FI70727C - Foerfarande och reagens foer enzymatisk bestaemning av enzymsubstrat - Google Patents
Foerfarande och reagens foer enzymatisk bestaemning av enzymsubstrat Download PDFInfo
- Publication number
- FI70727C FI70727C FI801025A FI801025A FI70727C FI 70727 C FI70727 C FI 70727C FI 801025 A FI801025 A FI 801025A FI 801025 A FI801025 A FI 801025A FI 70727 C FI70727 C FI 70727C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- substrate
- reagent
- determination
- buffer
- enzyme
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Description
|ffl r , „ KUULUTUSJULKAISU .
·$ϋΟί! B (11)UTLÄGGN,NGSSKR,FT ',f J^ ^ 7 (•ggj <45) rati'it'ic 'i’ln'cG 10 1300 (51) Kv.ik.*/Int.ci.‘ c 12 Q 1/00 g U Q I _ FINLAND (21) Patenttihakemus — Patentansdkning 801025 (22) Hakemispäivä -- Ansökningsdag 01. 0^.80 (FI) (23) Alkupäivä — Glltlghetsdag 01 . 0*1.80 (41) Tullut julkiseksi — Blivit offentllg 05 10.80
Patentti- ja rekisterihallitus Nähtäväksipanon ja kuut.julkaisun pvm. —
Patent- och registerstyrelsen ' 1 Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad 26.06.86 (86) Kv. hakemus — Int. ansökan (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus—Begärd prioritet 0*1.0*4 . 79 Saksan 1i i ttotasavalta-Förbundsrepubl iken Tysk)and(DE) P 2913553-3 (71) Boehringer Mannheim GmbH., Sandhofer Strasse 112-132, 6800 Mannheim-Waldhof, Saksen 1iittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (72) Peter Scheibe, Munchen, Erich Bernt, Munchen, Sigmar Klose, Berg,
Saksan 1iittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (7**) Berggren Oy Ab (5*0 Menetelmä ja reagenssi entsyymisubstraattien entsymaattiseksi määrittämiseksi - Förfarande och reagens för enzymatisk bestämning av enzym-substrat
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää ja reagenssia entsyymi-substraattien entsymaattiseksi määrittämiseksi.
Entsyymisubstraattien, kuten esimerkiksi glukoosin, virtsa-hapon ja kolesterolin entsymaattiset määritykset häiriintyvät usein sen johdosta, että näiden reagenssien sisältämät aineet, esimerkiksi pelkistävät tai hapettavat aineet, reagoivat koejärjestelmän välituotteiden tai lopputuotteiden kanssa. Nämä häiritsevät sivureaktiot voivat tapahtua puhtaasti kemiallisesti tai häiriintyminen voi olla seurauksena entsyymin estymisestä osallistua entsymaattiseen reaktioon kilpailevan substraatin tai senkaltaisen johdosta. Joka tapauksessa pienenee varsinaisen indikaattorituotteen väkevyys, joka mitataan kvantitatiivisissä, erikoisesti fotometrisissä määrityksissä, samoin kuin esimerkiksi myös muodostuneen väriaineen konsentraatio. Menetelmän tarkkuudelle tärkeä suhde osoitettavan substraattiväkevyyden ja mitatun indikaattorituotteen väkevyyden välillä vääristyy täten. Osoitettavan substraatin saanti vaihtelee täten 100 %:sta alkaen. Toisin sanoen saadaan vääriä tuloksia.
2 70727
Esillä olevan keksinnön tehtävänä on poistaa tämä probleemi ja aikaansaada sellainen menetelmä ja sellainen reaqenssi entsyymi-substraatin entsymaattiseksi määrittämiseksi häiritsevien aineiden läsnäollessa, joilla aikaansaadaan oikea tulos ja vältetään edellä esitetyt vaikeudet.
Keksinnön mukaisesti ratkaistaan tämä tehtävä menetelmän avulla entsyymisubstraatin entsymaattiseksi määrittämiseksi häiritsevien aineiden läsnäollessa, jotka kykenevät reagoimaan itse substraatin kanssa tai indikaattorireaktion väli- tai lopputuotteen kanssa, jolle on tunnusomaista se, että ennen tutkittavan näytteen lisäystä saatetaan substraatin määrätty määrä reagoimaan ensin reagenssin kanssa siksi, kunnes reaktio on päättynyt ja vasta tämän jälkeen lisätään määritettävä näyte.
