alkoxy označuje alkylovou skupinu, která je navázána na zbytek molekuly prostřednictvím kyslíku (například RO-, jako je methoxy, ethoxy, atd.).

Aryl označuje aromatický kruh obsahující 5 až 10 atomů a skládající se z 1 nebo 2 kruhů, který může volitelně obsahovat * jeden nebo více heteroatomů, které jsou stejné nebo různé. Pro účely této definice zahrnuje termín aryl také heteroaryl. Mezi * Výhodné heteroatomy patří dusík, síra nebo kyslík, samostatně nebo v jakékoliv kombinaci, místo jednoho nebo více atomů uhlíku. Příklady arylových skupin podle této definice jsou fenyl, pyridin, imidazol, pyrrol, triazol, furan, pyrimidin.

Cykloalkyl označuje nearomatickou, částečně nebo zcela

0 0 0 00·· ·· ·· • 0 00 · · 0 0 ·

0000* 0 0 « ····· ·· ·· · ·

0 0 0 0 0 0

000 ·· 0000 nasycenou cyklickou alifatickou uhlovodíkovou skupinu obsahující 3 až 8 atomů. Příklady cykloalkylových skupin jsou cyklopropyl, cyklopentyl a cyklohexyl.

Účinné množství označuje množství alespoň jedné sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli, které signifikantně inhibuje proliferaci a/nebo brání diferenciaci lidských nádorových buněk, včetně lidských nádorových buněčných linií.

Heteroatom označuje atom vybraný ze skupiny zahrnující dusík, síru a kyslík. Heteroatomy jsou nezávisle vybrané a mohou nahrazovat jeden nebo více atomů uhlíku.

Heterocyklus označuje 3- až 10-členný nearomatickou, částečně nebo zcela nasycenou uhlovodíkovou skupinu, která obsahuje alespoň jeden heteroatom. Mezi takové kruhové systémy patří morfolin, pyrrolidin, piperidin, piperazin.

IC50 označuje koncentraci konkrétní sloučeniny podle předkládaného vynálezu, která inhibuje 50% spécifické měřené aktivity. IC50 může být měřena, mimo jiné, způsobem podle příkladu 26, níže.

Farmaceuticky přijatelná sůl je běžná adiční sůl s kyselinou nebo baží, která si zachovává biologické účinky sloučenin vzorce I a která se tvoří s vhodné netoxické organické nebo anorganické kyseliny nebo organické nebo anorganické baze. Příkladem adičních solí s kyselinami jsou soli odvozené od anorganických kyselin, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina jodovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná a dusičná, a soli odvozené od organických kyselin, jako je kyselina octová, kyselina vinná, kyselina salicylová, kyselina * ·· 4444·· ·· ·· ···· «4 * 444*

44444 44 44 4 4

4444 444 ··· ·· ·· · ·· ···· methanesulfonová, kyselina jantarová, kyselina citrónová, kyselina jablečná, kyselina mléčná, kyselina fumarová a podobně. Příkladem adičních solí s bázemi jsou soli odvozené od amonných, draselných, sodných a kvarterních amonných hydroxidů, jako je například, hydroxid tetramethylamonný.

Farmaceuticky přijatelný, jak je uvedeno například pro farmaceuticky přijatelný nosič, přísadu, atd., označuje farmakologicky přijatelný a v podstatě netoxický pro jedince, kterému je konkrétní sloučenina podána.

Farmaceuticky aktivní metabolit označuje metabolický produkt sloučeniny vzorce I, který je farmaceuticky přijatelný a účinný.

Termín plasmatická konverze znamená, pro sloučeniny vzorce I, degradaci (enzymatickou a/nebo non-enzymatickou) takové sloučeniny v plasmě člověka nebo hlodavce při 37°C během 30 minut až 6 hodin, za zisku 3-(l-methyl-3-indolyl)-4-(1-methyl6-nitro-3-indolyl)-lH-pyrrol-2,5-dionu, farmaceuticky aktivního metabolitu sloučeniny vzorce I, stejně jako jeho farmaceuticky aktivních metabolitů. Tato konverze je obvykle uvedena jako procentuální degradace během specifického časového období.

Polyethylenglykol nebo PEG skupiny jsou sloučeniny obecného vzorce HO (CH2CH2O) _nR , kde n je průměr mezi 2 a 1500, výhodně 15 až 150, s průměrnou molekulovou hmotností 500 až o

5000 Daltonů, a kde R je karboxy nebo nižší alkyl, výhodně methyl nebo ethyl. PEG skupiny mohou reagovat se sloučeninami podle předkládaného vynálezu za zisku pegylovaných sloučenin, které také spadají do rozsahu předkládaného vynálezu.

Proléčivo je sloučenina, která může být přeměněna za fyziologických podmínek nebo solvolýzou na farmaceuticky aktivní sloučeninu. Proléčivo může být inaktivní, když je podáno jedinci, ale po podání je přeměněno na aktivní sloučeninu.

Stabilita je celková schopnost sloučeniny vzorce I odolávat degradaci v typickém roztoku používaném pro intravenosní aplikaci léčiv. Konkrétně označuje schopnost jakékoliv dané sloučenina vzorce I uvolňovat 3-(l-methyl-3indolyl)-4-(l-methyl-6-nitro-3-indolyl)-lH-pyrrol-2,5-dion během 72 hodinové periody ve směsi acetonitrilu a salinického roztoku nebo dextrosové vody. Stabilita sloučeniny vzorce I je velmi dobrá, když je detekováno méně než 1% 3-(l-methyl3-indolyl)-4-(l-methyl-6-nitro-3-indolyl)-lH-pyrrol-2,5-dionu, dobrá, když je detekováno méně než 2,5% 3-(l-methyl-3indolyl)-4-(l-methyl-6-nitro-3-indolyl)-lH-pyrrol-2,5-dionu, a uspokojivá, když je detekováno méně než 5% 3-(l-methyl-3indolyl)-4-(l-methyl-6-nitro-3-indolyl)-lH-pyrrol-2,5-dionu po 72 hodinách inkubace při teplotě místnosti.

Substituovaný, jako například v termínu substituovaný alkyl, označuje, že na jedné nebo více pozicích může být provedena substituce, a že substituenty v každém místě substituce jsou nezávisle vybrány z uvedených možností.

Substituovaný amin označuje amino skupinu, která je mononebo disubstituovaná jinou skupinou, výhodně nižším alkylem (například methylem nebo ethylem).

Podstata vynálezu

Konkrétně se předkládaný vynález týká substituovaných pyrrolů vzorce:

a farmaceuticky přijatelných soli uvedených sloučenin, kde

R je vybrán ze skupiny zahrnující -CH2OPO3R¹R², -CH2OH, CH2OCOR³, -CH2OCO2³, -CH2OCONHR³ a -CONHR³;

R¹ a R² jsou vybrány ze skupiny zahrnující H, Na a NH4 a jsou stejné, pokud není jeden z R¹ nebo R² vodík, kdy může být druhý z nich odlišný, nebo alternativně, R¹ a R² znamenají dohromady vápník.

R³ je vybraný ze skupiny zahrnující alkyl, který volitelně může být substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -CO2R⁴, NR⁵R⁶, polyethylenglykol,

-OPO₃R¹R², hydroxy, alkoxy a aryl; alkenyl, který může být volitelně substituovaný jedním nebo více súbstituenty vybranými ze skupiny zahrnující -CO2R⁴, -NR⁵R⁶, polyethylenglykol, -0P03R¹R², hydroxy, alkoxy a aryl; cykloalkyl, který může být volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -CO2R⁴, -NR⁵R⁶, polyethylenglykol, -0P03R¹R², hydroxy, alkoxy a aryl;

heterocyklus, který když obsahuje N jako heteroatom, tak může být N volitelně substituovaný nižším alkylem a —COR⁷, aryl, který může být volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující CO2R⁴, hydroxy, alkoxy, polyethylenglykol, OPO₃R¹R² a alkyl, který sám může být substituovaný hydroxy, alkoxy, karboxy a substituovanou amino skupinou, s podmínkou, že když aryl znamená pyridin, tak může být dusík substituovaný nižším alkylem;

• ·· • · ·· ··· ·

R⁴ je vybraný ze skupiny zahrnující H, Na a nižší alkyl;

6

R a R jsou každý nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující H, nižší alkyl a COR⁷, nebo alternativně, skupina —NR⁵R⁶dohromady tvoří 5- nebo 6-členný heterocyklický kruh; a

R⁷ je nižší alkyl, který může být volitelně substituovaný karboxy, polyethylenglykolem a substituovanou amino skupinou.

Sloučeniny vzorce I mají antiproliferativní aktivitu, konkrétně, inhibují dělení buněk v G2/M fázi buněčného cyklu a jsou obecně označovány jako inhibitory G2/M fáze buněčného cyklu. Tyto sloučeniny jsou stabilní, rozpustná proléčiva protinádorových terapeutických činidel v U.S. Patentu

5,057,614 a jsou vhodné pro kontinuální infusní podání.

Předkládaný vynález se také týká farmaceutických prostředků obsahujících farmaceuticky účinné množství jakékoliv z výše popsaných sloučenin a farmaceuticky přijatelného nosiče nebo přísady.

Předkládaný vynález se také týká použití účinného množství sloučeniny vzorce I a/nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí léčbu solidních nádorů, konkrétně nádorů prsu nebo tlustého střeva.

Ve výhodném provedení sloučenin vzorce I je R vybraný ze skupiny zahrnující -CH2OPO3R¹R², -CH2OCOR³, -CH2OCO2R³, -CH2OCONHR³ a -CH2NHR³, výhodně -CH2OPO3R¹R², -CH2OCOR³ a -CH2NHR³, nejlépe -CH2OPO3R¹R² a -CH2OCOR³.

