CS244669B2 - Production method of the new s,s'-alkyle-di(dithioalkanoles di(dithioalkanol lower alkyletheres)and-di(dithioalkanolesters) - Google Patents

Description

Způsob výroby nových S,S'-alkylen-di(dithioalkanolů, -di(dithioalkanol- nižších alkyletherů) a -di(dithioalkanolesterů) Sloučeniny s imunostimulačním účinkem obecného vzorce I ^Rl°- ^(CH2’.n-^S-E^S- ^(CH2>p-^S3-x^S- ^(CH2 > n^0R2 (I) kde substituenty mají stejný význam jako v definici, se vyrábějí tím, že se uvede do reakce za vzniku disulfidové vazby první thiosloučenina se sledem obecného vzorce IV

Z-fs-(CH₂)_p-S-J-_xl (IV) a druhá sloučenina se sledem obecného vzorce V

-£-s- (ch₂) _p-s]- ₂ S- (CH₂) _n~OR₂ (V) kde substituenty mají stejný význam jako v definici. Sloučeniny obecného vzorce I jsou použitelné jakt> imunostimulační látky.

224669

Vynález se týká způsobu výroby nových bis- a polydisulfidů s iminostimulačním účinkem.

Předmětem vynálezu je způsob výroby nových S,S'-alk^ylen-di(dithioalkanolů), -di(dithioalkanol nižších alkyletherů) a -di(dithioalkanoletserů) s imunostimulačním účinkem obecného vzorce I ^Rl^{0- (Ct,2}> ^m-S-í^S- ^(CH2’ p-^s3~x^s- ^(CH2> n^-01'² (I) kde

R^ a '2 znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, alkylový zbytek o 1 až 5 atomech uhlíku nebo kyselý zbytek, fyziologicky přijatelný a hydrolyzovatelný, za vzniku kyseliny, která je rovněž přijatelná z fyziologického hlediska v užitých dávkách, man znamenají nezávisle na sobě celá čísla 2 nebo 3, p je číslo v rozmezí 2 až 6 a x znamená 1, 2 nebo 3, přičemž v případě, že x znamená 2 nebo 3, mohou být jednotlivé symboly £ stejné nebo různé, vyznačující se tím, že se uvede.do reakce za vzniku disulfidové vazby první thiosloučenina se sledem obecného vzorce XV

Z-^ES-(CH2)p^-S^a-xl _(lv) a druhá sloučenina se sledem obecného vzorce V ^-S - (CHPp - ^S 1—2S ^- (CH^ ^{- 0}'² (V) kde '2' n a £ mají svrchu uvedený význam,

i) Z znamená skupinu obecného vzorce R^O - <^^H2)m ~ ^S kde ' ^{a m} mají výše uvedený význam a .12 x^A a x· znamenají nezávisle na sobě O,·1, 2 nebo 3, přičemž (x + x ) = 1, 2 nebo 3 nebo

ii) Z	znamená	volnou	vazbu,
X1	znamená	1	a
x2	znamená	0	nebo	1	nebo
x1	znamená	2	nebo	3	a
x 2	znamená	0.

Při zvláštním provedení způsobu podle vynálezu se postupuje tak, že se uvede v reakci sloučenina obecného vzorce XVa

Z^-Es-ZCH-J-sl·! H(XVa) *- 2 p ^J x nebo její reaktivní derivát se sloučeninou obecného vzorce Va· ^y--£s - (CH^p - s ^S - (CH^ - O'²(Va) kde

R₂ a c mají stejný význam jako skupiny R₂ a h v obecém vzorci Va.

aprotickéReakce sloučenin obecného vzorce IV a V, stejně jako IVa a Va se s výhodou provádějí při níz^kých 'te^plot^ác^h, nap^říklad -6O.až ^-20 °C v ^přís^lušn^ém rozpouštěje nebo ^řed^idle. V případě, že Z a Y znamenají odštěpitelné skupiny, například atomy halogenu je výhodné užít ho rozpouštědla, například tetrahydrofuranu nebo ethylacetátu.

