CZ20012694A3 - Způsob čiątění kyseliny hyalurové o vysoké molekulové hmotnosti - Google Patents
Způsob čiątění kyseliny hyalurové o vysoké molekulové hmotnosti Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20012694A3 CZ20012694A3 CZ20012694A CZ20012694A CZ20012694A3 CZ 20012694 A3 CZ20012694 A3 CZ 20012694A3 CZ 20012694 A CZ20012694 A CZ 20012694A CZ 20012694 A CZ20012694 A CZ 20012694A CZ 20012694 A3 CZ20012694 A3 CZ 20012694A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- molecular weight
- high molecular
- aqueous solution
- diafiltration
- Prior art date
Links
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims abstract description 114
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims abstract description 114
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 114
- 238000000746 purification Methods 0.000 title description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 69
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 43
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims abstract description 35
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 42
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 30
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 20
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 19
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 19
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 17
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims description 15
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 7
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- 241000194048 Streptococcus equi Species 0.000 claims description 3
- 241000120569 Streptococcus equi subsp. zooepidemicus Species 0.000 claims description 2
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 claims description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 43
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 8
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 8
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 6
- WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-3-[(2s,3r,5s,6r)-3-acetamido-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5,6-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 229940014041 hyaluronate Drugs 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 5
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000003134 recirculating effect Effects 0.000 description 3
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 3
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical group O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 2
- 210000001520 comb Anatomy 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000561734 Celosia cristata Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Chemical group CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000008952 bacterial invasion Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000001050 lubricating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000002374 sebum Anatomy 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polyethers (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu čištění kyseliny hyaluronové o vysoké molekulové hmotnosti nebo její soli.
Dosavadní stav techniky
Kyselina hyaluronové je mukopolysacharid biologického původu v přírodě značně rozšířený. Je například známé, že kyselina hyaluronová je obsažená v živočišných tkáních jako v pupeční šňůře, synoviální tekutině, ve sklivci, v kohoutím hřebenu a v různých pojivových tkáních jako v kůži a v chrupavce.
Chemicky patří kyselina hyaluronová mezi glykosaminoglykany a obsahuje střídající se a opakující se jednotky D-glukuronové kyseliny a N-acetyl-D-glukosaminu tvořící lineární řetězec o molekulové hmotnosti až do 13 χ 106 Daltonů.
Výraz kyselina hyaluronová o vysoké molekulové hmotnosti používaný v přihlášce tohoto vynálezu znamená kyselinu hyaluronovu o molekulové hmotnosti, jejíž hodnota není menší než asi 0,5 χ 106 Daltonů.
Je zapotřebí upozornit na skutečnost, že výraz kyselina hyaluronová uváděný v popisu vynálezu i v patentových nárocích může znamenat bez rozlišování jak kyselinu hyaluronovou ve své kyselé formě, nebo může znamenat její sůl například natrium• · tt tt ·· tt • tttttt tt tt • · tttt · hyaluronát, kalium-hyaluronát, magnesium-hyaluronát, kalciumhyaluronát nebo další.
Kyselina hyaluronová o vysoké molekulové hmotnosti je viskózní a je schopná si zachovávat gelovitý stav, má lubrikační účinky a zabraňuje invazi bakterií a zadržuje vodu.
Díky těmto vlastnostem kyselina hyaluronová umožňuje zachovávat tonicitu a elasticitu kůže.
V literatuře existují obsáhlé údaje o farmaceutickém použití kyseliny hyaluronové nebo její soli.
Protože kyselina hyaluronová je neimunogenní sloučenina a má viskózně-elastické a hydrofilní vlastnosti, používá se již několik let jako náhrada sklivce nebo kloubního mazu nebo jako nosné médium v oční chirurgii jak je popsané například v US-A4,141,973, Balazs.
V kloubních mazech působí roztok kyseliny hyaluronové jako kluzný prostředek poskytující buňkám ochranné prostředí, a proto se používá pro léčbu zánětu kolenních kloubů.
V EP-A-0 781 547, Chemedica S.A, je popsaný oftalmický přípravek obsahující natrium-hyaluronát pro použití v oční chirurgii.
V EP-A-0 719 559, Chemedica S.A, jsou popsané viskózní roztoky natrium-hyaluronátu vhodné jako maskovací tekutiny při terapeutické fotokeratektomii pomocí excimer-laseru.
V EP-A-0 875 248, Chemedica S.A, je popsané použití kyseliny hyaluronové nebo některé z jejích farmaceuticky
| ·· · | * | • ·· ♦ | ||||
| • · | • · | φ· | • | • | • · | |
| • | • | « | • | • | • | |
| • | • · | • | • | • · | • | |
| • | • | Φ | • | • | • | |
| ··♦· | • · « | ♦ ·· | ·· | ·· |
přijatelných solí pro přípravu vodných roztoků vhodných jako tekutiny pro intraartikulární.výplachy.
V EP-A-0 698 388, Chemedica S.A, je popsaný oftalmický přípravek sloužící jako náhrada slz, který obsahuje hyaluronát jako prostředek pro zvýšení viskozíty.
Díky své vysoce hydrofilní podstatě, je možné kyselinu hyaluronóvou použít také v kosmetických produktech jako v pleťových vodách a krémech.
Pro farmaceutické použití kyseliny hyaluronové nebo její soli se vyžaduje, aby uvedené složky byly ve vysoce čisté formě.
Kyselinu hyaluronovou lze extrahovat a získat přečištěním například z pupeční šňůry, z kohoutích hřebínků nebo ze streptokoků skupiny A a C jak je popsané například v (JS-A4,141,973, Balasz a v US-A-5,559,104, Romeo a sp.
Přípravu kyseliny hyaluronové s použitím streptokoků poprvé popsali Forres a sp., v roce 1937 (J.Biol.Chem., 118, (1937) a později bylo prokázané, že kyselina hyaluronová získaná ze zvířecích zdrojů je totožná s kyselinou hyaluronovou získanou z mikrobiologických zdrojů.
Způsoby přípravy kyseliny hyaluronové z mikrobiologických zdrojů jsou založené na vlastnosti streptokoků, že jejich buněčná stěna obsahuje jako hlavní složku kyselinu hyaluronovou.