V dalším výhodném provedení sloučenin vzorce I je P —CH2COO-pyridin, kde atom N na pyridinu je substituovaný nižším alkylem, nejlépe methylem nebo ethylem, za vzniku kvarterního atomu dusíku.

• o · * 999· 99 ·· • · · * · 9 * · >•99 * · ·

999 · · · · *·· 9

9 9 9 9 9 9

99 9 99 9999

V dalším výhodném provedení sloučenin vzorce I jsou R¹ a R²nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující H a Na.

V dalším výhodném provedení sloučenin vzorce I je R heterocyklus obsahujících alespoň jeden atom dusíku, který η

může být volitelně substituovaný —COR .

V dalším výhodném provedení sloučenin vzorce I je R³ aryl, který je substituovaný —0P03R¹R², a R¹ a R² jsou nezávisle vybrány z H nebo Na.

V dalším výhodném provedení sloučenin vzorce I je R³ aryl, který je substituovaný skupinou skládající se z -CCteNa, polyethylenglykolu a -CH2CH2N (CH2CH2) 2.

V dalším výhodném provedení sloučenin vzorce I, P3 je nižší alkyl který je substituovaný s —C02Na.

V dalším výhodném provedení sloučenin vzorce I tvoří skupina NR⁵R⁶ dohromady 5- nebo 6-členný heterocyklický kruh, výhodně piperidin nebo pyrrolidin.

V dalším výhodném provedení sloučenin vzorce I jsou R a R každý nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující H, methyl a ethyl.

V dalším výhodném provedení sloučenin vzorce I je R⁷ ethyl, který je substituovaný polyethylenglykolem.

V dalším výhodném provedení sloučenin vzorce I má polyethylenglykol molekulovou hmotnost od přibližně 750 do přibližně §000 Daltonů.

V dalším výhodném provedení sloučenin vzorce I je R

•	99	9999	99	99
9 · · ·	9	9 9	9 9	9 9
• ··· ·	9	9 ·	9 9 9	9
• ·	9	• 9	9 9	9
• 9 · · ·	9 9	9	99	999 9

-CO2OCOR³, kde R³ je ethyl, který je substituovaný PEG majícím molekulovou hmotnost od přibližně 750 do přibližně 5000 Daltonů.

Následující příklady jsou výhodné sloučeniny vzorce 1: mono-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethyl]-sodná sůl kyseliny fosforečné;

O-[2-[[2,5-dihydro-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1-methyl6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lyl]methoxykarbonyl]ethyl]-0'-methylpolyethylenglykol 2000;

mono-(4-{[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitrolH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2, 5-dihydro-pyrrol-l-karbonyl]amino}-butyl)ester-sodná sůl kyseliny fosforečné;

l-methyl-3-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitrolH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lylmethoxykarbonyl]-pyridinium-trifluoracetát;

l-hydroxymethyl-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6nitro-lH-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion; a

O-[2-[[[2,5-dihydro-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1-methyl6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-lH-pyrrol-l-yl]methoxy]karbonyl]methyl]-O'-methylpolyethylenglykol 2000.

Sloučeniny výše uvedených vzorců mohou vykazovat tautomerismus nebo strukturální isomerismus. Předkládaný vynález zahrnuje jakékoliv tautomerní nebo strukturálně izomerní formy těchto sloučenin, nebo směsi takových forem, a není omezen na jakoukoliv jednu tautomerní nebo strukturálně izomerní formu použitou ve vzorcích uvedených výše.

Syntéza sloučenin podle předkládaného vynálezu

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny způsoby známými v oboru. Vhodné způsoby pro syntétu «44 44

4«

4 4 · · 4

4 4 4

4 4

4444 těchto sloučenin jsou uvedeny v příkladech. Obecně, tyto sloučeniny mohou být připraveny podle následujících schémat syntézy.

Sloučeniny vzorce 1, kde R znamená CH2OCOR³, a kde R³ je stejný, jak je popsáno výše, mohou být připraveny způsobem uvedeným ve schématu I, s podmínkou, že když R³ obsahuje hydroxy, hydroxyalkyl, amino, aminoalkyl, monoalkylamino, nebo karboxyl, tak je taková skupina nejprve chráněna za použití běžných chránících skupin známých v oboru. Schéma I je také vhodné pro přípravu sloučenin vzorce I, kde R znamená -CH2OH.

9 4«	4·	• 949	99	• 9
«♦ · 9	9	•	9	4	4	• 9
						4
• 9·· 9	9	9	4	4 4	4	4
9 9	9	•	9	•	4	9
9 9 9 9 9		99	9		94	9944

Jak je uvedeno ve schématu Ia, chlormethylester připravený reakci známé karboxylové kyseliny nebo karboxylové kyseliny připravené známým způsobem, s CICH2OSO2CI v methylenchloridu a vodě, za přítomnosti baze, jako je uhličitan sodný, a činidla katalyzujícího fázový přenos, jako je tetrabutylammoniumhydrogensulfát, reaguje s 3-(l-methyl-3-indolyl)-4-(1-methyl6-nitro-3-indolyl)-lH-pyrrol-2,5-dionem [připraveným způsobem popsaným v EP Patentu 03288026].

Alternativně, 3-(l-methyl-3-indolyl)-4-(l-methyl-6-nitro-3indolyl)-lH-pyrrol-2,5-dion [připravený způsobem popsaným v Davisově US Patentu 5,057,614] reaguje s formaldehydem za zisku hydroxymethylového meziproduktu 2. Tento meziprodukt je potom esterifikován za použití známých způsobů. Obvykle reaguje hydroxy-meziprodukt 2 se známou karboxylovou kyselinou nebo karboxylovou kyselinou připraevnou za použití známých způsobů, v rozpouštědle jako je methylenchlorid, za přítomnosti EDO a dimethylaminopyridinu, během několika hodinh při teplotě místnosti. Alternativně, hydroxy-meziprodukt 2 může reagovat se známým chloridem kyseliny nebo s chloridem kyseliny připraveným za použití známých způsobů.

Pro přípravu sloučenin vzorce 3, kde R³ obsahuje heteroaromatický kruh, může být heteroatom, jako je N, dále modifikován alkyl jodidem, jako je CH3I, v rozpouštědle jako je acetonitril. Alternativně mohou být sloučeniny vzorce 3, kde R³obsahuje vhodně chráněnou hydroxy, hydroxyalkýlovou, amino, aminoalkýlovou, monoalkylamino skupinu, dále modifikovány nejprve odstraněním chránící skupiny za použití známých způsobů. Amino nebo hydroxy skupina může být potom modifikována na požadovaný amide nebo ester za použití způsobů známých v oboru.

Sloučeniny obecného vzorce I, kde R znamená -CH2OPO3R¹R², a

4 4« • 4 ·	• 4 4	•	«444 4	44	44 4 ·
4	4
4 444	4 4	4	4	4 4	4	4
9 4	4	4		•	4	4
44 44	44		4	44		4444

kde Ri a R2 jsou stejné, jak byly definovány výše, mohou být připraveny za použití následujícího schématu II.

Schéma II

Obvykle je hydroxymethylový meziprodukt 2 navázán na vhodně chráněný fosfát Mitsunobuovou reakcí za použití trifenylfosfinu a diethylazodikarboxylátu, za zisku sloučeniny vzorce 4, kde Y znamená vhodnou chránící skupinu. Odstranění chránící skupiny může být provedeno jakýmkoliv ze standardních způsobů, za zisku kyseliny fosforečné 5. Konkrétně, když Y znamená benzylovou skupinu, tak jsou chránící skupiny odstraněny za použití cyklohexadienu a palladia na uhlíku jako katalyzátoru. Sloučenina 5 může být potom přeměněna na svou sůl, jako je monosodná sůl 6, za použití standardních způsobů.

• 9· • 9 9 ·	9· •	9	99»· •	• 9 •	9	99 9 9 9
• 9*9 ·	9	•	•	« 9	9	•
• 9	•	•	•	•	9	•
999 99	• ·		•	99		9999

3

Sloučeniny vzorce I, kde R znamená -CO2OCO2R , a kde R je stejný, jak je popsáno výše, se připraví podle schématu III.

Schéma III

Obvykle reaguje hydroxymethylový meziprodukt 2 se známým chlorformiátem nebo s chlorformiátem připraveným za použití známých způsobů, v rozpouštědle jako je THF, při teplotě 0°C až 200 °C, za přítomnosti dimethylaminopyridinu a 1,5diazabicyklo(4.3.0)non-5-enu, za zisku požadovaného uhličitanu.

Sloučeniny vzorce I, kde R znamená-CH2OCONHP3, a kde R³ je stejný, jak je popsáno výše, se připraví podle schématu IV.

Schéma IV

• 9* * 9	9	•	*» 9	• «9· 9	• 9*	• 4 9 ·
•	9
» a ·	9	• 9	9	•	• 9	9	9
	•	4	9	«	9	*	9
»· «9			99	9		4 9	99 9 9

Obvykle je hydroxymethylový meziprodukt 2 deprotonován za použití silné baze, jako je n-butyllithium nebo lithiumbis (trimethylsilyl) amid, v rozpouštědle jako je THF, při teplotě 0 °C. Vzniklý anion reaguje potom ve stejném rozpouštědle s bis(p-nitrofenyl)karbonátem, a potom se známým aminem nebo aminem připraveným za použití známých způsobů.

Sloučeniny vzorce I, kde R znamená -CH2NHR³, a kde R³ je stejný, jak byl definován výše, mohou být připraveny způsobem uvedeným ve schématu V, s podmínkou, že když R³ obsahuje hydroxy, hydroxyalkyl, amino, aminoalkyl, monoalkylamino skupinu nebo karboxyl, tak je taková skupina chráněna pomocí běžných chránících skupin.