Lisäämällä määrätty substraatin määrä, joka alittaa aina huomattavasti analyysijärjestelmän substraattimäärityskapasiteetin, mahdollistetaan esireaktion tapahtuminen siksi, kunnes kaikki lisätty substraatti on kulunut loppuun. Tämän esireaktion aikana myös häiritsevät aineet kuluvat täydellisesti loppuun. Heti kun tämä reaktio on päättynyt, lisätään varsinaisesti tutkittava näyte, joka sisältää tuntemattoman määrän määritettävää substraattia. Määritettävän substraatin määrä saadaan sitten erosta määritettävän reaktiotuotteen esireaktion loppuarvon ja sen loppuar-von välillä, joka saadaan tutkittavan näytteen lisäämisen jälkeen.
On myös mahdollista seurata varsinaista näytteen määritystä kineettisestä, so. ei mitata loppuarvoa vaan ainoastaan reaktionopeus.
Keksinnön mukaisesti lisättävän substraatin määrän suhteen ei voida antaa mitään yleisiä arvoja. Tämä määrä riippuu määritysjär-jestelmän luonteesta ja odotettavissa olevien häiritsevien aineiden määrästä. Yleensä käytetään riittävää substraatin ylimäärää häiritseviin aineisiin verrattuna varmuuden aikaansaamiseksi sen suhteen, ettei ole enää olemassa reagoimattomia häiritseviä aineita silloin kun varsinainen tuntematon näyte lisätään. Toiselta puolen ei lisätä myöskään liian paljon substraattia jottei varsinaiseen näytereaktioon nähden saada liian suurta ja mittausreaktion tarkkuuteen negatiivisesti vaikuttavaa nolla-arvoa. Viimemainitulla on merkitystä esimerkiksi mitattaessa fo-tometrisesti menetelmän tuotteena muodostettua väriainetta. Täi- 70727 3 laisissa reaktiotuotteena saadun väriaineen fotometriseen mittaukseen perustuvissa menetelmissä pidetään lisätty määrätty substraattimäärä niin alhaisena, ettei muodostu väriaineen häiritseviä väkevyyksiä. Tämä voidaan saavuttaa käytännössä aina helposti, koska tällainen väriaine tai indikaattorituote muodostuu vasta sellaista substraattimäärää käytettäessä, joka ylittää häiritsevien aineiden loppureaktioon tarvittavan substraattimää-rän.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä ei ole tarpeellista tuntea häiritsevien vieraiden aineiden laatua. Tällöin ovat kuitenkin usein kysymyksessä pelkistävät aineet, mutta myös hapettavat tai muut häiritsevät aineet voidaan keksinnön mukaisella menetelmällä varmuudella eliminoida.
Keksinnön kohteena on edelleen reagenssi entsyymisubstraatin entsymaattiseksi määrittämiseksi, joka reagenssi sisältää järjestelmän substraatin määrittämiseksi, jonka muodostaa ainakin yksi entsyymi, ainakin yksi puskuriaine ja ainakin yksi indikaattoriaine, sekä mahdollisesti apuaineet, jolle reagenssille on tunnusomaista se, että se sisältää määrätyn määrän substraattia alimäärin sen järjestelmän substraatin määrityskapasiteettiin nähden, jota käytetään tämän substraatin määrittämiseen.
Kun kuivassa muodossa oleva keksinnön mukainen reagenssi liuotetaan veteen, tapahtuu reaktio häiritsevien aineiden poistamiseksi kokonaan jo liukenemisen aikana ja sen jälkeen. Täten saatu liuos voidaan sitten lisätä suoraan entsyymisubstraatin varsinaiseen määritykseen tai myös muuttaa uudelleen kuivareagenssiksi, jota käytetään myöhempään uudelleenliuottamiseen ennen määritys-reaktion toteuttamista. On kuitenkin myös mahdollista täydentää keksinnön mukaista reagenssia vasta välittömästi ennen sen käyttöä substraatin lisäyksen avulla tai vaihtoehtoisesti lisätä toista reaktion alkamiseen tarpeellista ainetta vasta jälkeenpäin, esimerkiksi entsyymiä, tai kun kysymyksessä on useampivaiheinen reaktio,jossa on useampia entsymaattisia vaiheita, jotakin reaktiossa tarpeellista entsyymiä.
Keksinnön mukaisen reagenssin erään edullisen toteuttamismuodon mukaisesti sisältää se glukoosia substraattina, ja järjestelmä 4 7 0 7 2 7 glukoosisubstraatin määrittämiseksi muodostuu glukoosioksidaasis-ta (GOD) , peroksidaasista (POD) , puskurista ja ABT^ (2,2'-atsi-no-di-/3-etyyli-bentstiatsoliini-sulfcnaatti (6 )_/) värireagenssina.
