CS272221B2 - Method of new forskolin derivatives production - Google Patents

Description

Způsob výroby nových forskolxnových derivátů obecného vzorce VII, v němž r4 znamená vinyl, ethyl nebo cyklopropyl, r5 _a r6 znamenají jednotlivě vodík nebo C]_4alkyl nebo R? a R° znamenají společně Ci_4alkylenový řetězec, který popřípadě obsahuje atom kyslíku nebo dusíku, man znamenají čísla od 1 do 5 a X znamená vo-p⁷ dík nebo„skupinu obecného vzorce -N/ v němž r7 a R° znamenají jednotlivě vodílc^R nebo Cý_4alkyl nebo R' a R⁸ znamenají společně Ci_4alkylenový řetězec,který popřípadě obsahuje atom kyslíku nebo dusíku, nebo jejich fyziologicky přijatelných solí, spočívá v tom, že se 7-deacetylforskolinový derivát obecného vzorce VIII, v němž R^ , r5 ₍ r6 _{a m} znamenají jak shora uvedeno, nechá reagovat s karboxylovou kyselinou obecného vzorce IX, v němž n a X znamenají jak shora uvedeno, nebo jejím halogenidem nebo anhydridem, a popřípadě se výsledná sloučenina obecného vzorce VII převede na jinou sloučeninu spadající do rozsahu řízeni a popřípadě se nechá reagovat volná báze výsledné sloučeniny obecného vzorce VII s fyziologicky přijatelnou kyselinou za vzniku odpovídající soli. Nové forskolinové deriváty mají positivní inotropní, hypotensivní a adenylát-cyklásu stimulující účinky.

HOOC(CH₂)_nX (VII) tvxxx) (XX)

Tento vynález ae týká nového forskolinového derivátu, který má positivní ionotrop ní, hypotensivní a adenylát-eyklásu stimulující účinky.

O forskolinu je již známo, že má positivní ionotropní, hypotensivní a adenyláteyklásu stimulující účinky /japonská patentová vykládací přihláška č. 79 015/77 a Arzneim. Forsch. 31, 1248 (1981)/.

Forskolin je však ve vodě za teploty místnosti rozpustný pouze na 0,0026% koncentraci. Pro jeho podávání je tudíž nutné speciální farmaceutické zařízení. Je tedy žádoucí, aby byl vyvinut ve vodě rozpustný derivát forskolinu.

Z tohoto důvodu podnikli autoři tohoto vynálezu rozsáhlé studie. Výsledkem těchto studií bylo zjištění, že následující forskolinové deriváty a jejioh fyBiologicky přijatelné soli jsou v kyselém, basickém nebo neutrálním roztoku rozpustnější než forskolin, a že mají positivní ionotropní, hypotensivní a adenylát-cyklasu stimulují účinky. Tyto forskolinové deriváty jsou sloučeniny obecného vzorce VII,

V nšmž znamená vinylovou, ethylovou nebo cyklopropylovou skupinu,

R^ a R⁵ znamenají jednotlivě atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy 5 6 uhlíku nebo R a R znamenají společně alkylenový řetězec s 1 až 4 atomy uhlíku, který popřípadě obsahuje atom kyaliku nebo dusíku, man znamenají čísla od 1 do 5 a

X znamená atom vodíku nebo skupinu obecného vzorce

8 v němž R‘ a R znamenají jednotlivě atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy 7 8 uhlíku nebo R a R znamenají společně alkylenový řetězec s 1 až 4 atomy uhlíku, který popřípadě obsahuje atom kyslíku nebo dusíku, nebo jejich fyziologicky přijatelné soli.

Ve shora uvedeném vzorci VII alkylové skupina s 1 až 4 atomy uhlíku znamená skupinou methylovou, ethylovou, propylovou nebo butylovou. Alkylenový řetězec s 1 až 4 atomy uhlíku, který popřípadě obsahuje atom kyslíku nebo dusíku, znamená například

-((Ή₂)₃-, -(CH₂)₄-, -(CH₂)₂-NH-(CH₂)₂-nebo -(CH₂)₂-0-(CH₂)₂-.

6

Skupina obecného vzorce -CO(CH₂)_niír(R )R znamená například dimethylamínoacetylovou skupinu, diethylaminopropionylovou skupinu, butylaminoacetylovou skupinu, dimethylaminopropionylovou skupinu, dimethylaminobutyrylovou skupinu, pyrrolidinbutyrylovou skupinu, pyrrolidinacetylovou skupinu, piperazinacetylovou

CS 272221 ’B2 skupinu nebo morfolinacetylovou skupinu. Skupina -C0(CH₂)_nX znamená například acetylovou, propionylovou nebo butyrylovou skupinu nebo kteroukoliv ze shora uvedených různých aminoacylových skupin.

Forskolinové deriváty obecného vzorce VII se podle vynálezu vyrábějí tak, že se 7-deacetylforskolinový derivát obecného vzorce VIII

(VIII), v němž R^, R^, a m znamenají jak shora uvedeno, nechá reagovat s karboxylovou kyselinou obecného vzorce IX

Η000(0Η₂)_η X (IX), v němž n a X znamenají jak shora uvedeno, nebo jejím halogenidem nebo anhydridem v organickém rozpouštědle, jako je například dichlormethan, 1,2-dichlorethan, chloroform a diethylether nebo jejich směs s vodou, za teploty napřiklad mezi -20 °C a + 200 °C, s výhodou mezi - 5 °C a teplotou.varu použitého rozpouštědla.

6-Aminoalkylkarbonyl-7rdeacetylforskolin, 6-aminoalkyIkarbony1-7-deacety1-14,15-dihydroforskolin nebo 13-cyklopropyl-6-aminoalkykarbonyl-7-deaeety1-14,15-ůinorforskolin, tj. výchozí materiál obecného vzorce VIII, se může vyrobit reakcí báze se 7-aminoalkyIkarbony1-7-deacetylforskolinem nebo s 13-cyklopropy1-7-aminoalkyIkarbony1-14,15-dinorforskolinem obecného vzorce X

(V, i c £ v němž R, R , R° a m znamenají jak shora uvedeno, v polárním rozpouštědle, čímž se skupina obecného vzorce -CO(CH₂)_mN(R5)R^ dislokuje do polohy 6.

Sloučenina obecného vzorce VII, v němž R^ znamená ethylovou nebo cyklopropylovou skupinu a R^, r6, X, man znamenají jak shora uvedeno, se může vyrobit hydrogenací forskolinového derivátu obecného vzorce Vila

CS 272221 ’B2

v němž R^, R^, X, man znamenají jak shora uvedeno, něho reakcí s diazomethanem v přítomnosti katalyzátoru.

Z roztoku reakčniho produktu se sloučenina podle tohoto vynálezu isoluje a čistí obvyklými způsoby. Získává se tak ve formě volné báze, volné kyseliny nebo jako sůl, podle reakčních podmínek a podle způsobu zpracování po reakci. Jestliže je to žádoucí, volná báze i volná kyselina se mohou převádět na sůl normálním způsobem. Volná báze se může převádět na ediční sůl s anorganickou kyselinou, jako je například hydrochlorid, hydrobromid, síran nebo fosforečnan, nebo na ediční bůI s organickou kyselinou, jako jsou například soli s kyselinou mravenčí, kyselinou octovou, kyselinou fumarovou, kyselinou jablečnou, kyselinou citrónovou, kyselinou vinnou, kyselinou mléčnou nebo s methensulfonovou kyselinou. Volná kyselina se může převést na sůl s kovem, například na sodnou, draselnou, hořečnatou nebo vápenatou sůl, nebo na sůl s organickou bází, jako jsou například kvartérní amoniové soli nebo pyridiniové soli.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu, které mají asymetrický atom uhlíku ve skupinách -CO(CH₂)_nN(R5)R^ a -COÍCHgJ^X, existují teoreticky jako optické isomery. Tyto optické isomery jsou tudíž zahrnuty v rozsahu tohoto vynálezu. Optické isomery se mohou rozdělit známým způsobem, například chromatografii nebo frakční krystalizaci.

