BE856461A

BE856461A - Indicator voor zuurstofoverdracht, preparaat voor het verrichten van enzymatische bepalingen op basis van deze indicator en werkwijze

Info

Publication number: BE856461A
Application number: BE179071A
Authority: BE
Original assignee: Henau Paul
Priority date: 1977-07-04
Filing date: 1977-07-04
Publication date: 1978-01-04

Description


  "Indicator voor zuurstofoverdracht,preparaat voor het verrichten van enzymatische bepalingen op basis van deze indicator en werkwijze ter bereiding van dit preparaat".

  
De uitvinding heeft betrekking op een indicator voor zuurstofoverdracht,met een organische amino-verbinding en een fenol derivaat.

  
Thans wordt in dergelijke indicatoren meestal gebruik gemaakt van fenol of dichlorofenol: deze produkten vertonen nochtans het- nadeel' een onaangename geur

  
 <EMI ID=1.1> 

  
dicator. 

  
Een doel van de uitvinding is aan dit nadeel te verhelpen en bovendien een indicator voor te stellen die op een zeer eenvoudige wijze toegepast kan worden.

  
Tot dit doel is het fenolderivaat zodanig dat

  
 <EMI ID=2.1> 

  
bekomen kan worden en in kontakt met andere ingrediënten, zoals bufferzoute&#65533;, enzymen en hulpstoffen, kan bewaard worden zonder deze te denatureren en in hun activiteit of bewaring te beïnvloeden.

  
Doelmatig is het fenolderivaat een alkalizout van de verbinding met de volgende algemene formule (I) :

  

 <EMI ID=3.1> 


  
 <EMI ID=4.1> 

  
 <EMI ID=5.1> 

  
is .

  
In een bijzondere uitvoeringsvorm is de organische amino-verbinding gevormd uit een verbinding met algemene formule:

  

 <EMI ID=6.1> 


  
 <EMI ID=7.1>  

  
De uitvinding heeft eveneens betrekking op een preparaat op basis van deze indicator voor het verrichten

  
 <EMI ID=8.1> 

  
kleurindicator in aanwezigheid van peroxydase.

  
Tenslotte heeft de uitvinding nog betrekking

  
 <EMI ID=9.1> 

  
paraat, die gekenmerkt is door het feit dat men alle ingredi&#65533;nten afzonderlijk als poeder bereidt en dan in droge vorm in de gewenste dosis met elkaar mengt.

  
Nadere bijzonderheden en voordelen van de uitvinding zullen blijken uit.de hierna volgende beschrijving waarin enkele concrete uitvoeringsvormen als voorbeeld gegeven worden.

  
In verschillende biochemische bepalingsmethoden gebruikt o.a. in de klinische chemie en in de voedingscheikunde wordt gebruik gemaakt van kleurindicatoren.

  
Als voorbeeld kan men citeren de glucose bepaling met glucoseoxydase en peroxydase, de galactose bepaling met galactoseoxydase en peroxydase, de cholesterolbepaling met cholesteroloxydase en peroxydase, de urinezuurbepaling met uricase en peroxydase, enz.

  
Bij voorbeeld de bepaling van glucose is gesteund op volgende reacties :

  

 <EMI ID=10.1> 
 

  

 <EMI ID=11.1> 


  
Er wordt meestal gebruik gemaakt van een buffer voor het behouden van de gewenste pH waarde.

  
De intensiteit van de bekomen kleur is

  
 <EMI ID=12.1> 

  
monster. 

  
 <EMI ID=13.1> 

  
noemde amino-verbinding en het fenolderivaat.

  
Op een analoge manier gebeuren de bepalingen

  
 <EMI ID=14.1> 

  
hun gebruik een onaangename geur.

  
De indicator volgens de uitvinding onderscheidt zich ten opzichte van de bekende 'indicatoren, door de specifieke keuze van het gebruikte fenolderivaat.Dit laatste is zodanig dat het door uit-

  
 <EMI ID=15.1>  
 <EMI ID=16.1> 
 waarin R een halogeen, zoals chloor of fluor, waterstof of

  
 <EMI ID=17.1> 

  
plaats ten overstaan van de OH-funcie vrij blijft.

  
 <EMI ID=18.1> 

  
goede resultaten geven. Dit product is zeer goed oplosbaar in water en de a-toxiciteit ervan is zeer goed bekend aangezien het zelf reeds lang als geneesmiddel gebruikt wordt.

  
Een andere fenolderivaat is het gesulfoneerd

  
 <EMI ID=19.1> 

  
gesteld- dat bij het afzonderlijk sulfoneren van dichlorofenol en het uitdampen ervan na neutralisatie, de onaangename geur van de dichlorofenol volledig weg te nemen is en dat het aldus bekomen produkt perfekt bevaarbaar is in droge poedervorm.

