CS212776B2 - Method of preparing a-30912 antibiotics - Google Patents
Method of preparing a-30912 antibiotics Download PDFInfo
- Publication number
- CS212776B2 CS212776B2 CS766294A CS629476A CS212776B2 CS 212776 B2 CS212776 B2 CS 212776B2 CS 766294 A CS766294 A CS 766294A CS 629476 A CS629476 A CS 629476A CS 212776 B2 CS212776 B2 CS 212776B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- antibiotic
- mixture
- factor
- methanol
- diethyl ether
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 title description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 title 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 88
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 63
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 241000133685 Aspergillus rugulosus Species 0.000 claims abstract description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 129
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 81
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 17
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 15
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 14
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 12
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 11
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 8
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 7
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims 6
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims 2
- 102000003712 Complement factor B Human genes 0.000 claims 1
- 108090000056 Complement factor B Proteins 0.000 claims 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 claims 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 13
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 abstract 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 abstract 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 abstract 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 abstract 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 12
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 10
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 9
- FAUOJMHVEYMQQG-HVYQDZECSA-N echinocandin B Chemical compound C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N3C[C@H](C)[C@H](O)[C@H]3C(=O)N[C@H](O)[C@H](O)C[C@@H](C(N[C@H](C(=O)N3C[C@H](O)C[C@H]3C(=O)N2)[C@@H](C)O)=O)NC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC)[C@@H](C)O)=CC=C(O)C=C1 FAUOJMHVEYMQQG-HVYQDZECSA-N 0.000 description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 7
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 4
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 4
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 4
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 4
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KYGRCGGBECLWMH-UHFFFAOYSA-N Sterigmatocystin Natural products COc1cc2OC3C=COC3c2c4Oc5cccc(O)c5C(=O)c14 KYGRCGGBECLWMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UTSVPXMQSFGQTM-UHFFFAOYSA-N Sterigmatrocystin Natural products O1C2=CC=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(C1C=COC1O1)=C1C=C2OC UTSVPXMQSFGQTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000223238 Trichophyton Species 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012474 bioautography Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- RHGQIWVTIHZRLI-UHFFFAOYSA-N dihydrosterigmatocystin Natural products O1C2=CC=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(C1CCOC1O1)=C1C=C2OC RHGQIWVTIHZRLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- UTSVPXMQSFGQTM-DCXZOGHSSA-N sterigmatocystin Chemical compound O1C2=CC=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C([C@@H]1C=CO[C@@H]1O1)=C1C=C2OC UTSVPXMQSFGQTM-DCXZOGHSSA-N 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- -1 8 17% Inorganic materials 0.000 description 2
- 241001480043 Arthrodermataceae Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 241001045770 Trichophyton mentagrophytes Species 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000037304 dermatophytes Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 244000223760 Cinnamomum zeylanicum Species 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 240000006927 Foeniculum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000004204 Foeniculum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 244000168141 Geotrichum candidum Species 0.000 description 1
- 235000017388 Geotrichum candidum Nutrition 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 241001221585 Keratinomyces Species 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000995680 Nannizzia Species 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241001609979 Trichophyton quinckeanum Species 0.000 description 1
- 241000223229 Trichophyton rubrum Species 0.000 description 1
- 241001609978 Trichophyton terrestre Species 0.000 description 1
- 241001480048 Trichophyton tonsurans Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 1
- 235000017803 cinnamon Nutrition 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000018842 conidium formation Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000012225 czapek media Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 108010062092 echinocandin B Proteins 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000004922 lacquer Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 210000003339 pole cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000012808 vapor phase Substances 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
- C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
- C07K7/56—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation not occurring through 2,4-diamino-butanoic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu výroby antibiotika A-30912, které sestává alespoň ze 7 jednotlivých faktorů А, В, C, D, E, F a G. Antibiotikum A-30912 ve formě směsi těchto faktorů je možno získat tak, že se pěstuje nový kmen mikroorganismu Aspergillus rugulosus NRRL 8113.
Termín „antibotikum ve formě směsi“ se užívá к označení směsi jednotlivých faktorů. Je totiž zřejmé, že poměr těchto faktorů ve směsi závisí na podmínkách fermentace.
Jednotlivé antibiotické faktory antibiotika ve formě směsi jsou v průběhu přihlášky označovány jako antibiotikum A-30912, faktory А, В, C, D, E, F a G.
Předmětem vynálezu je tedy způsob výroby nového antibiotika A-30912 ve formě směsi a faktorů В, C, D, E, F a G.
Předmětem vynálezu je rovněž způsob výroby a izolace antibiotika A-30912 ve formě směsi, která obsahuje faktory А, В, C, D, E, F a G a izolaci všech těchto faktorů А, В, C, D, E, F a G.
Předmětem vynálezu je způsob výroby antibiotika A-30912 ve formě směsi s obsahem faktorů А, В, C, D, E, F a G, vyznačující se tím, že se kultivuje Aspergillus rugulosus NRRL· 8113 v živném prostředí s obsahem využitelných zdrojů uhlíku, dusíku a anorganických solích v submerzních aerobních podmínkách při teplotě 30 až 43 ЭС po dobu 2 nebo více dnů do nahromadění antibiotika a antibiotikum A-30912 ve formě směsi se izoluje z živného prostředí filtrací a na základě selektivní rozpustnosti, a jednotlivé faktory se oddělí ze směsi chromátograficky a popřípadě na podkladě selektivní rozpustnosti.
Známá sloučenina sterigmatocysti je rovněž produkována kmenem Aspergillus rugulosus NRRL 8113. Tato látka se extrahuje jednotlivě nepolárními organickými rozpouštědly nebo společně s antibiotikem A-30912 ve formě směsi polárním organickým rozpouštědlem. V tomto případě se pak antibiotikum A-30912 oddělí od sterigmatocystinu zahuštěním extrakčního rozpouštědla, přidáním koncentrátu к přebytků nepolárního organického rozpouštědla jako diethyletheru a oddělením antibiotika A-30912 ve formě sraženiny. Sterigmatocystin zůstává v tomto případě ve filtrátu. Oddělené antibiotikum A-30912 ve formě směsi se dále čistí sloupcovou chromatografií.
Antibiotikum A-30912 ve formě směsi a jeho jednotlivé faktory jsou účinné proti houbám.
Absorpční spektra jednotlivých faktorů antibiotika v infračerveném světle v peletách s bromidem draselným jsou· znázorněny na následujících výkresech:
obr. 1 — antibiotikum A-30912 faktorA obr. 2 — antibiotikum A-30912 faktorD obr. 3 — antibiotikum A-30912 faktorВ obr. 4 — antibiotikum· A-30912 faktorC.
Antibiotikum A-30912, faktor A
A-30912 faktor A je podobný polypeptidovému antibiotiku Echínocandinu B, které bylo popsáno v současné době v publikaci F. Benz a další, Helv. Chim. Acta 57, 2459 až 2477 (1974).
Antibiotikum A-30912 faktor A je bílá amorfní pevná látka. Při elementární analýze této látky byly zjištěny následující údaje: uhlík 56,52 %, vodík 7,29 %, dusík 8,68 % a kyslík 27,09 %.
Přibližný empirický vzorec, navrhovaný pro faktor A je
С51 —53U79.-83N7O17— ]9 .
