CS273134B1 - Strain of "penicillium chrysogenum ccm 8013" microorganism - Google Patents
Strain of "penicillium chrysogenum ccm 8013" microorganism Download PDFInfo
- Publication number
- CS273134B1 CS273134B1 CS842487A CS842487A CS273134B1 CS 273134 B1 CS273134 B1 CS 273134B1 CS 842487 A CS842487 A CS 842487A CS 842487 A CS842487 A CS 842487A CS 273134 B1 CS273134 B1 CS 273134B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- penicillin
- strain
- penicillium chrysogenum
- source
- microorganism
- Prior art date
Links
- 241000228150 Penicillium chrysogenum Species 0.000 title claims abstract description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 229930195708 Penicillin V Natural products 0.000 claims abstract description 5
- 229940056367 penicillin v Drugs 0.000 claims abstract description 5
- BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N phenoxymethylpenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)COC1=CC=CC=C1 BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 claims description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 16
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 abstract description 12
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 abstract description 12
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 abstract description 9
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 abstract description 9
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 abstract description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 abstract description 8
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 abstract description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 abstract description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 abstract description 2
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 abstract 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 abstract 1
- 239000013530 defoamer Substances 0.000 abstract 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 10
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 9
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 8
- ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-N-nitrosourea Chemical compound O=NN(C)C(N)=O ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 5
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 239000011593 sulfur Chemical group 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GWYQHLHNMNYPPL-UHFFFAOYSA-N 2-(nitrosomethyl)guanidine Chemical compound NC(=N)NCN=O GWYQHLHNMNYPPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- -1 chalk Chemical group 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- RHGYANGWZZFRIJ-UHFFFAOYSA-N nitrosomethylurea Chemical compound NC(=O)NCN=O RHGYANGWZZFRIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 239000007361 sporulation-agar Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
(57) Účelem řešení je Získání kmene produkujícího penicilin ve vyšších koncentracích, než jakých je dosahováno předchozími kmeny. Penicilin syntetizuje mutant Penicillium chrysogenum, získaný po působení vybraných mutagenů a po pasivních selekcích, v médiu obsahujícím vhodný zdroj uhlíku, dusíku, síry, fosforu a stopových prvků, křídu, prekurzor postranního řetězce penicilinu a odpěňovadlo, při vysoké konverzi zdroje uhlíku, za aerobních podmínek při 25 °C. Tento kmen vytváří v průběhu 168 hodinové kultivace v laboratorních podmínkách 35 300 j penicilinu V na 1 ml.
CS 273134 Bl
Vynález se týká kmene mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8013 (interního označení UV LXV A/24) produkujícího penicilín V a G a selektátů tohoto kmene.
Produkce penicilinu je v současnosti o tři řády vyšší, než tomu bylo před čtyřiceti lety, kdy výroba penicilinu začínala. Značnou zásluhu o toto zvýšení má rozvoj šlechtitelských metod, jejichž základem je využívání uměle navozované variability biologického materiálu.
Program zvyšování produkce kmenů se opírá o namátkovou selekci mutantů, indukovaných uměle pomocí vhodných chemických či fyzikálních mutagenů, a □ testování získaných mutagenizovaných kultur. Okruh používaných mutagenů se vybírá podle jejích účinků tak, aby docházelo ke zvyšování produkce a nedošlo přitom ke zhoršování životaschopnosti mikroorganismu.
Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8013, interního označeni UV LXV A/24, byl získán působením mutagenů a pasivní selekcí z výchozího knejse CCM F-760, interního označení NMU 2/40. Postup šlechtění zachycuje následující schéma, kde je znázorněna genealogická linie vedoucí ke kmenu, na nějž je uplatňován patentový nárok.
Penicillium chrysogenum
NMU 2/40 J. PS
NMU 2/40-4 | UV
UV L/114 ]. NMG
NMG 1/65 | NMU
NMU XXIV/29 | UV
UV LIX B/783
Juv
UV LXV A/24
Jps
UV LXV A/24-selektáty
Vysvětlení zkratek: UV .....
NMG .... NMU ....
PS.....
působení UV světla působení nitrosometylguanidinu působení nitrosometylurey pasivní selekce
Aplikace mutagenů:
Zdroje UV světla byla germicidní lampa Phillips TUV 40W s předřazeným stabilizátorem síťového napětí ST 250 o citlivosti 1 %. Suspenze spor ve vodě v Petriho misce, míchaná pomocí elektromagnetického míchadla, byla ozařována UV světlem. Vzdálenost misky od zdroje záření byla 20 cm. Ve zvolených intervalech bylo záření přerušováno, byly odebírány vzorky a po příslušném naředění vysévány na Petriho misky se sporulační půdou.
Pro mutagenizaci nitrosometylguanidinem byla používána koncentrace mutagenu 2 mg/ml ve výsledné mutační směsi. Doba aplikace mutagenu se pohybovala mezi 15 až 45 minutami. Směs byla míchána na elektromagnetickém míchadle v Erlenmeyerových bankách chráněných proti přístupu světla, pH mutační směsi bylo stabilizováno citrofosfátovým pufrem o pH 6,0.
V časových intervalech byly odebírány vzorky, ředěny na neúčinnou koncentraci mutagenu a vysévány na Petriho misky se sporulační půdou.
CS 273134 Bl i
Nitrosometylurea byla aplikována v konečné koncentraci 6 mg/ml. Mutagenizovaná sporová suspenze v citrofosfátovém pufru o pH 6,0 byla míchána elektromagnetickým míchadlem v Erlenmeyerových bankách chráněných před přístupem světla, ve vhodných časových intervalech byly odebírány vzorky a po naředění vysévány na Petriho misky se sporulační půdou.
Pro pasivní selekci byly spory resuspendovány v destilované vodě nebo ve fyziologickém roztoku, naředěny a vysévány na Petriho misky se sporulační půdou.
Tímto způsobem aplikace mutagenů a pasivní selekci byl získán izolát UV LXV A/24 a jeho selektáty.
Izoláty byly hodnoceny podle následujícího schématu:
izolované kolonie na Petriho misce i
šikmý agar
I vegetativní inokulum í
vlastní fermentace
Izoláty po mutagenních zásazích či po pasivní selekci byly produkčně hodnoceny ve dvou pokusech, nejlepší byly zlyofilizovány nebo uloženy do kapalného dusíku. Po vyočkování konzerv byly izoláty opětovně hodnoceny ve třech pokusech. Konzervace slouží k dlouhodobému uchovávání kmenů a umožňuje zachování získaných vlastností.
Stanovení penicilinu bylo prováděno automatizovaným systémem založeným na použití hydroxamátové kolorimetrické metody.
Tímto hodnotícím systémem byl získán kmen, na který je uplatňován patentový nárok, a jeho selektáty.
Kolonie kmene při monosporickém rozsevu dorůstají v průběhu 9 dní velikosti cqa 11 mm v průměru, střed kolonie je tvořen miskovitou prohlubní, mezi vrcholem válu a okrajem jsou kolonie zvrásněné. Barva spor je béžová. Kultura dobře a rychle sporuluje na různých typech sporulačních půd i na přírodních substrátech, jako jsou kroupy, rýže, proso apod.
Počet spor v 1 ml suspenze vzniklé smytím spor z Endovy zkumavky 10 ml vody še pohybuje kolem 10? a počet spor v 1 ml suspenze vzniklé smytím Spor ze 30 g krup 50 ml vody je
Vegetativní inokulum lze připravit na půdách obsahujících jako zdroj uhlíku sacharozu nebo glukózu. Vhodným zdrojem dusíku pro přípravu inokula je kukuřičný extrakt. Optimální stáří vegetativního inokula je 36 až 48 hodin, optimální teplota je 25 °C.
Nejvyšších produkcí je s tímto kmenem dosahováno ve fermentační půdě obsahující laktózu či sácharpzu jako zdroj uhlíku. Nejvhodnějším zdrojem dusíku je bavlníková mouka v kombinaci s anorganickým zdrojem dusíku. Oále musí půda pro fermentaci obsahovat zdroj síry, fosforu a hořčíku, uhličitan vápenatý, prekurzor postranního řetězce penicilinu a odpěňovadlo. Teplota optimální pro biosyntézu penicilinu je 25 °C.
Příklad
Vegetativní inokulum bylo připraveno submerzní kultivací kmene v 500 ml varných baňkách se 40 ml inokulační půdy, obsahující sacharózu jako zdroj uhlíku, kukuřičný výluh jako zdroj dusíku, síran amonný a další anorganické soli. Půda pro přípravu vegetativního inokula byla zaočkována kličkou spor ze šikmého sporulačniho agaru nebo 2,5 ml sporové suspenze} vzniklé smytím 30 g krup ptí ' 50 ml destilované vody, a inkubována na rotačním třepacím stroji 48 hodin.
CS 273134 Bl
Takto připraveným vegetativním inokulem byly v poměru 1:10 očkovány fermentační baňky o objemu 500 ml obsahující 40 ml fermentační půdy. Jako zdroj uhlíku ve fermentační půdě sloužila laktóza v kombinaci se sacharózou, jako zdroj dusíku bavlníková mouka v kombinaci s dusičnanem amonným. Dále půda obsahovala zdroj hořčíku, síry, fosforu, prekurzor postranního řetězce, uhličitan vápenatý a odpěňovadlo.
Příprava vegetativního inokula i vlastní fermentace probíhaly na rotačních třepacích strojích (230 obrátek za minutu, výstřednost 25 mm) při 25 °C.
Doba fermentace byla 8 dnů, vzorky pro stanovení penicilinu byly odebírány v 6., 7. a 8. dnu. fermentace. Maxima produkce bylo dosahováno v 7. dnu fermentace.
Produkční srovnání výchozího kmene s kmenem, na který je uplatňován patentový nárok, je uvedeno v následující tabulce.
| interní označení kmene | penicilín V (j/ml) |
| NMU 2/40 | 32 300 |
| UV LXV A/24 | 35 300 |
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUKmen mikroorganismu Penicillíum chrysogenum CCM 8013, vyznačující se tím, že produkuje penicilín V a G a selektáty tohoto kmene.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS842487A CS273134B1 (en) | 1987-11-23 | 1987-11-23 | Strain of "penicillium chrysogenum ccm 8013" microorganism |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS842487A CS273134B1 (en) | 1987-11-23 | 1987-11-23 | Strain of "penicillium chrysogenum ccm 8013" microorganism |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS842487A1 CS842487A1 (en) | 1990-07-12 |
| CS273134B1 true CS273134B1 (en) | 1991-03-12 |
Family
ID=5434769
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS842487A CS273134B1 (en) | 1987-11-23 | 1987-11-23 | Strain of "penicillium chrysogenum ccm 8013" microorganism |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS273134B1 (cs) |
-
1987
- 1987-11-23 CS CS842487A patent/CS273134B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS842487A1 (en) | 1990-07-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fallik et al. | Growth response of maize roots to Azospirillum inoculation: effect of soil organic matter content, number of rhizosphere bacteria and timing of inoculation | |
| US5021076A (en) | Enhancement of nitrogen fixation with Bradyrhizobium japonicum mutants | |
| Newton et al. | Isolation of cyanobacteria from the aquatic fern, Azolla | |
| Ordentlich et al. | Rhizosphere colonization by Serratia marcescens for the control of Sclerotium rolfsii | |
| WO2002072795A2 (en) | Isolated bacteria for the protection of plants against phytopathogenic fungi and bacteria | |
| Schwinghamer | Studies on induced variation in the rhizobia. I. Defined media and nodulation test techniques | |
| KR100411185B1 (ko) | 신균주 스트렙토마이세스 속 ａｇ－ｐ（ｋｃｔｃ８９６５ｐ）및 이를 이용한 식물병 방제제 | |
| US4863866A (en) | Bradyrhizobium japonicum mutants exhibiting superior soybean nodulation | |
| Park et al. | Biological control of Phytophthora crown and root rot of greenhouse pepper with Trichoderma harzianum and Enterobacter agglomerans by improved method of application | |
| KR100577717B1 (ko) | 작물생장을 촉진시키는 미생물 바실러스 메가테리움ｋｒ076(ｋａｃｃ91049) 및 이를 함유하는 미생물 제제 | |
| JPH1142083A (ja) | ５−アミノレブリン酸生産微生物及びこれを用いた５−アミノレブリン酸の製造法 | |
| US4711656A (en) | Enhancement of nitrogen-fixation with rhizobial tan variants | |
| Van Dijck et al. | Sensitivity of environmental microorganisms to antimicrobial agents | |
| CS273134B1 (en) | Strain of "penicillium chrysogenum ccm 8013" microorganism | |
| HU181488B (en) | Process for the hydrolysis of racemic hydantoins into optically active n-carbamoyl-aminoacid derivatives and for preparing the hydrolyzing enzymatic complex | |
| KR20030031371A (ko) | 항진균 활성세균인 바실러스 서브틸리스 ｙｓ1, 감마선조사를 이용한 돌연변이체 제조방법 및 그 돌연변이체 | |
| EP1018546B1 (en) | Microorganisms producing 5-aminolevulinic acid and processes for producing 5-aminolevulinic acid by using the same | |
| Lowe et al. | Ecological studies on coccoid bacteria in a pine forest soil—II. Growth of bacteria introduced into soil | |
| KR100403896B1 (ko) | 채소류 모잘록병균에 길항하는 바실러스 에히멘시스 | |
| Shah et al. | Evaluation of plant growth-promoting activity of strain HBCD-sjtu | |
| RU2001950C1 (ru) | Штамм бактерий PSEUDOMONAS AUREOFACIENS дл получени стимул тора роста растений | |
| KR100646601B1 (ko) | 작물생장을 촉진시키는 미생물 바실러스 에스피 ｋｒ083(ｋａｃｃ91050) 및 이를 함유하는 미생물 제제 | |
| CS262188B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenuniCCM F-8012 | |
| US4430429A (en) | Production of vitamin B12 -activity substances | |
| JP2002233246A (ja) | 植物生育促進能及び植物病害防除能を有する微生物 |