Schéma V

Obvykle je 3-(l-methyl-3-indolyl)-4-(l-methyl-6-nitro-3indolyl)-lH-pyrrol-2,5-dion [připravený způsobem popsaným v EP Patentu 03288026] deprotonován v aprotickém rozpouštědle, jako je THF, při teplotě 0°C, za použití silné baze, jako je nbutyllithium nebo lithium-bis(trimethylsilyl)amid. Vzniklý anion potom reaguje s bis(p-nitrofenyl)karbonátem a potom se známým aminem nebo s aminem připraveným za použití způsobů známých v oboru.

Konverze acidické sloučeniny vzorce I na farmaceuticky

9 ·*	·· »·«·	·*	··
• 9 4 ·	♦	• ·	•		•	• »
						•
• ··»	• «	• 9	• ·		•	•
• *	•	• ·	•		9	•
		·· ·		«·		·« · 9

přijatelnou sůl může být provedena reakcí s vhodnou baží za použití známého způsobu. Vhodné soli jsou nejen soli odvozené od anorganických baží, jako jsou například sodné, draselné nebo vápenaté soli, ale také od organických baží, jako je ethylenediamin, monoethanolamin nebo diethanolamin. Konverze bazické sloučeniny vzorce I na farmaceuticky přijatelnou sůl může být provedena reakcí s vhodnou kyselinou za použití známého způsobu. Vhodné soli jsou soli popsané na straně 3.

Prostředky/přípravky

V alternativním provedení se předkládaný vynález týká farmaceutických prostředků obsahujících alespoň jednu sloučeninu vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl.

Tyto farmaceutické prostředky podány orálně, například ve formě tablet, potahovaných tablet, dražé, kapslí z tuhé nebo měkké želatiny, roztoků, emulzí nebo suspenzí. Mohou být také podány rektálně, například ve formě čípků. Nicméně, sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou zejména vhodné pro parenterální podání, například ve formě injekčních roztoků.

Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu obsahující sloučeniny vzorce I, proléčiva takových sloučenin nebo jejich soli, mohou být připraveny za použití způsobů známých v oboru, například použití běžných procesů míšení, enkapsulace, rozpouštění, granulování, emulgování, zachycování, výroby dražé nebo lyofilizace. Tyto farmaceutické prostředky mohou být připraveny s terapeuticky inertními, anorganickými nebo organickými nosiči. Laktosa, kukuřičný škrob nebo jeho deriváty, talek, kyseliny stearové nebo jejich soli, mohou být použity jako takové nosiče pro tablety, potahované tablety, dražé a kapsle z tuhé želatiny. Mezi vhodné nosiče pro kapsle z měkké želatiny patří rostlinné • « · • · · ··· · · « ·

oleje, vosky a tuky. Podle charakteru aktivní substance nejsou obvykle v případě kapslí z měkké želatiny potřeba žádné nosiče. Vhodné nosiče pro přípravu roztoků a sirupů jsou voda, polyoly, sacharosa, invertní sacharid a glukosa. Vhodné nosiče pro injekce jsou voda, alkoholy, polyoly, glycerin, rostlinné oleje, fosfolipidy a surfaktanty. Vhodné nosiče pro čípky jsou přírodní nebo ztužené oleje, vosky, tuky a semi-kapalné polyoly

Farmaceutické přípravky mohou také obsahovat konzervační činidla, solubilizační činidla, stabilizační činidla, smáčivá činidla, emulgační činidla, sladidla, barviva, chuťová korigens, soli pro úpravu osmotického tlaku, pufry, potahovací činidla nebo antioxidační činidla. Mohou také obsahovat jiné terapeuticky hodnotné substance, včetně aktivních složek jiných než jsou sloučeniny vzorce I.

Dávkování

Jak bylo uvedeno výše, sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou použitelné při léčbě nebo kontrole buněčných proliferativních onemocnění, konkrétně onkologických onemocnění. Tyto sloučeny a prostředky obsahující uvedené sloučeniny jsou zejména použitelné při léčbě nebo kontrole solidních nádorů, jako je, například, karcinom prsu a tlustého střeva.

Terapeuticky účinné množství sloučeniny podle předkládaného vynálezu je množství sloučeniny, které je účinné pro prevenci, zmírnění nebo zlepšení příznaků onemocnění, nebo pro prodloužení přežívání léčeného jedince. Stanovení terapeuticky účinného množství je známé odborníkům v oboru.

Terapeuticky účinné množství nebo dávka sloučeniny podle

předkládaného vynálezu může být různé v uvedených limitech a musí být upraveno pro konkrétní případy. Obecně, v případě orálního nebo parenterálního podání dospělému člověku o hmotnosti přibližně 70 kg, je denní dávka od přibližně 10 mg do přibližně 10000 mg, výhodně od přibližně 200 mg do přibližně 1,000 mg, ačkoliv horní hranice může být překročena, pokud je to nutné. Denní dávka může být podána v jedné dávce nebo rozděleně do více dávek, nebo - pro parenterální podání může být podána ve formě kontinuální infuse.

Příklady provedeni vynálezu

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být syntetizovány za použití známých technik, jako jsou, například, obecná schémata uvedená výše. Následující příklady ilustrují způsoby pro syntézu sloučenin a prostředků podle předkládaného vynálezu.

Příklad 1: Mono-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethyl]sodná sůl kyseliny fosforečné

a) Suspenze obsahující 0,5 g (1,25 mmol) 3-(l-methyl-3indolyl)-4-(l-methyl-6-nitro-3-indolyl)-lH-pyrrol-2,5-dionu (viz Davisův US Pat. č. 5,057,614), 4,0 ml formaldehydového roztoku (37% hmot./hmot.) a 2,0 ml vody se zahřívá při teplotě 125 °C za míšení a s napojeným refluxním chladičem po dobu 14 hodin. Reakční směs se ochladí a naředí se vodou. Červená pevná látka se přefiltruje a promyje se vodou a suší se. Pevná látka se přečistí chromatografií za použití silikagelu a směsi EtOAc/hexan jako eluens za zisku l-hydroxymethyl-3-(1-methyllH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-pyrrol-2,5dionu (t.t. = 209-211°C) .

b) Do chladného roztoku (10°C) THF obsahujícího 0,12 g (0,68 mmol) diethylazodikarboxylátu, 0,20 g (0,46 mmol) 1hydroxymethyl-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitrolH-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dionu (ze stupně a) a 0,40 g (1,43 mmol) dibenzylfosfátu se přidá po kapkách 5 ml roztoku obsahujícího 0,128 g (0,49 mmol) trifenylfosfinu. Získaná směs se mísí po dobu 14 hodin při teplotě 20 °C. Všechna rozpouštědla se odpaří a zbytek se přečistí chromatografií za použití silikagelu a eluce směsí EtOAc/hexanů za zisku dibenzylesteru kyseliny 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1raethyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lylmethyl-fosforečné ve formě světle červené pevné látky (t.t.

= 105-109 °C) .

c) Roztok 35 mg (0,051 mmol) dibenzylesteru 3-(1-methyl-lHindol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5dihydro-pyrrol-l-ylmethylesteru kyseliny fosforečné (ze stupně b) v THF (5 ml) s 5 ml ethanolu a 0,5 g 1,4-cyklohexadienu reaguje s 35 mg 10% palladia na uhlíku. Směs se zahřeje na 45 °C, při které je mírně exotermní. Po 10 min. při 50 °C se horká reakční směs přefiltruje přes celit a filtrační koláč se promyje THF. Všechno rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí znovu v THF, přefiltruje se přes celit a trituruje se s hexanm za zisku 14 mg mono-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lylmethyl] kyseliny fosforečné.

d) Roztok 14 mg (0,029 mmol) mono-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl]4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydropyrrol-l-ylmethyl] kyseliny fosforečné (ze stupně c) v 15 ml vody se zpracuje ředěným hydroxidem sodný do té doby, než je pH roztoku 7,1. Tento roztok se přefiltruje a lyofilizuje se za zisku mono-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitrolH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethyl]sodné ♦ ·9 9

9

9999 soli kyseliny fosforečné.

Příklad 2: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny isonikotinové

Do roztoku dimethylaminopyridinu (1,5 ekvivalentů) a 1ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu, hydrochloridu (1,5 ekvivalentu) v CH2CI2 se přidá kyselina 4-pikolinová (1,2 ekvivalentů) a reakční směs se mísí po dobu několika minut. Přidá se l-hydroxymethyl-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion, připravený způsobem podle příkladu la, a reakční směs se mísí při teplotě místnosti po dobu několika hodin. Směs se naředí dichlormethanem, promyje se vodným roztokem HC1, nasyceným roztokem NaHCO3, vodou, suší se přes MgSO₄ a odpaří se. Zbytek se přečistí chromatografií na koloně za zisku 3-(1-methyl-lHindol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny isonikotinové (výtěžek - 76%).

Příklad 3

Za použití stejného postupu jako v příkladu 2 se připraví následující sloučeniny:

a) 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny nikotinové (výtěžek — 76%);

b) 0-[2-[[2,5-dihydro-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1-methyl6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lyl)methoxykarbonyl]ethyl]-0'-methylpolyethylenglykol 2000 (výtěžek — 88%);

• · · · · ·

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 ·99 9999 999 9

Of) 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

c) 3- (l-methyl-lH-indol-3-yl) -4- (l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny pyridin-4-yl octové (výtěžek — 39%);

d) 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny pyridin-3-yl-octové (výtěžek — 94%);

e) 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny pyridin-2-yl-octové (výtěžek — 65%);

f) mono-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethyl]ester kyseliny jantarové (použijí se 3 ekv. EDO a DMAP a 2,4 ekv. kyseliny přečištěné preparativní TLC) (výtěžek — 89%);

g) 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny hexadek-9-enoové (výtěžek — 53%);

h) 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny [2[2-(2-karboxymethoxy-ethoxy)-ethoxy]-ethoxy]octové, přečištěné chromatografií na koloně s reverzní fází (výtěžek —61%).