Reakce sloučenin obecného vzorce IVb a Vb se provádí s výhodou za přítomnosti činidla, například hexakyanoferitanu jodu nebo draslíku za přítomnosti anorganické zejména hydroxidu alkalického kovu, například hydroxidu draselného. Je možno užít vodného nebo alkoholového, například methanolového prostředí a reakce se provádí při teplotě 0 až 50 °C.

oxidačního zásady,

V případě svrchu popsaných postupů za předpokladu, že subseieueney Z, Z nebo Z jsou odlišné od skupiny obecného vzorce R^O - (СН^^ - S -, budou skupiny R^O - (CH^^ - S a R2O - (СН2*с ' s ve výsledném produktu stejné.

Výchozí sloučeniny obecných vzorců IVa, IVb, Va a Vb jsou známé nebo je možno je získat analogickým způsobem podle známých postupů. Například 1,2-ethandithiol obecného vzorce IVa, v něm^ž Z' znamen^á atom vo^díku, x¹ znamená lap znamená ² se ^béžně do^dáv^á. O^dpovídaj^íc^í vzorce IiVb, v n^ěm^ž Z a У znamenají atom^y chlory x¹ znamená ^lap znamen^{á 2} je z literatur^y znám a je možno jej získat například způsobem B popsaným v následujících příkladech.

Sloučeniny obecného vzorce Va, v nichž x znamená O a Y znamená svrchu definovanou sku- pinu obecného vzorce VI je možno získat například podle reakčního schématu:

1) R20 (CH₂)c R SH (VII) .R Rr0- )CH -) . - S - S- (CH -R -2 ORr /Z Z П Z П Z (VIII)

2) (VIII)

O

S > R²O r (СН²>^с r s r s- (CH₂)^c r OR² (Va¹) se provádí podobně jako reakce sloučenin obecného vzorce IVb a Vb, stupeň

Stupeň 1)

2) se provádí oxidací působením kyseliny m-chlorperbeczoové v alkanolovém prostředí při teplotě -20 až +30 °C.

Sloučeniny obecného vzorce Vb, v němž x znamená 1 je rovněž možno získat reakcí slou^čenⁱn o^becn^ého vzorce Va¹ se slou^čenⁱnou otecn^o vzorce ^HS - (CH^^ ^- SH za od^št^ěpení skupiny ^{S R} <^CH2>^{c R OR}2 za vzn^iku s^lou^čenⁱn^y o^becn^ého vzorce Vb¹

R2O r (CH₂)c R s r S r (CH₂)_p r SH (IVa¹) je možno z^ískat analo^gic^ky jako s^lou^čenⁱn^y o^becné^ho vzorce Vb¹.

V případě, že se užijí svrchu uvedené meziprodukty a postupuje se svrchu uvedenými získat sloučeniny obecného vzorce I, v nichž například R^ a m a Rr a n nichž x znamená 2 nebo 3, přičemž p jsou s’tejné nebo různé.

způsoby, je možno jsou různé nebo v

Jako příklad /

je možno uvést následující reakční schémata:

3) (IVa¹) + (Va¹)

R|O - (CH₂)_m - S - S - (Cí^p - S - S - (CH^-OR²

kde ^R2' 2 ^a E mají svrchu uvedený význam, t

Y znamená snadno odštěpitelnou skupinu a

i) Z' znamená skupinu obecného vzorce

R.O - (CH,) - S -, kde R. a m mají výše uvedený význam, a

12^{1 z m 1} 12 x a x znamenají nezávisle na sobě O, 1, 2 nebo 3, přičemž (x + x ) = 1, 2 nebo 3 nebo ii) Z' znamená atom vodíku a x^ znamená ¹a x znamená 0 nnbo1 x¹ znamen^{á 2} nnbo ³a x znamen^á O, nebo se uvede v reakci sloučenina obecného vzorce IVb z -£s - (ch₂,_p - s y (IVb) se slou·· - Qninou obecného vzorce Vb

H ^-fs - (CH^ - S }-²S - (ΟΗ^ - 0R² (Vb) nebo s reaktivním derivátem této sloučeniny, kde ^r ₂, n, p a Y mají svrchu uvedený význam a

i) Z znamená skupinu obecného vzorce

R.O - (CH,) - S -, kde R. a m mají výše uvedený význam, a

2 _{1 2} ¹¹¹ _i 12 x a x znamenají nezávisle na sobě 0,1, 2 nebo 3, přičemž (x + x )

1, 2 nebo 3 nebo

ii) Ž	znamená	snadno
x1	znamená	1 a
x2	znamená	0 nebo
x1	znamená	2 nebo
x2	znamená	0,

odeštěpitelnou skupinu a nebo a

nebo se uvede v reakci sloučenina obecného vzorce IVa se sloučeninou obecného vzorce Vb,

2 v nichž'Z, x , x mají svrchu uvedený význam a R^, m, n a g mají rovněž svrchu uvedený význam; reakce se provádí za oxidačních podmínek.