V tomto rozmezí odpovídá vzhledem к výsledkům elementární analýzy pro faktor A zvláště dobře empirický vzorec
C52H81N7O18. H2O (vypočítáno: 56,24 % C, 7,54 % H, 8,84 % N a 27,39 % O).
Molekulová hmotnost antibiotika A-30912 faktoru A je přibližně 1100, jak bylo stanoveno hmotovou spektrometrií a titrací.
Absorpční spektrum tohoto faktoru v infračerveném světle v peletách s bromidem draselným je znázorněno na obr. 1. Byla zjištěna následující charakteristická absorpční maxima: 2,97 (silné), 3,39 (střední), 3,47 (slabé), 5,99 (silné), 6,10 (silné), 6,49 (střední), 6,56 (střední), 6,90 (střední) ,8,00 (slabé), 9,13 (slabé) a 11,77 (slabé) mikronů. ' ..··-· • Absorpční spektra antibiotika A-30912 faktoru A v ultrafialovém světle v neutrálním i okyseleném methanólu mají absorpční maxima při 225 nni (ε 18 000), 275 nm (a 3000) a 284 nm (hrb ε 16 000) a 290 nm (ε 3000) a také koncovou absorpci.
Spektrum v nukleární magnetické resonanci 13C faktoru A v perdeuteromethanolu mú následující vlastnosti:
δ 176,1, 174,3, 173,4, 172,7, 172,4, 169,8, 158,4, 132-8, 130,9, 129,6, 129,0, 116,2, 77,0, 75,7, 74,4, 71,3, 70,9, 69,6, 68,3, 62,4,58,7,
56,9·, 52,9, 39,0, 38,5, 36,8, 35,2, 33,9,32,9,
32,6, 30,7, 30,4, 30,2, 28,2, 27,0, 26,5,23,6,
20,1, 19,6, 14,4 a 11,3 ppm.
Antibiotikum A-30912 faktor A má následující specifickou otáčivost: [a]D 25 —44° (c 0,5, СНзОН) [a]36525 —156° (c 0,5, СНзОН)
Elektrometrická titrace antibiotika A-30912 faktoru A v 66% vodném dimethylformamidu prokazuje přítomnost titrovatelné skupiny s hodnotou pKa 12,8 při počátečním pH 6,9.
Při analýze aminokyselin faktoru A byla po hydrolýze prokázána přítomnost threoninu, hydroxyprolinu a tří dalších, dosud neidentifikovaných aminokyselin.
Antibiotikum A-30912 faktor A je rozpustný v různých organických rozpouštědlech jako jsou methanol, ethanol, dimethylformamid, dlmethylsulfoxid a ethylacetát. Je nerozpustný v nepolárních organických rozpouštědlech jako je diethylether a pétrolether. Je rozpustný ve vodných roztocích, zvláště při pH vyšším než 7,0.
Antibiotikum A-30912 faktor D
Antibiotikum A-30912 faktor D je bílá amorfní pevná látka. Při elementární analýze faktoru D bylo získáno následující slo- * žení: uhlík 56,37 %, vodík 8, 17 %, dusík 8,54 %, kyslík 26,92 o/o (vypočítáno jako rozdíl).
Přibližná molekulová hmotnost faktoru D ** je 1100 podle výsledků analýzy aminokyselin, to znamená, že toto antibiotikum je strukturní, velmi příbuzné faktoru A.
Spektrum· v infračerčeném světle pro· faktor D v peletách s bromidem draselným je znázorněno na obr. 2. Bylo možnoi pozorovat následující charakteristická absorpční maxima: 2,98 (silné), 3,31 (slabé), 3,36 (hrb), 3,40 (střední), 3,48 (slabé), 5,76 (slabé), 6,01 (silné), 6,10 (hrb), 6,49 (střední), 6,57 (střední), 6,90 .(střední), 7,81 (slabé), 8,07 (slabé) a 9,16 (slabé) mikronů.
Absorpční spektra antibiotika A-30912 faktoru D v ultrafialovém· světle v neutrálním nebo kyselém methanólu mají absorpční maxima při 225 nm (ε 18 000) a 275 nm (ε 2500). Absorpční spektrum faktoru D v Ultrafialovém světle v zásaditém methanolu má absorpční maxima při 240 nm (ε 11 000) а 290 nm (ε 3000).
Faktor D má následující specifickou otáčivost:
[a],,25 —50° (c 0,34, СНзОН).
Analýzou aminokyselin faktoru D po hydrolýze byla prokázána přítomnost thréoninUj· hydroxyprolinu, histidinu a tří dalších neidentifikovaných aminokyselin. Jedna z neidentifikovaných aminokyselin faktoru D je totožná s neidentifikovanou aminokyselinou faktoru A.
Faktor D je rozpustný v různých organických rozpouštědlech, jako jsou methanol, ethanol, dimethylformamid, dimethylsulfoxid a ethylacetát. Je nerozpustný v nepolárních organických rozpouštědlech jako diethyletheru a petroletheru. Je rozpustný ve vodných roztocích, zvláště při pH vyšším než 7,0.
Antibiotikum A-30912 faktor В
Antibiotikum A-30912 faktor В je bílá amorfní pevná látka. Elementární analýzou.
faktoru В bylo získáno přibližné percentuální složení: uhlík 57,36 %, vodík 5,92 °/o, dusík 8,75 % a kyslík 26,19 %.
Absorpční spektrum faktoru В v infračerveném světle v peletách s bromidem draselným je znázorněno na obr. 3. Je možno pozorovat následující charakteristická absorpční maxima, 2,99, 3,41, 3,49, 6,06, 6,15, 6,54, 6,61, 6,94, 7,62, 8,07, 9,26 a 9,39 mikronů.
Absorpční spektra faktoru В v ultrafialovém světle v neutrálním kyselém .methanolu mají absorpční maxima při 223 nm (hrb, ε 16 000) a 278 nm; (ε 2400). Spektrum antibiotika A-30912 faktoru В v ultrafialovém světle v zásaditém methanolu má absorpční maxima při 242 nm (ε 13 900) a 292 nm (ε 2800).
Faktor В má následující specifickou otáčivost:
[«]d25 — 47° (c 0,5, СНзОН] [«]38525 —170° (c 0,5, СНзОН).
Elektrometrickou titracf faktoru В v 66% vodném dimethylformamidu byla prokázána přítomnost titrovatelné skupiny s hodnotou pKa 13,0 při počátečním pH 7,91.
Při analýze aminokyselin faktoru В byla po kyselé hydrolýze prokázána přítomnost threoninu, hydroxyprolinu a několika dosud neidentifikovaných aminokyselin.
Faktor В je rozpustný v celé řadě organických rozpouštědel jako jsou methanol, ethanol, dimethylformamid, dimethylsulfoxid a ethylacetát. Je nerozpustný v nepolárních organických rozpouštědlech, například diethyletheru a petroletheru. Faktor В je také rozpustný ve vodných roztocích, a to zejména při pH vyšším než 7,0.
Antibiotikum A-30912 faktor C
Antibiotikum A-30912 faktor C je bílá amorfní pevná látka. Elementární analýzou faktoru C bylo získáno následující percentuální složení: uhlík 56,76 %, vodík 7,88 %, dusík 10,61 % a kyslík 25,09 %.