V tabulce 1 jsou popsány příklady sloučenin podle tohoto vynálezu, které se připravují podle shora uvedeného postupu.

Tabulka 1

sloučenina č.	OCO(CH„) N.(R5)R6 2 m.	OCO(CH2)nX	R4
1	OCOCHpNXCHPp	OCOCH3	CH=GH2
2	0C0CH2N.(CH^)?	0C0CH2CH3	ch==ch2
3	0C0CH2N(CH3)2	OCO(CH2)2CH3	ch=ch2
4	OCO(3H;,N(CH3)?	0C0CH2N(CH3)2	ch=ch2
5	0C0CH2N(CH2CH3)2	OCOCHij	ch=ch2
6	0C0(CH^)2Ň(CH3)2	OCOCH3	ch=ch2
7	0C0(CH?)9N.(CH?CH.p2	OCOCH3	ch=ch2
8	0C0(CH2)3N(CH3)2	ococh3	Cffe=CH2

CS 272 221 B2

Tabulka 1 (pokračování)

9 10	OCO(CH2)3Nl·	2	OCOCII3	ch=ch2
	OCOCHg/		OCOCH3	ch=ch2
11	OCO(CH2)3N.(CH3)2	ococh3	'CH2CH3
12	OCOCH2N,(CH3	^2	ococh3	CH2CH3
13	OCOCHgN^_		ococh3	CH2GH3
14	OCO(CH2)2N.(CH3)2	ococh3	CH2CH3
15	OCOCH2N(CH3	^2	ococh3	ch(ch2)

Fysiologická účinnost sloučenin podle tohoto vynálezu se stanovuje následujícími způsoby:

A. Positivní ionotropní aktivita a hypotensivní aktivita

Jako testovací zvířata se použijí dospělí psi, buS samci nebo samice, malého slíd ného psa (beagle) nebo psi smíšeného plemene. Za anesthesie pentobarbitalem sodným se do levé komory každého zvířete jeho carotidní arterií vloží polyethylenová trubička, aby bylo možno měřit vnitrní tlak levé komory. Polyethylenová trubička se vloží také do femorální arterie zvířete, aby bylo možno měřit krevní tlak. Každá polyethylenová trubička je spojena se snímačem tlaku. Tlak se kontinuálně zaznamenává na zapisovači pomocí měřidla tlaku. Další zvýšení rychlosti vnitřního tlaku levé komory (dp/dt) se stanoví pomocí diferenciálního měřiče a kontinuálně se zaznamenává podobným způsobem. Slouží jako index ionotropní účinnosti.

Účinnost testovaných sloučenin je representována relativními hodnotami k maximálním účinkům daným forskolinem. Maximální zvýšení rychlosti (dp/dt) a maximální snížení středního krevního tlaku (MIBP), které pocházejí od intravenosního podávání 30 ^ug/kg forskolinu, se bere jako 1; účinnost testovaných sloučenin je vyjádřena jako relativní hodnoty pocházející od intravenosního podávání 300 ^ug/kg nebo 30 ^ug/kg testovaných sloučenin.

B. Aktivita stimulující adenylát-cyklasu , Jako authentický vzorek adenylát-cyklasy se použije membránová frakce získaná z homogenátu srdečního svalu morčat /viz: G. I. Drummond, D. L. Severson a L. Kuncan: J. Biol. Chem. 246, 4166 (1971)/. Značený cyklický adenosinmonofosfát (cAMP), který se produkuje působením adenylát-cyklasy na značený adenosintrifosfát (ATP) jako substrát, se stanovuje způsobem podle Salomona Y., Londese C, a Roďbella M.: Anal.

CS 272221 32

Biochem. 58, 541 (1974). Reakce se inicuuje tím, že se authentický enzym přidá k roztoku 25 mM Tris-HCl (pH 7,5) obsahující 5 mM MgClj, 20 mM kreatin-fosfátu, 100 jednotek na mililitr kreatin-fosfokinasy, 1 mM cAMP, 1 mM /'^C(U)/ ATP (přibližně 7 impulsů za minutu/pikomol) a buď forskolin nebo testovanou sloučeninu (1 χΐιΜ) tak, aby konečný objem reakčni směsi byl 100 /ul. Authentický enzym se používá v množství 150 až 200 mikrogramů na 100 mikrolitrů jako membránový protein. Po 10 minutách při teplotě 37 °C se reakce zastaví přidáním 100 yul roztoku (pH 7,5), který obsahuje 2 % dodecylsulfátu sodného (SDS), 40 mM ATP a 1,4 mM cAMP. Aby bylo možno měřit procenta vzniklého cAMP, přidá se 50 /Ul /^JH/cAMP (asi 20 000 impulsů za minutu). Potom se isoluje cAMP chromatografii na koloně pryskyřice Dowex 50 a na koloně oxidu hlinitého a změří se radioaktivita cAMP.

Aktivita stimulace adenylát-cyklasy testovaných sloučenin (1 ^uM) se vyjádří jako procento účinnosti vztažené k forskolinu (1 yum), /a znamená číslo 4 (n znamená číslo 6 pro sloučeninu č. 1 a 6 a n znamená Číslo 2 pro sloučeninu č. 9, 10 a 11), střední hodnota £ standardní odchylka/.

Tabulka 2 ukazuje výsledky testů A a B pro typické sloučeniny podle tohoto vynálezu.

Tabulka 2

Pýziologické účinnosti forskolinových derivátů

sloučenina č.	A. positivní inotropní a hypotensivní účinnosti	B. adenylát cyklasu aktivující účinnost (%)
dávka ( g/kgj 'iv.)	positivní inotropm účinnost, (dp/dt)	hypoten- sivní účinnost
1	300	1,1	2,0	90,4 + 4,7
2	300	0,8	1,2	45 rl ±6,9
3	300	0,8	1,0	40,2 _ 7,1
4	300	0,9	0,7	19,5 + 0,5
6	30	1,2	0,8	107,-4 ± 7,1
7	300	1,0	1,5	.27,9 + 16,2
8	30	1,0	0,9	91,1 ± 14,6
9	30	0,9	0,7	214,9
10	30	0,6	0,6	57,8
11	30	0,5	0,6	114,7
15	300	0,8	0,8	-

C. Rozpustnost

Z výsledků měření rozpustnosti sloučenin podle tohoto vynálezu ve vodě vyplývá, že všechny sloučeniny podle tohoto vynálezu vykazují vyšší rozpustnosti než forskolin.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mají tedy výtečnou inotropní, hypotensivní a adenylát-cyklasu stimulující účinnost a jsou ve vodě rozpustnější než forskolin. Předpokládá se, že sloučeniny podle tohoto vynálezu budou účinné jako lék pro chronickou srdeční nedostatečnost, jako hypotensivní činidlo a jako mozkový vasodilatátor a dále jako lék u onemocnění, jako je například glaukom, astma, nedostatečná imunita, nádory a při nemocech zažívacího systému, které jsou způsobeny abnormální regulací cAMP. Vhodné dávky sloučenin podle tohoto vynálezu při léčení nemocí obvykle jsou cd 0,01 do 30 mg/kg a den, i když dávkování závisí na stavu onemocnění, na věku pacienta, který má být léčen a na způsobu podávání.

