CZ20011999A3

CZ20011999A3 - Diazepinoindoly pro léčbu chronické obstrukční nemoci bronchopulmonální

Info

Publication number: CZ20011999A3
Application number: CZ20011999A
Authority: CZ
Inventors: Annette Doherty
Original assignee: Warner-Lambert Company
Priority date: 2000-06-09
Filing date: 2001-06-05
Publication date: 2002-04-17
Also published as: CN1345725A; HUP0102388A2; NO20012831D0; MXPA01005726A; BR0102289A; AU5181301A; CA2347337A1; HU0102388D0; NZ512222A; AR030291A1; SK7832001A3; NO20012831L; ZA200104616B; JP2002138090A; US6544983B2; EA200100515A2; IL143636A0; HUP0102388A3; EA200100515A3; EP1161949A1

Description

Diazepinoindoly pro léčbu chronické obstrukční nemoci bronchopulmonálni

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká použiti diazepinoindolů /prrr Léětouf pro léčbu chronické obstrukční nemoci bronchopulmonálni (zde dále CHONBP).

Oblast techniky

CHONBP je chronické, pomalu progredujicí onemocnění charakterizované obstrukcí dýchacích cest (spojenou se zánětem dýchacích cest a se značným obsahem neutrofilů). Většina porušení funkce plic je ireversibilní (ačkoliv k určitému zlepšeni může dojít po bronchodilatační terapii). Toto onemocnění může být označováno jako CHONBP, ačkoliv v minulosti bylo používáno mnoho klinických termínů, samostatně nebo v kombinaci. Mezi tyto termíny patří emfyzem, chronická bronchitida, chroniccká obstrukce dýchacích cest, chronické omezení dýchacích cest, ireversibilní obstrukční onemocnění dýchacích cest a chronické obstrukční onemocnění plic.

Klinická prezentace CHONBP může být různá v závažnosti příznaků od prosté chronické broonchitidy bez omezení výkonosti do závažného onemocnění s chronickým respiračním selháním. Hlavními klinickými jednotkami u pacientů s CHONBP jsou chronická bronchitida a/nebo emfyzem (spojený se zánětem dýchacích cest a/nebo infiltrací neutrofily).

Ačkoliv není prevalence CHONBP zcela známá, lze říci, že je čtvrtou hlavní příčionu smrti v rozvinutých zemích, zejména v USA. Také se předpokládá, že problém s CHONBP bude

• · to v následujících letech narůstat, jak v západních zemích, tak i v dalších zemích. 3-násobné zvýšení se předpokládá během následujících deseti let v zemích východní Asie, protože velké procento mužské popupulace v těchto zemích jsou kuřáci.

Proto existuje potřeba účinné léčby CHONBP.

V posledních letech byly selektivní inhibitory fosfodiesterasy 4 II. generace (PDE4 inhibitory) navrženy jako potenciálně účinná léčba CHONBP. Viz, mimo jiné, Doherty, Current Opinion in Chemical Biology 1999, 3:466473; Mohammed et al, Anti-inflammatory & Immunomodulatory Investigational Drugs 1999 l(l):21-28; Schmidt et al., Clinical a Experimental Allergy, 29, Supplement 2, 99-109. Cilomilast (Ariflo®), orálně aktivní PDE4 inhibitor, byl navržen jako léčba pro CHONBP. Viz, mimo jiné: Nieman et al, Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1998, 157:A413; Underwood et al, Eur. Respir. J. 1998, 12:86s; Compton et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1999, 159:A522. Viz též ústní prezentace na European Respirátory Society Meeting, Madrid, 12.10.1999, Compton, a na 4^th World Congress on Inflammation, Paris, 27-30.6..1999, Torphy a Underwood. Tato sloučenina je nyní ve fázi III klinické studie pro léčbu CHONBP.

Nicménně, použití cilomilastu pro léčbu CHONBP má určité nevýhody. Bylo popsáno, že když je cilomilast podán v jediné dávce 20 mg, vyskytují se nežádoucí účinky, jako je nauzea a zvracení. Viz Murdoch et al, Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1998, 157:A409. Vedlejší účinky objevující se při takové nízké dávce limitují použití cilomilastu a brání přípravě dávkových forem pro podání jednou denně, což je nevýhodné pro pacienty.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje použití určitých tříd diazepinoindolů, které jsou známé jako inhibitory PDE4, pro léčbu CHONBP. Tyto sloučeniny nemají vedlejší nežádoucí účinky, zejména na srdce nebo na trávicí systém (viz Burnouf et al., Journal of medicinal chemistry (2000), 43:48504867), a jsou účinnější než cilomilast při nižších dávkách.