Absorpční spektrum faktoru C v infračerveném světle s bromidem, draselným je znázorněno na obr. 4. Je možno· pozorovat následující charakteristická absorpční maxima: 2,98, 3,39, 3,43, 3,51, 6,01, 6,12, 6,47, 6,90, 7,04, 7,22, 7,38, 8,00, 8,30 a 9,13 mikronů.
Absorpční spektrum faktoru C v ultrafialovém světle v neutrálním i kyselém methanolu má absorpční maxima při 223 nm (hrb, ε 7300) a 275 nm (ε 1350). Absorpční spektrum faktoru C v zásaditém methanolu má absorpční maxima při 240 nm· (ε 12 400) a 2-90 nm (ε 5200).
Faktor C má následující specifickou otáčivost:
[a]o25 — 33° (c 0,5, СНзОН) [«]36525 -119° (C 0,5, СНзОН].
Elektrometrickou titrací faktoru C v 66% vodném dimethylformamidu je možno prokázat přítomnost titrovatelné skupiny s hodnotou pKa 13,08 při počátečním pH 7,93.
Při analýze aminokyselin po standardní kyselé hydrolýze bylo možno prokázat ve faktoru C přítomnost threoninu, hydroxyprolinu a několika dosud neidentifikovaných aminokyselin.
Faktor C je rozpustný v různých organických rozpouštědlech, jako je methanol, ethainol, dimethylformamid, dimethylsulfoxid a ethylacetát. Je nerozpustný v nepolárních organických rozpouštědlech, například diethyletheru a petroletheru. Faktor C je rozpustný také ve vodných roztocích, zejména při pH vyšším než 7,0.
Sedm jednotlivých faktorů antibiotika A-30912 ve formě směsi je možno od sebe oddělit a identifikovat chro-matcgrafií na tenké vrstvě; silikagel je nejvýhodnějším adsorpčním činidlem. Výhodným systémem rozpouštědel je směs benzenu a methanolu v objemovém poměru 7:3.
Hodnoty Rf faktorů A až G antibiotika A-30912 při použití tenké vrstvy silikagelu a směsi benzenu a methanolu v objemovém poměru 7:3 při bioautografii pomocí Candida albicans jsou uvedeny v tabulce I.
TABULKA I
Antibiotikum A-30912 faktor Hodnota Rf
A0,35
В0,45
C0,54
D0,59
E0,27
F0,18
G0,13
Hodnoty Rf faktoru A při chromatografii na papíře a při použití různých systémů rozpouštědel po bioautografii s použitím Candida albicans jako detekčního organismu jsou uvedeny v tabulce II.
| A-30912 faktor A hodnoty Rf | TABULKA II Systém rozpouštědel |
| 0,76 | butanol nasycený vodou |
| 0,69 | butanol nasycený vodou s dvěma % kyseliny p-toluensulfono.vé |
| 0,75 | methanol a 0,1 N kyselina chlorovodíková v poměru 3:1 |
| 0,17 | butanol, ethanol a voda v poměru 13,5:15:150 |
| -0,78 | methanol, 0,05 M citronan sodný o pH 7,5 v poměru 7:3, papír byl nasycen pufrem 0,05 M citronanu sodného o pH 5,7. |
Organismus, který produkuje antibiotikum A-30912 ve formě směsi byl izolován ze vzorku půdy ve zříceninách Pompeii v Itálii. Tento organismus byl klasifikován jako kmen Aspergillus rugolosus Thom a Raper, náležející do skupiny Aspergillus nidulans. Tato· klasifikace je založena na popisu kmene v publikaci K. B. Raper a D. I. Fennel v „The Genus Aspergillus“, The Williams aind Wilkins Com,pany, Baltimore, Md., 1965.
Názvy barev byly užity v souhlase s ISCC-NBS (K. L. Kelly a D. B. Judd, „The ISCC-NBS Method of Desígnating Colo-r and a Dictionary of Color Names,“ U. S. Dept. of Commerce, Circ. 553, Washington, D. C., 1955). Maerzovy a Paulovy barevné bloky jsou popsány v publikaci A. Maer.z a M. R. Paul v „Dictionary of Color“, McGraw-Hill Book Company, New York, N. Y., 1950.
Mikroorganismus byl pěstován při teplotě 25 °C, není-li uvedeno jinak.
Vlastnosti A. rugolosus NRRL 8113 v kultuře Czapkův agar
Kultura roste pomalu a dosahuje průměru 1,5 až 2,0 cm po· 15 dnech při teplotě 25 °C. Povrch kolonie je konvexní a postupně se zvrásňuje nejprve ve středu a pak při okrajích. Periferie mycelia je v šířce 2 mm sinusoidně zvlněna a obsahuje v hloubce submerzní bezbarvé hyfy. Na okraji hyf se tvoří růžovohnědě zbarvená tekutina. Mezi 7. až 14. dnem se tvoří v agaru kolem· kolonie slabě purpurový rozpustný pigment. Tento pigment pronikne celou kolonií po 15 dnech.
Po 5 dnech se mění povrch kolonie z barvy bílé do špinavě bílé a spodní strana kolonie je ve středu hnědavě oranžová a na periferii hnědavá až hnědavě purpurová. Po 10 dnech je kolonie slabě žlutorůžová (ISCC-NBS 29 a Maerz a Paul ll-A-7). Po· 14 dnech je kolonie světle ' šedavě červená (ISCC-NBS ' 18 Maerz a Paul 4-G-7). Okraj kolonie je zvrásnělý a intenzívně žlutý (ISCC-NBS a Maerz a Paul 10-L-5) v důsledku tvorby konidií. Na různých místech' na povrchu a podél okraje kolonie se začínají objevovat hrozny špinavě žlutých Hullových buněk. Při stárnutí kolonie se barva těchto· hroznů mění na žlutavě zelenou. Po 3 týdnech se objevuje na okraji kolonie oranžově purpurové zbarvení a zadní strana kolonie se stává slabě konkávní. Jak kolonie zraje, postupně se zplošťuje a její zadní strana je zvrásněna. Po. 10 dnech je zadní strana kolonie světle hnědá · (ISCC-NBS 57 a Maerz a Paul 5-A-10). Po 15 dnech je zadní strana kolonie šedavě červená. (ISCC-NBS 19 a Maerz a Paul 6-J-3).
Konidie jsou rozmístěny na konidioforech po povrchu kolonie, někdy se objevují jako skvrny v pruhu na okraji kolonie. Hlavy konidií jsou ze začátku kulovité, podupem doby mají válcovitý tvar. Rozměr hlav konidií je 70 až 80 μ průměru, hlavy o tvaru válce mohou být až 140 μ dlouhé · a 70 μ široké.
Conidie jsou globózní až subglobózní, zvrásněné a zelenavě zlaté. Jejich rozměr je 2,8 μ až 3,9 μ, v průměru 3,2 μ.
Sterigmata jsou rozvětvena a bezbarvá. Primární sterigmata jsou dlouhá 4,7 až 11,0 μ, v průměru 7,9 μ. V nejširším bodu je šířka 2,4 μ a sterigma se zužuje na 1,6 μ. Sekundární sterigmata se objevují jednotlivě nebo, v párech, vychází z primárních sterigmat a mají lahvovitý tvar. V nejširším bodu měří 3,0 μ a k vrcholu se zužují až na 0,4 μ a mají válcovitý tvar. Tento válcovitý konec je dlouhý 1,2 μ, celková délka je 5,5 až 12,6, v průměru 9,2 μ.
