CS244665B2 - Method of enzymatic determination of enzyme substrates - Google Patents

Method of enzymatic determination of enzyme substrates Download PDF

Info

Publication number
CS244665B2
CS244665B2 CS817834A CS783481A CS244665B2 CS 244665 B2 CS244665 B2 CS 244665B2 CS 817834 A CS817834 A CS 817834A CS 783481 A CS783481 A CS 783481A CS 244665 B2 CS244665 B2 CS 244665B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
reagent
substrate
glucose
reaction
sample
Prior art date
Application number
CS817834A
Other languages
English (en)
Other versions
CS783481A2 (en
Inventor
Peter Scheibe
Erich Bernt
Sigmar Klose
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of CS783481A2 publication Critical patent/CS783481A2/cs
Publication of CS244665B2 publication Critical patent/CS244665B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Způsob enzymatického stanovení enzymových substrátů v přítomnosti rušivých látek, ’ reagujících se samotným substrátem nebo s meziproduktem nebo konečným produktem indikátorové reakce spočívá v tom, že před přidáním vzorku, který se má zkoumat, se nejprve nechá reagovat s reakčním,činidlem enzymový substrát, například glukóza, kysleina močová nebo cholesterol, a teprve pak po jeho zreagování se přidá vzorek, který se má stanovit;.
Vynález se týká způsobu enzymatického stanovení enzymového substrátu v přítomnosti rušivých látek, které mohou reagovat se samotným substrátem nebo s meziproduktem nebo konečným produktem indikátorové reakce.
Enzymatická stanovení enzymových substrátů, jako je například glukóza, kyselina močová, cholesterol, jsou často rušena tím, že látky obsažené v reagenčních činidlech, například , redukující nebo oxidující látky, reagují s meziprodukty nebo výslednými produkty testovací soustavy. Tato rušivá vedlejší reakce může probíhat čistě chemicky nebo rušivý vliv může spočívat v blokování enzymu, ve vstupu v enzymatickou reakci jakožto konkurenční substrát apod. V každém případě se sníží koncentrace vlastního indikátorového produktu, který se stanoví, při kvantitativních zejména fotometrických stanoveních, tedy například vzniklého barviva. Úměrný vztah, podstatný pro správnost postupu, mezi koncentrací substrátu, který se má dokázat, a koncentrací měřeného indikátorového produktu se tímto způsobem poruší. Opět zjištění substrátu, který má dokázat, se tím odchýlí od 100 %. Jinými slovy, získají se chybné výsledky.
Úkolem vynálezu je tento problém odstranit a poskytnout způsob pro enzymatické stanovení enzymového substrátu v přítomnosti rušivých látek, kterýžto způsob ský.tá správné výsledky a odstraňuje výše uvedené obtíže.
Podle vynálezu se tento úkol řeší způsobem enzymatického stanovení enzymového substrátu v přítomnosti látek, reagujících se samotným substrátem nebo s meziproduktem nebo konečným produktem indikátorové reakce, kterýžto způsob se vyznačuje tím, že před přidáním vzorku, který se má zkoumat, se nejprve nechá reagovat s .reagěnčním činidlem enzymový substrát, například glukóza, kyselina močová neboccholesterol, a teprve po jeho zreagování se přidá vzorek, který se má stanovit.
