CS260749B1 - Myši iymfocytáraí hyliridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnítnu skupinovému antigenu B - Google Patents

Myši iymfocytáraí hyliridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnítnu skupinovému antigenu B Download PDF

Info

Publication number
CS260749B1
CS260749B1 CS874358A CS435887A CS260749B1 CS 260749 B1 CS260749 B1 CS 260749B1 CS 874358 A CS874358 A CS 874358A CS 435887 A CS435887 A CS 435887A CS 260749 B1 CS260749 B1 CS 260749B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
heb
group
antigen
hybridoma
mouse
Prior art date
Application number
CS874358A
Other languages
English (en)
Other versions
CS435887A1 (en
Inventor
Vladimir Viklicky
Dagmar Drimalova
Jan Vanak
Milos Nemec
Original Assignee
Vladimir Viklicky
Dagmar Drimalova
Jan Vanak
Milos Nemec
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vladimir Viklicky, Dagmar Drimalova, Jan Vanak, Milos Nemec filed Critical Vladimir Viklicky
Priority to CS874358A priority Critical patent/CS260749B1/cs
Publication of CS435887A1 publication Critical patent/CS435887A1/cs
Publication of CS260749B1 publication Critical patent/CS260749B1/cs

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

(Řešení se týká myšího lymfocytárního hybridomu, produkujícího protilátku píoťi lidskému erytrocytárhímu 'skupinovému antigenu B, uloženého ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením HEB-27. Monoklonální protilátka hybridomu HEB-27 je vhodná jako součást diagnostického panelu obsahujícího také monoklonální protilátky HE-10, HE-14 a HEB-20 k upřesnění patologicko anatomické diagnózy nádorových onemocnění tenkého a tlustého střeva.

Description

.Vynález se týká nového hybridomu, to je hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného, fúzí buňky myší myelomové linie Sp 2/0 a myší slezinné lymfoldní buňky produkující protilátku proti lidskému eryirocytárnímu skupinovému antigenu B.
Diagnostická séra proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu B (zkráceně diagnostická séra anti-B) jsou základní složkou souborů diagnostických sér sloužících k určení skupinové příslušnosti lidských erytrocytň v systému ABO. Vyšetřování skupinové příslušnosti v systému ABO je základním a nejčastějším sérologickým vyšetřením v humánní, hematologické a transfúzní praxi. Provádí se například jako základní součást úplného předtransfúzního vyšetření, kontroly krevní skupiny a lůžka při začátku krevní transfúze, sérologických vyšetřování rodiček a vyšetřování novorozenců.
Výskyt antigenu krevně skupinového systému ABO není omezen pouze na srytrocy-. tární membrány. Ve formě glykoproteinů se nacházejí například v sekretech žlázových buněk gastrointestinálního, genitálního a respiračního traktu. Antigenní sacharidové struktury jsou rovněž součástí buněčných membrán epiteliální tkáně, přičemž pozornost se soustřeďuje na změny v expresi těchto antigenu v souvislosti s vývojovými, diferenciálními a zejména nádorovými procesy. Značný počet imunohistocheimických studií prokázal, že například u karcinomů plic, žaludku, prostaty a močového měchýře dofchází ke ztrátě A a B isoantigenů, které jsou normálně přítomny ve zdravé epiteliální tkáni.
Krevně skupinové antigeny A a B jsou přítomny také v epiteliálních buňkách sliznice tlustého střeva lidského plodu. Po narození zůstávají zachovány v proximální části, rychle však mizí v distální části tračníku. Krevně skupinové antigeny se znovu objevují u distálně lokalizovaných karcinomů — například v esovité kličce a rektu — — a stávají se významným diagnostickým znakem rozvoje nádoru.
Diagnostická séra anti-B se dosud většinou připravují z lidské krve vybraných dárců, u nichž byly předem prokázány přirozené vysoké hodnoty aglutininů anti-B nebo z krve dobrovolných dárců záměrně imunizovaných slinami vylučovatelů skupinově specifické substance B, případně substancí B připravenou z lidských slin nebo· zvířecího materiálu — např. žaludeční mukózy prasat či koní.
Substance užívané k imunizaci lidských dobrovolníků je nezbytné podrobit státní kontrole sterility, neškodnosti a účinnosti. Protože koncentrace žádaných protilátek v séru klesá po· imunizaci s časem, je nutné provádět imunizaci opakovaně. Imunizace dobrovolníků izolovanými substancemi mohou být provázeny nepříznivými projevy, jimž lze předcházet pouze desenzibilizací imunizovaných jedinců. Dosud užívaný způsob přípravy diagnostických sér anti-B klade tedy značné nároky na materiální, kádrové, metodické i organizační zajištění výrobního procesu.
Vedle žádaných protilátek anti-B se v séru každého záměrně imunizovaného i neimunizovaného dárce, vyskytují v heterogenní — složením vždy jedinečné a neopakovatelné směsi — mnohé další protilátky, z nichž některé přímo ovlivňují reakci séra s erytrocyty a znehodnocují diagnostickou účinnost získaného séra. Takové protilátky je nezbytné ze séra odstranit. Standardizace jednotlivých šarží diagnostických sér je při stávajícím způsobu přípravy obtížná a vždy neúplná, neboť z vlastní podstaty dosavadní přípravy sér vyplývá nemožnost získat dvě výrobní šarže stejných vlastností. Nepříznivým rysem dosavadního, způsobu přípravy diagnostických sér anti-B je spotřeba velkých množství lidské krve.
Mnohé z uvedených problémů dosud používaného postupu přípravy diagnostických lidských sér anti-B a řadu obtíží vyplývajících z nepříznivých vlastností současných diagnostických sér je možné odstranit zavedením přípravy myších monoklonálních protilátek anti-B, produkovaných lymfocytárními hybridomy.
Podobné hybridomy produkující protilátky byly připraveny v řadě zemí a v některých z nich jsou již komerčně dostupné a začínají se používat v klinické sérologické praxi.
Jde například o výrobky firem:
Serotec (Anglie),
Immunotech (Francie),
Biotest-Diagnostice (NSR),
Diagnostice Pasteur (Francie),
Celtech (Anglie).
Nabízené protilátky v zahraničí jsou určeny pro sérologické vyšetření krevních skupin. Žádná z uvedených zahraničních firem neuvádí možnost využití nabízených protilátek v imunohistochemii.
Uvedené nevýhody odstraňuje nový hybridom, uložený ve sbírce hyhridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská ul. 1083 ipod označením IMG HEB-27, který je zdrojem monoklonální protilátky proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu B.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St. Groth, S., Scheidigger, O.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Immunol. Meth.: 35: 1, 1980; Galfré, G., Howe, S. S., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard, j. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře, 266: 550, 1977] klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí buněk myší myelomové linie S;p 2/0 a buněk, získaných ze sleziny myší Fi (BALB/c X B 10.A), imunizovaných erytrocyty skupiny B.