Příklad 4: Mono-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethyl] ester kyseliny but-2endioové

Do roztoku l-hydroxymethyl-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dionu, připraveného podle příkladu la, v 1:4 směsi CH2CI2:benzenu, se přidá velký • ·· 0 · · 0 · · 0 0 0 0 • · · · 0 « · · 4 · · • •0 000 «0 · • 00000 0 0 0 0 0 * • 0000 0 0 ·

000 00 00 4 ·· 000 0 nadbytek fumaryl-chloridu a nadbytek diisopropylethylaminu. Reakční směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 20 min. Přidá se aceton a voda. Reakční směs se naředí s CH2CI2, promyje se vodou, chladným nasyceným roztokem NaHCCb, vodou, a suší se přes Na2SO4. Získaný mono- [3- (l-methyl-lH-indol-3-yl) 4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydropyrrol-l-ylmethyl]ester kyseliny but-2-endioové se přečistí rychlou chromatografii (výtěžek 60%).

Příklad 5: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny děkanové

a) Kyselina dekanová (0,2 g, 1,2 mmol) se zpracuje s 4 ekv. NaHCO₃, 0,1 ekv BU4NHSO4 a 1,2 ekv. CICH2OSO2CI v 1:1 směsi CH2Cl2:H₂O. Reakční směs se důkladně mísí při teplotě 0°C po dobu 30 min. a potom při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Zpracování vodou vede k zisku chlormethyldekanoátu (výtěžek 100%).

b) 3-(l-methyl-3-indolyl)-4-(l-methyl-6-nitro-3-indolyl)-1Hpyrrol-2,5-dion (20 mg, 0,05 mmol) (viz EP Patent 03288026) se rozpustí DMF a zpracuje se s CS2CO3 (49 mg, 0,15 mmol) během několika minut, přidá se chlormethylester (33 mg, 0,15 mmol) připravený ve stupni a, a reakční směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Zpracování vodou, následované přečištěním rychlou chromatografii, vede k zisku 3-(l-methyllH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylesteru kyseliny děkanové (výtěžek - 58%) .

Příklad 6

Následující sloučeniny se připraví způsobem podobným • ·· ·«- 4444 44 ·· · ♦ · · 4 4

způsobu podle příkladu 5b.

a) 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny [2(2-methoxy-ethoxy)-ethoxy]-octové (výchozí chlormethylester se připraví z příslušné kyseliny způsobem podle příkladu 5a; přečistí se preparativní TLC) (výtěžek — 38%);

b) 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny 2,2dimethyl-propionové (výchozí chlormethylpivalát se získá od (Aldrich) (výtěžek — 91%).

Příklad7: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester, trifluoracetát, kyseliny 3-amino-cyklohexankarboxylové

a) chlormethyl-N-terc.butyloxykarbonyl-3-aminocyklohexankarboxylát se připraví způsobem podobným způsobu podle příkladu 5a (87% výtěžek) z kyseliny N-terc.butyloxykarbonyl-3-amino-cyklohexankarboxylové, která se sama syntetizuje známým způsobem BOG chránění kyseliny 3-aminocyklohexankarboxylové (Aldrich).

b) 3-(l-methyl-3-indolyl)-4-(l-methyl-6-nitro-3-indolyl)-1Hpyrrol-2,5-dion (68 mg, 0,15 mmol) (viz EP Patent 03288026) se rozpustí v DMF a zpracuje se s CS2CO3 (0,15 g, 0,45 mmol) během několika minut. Přidá se chlormethylester (0,13 g, 0,45 mmol) připravený ve stupni a) a reakční směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 50 minut. Po zpracování vodou a následném přečištění rychlou chromatografií se získá [N-a-butyloxy-3amino-cyklohexankarboxylá kyselina]-3-(l-methyl-lH-indol-3yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydropyrrol-l-ylmethylester (výtěžek-95%).

9999

9 9

9

9999

c). Terč.butyloxy chránící skupina sloučeniny stupně b) se odstraní reakcí s TFA v CH2CI2 při teplotě místnosti po dobu 50 minut. TFA a CH2CI2 se odpaří za použití proudu dusíku. Zbytek se přečistí HPLC za zisku 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lylmethylesteru, trifluoracetátu, kyseliny 3-aminocyklohexankarboxylové (výtěžek — 57%).

Příklad 8

Následující sloučeniny se připraví způsobem podobným způsobu podle příkladů 7a, bac:

a) 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester, trifluoracetát, kyseliny piperidin-4-karboxylové (připravený z kyseliny N-terc.butyloxykarbonyl-piperidin-4-karl?oxylové (Bachem)) (výtěžek — 62%);

b) 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitrolH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester, trifiuoroacetát, kyseliny 2-amino-2-methyl-propionové (připravený z kyseliny N-terc.butyloxykarbonyl-aminomáselné (Bachem)) (výtěžek —63%).

Příklad 9: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny piperidin-4-karboxylové, acetátová sůl

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny piperidin-4-karboxylové, trifluoracetát, připravený podle příkladu 8a, se rozpustí v ethylacetátu. Získaný roztok se

neutralizuje chladným nasyceným roztokem NaHCO₃.

Ethylacetátová vrstva se zahustí a rozetře na kaši v H2O a okyselí se nadbytkem HOAc a lyofilizuje se za zisku požadovaného produktu (výtěžek — 97%).

Příklad 10: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny piperidin-4-karboxylové, hydrochloride

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny piperidin-4-karboxylové, acetát, připravený způsobem podle příkladu 9, se rozpustí v ethylacetátu. Ethylacetátový roztok se neutralizuje chladným nasyceným roztokem NaHCO₃, zahustí se a odebere se v 1:5 směsi CH₃CN:H2O. Získaný roztok se zpracuje s 2 ekvivalenty 2N vodného roztoku HCl a přečistí se HPLC za zisku požadovaného produktu (výtěžek-86%).

Příklad 11: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2, 5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny 2-amino-2-methyl-propionové, hydrochlorid

Tato sloučenina se připraví z 3-(l-methyllH-indol-3-yl)-4(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol1-ylmethylesteru kyseliny 2-amino-2-methyl-propionové, trifluoracetátu, připraveného způsobem podle příkladu 8b, za použití postupu podobného postupu použitému v příkladu 10 (výtěžek - 71%).

Příklad 12: l-methyl-3-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lylmethoxykarbonyl]-pyridinium; trifluoracetát ♦ 4 «4 » 9 9 9

Roztok 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylesteru kyseliny nikotinové v CH3CN, připravený způsobem popsaným v příkladu 3a, se zpracuje s 2 ekv. NaBPh₄ a 6 ekv. Mel. Reakční směs se mísí při teplotě zpětného toku po dobu 7 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se přečistí HPLC za zisku l-methyl-3-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lylmethoxykarbony1]pyridinia; trifluoracetátu (výtěžek 52%).

Příklad 13: O-[2-[[4-[[[2,5-dihydro-3-(l-methyl-lH-indol-3yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-lH-pyrrol-lyl-methoxy]karbonyl]-1-piperidinyl]karbonyl]ethyl]-O'methylpolyethylenglykol 1000

3-(l-methyl-3-indolyl)-4-(l-methyl-6-nitro-3-indolyl)-1-(4piperidinkarboxymethyl)-lH-pyrrol-2,5-dion, trifluoracetát, připravený způsobem podle příkladu 8a, se rozpustí v ethylacetátu. Získaný roztok se neutralizuje chladným nasyceným roztokem NaHCO3, ethylacetátová vrstva se zahustí a zbytek se odebere v CH3CN. Roztok se přidá po kapkách do roztoku O-(2-karboxyethyl)-0'-methylpolyethylenglykolu 1000 chloridu kyseliny (připraveného z 0-(2-karboxyethyl)-O'methylpolyethylenglykolu 1000 - kyseliny za použití standardního způsobu) v CH3CN. Reakční směs se mísí po dobu 1 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se přečistí by HPLC (výtěžek 70%) .

Příklad 14: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny -fosfonoxy-benzoové, monosodná sůl

a) Terc.buOK (9,6 ml, 9,6 mmol, 1 M v THF) se přidá po kapkách do roztoku 4-hydroxybenzaldehydu (1,10 g, 9 mmol) v • *· 99 9999 99 9

9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

999 9999 999 • 9 9 9 9 9 9 9 ··· ·· 99 9 99 99

THF (40 ml). Směs se zahřívá při 70°C a přidá se tetrabenzylpyrofosfát (5,05 g, 9,37 mmol) v THF (20 ml). Po 1 hodině se přidá THF (100 ml) a hexany (200 ml). Reakční směs se přefiltruje a filtrát se odpaří. Chromatografií zbytku přes oxid křemičitý za použití 2%-5%-10% methanolu-CH2Cl2 se získá

4-formyl-fenylester dibenzylesteru kyseliny fosforečné (3,38 g, 98%).

b) Monohydrát dihydrogenfosforečnanu sodného (79 mg, 0,57 mmol) v vodě (1 ml) se přidá do roztoku 4-formyl-fenylesteru dibenzylesteru kyseliny fosforečné (0,89 g, 2,32 mmol) (ze stupně a) v MeCN (10 ml) při teplotě 0 °C. Přidá se peroxid vodíku (0,24 ml, 30% ve vodě, 2,4 mmol) a potom chlorid sodný (315 mg, 3,5 mmol) ve vodě (2 ml). Reakční směs se mísí při teplotě 0°C po dobu 1 hodiny a potom se zahřívá po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Přidá se thiosíran sodný (100 mg) a reakční směs se důkladně mísí po dobu 15 min. Přidá se voda a směs se extrahuje EtOAc. Organické extrakty se promyjí vodou, suší se (MgSO₄), přefiltrují se a zahustí se za zisku