Přidáním určitého množství substrátu, které je vždy zřetelně menší než odpovídá schopnosti analyzační soustavy pro stanovení substrátu, se zahájí předběžná reakce, která probíhá tak dlouho, až se veškerý přidaný substrát spotřebuje. V rámci této předběžné reakce se úplně spotřebují i rušivé látky. Jakmile je tato reakce skončena, přidá se vlastní vzorek, který se má zkoumat, s neznámým obsahem substrátu, který se má stanovit. Množství substrátu, který se má stanovit, je pak dáno rozdílem mezi výslednou hodnotou předběžné reakce pro stanovení reakčního produktu a výslednou hodnotou, která se získá po přidání vzorku, který se má zkoumat. Popřípadě je též možno sledovat vlastní zkoumání vzorku kineticky, tj. měřit nikoliv konečné hodnoty, nýbrž jen reakční rychlost.
Pokud jde o množství substráuu' které se má podle vynálezu přidat, nelze uvést žádné obecné údaje. Toto množství závisí na druhu soustavy pro stanovení enzymových substrátů a na množství rušivých látek, které lze v substrátu očekávat. Zpravidla se použije dostatečného nadbytku substrátu, pokud jde o rušivé látky, aby bylo s jistotou vyloučeno, že v okamžiku přidání vlastního neznámého vzorku jsou ještě přítomny nezreagované rušivé látky. Naopak se zase nebude přidávat příliš mnoho substrátu, aby se; pro vlastní reakcí vzorku nezískala příliš vysoká nulová hodnota, nepříznivě ovlivňující přesnost měřící reakce. Toto posledně uvedené hraje roli například při fotometrických měřeních barviva, vzniklého jako reakční produkt. U takových metod, spočívajících, na fotometrickém stanovení barviva vzniklého jako reakční produkt, bude přidané určité množství substrátu tak · malé, že nevzniknou ještě žádné rušivé koncentrace barviva. Toho lze v praxi v každém jednotlivém případě snadno dosáhnout, poněvadž přece takové barvivo nebo jiný indikátorový produkt vznikne teprve takovým množstvím substrátu, které převyšuje množství substrátu, potřebné pro zreagování rušivých látek. Při způsobu podle vynálezu není nutné znát druh rušivých cizích látek, často zde jde o sice redukující látky, avšak způsobem podle vynálezu se bezpečně vyřadí o oxidující nebo jiné rušivé látky.
Reagenční činidlo, jehož se používá při způsobu podle vynálezu к enzymatickému stanovení enzymových substrátů v přítomnosti rušivých látek a které je předmětem čs. patentu č. 228127 sestává z alespoň jednoho enzymu, alespoň jednoho pufru a alespoň jedné indikátorové látky jakož popřípadě i z pomocných látek a vyznačuje se tím, že obsahuje určité množství substrátu, menší než je stanovovací kapacita této soustavy ke stanovení substrátu, pro stanovení tohoto substrátu.
Rozpustí-li se reakční činidlo, které je v podobě suché látky, ve vodě, proběhne už reakce к odstranění rušivých látek během rozpouštění a po něm. Takto získaného roztoku lze pak použít přímo pro vlastní stanovení enzymového substrátu nebo jej lze znovu převést do podoby suchého reagenčního činidla, které je určeno к pozdějšímu opětnému rozpuštění před provedením stanovovací reakce. Je však též možné, zkoumpletovat reagenční činidlo přidáním substrátu teprve bezprostředně před jeho použitím nebo alternativně teprve dodatečně přidat látku, potřebnou pro zahájení reakce, například enzym nebo - v případě vícestupňové reakce s větším počtem enzymatických stupňů - jeden z enzymů potřebných pro reakci.
Podle jednoho výhodného provedení reagenčního činidla obsahuje toto činidlo glukózu jakožto substrát a soustava ke stanovení glukózy jakožto substrátu sestává z glukózooxidázy /GOD/, perooxidázy /POD/, p-ufru a /2,2'-azino-di-f3-etylbenzthiazolinsulfonátu-/6/J/ /ABTS/ jakožto barevné reagencie.
U takovéhoto reagenčního činidla se použije, vztaženo na 100 ml vodného roztoku soustavy ke stanovení substrátu, asi 750 až 1 500 j., s výhodou 900 až 1 200 j. glukózooxidázy o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg. Příslušná množství peroxidázy o specifické aktivitě rovněž asi 100 j/mg činí 10 až 150 j., s výhodou 80 až 120 j./ΙΟΟ ml roztoku reagenčního činidla připraveného к použití. Příslušné koncentrace pro /2,2 -azino-di-уз-etylbenzthiazolinsulfonát-/6/J/ činí 75 až 150 mg, s výhodou 90 až 120 mg/100 ml. Jako pufr přichází v úvahu pufr o pH v rozmezí 6,5 až 7,5, s výhodou 6,8 až 7,2. Koncentrace je účelně v rozmezí 50 až 200 mmolů, s výhodou 80 až 120 mmolů/litr. Výhodným pufrem je pufr na bázi fosforečnanu sodného /Иа2НРО^/МаН2РОд/. Příklady jiných vhodných pufrů jsou pufr na bázi tris-fosfátu, pufr na bázi tris-kyseliny citrónové, tris-kyseliny vinné a tris-kyseliny maleinové. Pro koncentraci a hodnotu pH platí tytéž údaje, jak byly výše uvedeny.
U jednoho reagenčního činidla výše popsaného složení je obsah glukózy účelně v rozmezí 0,01 až 0,05 mg, s výhodou 0,02 až 0,04 mg/100 ml roztoku.
U jiného výhodného reagenčního činidla ke stanovení obsahu glukózy obsahuje soustava ke stanovení substrátu, kromě glukózy a peroxidázy 4-aminofenazon /РАР/ a fenol jakožto složky pro vytvoření barviva. V tomto případe se použije na 100 ml roztoku reagenčního činidla, připraveného к použití, 3 000 až 5 000 j. glukózooxidázy, s výhodou 3 800 až 4 200 j/100 ml, 50 až 240 j. peroxidázy, s výhodou 160 až 200 j./ΙΟΟ ml roztoku, jakož i 10 až 20 mg 4-aminofenazonu, s výhodou 13 až 17 mg/100 ml a 120 až 240 mg fenolu, s výhodou 160 až 200 mg/100 ml. Jakožto pufru se v tomto případě použije s výhodou pufru na bázi fosforečnanu draselného o pH ve výše uvedeném rozmezí. Koncentrace by měla být účelně v rozmezí od 150 do 250 mmolů, s výhodou od 180 do 220 mmolů/litr. U tohoto reagenčního činidla je obsah glukózy účelně v rozmezí 0,05 až 0,25 mg, s výhodou 0,1 až 0,2 mg/100 ml roztoku.
Výše uvedné údaje se vztahují na rozpuštěné reagenční ěinidlo. Platí stejně pro takové množství reagenčního činidla v podobě suché látky, které je určeno pro přípravu 100 ml roztoku
Další výhodné reakční činidlo obsahuje jako substrát kyselinu močovou a soustava ke stanovení tohoto substrátu sestává z urikázy, peroxidázy, látky vytvářející barvivo a pufru. Jako látky vytvářející barvivo se s výhodou používá směsi 2,4-dichlorfenolátu s 4-aminoantipyridem.
Takovéto reagenční činidlo obsahuje v účelném provedení 35 až 45 j., s výhodou 38 až 42 j. urikázy o specifické aktivitě přibližně 9 j./mg ve 100 ml roztoku připraveného k použití. Množství peroxidázy u- preparátu o aktivitě přibližně 100 j./mg je účelně v rozmezí 30 až 40 j., s výhodou 33 až 37 j./ΙΟΟ ml roztoku. Množství 2,4-dichlorfenolátu, kterého se používá v podobě alkalické soli, amoniové soli nebo aminosoli, s výhodou jako etylaminové soli, je účelně v rozmezí do 150 do 200 mg, s výhodou od 165 do 180 mg/100 ml, vztaženo na etylamoniovou sůl. Tyto údaje o množstvích se samozřejmě mění podle povahy kationtu. 4-aminoantipyrinu se účelně používá v množství od 150 do 250 mg, s výhodou od 180 do 220 mg/ /100 ml reagenčního činidla.
Pufrovací látka má udržovat hodnotu pH v rozmezí od 8,5 do 9,5, s výhodou od 8,7 do 9,3. Koncentrace pufru je účleně v rozmezí 100 až 200 mmolů, s výhodou 130 až 180 mmolů/litr. Výhodným je pufr na bázi tris-citrátu, jinými vhodnými pufrovacími látkami jsou pufr na bázi trls-kyseliny vinné a tris-kyseliny maleinové.
U tohoto reagenčního činidla činí přídavek kyseliny močové účelně od 0,05 do 0,25 mg s výhodou od 0,1 do 0,2 mg/100 ml, vztaženo na litnou nebo sodnou sůl.
Ještě jiné výhodné reagenční činidlo, používané při způsobu podle vynálezu, obsahuje cholesterol jakožto substrát a soustava ke stanovení tohoto substrátu sestává z cholesterolesterázy, choleteroloxidázy, peroxidázy a látky vytvářející barvivo jakožto i z pufru. Jako látka vytvářející barvivo je vhodná zejména směs 4-aminoantipyrinu s fenolem.
Při účelném provedení obsahuje toto reagenční činidlo 15 až 25 j., s výhodou 17 až 23 j. cholesterolesterázy o specifické aktivitě přibližně 20 j./mg na 100 ml roztoku reagenčního činidla, 20 až 30 j., s výhodou 22 až 28 j. cholesteroloxidázy o specifické aktivitě přibližně 25 j./mg na 100 ml roztoku, 50 až 200 j., s výhodou 130 až 180 j. peroxidázy o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg na 100 ml roztoku, 15 až 25 mg, s výhodou 17 až 23 mg 4-aminoantipyrinu na 100 ml roztoku reagenčního činidla a 40 až 60 mg, s výhodou 45 až 55 mg fenolu na 100 ml roztoku reagenčního činidla. Jako pufru se použije vhodné pufrovací látky o pH v rozmezí 7 až 8-, 5, s výhodou 7,8 až 8,2, v koncentraci v rozmezí od 150 do 250 mmolů, s výhodou od 180 až do 220 mmolů/litr. Obvzláště vhodný je pufr na bázi fosforečnanu draselného, vhodné jsou však i jiné pufrovací látky, které jsou schopny udržovat pH v uvedeném rozmezí hodnot. Obsah cholesterolu v takovémto reagenčním činidle je účelně v rozmezí od 0,20 do 0,60 mg, s výhodou od 0,30 do 0,50 mg na 100 ml roztoku reagenčního činidla, popřípadě na takové množství reagenčního činidla v podobě suché látky, kterého je zapotřebí; pro .přípravu takovéhoto množství roztoku reagenčního činidla.
Je samozřejmé, že množství enzymů, uvedená pro výše popsaná výhodná složení reagenčního činidla používaného při způsobu podle vynálezu, platí pouze pro enzymy uvedených specifických aktivit a mohou být nahrazena preparáty jiné aktivity.
Jak je z uvedeného zřejmé, je možno způsobem podle vynálezu odstranit vliv rušivých reakcí při enzymatickém stanovení enzymových substrátů. To umožňuje použití méně čistých reagencií, prodloužit skladovatelnost reagencií, u nichž vznikají rušivé látky teprve během skladování, a zvýšit přesnost stanovení.
Dále uvedené příklady vynález .blíže objasňují.
Příklad 1
Reagenční činidlo pro stanovení glukózy způsobem používajícím kyselinu 2,2'-azino-di-|3-eeylbenzthiazolinsulfonovou-/6/J pufr na bázi fosforečnanu sodného, pH 7,0 100 mmolů/litr glukózooxidáza o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg 1 000 j./ΙΟΟ ml
peroxidáza o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg diamoniová sůl kysleiny 2,2'-azinodi-|'3-etylbenz- 80 j./1ОО ml
thiazolinsulfonové-/6/J glukóza 100 mg/ml 0,05 mg/100 ml
Příklad 2
Reagenční činidlo pro stanovení glukózy způsobem používajícím glukozidázu a
4-aminofenazon pufr na bázi fosforečnanu draselného o pH 7,1 glukózooxidáza o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg peroxidáza o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg 4-aminofenazon fenol glukóza
Pří k. lad 3
Reagenční činidlo pro stanovení cholesterolu pufr na bázi fosforečnanu draselného o pH 7,9 cholesterolesteráza o specifické aktivitě přibližně 20 j./mg cholesteroloxidáza o specifické aktivitě přibližně 25 j./mg peroxidáza o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg 4-aminoantipyrin fenol cholesterol
Příklad 4
Reagenční činidlo pro stanovení kyseliny močové pufr na bázi tris-citrátu o pH 9,1 urikáza o specifické aktivitě přibližně 9 j./mg peroxidáza o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg etylamoniová sůl 2,4-dichlorfenolátu 4-aminoantipyrin kyselina močová /lithná nebo sodná sůl/
205 mmolů/litr
4 100 j./lOO ml
190 j./lOO ml
17 mg/100 ml
200 mg/100 ml
0,2 mg/100 ml
200 mmolů/litr
22 j./100 ml
24 j./lOO ml
150 j./lOO ml
21 mg/100 ml
47 mg/100 ml
0,4 mg/100 ml
150 mmolů/litr
39 j./lOO ml
36 j./lOO ml
170 mg/100 ml
190 mg/100 ml
0,16 mg/100 ml
Příklad 5
Srovnávací stanovení glukózy
Aby byla ukázána zlepšená přesnost stanovení glukózy způsobem podle vynálezu, postupuje se takto:
Rozpuštěním reagenčního činidla z příkladu 1 v potřebném množství vody se připraví dva roztoky А а В reagenčního činidla. U roztoku A se však vynechá přidání glukózy. Ke stanovení se použije glukózové standardní řady s obsahem glukózy, vzrůstajícím od 50 do 400 mg/100 ml jakož i lidského séra.
Násada pro stanovení:
vlnová délka: Hg 436 nm kyveta: tloušřka vrstvy 1 cm teplota inkubace: 20 až 25 °C
Měření se provádí komerčním fotometrem oproti slepé hodnotě. Do kyvet se napipetují tyto roztoky:
Slepá hodnota
Standard
Vzorek destilovaná voda 0,1 ml zředěný standardní roztok vzorek zbavený bílkovin testovací reagenční činidlo 5,0 ml /А/В/
0,1 ml
5,0 ml
0,1 ml
5,0 ml které se promísí a inkubují při teplotě v rozmezí 20 až 25 °C. Po 25 až 50 minutách se měří extinkce vzorku /Evzorku/ a extinkce standardu /Estanjarju/ oproti slepé hodnotě.
Výpočet koncentrace glukózy ve vzorku se provádí podle vztahu:
vzorku
С = 100 X ;-------— — standardu /mg/100 ml/
Výsledky měření:
Glukózová standardní řada /50 až 400 ing/100 ml/
Koncentrace glukózy Extinkce v reakčním činidle
A В
50 mg/100 ml - 0,095
100 mg/100 ml 0,060 0,170
200 mg/100 ml 0,236 0,353
300 mg/100 ml 0,400 0,533
400 mg/100 ml 0,577 0,700
Výše uvedené výsledky měření jsou graficky znázorněny na přiloženém výkresu. Křivka _1 pro reakční činidlo A ukazuje, že kapalné vzorky s obsahem glukózy pod přibližně 70 mg/ /100 ml se neměří, poněvadž nedochází к extinkci, tj. ke vzniku barvy. Při použití obvyklého jednobodového standardu například 100 mg glukózy/100 ml se vzorky o koncentraci glukózy od 70 do 100 mg/100 ml vyhodnotí' jako niéší než je skutečný obsah glukózy, vzorky o obsahu glukózy nad 100 mg/100 ml jako vyšší než je skutečný obsah glukózy. Jenom vzorky s koncentracemi, které přesně odpovídají koncentraci standardu, skýtají korektní výsledky při měření. Naproti tomu křivka 2 odpovídající reakčnímu činidlu B, použitému při způsobu podle vynálezu, skýtá průběžně správné výsledky při měření.
Testy se vzorky lidského séra se provedou výše popsaným způsobem, přičemž pro srovnání jsou určeny hodnoty, získané hexokinázovou metodou^což je standardní metoda. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce:
HK/G6P-DH /standardní metoda/
Reakční činidlo A
Reakční činidlo В
sérum 1 53 mg/100 ml nenaměřena žádná 51 mg/100 ml
hodnota
sérum 2 84 mg/100 ml 55 mg/100 ml '83,5 mg/100 ml
sérum 3 135 mg/100 ml 213 mg/100 ml 135 mg/100 ml
PŘEDMĚT

Claims (1)

  1. E Z
    Způsob enzymatického stanovení enzymového substrátu v přítomnosti rušivých látek, reagujících se samotným substrátem nebo s meziproduktem nebo konečným produktem indikátorové reakce, vyznačující se tím, že před přidáním vzorku, který se má zkoumat, se nejprve nechá reagovat s reakčním činidlem enzymový substrát, například glukóza, kyselina močová nebo cholesterol, a teprve po jeho zreagování se přidá vzorek, který se má stanovit.
    1 výkres
CS817834A 1979-04-04 1980-04-03 Method of enzymatic determination of enzyme substrates CS244665B2 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2913553A DE2913553C2 (de) 1979-04-04 1979-04-04 Verfahren und Reagenz zur enzymatischen Bestimmung von Enzymsubstraten
CS802326A CS228127B2 (en) 1979-04-04 1980-04-03 Reagencni cinidlo

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS783481A2 CS783481A2 (en) 1985-09-17
CS244665B2 true CS244665B2 (en) 1986-08-14

Family

ID=6067435

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS817834A CS244665B2 (en) 1979-04-04 1980-04-03 Method of enzymatic determination of enzyme substrates
CS802326A CS228127B2 (en) 1979-04-04 1980-04-03 Reagencni cinidlo

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS802326A CS228127B2 (en) 1979-04-04 1980-04-03 Reagencni cinidlo

Country Status (12)

Country Link
US (1) US4517287A (cs)
EP (1) EP0016947B1 (cs)
JP (1) JPS55135599A (cs)
AT (1) ATE4126T1 (cs)
AU (1) AU515851B2 (cs)
CA (1) CA1152871A (cs)
CS (2) CS244665B2 (cs)
DD (1) DD150256A5 (cs)
DE (2) DE2913553C2 (cs)
FI (1) FI70727C (cs)
HU (1) HU181089B (cs)
YU (1) YU44100B (cs)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS56164797A (en) * 1980-05-21 1981-12-17 Toyo Jozo Co Ltd Improved method of determining components in samples
EP0100217B1 (en) * 1982-07-23 1987-10-07 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase
DE3314308A1 (de) * 1983-04-20 1984-10-25 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und reagens zur bestimmung des haemoglobin-haptoglobin komplexes in gegenwart von freiem haemoglobin
DE3509238A1 (de) * 1985-03-14 1986-09-18 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Stabilisierung der aktivitaet von peroxidase in loesung
US4937186A (en) * 1988-01-28 1990-06-26 Iqbal Siddiqi Method for the determination of bilirubin in solution
US5183743A (en) * 1989-06-12 1993-02-02 Miles Inc. Chromogenic dibenzoxazepinone and dibenzothiazepinone enzyme substrates
GB9113212D0 (en) * 1991-06-19 1991-08-07 Hypoguard Uk Ltd Reagent mixture
US5614010A (en) * 1994-03-14 1997-03-25 Clearwater, Inc. Hydrocarbon gels useful in formation fracturing
AUPM506894A0 (en) * 1994-04-14 1994-05-05 Memtec Limited Novel electrochemical cells
AUPN239395A0 (en) * 1995-04-12 1995-05-11 Memtec Limited Method of defining an electrode area
US6413410B1 (en) * 1996-06-19 2002-07-02 Lifescan, Inc. Electrochemical cell
AUPN363995A0 (en) 1995-06-19 1995-07-13 Memtec Limited Electrochemical cell
US6863801B2 (en) 1995-11-16 2005-03-08 Lifescan, Inc. Electrochemical cell
US6521110B1 (en) 1995-11-16 2003-02-18 Lifescan, Inc. Electrochemical cell
AUPN661995A0 (en) 1995-11-16 1995-12-07 Memtec America Corporation Electrochemical cell 2
US6638415B1 (en) 1995-11-16 2003-10-28 Lifescan, Inc. Antioxidant sensor
US6632349B1 (en) * 1996-11-15 2003-10-14 Lifescan, Inc. Hemoglobin sensor
AUPO855897A0 (en) * 1997-08-13 1997-09-04 Usf Filtration And Separations Group Inc. Automatic analysing apparatus II
US6193865B1 (en) 1997-09-11 2001-02-27 Usf Filtration And Separations Group, Inc. Analytic cell
RU2278612C2 (ru) 2000-07-14 2006-06-27 Лайфскен, Инк. Иммуносенсор
US6444115B1 (en) * 2000-07-14 2002-09-03 Lifescan, Inc. Electrochemical method for measuring chemical reaction rates
AU2002340079A1 (en) * 2001-10-10 2003-04-22 Lifescan Inc. Electrochemical cell
US20060134713A1 (en) * 2002-03-21 2006-06-22 Lifescan, Inc. Biosensor apparatus and methods of use
US20030180814A1 (en) * 2002-03-21 2003-09-25 Alastair Hodges Direct immunosensor assay
US8529751B2 (en) * 2006-03-31 2013-09-10 Lifescan, Inc. Systems and methods for discriminating control solution from a physiological sample
US8778168B2 (en) 2007-09-28 2014-07-15 Lifescan, Inc. Systems and methods of discriminating control solution from a physiological sample
US8097674B2 (en) * 2007-12-31 2012-01-17 Bridgestone Corporation Amino alkoxy-modified silsesquioxanes in silica-filled rubber with low volatile organic chemical evolution
US8603768B2 (en) 2008-01-17 2013-12-10 Lifescan, Inc. System and method for measuring an analyte in a sample
US8551320B2 (en) 2008-06-09 2013-10-08 Lifescan, Inc. System and method for measuring an analyte in a sample
CN111808921A (zh) * 2020-06-15 2020-10-23 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种基于Trinder反应的检测试剂盒及其应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL137003C (cs) * 1967-10-14
GB1385320A (en) * 1971-09-22 1975-02-26 Nat Res Dev Cholesterol assay
IT986838B (it) * 1972-05-12 1975-01-30 Sclavo Inst Sieroterapeut Complesso di reagenti per la deter minazione enzimatica del glucosio sistema glucosio ossidasi perossi dasi con metodo manuale e automati co con lettura a termine o in cinetica
US4000042A (en) * 1973-09-06 1976-12-28 E. I. Du Pont De Nemours And Company Diagnostic reagent for the determination of amylase
DE2417230A1 (de) * 1974-04-09 1975-11-06 Lebrecht Von Dr Klitzing Verfahren und anordnung zur enzymatischen bestimmung der konzentration von substraten, insbesondere stoffwechselmetaboliten
BE856461A (nl) * 1977-07-04 1978-01-04 Henau Paul Indicator voor zuurstofoverdracht, preparaat voor het verrichten van enzymatische bepalingen op basis van deze indicator en werkwijze
US4242446A (en) * 1978-07-26 1980-12-30 Coulter Electronics, Inc. Method for determining a substance in a biological fluid and reagent combination for use in the method
US4241179A (en) * 1978-08-14 1980-12-23 Coulter Electronics, Inc. Method for determining a transaminase in a biological fluid and reagent combination for use in the method

Also Published As

Publication number Publication date
EP0016947A1 (de) 1980-10-15
DD150256A5 (de) 1981-08-19
FI801025A (fi) 1980-10-05
FI70727C (fi) 1986-10-06
CS228127B2 (en) 1984-05-14
DE2913553C2 (de) 1981-09-17
JPS5646800B2 (cs) 1981-11-05
AU515851B2 (en) 1981-05-07
DE3064075D1 (en) 1983-08-18
CA1152871A (en) 1983-08-30
JPS55135599A (en) 1980-10-22
ATE4126T1 (de) 1983-07-15
FI70727B (fi) 1986-06-26
CS783481A2 (en) 1985-09-17
AU5677980A (en) 1980-10-09
YU91780A (en) 1984-04-30
HU181089B (en) 1983-05-30
US4517287A (en) 1985-05-14
YU44100B (en) 1990-02-28
DE2913553B1 (de) 1980-10-09
EP0016947B1 (de) 1983-07-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS244665B2 (en) Method of enzymatic determination of enzyme substrates
US4543326A (en) Stabilization of oxidase
US4350762A (en) Aminopyrine improved Trinder's reagent and dosing process for hydrogen peroxide from enzymatic oxidation of metabolic substrata with the same
JPS61146196A (ja) Ｈ↓２ｏ↓２の測色的測定を改善するための方法び試薬
FI57782B (fi) Foerfarande och reagens foer enzymkinetisk koncentrationsbestaemning hos ett substrat
EP0575515B1 (en) Stabilization of enzyme containing reagent composition for determination of an analyte
EP0116307A2 (en) Composition, analytical element and method for the quantification of creatine kinase
CS199692B2 (en) Method of photometric determination of hydrogen peroxides
US5962248A (en) Quantitative determination method for chloride ions
Bertrand et al. A one-step determination of serum 5'-nucleotidase using a centrifugal analyzer
JPS59183698A (ja) 基質又は酵素活性の定量方法
Scheibe et al. Uric acid
EP0586397B1 (en) Improved method and reagent for determination of an analyte
US4695539A (en) Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase
JPH0571239B2 (cs)
US5587296A (en) Reagent for assaying glucose
JP4022799B2 (ja) 電解質測定用試薬組成物
JPS59159798A (ja) 生体体液成分の測定法
JP3034984B2 (ja) Ｄ−ガラクトースの高感度定量法および定量用組成物
JPH02276597A (ja) 体液中のカルシウム測定方法
JP2643205B2 (ja) 高感度比色定量法
JPH0224520B2 (cs)
JPH0153040B2 (cs)
CS236758B2 (en) Method of determining of alpha-amylase
US20050164330A1 (en) Method for quantitatively determining a specific component in a biological specimen, and reagent for quantitative determination