Výhodnými sloučeninami podle tohoto vynálezu jsou 6-dimethylaminoacetylforskolin (sloučenina číslo 1), 6-(3-dimethylaminopropionyl)forskolin (sloučenina číslo 6),

6-(4-dimethylaminobutyryl)forskolin (sloučenina číslo 8),

6-(4*aminobutyryl)forskolin (sloučenina číslo 9),

6-pyrrolidinoacetyl)forskolin (sloučenina číslo 10) a

6-(4-dimethylaminobutyryl)-14,15-dihydroforskolin (sloučenina číslo 11). Z těchto slou čenin pro svou therapeutickou účinnost a pro své další vlastnosti jsou zvláště výhodné sloučeniny číslo 6, 8 a 9.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu se mohou smíchat s vhodnými farmaceuticky přija telnými nosiči. Získají se tak tablety, granule, jemnější granule, prášky, tobolky, in jektovatelné prostředky, čípky, oční kapky, sádry, masti a další formy farmaceutických prostředků, které se mohou podávat orálně nebo parenterálně. Sloučeniny podle tohoto a

vynálezu jsou ve vodě rozpustnější než forskolin, takže se mohou připravovat jako vodný roztok vhodný pro infusní nebo intravenosní podávání. Očekává se tedy, že při paren terálním podávání mají velké therapeutické účinky.

Tento vynález je podrobněji ilustrován v následujících příkladech, kde je kromě přípravy sloučenin podle vynálezu, tj. sloučenin č. 1 až 15, uvedena též příprava sloučenin č. 16 až 33, popsaných v tabulce 3, z nichž mnohé slouží jako výchozí látky pro přípravu sloučenin podle vynálezu. Tyto příklady však neomezují rozsah vynálezu.

Tabulka 3

CS 272221 82

Tabulka 3 (pokračování) sloučenina č

R^c

R

IC

H

H

H

H

H

H

C00H2E(CH3)2 COGH2KH(CH2)3CH3 COČH2MCÉ2CH3)2··	®H=CH2 ch=ch2 ch=gh2
GOCH2N		CH=CH2
r~ 0OGH2N<\_ z™-	/NH	ch=ch2
C0CH2n/	V	CHf=CH2

22	H
23	H
24	COCH2Ní( CH3) 2
25	coch2n.(oh2ch3)2
26	C0CH2NH(CH2)3CH3
27	ÓO(CH2)3N!(CH3)'2'
28	co(čh2)2n(ch3)2
29	CO(ÓH2)2N!(ČH2CH3)
30	COGH3
31	H
32	H
33	COCH3

co(gh₂)₂n.(ch₃)₂

CO(CH₂)₃N

H

H

H

H

H coch^;2n;(ch₃)₂ co(ch₂)₃ní(ch₃)₂ co(čh₂)n(ch₃)₂ gh=oh₂ ch=ch₂

CH=GH₂ ch=ch₂

CH=CH₂

CH=CH₂

CH=CH₂

CH=CH₂ ch=ch₂ óh=ch₂ čh₂ch₃

CH=<2H-

CO(CH₂)₃N

Příklad 1

7-Deacetyl-7-dimethylaminoacetylforskolin (sloučenina č. 16)

Roztok (1 ml) hhloracetylchloridu (250 mg) v dichlormethanu se přidá ke směsi 7-deacetylforskolinu (500 mg), pyridinu (250 mg) a dichlormethanu (10 ml) za chlazení ledem a za míchání při teplotě místnosti během jedné hodiny. Za chlazení ledem se přidá další roztok pyridinu (75 mg) a ecetylchloridu (75 mg) v dichlormethanu (1 ml).

Směs se míchá za teploty místnosti tři hodiny, aby se reakce ukončila. Potom se roztok produktu odpaří dosucha ve vakuu, aby se odstranil dichlormethan a nezreagované složky. Získá se tak olejovitý 7-deacetyl-7-chloracetylforskolin, který se bez dalšího čištění podrobí následující reakci.· To znamená, že se olejovitý produkt rozpustí v dichlormethanu (10 ml), za chlazení ledem se přidá dimethylamin (3 ml) a směs se míchá jednu hodinu, aby se reakce ukončila. Tento roztok produktu se zahustí ve vakuu a po přidání vody se směs extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva (roztok extraktu) se promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a zfiltruje, aby se odstranilo sušicí činidlo. Filtrát se zahustí ve vakuu. Koncentrát (780 mg) se vyčistí chromatografií na silikagelu. Eluce ethylacetátem poskytuje 7-deacetyl-7-dimethylaminoacetylforskolin (468 mg, 76 % výtěžku vztaženo na 7-deacetyl-forskolin), teplota tání 162 až 166 °C (rekrystalováno ze směsi hexanu s ethylacetátem). IČ spektrum (nujol): 3450, 3200, 1735 a 1705 cm“'¹'. Hmotové spektrum (m/z, relativní intensita): 453 (M⁺, 5), 357 (6), 102 (71), 59 (52), (100). Tento krystalický produkt se rozpustí v dioxanu. Přidáním ekvimolárního množství kyseliny chlorovodíkové rozpuštěné v dioxanu se získá hydro chlorid produktu, t.t. 284 až 287 °C (ethanol). IČ spektrum (nujol): 1740 a 1710 cm“'¹'. Sloučeniny číslo 17 až 21 se také získávají podle shora uvedeného postupu, ale s tím, že se místo dimethylaminu používají aminy, které jsou uvedeny v tabulce. V tabulce platí, že výtěžky jsou vztaženy na 7-deacetylforskolin, IČ spektrum (v nujolu) je měřeno v cm“'¹' a u hmotového spektra je udáváno m/z (relativní intensita).

Tabulka 4 slouče- amin nina č.

butylamin ethylamin

výtěžek (%)	t.t. C 0)	IČ	hmotové spektrum
14	175-8	5610	481 (M+, 10)
	(hexan- ethyl-	5520	585 (5)
	acetát)	5520	550 (5)
		1750	524 (7)
		1710	152 (100)
			86 (100)
90	150-5	5500	481 (M+, 12)
	(hexan• ethyl-	5180	585 (5), 150 (72)
	acetát)	1740	88 (100), 87 (100)
		1710	58 (61)

CS 272221 B2.

Tabulka 4 (pokračování)

19'	pyrrolidin	71	178-182 (hexan- ěthyl- acetát)	5000 5440 5160 1750 1710	479(M+, 1), 150-(6), 128 (9), 85 (7), 84 (100)
20	piperazin	32	olej		494 (M+, 5), 452 (2), 582 (10), 145 (28), 99 (100)
'21	fflorfolin	28	182-185 (hexaň- ěthyl- acetát)	549Ο 5140 1755 1715	495 (M+, 2) 599 (2), 146 (9), 144· (10), 100(100)

Příklad 2

7-Deacetyl-7-(3-dimethylaminopropxonyl)forskolxn (sloučenina číslo 22)

Směs forskolinu (15 g)> terc.butyldxmethylchlorsilanu (11,25 g), itnidazolu (5,25 g) a N,N-dimethylformaniidu (45 ml) se míchá při teplotě 70 °C 21 hodinu až do úplného skončení reakce. Potom se roztok produktu vlije do vody. Tato směs ae extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a áušidlo se odfiltruje. Filtrát se ve vakuu zahustí. Získá se surový Kterc.butyldimethylsilyl)forskolin (21,62 g).

Tento olejovitý produkt (21,62 g) se rozpustí v methanolu (250 ml). K tomuto roztoku se přidá 1ΪΓ vodný hydroxid sodný (40 ml) za chlazení ledem. Tato reakční směs se míchá přes noc za teploty místnosti, aby se reakce dokončila. Potom se reakční směs zahustí ve vakuu. Koncentrát se po přidání vody extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a sušidlo se odfiltruje. Filtrát se zahhustí ve vakuu. Koncentrát se vyčistí chromatografií na silikegelu (hmotnost koncentrátu: 20 g). Eluce směsí hexanu s ethylacetátem v poměru 5 : 1 poskytne l-(terc. butyldimethylsilyl)-7-deacetylforskolin (17,42 g, 99% výtěžek vztaženo na forskolxn) jako olej. IČ spektrum (čistý): 3500, 3300 a 1710 cm“¹ .MS: m/z (relativní intensita): 482 (M⁺, 0,8), 466 (100), 407 (8), 311 (20), 191 (36), 75 (100).