4-karboxyl-fenylesteru dibenzylesteru kyseliny fosforečné (880 mg, 94%) ve formě světle žluté voskové pevné látky.

c) Roztok 4-karboxyl-fenylesteru dibenzylesteru kyseliny fosforečné (205 mg, 0,5 mmol) (ze stupně b) v CH2CI2 (2 ml) se přidá do roztoku l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu, hydrochloridu (149 mg, 0,78 mmol) (Aldrich) a dimethylaminopyridinu (139 mg, 1,13 mmol) v CH2CI2 (5 ml) . Po 5 min. se přidá l-hydroxymethyl-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion (215 mg, 0,5 mmol), připravený podle příkladu la, v CH2CI2 (2 ml), a směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Získaná směs se rozdělí mezi CH2CI2 a vodu a organické extrakty se promyjí vodou. Vodná vrstva se extrahuje CH2CI2. Organické extrakty se kombinují, suší se (MgSO₄) a zahustí se. Chromátografií • 0 0 • · · ··· · · »0 «00«

• 0 00 0 0 « 0

0 0

0«

0 0

0000 zbytku přes silikagel za použití 5%-10% EtOAc-CH2Cl2 se získá 3-(1,6-dimethyl-lH-indol-3~yl)-4-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-2,5dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny 4-(bisbenzyloxy-fosforyloxy)-benzoové (179 mg, 44%) ve formě oranžové pěny.

d) 1,4-cyklohexadien (0,12 ml, 1,26 mmol) (Aldrich) se přidá do směsi 3-(1,6-dimethyl-lH-indol-3-yl)-4-(1-methyl-lH-indol3- yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylesteru kyseliny

4- (bis-benzyloxy-fosfonyloxy)-benzoové (100 mg, 0,12 mmol) (ze stupně c) a Pd/C (37 mg 10%) ve směsi THF (6 ml) a ethanolu (0,3 ml) . Reakční směs se zahřívá při 55°C po dobu 20 minut. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a přefiltruje se přes celit, promyje se methylenchloridem a zahustí se. Zbytek se rozpustí v MeCN a vodě při teplotě 0°C. Přidá se IN hydroxid sodný (2,4 ml, 2,4 mmol) a směs se lyofilizuje. Získaná směs se dále přečistí HPLC s 5 až 50% směsí MeCN-voda. Lyofilizace vede k zisku 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lylmethylesteru kyseliny 4-fosfonoxy-benzoové, monosodné soli, (60 mg, 74%) ve formě oranžového prášku.

Příklad 15: [[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitrolH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-yl]methoxykarbonyl]-4-fenyl-O-methylpolyethylenglykol 500

a) Suchý PEG-500-monomethylether (18,36 g, 33 mmol), ethyl-4hydroxybenzoát (5,0 g, 30 mmol) a trifenylfosfin (17,34 g, 66 mmol) se rozpustí v suchém THF (100 ml) a směs se ochladí na 0°C pod atmosférou argonu. Do této směsi se pomalu přidá diethylazodikarboxylát (12,95 ml, 83 mmol) v suchém THF (10 ml) . Získaná směs se potom zahřívá při 50°C po dobu 16 hodin. Směs se ochladí na teplotu 0°C pod atmosférou argonu a přidá se diethylazodikarboxylát (6 ml) v suchém THF (5 ml). Směs se

4 4

4 4 • 9 4·«4

4

44

4 4 4

4 4

4 4 • 94

9444 zahřívá při teplotě 50 °C po dobu 24 hodin. Odpařením rozpouštědel a ehromatografií zbytku přes silikagel za použití 1:1 směsi CH2Cl2-hexanů, CH2CI2, 50% ether/CH2Cl2, a etheru se získá 9 g surového ethyl-4-O-methylpolyethylenglykolu 500benzoátu, ve formě oleje, 5,4 g oranžového oleje (3/2 mol% trifenylfosfinu/produktu), a 4,9 g (—58 % celkový výtěžek) oranžového oleje (5/4 mol% trifenylfosfinu/produktu).

b) Do roztoku surového ethyl-4-O-methylpolyethylenglykolu 500benzoátu (4,90 g, 5/4 mol% trifenylfosfinu/produktu) (ze stupně a) v methanolu (10 ml) a vodě (15 ml) se přidá 6N NaOH (13,8 ml, 83 mmol) a získaný roztok se zahřívá při teplotě 65°C po dobu 2 hodin. Roztok se zahustí a rozdělí se mezi 30% CH2Cl2/ethylacetát a vodu. Vodná vrstva se ochladí na teplotu 0°C a okyselí se na pH 3,0 pomocí IN HC1. Směs se extrahuje CH2CI2 a organické extrakty se suší (MgSO₄) . Odpařením organických rozpouštědel se získá surový 4-0methylpolyethylenglykol 500-kyselina benzoová (2,3 g, 49%) ve formě žlutého vosku, (vzorek obsahuje 20-30% molární nadbytek PEG 500).

c) Roztok surového 4-O-methylpolyethylenglykolu 500-kyseliny benzoové (679 mg, 1 mmol) (ze stupně b) v suchém CH2C12 (5 ml) se přidá při teplotě místnosti do roztoku l-ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimidu, hydrochloridu (300 mg, 1,56 mmol) (Aldrich) a dimethylaminopyridinu (279 mg, 2,28 mmol) v suchém CH2CI2 (5 ml). Po 5 min. se přidá l-hydroxymethyl-3-(1methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)pyrrol-2,5-dion (430 mg, 1 mmol), připravený způsobem podle příkladu la. Směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Přidá se voda a směs se extrahuje CH2CI2. Organické extrakty se promyjí vodou, suší se (MgSO₄) a zahustí se.

Zbytek se přečistí HPLC s MeCN/vodou za zisku [[3-(1-methyllH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo29 * 99 99 t·»· ·* ·*·· »· · · · 9 • ··· · · * « · · · « ♦ 9 9 9 9 9 i ··» ·· 99 ♦ 99 ·4

2,5-dihydro-pyrrol-l-yl]methoxykarbonyl]-4-fenyl-Omethylpolyethylenglykolu 500 (490 mg, 47 %) ve formě oranžového oleje.

Příklad 16: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester allylesteru kyseliny uhličité

Roztok 200 mg (0,47 mmol) l-hydroxymethyl-3-(1-methyl-lHindol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-pyrrol-2,5dionu, připraveného podle příkladu la, se rozpustí v 90 ml THF a zpracuje se 300 mg (2,5 mmol) 4-dimethylaminopyridinu (DMAP). Do tohoto roztoku se při 5 °C přidá 90 mg (0,75 mmol) allylchlorformiátu. Za míšení se po kapkách přidá 300 mg (2,4 mmol) 1,5-diazabicyklo(4,3,0)non-5-enu (DBN) (Aldrich). Tato směs se mísí po dobu 14 hodin při teplotě 20°C. Rozpouštědlo se odpaří a směs se přečistí chromatografií za použití silikagelu a eluce směsí EtOAc/hexanu za zisku 3-(1-methyl-lHindol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5dihydro-pyrrol-l-ylmethylesteru allylesteru kyseliny uhličité ve formě červené pevné látky (t.t. 191-194 °C) .

Příklad 17: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny (2-dimethylamino-ethyl)-karbamové l-hydroxymethyl-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6nitro-lH-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion (200 mg, 0,47 mmol), připravený podle příkladu la, se rozpustí v THF (10 ml). Získaný červený roztok se ochladí v ledové lázni. Po kapkách se do roztoku přidá 5 bis(trimethylsilil)amid lithný (0,56 ml, 0,56 mmol, 1 M v THF) za zisku červené suspenze. Po 10 min. se přidá bis(p-nitrofenyl)karbonát (200 mg, 0,66 mmol). Získaný roztok se mísí při 0°C po dobu 20 min. Přidá se * 49 · r

4 4

449

4 • 94 94

9499

9 9

9 4 • 4 4

4 4

4 *9

9 9 9

9 4

4 4

4 9

449· diethylaminoethylamin (90 mg, 0,78 mmol) v THF (2 ml). Míšení pokračuje po dobu 2 hodin. Směs se odpaří a zbytek se přečistí rychlou chromatografií za zisku 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol1-ylmethylesteru kyseliny (2-dimethylamino-ethyl)karbamové (124 mg 46%).

Příklad 18: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny [2-(2-hydroxy-ethoxy)-ethyl]-karbamové

Tato sloučenina se připraví z l-amino-2-ethoxy-ethanolu (Aldrich), za použití stejného postupu jako v příkladu 17 (45 mg, 17%) .

Příklad 19: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny (2-hydroxy-ethyl)-karbamové n-BuLi (0,96 ml, 1,54 mmol, 1,6 M v hexanech) se přidá po kapkách do roztoku l-hydroxymethyl-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dionu (600 mg,

1,54 mmol), připraveného způsobem podle příkladu la, v THF (30 ml) při teplotě 0°C. Po 10 min. se přidá bis(pnitrofenyl)karbonát (600 mg, 1,96 mmol). Roztok se mísí při teplotě 0°C po dobu 20 min. Přidá se roztok 1-aminoethanolu (128 mg, 2,10 mmol). Získaná směs se mísí při teplotě 0°C po dobu 30 min. Přidá se vodný roztok NH4CI se přidá a směs se extrahuje EtOAc. Organický extrakt se promyje solankou a suší se přes MgSO4. Odpařením rozpouštědel a chromatografií zbytku přes silikagel za použití 1:1-3:2 směsi EtOAc/hexanů se získá 3-(l-methyllH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny (2hydroxy-ethyl)-karbamové (339 mg, 47%).