Reaktivní deriváty sloučenin obecného vzorce IVa a Vb zahrnují například odpovídající monothioláty nebo bis-thicláty alkalických kovů, například monosodný thiolát sloučenin obecného vzorce IVa, v němž Z' znamená skupinu obecného vzorce R^O - (CH2)_m ” S -, nebo obecného vzorce Vb, jakož i odpovídající bis-sodné thioláty sloučeniny obecného vzorce IVa, v němž Z' znamená atom vodíku. Výhodnější je použití sloučenin obecných vzorců IVa a IVb jako takový.

Vhodnými odštěpitelnými skupinami Z a Y jsou například atomy halogenu, zejména chloru.

V případě sloučenin obecného vzorce Va, v nichž X znamená 0 je další vhodnou odštěpitelnou skupinou Y skupina obecného vzorce VI, ^,C»²⁾n ^S (VI)

244669
4)	(IVa1)	4-	(IVa1)
5)	(IVa1)	+	(vm1)
6)	(IVa1)		HS - (CH

>

R.O(CH-)_m - S

2 m ²⁾p ^R1° - ^(CH2>^m - ³

4- S - (CH₂)_p - S 3-28 - (CH₂)_m - OR_X.

s - (CH₂)_p - S J-²S - (CH₂)ⁿ - OR^{2 -2s - (CH}2> p - ^S Ъ^(СН2⁾ _га - ^OR1

Mimoto v případě, že se ne^bo Ш, v п^-о^ x¹ znamen^á vytváří se v menším množství nebo 3 a skupiny obecných vzorců R^O - (CH₂)_m - s - a R3° Relativní množství těchto sloučenin je možno zvýšit úpravou reakčních podmínek. Získané sloučeniny vzorce v nichž x znamená provádějí psotupy při použití sloučenin obecného vzorce IVa ¹ a ^Z' ne^bo ^Z m^á odMsný význam od s^ku^pin^y R^)O - (CH₂)_m - S jako vedlejší produkty také sloučeniny, v nichž x znamená 2 s - a R_o° - SCH2) ~ S ~ jsou totožné.

I, v nichž x znamená 2 nebo 3 je možno oddělit od sloučenin vzorce I, 1 běžným způsobem, zejména chromatograficky.

Vynález bude osvětlen následujícími příklady.

Příklad

Způsob výroby S,S'-ethylen-bis-(2-dithioethanolu): sloučenina 1

HO - (^2)2 - S - S - (ch₂)₂ - S - S (CH₂)₂ - OH

Postup A g ethandithiolu se přidá za míchání k vody. Pak se přidá současně a po kapkách ke kyanoferitanu draselného v 500 ml vody a 30 přidává tak dlouho, až se dosáhne pH v rozmezí 7 až 8.

41,5 g 2-merkaptoethanolu v roztoku v 50 ml vzniklému bezbarvému čirému roztoku 200 g hexag hydroxidu draselného ve

200 ml vody a směs se

Přidávání se ukončí při vzniku žlutého zbarvení, které přetrvává extrahuje 4x 100 ml methylenchloridu. Organické fáze se slijí, vysuší zfiltrují a odpaří, čímž se získá 7,7 g surového produktu.

a reakční směs se pak se síranem horečnatým,

Tento produkt se chromatografuje na bilikagllu při použití směsi a tetrahydro^ranu v pom^ěru ⁴:¹ ja^ko e^luční^ho ^n^¹^ ^čímž se z^ís^ká ' ^lotě tání ⁷⁹ a^{ž 80} °C.

