CS216583B1 - Způsob dělení optických isomerů D,L-S-benzylpenicilaminu - Google Patents

Abstract

Pro dělení enantiomerů S-benzylpenicilaminu lze s výhodou použít nerozpustné formy enzymu penicilin-amidohydrolasy, např. enzym zakotvený na buňkách B.megaterinium nebo pomocí navzájem vázaných buněk E.coli'majících zachovanou penicilin-amidohydrolasovou aktivitu. Podstata tohoto způsobu dělení je v tom, že se DjL-N-fenylacetyl-S-benzylpenicilamin nechá resgovst s nerozpustnou formou penicilin-amidohydrolasy ve vodné suspenzi při pH 6 až 8 s vzniklá směs L-S-benzyppenicilaminu a D-N-fenylacetyl-S-benzylpenicyl* aminu se rozdělí známým způsobem.

Description

Předmětem vynálezu je způsob děleni isomerů D,L-S-benzylpenicilaminu, tj.β,4-dimethyl-S-benzylcysteinu pomoci nerozpustných forem penicilin-emidohydrolaay.

Bylo prokázáno, že u D,L-N-fenylacetyl-S-benzylpenicilaminu lze selektivně odštěpit fenylacetylovou ekupinu pouze z L-formy inkubaci a penicilin-aminohydrolasou (čel. a.o. 209 633).

Dále bylo zjištěno, že pro děleni enantiomerů S-benzyl-penicilsminu lze e výhodou použit nerozpustných forem tohoto enzymu, např. enzymem zakotveným na buňkách B.megaterinium (čel. a.o. 208931) nebo pomocí navzájem vázaných buněk E. coli, majících zachovanou penicilin-amidohydrolasovou aktivitu (čel. a.oe 203607). Obě tyto modifikaae umožňovaly rychlou regeneraci a opětné použiti enzymu.

Podetatou tohoto způsobu dělaní tedy je, že ae D,L-N-fenylacetyl-S-bénzylpenicilamin nechá reagovat a nerozpustnou formou penicilin-aminohydrolaay ve vodné suspenzi při pH 6 až 8 a vzniklá směs L-S-benzylpenicilaminu a D-N-fenylacetyl-S-benzylpenicilaminu ae rozdělí známým způsobem.

Způsob dělení racemického S-benzylpenicilaminu je dále objasněn v příkladech provedení.

Příklad 1

K roztoku N-fenylacetyl-S-benzyl-D,L-penicilaminu (21,5 g; příprava viz The Chemiatry of PeniciBin. Princeton Univ.Presa, Princeton 1949, str.472) ve směsi voda (176 ml)., 1 mol/

1-NaOH (63 ml) a 0,2 mol/l Na-fosfátového pufru o pH 7,5 (50 ml) byly přidány modifikované buňky E. coli a pěnicilin-amidohydrolaaovou aktivitou (15 g; aktivita enzymatického preparátu:

g vlhké hmoty uvolnil z penicilinu G 77 /umol/1 6-aminopenicilanové kyseliny za 1 min).

Výsledné pH suspenze bylo 7,3. Směs byla míchána magnetickým míchadlem při 37 °C a průběh reakce byl sledován pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Po 120 bod inkubace byly buňky odděleny filtrací přes plachetku, promyty vodou a použity k další reekci. Dále byl roztok zpracován stejným způsobem, jako je uvedeno v čsl. a.o. 209633. Bylo získáno 3,1 g (43

S-benzyl-L-penicilaminu o b.t. 190-192 °C, $ + 96,4° (c 0,2 1 mol/1-ďCl). Pro C^gH^NOgS (239.3) vypočteno: 60,22 % C, 7,16 % H, 5,85 % N; nalezeno 60,35 t C, 7,22 % H, 5,78 % N.

Postup byl opakován se stejnou frakcí buněk. Bylo získáno 3,4 g (47 %) produktu o b.t. 191-193 °C, + 97.6° (o 0,2, 1M-HC1); nelezeno 60,27 % C, 7,17 % H, 5,85 % N.

Příklad 2

K roztoku N-fenylacetyl-S-benzyl-D,L-penicilaminu (0,5 g) ve směsi voda (2,5 ml) a 1 mol/

1-NaOH (1,5 ml), jehož pH bylo upraveno na hodnotu 7 přidáním O,21í-NaH₂PO₄ (0,5 ml), byla přidána suspenze enzymu zakotveného na buňkách B.megaterinium (obsahující 3,7 ml vlastní hmoty). Reakce probíhala při 37 °C 24 hod, zakotvený enzym byl odfiltrován a roztok byl zpracován jako v příkladu

1. Bylo získáno 122 mg (73 %) S-benzyl-L-penicilaminu o b.t.187-190 °C a /β47ρ+93,2°(ο 0,2 1 mol/l HC1; nelezeno: 69,82 % C, 7,19 % H, 5,89 % N.

Claims (1)

1. Způsob dělení optických isomerů D,L-S-benzylpenicilaminu, vyznačený tím, že se D,L-N-fenylacetyl-S-benzylpenicilamin nechá reagovat a nerozpustnou formou penicilin-emidohydrolaay ve vodné suspenzi při pH 6 až 8 a vznilé směs L-S-benzylpenicilaminu a D-N-fenylacetyl-S-benzylpenicilaminu se rozdělí známým způsobem.