• · «

··

I · » · ··· ·

Příklad 20: 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny (2-fosfonooxy-ethyl)-karbamové

a) Trifenylfosfin (95 mg, 0,36 mmol) a dibenzyl fosfát (101 mg, 0,36 mmol) se přidají do roztoku 3-(l-methyl-lH-mndol-3yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydropyrrol-l-ylmethylesteru kyseliny (2-hydroxy-ethyl)-karbamové, připravené způsobem podle příkladu 19 (150 mg, 0,289 mmol) v THF (6 ml). Směs se ochladí na -78°C. Diethylazodikarboxylát (0,057 ml, 0,36 mmol) se přidá po kapkách během 5 min.

Chladící lázeň se odstraní a směs se mísí přes noc. Směs se potom odpaří. Chromatografií zbytku na silikagelu za použití 2:1-4:1 směsi EtOAc/hexany se získá 3-(l-methyl-lH-indol-3yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydropyrrol-l-ylmethylester kyseliny [2-bis-benzyloxy-fosforyloxy)ethyl]-karbamové (121 mg, 54%).

b) Pd/C (33 mg, 10%) a 1,4-cyklohexadien (0,12 ml, 1,27 mmol) se přidají do roztoku 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1-methyl6-nitro-lH-indol-3-yl)-2 ,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lylmethylesteru kyseliny [2-bis-benzyloxy-phosphoryloxy)ethyl]-karbamové (115 mg, 0,148 mmol) ve směsi THF (5 ml) a EtOH (0,25 ml). Směs se zahřívá při teplotě 50-55 °C po dobu 30 min. Získaná směs se přefiltruje přes celit, promyje se THF a filtrát se odpaří. Zbytek se rozpustí ve směsi EtOH (10 ml) a CH3CN (10 ml). Přidá se 0,1 N NaOH a pH se upraví na 8,2. Přidá se voda (10 ml) pro rozpuštění sraženiny. Organická rozpouštědla se odstraní ve vakuu a lyofilizací červeného roztoku se získá 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lylmethylester kyseliny (2-fosfonooxy-ethyl)-karbamové (59 mg, 62%) ve formě oranžového prášku.

- '·· · ··<

• · ··· ·

Příklad 21: kyselina 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6 nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2, 5-dihydro-pyrrol-lkarboxylová, (2-diethylamino-ethyl)-amid

Do chladného roztoku 3-(l-methyl-3-indolyl)-4-(l-methyl-6nitro-3-indolyl)-lH-pyrrol-2,5-dionu (200 mg, 0,5 mmol) (viz EP Patent 03288026) v THF (7 ml) se přidá po kapkách lithium bis(trimethylsilyl)amid (0,55 mmol, 0,55 ml, 1 M v THF). Získaná červená suspenze se mísí po dobu 15 min. Přidá se bis(p-nitrofenyl)karbonát (213 mg, 0,7 mmol). Roztok se mísí při teplotě 0°C po dobu 0,5 hodiny. Přidá se diethylaminoethylamin (69,7 mg, 0,6 mmol) v THF (2 ml) a míšení pokračuje po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se přečistí rychlou chromatografií za zisku kyseliny 3 (l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-karboxylové, (2-diethylaminoethyl) -amidu (28 mg, 10%).

Příklad 22: Kyselina 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6 nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lkarboxylová, (6-dimethylamino-hexyl)-amid

Tato sloučenina se připraví z dimethylaminohexylaminu postupem podle příkladu 21 (67 mg, 24%).

Příklad 23: Kyselina 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6 nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lkarboxylová, (4-hydroxybutyl)-amid

Do chladného roztoku 3-(l-methyl-3-indolyl)-4-(l-methyl-6nitro-3-indolyl)-lH-pyrrol-2,5-dionu (500 mg, 1,25 mmol) (viz EP Patent 03288026) v THF (7 ml) se přidá po kapkách nbutyllithium (0,86 ml, 1,375 mmol, 1,6 M v hexanu). Získaná »·.

• ·

červená suspenze se mísí po dobu 15 min. Potom se přidá bis(pnitrofenyl)karbonát (532 mg, 1,75 mmol). Získaný roztok se mísí při teplotě 0°C po dobu 1 hodiny. Přidá se 4-aminobutanol (167 mg, 1,875 mmol) v THF (4 ml) a míšení pokračuje po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se přečistí rychlou chromatografií za zisku kyseliny 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrroll-karboxylové, (4-hydroxybutyl)-amidu, ve formě oranžové pevné látky (280 mg, 43%).

Příklad 24: Mono-(4—{[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lkarbonyl]amino}-butyl)ester kyseliny fosforečné, sodná sůl

a) Trifenylfosfin (0,86 g, 3,29 mmol) a dibenzyl fosfát (0,91 g, 3,29 mmol) se přidají do roztoku kyseliny 3-(1-methyl-lHindol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5dihydro-pyrrol-l-karboxylové, (4-hydroxybutyl)-amidu (připraveného způsobem podle příkladu 23, 1,41 g, 2,74 mmol) v THF (50 ml) . Směs se ochladí při teplotě -78°C. Diethylazodikarboxylát (0,52 ml, 3,29 mmol) se přidá po kapkách během 5 min. Chladící lázeň se odstraní a po 2 hodinách se směs odpaří. Chromatografií zbytku přes silikagel za použití 2:1 směsi EtOAc/hexan a potom EtOAc se získá 4-{[3-(1-methyl-lHindol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5dihydro-pyrrol-l-karbonyl]-amino}-butyl-dibenzylesteru kyseliny fosforečné (1,76 g, 83%).

b) Pd/C (0,5 g, 10%) a 1,4-cyklohexadien (1,84 ml, 19 mmol) se přidají do roztoku 4-{[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1-methyl6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lc) rbonyl]-aminojbutyl-dibenzylesteru kyseliny fosforečné (1,76 g, 2,27 mmol) (ze stupně a) ve směsi THF (75 ml) a EtOH (3,8 ml). Získaná směs se zahřívá při teplotě 50-55 °C po dobu 30 ···

• · · · · · min. TLC (EtOAc) ukáže, že zbývá pouze stopové množství 4—{[3— (l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-karbonyl]-amino}-butyl dibenzylesteru kyseliny fosforečné. Směs se přefiltruje přes celit a filtrát se odpaří. Zbytek se rozpustí ve směsi EtOH (100 ml) a CH3CN (lOOml) a alkalizuje se NaOH (0,2 N) na pH=8,2. Přidá se voda (50 ml) pro rozpuštění sraženiny. Organická rozpouštědla se odstraní ve vakuu a lyofilizací červeného roztoku se získá surový produkt (1,2 g). Přečištěním zbytku za použití HPLC (10%-90% CH3CN-H2O) se získá mono-(4{[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-karbonyl]-aminojbutyl) ester kyseliny fosforečné, sodná sůl (0,49 g, 34%), ve formě červeného prášku.

Příklad 25: 0-(2-[[[2,5-dihydro-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4(1-methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-lH-pyrrol-lyljmethoxy]karbonyl]methyl]-0'-methylpolyethylenglykol 2000 &

Póly(ethylenglykol)methylether o průměrné mol. hmot. přibližně 2000 (Aldrich) (4,4 g, 2,2, mmol) v tetrahydrofuranu (120 ml) se zahřeje na přibližně 35-40 °C a do této směsi se přidá hydrid sodný (0,6 g 60%, 15 mmol) a směs se mísí po dobu dalších 15 minut. Ve dvou podílech se během 5 minut přidá terc.butyl-bromoacetát (1,2 g, cca. 6,2 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 45-50°C po dobu 4 hodin. Směs se ochladí na přibližně 30°C, naředí se ethyletherem (100 ml), přefiltruje se za horka přes celit a filtrační koláč se promyje tetrahydrofuranem. Organická rozpouštědla se odpaří a zbytek se zpracuje hromatografií na silikagelu. Přečištěný terc.butylester připravený podobným způsobem (12,5 g) se • ·

......

zpracuje kyselinou triftuorooctovou (75 ml) a mísí se při teplotě místnosti po dobu 90 minut. Odpařením roztoku a krystalizaci z chladného ethyletheru se získá 9,0 g methoxyPEG 2000-kyseliny ethanoové.

Roztok methoxy-PEG 2000-kyseliny ethanové (9,0 g, 4,5 mmol) v dichlormethanu (50 ml) se zpracuje s oxalylchloridem (10 ml), směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 15 minut a potom se přidá stopa dimethylformamidu (0,1 ml). Zahřívání při teplotě zpětného toku pokračuje po dobu dalších 15 minut, přidá se toluen (50 ml) a těkavé složky se odstraní odpařením. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu (50 ml) a přidá se do kaše l-hydroxymethyl-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dionu (1,93 g, 4,5 mmol) (připraveného podle příkladu la) a 4dimethylaminopyridinu (1,1 g, 9 mmol) v dichlormethanu (25 ml) při teplotě -50 °C. Chladící lázeň se odstraní a směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 2 hodin a nalije se na silikagel (200 g) v dichlormethanu. Přečištěním chromatografií a krystalizaci zbytku z tetrahydrofuran-ethyletheru se získá 0[2-[[2,5-dihydro-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-yl]methoxykarbonyl]-methyl-θ'-methylpolyethylenglykol 2000 ve formě červené pevné látky (výtěžek 63%).

Příklad 26: Antiproliferativní aktivita

Antiproliferativní aktivita sloučenin podle předkládaného vynálezu je demonstrována dále. Tyto účinky naznačují, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou použitelné v léčbě zhoubných nádorů, zejména solidních nádorů, jako je karcinom prsu a tlustého střeva.

··· ·

MDÁMB-435 Buněčný test

Buněčná linie epitelového karcinomu prsu (MDAMB-435) byla získána od ATCC (American Type Cell Culture Collection) a kultivovala se v kultivačním mediu podle doporučení ATCC. Pro analýzu různých účinků sloučenin vzorce I na růst těchto buněk se buňky umístily na plotnu v koncentraci 1500 buněk/jamku v 96-jamkové tkáňové kultivační plotně (testovací plotně). Den po umístění buněk se analyzované sloučeniny rozpustily v 100% DMSO (dímethylsulfoxidu) za zisku 10 mM zásobního roztoku. Každá sloučenina se naředí v H2O na 1 mM a přidá se do třech jamek v první řadě 96-jamkové master plotny obsahující medium za dosažení konečné koncentrace 40 μΜ. Sloučeniny se potom sériově naředí v medium v „master plotně. Naředěné sloučeniny se potom přenesou na plotny obsahující buňky. Řada kontrolních buněk dostane DMSO. Konečná koncentrace DMSO v každé jamce byla 0,1%. 5 dnů po přidání léku, a plotna se analyzuje způsobem popsaným dále.

MTT (3-(4-5-methylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromid; thiazolylová modř) se přidá do každé jamky za dosažení konečné koncentrace 1 mg/ml. Plotna se potom inkubuje při 37°C po dobu 2 1/2-3 hodin. MTT-obsahující medium se potom odstraní a do každé jamky se přidá 50 μΐ 100% ethanolu pro rozpuštění formazanu. Absorbence se potom odečítají za použití automatizované čtečky ploten (Bio-tek čtečka mikroploten).

IC50 se vypočítají za použití Reedovi a Munschovi rovnice, viz Am. J. Hygiene Vol. 27, str. 493-497, 1938.

Výsledky uvedených pokusů in vitro jsou uvedeny v následující tabulce 1.

Každá ze sloučenin v tabulce 1 má IC50 1,00 μΜ.

··»·

4· · • 4

4·

444

444 44 • · · 4 · ·

4

4444

Tabulka I

R N TJ 0” I 1
1 Příklad	R	; Schéma
6b	chT°Y^ o	la
7	O	la
8b,11	°^°γ^₂ o	la í í I
8a, 9,10	Γ^^ΝΗ ch/Y^ o	la
13	O ΡΕθ,οοο O	lb l I i I 1
12	^CH2 O	lb

·· ···· ♦· *·, ► * · » · ?

V γ ν b' 1 f
J Příklad	R	Schéma i
2	f^N OH-V^ O	lb
3a	cHr^oyO o	lb
3f	o OH O	lb
5	cHr°Y^{C^^CH3 o	la
39	CH₂ ^/°^^X/X/Xk O	lb
4	0 ΟΗ/^θ'γ^⁵^^ OH O	lb f
3h	O /OQ Jk CH^ O3 7^^ OH 8 ³	lb ; » i i 1 1 1
6a	ΟΗ^θΥ^Ο-^^^θΗ^ o ²	la 1

φφ φ· ··· φφ

39_

? _ό-
Příklad 1	R	' Schéma-
3b	θ ΡΕθ 2000	lb
3c	•'ΎΊΟ	1b
3d	“ΎΌ	lb
3e	ΗΐΓ ο	lb
15	ο_Η/θγΜ ^PEG- 0	lb i
14	_xí;\,OPO₃HNa 0	ib
16	X). ..CL .χχ. CY Υ Ο	111
17	Η /0. ,Ν. «< ° k	IV
18	Η ,Ο. J4. .ΟΗ ch/ γ Ο	IV

»0 00»· ·· · ·· • 0 ·· » · ·

·· · ♦ * • ·

000

000·

R 1	₀
	Cti N ř	hO- N i	-N* b- ' i
Příkladt	R	Schémat í i
19	CH-V' O	'^^zXX'OH		IV i i i t
20	ch/ γ 0	'^^x'OPO₃Na₂		IV i i
1	CH₂opo₃Na₂	í II j
21		v
22	H 0	l		v { í I
23	H 0	/^OH		v í
24	H 0	^OPOjNaj		í v
25	CHC Y ° 0	ΡεθϋΟΟΟ	fh-	lb I 1 1 1 1 1 1

• 4

4 * • 4 4

4· ·*4· *·

4 · ·

« ·

4

4444

	H J PEG^ ”	v
	,αΑ^ o	v
	o	v
		v
	o	IV
1	-ch₂oh	1

Měření plasmatické konverze representativních sloučenin vzorce I ukazuje, že tyto sloučeniny se skutečně mění na farmaceuticky aktivní metabolity v časovém rozmezí vhodném pro terapeutické použití. Dále, měření stability některých representativních sloučenin vzorce I ukazuje, že tyto sloučeniny mají dosti dobrou stabilitu v těch roztocích, které jsou obvykle používány pro terapeutické podávání intravenosních léků. Výsledky těchto měření plasmatické konverze a stability jsou uvedeny v následující tabulce II. Proto jsou tyto sloučeniny vhodné pro podání formou kontinuální infuse.

• 9 • 9 ··· • 9 • 9 9

9* • · • · ··· « «

·· ···· • · · 9 · * · · · · »9 *

Tabulka II

R t

Příklad	R	Stabilita	Plasmatick4 ₍kon verze _t	Schéma 5
8a, 9, 10	O	dobrá	30% @30min	ia i
13	PEG,occ O	dobrá	N/D*	lb
12	fY US cHy°Y^- o	pokojivá	60% @30min	ib
3a	«yyQ o	dobrá	70% @30min	Ib J t Ϊ
3f	o ^ch2^°^vjT^^zX^ ^oh o	dobrá	20% @30min	Ib
3g	O	dobrá	N/D*	^lb I
3h	o ch₂ ^/°'^^o-Y^s^^°Y-^x^oh o	uspokoj i v	á N/D*	Ib

• · • · · ·

43.

	R N ^XN^ O I I
Příklad)	R	Stabilita f	Plasmatická konverze	Schémaie
3b	οΗ^θγ^^θΗ^^οo ^PEGax*	dobrá	80% @30min	ib t
3c	^CHí°Y~V^ O S^N	dobrá	60% @30min	Ib
3d	“XO	dobrá	70% @30min	Ib
15	^{PEG 500} o	dobrá	100% @2h	Ib
14	^^-OPO₃HNa o	dobrá	5% @4b	Ib
17	H .CL .N. ΟΗΤΥ'^Ρ' ° k	dobrá	15% @6h	IV J » I
20	H .CL .N. .—_ CF< γ ^^OPO^a, 0	dobrá	N/D*	IV
1	CH2OPO3NS2	dobrá	100% @30min	II J i I t
21	if ⁰ k	spokoj ivá	100% @1h	v í

• ·

R

I

ι

I

{Příklad·;	R	Stabilita·	Plasmatická konverze,	....... - Schéma I
22	ί^Χ^^,Αχ o	dobrá	N/D*	v í
24	H O	dobrá	10% @6hrs	v
	0 PEG 2000	dobrá	N/D*	V

* neprovedeno

Příklad 27: Tabletový prostředek

Položk a	Složka	mg/tabletu
1	Sloučenina A*	5	25	100	250	500	750
2	bezvodá laktosa	103	83	35	19	38	57
3	kroskarmellosa sodná	6	6	8	16	32	48
4	Povidon K30	5	5	6	12	24	36
5	magnesium-stearát	1	1	1	3	6	9
	celková hmotnost	120	120	150	300	600	900

* sloučenina A je sloučenina podle předkládaného vynálezu

Způsob přípravy

1. Položky 1, 2 a 3 se smísí ve vhodném míchacím zařízení • · během 15 minut.

2. Prášková směs ze stupně 1 se granuluje s 20% roztokem Povidonu K30 (položka 4) .

3. Granule ze stupně 2 se suší při 50 °C.

4. Granule ze stupně 3 se rozemelou na vhodném mlecím zařízení.

5. K rozemletým granulím ze stupně 4 se přidá položka 5 a směs se mísí po dobu 3 minut.

6. Granule ze stupně 5 se lisují na vhodném lisu.

Příklad 28: Kapsle

Položk a	Složka	mg/tabletu
1	Sloučenina A*	5	25	100	250	500
2	bezvodá laktosa	159	123	148	-	-
3	Kukuřičný škrob	25	35	40	35	70
4	Talek	10	15	10	12	24
5	magnesium-stearát	1	2	2	3	6
	celková hmotnost náplně	200	200	300	300	600

* sloučenina A je sloučenina podle předkládaného vynálezu

Způsob přípravy

1. Položky 1, 2 a 3 se smísí ve vhodném míchacím zařízení během 15 minut.

• ·

2. Přidají se položky 4 a 5 a směs se	mísí po dobu 3 minut.
3. Směs	se plní do vhodných kapslí.
Příklad	29: Injekční roztoky/emulze
Položka	Složka	mg/ml
1	Sloučenina A*	1 mg
2	PEG 400	10-50 mg
3	Lecitin	20-50 mg
4	Sojový olej	1-5 mg
5	Glycerol	8-12 mg
6	Voda q.s.	1 ml

★ sloučenina A je sloučenina podle předkládaného vynálezu

Způsob přípravy

1. Položka 1 se rozpustí v položce 2.

2. Položky 3, 4 a 5 se přidají do položky 6 a směs se mísí do dispergování a potom se homogenizuje.

3. Roztok ze stupně 1 se přidá do směsi ze stupně 2 a směs se homogenizuje do zisku průhledné směsi.

4. Směs se sterilně filtruje přes 0,2 gm filtr do fiol.

Příklad 30: Injekční roztoky/emulze • ·· ·· ··

Položka

Složka	mg/ml
Sloučenina A*	1 mg
Glykofurol	10-50 mg
Lecitin	20-50 mg
Sojový olej	1-5 mg
Glycerol	8-12 mg
Voda	q.s. 1 m

* sloučenina A je sloučenina podle předkládaného vynálezu

Způsob přípravy

1. Položka 1 se rozpustí v položce 2.

4. Směs se sterilně filtruje přes 0,2 μπι filtr do fiol.

Vynález byl nyní popsán na specifických a výhodných provedeních, ale odborníkům v oboru bude jasné, že existují různé jeho modifikace. Vynález je tedy omezen pouze připojenými patentovými nároky a jejich ekvivalenty.

• ·

Patentové

• · · * I .* *··· • · · · * · ·· · ·· ···· />Z k y

Claims

1. Sloučenina vzorce a její farmaceuticky přijatelné soli, kde R je vybrán ze skupiny zahrnující -CH

2OPO3R¹R², -CH2OH, CH2OCOR³, -CH2OCO2³, -CH2OCONHR³ a -CONHR³;

R¹ a R² jsou vybrány ze skupiny zahrnující H, Na a Níh a jsou stejné, pokud není jeden z R¹ nebo R² vodík, kdy může být druhý z nich odlišný, nebo alternativně, R¹ a R² znamenají dohromady vápník;

R³ je vybraný ze skupiny zahrnující alkyl, který volitelně může být substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -CO2R⁴, -NR⁵R⁶, polyethylenglykol,

-ΟΡύ^’Ή², hydroxy, alkoxy a aryl; alkenyl, který může být volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -CO2R⁴, -NR⁵R⁶, polyethylenglykol, -0P03R¹R², hydroxy, alkoxy a aryl; cykloalkyl, který může být volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -CO2R⁴, -NR⁵R⁶, polyethylenglykol, -0P03R¹R², hydroxy, alkoxy a aryl;

heterocyklus, který když obsahuje N jako heteroatom, tak může být N volitelně substituovaný nižším alkylem a —COR⁷, aryl, který může být volitelně substituovaný jedním nebo . z z 4 více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující CO2R , « 9 • 9 hydroxy, alkoxy, polyethylenglykol, OPO3R¹R² a alkyl, který sám může být substituovaný hydroxy, alkoxy, karboxy a substituovanou amino skupinou, s podmínkou, že když aryl znamená pyridin, tak může být dusík substituovaný nižším alkylem;

R⁴ je vybraný ze skupiny zahrnující H, Na a nižší alkyl;

R⁵ a R⁶ jsou každý nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující

H, nižší alkyl a COR , nebo alternativně, skupina —NR R dohromady tvoří 5- nebo 6-členný heterocyklický kruh; a

a její farmaceuticky přijatelné soli, kde R je vybrán ze skupiny zahrnující -CH2OPO3R¹R², -CH2OH, CH2OCOR³, -CH2OCO2³, -CH2OCONHR³ a -CONHR³;

R¹ a R² jsou vybrány ze skupiny zahrnující H, Na a NH4 a jsou stejné, pokud není jeden z R¹ nebo R² vodík, kdy může být druhý z nich odlišný, nebo alternativně, R¹ a R² znamenají dohromady vápník;

R³ je vybraný ze skupiny zahrnující alkyl, který volitelně může být substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující -CO₂R⁴, -NR⁵R⁶, polyethylenglykol, -OPO3R¹R², hydroxy, alkoxy a aryl; alkenyl, který může být volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny ·· '···'·' zahrnující -CO2R⁴, -NR⁵R⁶, polyethylenglykol, -0P0₃R¹R², hydroxy, alkoxy a aryl;

heterocyklus, který když obsahuje N jako heteroatom, tak může být N volitelně substituovaný nižším alkylem a —COR⁷, aryl, který může být volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny zahrnující CO2R⁴, hydroxy, alkoxy, polyethylenglykol, OPO3R¹R² a alkyl, který sám může být substituovaný hydroxy, alkoxy, karboxy a substituovanou amino skupinou, s podmínkou, že když aryl znamená pyridin, tak může být dusík substituovaný nižším alkylem;

R⁴ je vybraný ze skupiny zahrnující H, Na a nižší alkyl;

R⁵ a R⁶ jsou každý nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující

H, nižší alkyl a COR⁷, nebo alternativně, skupina —NR⁵R⁶dohromady tvoří 5- nebo 6-členný heterocyklický kruh; a

3. Sloučenina podle nároku 2, kde R je vybraný ze skupiny zahrnující -CH₂OPO₃R¹R² a -CH₂0C0R^3,

4. Sloučenina podle nároku 2, kde R je — CflteOCO-pyridin, kde N atom pyridinu je substituovaný nižším alkylem.

5. Sloučenina podle nároku 4, kde N atom pyridinu je substituovaný methylem nebo ethylem.

6. Sloučenina podle nároku 2, kde R¹ a R² jsou nezávisle vybraně ze skupiny zahrnující H a Na.

7. Sloučenina podle nároku 2, kde R³ je heterocyklus obsahujících alespoň jeden atom dusíku, který volitelně může být substituovaný —COR .

8. Sloučenina podle nároku 2, kde R³ je aryl, který je substituovaný —OPO₃R¹R², a R¹ a R² jsouu nezávisle vybrané z H a Na.

9. Sloučenina podle nároku 2, kde R³ je aryl, který je substituovaný skupinou vybranou ze skupiny zahrnující -C02Na, polyethylenglykol a -CH2CH2N (CH2CH2) 2.

10. Sloučenina podle nároku 2, kde R₃ je nižší alkyl, který je substituovaný -CO2Na.

11. Sloučenina podle nároku 2, kde skupina NR⁵R⁶ dohromady tvoří 5- nebo 6-členný heterocyklický kruh.

12. Sloučenina podle nároku 11, kde skupina NR⁵R⁶ je vybraná z piperidinu nebo pyrrolidinu.

13. Sloučenina podle nároku 2, kde R⁵ a R⁶ jsou každý nezávisle vybrané ze skupiny zahrnující H, methyl a ethyl.

14. Sloučenina podle nároku 2, kde R⁷ je ethyl, který je substituovaný polyethylenglykolem.

15. Sloučenina podle nároku 2, kde R je -CH2OCOR³ a R³ je ethyl, který je substituovaný polyethylenglykolem majícím molekulovou hmotnost od přibližně 750 do přibližně 5000 Daltonů.

16. Sloučenina podle nároku 2, kde polyethylenglykol má molekulovou hmotnost od přibližně 750 do přibližně 5000 Daltonů.

17. Sloučenina vybraná ze skupiny zahrnující:

·· • · ♦· » · · <

»« ····

Mono-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethyl]kyselina fosforečná, sodná sůl;

l-hydroxymethyl-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6nitro-lH-indol-3-yl)-pyrrol-2,5-dion;

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny ísonikotinové;

Mono-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethyl]ester kyseliny but-2-endioové;

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny děkanové;

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny 3amino-cyklohexankarboxylové, trifluoracetát;

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-riitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny piperidin-4-karboxylové, acetát;

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny piperidin-4-karboxylové, hydrochlorid;

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny 2amino-2-methyl-propionové, hydrochlorid;

l-methyl-3-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lylmethoxykarbonyl]-pyridinium, trifluoracetát; a

0-[2-[[4-[[[2,5-dihydro-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1methyl-6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-lH-pyrrol-lyl]methoxy]karbonyl]-1-piperidinyl]karbonyl]ethyl]-0' methylpolyethylenglykol 1000.

····

18. Sloučenina vybraná ze skupiny zahrnující:

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny 4fosfonoxybenzoové, monosodná sůl;

[[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1-methyl-6-nitro-lH-indol3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-yl]methoxykarbonyl]-4fenyl-O-methylpolyethylenglykol 500;

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester allylesteru kyseliny uhličité;

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny (2dimethylamino-ethyl)-karbamové;

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny [2(2-hydroxy-ethoxy)-ethyl)-karbamové;

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny (2hydroxy-ethyl)-karbamové;

3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lH-indol-3yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-ylmethylester kyseliny (2fosfonooxy-ethyl)-karbamové;

kyselina 3- (l-methyl-lfí-indol-3-yl) -4- (l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-karboxylová, (2diethylamino-ethyl)-amid;

kyselina 3-{l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-{l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-karboxylová, (6dimethylamino-hexyl)-amid;

kyselina 3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitro-lHindol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-karboxylová, (4hydroxybutyl)-amid; a mono-{4—{[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitrolH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-karbonyl]• 4

....... 4 · • 4 4 • ·

4 4 4 amino}-butyl)ester kyseliny fosforečné, sodná sůl.

19. Sloučenina vybraná ze skupiny zahrnující:

Kyselina mono-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lylmethyl]fosforečná, sodná sůl;

0- [2-[[2,5-dihydro-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-{1-methyl6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-lyl]methoxykarbonyl]ethyl]-0'-methylpolyethylenglykol 2000;

mono-(4—{[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-6-nitrolH-indol-yl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l-karbonyl]-amino}butyl)ester kyseliny fosforečné, sodná sůl;

l-methyl-3-[3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(l-methyl-e-nitrolH-indol-S-yl) -2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyrrol-l~ ylmethoxykarbonyl]-pyridinium trifluoracetát; a

O- [2-([[2,5-dihydro-3-(l-methyl-lH-indol-3-yl)-4-(1-methyl6-nitro-lH-indol-3-yl)-2,5-dioxo-lH-pyrrol-l-yl]methoxy]karbonyl]methyl]-O'-methylpolyethylenglykol 2000.

20. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku účinné množství sloučeniny podle nároku 1 a farmaceuticky přijatelný nosič nebo přísadu.

21. Farmaceutický prostředek podle nároku 20, který je vhodný pro parenterální podání.

22. Použití terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 pro léčbu buněčných proliferativních onemocnění.

23. Použití podle nároku 22, kde buněčným proliferativním onemocněním je zhoubný nádor.

• ··

24. Použití podle nároku 23, kde zhoubným nádorem je solidní nádor.

25. Použití podle nároku 23, kde solidním nádorem je karcinom prsu, tlustého střeva nebo plic.