Vynález se týká použití [1,4]diazepino[6,7,1-hi]indolů vzorce (I)

kde:

- A znamená aryl nebo heteroaryl obsahující dusík, kde každý je volitelně substituovaný jednou až třemi skupinami nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující halogen, nižší alkyl, nižší haloalkyl, nižší alkoxy, cykloalkyloxy, amino a nižší alkylkarbonylamino nebo alkyloxykarbonylamino;

- B znamená hydroxyl nebo amino radikál, který je volitelně substituovaný, nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, pro výrobu léku pro léčbu chronické obstrukční nemoci bronchopulmonální nebo CHONBP.

• 4

Vynález také poskytuje způsob léčby CHONBP, při kterém je člověku, který potřebuje takovou léčbu, podáno účinné množství diazepinoindolu vzorce I.

Tyto sloučeniny, jejich použití jako inhibitorů PDE4 a způsoby jejich přípravy jsou popsány ve WO 97/36905, jehož obsah je zde uveden jako odkaz. Tyto diazepinoindoly jsou použity v předkládaném vynálezu jako aktivní činidla.

Popis obrázků na připojených výkresech

Obr. 1 ukazuje počet neutrofilů v dýchacích cestách a procento inhibice plicni neutrofilie indukované LPS v závislosti na dávce (3R)N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)-nikotinamidu podaného Wistar krysám.

Obr. 2 ukazuje počet neutrofilů v dýchacích cestách a procento inhibice plicni neutrofilie indukované LPS v závislosti na dávce cilomilastu (kyselina cis-4-kyano-4-[3-(cyklopentyloxy)-4-methoxyfenyl]cyklohexankarboxylová) podané Wistar krysám.

Podrobný popis vynálezu

Vynále se týká použití [1,4]diazepino[6,7,1-hi]indolů vzorce (I)

B (i) kde:

- A znamená aryl nebo heteroaryl obsahující dusík, které jsou každý volitelně substituovaný jednou až třemi skupinami vybranými nezávisle ze skupiny zahrnující halogen, nižší alkyl, nižší haloalkyl, nižší alkoxy, cykloalkyloxy, amino a nižší alkylkarbonylamino nebo alkyloxykarbonylamino;

- B znamená:

1)

-ORi, kde Ri znamená -H nebo R4,

-NR2R3, kde

R2 znamená -C(NH)NH2 a R3 znamená -H,

-NR2R3, kde

Rž znamená R4 a R3 znamená -H,

4)

-NR2R3, kde

R2

R3 nezávisle znamenají -H nebo nižší alkyl, nebo

-NR2R3, kde

R2

R₃ tvoří, dohromady s atomem dusíku, na který jsou navázány, nasycený 5- až 7-členný heterocyklus, který může obsahovat jako druhý heteroatom, který není přímo navázán na atom dusíku, kyslík, síru nbeo dusík;

- R4 znamená:

1) -CH2-CO2H,

2) -CO-(CH₂)_P-CO₂H,

3) -CO-A, kde A je stejný, jak byl definován výše,

4) -CO-CH=CH-CO₂H,

5) -CO-(CH₂) 11-CH3, kde n je celé číslo od 0 do 18,

6) -CO-(CH2-O-CH₂)p-CH2-O-CH3,

7) -CO- (CH2-O-CH2) p-CO₂H,

8) - (CH₂) p-NRsRe, Rs a Re znamenají nezávisle -H nebo nižší alkyl, nebo

9) - (CH₂) p-NRsRe, Rs a Re tvoří, dohromady s atomem dusíku, na který jsou navázány, nasycený 5- až 7-členný heterocyklus, který může obsahovat jako druhý heteroatom, který není přímo navázán na atom dusíku, kyslík, síru nbeo dusík;

- p je celé číslo rovné 2, 3 nebo 4;

• toto · ·♦ ·· · • to to to ♦ · · · · to · toto·· ··· tototo • to · to to to · toto to · to ·to ··· · to · ♦ ·♦ •9 · totototo· · · ··· jejich racemických forem a izomerů, zejména těch, jejichž konfigurace je určena uhlíkem 3 diazepinoindol-4-onového kruhu, stejně jako jejich farmaceuticky přijatelných derivátů, pro léčbu CHONBP.

Výhodná je skupina sloučenin (I), kde B znamená ORi nebo NR2R3Z kde Ri, R2 a R3 znamenají vodík.

Jiná skupina sloučenin vzorce (I), která je výhodná, zahrnuje ty sloučeniny, kde A znamená aryl substituovaný 1 až 3 skupinami nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující halogen, amino, nižší alkyloxykarbonylamino nebo alkoxy, stejně jako skupina sloučenin vzorce (I), kde A znamená monocyklický heteroaryl obsahující 1 až 2 atomy dusíku nebo bicyklický heteroaryl obsahující 1 až 4 atomy dusíku.

Přesněji, skupina sloučenin, která je zejména zajímavá při léčbě CHONBP, zahrnuje ty sloučeniny vzorce I, kde B znamená NH2a, A znamená aryl substituovaný 1 až 3 skupinamu nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující halogen a amino nebo monocyklický heteroaryl obsahující 1 až 2 atomy dusíku.

V uvedeném vynálezu mají následující termíny následující významy:

- aryl znamená fenyl nebo naftyl;

- heteroaryl obsahující dusík znamená nenasycený monocyklický nebo polycyklický kruh obsahující alespoň jeden atom dusíku, lépe 5- až 7-členný heteromonocyklus obsahující 1 až 4 atomy dusíku, nebo alternativně nenasycený kondenzovaný heterocyklus obsahující 1 až 4 atomy dusíku, volitelně methylovaný nebo ethylovaný na pozitivně nabitém atomu dusíku;

- halogen znamená fluor, chlor, brom nebo jod;

- v souvislosti s radikály obsahujícími alkyl znamená nižší to, že alkyl je lineární nebo rozvětvený a obsahuje 1 až 4 atomů uhlíku, nebo alternativně znamená cyklopropylmethylový radikál;

- cykloalkyl znamená cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl nebo cyklohexyl;

- halogenalkyl znamená mono-, di- nebo trihalogenalkyl.

Sloučeniny použité v předkládaném vynálezu zahrnují solváty, hydráty, farmaceuticky přijatelné sáli a polymorfní formy (formy s jinou krystalickou mřížkou) sloučenin vzorce I, které jsou jejich farmaceuticky přijatelné deriváty.

Výraz farmakologicky přijatelná sůl sloučeniny vzorce (I) obsahující bazickouo část označuje addiční soli sloučenin vzorce (I), které mohou být tvořeny z netoxických anorganických nebo organických kyselin, jako jsou, například, soli s kyselinami bromovodíkovou, chlorovodíkovou, sírovou, fosforečnou, dusičnou, octovou, jantarovou, vinou, citrónovou, maleinovou, hydroxymaleinovou, benzoovou, fumarovou, toluenesulfonovou a isethionovou a podobně. Různé kvarterní ammoniové soli derivátů (I) jsou také zahrnuty v této kategorii sloučenin podle předkládaného vynálezu. Dále, výraz farmakologicky přijatelná sůl sloučeniny vzorce (I) obsahující acidickou část označuje obvyklé soli sloučenin vzorce (I), které mohou být tvořeny z netoxických anorganických nebo organických baží, jako jsou, například, hydroxidy alkalických kovů a kovů alkalických zemin (sodíku, draslíku, hořčíku a vápníku), aminy (dibenzylethylendiamin, trimethylamin, piperidin, pyrrolidin, benzylamin a podobně) nebo alternativně kvarterní amonné hydroxidy, jako je hydroxid tetramethylamonný (Viz též Pharmaceutical salts

0 0 0 0 000 0 • 00 ♦ · · · · · 00 • 000 00· · · 0 • 000000 00 0 · φ ·· ♦ 00 ······ ·· 0 000 00 0Φ000

Berge S.M. et al. (1997) J. Pharm. Sci. 66: 1-19, který je zde uveden jako odkaz).

Vynález také zahrnuje použití proléčiv sloučeniny vzorce (I), které jsou známé odborníkům v oboru (viz Bundgaard, et al., Acta Pharm. Suec., 1987; 24: 233-246).

Výhodné jsou diazepinoindoly vzorce (I), ve kterých má asymetrický atom uhlíku v α-pozici vzhledem ke ”3-on karbonylu diazepinového kruhu, (R) absolutní konfiguraci podle Cahn-Ingold-Prelog pravidla.

Přesněji, následující sloučeniny vzorce (I):

- kyselina (3R)-isochinolin-3-karboxylová (9-hydroxy-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro[1,4]diazepino[6,7,1-

-hi]indol-3-yl)amid;

- (3R)-4-t-butyloxykarbonylamino-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)benzamid;

- (3R)-4-amino-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetra-hydro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)-3,5-dichloro-benzamid;

- (3R)-4-amino-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetra-hydro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)-5-chloro-2-methoxybenzamid;

- (3R)-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)isonikotinamid;

- (3R)-3-t-butyloxykarbonylamino-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)isonikotinamid;

- kyelina (3R)-isochinolin-3-karboxylová (9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)amid;

- kyselina (3R)-chinolin-3-karboxylová (9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)amid;

- kyselina (3R)-4,7-dimethylpyrazolo[5,1-c] [1,2,4]triazin-3-karboxylová (9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro[1,4]diazepino [6,7,1-hi]indol-3-yl)amid;

- (3R)-4-amino-3,5-dichloro-N-(9-dimethylamino-4-oxo-l-fenyl-3, 4,6,7-tetrahydro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)benzamid;

- (3R)N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3, 4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)-2-benzofurankarboxamid;

- kyselina (3R)4,7-dimethyl-pyrazolo[5,1-c] [1,2,4]triazin-3-karboxylová [4-oxo-l-fenyl-9-(pyrrolidin-l-yl)-3,4, 6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl]-amid;

- kyselina pyridin-2-karboxylová (3R)-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)amid;

- kyselina pyrazin-2-karboxylová (3R)-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4, 6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)amid;

- (3R)-4-amino-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3, 4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)benzamid; a

- (3R)N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)-nikotinamid;

jsou výhodné pro výrobu léku pro léčbu CHONBP.

Nejvýhodnějši sloučeniny jsou:

- (3R)-4-amino-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)-3,5-dichlorbenzamid;

- (3R)-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)-isonikotinamid;

- (3R)-N-{9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-

-[1,4]diazepino-[6,7,1-hi]indol-3-yl)nikotinamid; a

- (3R)-4-amino-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)benzamid.

Zejména výhodné sloučeniny vzorce (I) jsou:

- (3R)-4-amino-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)benzamid;

- (3R)N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)-nikotinamid (sloučenina

1) -

Tyto sloučeniny odpovídají sloučeninám příkladů 11 a 3 WO 97/36905.

Sloučeniny použité v předkládaném vynálezu mohou být připraveny způsoby popsanými ve WO 97/36905; odborníci použijí postup podle této přihlášky pro výrobu sloučenin podle předkládaného vynálezu.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou podány ve formě prostředků, které jsou vhodné pro charakter a závažnost léčeného onemocnění. Denní dávka u člověka je obvykle v rozmezí od 2 mg do 1 g produktu, který může být aplikován v jedné nebo v několika dávkách. Prostředky jsou připraveny ve formách, které jsou kompatibilní se zamýšleným způsobem podání, jako jsou například tablety, potahované tablety, kapsle, ústní vody, aerosoly, prášky pro inhalaci, čípky gely nebo suspenze. Tyto prostředky jsou připraveny způsoby, které jsou dobře známé odborníkům v oboru, a obsahují od 0,5 do 60% hmotnostních aktivní složky (sloučeniny vzorce I) a 40 až 99,5% hmotnostních farmaceutického vehikula nebo nosiče, φ ·· Φ· ·· < · φ Φ · φ Φ Φ · Φ • φ φ φ < ·

Φ <· φ · >

ΦΦ ♦ • ··

Φ · ·* • · ····Φ • Φ· • ι η který je vhodný a kompatibilní s aktivní složkou a fyzikální formou připravovanéhop prostředku.

Přesněji, pro léčbu akutní CHONBP bude dávka obvykle od přibližně 20 mg do přibližně 500 mg na den. Výhodné dávky jsou od přibližně 50 mg do přibližně 300 mg na den (pro dospělého o hmotnosti 70 kg).

Výhodně bude prostředek podáván dvakrát denně. Lépe bude prostředek podáván jednou denně.

Frekvence podávání je významná pro komfort pacienta při léčbě chronických onemocnění, jako je CHONBP, protože pacienti užívají léčbu pravidelně a dlouhodobě.

Eliminační poločas cilomilastu (Torphy et al., Pulmonary Pharmacology & Therapeutics (1999) 12, 131-135) u člověla je přibližně 8 hodin. Při tomto relativně krátkém poločasu je podávání cilomilastu jednou denně při léčbě CHONBP nedosažitelné: vedlejší účinky objevující se při dávce 20 mg vylučují použití jediné vyšší dávky a proto je nutné podávání dvakrát denně.

Poločas sloučeniny 1 byl určen u člověka: jedna orální dávka sloučeniny 1, v rozmezí od 1 do 25 mg, byla podávána zdravým dobrovolníkům. Neočekávaně byly průměrné terminální poločasy podobné při všech dávkách a relativně dlouhé, od 13,9 do 17,1 hodin (průměr: 15,4 hours). Tyto hodnoty ukazují, že sloučenina 1 může být podávána jednou denně.

Složení a příprava tablet obsahujících sloučeninu podle předkládaného vynálezu jsou uvedeny dále:

Prostředek	Dávka
Sloučenina vzorce (I)	1 až 75 mg
Laktosa	124 až 74 mg
Mikrokrystalická celulosa	36 až 60 mg
Polyvinylpyrrolidon	6 mg
Karboxymethylškrob sodný	8 mg
Stearan hořečnatý	1 mg

Smísí se aktivní substance, laktosa, mikrokrystalická celulosa a karboxymethylškrob. Směs se zvlhčí a granuluje se za použití vodného nebo alkoholového roztoku polyvinylpyrrolidonu vhodné koncentrace. Granule se suší a upraví se distribuce velikosti. Směs se homogene promísí se stearanem hořečnatým. Provede se tabletování za zisku tablet o hmotnosti 200 mg.

Mezi pevné dávkové formy patří prášky, tablety, dispergovatelné granule, kapsle, pastilky a čípky. Pevným nosičem může být jedna nebo více substancí, které mohou také působit jako ředidla, chuťová korigens, pojivá, solubilizační činidla, kluzná činidla nebo činidla podporující rozpadavost, a nebo jako enkapsulační materiál. V práškách je nosičem jemně dělený pevný materiál, který je ve směsi s jemně dělenou aktivní složkou. V tabletách je aktivní složka smísena ve vhodném poměru s nosičem majícím nezbytné pojivové vlastnosti a lisuje se do požadovaného tvaru a velikosti. Při přípravě čípků se vosk s nízkou teplotou tání, jako je směs glyceridů mastných kyselin a kakaového másla, nechá nejprve roztavit a potom se v získaném roztaveném materiálu disperguje aktivní složka, například míšením. Roztavená homogenní směs se potom nalije do vhodných forem a nechá se vychladnout a ztuhnout. Prášky, tablety, pastilky nebo enkapsulované formy pro kapsle • · ··· · · · ♦ · · · · ···· ··· · ··

U · · ···· · ······· • · · · · · · ·· • · · ····· ·· · · · výhodně obsahují 5% až přibližně 70% aktivní složky. Vhodnými nosiči jsou uhličitan hořečnatý, talek, laktosa, cukr, pektin, dextrin, škrob, tragant, methylcelulosa, karboxymethylcelulosa sodná, vosk s nízkou teplotou tání, kakaové máslo a podobně.

Tablety, prášky, pastilky, kapsle mohou být použity jako pevné dávkové formy vhodné pro orální podání. Lék může být aplikován také jako sprej (buď v tlakovaném zásobníku opatřeném vhodným ventilem nebo v netlakovaném zásobníku opatřeném ventilem pro odměření dávky).

Mezi kapalné dávkové formy patří roztoky, suspenze a emulze.

Roztoky aktivní sloučeniny ve sterilní vodě nebo roztokách voda-propylenglycol mohou být uvedeny jako příklady kapalných prostředků vhodných pro parenterálni aplikaci. Kapalné prostředky mohou být také připraveny ve vodném roztoku polyethylenglykolu.

Vodné roztoky pro orální aplikaci mohou být připraevny rozpuštěním aktivní složky ve vodě a přidáním vhodných barviv, chuťových korigens, stabilizačních činidel a zahušťovacích čindiel, podle potřeby. Vodné suspenze pro orální podání mohou být připraveny dispergováním jemně dělené aktivní složky ve vodě společně s viskozním materiálem, jako jsou přirozené syntetické klovatiny, pryskyřice, methylcelulosa, karboxymethylcelulosa sodná a jiná suspendační činidla známá ve farmacii.

Výhodně je farmaceutický prostředek ve formě dávkové jednotky. V takové formě je prostředek rozdělen do • · · 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 ··· • · 9 · · 9 · · · • ·♦···· · · · · · · jednotlivých dávek obsahujících vhodná množství léku. Dávkovou jednotkou může být balený prostředek, balení obsahující oddělené dávky prostředku, například balené tablety, kapsle a prášky, a prášky ve zkumavkách nebo ampulích. Dávkovou jednotkou může být také kapsle, pastilka nebo tableta, nebo vhodný počet takových jednotek.

Následující příklady ilustrují vynález bez toho, že by jej nějak omezovaly.

Příklady provedení vynálezu

Modelem použitým pro hodnocení použitelnosti sloučenin podle předkládaného vynálezu pro léčbu CHONBP byl model neutrofilie. Neutrofilie byla indukována aplikací lipopolysacharidového (LPS) aerosolu krysám nebo myším..

Příklad 1: Neutrofilie indukovaná LPS aerosolem u C57bl/6 myší

1.1 Protokol pokusu:

Podání sloučeniny 1

Zvířatům byla aplikována sloučenina 1 za vědomí, to znamená orálně.

Aplikace LPS

Jednu hodinu po aplikaci byly myši umístěny do plexisklového boxu (maximálně 25 myší na box) a bylo aplikováno 100 pg/ml aerosolu LPS (Escherichia coli, serotyp

055:B5) po dobu 1 hodiny. Kontrolním myším nebyl aplikován

LPS aerosol.

• · · · · · ·· · • · · · · · · · · · · ···· · · · · · · • ······ ·· ··· · · • · · ······ • · · ····· ·· · · ·

Anestesie a tracheotomie hodin po aplikaci LPS byla zvířata uvedena do anestesie pomocí intraperitoneální injekce 0,6% pentobarbitalu sodného v dávce 15 ml/kg. Provedla se tracheotomie a vložila se tracheální kanyla.

Bronchoalveolární laváž

Pomocí 1 ml injekční stříkačky se provedlo 6 postupných laváži za použití 0,3 ml PBS roztoku (37°C) za účelem získání buněčné populace, která je přítomna v lumen dýchacích cest. Získaná kapalina se uskladnila při teplotě +4 °C na ledu.

Určení složení buněk v bronchoalveolární laváži

Buňky získané z kapaliny z bronchoalveolární laváže se počítaly za použití Coulterova počítacího přístroje. Po přenesení na mikroskopické sklíčko odstředěním (Cytospin®) se vzorky barvily May Grunwald - Giemsovým barvením. Populace buněk se diferencovaly mikroskopicky (xlOO) podle morfologických kriterií.

Hodnotící kriterium

Hlavním hodnotícím kriteriem byl počet neutrofilů/ttil bronchoalveolární laváže. Ten se vyjádřil jako 10⁵ (E+05) buněk/ml.

Výsledky

Aritmetický průměr a standardní odchylka (SD) počtu neutrofilů v bronchoalveolární laváži se vypočetly pro každou skupinu. Procento inhibice se vypočítalo následujícím způsobem:

Cpozit. kontrola ^— Cléčeni (procento inhibice) léčení = x 100

Cpozit. kontrola • · • · 9

99999 9

Cposítívni kontrola· Aritmetický průměr koncentrace buněk v pozitivní kontrolní skupině, kde tato hodnota byla použita jako 0% inhibice.

Ciéčeni : Aritmetický průměr koncentrace buněk v léčené (nebo referenční) skupině.

90% interval spolehlivosti pro procento inhibice byl vypočítán Delta metodou nebo Fiellerovou metodou ^{11 & 111}(Armitage & al, 1998; Feuerstein & al, 1997; Hubert & al, 1988), podle toho, co bylo vhodné.

1.2 Výsledky

Výsledky těchto pokusů ukazují, že sloučeniny vzorce I a zejména sloučenina 1 silně inhibují plicní neutrofilii indukovanou LPS u myší.

Příklad 2: Neutrofilie indukovaná LPS aerosolem u Wistar krys

2.1 Protokol pokusu:

Aplikace léčby

Zvířata byla léčena sloučeninou 1 nebo cilomilastem za vědomí, to znamená orálně.

Aplikace LPS

Jednu hodinu po aplikaci byly myši umístěny do plexisklového boxu (maximálně 25 myší na box) a bylo aplikováno 200 pg/ml aerosolu LPS (Escherichia coli, serotyp

055:B5) po dobu 1 hodiny. Kontrolním myším nebyl aplikován •· · · ·· ·· • · · ···· · · · ···« · 4 · · ♦ • ······ · · · · · ·

LPS aerosol. Tato kontrola je na obr. 1 a 2 označena jako kontrola.

Anestesie a tracheotomie hodin po aplikaci LPS byla zvířata uvedena do anestesie pomocí intraperitoneální injekce 6% pentobarbitalu sodného v dávce 1 ml/kg. Provedla se tracheotomie a vložila se tracheální kanyla.

Bronchoalveolární laváž

Pomocí 5 ml injekční stříkačky se provedly 3 postupné laváže za použití 5 ml roztoku 0,9% NaCl + EDTA (37°C) za účelem získání buněčné populace, která je přítomna v lumen dýchacích cest. Získaná kapalina se uskladnila při teplotě +4 °C na ledu.

Určení složení buněk v bronchoalveolární laváži

Viz přiklad 1.

Hodnotící kriterium

Viz příklad 1.

Vyjádření výsledků

Viz příklad 1.

2.2 Výsledky

Jak je uvedeno na obr. 1, sloučenina 1 silně a výrazně inhibuje plicní neutrofilii indukovanou LPS u Wistar krys, s procentuální inhibici 74% při dávce 10 mg/kg. Srovnání těchto výsledků s výsledky získanými pro cilomilast (Ariflo®) ve stejném modelu (obr. 2) ukazuje, že sloučenina (s procentuální inhibici 80% při 30 mg/kg) je účinnější než cilomilast při stejné dávce. Zejména při dávce 10 mg/kg • · ♦ · je sloučenina 1 dvakrát účinější než cilomilast při stejné dávce. Jinými slovy, sloučenina 1 je aktivní při dávce 10 mg/kg (procentuální inhibice: 74%) jako cilomilast při dávce 30mg/kg (procentuální inhibice: 74%).

Příklad 3: Inhibice produkce TNFa indukované LPS in vitro v plné krvi pacientů s CHONBP

Cíle pokusu by srovnání in vitro aktivit tří selektivních inhibitorů PDE4 (sloučeniny 1, rolipramu, což je 4-[3-(cyklopentyloxy)-4-methoxy-fenyl]-2-pyrrolidinon, a cilomilastu) v redukci lipopolysaccharidem (LPS)indukovaného uvolňování TNFa v plné krvi od pacientů s CHONBP. 13 pacientů s CHONBP, diagnostikovaných podle ATS guidelines^iV, bylo zahrnuto do této studie pro stanovení efektu koncetrace LPS na produkci TNFa (n=6) a IC50 hodnot sloučeniny 1, rolipramu a cilomilastu (n=7).

3.1 Protokol pokusu:

Krev (15 ml/pacienta) byla odebrána do heparinových zkumavek a byla umístěna do 96-jamkových mikroploten (250 μΐ/jamku). Po 30-minutové inkubaci při teplotě 37°C se do různých jamek přidalo 25 μΐ stoupající koncentrace testované sloučeniny nebo vehikula. Mikroplotny se potom inkubovaly při teplotě 37°C po dobu 30 minut a potom se přidalo 25 μΐ LPS (E. coli) v dávce 50 pg/ml (stimulované jamky) nebo 25 μΐ sterilního salinického roztoku (nestimulované jamky). Mikroplotny se potom inkubovaly po dobu 22-24 hodin při teplotě 37°C. 125 μΐ supernatantu plasmy se opatrně přeneslo ve sterilní 96-jamkové mikroplotně a provedlo se uskladnění při teplotě - 80°C do provedení testu na TNFa. Produkce TNFa se potom měřila ELISA testem.

• · ·♦··

3.2 Výsledky

Po inkubaci přes noc s LPS se koncentrace TNFa v plné krvi zvýšily způsobem závislým na koncetraci z nedetékovaetlných základních hodnot na průměr 8,1 ± 2,0 ng/ml při dávce 50 pg/ml LPS. Pre-inkubace se sloučeninou 1 vedla k inhibici uvolnění TNFa závislé na dávce s IC50 hodnotou 1,3 ± 0,7 μΜ. IC₅o hodnoty byly 2,8 + 0,9 μΜ pro rolipram a > 10 μΜ pro cilomilast. Tato data ukazují, že sloučenina 1, která inhibuje uvolňování TNFa indukované LPS in vitro u pacentů s CHONBPlépe než rolipram a cilomilast, může být použita jako protizánětlivé činidlo v terapii tohoto onemocnění.

^I ARMITAGE P. & COLTON T. (1998). Fieller's Theorem. Encyklopedia of Biostatistics, Svazek 2, str. 15151516. Wiley, New York.

^II FEUERSTEIN T.J., ROSSNER R. & SCHUMACHER M. (1997). How to Express an Effect Mean as Percentage of a Control Mean. Journal of Pharmacology a Toxicology Methods 37, str. 187-190.

^i:Íi HUBERT J.J., BOHIDARD N.R. & PEACE K.E. (1988).

Biopharmaceutical Statistics for Drug Development, Assessment of Pharmacological Activity section, str. 83-148. Karl peace, New York.

^1V Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1995; 152: S77-S120.

··· · * ♦ · · • · · · · 9 • ···«·· 9 • · · · · · 9 · 9

9 ·99 ·· · · ···

V//oo4 - /tqqq

Claims

1. Použití diazepinoindolů vzorce (I) kde:

- B znamená:

1) -ORi, kde Ri znamená -H nebo R4,

2) -NR2R3, kde Rs znamená -C(NH)NH₂ a R3 znamená -H, 3) -NR2R3, kde Rs znamená R4 a R3 znamená -H, 4) -NR2R3, kde Rs a R3 nezávisle znamenají -H nebo nižší alkyl, nebo 5) —NR2R3₁ kde Rs a R3 tvoří, dohromady s atomem dusíku,

na který jsou navázány, nasycený 5- až 7-členný heterocyklus, který může obsahovat jako druhý heteroatom, který není přímo navázán na atom dusíku, kyslík, síru nebo dusík;

- R4 znamená:

1) -CH2-CO2H,

2) -CO-(CH₂)p-CO₂H,

3) -CO-A, kde A je stejný, jak byl definován výše,

4) -CO-CH=CH-CO₂H,

5) -CO-(CH2) n~CH3, kde n je celé číslo od 0 do 18,

9 ·

6) -CO- (CH₂-O-CH₂)_p-CH₂-O-CH₃,

7) -CO-(CH₂-O-CH₂) _P-CO₂H,

8) - (CH₂)_P-NR₅R6/ Rs a R₆ znamenají nezávisle -H nebo nižší alkyl, nebo

9) - (CH₂)_p-NR₅R₆, R₅ a Rg tvoří, dohromady s atomem dusíku, na který jsou navázány, nasycený 5- až 7-členný heterocyklus, který může obsahovat jako druhý heteroatom, který není přímo navázán na atom dusíku, kyslík, síru nbeo dusík;

- p je celé číslo rovné 2, 3 nebo 4;

jejich racemických forem a izomerů, zejména těch, jejichž konfigurace je určena uhlíkem 3 diazepinoindol-4-onového kruhu, stejně jako jejich farmaceuticky přijatelných derivátů, pro výrobu léčiva pro léčbu CHONBP.

2. Použití podle nároku 1, kde diazepinoindoly vzorce (I) mají absolutní konfiguraci R podle Cahn-Ingold-Prelogova pravidla, kdy asymetrický atom uhlíku je v alfa pozici vzhledem ke karbonylové skupině diazepinového kruhu.

3. Použití podle nároku 1 nebo 2, kde v diazepinoindolech vzorce (I) B znamená ORi nebo NR₂R₃, kde Rj., R_{2 a} R3 znamenaj í vodík.

4. Použití podle nároků 1, 2 nebo 3, kde v diazepinoindolech vzorce (I) A znamená aryl substituovaný 1 až 3 skupinami nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující halogen, amino, nižší alkyloxykarbonylamino nebo alkoxy skupiny.

5. Použití podle nároků 1, 2 nebo 3, kde v diazepinoindolech vzorce (I) A znamená monocyklický heteroaryl obsahující dusík obsahující od 1 do 2 atomů dusíku nebo bicyklický heteroaryl obsahující dusík obsahující od 1 do 4 atomů dusíku.

• · ·

6. Použití podle nároku 5, kde heteroaryl je substituovaný skupinou vybranou ze skupiny zahrnující amino skupinu, nižší alkyl, nižší alkyloxykarbonylamino skupinu nebo alkylkarbonylamino skupinu.

7. Použití podle nároku 4, kde v diazepinoindolech vzorce (I) B znamená NH2 a A znamená aryl substituovaný 1 až 3 skupinami nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující halogen a amino skupinu.

8. Použiti podle nároku 5, kde v diazepinoindolech vzorce (I) B znamená NH2 a A znamená monocyklický heteroaryl obsahující od 1 do 2 atomů dusíku.

9. Použití podle nároku 1, 2 nebo 3, kde diazepinoindoly vzorce (I) jsou:

- kyselina (3R)-isochinolin-3-karboxylová (9-hydroxy-4-oxo-1-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro[1,4]diazepino[6,7,1-

-hi]indol-3-yl) amid;

- kyselina (3R)-4,7-dimethylpyrazolo[5,1-c][1,2,4] triazin-3-karboxylová (9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)amid;

- (3R) -4-amino-3,5-dichloro-N-(9-dimethylamino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)benzamid;

- (3R)N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-

-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)-2-benzofurankarboxamid;

- kyselina (3R)4,7-dimethyl-pyrazolo[5,1-c][1,2,4]triazin-3-karboxylová [4-oxo-l-fenyl-9-(pyrrolidin-l-yl)-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl]-amid;

- kyselina pyridin-2-karboxylové (3R)-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)amid;

- kyselina pyrazin-2-karboxylové (3R)-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)amid;

- (3R)-4-amino-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)benzamid; a

- (3R)N-(9-amino-4-oxo-1-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-

-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)-nikotinamid.

• · ·« · · 44 • 4 · 4» ·· • · · « 4 44 « · 4444 4444

444 4 4 4 4 44 • 4 9 444 «4Μ «44

10. Použití podle nároku 9, kde diazepinoindoly vzorce (I) jsou:

- (3R)-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-

-[1,4]diazepino-[6,7,1-hi]indol-3-yl)nikotinamid; a

- (3R)-4-amino-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4, 6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)benzamid.

11. Použití (3R)-4-amino-N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)benzamidu pro výrobu léku pro léčbu chronické obstrukční nemoci bronchopulmonální.

12. Použití (3R)N-(9-amino-4-oxo-l-fenyl-3,4,6,7-tetrahydro-[1,4]diazepino[6,7,1-hi]indol-3-yl)-nikotinamidu pro výrobu léku pro léčbu chronické obstrukční nemoci bronchopulmonální.