Inkluze jsou klobózní, subglobózní nebo polokulovité a jsou u vrcholu zploštělé a postupem času nabývají hnědavé zbarvení. Měří 7,4 až 11,2, v průměru 9,4 μ.
Konidlofory jsou hladké, poměrně silnostěnné, nejprve téměř průhledné a v průběhu doby se barví skořicově hnědě. Jsou na jedné straně poněkud širší a zužují se směrem dolů. Průměrná šíře je 5,9 μ. Délka konidioforů je 47,7 až 160,6, průměrně 106 μ. Tyto útvary vycházejí ze submerzních hyf nebo· ze strany vzdušných hyf.
Askogenní stav se dostavuje do 20 dnů. Malé žluté hrozny Hullových buněk je pak možno najít po celém myceliu. Tyto hrozny sestávají z Hullových buněk, do nichž jsou zavzaty jedno nebo větší množství cleistothecií. Hůllovy buňky jsou globózní, subglobózní, vejčité až protažené, silnostěnné a téměř průhledné. Kulovité buňky mají v průměru 18 až 24, průměrně 21,8 μ.
Kleistothecie jsou globózní a subglobózní, silnostěnné, poměrně tuhé a fibrózní. Ze začátku jsou bezbarvé, · pak se barví ' červenopurpurově a postupně dále ztmavnou. Měří 165 až 470, průměrně 275 μ.
Agar se sladovým extraktem
Kolonie, pěstované při teplotě 25 °C rychle rostou a dosahují · v průměru ·4 až 5 cm po· 10 až 12 dnech. Šedobílé kolonie mění' svou barvu postupně v průběhu 4 dnů na olivově zelenou. (ISCC-NBS 90 a Maerz a Paul 23-E-6). Okraj je sinusovitý nebo slabě laločnatý a sestává z krátkých vzdušných hyf. Malé žluté hrozny Hullových buněk se nacházejí hlavně na okraji a leží na povrchu agaru. Po 20 dnech pokrývají téměř celý povrch. Zadní strana kolonie je šedavě žlutá (ISCC-NBS 90 a Maerz a Paul 11-B-l).
Askogenní stav se 'objevuje po 15 dnech. Malé žlutavé hrozny je pak možno najít v celém myceliu. Sestávají z Hullových buněk, do nichž jsou zavzaty Cleistothecie. Hůllovy buňky přitom přerůstají přes· hlavy konidií a jsou globózní až subglobózní nebo oválné až protáhlého tvaru, silnostěnné a téměř průhledné. Kulovité buňky mají rozměr 18 až 24, v průměru 21,8 μ.
Cleistothecie jsou globózní až subglobózní a mají tmavě červenavě hnědou barvu.
10
Jejich průměr je 389 až 700, v průměru 506 μ.
Asci jsou fragilní, hyalinní a subglobózní až oválné. Subglobózní asci mají rozměr 8,7 až 11,9, průměrně 10,3 μ, oválné 10,3 až
14,2 x 8,7 až 10,3, průměrně 12,2 x 9,1 μ.
Askopory jsou červeně oranžové, zvrásněné s dvěma rovnoběžnými ekvatoriálními hřebeny, které jsou široké až 0,8 μ a nepřerušované. Při pohledu podle dlouhé osy mají askospcry čočkovitý tvar. V případě, ' že se hřebeny nacházejí na okraji, má askospora tvar kulovitý a v tomto· případě má průměr 4,9 až 6,3, průměrně 5,4 μ.
Aspergillus rugulosus, který produkuje antibiotikum A-30912 se liší dvěma svými vlastnostmi od A. rugulosus, tak jak byl popsán ve svrchu uvedené citaci Raperem a Fennelem. Kmen, který produkuje antibiotikum A-30912 má větší hlavu konidií a askospory.
Kultura Aspergillus rugulosus pro· produkci antibiotika A-30912 ve formě směsi byla uložena trvale v Northern Regional Research Laboratory, U. S. Department of Agriculture, Abricultural Research Service, Peoria, Illinois 61 604, odkud je· možno ji získat pod číslem· NRRL 8113.
Kmen Aspergillus rugulosus NRRL 8113 je možno pěstovat na celé řadě živných prostředí. Pro levnost, optimální výtěžek a snadné provádění fermentace a izolace· jsou však výhodnější určitá prostředí. Výhodným- zdrojem uhlíku při fermentaci ve· velkém je například glukóza, přestože je možno užít i melasu, škrob, mléčný cukr, sacharózu, maltózu, glycerol a další zdroje uhlíku. Výhodným zdrojem dusíku je enzymaticky hydrolyzovaný kasein a rozpustný pepton z masa, přestože je možno· užít i lihovarské výpalky, glutamát sodný apod. Živné prostředí má obsahovat také anorganické soli. Užívá se běžných rozpustných solí, sodíku, hořčíku, vápníku, amonných solí, chloridů, uhličitanů, síranů, dusičnanů apod.
Do· živného prostředí je nutno dodat také stopové prvky, nutné pro· růst a vývoj mikroorganismů. Tyto stopové prvky jsou obvykle přítomny jako znečištěniny ostatních složek živného prostředí v množství dostatečném· pro· potřeby . mikroorganismů.
Do živného prostředí je možno přidat malé množství, například 0,2 ml/litr protipěnivého činidla, například polypropylenglykolu, zejména při fermentaci ve velkém, kde pěna· vyvolává obtíže.
Pro výrobu velkých množství antibiotika A-30912 ve formě směsi je nejvýhodnější submerzní aerobní fermentace ve velkých tancích. Malá množství tohoto antibiotika je možno získat pěstováním v trepacích lahvích. Protože stadium lak, kterého se běžně užívá k naočkování obsahuje obvykle spóry, je v tomto· případě výhodnější užít vegetativní očkovací materiál. Tento· materiál se získává tak, že se malý objem· živného prostředí naočkuje spórami nebo úlomky mycelia, čímž se získá čerstvá, aktivně rostoucí kultura mikroorganismu. Živné prostředí užívané pro· růst vegetativního očkovacího· materiálu může být totéž jako živné prostředí pro fermentaci ve větším měřítku, je však možno užít i jiných živných prostředí. Získaný materiál se pak přenese do větší fermentační nádoby. Uvedený kmen je možno pěstovat při teplotách vyšších· než 20 °C, obvykle 20 až 43 ac. S výhodou se organismus pěstuje při teplotách 25 až 30 °C, optimální produkce antibiotika· A-30912 ve formě směsi je možno dosáhnout při teplotě 25 °C.
Jak je obvyklé při aerobní submerzní kultuře, nechá se živným prostředím probublávat sterilní vzduch. K dosažení dostatečného množství antibiotika v pokud možno krátké době se s výhodou · užívá 0,4 objemu vzduchu na 1 objem živnéhol prostředí za minutu.
Produkce antibiotika A-30912 ve formě směsi se v průběhu fermentace sleduje ze vzorků alkoholových extraktů nebo· ze vzorků živného prostředí, jejichž antibiotická účinnost se určuje. K tomuto účelu se užije organismu, citlivého· na uvedené antibiotikum. Výhodným mikroorganismem pro toto použití je například Candida albicans. Etologický pokus se obvykle provádí na agarových plotnách s obsahem· této kvasinky při použití papírových kotoučů.
Rozsah antibiotické účinnosti je· .obvykle zřejmý druhý den fermentace. K maximální produkci antibiotika obvykle dochází mezi
3. až 6. dnem.
Antibiotikum A-30912 ve formě· směsi a jeho faktory jsou účinné proti houbám. Tuto účinnost je možno prokázat . pokusy in vitro při použití faktorů A a D antibiotika A-30912. Výsledky těchto pokusů jsou uvedeny v tabulce III. Účinnost proti houbám byla měřena běžným· způsobem, při němž byly papírové kotouče o průměru 6 mm namočeny do roztoku zkoumané látky· a uloženy na agarovou plotnu, která obsahovala příslušný mikroorganismus. Výsledky jsou uvedeny jako minimální inhibiční koncentrace (MIC), tj. nejnižší koncentrace, při níž zkoumaná látka zbrzdila růst zkoumaného mikroorganismu.
TABULKA III
| Mikroorganismus | Minimální inhibiční koncentrace (^g/kotouč) Faktor A Faktor D | |
| Candida albicans | 0,625 | 0,5 |
| Trichophyton mentagrophytes | 0,078 | 0,07 |
Faktor A je velmi účinný in vitro proti obdobným způsobem jako svrchu jsou uvedermatofytům. Výsledky pokusů, provedené děny v tabulce IV.
TABULKA IV
Účinnost faktoru A proti dermatofytům
| Dermatofyt | Počet izolátů | MIC (^g/kotouč] |
| Trichophyton mentagrophytes | 13 | 1,25 až 0,03'9 |
| Trichophyton gallinae | 1 | >1,215 |
| Trichophyton, meginini | 1 | 0,0195 |
| Trichophyton quinckeanum | 1 | >1,25 |
| Trichophyton rubrum | 1 | <0,0098 |
| Trichophyton schoenceinii | 1 | 0,0195 |
| Trichophyton terrestre | 1 | 0,0195 |
| Trichophyton tonsurans | 9 | >1,25 až 0,156 |
| Microsporium gypseus | 5 | 0,156 až 0,038 |
| Microsporium audouinii | 4 | 1,25 až 0,156 |
| Microsporium canis | 6 | 1,25 až 0,0098 |
| Microsporium cookei | 2 | 1,25 až 0,0195 |
| Nannizzia incur.vata | 1 | 0,312 |
| Phalaphere jean salemi | 1 | >1,25 |
| Epidermatophyton fioccosum | 1 | 1,25 |
| Geotrichum candidum | 4 | > 1,25 až 0,156 |
| Keratinomyces ajellio | 1 | 0,156 |
Účinnost faktoru antibiotika A-30912 proti houbám byla dále prokázána pokusy in vivo. Tyto pokusy byly prováděny následujícím způsobem,: Tři dávky zkoumané látky byly podány myším, které byly infikovány Candida albicans 0, 4 a 24 hodin po infekci. Ochrana, kterou poskytuje zkoumaná látka je vyjádřena jako EDso, tj. dávka v mg/kg, která chrání 50 % pokusných myší. Pokus byl popsán v publikaci W. Wick a další, J. Bacteriol. 81, 233 až 235 (1961). Hodnota ED50 pro faktor A proti Candida albicans u myší byla 30 mg/kg při intraperitoneálním podání a 50 mg/kg při podkožním podání. ED50 pro faktor D proti Candida albicans u myší byla 33 mg/kg při podkožním podání.
Při intraperitoneálním ani podkožním podání faktoru A myším nebylo- možno pozorovat žádnou akutní toxicitu tohoto faktoru v dávce 100 mg/kg, podané dvakrát denně po dobu 3 dnů, celkem tedy 600 mg/kg. Rovněž nebylo možno pozorovat žádné známky akutní toxicity v případě, že faktor A byl podán intraperitoneálně myším v dávce 200 mg/kg třikrát denně, celkem; 600 mg/kg.
Faktor D nevyvolal žádné známky akutní toxicity v případě, že byl podán podkožně myším třikrát denně v dávce 14 mg/kg, celkem 42 mg/kg.
V případě podání proti houbám se faktory antibiotika A-30912 podávají parenterál ně a obvykle spolu s farmaceutickým nosičem' nebo ředidlem. Dávka těchto faktorů závisí na různých podmínkách, například na povaze a závažnosti infekce.
Vynález bude osvětlen následujícími příklady.
Příklad 1
A. Pěstování v třepacích lahvích
Byla připravena kultura Aspergillus regulosus NRRL 8113 a udržována na šikmém agaru v 18 zkumavkách po 150 ml, přičemž živné prostředí mělo následující složení:
| Složka | Množství (%) | / |
| dextrin | 1,0000 | |
| enzymatický hydrolyzát kaseinu* | 0,2000 | |
| extrakt z kvasnic | 0,1000 | |
| extrakt z hovězího masa | 0,1000 | |
| KC1 0, | 0,0200 | |
| MgSOi. 7№O | 0,0200 | |
| FeSOi.7НгО | 0,0004 | |
| voda | 98,5596 |
* N-Z-aminA, Sheffield Chemmal Co., Norwich, N. Y.
Šikmý agar oyl naočkován kulturou Aspergillus regulosus NRRL 8113 a inkubován 7 dní při teplotě 25 °C. Zralá kultura byla převrstvena hovězím sérem a snesena bakteriologickou kličkou k uvolnění sper. Polovina výsledné suspenze byla užita k naočkování 50 ml vegetativ.ního: živného prostředí následujícího; složení:
Složka Množství (%) sacharóza2,5 melasa3,6 kukuřičný výluh0,6 enzymatický hydrolyzát1,0 kaseinu*
K2HPO40,2 voda92,1 * N-Z-Case, Shef.fie.ld Chemical Co., Norwich, N. Y.
Naočkované vegetativní prostředí se inkubuje v Erlenmeyerově baňce se širokým hrdlem· a s obsahem 250 ml při teplotě 25 °C 24 hodin na rotační třepačce o rozkyvu 5 cm při 250 otáčkách za minutu.
Inkubované vegetativní prostředí je možno přímo užít k naočkování živného prostředí pro druhý stupeň. Toto· prostředí je také možno; skladovat pro pozdější použití udržování kultury v kapalném dusíku. Kultura se pro toto skladování v malých lahvičkách připraví následujícím· způsobem. Do· každé lahvičky se uloží 2 ml inkubovaného vegetativního živného prostředí a 2 ml roztoku glycerolu a laktózy následujícího; složení:
Složka Množství ('%)
| glycerol | 20 |
| laktóza | 10 |
| deionizovaná voda | 70 |
Tato suspenze se skladuje v parní fázi nad kapalným dusíkem.
ml takto skladované suspenze se užije k naočkování 50 ml téhož živného prostředí jako pro; vypěstování vegetativní fáze. Toto živné prostředí se inkubuje v Erlenmeyerových baňkách se širokým hrdlem· o obsahu 250 ml při teplotě 25 °C 22 hodin na · rotační třepačce s výkyvem 5 cm při 250 otáčkách za minutu.
B. Fermentace v tanku
K získání většího množství očkovacího materiálu se užije 10 ml takto získaného· prostředí z prvního stupně k naočkování 400 ml živného· prostředí. Toto živné prostředí má stejné složení jako svrchu a inkubuje se v Erlenmeyerových baňkách se širokým hrdlem o obsahu 2 litry při teplotě 25 °C 25 · ho din na rotační třepačce· s výkyvem 5 cm při 250· otáčkách za minutu.
800 ml takto získaného živného prostředí se užije k naočkování 100· litrů sterilního produkčního živného prostředí následujícího složení:
| Složka | Množství |
| glukóza | 25 g/litr |
| škrob | 10· g/litr |
| pepton* | 10 g/litr |
| melasa | 5 g/litr |
| enzymatický hydrolyzát | 4 g/litr |
| kaseinu** | |
| MgSOi. 7HžO | 0,5 g/litr |
| Czapkova směs minerálních | 2,0 ml/litr |
| látek*** | |
| CaCO3 | 2,0 g/litr |
| deionizovaná· voda do | 1 litru |
* W. P. č. 159, Inolex Biomedical Corp., Glenwood, 111.
** N-Z-amin A, Sheffield Chemical Co., Norwich, N. Y.
*** Czapkova směs minerálních látek má
| následující složení | |
| Složka | Množství |
| FeSOi.7H2O (rozpuštěno | 2 g |
| ve 2 ml konc. HC1) | |
| KC1 | 100 g |
| MgSO. 7H2O | 100 g |
| deionizovaná voda | do 1 litru |
Živné prostředí bylo upraveno na pH 6,8 po sterilizaci v autoklávu při teplotě 121 °C na dobu 30 minut při tlaku 8· až 9 kg. Živné prostředí bylo pak přeneseno; do- fermentačního tanku o obsahu 165 litrů a bylo inkubováno při teplotě 25 °C 4 dny, přičemž bylo provzdušňováno sterilním vzduchem· rychlostí 0,5 objemů vzduchu na 1 objem živnéhO' prostředí za minutu. Míchání bylo prováděno běžnými míchadly při 300· otáčkách za minutu.
Příklad 2
Izolace antibiotika A-30912 ve formě směsi
200 litrů fermentačního prostředí, získaného způsobem podle příkladu 1 se hodinu míchá s 200 litry methanolu a pak se zfiltruje při použití infuzoriové hlinky (Hyflo Super-cel, Joihns-Manville Products Corp.). Filtrát se upraví na pH 4,0· přidáváním 5 N· kyseliny chlorovodíkové. Okyselený filtrát se dvakrát extrahuje stejným- množstvím chloroformu. Chloroformové extrakty se slijí a · odpaří ve vakuu na objem 4 litry. Tento koncentrát se přidá k 60· litrům diethyletheru, čímž se vysráží výsledné antibiotikum ve formě směsi faktorů. Sraženina se oddělí filtrací a usuší, čímž se získá 38 g antibiotika A-30912 ve formě směsi jako še212776
1S dý prášek. Filtrát se zahustí ve vakuu na olejovitou kapalinu, která se rozpustí v 500 mililitrech methanolu. Methanolový roztok se přidá к 7,5 litru diethyletheru, čímž se vysráží další podíl antibiotika. Tato· sraženina se rovněž oddělí filtrací a usuší, čímž se získá ještě 3,5 g antibiotika A-30912.
Příklad 3
Izolace faktoru A antibiotika A-30912 g antibiotika A-30912 ve formě směsi faktorů, získaného způsobem podle příkladu 2 se nanese na vrchol sloupce o rozměrech 4 x 107 cm s obsahem silikagelu (Woelm) ve směsi acetonitrilu a vody v poměru 95:5. Sloupec se vymývá směsí acetonitrilu a vody v poměru. 95:5 rychlostí 1 až 2 ml za minutu, přičemž se odebírají frakce o objemu 20 ml. Tyto/ frakce se zkoumají chromatografií na tenké vrstvě silikagelu při použití směsi acetonitrilu a vody v poměru 95:5 a Candida albicans jako zkušebního! mikroorganismu pro bioautografii.
Frakce 74 až 125 se slijí a zahustí. Koncentrovaný roztok stáním krystalizuje, čímž se získá 124 mg sterigmatocystinu. Frakce 212 až 273 se slijí a zahustí ve vakuu na olejovitou kapalinu, která se rozpustí v malém množství methanolu. Methanolový roztok se přidá к 15 objemům diethyletheru. Vzniklá sraženina se oddělí a usuší, čímž se získá 23 mg faktoru D antibiotika A-30912. Frakce 274 až 437 obsahují faktory А, В, C a D. Frakce 482 až 900 obsahují faktory A, E, F a G. Frakce 438 až 481 se slijí a koncentrují ve vakuu na olejovitou kapalinu, která se rozpustí v malém množství methanolu. Methanolový roztok se přidá к 15 objemům diethyletheru. Vytvoří se sraženinia, která se oddělí a usuší, čímž se získá 2,17 g faktoru A.
Příklad 4
Izolace faktoru D antibiotika A-30912
Částečně čištěné antibiotikum A-30912 ve formě směsi s obsahem faktorů В, C a D se získá způsobem podle příkladu 3 ve formě frakcí 274 až 437. 750 mg tohoto materiálu se chromatografuje na sloupci o rozměrech
2,2 x 51 cm s obsahem silikagelu (Woelm), přičemž se odebírají frakce o objemu 15 ml. Sloupec se vymývá následujícími rozpouštědly:
Frakce Rozpouštědlo až 25 acetonitril až 62 acetonitril + 1 % vody až 700 acetonitril + 1,5 % vody
Frakce se sledují chromatografií na tenké vrstvě silikagelu při použití směsi acetonitrilu a, vody v poměru 95:5 a směsi benze16 nu a methanolu v poměru 7:3 při hioautografii s použitím Candida albicans. Frakce 535 až 685, které obsahují faktor D se slijí a zahustí ve vakuu na olejovitou kapalinu, která se rozpustí v malém· množství methanolu a vzniklý roztok se přidá к 15 objemům diethyletheru. Vznikne sraženina, která se oddělí filtrací a usuší, čímž se získá 69 mg faktoru D.
Příklad 5
Izolace faktorů В a C antibiotika A-30912
Částečně čištěné antibiotikum A-30912 s obsahem faktorů А, В, C a D se získá způsobem podle příkladu 3 ve formě frakcí 212 až 437. 18 g tohoto materiálu se rozpustí v malém množství směsi acetonitrilu a vody v poměru 4:1 a chromatcigrafuje se na sloupci o rozměrech 3,8 x 56 cm s obsahem kysličníku hlinitého (Woelm), přičemž se odebírají frakce o objemu 20 ml. Sloupec se vymývá následujícím rozpouštědlem.:
Frakce Rozpouštědlo až 300 acetonitril a voda (4:1)
301 až 509 acetonitril a voda (7:3)
Jednotlivé frakce se sledují chramatografií na tenké vrstvě silikagelu způsobem, popsaným v příkladu 4. Na základě získaných výsledků se určité frakce slijí a zahustí na olejovité kapaliny, které se rozpustí v malém množství methanolu. Methanolové roztoky se sráží 10 až 15 objemy diethyletheru. Spojení frakcí, hmotnost získaného materiálu a obsah jednotlivých faktorů jsou uvedeny v následující tabulce:
| Frakce | Hmotnost v g | Faktory A-30912 |
| 6 až 28 | 0,23* | c |
| 6 až 28 | 5,80 | C, D |
| 34 až 114 | 2,90 | В |
| 115 až 164 | 1,20 | А, В |
| 165 až 509 | 1,90 | A |
* nerozpustný materiál, odstraněný před srážením etherem.
К získání faktoru C se 2 g z frakcí 6 až 28 rozpustí v methanolu, adsorbují na dostatečném množství silikagelu, usuší a nanesou na vrchol silikagelového sloupce o rozměru 1,9 x 80 cm, v acetonitrilu. Sloupec se vymývá acetonitrilem rychlostí 2 ml za minutu, přičemž se odebírají frakce o objemu 10 ml. Po frakci 117 se rozpouštědlo nahradí směsí acetonitrilu a vody v poměru 99:1, načež se jednotlivé frakce sledují chromatografií na tenké vrstvě. Podle výsledku této chromatografie se frakce slijí a zahustí na olejovitý zbytek, který se rozpustí v malém množství methanolu, methanolový roztok se vysráží 10 až 15 objemy diethyl- Frakce Hmotnost v g Faktory etheru. Výsledky jsou uvedeny v následující------
| tabulce: | 341 až 479 | 0,250 | D |
| 480 až 540 | 0,015 | D | |
| 541 až 899 | 0,391 | C, D | |
| 900 až 1675 | 0,340 | C |
PŘEDMĚT
Claims (8)
1. Způsob výroby antibiotika A-30 912 ve formě směsi s obsahem faktorů A, B, C, D, E, F a G, vyznačující se tím, že se kultivuje Aspergillus rugulosus NRRL 8113 v živném prostředí s obsahem využitelných zdrojů uhlíku, dusíku a anorganických solí v submerzních aerobních podmínkách při teplotě 30 až 43 °C po dobu 2 nebo více dnů do nahromadění antibiotika a antibiotikum. A-30912 .ve formě směsi se izoluje z živného prostředí filtrací a na podkladu selektivní rozpustnosti a jednotlivé faktory se oddělí ze směsi chrcmatograficky a popřípadě na podkladě selektivní rozpustnosti.
2. Způsob podle bodu 1 pro výrobu faktoru A antibiotika A-30912, vyznačující se tím, že se izoluje antibiotikum A-30912 ve formě směsi. filtrací, extrakcí filtrátu chloroformem, vysrážením diethyletherem, dalším rozpuštěním. v methanolu a dalším·· srážením diethydutherum a faktor A antibiotika A-30912 oddělí od antibiotika ve formě směsi chromatografickým. dělením na sloupci silikagulu, eluce se provádí směsí acetonitrilu a vody, frakce se odpaří, znovu· rozpustí v .methanolu a vysráží diethyletherem.
3. Způsob podle bodu 1 pro výrobu faktoru B antibiotika A-30912, vyznačující se tím, že se izoluje antibiotikum A-30912 ve formě směsi filtrací, extrakcí filtrátu chloroformem, vysrážením diuthylethurum, dalším rozpuštěním v methanolu a dalším srážením diuthyduthurum a faktor B antibiotika A-30912 oddělí od antibiotika ve formě směsi chromatografickým dělením' na sloupci silikagelu, eluce se provádí směsí acetonitrilu a vody, frakce se odpaří, znovu rozpustí v methanolu a vysráží diuthydethurem.
4. Způsob podle bodu 1 pro· výrobu faktoru C antibiotika A-30912, vyznačující se tím, že se izoluje antibiotikum1 A-30912 ve formě směsi filtrací, extrakcí filtrátu chloroformem, vysrážením diethyletherem, dalším rozpuštěním, v •methanolu a dalším srážením diethylutherum a faktor C antibiotika A-30912 se .oddělí od antibiotika ve formě směsi chromatografickým dělením na sloupci silikagelu, eluce se provádí směsí aceto
VYNALEZU nitrilu a vody, frakce se odpaří, znovu rozpustí v methanolu a vysráží diethyletherem.
5. Způsob podle bodu 1 pro výrobu faktoru D antibiotika A-30912, vyznačující se tím, že se izoluje antibiotikum A-30912 ve formě směsi filtrací, extrakcí filtrátu chloroformem, vysrážením. disthylsthsrsm, dalším .rozpuštěním v methanolu a dalším, srážením diuthyduthurum a faktor D antibiotika A-30912 .oddělí se od antibiotika ve formě směsi chromatografickým dělením na sloupci silikagelu, eluce se provádí směsí acetonitrilu a vody, frakce se odpaří, znovu rozpustí v methanolu a vysráží diethyletherem.
6. Způsob podle bodu 1 pro výrobu· faktoru E antibiotika A-30912, vyznačující se tím, že se izoluje antibiotikum- A-30912 ve formě směsi filtrací, extrakcí filtrátu chloroformem, vys-rážením diethyletherem, dalším rozpuštěním. v methanolu a dalším srážením diethyletherem a faktor E antibiotika A-30912 se oddělí od antibiotika ve formě směsi chromatografickým dělením- na tenké vrstvě silikagelu při použití směsi benzenu z methanolu v poměru 7:3.
7. Způsob podle bodu 1 pro výrobu faktoru F antibiotika A-30912, vyznačující se tím, že se izoluje antibiotikum. A-30912 ve formě směsi filtrací, extrakcí filtrátu chloroformem, vysrážením diethyletherem, dalším rozpuštěním v methanolu a dalším srážením diethyletherem a faktor F antibiotika A-30912 se oddělí od antibiotika ve formě směsi chromatografickým dělením na tenké vrstvě silikagelu při použití směsi benzenu z methanolu v poměru 7:3.
8. Způsob podle bodu 1 pro výrobu faktoru G antibiotika A-30912, vyznačující se tím, že se izoluje antibiotikum· A-30912 ve formě směsi filtrací, extrakcí filtrátu chloroformem, vysrážením diethyletherem, dalším rozpuštěním v methanolu a dalším srážením diethyletherem a faktor G antibiotika A-30912 se oddělí .od antibiotika ve formě směsi chromatografickým dělením na tenké vrstvě silikagelu při použití směsi benzenu z methanolu v poměru 7:3.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US61910775A | 1975-10-02 | 1975-10-02 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS212776B2 true CS212776B2 (en) | 1982-03-26 |
Family
ID=24480483
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS766294A CS212776B2 (en) | 1975-10-02 | 1976-09-29 | Method of preparing a-30912 antibiotics |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5242801A (cs) |
| AR (1) | AR209993A1 (cs) |
| AT (1) | AT346479B (cs) |
| AU (1) | AU506777B2 (cs) |
| BE (1) | BE846829A (cs) |
| BG (1) | BG25380A3 (cs) |
| CA (1) | CA1080145A (cs) |
| CH (1) | CH629531A5 (cs) |
| CS (1) | CS212776B2 (cs) |
| DD (1) | DD127442A5 (cs) |
| DE (1) | DE2643485A1 (cs) |
| DK (1) | DK143608C (cs) |
| ES (1) | ES452021A1 (cs) |
| FR (1) | FR2326200A1 (cs) |
| GB (2) | GB1499710A (cs) |
| GR (1) | GR61730B (cs) |
| HU (1) | HU173445B (cs) |
| IE (1) | IE43663B1 (cs) |
| IL (1) | IL50429A (cs) |
| NL (1) | NL7610808A (cs) |
| NZ (1) | NZ182123A (cs) |
| PL (1) | PL103996B1 (cs) |
| PT (1) | PT65617B (cs) |
| RO (1) | RO69985A (cs) |
| SE (1) | SE7610943L (cs) |
| SU (1) | SU620215A3 (cs) |
| YU (1) | YU236076A (cs) |
| ZA (1) | ZA765320B (cs) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5452797A (en) * | 1977-10-04 | 1979-04-25 | Meiji Seika Kaisha Ltd | Novel antibiotic substance bn-200, and its preparation |
| CA1170598A (en) * | 1979-12-13 | 1984-07-10 | Bernard J. Abbott | Process for the preparation of cyclic peptide nuclei |
| GB2180464A (en) * | 1985-09-18 | 1987-04-01 | British Gas Corp | Gas-solid phase reactions and apparatus therefor |
| FI76004B (fi) * | 1986-03-24 | 1988-05-31 | Seppo Kalervo Ruottu | Cirkulationsmassareaktor. |
-
1976
- 1976-09-06 IE IE1974/76A patent/IE43663B1/en unknown
- 1976-09-07 ZA ZA00765320A patent/ZA765320B/xx unknown
- 1976-09-08 IL IL50429A patent/IL50429A/xx unknown
- 1976-09-16 GR GR51709A patent/GR61730B/el unknown
- 1976-09-20 CA CA261,528A patent/CA1080145A/en not_active Expired
- 1976-09-21 PT PT65617A patent/PT65617B/pt unknown
- 1976-09-21 NZ NZ182123A patent/NZ182123A/xx unknown
- 1976-09-22 JP JP51114357A patent/JPS5242801A/ja active Pending
- 1976-09-23 AU AU18080/76A patent/AU506777B2/en not_active Expired
- 1976-09-23 GB GB39477/76A patent/GB1499710A/en not_active Expired
- 1976-09-24 BG BG034273A patent/BG25380A3/xx unknown
- 1976-09-27 YU YU02360/76A patent/YU236076A/xx unknown
- 1976-09-27 DE DE19762643485 patent/DE2643485A1/de not_active Withdrawn
- 1976-09-27 GB GB39954/76A patent/GB1565821A/en not_active Expired
- 1976-09-29 SU SU762404253A patent/SU620215A3/ru active
- 1976-09-29 NL NL7610808A patent/NL7610808A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-09-29 CS CS766294A patent/CS212776B2/cs unknown
- 1976-09-30 CH CH1241376A patent/CH629531A5/de not_active IP Right Cessation
- 1976-09-30 ES ES452021A patent/ES452021A1/es not_active Expired
- 1976-09-30 DK DK440276A patent/DK143608C/da active
- 1976-10-01 AR AR264953A patent/AR209993A1/es active
- 1976-10-01 BE BE1007661A patent/BE846829A/xx unknown
- 1976-10-01 AT AT730976A patent/AT346479B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-10-01 DD DD195092A patent/DD127442A5/xx unknown
- 1976-10-01 PL PL1976192798A patent/PL103996B1/pl unknown
- 1976-10-01 HU HU76EI703A patent/HU173445B/hu unknown
- 1976-10-01 FR FR7629604A patent/FR2326200A1/fr active Granted
- 1976-10-01 SE SE7610943A patent/SE7610943L/ not_active Application Discontinuation
- 1976-10-02 RO RO7687891A patent/RO69985A/ro unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA765320B (en) | 1978-04-26 |
| CA1080145A (en) | 1980-06-24 |
| GB1565821A (en) | 1980-04-23 |
| FR2326200A1 (fr) | 1977-04-29 |
| SE7610943L (sv) | 1977-04-03 |
| PT65617A (en) | 1976-10-01 |
| IE43663B1 (en) | 1981-04-22 |
| IE43663L (en) | 1977-04-02 |
| JPS5242801A (en) | 1977-04-04 |
| SU620215A3 (ru) | 1978-08-15 |
| IL50429A (en) | 1979-11-30 |
| DK143608C (da) | 1982-02-15 |
| RO69985A (ro) | 1981-05-15 |
| IL50429A0 (en) | 1976-11-30 |
| BE846829A (fr) | 1977-04-01 |
| HU173445B (hu) | 1979-05-28 |
| YU236076A (en) | 1983-04-30 |
| NZ182123A (en) | 1978-06-02 |
| GB1499710A (en) | 1978-02-01 |
| AT346479B (de) | 1978-11-10 |
| GR61730B (en) | 1978-12-30 |
| ES452021A1 (es) | 1977-12-01 |
| DD127442A5 (cs) | 1977-09-21 |
| PL103996B1 (pl) | 1979-07-31 |
| AU506777B2 (en) | 1980-01-24 |
| ATA730976A (de) | 1978-03-15 |
| NL7610808A (nl) | 1977-04-05 |
| DE2643485A1 (de) | 1977-04-14 |
| FR2326200B1 (cs) | 1980-03-07 |
| PT65617B (en) | 1978-04-05 |
| CH629531A5 (en) | 1982-04-30 |
| BG25380A3 (en) | 1978-09-15 |
| DK143608B (da) | 1981-09-14 |
| AU1808076A (en) | 1978-04-06 |
| AR209993A1 (es) | 1977-06-15 |
| DK440276A (da) | 1977-04-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4024245A (en) | Antibiotic A-30912 and process for production thereof | |
| US4024246A (en) | Antibiotic A-22082 and process for production thereof | |
| KR100333017B1 (ko) | 폴리사이클릭구충제,이의제조방법,이의제조용균주및이를포함하는조성물 | |
| DD153213A5 (de) | Verfahren zur herstellung der die faktoren a,b,d und h von a-30912 enthaltenden antibiotikummischung a-42355 sowie der einzelnen faktoren | |
| KR960016874B1 (ko) | 미생물에 의한 트랜스-4-히드록시-l-프롤린의 제조방법 | |
| US5183826A (en) | Antiviral agent | |
| EP0021685A1 (en) | A-30912 H-type antibiotics, their preparation and use | |
| CS212776B2 (en) | Method of preparing a-30912 antibiotics | |
| US3991052A (en) | Antibiotic A-30641 | |
| KR850001939B1 (ko) | A-32724 항생물질의 제조방법 | |
| JP3026864B2 (ja) | 新規セスキテルペン誘導体 | |
| WO1982000587A1 (en) | New metabolites,processes for their production and their use | |
| US5166217A (en) | Antifungal agents | |
| GB1567024A (en) | Antibiotic a-22082 and process for production thereof | |
| US6730776B1 (en) | WF14573 or its salt, production thereof and use thereof | |
| KR800000298B1 (ko) | 항생물질 a-30912의 제조방법 | |
| US5597806A (en) | Antifungal agents | |
| TSUJII et al. | WF11605, AN ANTAGONIST OF LEUKOTRIENE B4 PRODUCED BY A FUNGUS I. PRODUCING STRAIN, FERMENTATION, ISOLATION AND BIOLOGICAL ACTIVITY | |
| US6521600B1 (en) | Compound, WF002, production thereof and use thereof | |
| EP0187528B1 (en) | A new compound fr-68504, production thereof and use thereof | |
| US4001086A (en) | Antibiotic a-30641 and process for production thereof | |
| US3887564A (en) | Antibiotic A-25822 and process for production therof | |
| EP0301744A3 (en) | Antifungal fermentation products and compositions thereof | |
| US5232943A (en) | Antibiotics mer-af1032a and mer-af1032b | |
| JP2815166B2 (ja) | 新規抗生物質ｍｋ１６８８物質ならびにその製造法 |