Tällaista reagenssia käytettäessä lisätään, laskettuna 100 ml kohden substraattimääritys järjestelmän vesipitoista liuosta, noin 750-1500 U, edullisesti 900-1200 U Q0D:ta, jonka spesifinen aktiivisuus on noin 100 U/mg. Vastaava määrä POD:n suhteen, aktiivisuuden ollessa myös noin lOO U/mg, on 10-150 U, edullisesti 80-120 U/100 ml käyttövalmista reagenssiliuosta. Vastaavat ABTS:n väkevyydet ovat 75-150 mg, edullisesti 90-120 mg/ 100 ml. Puskurina tulee kysymykseen sellainen, jonka pH-arvo on 6,5-7,5, edullisesti 6,8-7,2. Väkevyys on tarkoituksenmukaisesti välillä 50 ja 200 mmoolia, edullisesti 80-120 mmoolia/1. Puskurina on edullinen natriumfosfaattipuskuri (Na2HP04/NaH2/ P04). Esimerkkejä muista sopivista puskureista ovat fosfaatti-tris-puskuri, sitruunahappo-tris-puskuri, viinihappo-tris-puskuri ja maleiinihappo-tris-puskuri. Väkevyyden ja pH-arvon suhteen pätee edellä esitetty.
Edellä kuvatulla tavalla muodostetussa reagenssissa on glukoosi-pitoisuus tarkoituksenmukaisesti 0,01-0,05 mg, edullisesti 0,02-0,04 mg/100 ml liuosta.
Eräässä toisessa edullisessa keksinnön mukaisessa reagenssissa glukoosin määrittämiseksi sisältää järjestelmä substraatin määrittämiseksi G0D:n ja P0D:n ohella värinmuodostuskomponentteina 4-amino-fenatsonia (PAP) ja fenolia. Tässä tapauksessa lisätään G0D:tä 100 ml kohden käyttövalmista reagenssiliuosta 3000-5000 U, edullisesti 3800-4200 U/100 ml, PODrtä 50-240 U, edullisesti 160-200 U/100 ml liuosta, sekä 10-20 mg, edullisesti 13-17 mg/ 100 ml PAP, ja 120-240 mg, edullisesti 160-200 mg/100 ml, fenolia. Puskurina on edullista käyttää tässä tapauksessa kaliumfosfaattipuskuria, jolla on edellä mainittu pH-alue.
Väkevyys on tarkoituksenmukaisesti välillä 150 ja 250 mmoolia, edullisesti 180-220 mmoolia/1. Tässä reagenssissa on glukoosi-pitoisuus tarkoituksenmukaisesti 0,05-0,25 mg, edullisesti 0,1-0,2 mg/100 ml liuosta.
Il 70727
Edellä esitetty koskee liuotettua reagenssia. Se koskee myös samalla tavalla 100 ml:n suuruisen liuosmäärän valmistamiseksi tarvittavaa kuivan reagenssin määrää.
Eräs toinen edullinen reagenssi sisältää substraattina virtsahap-poa, ja järjestelmä tämän substraatin määrittämiseksi käsittää uri-kaasia, P0D:tä, värinmuodostusainetta ja puskuria. Värinmuodos-tusaineena käytetään edullisesti seosta, jossa on 2,4-dikloori-fenolaattia ja 4-aminoantipyriiniä.
Tällaisen reagenssin tarkoituksenmukainen toteuttamismuoto sisältää urikaasia 35-45 U, edullisesti 38-42 U/IOO ml käyttövalmista liuosta, jonka aineen spesifinen aktiivisuus on noin 9 U/mg. Sellaisen preparaatin POD-määrä, jonka vahvuus on noin 100 U/mg, on tarkoituksenmukaisesti 30-40 U, edullisesti 33-37 U/lOO ml liuosta. 2,4-dikloorifenolaatin määrä, joka lisätään alkalisuo-lana, ammoniumsuolana tai aminosuolana, edullisesti etyyliammo-niumsuolana, on tarkoituksenmukaisesti välillä 150 ja 200 mg, edullisesti 165-180 mg/100 ml, etyyliammoniumsuolana laskettuna. Tämä määrä vaihtelee luonnollisesti kationin luonteesta riippuen.
4-aminoantipyriiniä lisätään edullisesti 150-250 mg, edullisesti 180-220 mg/100 ml reagenssia.
Puskuriaineen tulee puskuroida alueella 8,5-9,5, edullisesti alueella 8,7-9,3. Väkevyys on edullisesti 100-200 mmoolia, vielä edullisemmin 130-180 mmoolia/1. Edullisesti käytetään tris-sitraatti-puskuria, ja muita hyvin sopivia puskuriaineita ovat tris-viinihappo ja tris-maleiinihappo.