  
Naast genoemd fenolderivaat bevat -de indica-

  
 <EMI ID=20.1> 
 <EMI ID=21.1> 
  <EMI ID=22.1> 

  
 <EMI ID=23.1> 

  
antipyrine ruim voldoende is om,bij voorbeeld,bij de glucose bepaling de normale waarden in het gunstige afleesgebied van een fotometer te houden.

  
Deze indicator kan niet alleen zonder bijzondere voorzorgen afzonderlijk bewaard worden vóór het gebruik,

  
 <EMI ID=24.1> 

  
 <EMI ID=25.1> 

  
de bovenvermelde reacties.

  
Het preparaat; volgens de uitvinding kan be-

  
 <EMI ID=26.1> 

  
kaar gemengde ingrediënten, zoals onder meer genoemde indicator,

  
 <EMI ID=27.1> 

  
 <EMI ID=28.1>  

  
Een werkwijze voor de bereiding van het preparaat bestaat erin de verschillende ingrediënten droog in poedervorm met elkaar te mengen en dit poedermengsel eventueel in tabletvorm te brengen.

  
 <EMI ID=29.1> 

  
beelden gegeven ter illustratie van het voorwerp van de uitvinding.

  
Voorbeeld 1.

  
 <EMI ID=30.1> 

  
onder poedervorm bevindende ingrediënten bevat : 
 <EMI ID=31.1> 
 <EMI ID=32.1>  Voor de bepaling werd 0,1 ml bloed, serum of plasma onteiwit met 1 ml onteiwittingsreagens (bv. trichloorazijnzuuroplossing). Na centrifugatie werd 0,1 ml van

  
 <EMI ID=33.1> 

  
gemengd.

  
 <EMI ID=34.1> 

  
deld als het monster, terwijl als blanco 0,1 ml onteiwittingsreagens met 2,0 ml glucosereagens gemengd werd. Na 30 minuten

  
 <EMI ID=35.1> 

  
 <EMI ID=36.1> 

  
bepaling kan ook kinetisch doorgevoed worden. Voorbeeld 2.

  
 <EMI ID=37.1> 

  
in de aangegeven hoeveelheden opgelost :

  

 <EMI ID=38.1> 


  
Daarna werd de bekomen oplossing in flesjes verdeeld voor lyofilisatie (4 ml per flesje). Bij het gebruik voor de galactose bepaling werd de inhoud van een flesje opgelost met 20 ml water.

  
Een analoge doseringsmethode als voor glu-

  
 <EMI ID=39.1> 

  
 <EMI ID=40.1>   <EMI ID=41.1> 

  
gebeurt bij voorbeeld op basis van volgende reacties : 

  

 <EMI ID=42.1> 


  
 <EMI ID=43.1> 

  
op basis van volgende reacties uitgevoerd worden :

  

 <EMI ID=44.1> 


  
Deze opsomming is niet beperkend zodat de

  
 <EMI ID=45.1>

Claims

CONCLUSIES. <EMI ID=46.1>

dat het fenolderivaat zodanig is dat het door uitdampen of uitkristalliseren in nagenoeg droge vorm bekomen kan worden en

in kontakt met andere ingrediënten, zoals bufferzouten, enzymen en hulpstoffen, kan bewaard worden zonder deze te denatureren en in hun activiteit of bewaring te beïnvloeden.

2.- Indicator volgens conclusie 1, met het kenmerk

dat het fenolderivaat een alkalizout is van de verbinding met de volgende algemene formule (I) :

<EMI ID=47.1>

<EMI ID=48.1>

3.- Indicator volgens conclusie 2, met het kenmerk dat het fenolderivaat een alkalizout is van de verbinding met al-

<EMI ID=49.1>

<EMI ID=50.1>

tekenis hebben.

4.- Indicator volgens één van de conclusies 2 of 3,

<EMI ID=51.1>

neerd di-chlorofenol is.

5.- Indicator volgens één van de conclusies 2 of 3, met het kenmerk dat de verbinding met formule (I) gevormd is door thiocol. 6.- indicator volgens één van de vorige conclusies,

<EMI ID=52.1>

is uit een verbinding met algemene formule :

<EMI ID=53.1>

<EMI ID=54.1>

<EMI ID=55.1>

de organische verbinding gevormd is uit 4-amino-fenazone of 4-amino-antipyrine.

8-- Preparaat op basis van de indicator volgens één

<EMI ID=56.1>

in aanwezigheid van peroxydase met als indicator een aminover-

<EMI ID=57.1>

vaat door uitdampen of uitkristalliseren in droge vorm bekomen wordt en in kontakt met andere ingrediënten, zoals bufferzouten, enzymen en hulpstoffen, kan bewaard worden zonder deze te denatureren of in hun activiteit of bewaring te beïnvloeden <EMI ID=58.1>

<EMI ID=59.1>

dat de ingrediënten sich onder een gelyofiliseerde vorm bevinden.

<EMI ID=60.1>

bij gevoegde voorbeelden.

<EMI ID=61.1>

<EMI ID=62.1>