Lymfocytární hybridom HEB-27 produkuje zcela homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, specificky reagující s lidskými typovými erytrocyty B, AiB -a A2B a která nereaguje s erytrocyty Ai, Až a O. Hybridom HEB-27 je možné kultivovat v podmínkách in vitro- v kultivačních médiích vhodných pro živočišné buňky nebo v podmínkách in vivo v -peritoneální dutině myší Fi (BALB/c X Β 10.A). Hybridom HEB-27 je možné dlouhodobě uchovávat v konzervách uložených v kapalném dusíku. Produkci protilátky je možné zahájit po rozmražení buněčné konzervy, aniž by bylo třeba dalšího antigenu. Monoklonální protilátka produkovaná hyforidomem HEB-27 je specifická pro lidský erytrocytární skupinový antigen B a je prostá jakýchkoliv balastních protilátek.
Příklad
Za účelem pomnožení buněk hybridomu HEB-27 v podmínkách in vitro bylo vpraveno 1 X 10® hybridomových buněk do kultivační láhve Legroux obsahující 20 ml kompletního kultivačního -média RPMI s fetálním telecím sérem (10%). Po třech dnech růstu kultury hybridomových buněk bylo z láhve získáno kultivační médium obohacené o monoklonální protilátku HEB-27 uvolňovanou do média hybridomovými buňkami. Účinnost monoklonální protilátky HEB-27 byla testována postupným dvojnásobným ředěním kultivačního média obsahujícího- monokíc-nální protilátku v prostředí izotonického roztoku chloridu sodného v -aglutinačních zkumavkách podle oborové normy ON 84 3225. Kultivační médium aglutinovalo na + (podle ON 84 3225) erytrocyty B v ředění 1 : 16, erytrocyty AiB v ř&dění 1: 16, erytrocyty AžB v ředění 1 : 8. S erytrocyty Al, Až a O kultivační médium obsahující monoklonální protilátku HEB-27 nereagovalo.
-Pro testování reaktivity protilátky HEB-27 na tkáňových řezech byly bioptické vzorky odebírány z několika míst tlustého střeva-, fixovány ve formaldehydu a zality do parafinu. Po odparafinování řezů byla aplikována protilátka- HEB-27 (naředěný supernatant) a její vazba na terčové struktury byla sledována po-mocí prasečí protilátky proti myšímu imunoglobulinu značená křenovo-u peroxldázou (Ústav sér a očkovacích látelk, Praha). Protilátka HEB-27 výrazně barvila na řezech z normální tkáně difúzne mucinózní -buňky krypt s maximem v proxi-mální části tlustého střeva a vymizením pozitivity v- oblasti eso-vité kličky -a konečníku. Pozitivní reakce se projevila v oblasti distálního tračníku pouze ve vzorcích z nádorové tkáně (adenokarcinom sigmoidea), Silná pozitivní reakce byla též pozorována s přítomnými erytrocyty. Výsledky srovnání reaktivity jednotlivých monoklonálních protilátek jsou shrnuty v tabulce.
Tabulka
Reaktivita monoklonálních protilátek v tkáňových řezech1 pacientů s krevní skupinou B
Monoklonální protilátka Cílový antigen
HEB-27 B
HEB-20 B
HE-10 A
HE-14 A
Tračník Distální Adenokarcitračník nom distálního tračníku í - í+
Poznámka:
1 fixace formo-lem, zalití do parafinu
V podobě odebraných a zpracovaných vzorcích plicní tkáně byla pozitivní reakce, na rozdíl od protilátky HEB-20, zjištěna ve všech vrstvách epitelu bronchů, v sekretu a ve většině buněk bronchiálních žlázek. Protilátka HEB-27 též značila přítomné eytrocyty.
Buňky hybridomu HEB-27 -mají ultrastrukturální obraz typických myelo-mových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosony. V podmínkách in vitro rostou v pcdobě polosuspenz-ních kultur. Základními kultivačními médii jsou RPMI nebo Eaglovo- esenciální médium s Hanksovou solnou směsí, doplněná o- neesenciální -aminokyseliny. L-glutamin (3mM) a pyruvát sodný (lmM) médium označované jako- H-MEM-d, (Ústav molekulární genetiky ČSAV). Média jsou pro kultivaci hybridomu HEB-27 doplněna penicilinem, streptomycinem, 2-merkaptoetanolem (5 X ΙΟ“5 M), pufrem HEPES (2 — 4 X 103 M) -a inaktivov-aným bovinním sérem pro TK (Bioveta n.p., Ivanovice na Hané, 10%). Pro získávání kultivačního média obohaceného o monoklonální protilátku HEB-27 (supernatantu kultury hybridomových buněk) k diagnostickým účelům je v kultivačním médiu nahrazeno inaktivované bovinní sérum fetálníím telecím sérem.
80749
Hybridom HEB-27 je kultivován při 37 °C.: Střední generační čas je 16,4 hodin; molární počet chromosomů 40 měsíců po sestrojení (fúzi) je 81 chromosomů. Produkovaná monoklonální protilátka je myší ímunoglobdlin třídy IgM, kappa.
Monoklonální protilátka produkovaná myším lymfocytárním hybridomem HEB-27 může být využita ve zdravotnické ipraxi jako součást diagnostického panelu obsahujícího' také monoklonální protilátky HE-10, ΗΕ^14 a HEB-20 k upřesnění patologicko anatomické diagnózy nádorových onemocnění tenkého· a tlustého střeva. '

Claims (1)

  1. Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS HEB-27, produkující monoklonální protilátku
    VYNÁLEZU proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu B třídy IgM.
    Severografia, n. p. závod 7, Most
    Cena 2,40 Kčs
CS874358A 1987-06-15 1987-06-15 Myši iymfocytáraí hyliridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnítnu skupinovému antigenu B CS260749B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS874358A CS260749B1 (cs) 1987-06-15 1987-06-15 Myši iymfocytáraí hyliridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnítnu skupinovému antigenu B

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS874358A CS260749B1 (cs) 1987-06-15 1987-06-15 Myši iymfocytáraí hyliridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnítnu skupinovému antigenu B

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS435887A1 CS435887A1 (en) 1988-05-16
CS260749B1 true CS260749B1 (cs) 1989-01-12

Family

ID=5386134

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS874358A CS260749B1 (cs) 1987-06-15 1987-06-15 Myši iymfocytáraí hyliridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnítnu skupinovému antigenu B

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS260749B1 (cs)

Also Published As

Publication number Publication date
CS435887A1 (en) 1988-05-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BE1000611A5 (fr) Anticorps monoclonaux et antigene du carcinome pulmonaire humain a cellules non petites et de certains autres carcinomes humains.
JP3502125B2 (ja) 形質転換細胞の抽出および培養ならびにそれらに対する抗体の製造
US5866690A (en) Detection of malignant tumor cells
CA1339583C (en) Monoclonal antibody nuh2 capable of inactivating motility of human sperm, antigen defined by said monoclonal antibody and methods of using said monoclonal antibody and antigen
JPS58500837A (ja) 悪性腫瘍細胞の検出
WO1986002364A1 (en) Monoclonal antibodies and their use
JPS62501189A (ja) 腫瘍↓−胎児に特異的なモノクロナ−ル抗体の調製方法および使用方法
US4888275A (en) Diagnosing and monitoring cancer
CS260749B1 (cs) Myši iymfocytáraí hyliridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnítnu skupinovému antigenu B
JPS6283898A (ja) 抗ヒト肺腺癌特異的単クロ−ン性抗体
JPH03198794A (ja) 抗ヒト心筋cプロテインモノクローナル抗体及び該抗体を産生するハイブリドーマ
CS260747B1 (cs) Myší lymfocytární hybridům produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu B
CS260746B1 (cs) Myší lymfocytární hybridám produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému aníigeau A
CS260748B1 (cs) Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému erytrocytárnímu skupinovému antigenu A
EP0293940B1 (en) Monoclonal antibody and method for preparation of hybridoma producing said antibody
JPH078290A (ja) ヒト表皮角質層の抗原を特異的に認識することができる抗体,その調製およびそれを使用する方法
JP2614822B2 (ja) 抗体産生ハイブリドーマの作製方法
CA1294905C (en) Anti-lafora body monoclonal antibody
US5635361A (en) Diagnosis of cancer using tumor-mimetic cell surface antigen from chemically modified normal cells
JP2580028B2 (ja) 抗ひと精子抗体、その製法および用途
EP0307186B1 (en) Anti-ganglioside GD1a monoclonal antibody MZ, MZ-producing cells and MZ-containing reagent
CS276441B6 (cs) Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS HE-182
GB2197871A (en) Glycoprotein derived from the basal cells of the epidermis and monoclonals and polyclonals which bind said glycoprotein
RU1776691C (ru) Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, - продуцент моноклональных антител против J @ Е человека
CA1304305C (en) Monoclonal antibody, and its preparation and use