Näitä reagensseja käytettäessä on virtsahappolisäys tarkoituksenmukaisesti välillä noin 0,05 ja 0,25 mg, edullisesti 0,1-0,2 mg/100 ml, litium- tai natriumsuolana laskettuna.
Vielä eräs toinen edullinen keksinnön mukainen reagenssi sisältää kolesterolia substraattina, ja järjestelmän tämän substraatin määrittämiseksi muodostaa kolesteroliesteraasi, kolesterolioksi-daasi, POD ja värinmuodostaja sekä puskuriaine. Värinmuodosta-jaksi soveltuu erikoisesti 4-aminoantipyriinin ja fenolin seos.
6 70727
Erään tarkoituksenmukaisen toteuttamismuodon mukaisesti sisältää tämä reagenssi 15-25 U, edullisesti 17-23 U/100 ml reagenssiliuosta, kolesteroliesteraasia, jonka spesifinen aktiivisuus on noin 20 U/mg, 20-30 U, edullisesti 22-28 U/100 ml, kolestero-lioksidaasia, jonka spesifinen aktiivisuus on noin 25 U/mg, 50-200 U, edullisesti 130-180 U/100 ml liuosta, PODrtä, jonka aktiivisuus on noin 100 U/mg, 15-25 mg, edullisesti 17-23 mg/ 100 ml reagenssiliuosta, 4-aminoantipyriiniä, ja 40-60 mg, edullisesti 45-55 mg/100 ml, fenolia. Puskurina käytetään jotain sopivaa puskuriainetta pH 7-8,5, edullisesti 7,8-8,2, jonka väkevyys on välillä 150 ja 250 mmoolia, edullisesti 180-220 mmoo-lia/1. Erittäin sopiva on kaliumfosfaattipuskuri, mutta sopivia ovat myös muut puskuriaineet, jotka myös kykenevät puskuroimaan esitetyllä alueella. Tällaisen reagenssin kolesterolipitoisuus on tarkoituksenmukaisesti 0,20-0,60 mg, edullisesti 0,30-0,50 mg/100 ml reagenssiliuosta vast, tällaisen reagenssiliuosmäärän valmistukseen käytettyä kuiva-ainemäärää.
On ymmärrettävää, että edellä kuvattuja edullisia keksinnön mukaisia reagenssikoostumuksia varten käytetyt entsyymimäärät koskevat vain sellaisia entsyymejä, joilla on kulloinkin esitetty spesifinen aktiivisuus, ja että ne voidaan korvata muunlaisen aktiivisuuden omaavilla preparaateilla.
Edellä olevan perusteella voidaan todeta, että keksinnön mukaisesti voidaan häiritsevät reaktiot entsyymisubstraattien entsy-maattisessa määrityksessä välttää. Tämä tekee mahdolliseksi käyttää vähemmän puhtaita reagensseja, pidentää reagenssien varastoimiskestävyyttä, joissa syntyy häiritseviä aineita vasta varastoimisen aikana, ja suurentaa määrityksen tarkkuutta.
Seuraavat esimerkit kuvaavat edelleen keksintöä.
Esimerkki 1
Reagenssi glukoosin määritykseen ABTS-menetelmän mukaisesti.
II
7 70 7 2 7
Natriumfosfaatti-puskuri, pH 7,0 100 mmoolia/1
Glukoosioksidaasi (noin 100 U/mg) 1000 U/100 ml
Peroksidaasi (noin 100 U/mg) 80 U/100 ml ABTS+) 100 mg/100 ml
Glukoosi 0,05 mg/100 ml + * 2,2’-atsino-di-/3-etyyli-bentstiatsoliini-sulfonihappo(6)7-diammoniumsuola.
Esimerkki 2
Reagenssi glukoosin määrittämiseksi GOD-PAP-menetelmällä.
Kaliumfosfaatti-puskuri, pH 7,1 205 mmoolia/1
Glukoosioksidaasi (GOD noin 100 U/mg) 4100 U/100 ml
Peroksidaasi (POD noin 100 U/mg) 190 U/100 ml PAP (4-aminofenatsoni) 17 mg/100 ml
Fenoli 200mg/100 ml
Glukoosi 0,2 mg/100 ml
Esimerkki 3
Reagenssi kolesterolin määrittämiseksi.