. methylenchloridu výsadný ^produ^kt o te^pPostup B g 1,2aethananisa(bulUenylchloridu) ve 200 ml e-lylacl-á-u se 2-mea^pa^oeoh^anaiolu v ¹ l^ru ^hylac^á^^, ^edem zc^hlazenému na ^-70 Derivát se přidává po kapkách za stálého míchání v průběhu 15 minut tak, aby teplota nepřevý^šila -65 °C. V^ytvo^ří se ^ble^{dě žl}ut^á sus^pefze^{, k}terá se nⁱsa(sulUonylc^llor^-du) vij ^do ^{1 li}tru vod^, zatóáráto přidá k roztoku 58,9 g °C v dus^íkové atmosféře.

o^kamžⁱt^{ě p}o stončeném př^áv^í na 40 °C.

zfilmuje (hyflo) , čímž se vytvoří dvě fáze. Vodná fáze se extrahuje dvakrát 100 ml ethylacetát^u. Organické fáze se slijí a promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltruje a odpaří dosucha. Získaný béžový olej se chromatografuje na s-l-kagelu, čímž se získá výsledná l^átka o -i^o^ t^ání ⁷⁷ a^ž 8⁰ °C.

Po energickém třepání v dělicí nálevce se suspenze

1,2-hanan-bjs-(lulfenylchlorid), který je výchozí látkou, je možno získat následujícím způsobem:

40^,5 ^g sulfurylc^hlorⁱdu se po ka^pkác^h p^řidá za s^tálého míc^hán^í prú teplo^tě 0 °C к ^{9,4 g}

1,2-ethandithiolu v 50 ml methylenchloridu, přidávání trvá 20 minut. Vznikne bílá suspenze, z níž se po delším míchání vytvoří čirý, oranžově zbarvený roztok. Tento roztok se míchá je^{ště 2 h}o^diny p^{ři t}e^plo^tě 0 °C a pa^k se ^pře^bytečný su^ur^c^or^ a rozpou^^lo od^paH ^{při t}e^plo^tě 0 °C ^{při p}ou^žití vo^dn^í výv^ěv^y.

Zbývající těkavé složky se odstraní ze získané oranžově zbarvené olejovité kapaliny odpařováním 2 hodiny ve vysokém vakuu. Tímto způsobem se získá v pevné formě oranžově zbarvený výsledný 1,2-edhan-bns-(sulfenylciiornd).

Jako vedlejší produkty je možno z reakční směsi při postupu B získat chromatografickým dělením při použití s^i^ge^ a směsi detraiydrofurtno a methylenchloridu v poměru 1:4 ještě následující sloučeniny:

Sloučenina 2: ,

HO - (CH₂<2 - S - S - (CH₂>2 - S - S - (CH^ - S - S - (CH₂>₂ - OH o ^te^plo^tě tán^í 86 až 88 °C.

Sloučenina 3:

HO - (CH2>₂ - ^S - S - (^сн2>2 - S - S - (^Н2>2 - ^S - ^S - (^CH2>₂ - S - S - - OH o ^te^plo^tě tán^{í 102} až 103 °C.

Následující sloučeniny se připraví analogicky jako při způsobu B při použití (2-merkaptoethyDmethyletheru jako výchozí látky místo 2-merka^pdoedhanolu.

Sloučenina 4:

CHgO - (CH2>2 - ^s - ^s - (°½½ - ^S - ^S - - OCHg

Jde o kapalinu, jejíž R_f při chromatografii na tenké vrstvě při použití sninkageiu a směsi toluenu a ethylacetátu v poměru 9:1 je 0,36.

Nyní bylo neočekávaně prokázáno, že sloučeniny obecného vzorce I mají imunostimuiační účinek.

Bylo prokázáno, že tyto látky nejen stimulují proliferaci lymfatické tkáně jako odpověď na působeni antigenu, nýbrž rovněž podporují výrobu protilátek, to znamená, že vyvolávají primární a sekundární imunologickou odpověS a rovněž odpověS, zprostředkovávanou buňkami a tak zvyšují obecně imunitu, zejména proti antigenu.

