CS228127B2 - Reagencni cinidlo - Google Patents
Reagencni cinidlo Download PDFInfo
- Publication number
- CS228127B2 CS228127B2 CS802326A CS232680A CS228127B2 CS 228127 B2 CS228127 B2 CS 228127B2 CS 802326 A CS802326 A CS 802326A CS 232680 A CS232680 A CS 232680A CS 228127 B2 CS228127 B2 CS 228127B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- reagent
- substrate
- glucose
- solution
- determination
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 54
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 40
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 28
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 28
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 15
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 15
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 15
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 14
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 14
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims description 9
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims description 9
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 9
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims description 9
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims description 9
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 7
- HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-M 2,4-dichlorophenolate Chemical compound [O-]C1=CC=C(Cl)C=C1Cl HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 claims description 6
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 claims description 5
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 claims description 4
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 claims description 4
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 17
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 5
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- -1 -4-aminophenazone Chemical compound 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical class CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- IITIZHOBOIBGBW-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2N(CC)CSC2=C1 IITIZHOBOIBGBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XNQXMRLCUGVGFB-UHFFFAOYSA-N C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O.C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O.C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O.N1C(=O)NC=2NC(=O)NC2C1=O Chemical compound C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O.C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O.C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O.N1C(=O)NC=2NC(=O)NC2C1=O XNQXMRLCUGVGFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- OQRARGBZQRLEOK-UHFFFAOYSA-K P(=O)([O-])([O-])[O-].[K+].NC1=CCC(C2=NC3=CC=CC=C3N=C12)=O.[K+].[K+] Chemical compound P(=O)([O-])([O-])[O-].[K+].NC1=CCC(C2=NC3=CC=CC=C3N=C12)=O.[K+].[K+] OQRARGBZQRLEOK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Substances OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003947 ethylamines Chemical class 0.000 description 1
- 108010046301 glucose peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003541 multi-stage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N tris phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(N)(CO)CO JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
Vynález se týká reagenčního činidla k enzymatickému stanovení enzymových substrátů.
Enzymatická stanovení enzymových - substrátů, - jako je například glukóza, kyselina močová, cholesterol, jsou často rušena tím, že : látky ' obsažené v reagenčních činidlech, například redukující nebo oxidující látky, reagují s -meziprodukty nebo výslednými produkty -testovací soustavy. Tato rušivá vedlejší reakce může probíhat čistě chemicky neb.o může rušivý vliv -spočívat v blokování enzymu, ve vstupu v enzymatickou -reakci jakožto konkurenční -substrát a podobně. Ve všech případech se sníží - koncentrace vlastního indikátorového -produktu, který se stanoví při kvantitativních, zejména fotometrických -stanoveních, tedy -například koncentrace vzniklého barviva. Úměrný vztah, podstatný pro správnost postupu, imezi koncentrací substrátu, která se má dokázat, a koncentrací měřeného indikátorového produktu se tímto, způsobem poruší. Opětné zjištění -substrátu, který se -má dokázat, se tím odchýlí od 100 °/o. Jinými slovy, získají se chybné výsledky.
Úkolem vynálezu je odstranit tento problém - a poskytnout reagenční činidlo pro enzymatické stanovení enzymového substrátu v přítomnosti rušivých látek, jehož pou2 žitím -se -získají správné výsledky a odstraní se výše uvedené -obtíže.
Enzymatické stanovení -enzymového substrátu v přítomnosti rušivých látek, které mohou -reagovat se -samotným substrátem nebo s meziproduktem nebo výsledným produktem indikátorové reakce, se provádí za použití reagenčního činidla podle vynálezu.
Předmětem vynálezu je tedy reagenční činidlo k enzymatickému stanovení enzymového substrátu, například glukózy, kyseliny močové nebo cholesterolu, obsahující -soustavu ke stanovení tohoto substrátu, - která sestává z alespoň jednoho enzymu, například gl-ukózooxidázy, ur-ikázy, peroxidázy, cholesterolsterázy nebo ciholesteroloxidázy, alespoň jednoho pufru a alespoň jedné indikátorové látky, například 2,2‘-azino-di-[3-et'hylbenzthiazolins’ulfonátu-(6 j ], 2,4-dichlorfenolátu, 4-aminoantipyrinu, - 4-aminofenazonu, fenolu, jakož popřípadě i z pomocných látek, vyznačující se tím, že - obsahuje substrát v množství menším, než odpovídá kapacitě této soustavy pro stanovení substrátu.