Kaliumfosfaatti-puskuri, pH 7,9 200 mmoolia/1
Kolesteroliesteraasi (noin 20 U/mg) 22 U/100 ml
Kolesterolioksidaasi (noin 25 U/mg) 24 U/100 ml
Peroksidaasi (noin 100 U/mg) 150 U/100 ml 4-aminoantipyriini 21 mg/lOO ml
Fenoli 47 mg/lOO ml
Kolesteroli 0,4 mg/100 ml.
Esimerkki 4
Reagenssi virtsahapon määrittämiseksi.
Tris-sitraatti-puskuri, pH 9,1 150 mmoolia/1
Urikaasi (noin 9 U/mg) 39 U/100 ml
Peroksidaasi (noin 100 U/mg) 36 U/100 ml 2,4-dikloorifenolaatti-etyyliammoniumsuola 170 mg/100 ml 4-aminoantipyriini 190 mg/100 ml
Virtsahappo (Li- tai Na-suola) 0,16 mg/100 ml.
8 70727
Esimerkki 5
Vertaileva glukoosimääritys.
Keksinnön mukaisen parantuneen tarkkuuden osoittamiseksi glukoo-simäärityksessä meneteltiin seuraavasti:
Kaksi reagenssiliuosta A ja B valmistettiin liuottamalla esimerkin 1 mukaista reagenssia tarpeellisessa määrässä veteen. Liuoksesta A jätettiin pois glukoosilisäys. Määritystä varten valmistettiin glukoosi-vakiosarja, jonka glukoosipitoisuus kas-voi alueella 50-400 mg/100 ml, sekä lisättiin ihmisseerumia.
Määrityslaitteisto:
Aallonpituus: Hg 436 nm
Malja: 1 cm kerroksen paksuus Inkubointilämpötila: 20-25°C
Mittaus tapahtui nolla-arvoon verrattuna kaupan olevan fotometrin avulla. Maljaan pipetoitiin seuraavat liuokset:
Nolla- arvo Standardi Näyte
Tislattua vettä 0,1 ml
Laimennettua standardi- liuosta - 0,1 ml
Munavalkuaisesta vapautettu näyte - - 0,1 ml
Koereagenssi (A/B) 5,0 ml 5,0 ml 5,0 ml sekoitettiin ja inkuboitiin lämpötilassa 20-25°C. 25-50 minuutin jälkeen mitattiin näytteen ekstinktio (E-^ 3a standardin ekstinktio (E- . , ,.) 0-arvoon verrattuna, standardi
Glukoosiväkevyyden laskeminen näytteessä: c = 100 x yte- /mg/100 ml/ standardi
Mittaustulokset:
Glukoosi-vakio-sarja (50-400 mg/100 ml)
II
70727 9
Glukoosi-väkevyys Ekstinktio reagenssissa
A B
50 mg/100 ml - 0,095 100 mg/100 ml 0,060 0,170 200 mg/100 ml 0,236 0,353 300 mg/100 ml 0,400 0,533 400 mg/100 ml 0,577 0,700
Edellä olevat mittaustulokset on esitetty graafisesti oheenliitetyn piirustuksen kuviossa. Liuoksen A käyrä osoittaa, että koenesteitä, joiden glukoosipitoisuus on alle noin 70 mg/ 100 ml ei mitata, koska mitään ekstinktiota, so. värinkehitystä, ei tapahdu. Käytettäessä tavanomaista yksi-piste-standardia (esimerkiksi 100 mg glukoosia/100 ml) ovat näytteet, joiden glukoosiväkevyys on välillä 70 ja 100 mg/100 ml, liian alhaiset, ja näytteet, joiden glukoosipitoisuus on yli 100 mg/100 ml, liian korkeat verrattuna tosiasialliseen pitoisuuteen. Ainoastaan näyteväkevyydet, jotka vastaavat tarkoin standardien väkevyyttä, antavat oikeita mittausarvoja. Keksinnön mukainen rea-genssi B sitä vastoin antaa kauttaaltaan oikeita arvoja.
Tulokset, jotka saatiin ihmisseeruminäytteillä, suoritettiin edellä kuvatulla tavalla, jolloin vertailun vuoksi määritettiin heksokinaasi-menetelmällä (standardimenetelmä) saadut arvot. Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.