Ke směsi olejovitého produktu (1,5 g), pyridinu (320 mg) a dichlormethanu (ÍO ml) se přikape 3-chlorpropxonylchlorxd (513 mg). Po pětxhodinovém míchání za teploty místnosti se ke směsi přidá pyridin (320 mg) a 3-chlorpropionylehlorid (513 mg). Tato reakční směs se míchá za teploty místnosti přes noc, aby se reakce ukončila. Roztok produktu se po přidání vody extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou, vysuší a sušidlo se odstraní odfiltrováním. Filtrát zahuštěním.poskytne surový l-(terc, butyl-dimethylsilyl)-7-(3-chlorpropionyl)-7-deacetylforskolin (2,09 g) jako olej,

K roztoku (10 ml) tohoto olejovitého produktu v dichlormethanu se za chlazení ledem přidá nadbytek dimethylaminu. Tato směs se míchá za teploty místnosti dvě hodiny, aby se reakce dokončila. Potom se roztok produktu zahustí. Získá se surová l-(terc.

butyldimethylsilyl)-7-4eacetyl-7-(3-dimethylaminopropionyl)forskolin (877 mg) jako olej.

CS 272221 .32

NMR spektrum (CDCl^ ď) ·. 5,44 (1H, d, J = 4,6 Hz), 4,62 (1H, široký /dále br/ s),

4,60 (1H, br s), 2,86 (6H, s, 1,70 (3H, s), 1,45 (3H, s), 1,33 (3,H, s), 1,26 (3H, s), 1,05 (3H, s), 0,87 (9H, s), 0,14 (3H, s), 0,02 (3H, s).

K methanolickému roztoku (10 ml) tohoto olejovitého produktu (865 mg) se přidá kyselina trifluoroctová (4 ml) za chlazeni ledem. Směs se míchá 43 hodin za teploty místnosti, potom se zahustí. Tento koncentrát se zředí zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a promyje ethylacetátem. Oddělená vodná vrstva se zalkalizuje 28% vodným amoniakem a extra huje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou, vysuší síranem horečnatým a sušidlo se odfiltruje. Filtrát se zahustí a rekrystaluje ze směsi hexan-dichlormethan. Získá se 7-deacetyl-7-(3-dimethylaminopropionyl)forskolin (283 mg). Výtěžek 41 % vztaženo na l-(terc.butyldimethylsilyl)-7-deacetylforskolin. Teplota tání produktu: 150 až 153 °C. Hmotové spektrum : m/z (relativní intensita): 467 (M⁺, 2), 202 (2), 159 (8),

118 (29), 92 (61), 91 (81), 58 (100).

Příklad 3

7-Deacetyl-7-(4-pyrrolidinobutyryl)forskolin (sloučenina Č. 23)

Ke směsi 7-deacetylforskolinu (1,3 g), pyridinu (700 mg) a dichlormethanu (40 ml) se za chlazení ledem přidá roztok (10 ml) 4-chlorbutyrylchloridu (800 mg) v dichlormethanu. Tato reakční směs se míchá 3 hodiny za teploty místnosti, aby se reakce ukončila. Roztok produktu se ve vakuu zahustí a produkt se vyčistí chromatografii na silikagelu. Eluee směsi hexanu s ethylacetátem poskytne (7-(4-chlorbutyryl)-7-deacetylforskolin (1,27 g) jako olej. ^H NMR spektrum (CDClp ¢0):

5,53 (1H, d, J = 5 Hz), 4,58 (1H, široký'singlet), 4,48 (1H, br s), 3,64 (2H, triplet,

J = 6 HZ), 2,62 (2H, ra), 2,18 (4H, m), 1,73 (3H, s), 1,45 (3H, s), 1,35 (3H, s), 1,27 (3H, s), 1,04 (3H, s).

Směs tohoto oleje (1,27 g), pyrrolidinu (20 ml) a dichlormethanu (50 ml) se míchá pět dnů za teploty místnosti, aby se reakce dokončila. Roztok produktu se ve vakuu zahustí, přidá se voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou, vysuší síranem horečnatým a sušící činidlo se odfiltruje. Filtrát se ve vakuu zahusti. Produkt se vyčistí chromatografii na silikagelu. Eluce směsí chloroformu s methanolem poskytne 7-deacetyl-7-(4-pyrrolidinobutyryl)forskolin (109 mg, 6% výtěžek vztaženo na 7-deacetylforskolin). ''H NMR spektrum (CDCl^, tť):

5,37 (1H, d, J = 4 Hz), 4,56 (1H, m), 4,50 (1H, m), 2,53 (8H, m), 1,93 (2H, m), 1,79 (4H, m), 1,73 (3H, s), 1,44 (3H, s), 1,35 (3H, s), 1,26 (3H, s), 1,03 (3H, s). Hmotové spektrum m/z (relativní intensita ): 507 (M⁺, 4), 199 (3), 156 (26), 140 (10), 92 (40), 91 (52), 84 (100).

Příklad 4

6-Dimethylaminoacetyl-7-deacetylforskolin (sloučenina č. 24)

7-Deacetyl-7-dimethylaminoacetylforskolin (200 mg sloučeniny z příkladu 1) se rozpustí-ve 20 ml směsi acetonitrilu s vodou (45 : 55), přidá se 0-,8 ml IN vodného hydroxidu sodného a. roztok se míchá 25 minut za teploty místnosti, aby se reakce ukončila. Roztok produktu se zahustí ve vakuu. Přidá se voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou a vysuší síranem hořečnatým. Sušicí činidlo se odfiltruje. Filtrát se zahustí ve vakuu a koncentrát se vyčistí chromatografii na silikagelu. Eluce acetonitrilem poskytne 6-dimethylaminoacetyl-7-deacetylforskolin (176 mg, výtěžek 88 %), teplota tání: 116 až 117 °C. IČ spektrum (nujol): 3410, 3200,

1750 a 1720 cm^-1. Hmotové spektrum m/z: 453 (M⁺, 5), 350 (2), 237 (2), 219 (2), 104 (15), 58 (100). Tento krystalický produkt se rozpustí v dioxanu a přidá se ekvimolárni množství kyseliny chlorovodíkové rozpuštěné v dioxanu. Získá se hydrochlorid produktu, t.t. 263 až 265 °C (ethanol). IČ spektrum (nujol): 3490, 3230, 2680, 1745 a 1710 (cm^-1).

Následující sloučeniny se získávají stejným presmykem s tim, že se při tom používají odpovídající 7-substituované 7-deacetyl-forskoliny.

Tabulka 5 sloučenina

č.

výtěžek

t.t.

-‘•H-NMR (CDCl^íT):

Hmot. spektrum

3θ %

84—86 °0 (hexanethylacetát) fo 159-162 °0

5,89 C1H, q, J = 4 Hz,

J = 2,7 Hz), .

4,66-ClH, br s)

4-,29 (1H, d, J = 4 Hz) 3,54 (2H, střed AB kvartetu, J = 17,5 Hz)

4-81 (M+,5) 150(15)

87·(25) (100)

2,71 (4H, 1,62 (5H, 1,4-2 (5H, 1,40 (5H, 1,08 pH, 1,06 (5H, 0,98 C3H,

q.-J = 7 Hz)

J = 7 Hz)

5,94 (1H, kvartet, J = 481 (M⁺,2)

4,8-Hz, J = 5,1 Hz) 465 (0,8)

4,66 (1H, široký s) 152 (35)

4,51 (1H, d, J = 4,5 Hz) 86 (100) 5,45 (2H, střed AB kvartetu, J = 17,5 Hz)

2,65 (2H, t, -J = 7,6 Hz)

1,59 (3H, s) 1,49 (2H, ni),

1,42 (5H, s), 1,59·(3H, a), 1,55 (2H, m), 1,08 (5H, s), 0,98 (5H, s),

0,91 (5H, t, J = 7,5 Hz)

5,90 (III, triplet, 481 J =6,7 Hz), 175

4,65 (1H, široký s) 132 4,26 (1H, d, J = 4 Hz) 114 2,33 (4H, m) . 91

2,20 (6H, s), 1,78 (2H, m), 1,62 (3H, s), 1,42 (3H, s), 1,41 (3H, s), 1,0?(3Η, s), 0,97 (3H, s) (M+,12) (13) · (100) (50) (19)

2Q 87,1 % bezbarvý olejový - 467 (M⁺) materiál ' ·

33,9 % bezbarvý olejovitý - 495 (M+) materiál

Příklad 5

6-Dimethylamino'acetylforskolin (sloučenina č. 1)

Ke směsi 6-dimethylaminoacetyl-7-deacetylforskolinu (sloučenina č. 24, 587 mg) a diehlormethanu (20 ml) se přidá směs pyridinu (1 g) a acetylchloridu (750 mg) ve čtyřech podílech. Směs se míchá 7 hodin za teploty místnosti, aby se reakce ukončila. Roztok, produktu se po přidání vody zalkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (NaHCO^) a produkt se extrahuje dichlormethanem. Organická vrstva se vysuší sí raném hořečnatým a sušidlo se odfiltruje. Filtrát se zahustí a koncentrát (811 mg) se vyčistí chromatografii na silikagelu. Eluce směsí hexanu s etherem (1 : 3) poskytne 6-dimethylaminoacetylforskolin (444 mg, výtěžek 69 %), teplota tání 190 až 193 °C (toluen). IČ spektrum (nujol): 3100, 1750, 1730 a 1720 cm^-1. ^XH NMR spektrum (CDCl^ ): 5,86 (1H, kvartet, J = 4 Hz, J = 7,2 Hz), 5,56 (1H, dublet, J = 4,9 Hz), 4,61 (1H široký singlet), 3,18 (2H, singlet), 2,31 (6H, singlet), 2,04 (3H, singlet), 1,64 (3H, singlet), 1,42 (3H, singlet), 1,35 (3H, singlet), 1,04 (3H, singlet), 0,96 (3H, singlet) .

Hydrochlorid tohoto produktu se připraví stejným způsobem jako je to popsáno v příkladu 4, t.t. 255 až 260 °C (ethanol). IČ spektrum (nujol): 3240, 3130, 2400, 1750, 1725 cm¹.

Sloučeniny číslo 2 a 3 se připravují podle tohoto příkladu až na to, že se místo acetylchloridu použije propionylchlorid a butyrylchlorid.

Také sloučeniny číslo 5, 6, 7 a 8 se připravuji postupem podle tohoto příkladu až na to, že se místo 6-dimethylaminoacetyl-7-deacetylforskolinu použije 6-dimethylaminoacetyl-7-deacetylforskolin (sloučenina číslo 25), 6-(3-dimethylaminopropionyl)~ -7-deacetylforskolin (sloučenina číslo 28, 6-(3-diethylaminopropionyl)-7-deacetylforskolin (sloučenina číslo 29) a 6-(4-dimethylaminobutyryl)-7-deacetylforskolin (sloučenina Číslo 27).

Tabulka 6 sloudečenina δ výtěžek t.t. ¹H NMR (CDCl^)

Hmot» spektrum %

3, 38 %

5.81 (1H. kvartet, J = 4»3 ^Hz

. (3h’, t, J = 7,4 Hz)

Tabulka 6 (pokračování) %

5,84	(1H,	kvartet, J =	523	(M>,1)
	4 Hz	,: J = 2,7 Hz)	508	(0,5)
5,55	(1H,	ď, J = 4.3 Hž)	316	(2Í
4,61	(1K,	široký s)	132	(26)
2,70	(4H,	q, J= 6,9 Hz)	130	(17)
3,33	(2H,	s), 2,02 (3H, s)	95	(11)
1,66	3H,	s), 1,43 (3H, s)	87	(42)
1,35	(3H,	singlet) -	86	(100)
1,07	(6H,	triplet, J = 6,9	Hz)
1,03	(3H,	s) , 0,96 (-3H, s)

% 176-^'°C 5,54 (1H, q, J = 4’,3 Hz, (ďiethyl- J = 7,2 Hz) • ether) 5,52 (1H, dublet, J = 4 Hz)

4,62 (1H, široký singlet) 2,46 až 2,73 (5H, mt)

2,25 (6H, s),.2,02 (3H, s)

1,66 (3H,. s),. 1,44 (3H, s) 1,:35 (3H, s), 1,03 (3H, s) 0,97 (3H, s)

509 (M⁺,3) 186 (2) 160 (4)

118 (17) (25) (38) (100)

34 % 5,84 (1H, q, ď = 4,3 Hz,.

J = 2,7 Hz)

5,52 (1H, dublet, J = 4,.4 Hz) 4,61 (1H, široký singlet)

2,85 (2H, multiplet)

2,51 (6H, m), 2,02 (3H, s)

1,66 (3H„ s), 1,.44 (3H, s)

1,35 (3H,. s),

1,,04 (6H, triplet, J = 7,1 Hz) ‘ ' 1,03 (3H, s), 0,97 (3H, s)

8 31 % 238 až	5,84	(lH;	kvartet, J =	523	(M+,5)
240 °C	= 4 :	Hz, J = 3i Hz)	174	(4)
(tetrahy-	5,52	(1H,	dublet, J = 4 Hz)	132	(20)
. drofuranj-	4,61	(1H,	široký singlet)	114	(23)
(methanol)	2,35	(4H,.	multiplet)	92	(11)
	2,22	(6H,	s), 2,02 (3H, s)	91	(17)
	1,81	(2H,	m), 1,65 (3H, s)	58	(100)
	1,43	(3H,	s), 1,35·(3H, s)		•
	1,03	C3H,	s), 0,97 (3H, s)

Příklad 6

6-Dimethylaminoacetyl-7-deacetyl-7-dimethyleminoacetyl-forskolin (sloučenina číslo 4)

Chloracetylchlorid (209 mg) se za .chlazení ledem přikape ke směsi 6-dimethylaminoacetyl-7-deacetyl-forskolinu (sloučenina číslo 24, 700 mg), pyridinu (146 mg) a dichlormethanu (10 ml). Tato reakčni směs se míchá tři hodiny za chlazení ledem až do ukončení reakce. Potom se směs zahustí. Koncentrát se^-po zředěni vodou zalkalizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a^- produkt se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a sušící činidlo se odfiltruje. Zahuštěním filtrátu se získá bílá pevná látka 7-Chloracetyl-7-deacetyl-6-dimethylaminoacetylforskolinu (749 mg).

Hoztok této bílé pevné látky (20 ml, 749 mg) v dichlormethanu se přikape k roztoku (20 ml) nadbytku dimethylaminu v dichlormethanu za chlazení ledem. Směs se míchá jednu hodinu za teploty místnosti, aby se reakce dokončila. Roztok produktu se po přidání vody extrahuje dichlormethsnem. Organická vrstva se vysuší síranem horečnatým a sušící činidlo se odfiltruje. Filtrát se zahustí a koncentrát (728 mg) se vyčistí chromatografií na silikagelu. Eluce směsí dichlormethanu s acetonem (v poměru 2 : 1) .4 se získá 6-dimethylaminoacetyl-7-deacetyl-7-dimethylaminoacetylforskolin (186 mg, 23% výtěžek vztaženo na sloučeninu číslo 24). Teplota tání 180 až 183 °C (hexan-ethylacetát). Hmotové spektrum m/z (relativní intensita): 538 (M⁺, 58), 454 (8), 104 (100),

102 (100).

Podle shora uvedeného postupu se 6-acetyl-7-deacetylforskolin převede na 6-acetyl-7-chloracetyl-7-deacetylforskolin, který se dále nechá zreagovat s diméthylaminem .za vzniku 6-acetyl-7-deacetyl-7-dimethylaminoacetylforskolinu (sloučenina číslo 30, výtěžek 88 % vztaženo na 6-acetyl-7-deacetylforskolin). NMR spektrum (CDCl^, tť):

5.82 (1H, kvartet, J = 4,7 Hz, J = 3,0 Hz), 5,62 /1H, dublet, J = 4,4 Hz), 4,61 (1Ξ, široký singlet), 3,15 (2H, střed AB kvartetu, J = 17 Hz), 2,37 (6H, singlet), 2,09 (3H, singlet), 1,66 (3H, singlet), 1,44 (3H, singlet), 1,33 (3H, singlet), 1,03 (3H, singlet), 0,98 (3H, singlet).

Stejným způsobem se 6-acetyl-7-deacetylforskolin převede na 6-acetyl-7-(4-chlorbutyryl)-7-deacetylforskolin pomocí 4-chlorbutyrylchloridu. ^H NMR spektrum (CDCl-j (Τ'i:

5.83 (1H, kvartet, J = 4,3 Hz, J = 3,1 Hz), 5,55 (1H, dublet, J = 4,6 Hz), 4,63 (1H, široký singlet), 3,52 (2H, multiplet), 2,38 až 2,6 (4H, multiplet), 2,10 (3H, singlet), 2,04 až 2,2 (3H, multiplet), 1,67 (3H, singlet), 1,44 (3H, singlet), 1,36 (3H, singlet), 1,04 (3H, singlet), 0,98 (3H, singlet).

Tento produkt se nechá zreagovat s pyrrolidinem. Získá se tak 6-acetyl-7-deacetyl-7-(4-pyrrolidinobutyryl)-forskolin (sloučenina číslo 33, 14% výtěžek vztaženo na 6-ace-tyl-7-deacetylforskolin). NMR spektrum (CDCl^, Z): - .....

5,81 (1H, kvartet, J - 4,3 Hz, J = 2,9 Hz), 5,54 (1H, dublet, J = 4,6 Hz), 4,60 (1Ξ, široký singlet), 2,62 (6H, multiplet), 2,28 až 2,44 (3H, multiplet), 2,09 (3H, singlet) 1,75 až 1,95 (6H, multiplet), 1,65 (3H), 1,44 (3H, singlet), 1,35 (3Ξ, singlet), 1,03 (3H, singlet), 0,98 (3H, singlet).

Příklad 7

6- (4-Aminobutyryl)forskolin (sloučenina číslo 9) (1) Směs 4-(t-terc.butoxykarbonylamino)máselné kyseliny (8,20 g), 4-dimethylaminopyridinu (6,40 g) a dicyklohexylkarbodiimidu (12,60 g) se ve 4 podílech přidá ke směsi

7- deacetylforskolinu (3,00 g) a dichlormethanu (100 ml) za chlazení ledem. Tato reakční směs se míchá přes noc za teploty místnosti, aby se reakce ukončila. Roztok' produktu se po přidání vody (0,5 ml) zahustí ve vakuu. Ke koncentrátu se přidá dichlormethan a nerozpuštěný materiál se odstraní odfiltrováním. Filtrát se zahustí a odparek se chromatografuje na koloně silikagelu. Eluce směsí dichlormethanu s ethylacetátem (10 : 1) se získá 7-(4-(terc.butoxykarbonylamino)butyryl)-7-deacetylforskolin (sloučenina číslo 9a, 1,60 g, 36% výtěžek) jako bezbarvý olej. Hmotové spektrum m/z (relativní intensita): 535 ((M-H₂0)⁺, 23), 479 (23), 104 (34), 86 (81, 57 (100).

(2) Ke směsi tohoto olejovitého produktu (sloučenina čísla 38a, 1,50 g), acetonitrilu (90 ml) a vody (60 ml) se přidá IN vodný roztok hydroxidu sodného (6 ml). Směs se míchá za teploty místnosti 40 minut. Ihned po ukončení reakce se roztok produktu zahustí a po přidání vody se extrahuje ethylacetátem. Roztok extraktu se vysuší..síranem hořečnatým a sušicí činidlo se odfiltruje. Filtrát se zahustí a koncentrát (1,43 g) se vyčistí chromatografií na koloně silikagelu. Eluce směsí dichlormethanu s ethylacetátem (4 : 1 až 2 : 1) poskytne 6-(4-(terc.butoxykarbonylamino)butyryl)-7-deacetylforskolin (sloučenina číslo 9b, 1,12 g, 75% výtěžek), teplota tání 188 až 190 °C (ethylacetát). IČ spektrum (nujol): 3350, 1735 a 1710 cm^-1.

(3) Tato sloučenina (číslo 38 b, 1,12 g) se rozpustí v dichlormethanu (80 ml).

K tomuto roztoku se ve třech podílech přidá směs pyridinu (1,52 g) a acetyIchloridu (675 mg). Tato reakční směs se míchá 8 hodin za teploty místnosti. Ke konci reakce se přidá voda. Roztok produktu se extrahuje dichlormethanem, organická vrstva se vysuší síranem horečnatým a filtrát (po odstranění sušicího činidla odfiltrováním) se zahustí. Koncentrát (1,97 g) se vyčistí chromatografií na silikagelu. Eluce směsi dichlormethanu s ethylacetátem (10 : 1 aS 5 : 1) poskytne 6-(4-(terč.butoxykarbonylamino)butyryl)forskolin (sloučenina číslo 9c, 414 mg, 34% výtěžek), teplota tání 162 až 165 °C (směs hexanu s tuluenem).

(4) Tato sloučenina (číslo 9c, 123 mg) se rozpustí v 85% kyselině mravenčí za chlazení ledem, čímž spolu obě složky zreagují. Tento roztok se míchá dvě hodiny za teploty místnosti, aby se reakce dokončila. Roztok produktu se zkoncentruje, zředí vodou a promyje ethylacetátem. Vodná vrstva se zalkalizuje 3N vodným uhličitanem sodným. Produkt se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje, vysuší síranem hořečnatým a odfiltrováním se odstraní sušicí činidlo. Piltrát se zahustí a odparek se překrystaluje ze směsi ethylacetát - methanol. Získá se tak 6-(4-aminobutyryl)forskolin (sloučenina číslo 9, 31 mg, 30% výtěžek). Teplota tání 191 až 192 °C, IČ spektrum (nujol): 3360, 1725 cm^-1. NMR spektrum (CD^OD,

5,76 (1H, kvartet, J = 4,7 Hz, J = 3,3 Hz), 5,39 (1H, dublet, J = 4,3 Hz), 4,42 (1H, široký singlet), 2,59 (2H, triplet, J = 6,0 Hz), 2,2 až 2,4 (2H, multiplet), 1,88 (3H, s), 1,8 až 1,6 (3H, multiplet), 1,56 (3H, s), 1,37 (3Ξ, s), 1,23 (3H, s), 0,91 (6H, s). Hmotové spektrum m/z (relativní intensita): 495 (M⁺, 14), 146 (32, 104 (100), 99 (13), 86 (74).

Příklad 8

6-Pyrrolidinoacetylforskolin (sloučenina číslo 10) (1) 7-Deacetyl-7-pyrrolidinoacetylforskolin (4,20 g), který se připraví stejným způsobem jako v příkladu 7 (1) až na to, že se místo 4-(terč.butoxykarbonylamino)máselné kyseliny používá pyrrolidinoctová kyselina, se rozpustí ve směsi acetonitrilu s vodou (4 : 1) (150 ml). K tomuto roztoku se přikape IN vodný hydroxid sodný (9,63 ml) za chlazení ledem. Reakční směs se míchá za teploty místnosti 6 hodin. Pro ukončení reakce se přidá voda. Roztok produktu se extrahuje ethylacetátem, organická vrstva se zkoncentruje a rozpustí v etheru. Etherový roztok se extrahuje IN vodnou kyselinou chlorovodíkovou. K vodné vrstvě extrahovaného roztoku se za chlazení ledem přikape vodný amoniak. Roztok se tak zalkalizuje, načež se extrahuje etherem. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým. Filtrací se odstraní sušící činidlo. Filtrát se zahustí a odparek se vyčistí chromatografií na koloně silkagelu. Eluce směsí dichlormethanu s methanolem (20 : 1) se získá 7-deacetyl-6-pyrrolidinoacetyl-forskolin (sloučenina číslo 10a, 900 mg, 21% výtěžek), IČ spektrum (KBr): 3470 , 3210, 1745, 1710 cm~\ Hmotové spektrum m/z (relativní intensita): 479 (M⁺, 1), 130 (8), 84 (100).

Ke směsi shora získaná sloučeniny (číslo 10a, 100 mg) a dichlormethanu (10 ml) se za chlazení ledem přidá během 6 hodin ve čtyřech podílech pyridin (72 mg) a acetylchlorid (72 mg). Reakční směs se míchá přes noc za teploty místnosti. Potom se extrahuje dichlormethanem. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem, chloridu sodného, vysuší síranem horečnatým a odfiltrováním se odstraní sušící činidlo. Filtrát se zahustí ve vakuu (120 mg) a vyčistí chromatografií na silikagelu. Eluce směsí chloroformu s methenolem (20 : 1) se získá 6-pyrrolidino-acetylforskolin (sloučenina číslo 10, 53 mg,

50% výtěžek). Teplota tání 166 až 168 °C (dichlormethan - hexan). IČ spektrum (KBr):

3450, 3230, 1750, 1715 cm^-1.

Příklad 9

7-Deacetyl-7-(4-dimethyl8minobutyryl)forskolin (sloučenina číslo 31)

Směs dicyklohexylkarbodiimidu (35,82. mg) a dichlormethanu (120 ml) se přikape ke směsi 7-deacatylforskolinu (8,00 g), hydrochloridu 4-dimethylaminornáselné kyseliny (14,56 g), 4-dimethylaminopyridinu (21,21 g) a dichlormethanu (150 ml za chlazení ledem. Tato reakčni směs se míchá za teploty místnosti čtyři hodiny, aby se reakce dokončila. Roztok produktu se extrahuje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Vodná vrstva zalkalizovaná koncentrovaným vodným amoniakem se extrahuje diethyletherem. Organická vrstva se promyje vodou, vysuší bezvodým síranem hořečnatým a odfiltrováním se odstraní sušící činidlo. Filtrát se ve vakuu zahustí. Získá se olejovitý 7-deacetyl-7-(4-dimethylaminobutyryl)forskolin (5;41 g, 52% výtěžek vztaženo na 7-deecetylforskolin). Hmotové spektrum m/z: 481 (M ).

Příklad 10

7-(4-Dimethylaminobutyryl)-14,15-dihydroforskolin (sloučenina číslo 11)

Směs 6-(4-dimethylaminobutyryl)forskolinu (30 mg), 58% paladia na uhlí (6 mg) a methanolu (8 mg) se míchá v atmosféře vodíku pět hodin za teploty místnosti, aby se reakce dokončila. Roztok produktu se zfiltruje, aby se odstranil katalyzátor. Filtrát’ zahuštěním poskytne 6-(4-dimethylaminobutyryl)-14,15-dihydroforskolin (sloučenina číslo 11, 30 mg, 100% výtěžek). Teplota tání 210 až 212 °G (methanol). IČ spektrum (nujol) 3160, 1730 a 1740 cm^-1.

Sloučeniny číslo 32 a 12 až 14, jak jsou uvedeny v tabulce 7, se připravují stejným způsobem, jako je shora popsáno v tomto příkladu. NMR a hmotové spektrum sloučenin číslo 11, 12 a 14 jsou uvedena v tabulce 8.

Tabulka 7

sloučenina	vlastnosti výtěžek	výchozí mater.
c.	název
32	.14>15-dihydro-7-	Λ t.t. 187-188 °C 100 %	7-deacetyl-7-
	deacetyl-7-di-	(ethylacetát)	dimethylamino-
	methylaminoace-	ič (nujol): 34-70»	acetylforsko-
	tylforskolin	3180, 1750, 1700 cm-1	lín
12	'6-dimethylamino-	vzhled: bílá 100 %	6-dimethyla-
	acety1-14,15-di-	pevná látka	minoacetyl-
	hydroforslcolin	MS m:z: 497 (M+)	forskolin
13	'6_pyrrolidinoace-	vzhled.: bílá 100 %	sloučenina
	tyl-14,15-dihy-	pevná látka	číslo 10
	droforskolin	MS m/z : 507 (M+)

Λ

CS 272221 ’Β2

Tabulka 7 (pokračování)

6-(5-dimethylaminopropionyl)-14, 15dihydroforskolin vzhledl bílá 100% 6-(5-dimethylpevná látka aminopropionyl)MS m/zt 511 (M⁺) forskolin

Tabulka 8

Hmotové sp.ektrum slouče- , (m/z) .

TI NMR spektrum! (relat.^-intens.) mna c.

(rozpouštědlo, DMSO-dg, <Ť )t

5,64- (1H, triplet,· J =4-,0 Hz),

5,54 (1H, dublet, J = 4,0 Hz),

4-,54- C1H, br s), 2,4-2,5 (2H, m),

2,28 (2H, triplet,’ J = 7,0 Ήζ),

2,09 (5H, s), 1,91 (5H, s),

1,8 až 1,6 (2H, A), 1,6 až 1,4- (2H, m),

525	(M+,	26)
200	(6),	174 (10),
152	(64)	·’ *
114	(52)
58	(100)

1,4-9 (3H, s); 1,57 OH, s),

1,15 (5H, s), 0,92 (5H, s),

0,91 OH, s), 0,81 OH} t, «Γ = 6j8 Hz) (rozpouštědlo, CD^OD, íf )i 4-97 (M⁺)

5,9 až 5,3 (1H, multiplet),

5.4- 9 (1H, triplet, J = 5,5 Hz),

4,41 (1H, široký s), 1,99 OH, s),

1,98 (6H, s), 1,98 (6K,’š), 1,58 OH, s),

1.4- 7 OH, s), 1,22 OH, s), 1,01 OH, s),

1,00 OH, s), 0,89 OH, t, J = 7,5 Hz) (rozpouštědlo, GDGlj, 511 (M⁺, 7)

5,85 (1H, kvartet, J = 4-,3 Hz, 3»1 Hz), 160 (7)

5,4-9 (1H, dublet, J=4,'4 Hz), 118 09)

4-,55 (1H, široký s), 2,75 (2H, n), 116 (10)

2.57 (2H, m), 2,52 (6H, Š)',‘2,01 (3H, s) 53 (100)

1.58 (3H, s), 1,46 OH, s), 1,24 OH, s), '

1,02 OH, s), 0,97 OH, s), 0*90 OH, t, J _g 7 Hz)

Výchozí materiál pro přípravu sloučeniny číslo 32 se aůže připravit podle postupu z příkladu 9 až na to, že se místo hydrochloridu 4-dimethylaminomáselné kyseliny použije hydrochlorid Ν,Ν-dimethylglycinu.