Složení reagenčního činidla podle vynálezu je takové, aby před přidáním vzorku, který -se má zkoumat, nejprve zreagovalo určité množství substrátu s -reagenčím čini228127 dlem, a teprve po skončení této reakce se přidal vzorek, který se má stanovit.
Přidáním určitého množství substrátu, které vždy leží zřetelně pod schopností analyzační soustavy pro stanovení substrátu, se zahájí předběžná reakce, která probíhá tak dlouho, až se veškerý přidaný substrát spotřebuje:
V rámci této předběžné reakce se úplně spotřebují i rušivé látky. Jakmile tato reakce dozní, přidá se pak vlastní vzorek, který se má zkoumat, s neznámým obsahem substrátu, který se má stanovit. Množství substrátu, které se má stanovit, je pak dáno rozdílem mezi výslednou hodnotou předběžné 'reakce pro stanovení reakčního produktu a výslednou hodnotou, která se získá po přidání vzorku, jenž se má zkoumat. Popřípadě je též možné sledovat vlastní zkoumání vzorku kineticky, tj. měřit nikoliv konečné hodnoty, nýbrž jen reakční rychlosti.
Pokud jde a množství substrátu, které reagenční činidlo podle vynálezu obsahuje, nelze uvést žádné obecné údaje. Toto množství závisí na druhu soustavy pro stanovení enzymových substrátů a na množství rušivých látek, které lze v substrátu očekávat. Zpravidla bude činidlo obsahovat dostatečný nadbytek substrátu, pokud jde o rušivé látky, aby bylo s jistotou vyloučeno, že v okamžiku přidání vlastního neznámého vzorku jsou ještě přítomny nezreagované rušivé látky. Naproti tomu zase nebude činidlo obsahovat příliš mnoho substrátu, aby se pro vlastní reakci vzorku nezískala příliš vysoká nulová hodnota, nepříznivě ovlivňující přesnost měřicí reakce.
Toto posledně uvedené hraje roli například při fotometrických měřeních barviva, vzniklého jeko reakční produkt. U takových metod, spočívajících na fotometrickém stanovení barviva vzniklého jako reakční produkt, bude přidané určité množství substrátu tak malé, že nevzniknou ještě žádné rušivé koncentrace barviva. Toho lze v praxi v každém jednotlivém případě snadno dosáhnout, poněvadž přece takové barvivo nebo jiný indikátorový produkt vznikne teprve takovým množstvím substrátu, které převyšuje množství substrátu, potřebné pro zreagování rušivých látek.
Při použití reagenčního činidla podle vynálezu není nutné znát druh rušivých cizích látek. Často zde jde o sice redukující látky, avšak reagenční činidlo podle vynálezu bezpečně vyřadí i oxidující nebo jiné rušivé látky.
Rozpustí-li se reagenční činidlo podle vynálezu, které je v podobě suché látky, ve vodě, proběhne reakce к odstranění rušivých látek již během rozpuštění a po něm. Takto získaného roztoku lze pak použít přímo pro vlastní stanovení enzymového substrátu nebo jej lze znovu převést do podoby suchého reagenčního činidla, které je určeno к pozdějšímu opětnému rozpuštění před provedením stanovovací reakce. Avšak je těž možné zkompletovat reagenční činidlo přidáním substrátu teprve bezprostředně před jeho použitím nebo alternativně teprve dodatečně přidat látku, potřebnou pro zahájení reakce, například enzym, nebo v případě více stupňové reakce s větším počtem enzymatických kroků, jeden z enzymů potřebných pro reakci.
Podle jednoho výhodného provedení reagenčního činidla podle vynálezu, obsahuje toto činidlo glukózu jakožto substrát a soustava ke stanovení glukózy jakožto substrátu, sestává z glukózooxidázy (GOD), peroxidázy (POD), pufru a 2,2‘-azino-di-[3-ethylbenzthiazolinsulfonátu- (6) ]) (ABST) jakožto barevné reagencie.
U takovéhoto reagenčního činidla se použije, vztaženo na 100 ml vodného roztoku soustavy ke stanovení substrátu, asi 750 až 1500 j., s výhodou 900 až 1200 j. glukózooxidázy o specifické aktivitě, přibližně 100 j./mg. Příslušná množství peroxidázy o specifické aktivitě rovněž asi 100 j./mg činí 10 až 150 j., s výhodou 80 až 120 j./ΙΟΟ ml roztoku reagenčního činidla, připraveného к použití. Příslušné koncentrace pro (2,2‘-azino-di- [ 3-ethylbenzthiazolinsulf onát- (6) ]} činí 75 až 150mg, s výhodou 90 až 120 mg/ /100 ml. Jako pufr přichází v úvahu pufr o pH v rozmezí 6,5 až 7,5, s výhodou 6,8 až
7,2. Koncentrace je účelně v rozmezí od 50 do 200 mmolů, s výhodou od 80 do 120 mmolů/litr. Výhodným pufrem je pufr na bázi fosforečnanu sodného (NažHPCh/NaHaPCh). Příklady jiných vhodných pufrů jsou pufr na bázi tris-fosfátu, pufr na bázi tris-kyseliny citrónové, tris-kyseliny vinné a tris-kyseliny maleinové. Pro koncentraci a hodnotu pH platí tytéž údaje, jak byly výše uvedeny.
U jednoho reagenčního činidla výše popsaného složení je obsah glukózy účelně v rozmezí od 0,01 do 0,05 mg, s výhodou od 0,02 do 0,04 mg/100 ml roztoku. .
U jiného výhodného reagenčního činidla podle vynálezu ke stanovení obsahu glukózy, obsahuje soustava ke stanovení substrátu kromě glukózooxidázy a peroxidázy 4-aminofenazon(PAP) a fenol jakožto složky pro vytvoření barviva. V tomto případě se použije na 100 ml roztoku reagenčního činidla, připraveného к použití, 3000 až 5000 j. glukózooxidázy, s výhodou 3800 až 4200 j./ /100 ml, 50 až 240 j. peroxidázy, s výhodou 160 až 200 j./ΙΟΟ ml roztoku, jakož i 10 až 20 mg 4-aminofenazonu, s výhodou 13 až 17 mg/100 ml a 120 až 240 mg fenolu, s výhodou 160 až 200 mg/100 ml. Jakožto pufru se v tomto případě používá s výhodou pufru na bázi fosforečnanu draselného o pH ve výše uvedeném rozmezí. Koncentrace by měla být účelně v rozmezí od 150 do 250 mmolů, s výhodou od 180 do 220 mmolů/litr. U tohoto reagenčního činidla je obsah glukózy účelně v rozmezí od 0.05 do 0,25 mg, s výhodou od 0,1 do 0,2 mg/100 ml roztoku.
Výše uvedené údaje se vztahují na rozpuštěné. -reagenční činidlo. Platí stejně pro takové množství reagenčního činidla v podobě suché látky, které je určeno pro přípravu 100 ml roztoku.
Další výhodné reagenční činidlo podle vynálezu obsahuje Jako substrát kyselinu močovou a soustava ke stanovení tohoto substrátu sestává z urikázy, peroxidázy, látky vytvářející barvivo a pufru. Jako látky vytvářející barvivo se používá s výhodou směsi 2,4-dichlorfenolátu a 4-aminoantipyrin.
Takové reagenční činidlo obsahuje v účelném provedení 35 až 45 j., s výhodou 38 až 42 j. urikázy o specifické aktivitě přibližně ' 9 j./-mg ve 100 ml roztoku . připraveného k použití. Množství peroxidázy u preparátu o aktivitě přibližně 100 j./mg je účelné v rozmezí od 30 do 40 j., s výhodou od 33 do 37 j./100 ml roztoku. Množství 2,4-dichlorfenolátu, kterého se - používá v podobě alkalické soli, amoniové soli ' nebo aminosoli, s výhodou jako ethylamoniové soli, je účelné v rozmezí od 150 .do. 200 mg, - s výhodou od 165 do 180 mg/100 ml, - vztaženo na ethylamoniovou sůl. Tyto údaje o množství se samozřejmě mění podle povahy kationtu. 4mmiia3antipyrinu se účelně používá v množství od 150 do 250 mg, s výhodou od 180 do 220 mg/100 ml reagenčního činidla.
Pufrovací látka má udržovat hodnotu pH v rozmezí od 8,5 do 9,5, s výhodou od 8,7 do 9,3. Koncentrace pufru je účelně v rozmezí od 100 do 200 mmolů, s výhodou od 130 - do 180 mmolů/litr.
Výhodným je pufr na bázi tris-citrátu, jinými vhodnými pufrovacími látkami jsou pufr na bázi tris-kyseliny vinné a triskyseliny maleinové.
U tohoto reagenčního činidla činí přídavek kyseliny močové účelně od 0,05 do 0,25 miligramu, s výhodou od 0,1 do 0,2 mg/100 mililitrů vztaženo na lithnou nebo sodnou sůl.
Ještě jiné výhodné reagenční činidlo podle vynálezu obsahuje -cholesterol jakožto substrát a soustava ke stanovení tohoto substrátu sestává z cholesterolesterázy, cholesteroloxidázy, peroxidázy a látky vytvářející barvivo jakož i z . pufru. Jako látka vytvářející barvivo je vhodná zejména směs 4-amino-antipyrinu -s fenolem.
Při účelném provedení -obsahuje toto reagenční činidlo 15 až - 25 j., s výhodou 17 až 23. cholesterolesterázy o specifické aktivitě přibližně 20 j./mg na 100 ml roztoku reagenčního činidla., 20 až 30 j., s výhodou 22 až 28 j. choresteroloxidázy o specifické aktivitě přibližně 25 j./mg na 100 ml roztoku, 50 až 200 j., s výhodou 130 až 180 j. peroxidázy o specifické aktivitě přibližně 100 j./ /miligramů na 100 ml roztoku, 15 až 25 mg, s výhodou 17 . až 23 mg 4-aminoantipyrinu na 100 ml roztoku .reagenčního činidla a 40 až 60 mg, s výhodou 45 až 55 mg fenolu na 100 ml roztoku reagenčího činidla. Jako pufru se použije vhodné pufrovací látky o ρΗ v rozmezí 7 až 8,5, s výhodou 7,8 až 8,2, v koncentraci v rozmezí od 150 do 250 mmolů, s výhodou od 180 do- 220 mmolů/litr. Obzvlášť vhodný je pufr na bázi fosforečnanu - draselného, hodí - se však i jiné pufrovací látky, které jsou -schopné udržovat hodnotu pH v uvedeném rozmezí. Obsah - cholesterolu v takovémto reagenčním - činidle je účelně v rozmezí od 0,20 do 0,60 mg, s výhodou od 0,30 do 0,50 mg na 100 ml roztoku reagenčního činidla, popřípadě na takové množství reagenčního činidla v podobě suché látky, kterého je zapotřebí pro přípravu takovéhoto množství -roztoku reagenčního činidla.
Je samozřejmé, že množství enzymů, uvedená pro výše popsaná výhodná složení retenčního činidla podle vynálezu, platí pouze pro enzymy uvedených specifických aktivit a mohou být -nahražena preparáty jiné aktivity.
Jak je z uvedeného zřejmé, je možno podle vynálezu odstranit -rušivé reakce při enzymatickém stanovení enzymových substrátů. To -umožňuje použití méně čistých reagencií, prodloužit skladovatelnost reagencií, u nichž vznikají rušivé látky teprve během skladování, a zvýšit přesnost stanovení.
Dále uvedené příklady vynález blíže objasňují.
Příklad 1
Reagenční činidlo pro stanovení glukózy metodou používající - kyseliny 2,2í-azino-di- [ 3-ethylbenztihiazoli.nsulf onové- (6) ] pufr na bázi fosforečnanu sodného, pH 7,0 100 -mmolů/litr glukózooxidáza o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg 1000 j./100- ml peroxidáza - o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg 80 j./100 ml diaminová sůl kyseliny 2.2‘-azinodi-[3-ethyl-benzthiazolins-ufonové^ 6-j ] 100 mg/ml glukóza 0,05 mg/100 ml
Příklad 2
Reagenční činidlo pro- stanovení glukózy metodou používající glukózidázu a 4-aminofenazon pufr na bázi fosforečnanu draselného o pH 7,1 205 -mmolů/litr glukózooxidáza o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg 4100 j./lC0 ml peroxidáza o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg 190 j./10-0 ml
4-aminofenozan mg/100 ml fenol
200 mg/100 ml peroxidáza o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg 36 j./ΙΟΟ ml glukóza
0,2 mg/100 ml
Příklad 3 ethylaminová sůl
2,4-dichlorfenolátu
4-aminoantipyrin
170 mg/100 ml
190 mg/100 ml
Reagenční činidlo pro stanovení cholesterolu pufr na bázi fosforečnanu draselného o pH 7,9 200 mmolů/litr cholesterolesteráza o specifické aktivitě přibližně 20 j./mg 22 j./ΙΟΟ ml cholesterbloxidáza o specifické aktivitě přibližně 25 j./mg 24 j./ΙΟΟ ml peroxidáza o specifické aktivitě přibližně 100 j./mg 150 j./ΙΟΟ ml
4-aminoantipyrin img/100 ml fenol mg/100 ml cholesterol Příklad 4
0,4 mg/100 ml
Reagenční činidlo pro stanovení kyseliny močové pufr na bázi tris-citrátu o pH 9,1 150 mmolů/litr urikáza o specifické aktivitě přibližně 9 j./mg 39 j./ΙΟΟ ml kyselina močová (lithná nebo sodná sůl)
0,16 mg/100 ml
Příklad 5
Srovnávací stanovení glukózy
Aby byla ukázána zlepšená přesnost stanovení glukózy podle vynálezu, postupuje se takto:
Rozpuštění reagenčního činidla podle příkladu 1 v potřebném množství vody se připraví dva roztoky А а В reagenčního činidla. U roztoku A se však vynechá přidání glukózy. Ke stanovení se použije glukózové standardní řady o obsahu glukózy, vzrůstajícím od 50 do 400 mg/100 ml jakož i lidského séra.
Násada pro stanovení:
vlnová délka: Hg 436 nm kyveta: tloušťka vrstvy 1 cm teplota inkubace: 20 až 25 °C
Měření se provádí oproti slepé hodnotě komerčním fotometrem. Do kyvet se napipetují tyto roztoky:
slepá hodnota standard vzorek destilovaná voda 0,1 ml zředěný standardní roztok — vzorek zbavený bílkovin — testovací reagenční činidlo (A/B) 5,0 ml promísí a inkubují při teplotě v rozmezí od 20 .do 25 °C. Po 25 až 50 minutách se měří extinkce vzorku (EV20rku) a extinkce standardu Estandardu) oproti slepé hodnotě.
Výpočet koncentrace glukózy ve vzorku se provádí podle vztahu:
0,1 ml — — 0,1 ml
5,0 ml 5,0 ml c = 100 X Ev*°'kU (mg/100 ml) ^standardu
Výsledky měření:
Glukózová standardní řada (50 až 400 mg/ /100 ml) extinkce v reakčním činidle А В koncentrace glukózy
| 50 mg/100 ml | — | 0,095 |
| 100 mg/100 ml | 0,060 | 0,170 |
| 200 mg/100 ml | 0,236 | 0,353 |
| 300 mg/100 ml | 0,400 | 0,533 |
| 400 mg/100 ml | 0,577 | 0,700 |
Výše uvedené výsledky měření jso-u graficky znázorněny na přiloženém výkresu. V grafu jsou na ose x vyneseny koncentrace glukózy v mg na 100 ml roztoku vzorku. Na ose у jsou vyneseny rozdíly Δ E extinkce. Křivka A odpovídá roztoku ireagenčního činidla A z příkl. 5, křivka В odpovídá roztoku reagenčního činidla В z příkl. 5. Křivka A ukazuje, že kapalné vzorky s obsahem glukózy pod přibližně 70 mg/100 ml se neměří, poněvadž nedochází к extinkci, tj. ke vzniku barvy. Při použití obvyklého jed.no,bodového standardu (například 100 mg glukózy/100 ml) se vzorky o koncentraci glukózy v rozmezí od 70 do 100 mg/100 ml vy hodnotí jako s nižším obsahem glukózy než je skutečný obsah, a vzorky s obsahem glukózy nad 100 mg/100 ml jako s vyšším obsahem glukózy než je skutečný obsah glukózy. Jenom vzorky o koncentracích, které přesně odpovídají koncentraci standardu, skýtají správné výsledky při měření. Jak ukazuje křivka B, skýtá reagenční činidlo В podle vynálezu průběžně správné výsledky při měření.
Testy se vzorky lidského séra se provedou výše popsaným způsobem, přičemž pro porovnání byly určeny hodnoty, získané hexokinázovou metodou (standardní metoda). Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce.
HK/G6P-DH (standardní metoda) sérum 1 53 mg/100 ml sérum 2 84 mg/100 ml sérum 3 135 mg/100 ml
| reagenční činidlo A | reagenční činidlo В |
| nenaměřena žádná hodnota 55 mg/100 ml 213 mg/100 ml | 51 mg/100 ml 83,5 mg/100 ml 135 mg/100 ml |
PŘEDMĚT VYNÁLEZU
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUReagenční činidlo к enzymatickému stanovení enzymového substrátu, například glukózy, kyseliny močové nebo cholesterolu, obsahující soustavu ke stanovení tohoto substrátu, která sestává z alespoň jednoho enzymu, například glukózooxidázy, urikázy, peroxidázy, cholesterolesterázy nebo cho lesteroloxidázy, alespoň jednoho pufru a alespoň jedné indikátorové látky, například 2;2‘-azino-di- [ 3-ethylbenzthiazolinsulf onátu- (6)], 2,4-dichlorf enolátu, 4-aminoantipyrinu, 4-aminofenazonu, fenolu, jakož popřípadě i z pomocných látek, vyznačující se tím, že obsahuje substrát v množství menším než -odpovídá kapacitě této soustavy pro stanovení substrátu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS817834A CS244665B2 (en) | 1979-04-04 | 1980-04-03 | Method of enzymatic determination of enzyme substrates |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2913553A DE2913553C2 (de) | 1979-04-04 | 1979-04-04 | Verfahren und Reagenz zur enzymatischen Bestimmung von Enzymsubstraten |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS228127B2 true CS228127B2 (en) | 1984-05-14 |
Family
ID=6067435
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS802326A CS228127B2 (en) | 1979-04-04 | 1980-04-03 | Reagencni cinidlo |
| CS817834A CS244665B2 (en) | 1979-04-04 | 1980-04-03 | Method of enzymatic determination of enzyme substrates |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS817834A CS244665B2 (en) | 1979-04-04 | 1980-04-03 | Method of enzymatic determination of enzyme substrates |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4517287A (cs) |
| EP (1) | EP0016947B1 (cs) |
| JP (1) | JPS55135599A (cs) |
| AT (1) | ATE4126T1 (cs) |
| AU (1) | AU515851B2 (cs) |
| CA (1) | CA1152871A (cs) |
| CS (2) | CS228127B2 (cs) |
| DD (1) | DD150256A5 (cs) |
| DE (2) | DE2913553C2 (cs) |
| FI (1) | FI70727C (cs) |
| HU (1) | HU181089B (cs) |
| YU (1) | YU44100B (cs) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56164797A (en) * | 1980-05-21 | 1981-12-17 | Toyo Jozo Co Ltd | Improved method of determining components in samples |
| EP0100217B1 (en) * | 1982-07-23 | 1987-10-07 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase |
| DE3314308A1 (de) * | 1983-04-20 | 1984-10-25 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagens zur bestimmung des haemoglobin-haptoglobin komplexes in gegenwart von freiem haemoglobin |
| DE3509238A1 (de) * | 1985-03-14 | 1986-09-18 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisierung der aktivitaet von peroxidase in loesung |
| US4937186A (en) * | 1988-01-28 | 1990-06-26 | Iqbal Siddiqi | Method for the determination of bilirubin in solution |
| US5183743A (en) * | 1989-06-12 | 1993-02-02 | Miles Inc. | Chromogenic dibenzoxazepinone and dibenzothiazepinone enzyme substrates |
| GB9113212D0 (en) * | 1991-06-19 | 1991-08-07 | Hypoguard Uk Ltd | Reagent mixture |
| US5614010A (en) * | 1994-03-14 | 1997-03-25 | Clearwater, Inc. | Hydrocarbon gels useful in formation fracturing |
| AUPM506894A0 (en) * | 1994-04-14 | 1994-05-05 | Memtec Limited | Novel electrochemical cells |
| AUPN239395A0 (en) * | 1995-04-12 | 1995-05-11 | Memtec Limited | Method of defining an electrode area |
| US6413410B1 (en) * | 1996-06-19 | 2002-07-02 | Lifescan, Inc. | Electrochemical cell |
| AUPN363995A0 (en) | 1995-06-19 | 1995-07-13 | Memtec Limited | Electrochemical cell |
| US6521110B1 (en) | 1995-11-16 | 2003-02-18 | Lifescan, Inc. | Electrochemical cell |
| US6638415B1 (en) * | 1995-11-16 | 2003-10-28 | Lifescan, Inc. | Antioxidant sensor |
| US6863801B2 (en) * | 1995-11-16 | 2005-03-08 | Lifescan, Inc. | Electrochemical cell |
| AUPN661995A0 (en) | 1995-11-16 | 1995-12-07 | Memtec America Corporation | Electrochemical cell 2 |
| US6632349B1 (en) * | 1996-11-15 | 2003-10-14 | Lifescan, Inc. | Hemoglobin sensor |
| AUPO855897A0 (en) | 1997-08-13 | 1997-09-04 | Usf Filtration And Separations Group Inc. | Automatic analysing apparatus II |
| US6193865B1 (en) | 1997-09-11 | 2001-02-27 | Usf Filtration And Separations Group, Inc. | Analytic cell |
| RU2278612C2 (ru) | 2000-07-14 | 2006-06-27 | Лайфскен, Инк. | Иммуносенсор |
| US6444115B1 (en) * | 2000-07-14 | 2002-09-03 | Lifescan, Inc. | Electrochemical method for measuring chemical reaction rates |
| IL156007A0 (en) | 2001-10-10 | 2003-12-23 | Lifescan Inc | Electrochemical cell |
| US20060134713A1 (en) | 2002-03-21 | 2006-06-22 | Lifescan, Inc. | Biosensor apparatus and methods of use |
| US20030180814A1 (en) * | 2002-03-21 | 2003-09-25 | Alastair Hodges | Direct immunosensor assay |
| US8529751B2 (en) | 2006-03-31 | 2013-09-10 | Lifescan, Inc. | Systems and methods for discriminating control solution from a physiological sample |
| US8778168B2 (en) * | 2007-09-28 | 2014-07-15 | Lifescan, Inc. | Systems and methods of discriminating control solution from a physiological sample |
| US8097674B2 (en) * | 2007-12-31 | 2012-01-17 | Bridgestone Corporation | Amino alkoxy-modified silsesquioxanes in silica-filled rubber with low volatile organic chemical evolution |
| US8603768B2 (en) | 2008-01-17 | 2013-12-10 | Lifescan, Inc. | System and method for measuring an analyte in a sample |
| US8551320B2 (en) * | 2008-06-09 | 2013-10-08 | Lifescan, Inc. | System and method for measuring an analyte in a sample |
| CN111808921A (zh) * | 2020-06-15 | 2020-10-23 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种基于Trinder反应的检测试剂盒及其应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL137003C (cs) * | 1967-10-14 | |||
| GB1385320A (en) * | 1971-09-22 | 1975-02-26 | Nat Res Dev | Cholesterol assay |
| IT986838B (it) * | 1972-05-12 | 1975-01-30 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Complesso di reagenti per la deter minazione enzimatica del glucosio sistema glucosio ossidasi perossi dasi con metodo manuale e automati co con lettura a termine o in cinetica |
| US4000042A (en) * | 1973-09-06 | 1976-12-28 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Diagnostic reagent for the determination of amylase |
| DE2417230A1 (de) * | 1974-04-09 | 1975-11-06 | Lebrecht Von Dr Klitzing | Verfahren und anordnung zur enzymatischen bestimmung der konzentration von substraten, insbesondere stoffwechselmetaboliten |
| BE856461A (nl) * | 1977-07-04 | 1978-01-04 | Henau Paul | Indicator voor zuurstofoverdracht, preparaat voor het verrichten van enzymatische bepalingen op basis van deze indicator en werkwijze |
| US4242446A (en) * | 1978-07-26 | 1980-12-30 | Coulter Electronics, Inc. | Method for determining a substance in a biological fluid and reagent combination for use in the method |
| US4241179A (en) * | 1978-08-14 | 1980-12-23 | Coulter Electronics, Inc. | Method for determining a transaminase in a biological fluid and reagent combination for use in the method |
-
1979
- 1979-04-04 DE DE2913553A patent/DE2913553C2/de not_active Expired
-
1980
- 1980-02-20 DE DE8080100841T patent/DE3064075D1/de not_active Expired
- 1980-02-20 EP EP80100841A patent/EP0016947B1/de not_active Expired
- 1980-02-20 AT AT80100841T patent/ATE4126T1/de not_active IP Right Cessation
- 1980-03-11 CA CA000347407A patent/CA1152871A/en not_active Expired
- 1980-03-24 AU AU56779/80A patent/AU515851B2/en not_active Expired
- 1980-03-25 US US06/133,722 patent/US4517287A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-04-01 FI FI801025A patent/FI70727C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-04-02 YU YU917/80A patent/YU44100B/xx unknown
- 1980-04-02 HU HU8080795A patent/HU181089B/hu not_active IP Right Cessation
- 1980-04-02 DD DD80220176A patent/DD150256A5/de not_active IP Right Cessation
- 1980-04-03 CS CS802326A patent/CS228127B2/cs unknown
- 1980-04-03 JP JP4343980A patent/JPS55135599A/ja active Granted
- 1980-04-03 CS CS817834A patent/CS244665B2/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU181089B (en) | 1983-05-30 |
| AU515851B2 (en) | 1981-05-07 |
| AU5677980A (en) | 1980-10-09 |
| DE2913553B1 (de) | 1980-10-09 |
| EP0016947B1 (de) | 1983-07-13 |
| CA1152871A (en) | 1983-08-30 |
| ATE4126T1 (de) | 1983-07-15 |
| YU44100B (en) | 1990-02-28 |
| FI801025A7 (fi) | 1980-10-05 |
| CS783481A2 (en) | 1985-09-17 |
| FI70727B (fi) | 1986-06-26 |
| US4517287A (en) | 1985-05-14 |
| DE2913553C2 (de) | 1981-09-17 |
| FI70727C (fi) | 1986-10-06 |
| JPS5646800B2 (cs) | 1981-11-05 |
| YU91780A (en) | 1984-04-30 |
| DE3064075D1 (en) | 1983-08-18 |
| CS244665B2 (en) | 1986-08-14 |
| EP0016947A1 (de) | 1980-10-15 |
| JPS55135599A (en) | 1980-10-22 |
| DD150256A5 (de) | 1981-08-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS228127B2 (en) | Reagencni cinidlo | |
| Bondar et al. | Evaluation of glucose-6-phosphate dehydrogenase from Leuconostoc mesenteroides in the hexokinase method for determining glucose in serum | |
| US4350762A (en) | Aminopyrine improved Trinder's reagent and dosing process for hydrogen peroxide from enzymatic oxidation of metabolic substrata with the same | |
| Matsubara et al. | Spectrophotometric determination of hydrogen peroxide with titanium 2-((5-bromopyridyl) azo)-5-(N-propyl-N-sulfopropylamino) phenol reagent and its application to the determination of serum glucose using glucose oxidase | |
| JPH0577399B2 (cs) | ||
| Noma et al. | Polarographic method for rapid microdetermination of cholesterol with cholesterol esterase and cholesterol oxidase. | |
| FI57782C (fi) | Foerfarande och reagens foer enzymkinetisk koncentrationsbestaemning hos ett substrat | |
| EP0575515B1 (en) | Stabilization of enzyme containing reagent composition for determination of an analyte | |
| EP0116307B1 (en) | Composition, analytical element and method for the quantification of creatine kinase | |
| US6309852B1 (en) | Method and reagent for quantitative determination of 1,5-anhydroglucitol | |
| EP0036563B1 (en) | Bilirubin-resistant composition for the determination of cholesterol, test device containing the composition and method of making the test device | |
| CS199692B2 (en) | Method of photometric determination of hydrogen peroxides | |
| US5962248A (en) | Quantitative determination method for chloride ions | |
| US4695539A (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| CN112255219A (zh) | 一种1,5-脱水山梨醇的测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
| EP0586397B1 (en) | Improved method and reagent for determination of an analyte | |
| JP4022799B2 (ja) | 電解質測定用試薬組成物 | |
| CS227331B2 (en) | Method of glycerol determination | |
| EP0486997B1 (en) | Reagent for calcium ion level determination | |
| JPS60210998A (ja) | 無機リン酸塩の酵素学的測定用試験組成物、試験具及び試験方法 | |
| US7407774B2 (en) | Method for reducing influence of hemoglobin with albumin in an assay | |
| JPS59159798A (ja) | 生体体液成分の測定法 | |
| JP2643205B2 (ja) | 高感度比色定量法 | |
| JPH07303497A (ja) | 生体成分の測定方法および測定用試薬組成物 | |
| JP2003274996A (ja) | 夾雑物質による影響回避方法 |