HK/G6P-DH Reagenssi Reagenssi (standardimenetelmä) A_ b_
Seerumi 1 53 mg/100 ml ei mittaus- 51 mg/100 ml arvoa
Seerumi 2 84 mg/100 ml 55 mg/100 ml 83,5 mg/100 ml
Seerumi 3 135 mg/100 ml 213 mg/100 ml 135 mg/100 ml
Claims (6)
1. Menetelmä entsyymisubstraatin entsymaattiseksi määrittämiseksi häiritsevien aineiden läsnäollessa, jotka kykenevät reagoimaan itse substraatin kanssa tai indikaattorireaktion väli-tai lopputuotteen kanssa, tunnettu siitä, että ennen tutkittavan näytteen lisäystä saatetaan substraatin määrätty määrä reagoimaan ensin reagenssin kanssa siksi, kunnes reaktio on päättynyt, ja vasta tämän jälkeen lisätään määritettävä näyte.
1 o 7 0 7 2 7
2. Reagenssi entsyymisubstraatin entsymaattiseksi määrittämiseksi patenttivaatimuksen 1 mukaisella menetelmällä, joka reagenssi sisältää järjestelmän substraatin määrittämiseksi, jonka muodostaa ainakin yksi entsyymi, ainakin yksi puskurianne ja ainakin yksi indikaattorianne, sekä mahdollisesti apuaineet, tunnettu siitä, että se sisältää määrätyn määrän substraattia alimäärin sen järjestelmän substraatin määrityskapasiteettiin nähden, jota käytetään tämän substraatin määrittämiseen.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää substraattina glukoosia ja järjestelmän substraatin määrittämiseksi muodostaa glukoosioksidaasi, peroksidaasi, 2,2'-atsino-di-/3-etyyli-bentstiatsoliini-sulf o-naatti(6)y ja puskuri.
4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää substraattina virtsahappoa, ja järjestelmän substraatin määrittämiseksi muodostavat urikaasi, peroksidaasi, 2,4-dikloorifenolaatti, 4-aminoantipyriini ja puskuri.
5. Patenttivaatimuksen 2 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää kolesterolia substraattina, ja järjestelmän substraatin määrittämiseksi muodostavat kolesterolieste-raasi, kolesterolioksidaasi, peroksidaasi, 4-aminoantipyriini, fenoli ja puskuri.
6. Patenttivaatimuksen 2 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää glukoosia substraattina ja järjestelmän substraatin määrittämiseksi muodostavat glukoosioksidaasi, peroksidaasi, 4-aminofenatsoni, fenoli ja puskuri. Il 11 70727
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2913553A DE2913553C2 (de) | 1979-04-04 | 1979-04-04 | Verfahren und Reagenz zur enzymatischen Bestimmung von Enzymsubstraten |
| DE2913553 | 1979-04-04 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI801025A FI801025A (fi) | 1980-10-05 |
| FI70727B FI70727B (fi) | 1986-06-26 |
| FI70727C true FI70727C (fi) | 1986-10-06 |
Family
ID=6067435
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI801025A FI70727C (fi) | 1979-04-04 | 1980-04-01 | Foerfarande och reagens foer enzymatisk bestaemning av enzymsubstrat |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4517287A (fi) |
| EP (1) | EP0016947B1 (fi) |
| JP (1) | JPS55135599A (fi) |
| AT (1) | ATE4126T1 (fi) |
| AU (1) | AU515851B2 (fi) |
| CA (1) | CA1152871A (fi) |
| CS (2) | CS228127B2 (fi) |
| DD (1) | DD150256A5 (fi) |
| DE (2) | DE2913553C2 (fi) |
| FI (1) | FI70727C (fi) |
| HU (1) | HU181089B (fi) |
| YU (1) | YU44100B (fi) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56164797A (en) * | 1980-05-21 | 1981-12-17 | Toyo Jozo Co Ltd | Improved method of determining components in samples |
| DE3374019D1 (en) * | 1982-07-23 | 1987-11-12 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase |
| DE3314308A1 (de) * | 1983-04-20 | 1984-10-25 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagens zur bestimmung des haemoglobin-haptoglobin komplexes in gegenwart von freiem haemoglobin |
| DE3509238A1 (de) * | 1985-03-14 | 1986-09-18 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisierung der aktivitaet von peroxidase in loesung |
| US4937186A (en) * | 1988-01-28 | 1990-06-26 | Iqbal Siddiqi | Method for the determination of bilirubin in solution |
| US5183743A (en) * | 1989-06-12 | 1993-02-02 | Miles Inc. | Chromogenic dibenzoxazepinone and dibenzothiazepinone enzyme substrates |