Uvedené mikroorganismy jsou schopné transformovat glukosu obsaženou v jejich životním prostředí na D-glukuronovou • · * · · · · ft • · · · 999· £ ··♦···
9999 999 999 999 99 9 kyselinu a N-acetyl-G-glukosamin a jako sekundární metabolit produkovat kyselinu hyaluronovou pro tvorbu své ochranné stěny.
Biosyntéza kyseliny hyaluronové je popsaná například v US-A-4,897,349, Swann a sp.
Pro získávání kyseliny hyaluronové nebo její soli z mikrobiologických zdrojů ve farmaceutické čistotě je známých více způsobů.
Například v US-A-4,780,414, Nimrod a sp., US-A-4,517,295, Bracke a sp., a v US-A-5,563,051, Ellwood a sp, jsou uvedené způsoby získávání kyseliny hyaluronové kontinuální fermentací bakterií rodu Streptococcus s následným přečištěním až na farmaceutickou čistotu.
Nicméně ve všech uvedených procesech způsoby čištění kyseliny hyaluronové zahrnují vysrážení kyseliny hyaluronové z mikrobiologického prostředí s použitím velkých množství organických rozpouštědel jako je ethanol, aceton, isopropanol atd.
Jsou také známé některé způsoby čištění kyseliny hyaluronové z mikrobiologických zdrojů s použitím kvarterních amoniových solí (US-A-4,517,295, Bracke a sp.) nebo s použitím aniontových nebo kationtových povrchově aktivních prostředků (US-A-5,316,926, Brown a sp.).
Nicméně výše popsané způsoby jsou vcelku složité, což vede k vysoké ceně produktů.
Jsou také známé způsoby čištění, kde roztok kyseliny hyaluronové se zpracuje diafiltrací s použitím filtru s nominální hodnotou separace molekulové hmotnosti 10 000,
000 nebo 30 000 Daltonů, popsané například v US-A5,563,051, Ellwood a sp., a v US-A-4,517,295, Bracke a sp.
Nicméně, vzhledem k nízké hodnotě separačního limitu molekulové hmotnosti lze výše uvedené diafíltrační způsoby použít pouze k odstranění velmi malých molekul a diafiltrovaný roztok obsahující kyselinu hyaluronovou musí být dále zpracován způsoby zahrnujícími různé způsoby srážení, což vede k tomu, že uvedené způsoby zůstávají i nadále složité.
Cílem předloženého vynálezu je poskytnou způsob získávání kyseliny hyaluronové nebo její soli vysoké molekulové hmotnosti mající farmaceuticky přijatelnou čistotu z biologických zdrojů, zvláště z mikrobiologických zdrojů, ve vysokém výtěžku, při poměrně nízkých nákladech a výhodně bez použití organických rozpouštědel nebo bez přídavku dalších prostředků.
Podstata vynálezu
Výše uvedený cíl lze podle vynálezu docílit způsobem čištění kyseliny hyaluronové o vysoké molekulové hmotnosti z biologického zdroje charakterizovaným tím že zahrnuje následující stupně:
a) stupeň úpravy pH vodného roztoku obsahujícího kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti pocházející z biologického zdroje na pH v rozmezí 1,7 až 3,3 s následnou diafiltrací uvedeného roztoku při stejné hodnotě pH s použitím
filtru ο velikosti pórů s nominálním separačním limitem molekulové hmotnosti od 100 000 Daltonů do 0,45 pm;
b) stupeň odstranění buněk z vodného roztoku obsahujícího kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti pocházející z biologického zdroje, kde uvedený stupeň se provede před stupněm (a) nebo po stupni (a);
c) stupeň sterilizace.
Výše uvedeným způsobem zahrnujícím stupeň diafiltrace při pH v rozmezí od 1,7 do 3,3 a stupeň odstranění buněk lze tak výhodně přečistit kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti z biologického zdroje a zejména z mikrobiologického zdroje a získat tak kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti nebo její sůl ve farmaceuticky přijatelné čistotě a ve vysokém výtěžku.
Ve stupni (a) způsobu podle vynálezu se kyselina hyaluronová zpracuje diafiltrací s použitím filtru nominálního limitu separace molekulové hmotnosti nebo velikosti pórů umožňujícího recirkulaci kyseliny hyaluronové a průchod všech ostatních složek obsažených v roztoku nebo v půdě filtrem.
Způsob podle vynálezu lze provést s použitím jakéhokoliv biologického zdroje kyseliny hyaluronové.
Způsobem podle vynálezu lze kyselinu hyaluronovou ve farmaceuticky přijatelné čistoty výhodně připravit bez stopových průvodních množství organických rozpouštědel nebo dalších přidávaných složek, protože způsob čištění podle vynálezu nezahrnuje srážení organickými rozpouštědly nebo
9
9·· 9 * 9 • · 9
9
9949 444 4 dalšími prostředky, nýbrž kyselina hyaluronová zůstává v celém průběhu uvedeného způsobu udržovaná v roztoku.
Další cíle, vlastnosti a výhody vynálezu budou zřejmé z následujícího podrobného popisu.
Způsobem podle vynálezu je možné přečistit kyselinu . hyaluronovou z jakéhokoliv biologického zdroje až na farmaceuticky přijatelnou čistotu.
Například vodný roztok kyseliny hyaluronové obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti určený k prvotnímu zpracování buď ve stupni (a) podle vynálezu nebo ve stupni (b) podle vynálezu může být vodný roztok obsahující kyselinu hyaluronovou získaný extrakci pupeční šňůry, kohoutích hřebínků nebo jiných zdrojů.
Nicméně ve výhodném provedení podle vynálezu je vodný roztok kyseliny hyaluronové obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti určený nejprve ke zpracování buď ve stupni (a) podle vynálezu nebo ve stupni (b) podle vynálezu vodná půda obsahující kyselinu hyaluronovou z mikrobiologického zdroje.
Mikrobiologický zdroj je výhodně mikroorganismus rodu Streptococcus produkující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti, a ještě výhodněji se mikrobiologický zdroj zvolí ze skupiny zahrnující Streptococcus zooepidemicus, Streptococcus equi a Streptococcus pyogenes.
Půdy obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti lze připravit kterýmikoliv způsoby v oboru dobře známými, zahrnujícími fermentaci kultury Streptococcus ve
4· • β • · 4· · · · · ·»*
4 4 • 44 4*4 4· vhodném vodném médiu a za vhodných podmínek za tvorby kyseliny hyaluronové o vysoké molekulové hmotnosti. Uvedené způsoby jsou popsané například v US-A-4,780,414, Nimrod a sp., US-A5,563,051, Ellwood a sp., nebo v US-A-5,316,916, Brown a sp.
Způsob přípravy vodné půdy obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti podle vynálezu lze provést například následovně:
Na konci obvykle používaného fermentačního způsobu se půda mající pH asi 7,4 obsahující kyselinu hyaluronovoupřevede do nádrže opatřené systémem pro automatické řízení teploty.
Teplota se pak udržuje na hodnotě v rozmezí od 15 °C do 25 °C, výhodně na 20 °C.
Vodný roztok kyseliny hyaluronové nebo půda obsahující kyselinu hyaluronovou se pak zpracuje způsobem čištění podle vynálezu.
Odstranění veškerých proteinů a dalších rozpustných složek obsažených ve vodném roztoku se pak provede ve stupni (a) diafiltrací roztoku získaného z biologického zdroje o pH v rozmezí od 1,7 do 3,3 s použitím filtru o velikosti pórů v rozmezí od separačního limitu nominální molekulové hmotnosti 100 000 Daltonů do 0,45 pm.
Předpokládá se, že když se pH roztoku kyseliny hyaluronové upraví na hodnotu v rozmezí od 1,7 do 3,3, dojde ke vzniku určitého typu zesítění, kde molekuly kyseliny hyaluronové vytvoří síť, která se za podmínek jiných hodnot pH rozpadne.
• · · «· » · · • (·
9 9
9 *
V rozmezí hodnot pH od 1,7 do 3,3 tato síť neprochází filtrem o velikosti pórů v rozmezí velikosti od separačního limitu nominální molekulové hmotnosti 100 000 Daltonů do 0,45 pm, zatímco ostatní složky procházejí filtrem, což umožňuje separaci kyseliny hyaluronové od veškerých rozpuštěných složek obsažených v roztoku.
Ve stupni (a) se pH vodného roztoku výhodně upraví na hodnotu v rozmezí od 2,0 do 2,7 a pak se provede diafiltrace při uvedené hodnotě pH.
Ještě výhodněji se ve stupni (a) pH vodného roztoku upraví na hodnotu v rozmezí od 2,3 do 2,7 a pak se provede diafiltrace při uvedené hodnotě pH.
Ve stupni (a) se pH výhodně upraví pomocí vodného roztoku
HCI.
V prvním výhodném provedení podle vynálezu, se stupeň (b) zahrnující odstranění buněk provede až po stupni (a) zahrnujícím diafiltraci, kde pH vodného roztoku nebo půdy obsahující kyselinu hyaluronovou z biologického zdroje se nejprve upraví na hodnotu v rozmezí od 1,7 do 3,3, výhodně na hodnotu v rozmezí od 2,5 do 2,6, výhodně vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové.
Při uvedených hodnotách pH, se vodný roztok nebo půda obsahující kyselinu hyaluronovou převede na viskozně-elastický vodný roztok nebo půdu obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti v zesítěném stavu.
• · • · ····
Takto připravený vodný roztok nebo půda obsahující kyselinu hyaluronovou. o vysoké molekulové hmotnosti se pak podrobí diafiltraci, výhodně diafiltraci s příčným rozvodem toku, za udržování hodnoty pH na konstantní hodnotě během celého diafiltračního stupně.
Zvláště výhodné je, když filtr použitý ve stupni (a) rafinačního způsobu podle prvního výhodného provedení vynálezu má velikost pórů 0,2 pm.
V uvedeném stupni (a) zahrnujícím diafiltraci, se viskozně-elastický vodný roztok nebo půda obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti čerpá do filtrační komory s příčným rozvodem toku opatřené vhodným počtem filtračních vložek o velikosti pórů v rozmezí od separačního limitu nominální molekulové hmotnosti 100 000 Daltonů do 0,45 pm, výhodně velikosti pórů 0,2 pm za přívodu apyrogenní destilované vody do zásobníku obsahujícího viskozně-elastický roztok obsahující kyselinu hyaluronovu o vysoké molekulové hmotnosti stejnou rychlostí jakou se odvádí filtrát aby byl zachován konstantní objem.
Ve stupni (a) rafinačního procesu podle prvního výhodného provedení vynálezu se viskozně-elastický roztok nebo půda obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti výhodně diafiltruje tak dlouho, dokud odstraňovaný filtrát nemá absorbanci (optickou hustotu, OD) při vlnové délce 280 nm rovnou nebo nižší než 0,02. V tomto případě by absorbance filtrátu při uvedené vlnové délce měla být sledovaná během celého diafiltračního procesu.
Podle uvedeného prvního výhodného provedení vynálezu, po stupni (a) zahrnujícím diafiltraci následuje stupeň (b),
zahrnující odstranění buněk, výhodně stupeň (b) který zahrnuje odstřeďování k odstranění veškerých buněk nebo proteinů obsažených v diafiltrovaném roztoku nebo půdě.
V případě mikrobiologického zdroje může stupeň odstřeďování zahrnovat například úpravu pH diafiltrované půdy na .pH na rozmezí od 3,5 do 5,0, výhodně na 4,0 a potom odstředění diafiltrované vodné půdy za získání supernatantu obsahujícího kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti.
Výhodně se hodnota pH diafiltrované půdy upraví pomocí vodného roztoku NaOH. Nicméně je možné použit i jiné alkalické roztoky.
Podle uvedeného prvního výhodného provedení, po stupni (b) zahrnujícím odstranění buněk se provede sterilizační stupeň (c).
Podle druhého výhodného provedení způsobu podle vynálezu se stupeň (b) zahrnující odstranění buněk provede před stupněm diafiltrace (a).
V uvedeném druhém výhodném provedení se stupeň (b) odstranění buněk výhodně provede v diafiltračním stupni s příčným rozvodem toku.
V uvedeném diafiltračním stupni odstraňováni buněk (b) se pH vodného roztoku kyseliny hyaluronové nebo půdy získané z biologického zdroje nejprve upraví na 3,5 výhodně vodným roztokem HCl, a potom se získaný vodný roztok nebo půda diafiltruje při uvedeném pH s použitím filtru o velikosti 0,2 pm.
• ·
V uvedeném diafiltračním stupni (b) odstraňování buněk se vodný roztok nebo půda obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti čerpá do filtrační komory s příčným rozvodem toku opatřené vhodným počtem filtračních vložek o velikosti pórů 0,2 pm za přívodu sterilní apyrogenní destilované vody do zásobníku obsahujícího vodný roztok obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti stejnou rychlostí jakou se odvádí filtrát aby byl zachován konstantní objem.
Při uvedené hodnotě pH umožňuje filtr o velikosti pórů 0,2 pm recirkulaci buněk a průchod kyseliny hyaluronové filtrem.
Ve stupni (b) rafinačního způsobu podle druhého výhodného provedení se vodný roztok obsahující kyselinu hyaluronovou výhodně o vysoké molekulové hmotnosti diafiltruje až do dosažení přídavku 10 ekvivalentních objemů apyrogenní destilované vody.
Ve stupni (a) uvedeného druhého výhodného provedení se pH vodného roztoku kyseliny hyaluronové v podstatě prosté buněk získané ve stupni (b) nejprve upraví na 1,7 až 3,3, výhodně na 2,4, výhodně pomocí vodného roztoku HCI.
Při uvedené hodnotě pH se vodný roztok kyseliny hyaluronové převede na velmi viskozně-elastický roztok obsahující kyselinu hyaluronovou v zesítěném uspořádání.
Takto získaný vodný roztok obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti se pak diafiltruje, výhodně v procesu s příčným uspořádáním toků, přičemž hodnota
0 0
0 0 ♦
0 · ♦ 0 0 ·
0 0 0 0
000 000 ·00 · * pH se udržuje na konstantní výše uvedené hodnotě během celého průběhu diafiltrace.
Ve stupni (a) uvedeného rafinačního způsobu podle vynálezu podle druhého výhodného provedení, se použije filtr se separačním limitem nominální molekulové hmotnosti 300 000 Daltonů.
V uvedeném diafiltračním stupni (a) se viskozně-elastický vodný roztok obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti čerpá do filtrační komory opatřené vhodným počtem filtračních vložek o velikosti pórů v rozmezí od separačního limitu nominální molekulové hmotnosti 100 000 Daltonů do 0,45 pm, výhodně s nominálním separačním limitem molekulové hmotnosti 300 000 Daltonů, za zahuštění a přívodu apyrogenní sterilní destilované vody do zásobníku obsahujícího viskozně-elastický roztok obsahující kyselinu hyaluronovu o vysoké molekulové hmotnosti stejnou rychlostí jakou se odvádí filtrát aby byl zachován konstantní objem.
Ve stupni (a) rafinačního způsobu podle druhého výhodného provedení vynálezu se viskozně-elastický vodný roztok obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti výhodně diafiltruje až do dosažení přídavku 15 ekvivalentních objemů apyrogenní sterilní destilované vody. Filtrát se pak odstraní.
Při použití druhého výhodného provedení vynálezu je výhodné, že je vynecháno odstřeďování.
Podle uvedeného druhého provedení za stupněm (a) zahrnujícím diafiltraci následuje stupeň (c) zahrnující sterilizaci.
Sterilizační stupeň ve způsobu podle vynálezu se výhodně provede sterilizací filtrací.
Podle vynálezu je možné sterilizaci filtrací provést standardním způsobem sterilizace.filtrací.
Podle uvedeného prvního provedení se stupeň sterilizace filtrací provede úpravou pH supernatantu získaného ve stupni (b) odstředěním na hodnotu 7,0 a následnou filtrací supernatantu přes filtr o velikosti pórů 0,2 pm.
Podle uvedeného druhého provedení se stupeň sterilizace filtrací provede úpravou pH diafiltrovaného roztoku obsahujícího kyselinu hyaluronovou získaného ve stupni (a) na hodnotu 7,0 a následnou filtrací supernatantu přes filtr o velikosti pórů 0,2 pm.
V uvedených dvou výhodných provedeních se pH výhodně upraví pomocí vodného roztoku NaOH. Nicméně je možné použít i jiné vodné alkalické roztoky.
Potom je možné sterilní roztok zahustit s použitím filtru se separačním limitem nominální molekulové hmotnosti 5 000 až 10 000 Daltonů.
Po zahuštění je možné sterilizovaný roztok vysušit vymrazením za získání kyseliny hyaluronové nebo její soli ve formě suchého prášku.
Kyselina hyaluronová nebo její sůl připravená způsobem čištění podle vynálezu má farmaceuticky přijatelnou čistotu a
její výtěžek v uvedeném procesu je asi 70-90 % hmotnostních vzhledem k obsahu kyseliny hyaluronové v roztoku suroviny.
Kyselina hyaluronová nebo její sůl, připravená způsobem čištění podle vynálezu je pozoruhodná nepřítomnosti pyrogenních složek a tím že nevykazuje zánětlivé účinky.
Kyselina hyaluronová nebo jej'í sůl, připravená způsobem čištění podle vynálezu obsahuje od 90 % do 95 % hmotnostních kyseliny hyaluronové obsahující D-glukuronovou kyselinu a Nacetyl-D-glukosamin v poměru 1:1, od asi 3 % do 5 % hmotnostních vody, méně než 0,2 % hmotnostních proteinů, méně než 0,3 % hmotnostní nukleových kyselin a méně než 0,3 % hmotnostní neutrálního cukru.
Způsob podle vynálezu je velmi jednoduchý a je velmi výhodný z ekonomického a z ekologického hlediska, protože nezahrnuje použití jiných prostředků než HCl nebo NaOH.
Pří použití způsobu čištění podle vynálezu získaná kyselina hyaluronová nebo její sůl neobsahuje žádné stopy organických rozpouštědel.
Následující příklady provedení způsobu přípravy kyseliny hyaluronové o vysoké molekulové hmotnosti nebo její soli o farmaceuticky přijatelné čistotě podle vynálezu jsou uvedené pouze pro znázornění vynálezu a žádným způsobem neomezují rozsah vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Příprava vodné půdy obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti z mikrobiologického zdroje • · · · · · · « · · · « ···· ··· ··· ··· ··
Buňky Streptococcus egui se kultivují pří teplotě 37 °C ve vhodném médiu následujícího složení:
glukosa 60 g
Soytone 15 g extrakt z kvasnic 5 g dihydrogenfosforečnan draselný. 2,5 g síran hořečnatý heptahydrát 1,2 g přečištěná apyrogenní voda 1000 ml
Deset litrů média se vysterilizuje a inokuluje se 1-2 % kultury Streptococcus equi o optické hustotě (OD) asi 7 stanovené při vlnové délce 650 nm.
Během fermentace se pH půdy automaticky udržuje na hodnotě 7,4 přídavky NaOH 5 mol/1). Provádí se vzduchování v dávce 1 objemu vzduchu na jeden objem média za minutu, a během celého průběhu fermentace se půda promíchává rychlostí 250 ot./min.
Za 20 hodin se půda sklidí a převede se do vhodné nádrže mající objemovou kapacitu 50 litrů.
Způsob čištění podle prvního výhodného provedení vynálezu
Hodnota pH půdy připravené výše popsaným způsobem se za kontinuálního míchání upraví na 2,5 pomocí HCI (6 mol/1) a získá se tak velmi viskózní půda která má vzhled husté kapkovité tekutiny.
Tato vodná půda se pak čerpá do filtrační komory s příčným rozvodem toku opatřené třemi filtračními vložkami ·
0,2 pm umístěnými na sobě. Použijí se filtrační vložky
SARTOCON cassette, Mod. No. 302 186 07 06 W-SG vyráběné firmou SARTORIUS s velikostí pórů 0,2 pm.
Na počátku zavádění vodné půdy do filtračního systému se ventil pro odvod filtrátu uzavře aby vodná půda mohla několik minut recirkulovat a docílilo se stability systému a systém se zbavil bublin obsažených v systému s recirkulující tekutinou.
Pak se ventil pro odvod pro filtrátu otevře a do nádrže obsahující vodnou půdu se začne zavádět stejnou rychlostí jakou se odvádí filtrát sterilní apyrogenní destilovaná voda aby se zachoval konstantní objem vodné půdy. Vstupní tlak se udržuje na hodnotě v rozmezí 0,1 MPa až 0,3 MPa (1 až 3 bar) výhodně 0,2 MPa (2 bar).
Diafiltrace se ukončí, když absorbance filtrátu při vlnové'délce 280 nm dosáhne hodnoty 0,012 (OD). Filtrát se odstraňuj e.
Hodnota pH diafíltrované půdy se pak upraví na 4 pomocí roztoku NaOH (5 mol/1) a pak se půda odstřeďuje při 9 000 ot./min a 15 °C v odstředivce s chlazením.
Pak hodnota pH supernatantu upraví upraví ma 7,0 roztokem NaOH (5 mol/1) a roztok se zfiltruje přes filtr o velikosti pórů 0,2 pm ke sterilizaci roztoku standardním způsobem.
Sterilní roztok se pak lyofilizuje standardním lyofilizačním způsobem a získá se tak hyaluronát sodný ve formě suchého prášku.
• ·
• · · ·
Výtěžek kyseliny hyaluronové podle tohoto příkladu je asi 85-87 % vzhledem k obsahu kyseliny hyaluronové v roztoku obsahujícím vstupní surovinu a připravený produkt má následující parametry:
- obsah natrium-hyaluronátu 96,5 %
-vnitřní viskozita (25 °C) = 2100 ml/g (odpovídající molekulové hmotnosti
1,7 x 106 Daltonů)
- obsah vody 3,1 %
- obsah proteinu 0,08 %
- obsah kyseliny nukleové 0,01 %
- obsah neutrálního cukru 0,01 %
Natrium-hyaluronát o vysoké molekulové hmotnosti připravený výše uvedeným způsobem je vhodný pro přípravu farmaceutických kompozic.
Způsob čištění podle druhého výhodného provedení vynálezu
Hodnota pH vodné půdy objemu 5 litrů obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti připravené výše popsaným způsobem z mikrobiologického zdroje se za kontinuálního míchání upraví na 3,5 pomocí HCI (6 mol/1) a na této hodnotě pH se udržuje v celém průběhu diafiltračního stupně s příčným rozvodem toku k odstranění buněk.
Tato vodná půda (5 litrů) se pak čerpá do filtrační komory s příčným rozvodem toku opatřené třemi filtračními vložkami 0,2 pm umístěnými na sobě. Použijí se filtrační vložky SARTOCON cassette, Mod. No. 302 186 07 06 W-SG vyráběné firmou SARTORIUS o velikosti pórů 0,2 pm.
Na počátku zavádění vodné půdy do filtračního systému se ventil pro odvod filtrátu uzavře aby vodná půda mohla několik minut recirkulovat a docílilo se stability systému a systém se zbavil bublin obsažených v systému s recirkulující tekutinou.
Pak se ventil pro odvod filtrátu otevře a do nádrže obsahující vodnou půdu se zavádí stejnou rychlostí jakou se odvádí filtrát, sterilní apyrogenní destilovaná voda o celkovém objemu odpovídajícím 10 ekvivalentním objemům, aby se zachoval konstantní objem vodné půdy. Vstupní tlak se udržuje na hodnotě v rozmezí 0,1 MPa až 0,3 MPa (1 až 3 bar) výhodně 0,2 MPa (2 bar).
Retenční tekutina se odstraní a filtrát (50 litrů) obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti prostý buněk se zpracuje dále uvedeným způsobem.
Hodnota pH získaného díafiltrovaného roztoku (50 litrů) obsahující kyselinu hyaluronovou se pak upraví na 2,4 za tvorby velmi viskózního roztoku a hodnota pH se udržuje na výše uvedené hodnotě po celou dobu diafiltračního procesu s příčným rozvodem toku.
Tato vodná půda (50 litrů) se pak čerpá do filtrační komory s příčným rozvodem toku opatřené třemi filtračními vložkami 300 000 Daltonů umístěných na sobě. Použijí se filtrační vložky SARTOCON cassette, Mod. No. 302 146 790 07 7E-SG vyráběné firmou SARTORIUS s velikostí pórů odpovídající 300 000 Daltonům.
Na počátku zavádění vodné půdy do filtračního systému se ventil pro odvod filtrátu uzavře aby vodná půda mohla několik • · • * tt· tt· ·· ♦·· • tt · · · · · · · · · · · on ·> · · · · ···· ··· ··« ··· ·· · minut recirkulovat a docílilo se stability systému a systém se zbavil bublin obsažených v systému s recirkulujicí tekutinou.
Pak se ventil pro odvod filtrátu otevře a vodná půda se zahustí na objem 7,5 litru. Filtrát (42,5 litru) se odstraní.
Pak se do nádrže obsahující vodnou půdu zavádí stejnou rychlostí jakou se odvádí filtrát, sterilní apyrogenní destilovaná voda o celkovém objemu rovném patnácti ekvivalentnímh objemům, aby se zachoval konstantní objem vodné půdy. Vstupní tlak se udržuje na hodnotě v rozmezí od 0,1 MPa do 0,3 MPa (1 až 3 bar) výhodně 0,2 MPa (2 bar). Filtrát (116 litrů) se odstraní.
Pak se napájení vodou ukončí a vodná půda se zahustí.
Hodnota pH zahuštěného diafiltrovaného roztoku (4 litry) se pak upraví na 7,0 pomocí NaOH (5 mol/1) a roztok se zfiltruje přes statický filtr o velikosti pórů 0,2 pm ke sterilizaci roztoku standardním způsobem sterilizace filtrací.
Sterilní roztok se pak suší lyofilizací standardním lyofilizačním způsobem a ve formě suchého prášku se tak získá hyaluronát sodný.
Výtěžek v provedení podle uvedeného příkladu je asi 83-85 % vztažených na obsah kyseliny hyaluronové v roztoku suroviny a produkt má následující parametry:
- obsah natrium-hyaluronátu 97,0 %
-vnitřní viskozita (25 °C) = 2100 ml/g (odpovídající molekulové hmotnosti
1,7 x 106 Daltonů)
4· 4 4
4
4
4
444 444
- obsah vody
- obsah proteinu
- obsah kyseliny nukleové
- obsah neutrálního cukru
2,9% 0, 08 % 0,01 % 0,01 %
Natríum-hyaluronát o vysoké molekulové hmotnosti připravený výše uvedeným způsobem je vhodný pro přípravu farmaceutických kompozic.
Claims (28)
- NÁROKY1. Způsob čištění kyseliny hyaluronové o vysoké molekulové hmotnosti pocházející z biologického zdroje vedoucí k získaní kyseliny hyaluronové nebo její soli o vysoké molekulové hmotnosti o čistotě přijatelné pro farmaceutické použití vyznačující se tím, že’zahrnuje:a) stupeň úpravy pH vodného roztoku obsahujícího kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti pocházející z biologického zdroje na pH v rozmezí 1,7 až 3,3 s následnou diafiltrací uvedeného roztoku při stejné hodnotě pH s použitím filtru o velikosti pórů s nominálním separačním limitem molekulové hmotnosti od 100 000 Daltonů do 0,45 pm;b) stupeň odstranění buněk z vodného roztoku obsahujícího kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti pocházející z biologického zdroje, kde uvedený stupeň se . provede buď před stupněm (a) nebo po stupni (a);► 'i' c) stupeň sterilizace.
- 2. Způsob čištění podle nároku lvyznačuj ící se t i m , že vodný roztok obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti pocházející z biologického zdroje který se nejprve zpracuje buď ve stupni (a) nebo ve stupni (b) je vodná půda obsahující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti pocházející z mikrobiologického zdroje.
- 3. Způsob podle nároku 2vyznačující se tím, že uvedeným mikrobiologickým zdrojem je mikroorganismus rodu Streptococcus produkující kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti.
- 4. Způsob podle nároku 3vyznačující se tím, že uvedený mikroorganismus rodu Streptococcus se zvolí ze fť skupiny zahrnující Streptococcus zooepidemicus, Streptococcus equi a Streptococcus pyogenes.
- 5. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 vyznačující se tím, že ve stupni (a) se hodnota pH vodného roztoku obsahujícího kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti upraví na hodnotu v rozmezí od 2,0 do 2,7 a pak se roztok zpracuje diafiltrací při výše uvedené hodnotě pH.
- 6. Způsob podle nároku 5vyznačující se tím, že ve stupni (a) se hodnota pH vodného roztoku obsahujícího kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti upraví na hodnotu v rozmezí od 2,3 do 2,
- 7 a pak se roztok zpracuje diafiltrací při výše uvedené hodnotě pH.I f' 7. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 vyznačující se tím, že ve stupni (a) se hodnota pH vodného roztoku obsahujícího kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti upraví pomocí vodného roztoku HCI.
- 8. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 vyznačující se tím, že ve stupni sterilizace (c) se sterilizace provede sterilizací filtrací.
- 9. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 8 vyznačující se tím, že po stupni sterilizace (c) následuje stupeň lyofilizace d) ve kterém se lyofilizací sterilizovaného roztoku získá kyselina hyaluronová nebo její sůl ve formě suchého prášku.
- 10. Způsob podle nároku 9 vyznačující se tím, že sterilizovaný roztok se před lyofilizací zahustí.
- 11. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10 vyznačující se tím, že stupeň odstranění buněk (b) se provede po stupni diafiltrace (a).
- 12. Způsob podle nároku 11 vyznačující se tím, že ve stupni (a) se hodnota pH vodného roztoku obsahujícího kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti upraví na hodnotu v rozmezí od 2,5 do 2,6 a pak se roztok zpracuje diafiltraci při výše uvedené hodnotě pH.
- 13. Způsob podle nároku 11 nebo 12 vyznačující se tím, že filtr použitý v diafiltraci ve stupni (a) má velikost pórů 0,2 pm.
- 14. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 11 až 13 vyznačující se tím, že roztok kyseliny hyaluronové se ve stupni (a) diafiltruje tak dlouho, dokud odstraňovaný filtrát nemá hodnotu absorbance (OD) při vlnové délce 280 nm rovnou nebo nižší 0,02.
- 15. Způsob podle kteréholiv z nároků 11 až 14 vyznačující se tím, že stupeň (b) odstranění buněk se provede ve stupni s použitím odstřeďování.··*· · · *· « « · • » · · · ·
- 16. Způsob podle nároku 15 vyznačující se tím, že stupeň odstřeďování zahrnuje úpravu pH diafiltrovaného vodného roztoku získaného ve stupni (a) na hodnotu pHv.rozmezí od 3,5 do 5,0 a odstředění diafiltrovaného vodného roztoku za získání supernatantu obsahujícího kyselinu hyaluronovou.
- 17. Způsob podle nároku 16 vyznačující se tím, že hodnota pH diafiltrovaného vodného roztoku získaného ve stupni (a) se upraví na 4,0.
- 18. Způsob podle nároku 17 vyznačující se tím, že uvedená úprava hodnoty pH se provede vodným roztokem NaOH.
- 19. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 15 až 18 vyznačující se tím, že sterilizační stupeň (c) je stupeň sterilizace filtrací zahrnující úpravu pH superantantu získaného ve stupni odstředění (b) na hodnotu 7 a filtraci supernatantu filtrem o velikosti pórů 0,2 pm.
- 20. Způsob podle nároku 19 vyznačující se tím, že uvedená úprava pH se provede vodným roztokem NaOH.
- 21. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 11 vyznačující se tím, že stupeň (b) odstranění buněk se provede před stupněm (a).
- 22. Způsob podle nároku 21 vyznačující se tím, že stupeň (b) odstranění buněk je diafiltrační stupeň odstranění buněk.
- 23. Způsob podle nároku 22 vyznačující se tím, že diafiltrační stupeň (b) odstranění buněk zahrnuje úpravu pH ··« · · 4 ♦ vodného roztoku obsahujícího kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti pocházející z biologického zdroje na hodnotu pH 3,5 a následnou diafiltraci roztoku při stejné hodnotě pH s použitím filtru o velikosti pórů 0,2 pm.
- 24. Způsob podle nároku 23 vyznačující se tím, že uvedená hodnota pH se upraví vodným roztokem HCI.
- 25. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 21 až 24 vyznačující se tím, že filtr použitý v diafiltračním stupni (a) má velikost pórů odpovídající separačnímu limitu nominální molekulové hmotnosti 300 000 Daltonů.
- 26. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 21 až 25 vyznačující se tím, že ve stupni (a) se pH vodného roztoku obsahujícího kyselinu hyaluronovou o vysoké molekulové hmotnosti upraví na 2,4 a potom se roztok diafiltruje při stejné hodnotě pH.,
- 27. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 21 až 26 i ......? vyznačující se t i m , ze sterilizacni stupen (c)1 je stupeň sterilizace filtrací zahrnující úpravu hodnoty pH vodného roztoku získaného ve stupni (a) diafiltraci na hodnotu 7 a filtraci tohoto vodného roztoku filtrem o velikosti pórů 0,2 pm.
- 28. Způsob podle nároku 27 vyznačující se tím, že uvedená úprava pH se provede vodným roztokem NaOH.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH00154/99A CH692919A5 (fr) | 1999-01-28 | 1999-01-28 | Procédé de purification de l'acide hyaluronique à poids moléculaire élevé. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20012694A3 true CZ20012694A3 (cs) | 2002-02-13 |
| CZ301306B6 CZ301306B6 (cs) | 2010-01-06 |
Family
ID=4180486
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20012694A CZ301306B6 (cs) | 1999-01-28 | 2000-01-27 | Zpusob cištení kyseliny hyaluronové o vysoké molekulové hmotnosti |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6489467B1 (cs) |
| EP (1) | EP1144668B1 (cs) |
| AT (1) | ATE242816T1 (cs) |
| AU (1) | AU3070400A (cs) |
| BR (1) | BR0007782B1 (cs) |
| CA (1) | CA2360343C (cs) |
| CH (1) | CH692919A5 (cs) |
| CZ (1) | CZ301306B6 (cs) |
| DE (1) | DE60003282T2 (cs) |
| ES (1) | ES2200812T3 (cs) |
| PL (1) | PL200677B1 (cs) |
| SK (1) | SK286327B6 (cs) |
| WO (1) | WO2000044925A1 (cs) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH692919A5 (fr) * | 1999-01-28 | 2002-12-13 | Trb Chemedica S A | Procédé de purification de l'acide hyaluronique à poids moléculaire élevé. |
| ES2192960B1 (es) * | 2001-11-16 | 2005-03-01 | Consejo Sup. Investig. Cientificas | Nuevo procedimiento de obtencion de acido hialuronico. |
| WO2004014399A1 (en) | 2002-08-07 | 2004-02-19 | Laboratoire Medidom S.A. | Process for preparing a sterile high molecular weight hyaluronic acid formulation |
| US7002007B2 (en) * | 2004-05-28 | 2006-02-21 | Calcigen Corporation | Production of high molecular weight hyaluronates |
| KR100577075B1 (ko) * | 2004-06-16 | 2006-05-08 | 주식회사 티앤라이프시스템 | 칼슘염 및 인산염, 또는 인산칼슘염을 이용한 히아루론산정제방법 |
| GB0502096D0 (en) * | 2005-02-01 | 2005-03-09 | Chiron Srl | Purification of streptococcal capsular polysaccharide |
| EP2216412B1 (en) * | 2006-07-06 | 2012-10-03 | Reliance Life Sciences Pvt., Ltd. | Process for purification of high molecular weight hyaluronic acid |
| CN100478360C (zh) * | 2006-10-31 | 2009-04-15 | 山东福瑞达生物化工有限公司 | 将浓缩用于透明质酸或其盐的生产的方法 |
| US20110130473A1 (en) * | 2007-11-13 | 2011-06-02 | Bio-Technology General (Israel) Ltd. | Dilute filtration sterilization process for viscoelastic biopolymers |
| DE102009021372A1 (de) * | 2009-05-14 | 2010-11-18 | Ursapharm Arzneimittel Gmbh | Phosphatfreie pharmazeutische Zusammensetzung zur Glaukombehandlung |
| US8283463B2 (en) | 2010-02-09 | 2012-10-09 | Bausch & Lomb Incorporated | Sterile hyaluronic acid solutions |
| JP5713995B2 (ja) * | 2010-03-17 | 2015-05-07 | 電気化学工業株式会社 | ヒアルロン酸及び／又はその塩の精製方法 |
| CN102504047A (zh) * | 2011-11-30 | 2012-06-20 | 上海景峰制药有限公司 | 一种玻璃酸钠发酵液的超滤方法 |
| WO2013116819A1 (en) | 2012-02-03 | 2013-08-08 | University Of Rochester | Compositions and methods for recombinant synthesis of high molecular weight hyaluronic acid |
| CN105237656A (zh) * | 2015-10-30 | 2016-01-13 | 深圳市阳光之路生物材料科技有限公司 | 一种提纯透明质酸钠的方法 |
| GB201703850D0 (en) * | 2017-03-10 | 2017-04-26 | Givaudan Sa | Improvements in or relating to organic compounds |
| IT201900019724A1 (it) | 2019-10-24 | 2021-04-24 | Bmg Pharma S P A | “procedimento in solvente organico per la purificazione dell’acido ialuronico sale sodico” |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4517295A (en) * | 1983-02-18 | 1985-05-14 | Diagnostic, Inc. | Hyaluronic acid from bacterial culture |
| JPH072117B2 (ja) * | 1986-10-09 | 1995-01-18 | 三菱レイヨン株式会社 | ヒアルロン酸の製造法 |
| IT1271001B (it) * | 1994-07-26 | 1997-05-26 | Poli Ind Chimica Spa | Procedimento di preparazione di acido ialuronico mediante fermentazione con streptococcus |
| CH692919A5 (fr) * | 1999-01-28 | 2002-12-13 | Trb Chemedica S A | Procédé de purification de l'acide hyaluronique à poids moléculaire élevé. |
-
1999
- 1999-01-28 CH CH00154/99A patent/CH692919A5/fr not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-01-27 ES ES00900777T patent/ES2200812T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-27 CA CA2360343A patent/CA2360343C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-27 AT AT00900777T patent/ATE242816T1/de active
- 2000-01-27 DE DE60003282T patent/DE60003282T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-27 EP EP00900777A patent/EP1144668B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-27 WO PCT/IB2000/000082 patent/WO2000044925A1/en active IP Right Grant
- 2000-01-27 SK SK1063-2001A patent/SK286327B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-01-27 US US09/868,529 patent/US6489467B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-27 PL PL350135A patent/PL200677B1/pl unknown
- 2000-01-27 AU AU30704/00A patent/AU3070400A/en not_active Abandoned
- 2000-01-27 CZ CZ20012694A patent/CZ301306B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-01-27 BR BRPI0007782-8B1A patent/BR0007782B1/pt active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CH692919A5 (fr) | 2002-12-13 |
| WO2000044925A1 (en) | 2000-08-03 |
| DE60003282D1 (de) | 2003-07-17 |
| SK286327B6 (en) | 2008-07-07 |
| BR0007782B1 (pt) | 2013-08-27 |
| CA2360343C (en) | 2010-02-23 |
| PL200677B1 (pl) | 2009-01-30 |
| ES2200812T3 (es) | 2004-03-16 |
| PL350135A1 (en) | 2002-11-04 |
| CZ301306B6 (cs) | 2010-01-06 |
| US6489467B1 (en) | 2002-12-03 |
| EP1144668A1 (en) | 2001-10-17 |
| SK10632001A3 (sk) | 2002-04-04 |
| AU3070400A (en) | 2000-08-18 |
| ATE242816T1 (de) | 2003-06-15 |
| DE60003282T2 (de) | 2004-05-06 |
| EP1144668B1 (en) | 2003-06-11 |
| CA2360343A1 (en) | 2000-08-03 |
| BR0007782A (pt) | 2002-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ20012694A3 (cs) | Způsob čiątění kyseliny hyalurové o vysoké molekulové hmotnosti | |
| EP0716688B1 (en) | Culture medium and process for the preparation of high molecular weight hyaluronic acid | |
| CN102617754B (zh) | 用于纯化高分子量透明质酸的有效方法 | |
| FI79346B (fi) | Framstaellning av hyaluronsyra medelst bakteriekultur. | |
| AU2008322629B2 (en) | Dilute filtration sterilization process for viscoelastic biopolymers | |
| JPS60251898A (ja) | 醗酵法によるヒアルロン酸の製造方法 | |
| EP0266578B1 (en) | Method of producing hyaluronic acid | |
| DE3531612C2 (cs) | ||
| US6660853B2 (en) | Method for purifying high molecular weight hyaluronic acid | |
| EP1366082B1 (en) | Highly sulfated derivatives of k5 polysaccharide and their preparation | |
| US5424201A (en) | Method for preparing an antitumor dextran using Lactobacillus confusus | |
| MXPA01007523A (en) | Process for purifying high molecular weight hyaluronic acid | |
| US9718947B2 (en) | Biotechnological sulphated chondroitin sulphate at position 4 or 6 on the same polysaccharide chain, and process for the preparation thereof | |
| JPS61239898A (ja) | ヒアルロン酸の製造法 | |
| JPH0455675B2 (cs) | ||
| PL235053B1 (pl) | Sposób wytwarzania kwasu hialuronowego | |
| AU2013273729A1 (en) | Efficient process for purification of high molecular weight hyaluronic acid |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20200127 |