Imunostimulační účinek těchto látek je možno prokázat na standardních testech in vitro a in vivo. Pro sloučeniny obecného vzorce I byl prokázán imunostimulační účinek například v následujících pokusech:

In vitro

Pokus I:

Misieli/Dudtonův test

Jde o vznik humorální odpovědi při primární imunizaci slezinných buněk myši v suspenzi v ^kul^tu^ře na podn^{ět, k}terý -tvoří ^he^terologní červené krvinky. ^[Schⁱence 153^, 1004 (1966) a J. Exp. Med. 126)^, 423 (1967)].

Buňky myší sleziny byly pěstovány 3 až 4 dny za přítomnosti antigenu (erythrocyty ovce, SE) a zkoumané látky. Pak byly buňky promyty a naneseny do polotuhého agaru spolu s čerstvým antigenem SE. Po inkubaci 60 minut byl přidán komplement a inkubace pokračovala ještě dalších kultury minut. V se uvolňuje důsledku senzitizace nižších lymfocytů na antigen v průběhu primární protilátka.

přítomnosti

Za komplementu a specifické protilátky proti SE dochází k rozrušení ovčích erythrocytů a tvorbě plaků. Je možno pozorovat tvorbu plaků při použití sloučenin obecného vzorce I v koncentraci. *0,001 až 10,0 yig/ml.

Pokus II

Stimulace produkce interferonu, vyvolané působením antigenu

Myší lymfocyty ze sleziny (Balg/c) se inkubují 5 dnů spolu s allogenními slezinnými buňkami z ozařovaných myší (CBAj ) stejně jako svrchu za přítomnosti nebo v nepřítomnosti zkoumané látky). Supernatanty se odebírají a zkoumají na hladinu interferonu. Průkaz přítomnosti interferonu se provádí ochranou fibroblastů L929, infikovaných virem. Jednotky interferonu se standardizují při použití interferonu z lidských bílých krvinek se známou účinností.

Stimulace produkce interferonu je možno pozorovat při použití sloučenin I v koncentraci 0,2 ;*ž 5,0_/<ig/nil.

In vivo:

Pokus III:

Test pro zpo^žděnou hypersenzⁱtⁱvi^tu (imunita^, z^prost^ře^dkovan^á buňkami) ší, Int. Arch. Aller^gy 3^8, 246 (1970)] obecného vzorce ^Q)ietrⁱch a ^da^lMyši se senzitizují místně tak, že se antigen (oxazolon) nanese na kůži břicha v den O. Zkoumaná látka se podává intraperitoneálně nebo perorálně každý z následujících pěti dnů. Antigen se nanese znovu 9. dne na pravé ucho. Měří se mikrometrem po dalších 24 hodinách tloušťka kůže na pravém i na levém kontrolním uchu. Průměrný rozdíl v tloušťce ucha se pokládá za parametr, sloužící k vyhodnocení reakce. Vyjádřená stimulace zpožděného typu hypersenzitivity se pozoruje u zdravých zralých myší s normální imunologickou odpovědí je možno pozorovat po podání sloučenin obecného vzorce I v dávce 0,1 až 10 mg/kg denně po dobu 5 dnů intraperitoneálně nebo perorálně.

Pokus IV:

Aktivace přírodních fagocytárních buněk

Zkoumaná látka se podá intraperitoneálně nebo perorálně myším bez C57/BL). Po 16 hodinách se vyjmou sleziny a slezinné buňky se inkubují značenými chromém (YAK-1).

brzlíku (Balb/c nebo hodiny s buňkami,

Přirozené fagocytární buňky zničí značené buňky a chrom se uvolní do supernatantu. Supernatant se měří ve scintilačním počítači na přítomné množství chrómu. Jako kontrola se užívá uvolnění chrómu slezinnými buňkami z neošetřených myší a tato kontrolní hod^ata.se pokládá za 100 %. Uvolňování chrómu po podání zkoumané látky se vyjadřuje jako procento změny ve srovnání s kontrolou. ·

Zvýšené uvolnění chrómu se dostaví po podání sloučenin obecného vzorce I v dávkách 0,1 až 10,0 mg/kg.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou tedy určeny pro použití jako imunostimulační látky, zvyšující systemickou imunologickou odpověcl a jako stimulátory nespecifické odolnosti hostitele. Sloučeniny obecného vzorce I je tedy například možno použít pro léčbu nebo podpůrnou léčbu v kombinaci s dalšími léky u stavů, které jsou spojeny s narušením imunqlogické odpovědi, zvláště v případě narušené humorální odpovědi a/nebo hypersenzitivity zpožděného typu a u stavů, kde by bylo žádoucí zvýšit imunologickou odpověcl.

Sloučeniny obecného vzorce I se tedy zvláště hodí pro léčbu nebo podpůrnou léčbu chorobných stavů, které vznikají na základě idiopatických nedostatků imunity nebo u geriatrických nemocí a nemocí s vážnými popáleninami nebo celkovými infekcemi.

Tyto látky jsou rovněž vhodné pro léčbu nebo podpůrnou léčbu při virových onemocněních, jako je disseminovaný opar, progresivní vakcínia a disseminované plané neštovice, stejně jako v případě Hodgkinovy nemoci a dalších zhoubných nádorů.

V případě svrchu uvedeného použití se užívá perorální dávky 0,1 až 70 mg jednorázově nebo denně, a v tomto případě s výhodou v několika dávkách 2 až 4x denně nebo v lékové formě s pomalým uvolňováním, jednotlivá dávka obsahuje 0,025 až 35 mg sloučeniny obecného vzorce I, při jednorázovém podání až 70 mg sloučeniny obecného vzorce I.

Vzhledem ke své účinnosti je tyto látky možno užít také jako pomocné prostředky ve vakcínách. Pro toto použití se užívá perorálně 0,5 až 100 mg, s výhodou 70 mg v den očkování, tatáž dávka se může podávat ještě 2 až 4 týdny po očkování.

Farmaceutické prostředky s obsahem sloučenin obecného vzorce I ra připravují běžným způsobem, například smísením s běžnými farmaceutickými ředidly, nosiči a pomocnými látkami. Obvykle jde o tablety nebo kapsle nebo injekční formy.

Claims (2)

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

1, 2 nebo

3 nebo Z znamená volnou vazbu a 1 X znamená 1 a 2 X znamená 0 nebo 1 nebo X¹ znamená 2 nebo 3 a 2 X znamená 0.

1. Způsob výroby nových S,S'-alkylen-di(dithioalkanolů), -di(dithioalkanol nižších alkyletherů) a -di(dithioalkanolesterů) s imunostimulačním účinkem obecného vzorce I ^Rl° - ^(CH2»m - s -E.S - (CH₂)_p - S S - (CH.,)_n - OR₂ (I) kde a znamenají nezávisle na sobě atom vodíku, alkylový zbytek o 1 až 5 atomech uhlíku nebo kyselý zbytek, fyziologicky přijatelný, a hydrolyzovatelný za vzniku kyseliny, která je rovněž přijatelná z fyziologického hlediska v užitých dávkách» man znamenají nezávisle na sobě celá čísla 2 nebo 3, p je Číslo v rozmezí 2 až 6 a x znamená 1, 2 nebo 3, přičemž v případě, že x znamená 2 nebo 3, mohou být jednotlivé symboly p stejné nebo různé, vyznačující se tím, že se uvede do reakce za vzniku disulfidové vazby první thiosloučenina se sledem obecného vzorce IV

Z ⁴ S - (CH₂) _p - SJ- ₁ (IV) a druhá sloučenina se sledem obecného vzorce V ^{4 S -} (CH^ ^- s}^{2 S -} (C^H2>ⁿ - OR² (v) kde

R2' — a 2 mají svrchu uvedený význam,

i) Z znamená skupinu obecného vzorce R^O ný význam, a x- a x znamenají nezávisle na sobě 0, 1 (CH~)- - S

2 m kde R^ a m mají svrchu uvede2 nebo 3, přičemž (x ¹ +

2. Způsob podle bodu 1 vzorce IV a vyznačující se tím, že se uvede v reakci sloučenina obecného nebo

Z'⁴ S <^CH2^{)p - s}-} _x1 ^H její reaktivní derivát se sloučeninou obecného vzorce Va (HVa)

Y ⁴ s - (с» ^- ) p ^{- s}]-x^{2S -} «C¹? _n

OR2 (Va) kde

R2' — a 2 mají svrchu uvedený význam, znamená snadno odštěpitelnou skupinu nebo

i) Z' ^χ1 ii)- Z' x¹