| GB9113212D0 (en) * | 1991-06-19 | 1991-08-07 | Hypoguard Uk Ltd | Reagent mixture |
| US5614010A (en) * | 1994-03-14 | 1997-03-25 | Clearwater, Inc. | Hydrocarbon gels useful in formation fracturing |
| AUPM506894A0 (en) * | 1994-04-14 | 1994-05-05 | Memtec Limited | Novel electrochemical cells |
| AUPN239395A0 (en) * | 1995-04-12 | 1995-05-11 | Memtec Limited | Method of defining an electrode area |
| AUPN363995A0 (en) | 1995-06-19 | 1995-07-13 | Memtec Limited | Electrochemical cell |
| US6413410B1 (en) * | 1996-06-19 | 2002-07-02 | Lifescan, Inc. | Electrochemical cell |
| AUPN661995A0 (en) * | 1995-11-16 | 1995-12-07 | Memtec America Corporation | Electrochemical cell 2 |
| US6638415B1 (en) * | 1995-11-16 | 2003-10-28 | Lifescan, Inc. | Antioxidant sensor |
| US6521110B1 (en) | 1995-11-16 | 2003-02-18 | Lifescan, Inc. | Electrochemical cell |
| US6863801B2 (en) * | 1995-11-16 | 2005-03-08 | Lifescan, Inc. | Electrochemical cell |
| US6632349B1 (en) | 1996-11-15 | 2003-10-14 | Lifescan, Inc. | Hemoglobin sensor |
| AUPO855897A0 (en) * | 1997-08-13 | 1997-09-04 | Usf Filtration And Separations Group Inc. | Automatic analysing apparatus II |
| US6193865B1 (en) | 1997-09-11 | 2001-02-27 | Usf Filtration And Separations Group, Inc. | Analytic cell |
| RU2278612C2 (ru) | 2000-07-14 | 2006-06-27 | Лайфскен, Инк. | Иммуносенсор |
| US6444115B1 (en) * | 2000-07-14 | 2002-09-03 | Lifescan, Inc. | Electrochemical method for measuring chemical reaction rates |
| IL156007A0 (en) | 2001-10-10 | 2003-12-23 | Lifescan Inc | Electrochemical cell |
| US20030180814A1 (en) * | 2002-03-21 | 2003-09-25 | Alastair Hodges | Direct immunosensor assay |
| US20060134713A1 (en) * | 2002-03-21 | 2006-06-22 | Lifescan, Inc. | Biosensor apparatus and methods of use |
| US8529751B2 (en) * | 2006-03-31 | 2013-09-10 | Lifescan, Inc. | Systems and methods for discriminating control solution from a physiological sample |
| US8778168B2 (en) * | 2007-09-28 | 2014-07-15 | Lifescan, Inc. | Systems and methods of discriminating control solution from a physiological sample |
| US8097674B2 (en) * | 2007-12-31 | 2012-01-17 | Bridgestone Corporation | Amino alkoxy-modified silsesquioxanes in silica-filled rubber with low volatile organic chemical evolution |
| US8603768B2 (en) | 2008-01-17 | 2013-12-10 | Lifescan, Inc. | System and method for measuring an analyte in a sample |
| US8551320B2 (en) * | 2008-06-09 | 2013-10-08 | Lifescan, Inc. | System and method for measuring an analyte in a sample |
| CN111808921A (zh) * | 2020-06-15 | 2020-10-23 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种基于Trinder反应的检测试剂盒及其应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL137003C (fi) * | 1967-10-14 | |||
| GB1385320A (en) * | 1971-09-22 | 1975-02-26 | Nat Res Dev | Cholesterol assay |
| IT986838B (it) * | 1972-05-12 | 1975-01-30 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Complesso di reagenti per la deter minazione enzimatica del glucosio sistema glucosio ossidasi perossi dasi con metodo manuale e automati co con lettura a termine o in cinetica |
| US4000042A (en) * | 1973-09-06 | 1976-12-28 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Diagnostic reagent for the determination of amylase |
| DE2417230A1 (de) * | 1974-04-09 | 1975-11-06 | Lebrecht Von Dr Klitzing | Verfahren und anordnung zur enzymatischen bestimmung der konzentration von substraten, insbesondere stoffwechselmetaboliten |
| BE856461A (nl) * | 1977-07-04 | 1978-01-04 | Henau Paul | Indicator voor zuurstofoverdracht, preparaat voor het verrichten van enzymatische bepalingen op basis van deze indicator en werkwijze |
| US4242446A (en) * | 1978-07-26 | 1980-12-30 | Coulter Electronics, Inc. | Method for determining a substance in a biological fluid and reagent combination for use in the method |