Výchozí materiály pro přípravu sloučenin číslo 12, 13 a 14 se může připravit podle postupu z příkladu 7 s tím, že se místo 4-(terč.hutoxykarbonylamino)máselné kyseliny použije hydrochlorid Ν,Ν-dimethylglycinu, pyrrolidinoctová kyselina a 3-dimethylaminopropionová kyselina.

Příklad 11

13-Cyklopropyl-6-dimethylaminoacety1-14,15-dinorforskolin (sloučenina číslo 15)

Ke směsi 6-dimethylaminoacetylforskolinu (100 mg), octanu paladnatého (14 mg) a bezvodého tetrahydrofuranu (5 ml) se za chlazení ledem přidá etherický roztok diazomethanu. Tato reakční směs se míchá tři hodiny stále ještě za chlazení ledem, aby se reakce dokončila. K roztoku produktu se přidá voda. pH směsi se upraví přidáním 3N vodného roztoku uhličitanu sodného na 10 a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, sušící činidlo se odstraní odfiltrováním. Filtrát se zahustí a odparek se vyčistí chromatografií na koloně silikagelu. Eluce směsi dichlormethanu s etherem (4 : 1 až 2 : 1) poskytne 13-cyklopropyl-6-dimethylaminoacetyl-14,15-dinorforskolin (sloučenina číslo 15, 16 mg, 16% výtěžek). IČ spektrum (nujol):

3570, 3180, 1735 a 1715 cm^-1, ’ή NMR spektrum (CDCl-j :

0,30 (2H, m), 0,31 (lH,m), 0,75 (1H, m), 0,91 (1H, m), 0,95 (3H, s), 1,03 (3H, s),

1,32 (3H, s), 1,44 (3H, s), 1,54 (3H, s), 2,01 (3H, s), 2,43 (6H,s), 3,23 (2H, s), 4,51 (1H široký singlet)), 5,51 (1H, d, J = 5 Hz), 5,83 (1H, t, J = 4 Hz). Hmotové spektrum m/z (relativní intensita): 510 (M⁺, 23), 109 (49), 104 (100), 81(49), 59 (100), 58 (100).

Podle shora uvedeného postupu se ze 7-deacetyl-7-čimethylaminoacetylforskolinu vyrobí 13-cyklopropyl-7-deacetyl-7-dimethylaminoacetyl-14,15-dinorforskolin (sloučenina č. 19, 60 % výtěžek). IČ spektrum (nujol): 3250, 1740 a 1705 cm'\ ^H NMR spektrum (CDCl^ cT): 0,18 (2H, m), 0,49 (1H, m), 0,89 (TH, m), 0,96 (1H, m),. 1,01 (3H, s), 1,28 {3H, s), l,30 (3H, s), 1,50 (3Ξ, s), 1,66 (3H, s), 2,38 (6H, s), 3,27 2H, s), 4,43 (1H, široký s),

4,47 (1H, široký s), 5,43 (1H, d, J = 4,5 Hz). Hmotové spektrum m/z (relativní intensita): 467 (M⁺, 4), 109 (26), 104 (58), 102 (60), 85 (41), 58 (100).

Příklad 12

7-Deacetyl-7-(3-dimethylaminopropionyl)forskolin (sloučenina číslo 22)

Směs 4-dimethylaminopyridinu (3,00 g), hydrochloridu 3-dimethylaminopropionové kyseliny (3,80 g) a dicyklohexylkarbodiimidu (7,00 g) se ve třech podílech během 47 hodin přidá k roztoku (-60 ml) 7-deacetylforskolinu (2,00 g) v dichlormethanu. Tato reakční směs se míchá za teploty místnosti. Po ukončení reakce se rozpouštědlo odpaří ve vakuu. Výsledný odparek se rozpustí v ethylacetátu a roztok se zfiltruje. Filtrát se zahustí a koncentrát se vyčistí chromatografií na silikagelu (hmotnost koncentrátu: 6,05 g).

Eluce směsi dichlormethanu s methanolem (20 .: 1 až 10 : 1) poskytne 7-deacety1-7-(3-dimethylaminopropionyl)forskolin (sloučeninu číslo 22, 1,72 g, výtěžek : 68 %).

*

Claims (4)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   1. Způsob výroby nových forskolínových derivátů obecného vzorce VII (VII), v němž znamená vinylovou, ethylovou nebo cyklopropylovou skupinu, _a r^ znamenají jednotlivě atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo R^ _a 56 _znameilajf společně alkylenový řetězec s 1 až 4 atomy uhlíku, který popřípadě obsahuje atom kyslíku nebo dusíku, man znamenají čísla od 1 do 5 a

   X znamená atom vodíku nebo skupinu obecného vzorce

   R⁷

   7 8 v němž R' a R znamená jí jednotlivě atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy 7 8 uhlíku nebo R' a R znamenají společně alkylenový řetězec s 1 až 4 atomy uhlíku, který popřípadě obsahuje atom kyslíku nebo dusíku, nebo jejich fysiologicky přijatelných solí, vyznačující se tím, že se 7-deacetylforskolinový derivát obecného vzorce VIII (VIII), v němž R⁴, lČ} r⁶ a m znamenají jak shora uvedeno, nechá reagovat s karboxylovou kyše linou obecného vzorce IX '

   HOOC(CH₂)_nX (IX), v němž Hnal znamenají jak shora uvedeno, nebo jejím halogenidem nebo anhydridem, a popřípadě se výsledná sloučenina obecného vzorce VII, v němž R^ znamená vinylovou skupinu a R^, R⁶, m, n a X znamenají jak shora uvedeno, hydrogenuje v přítomnosti katalysátoru za vzniku sloučeniny obecného vzorce VII, v němž R^ znamená ethylovou skupinu a R^, r6, m, n a X znamenají jak shora uvedeno, nebo se nechá reagovat s diazomethanem v přítomnosti katelysátoru za vzniku sloučeniny obecného vzorce VII, v němž R^ znamená cyklopropylovou skupinu a R·’, R^, m, n, a X znamenají jak shora uvedeno, a popřípadě se nechá reagovat volná báze výsledné sloučeniny obecného vzorce VII s fyziologicky.přijatelnou kyselinou za vzniku odpovídající soli.
2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako karboxylová kyselina použije kyselina octová, jako halogenid kyselina acetylchlorid a jako. anhydrid kyseliny acetanhydrid.
3. 3. Způsob podle bodu 1 pro výrobu nových forskolinových derivátů obecného vzorce VII, v němž X znamená atom vodíku, m je 2, n je 1, R^ znamená vinylovou skupinu a a r6 znamenají každý methylovou skupinu, vyznačujíoí se tím, že se 7-deacetylforskolinový derivát obecného vzorce VIII, v němž R^ znamená vinylovou skupinu, a R^ znamenají každý methylovou skupinu a m je 2, nechá reagovat s kyselinou octovou, acetylchloridem nebo acetanhydridem.
4. 4. Způsob podle bodu 1 pro výrobu nových forskolinových derivátů obecného vzorce

   4 5

   VII, v němž X znamená atom vodíku, mje3, njel, R znamená vinylovou skupinu a R a r6 znamenají každý methylovou skupinu, vyznačující se tím, že se 7-deacetylforskolinový derivát obecného vzorce VIII, v němž R^ znamená vinylovou skupinu, R⁵ a R⁵ znamenají každý methylovou skupinu a m je 3, nechá reagovat s kyselinou octovou, acetylchloridem