| US4241179A (en) * | 1978-08-14 | 1980-12-23 | Coulter Electronics, Inc. | Method for determining a transaminase in a biological fluid and reagent combination for use in the method |
-
1979
- 1979-04-04 DE DE2913553A patent/DE2913553C2/de not_active Expired
-
1980
- 1980-02-20 DE DE8080100841T patent/DE3064075D1/de not_active Expired
- 1980-02-20 AT AT80100841T patent/ATE4126T1/de not_active IP Right Cessation
- 1980-02-20 EP EP80100841A patent/EP0016947B1/de not_active Expired
- 1980-03-11 CA CA000347407A patent/CA1152871A/en not_active Expired
- 1980-03-24 AU AU56779/80A patent/AU515851B2/en not_active Expired
- 1980-03-25 US US06/133,722 patent/US4517287A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-04-01 FI FI801025A patent/FI70727C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-04-02 YU YU917/80A patent/YU44100B/xx unknown
- 1980-04-02 DD DD80220176A patent/DD150256A5/de not_active IP Right Cessation
- 1980-04-02 HU HU8080795A patent/HU181089B/hu not_active IP Right Cessation
- 1980-04-03 JP JP4343980A patent/JPS55135599A/ja active Granted
- 1980-04-03 CS CS802326A patent/CS228127B2/cs unknown
- 1980-04-03 CS CS817834A patent/CS244665B2/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| YU44100B (en) | 1990-02-28 |
| JPS55135599A (en) | 1980-10-22 |
| DD150256A5 (de) | 1981-08-19 |
| CS783481A2 (en) | 1985-09-17 |
| FI801025A (fi) | 1980-10-05 |
| EP0016947B1 (de) | 1983-07-13 |
| HU181089B (en) | 1983-05-30 |
| DE2913553B1 (de) | 1980-10-09 |
| CS244665B2 (en) | 1986-08-14 |
| AU515851B2 (en) | 1981-05-07 |
| CA1152871A (en) | 1983-08-30 |
| YU91780A (en) | 1984-04-30 |
| DE3064075D1 (en) | 1983-08-18 |
| EP0016947A1 (de) | 1980-10-15 |
| AU5677980A (en) | 1980-10-09 |
| DE2913553C2 (de) | 1981-09-17 |
| US4517287A (en) | 1985-05-14 |
| CS228127B2 (en) | 1984-05-14 |
| FI70727B (fi) | 1986-06-26 |
| ATE4126T1 (de) | 1983-07-15 |
| JPS5646800B2 (fi) | 1981-11-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI70727C (fi) | Foerfarande och reagens foer enzymatisk bestaemning av enzymsubstrat | |
| KR920001449B1 (ko) | 효소적산화에 의한 검체의 비색적 측정방법 및 시약 | |
| US4543326A (en) | Stabilization of oxidase | |
| FI83975C (fi) | Foerfarande och reagens foer specifik bestaemning av hdl-kolesterolhalt i serum. | |
| US4492754A (en) | Composition and method for the determination of hydrogen peroxide | |
| FI61916B (fi) | Foerfarande och reagens foer bestaemning av alfa-amylas | |
| FI57782C (fi) | Foerfarande och reagens foer enzymkinetisk koncentrationsbestaemning hos ett substrat | |
| Morin et al. | Single Glucose Oxidase—Peroxidase reagent for two-minute determination of serum glucose | |
| EP0116307B1 (en) | Composition, analytical element and method for the quantification of creatine kinase | |
| FI57024B (fi) | Foerfarande foer kvantitativ bestaemning av ammoniak i blodet | |
| JPH0698032B2 (ja) | クレアチンもしくはクレアチニンの測定法及びこれらの測定用試薬 | |
| CN111944872A (zh) | 测定肌酐含量的试剂组合、试剂或试剂盒 | |
| US4439527A (en) | Composition and method for the detection of hydrogen peroxide | |
| US4782016A (en) | Analytical element and method for determination of theophylline by enzyme inhibition | |
| US4810642A (en) | Method and test composition for determination of hydrogen peroxide | |
| US4778757A (en) | Method for the determination of substrates or enzyme activities | |
| US4695539A (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| US4247633A (en) | Reagent for colorimetric determination of creative phosphokinase | |
| US5874229A (en) | Method for avoiding influence of hemoglobin | |
| EP0258035B1 (en) | Analytical element and method for theophylline determination having increased alkaline phosphatase isoenzyme | |
| JPH07303497A (ja) | 生体成分の測定方法および測定用試薬組成物 | |
| JPS6123998B2 (fi) | ||
| JPS5911197A (ja) | 基質または酵素活性の定量方法 | |
| JP2001116756A (ja) | 液状試薬および保存方法 | |
| JPH1084994A (ja) | トレハロースの酵素的測定方法およびトレハロース分析用試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |