CS212226B2 - Způsob přípravy 7-( α-substituovaných benzoylureido)- fenylacetamidoderivátů cefalosporinu - Google Patents

Abstract

Vynález se týká derivátů cefalosporinu, které mají Široké antibakteriální spektrum a vykazuji antibakteriální účinek vůěi různým gramnegativním a grampozitivním bakteriím. Přesněji se vynález týká 7-(ůlfa-substituovaných benzoylureido)fenylacetamidoderivátů cefalosporinu obecného vzorce I kde je Rj atom vodíku nebo alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, x Rg atom vodíku nebo hydroxyskupina, R^ hydroxyskupina, n číslo 2 nebo 3, přičemž. alespoň dve ze substituentů Rj jsou připojeny na sousední atomy uhlíku, poloha substituentu R^ je vybrána z poloh 3 až 5, jestliže R1 je alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, a z poloh 2 až 6, jestliže R, je atom vodíku, R^ je atom vodíku nebo methoxyl a Rg je pětiělenný heterocyklický kruh včetně jednoho nebo více atomů dusíku a popřípadě atomu síry, který je popřípadě substituován alkylskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku a jejich farmaceuticky vhodných solí.

Description

Vynález se týká derivátů cefalosporinu, které mají Široké antibakteriální spektrum a vykazuji antibakteriální účinek vůěi různým gramnegativním a grampozitivním bakteriím.

Přesněji se vynález týká 7-(ůlfa-substituovaných benzoylureido)fenylacetamidoderivátů cefalosporinu obecného vzorce I,

kde je

Rj atom vodíku nebo alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, _x

Rg atom vodíku nebo hydroxyskupina,

R^ hydroxyskupina, n číslo 2 nebo 3, přičemž. alespoň dve ze substituentů Rj jsou připojeny na sousední atomy uhlíku, poloha substituentu R^ je vybrána z poloh 3 až 5, jestliže R₁ je alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, a z poloh 2 až 6, jestliže R, je atom vodíku, R^ je atom vodíku nebo methoxyl a Rg je pětiělenný heterocyklický kruh včetně jednoho nebo více atomů dusíku a popřípadě atomu síry, který je popřípadě substituován alkylskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku a jejich farmaceuticky vhodných solí.

- Cefalosporinové deriváty mající benzoylureldoskupinu vázanou v alfa-poloze 7-acylaaidového postranního řetězce derivátů jsou známé například z USA patentů č. 3 925 368 a 4 061 630, britských patentů č. 1 479 711, 1 498 025, 1 505 885, 1 508 314, 1 5’β 722 a 1 521 073 a DOS 2 653 621. AvSak žádný z těchto patentů neuvádí sloučeniny, které by mSly hydroxyskupinu nebo nižSl alkanoyloxyskupinu jako substituent na odpovídající benzoylskupině.

I když USA patent č. 3 687 949, britský patent č. 1 525 626 a japonský patent číslo . . 5787/77 uvádějí jako substituent alkanoyloxyskupinu, neuvádějí hydroxylovou skupinu. Avšak výSe uvedené tři odkazy uvádějí pouze obecný popis alkanoyloxyskupiny jako jednoho z několika substituentů a nejsou nárokovány dvě nebo tři nižší alkanoyloxyskupiny, z nichž alespoň dvě jsou vázané na sousední atomy uhlíku. Dále nejsou uvedeny žádné konkrétní sloučeniny, které by měly alkanoyloxyskupiny jako substituenty benzoylskupiny.

Jak je vysvětleno výše, jsou cefalosporinové deriváty podle vynálezu obecného vzorce I sloučeniny nové.

Deriváty podle vynálezu vykazují vysoký antibakteriálnl účinek, jak proti grampozitivním tak gramnegativním bakteriím. Zejména jsou účinné proti bakteriím příslušejícím k Peeudomonas nebo Serratia e sloučeniny podle vynálezu vykazují značně vySěí antibakteriálnl účinek, než jaký má cefazorin, cefaloridln nebo jiná běžně používaná cefalosporinové antibiotika.

Sloučeniny podle vynálezu mají vynikající vlastnosti in vivo aplikaci, jako je absorpce, vylučování, distribuce, metabolismus apod., a vykazují schopnost prevence před infekcí bakteriemi. Vzhledem k těmto vlastnostem jsou sloučeniny podle vynálezu použitelné jako antibakteriálnl činidla.

Jestliže R, je alkylskupina s 1 až 4 atomy uhlíku a hydroxylové skupina je přítomna na benzoylovém jádře v poloze 2 nebo 6, stává se ureidoskupina nestabilní a tak se omezuje poloha eubstituentu R-j. Proto jestliže Rj je alkyl, je poloha substituentu R^ v poloze 3 a 4 nebo 3, 4 a 5. Pro ostatní kombinace R, a R^ je poloha substituentu Rj bul 2 a 3 poloha, 3 a 4 poloha, 2, 3 a 4 poloha, 3, 4 a 5 poloha, 2, 4 a 5 poloha, 2, 3 a 5 poloha, nebo 2, a 6 poloha. Výhodné jsou 2 a 3 poloha, 3 a 4 poloha nebo 3, 4 a 5 poloha.

Heterocyklická skupina s pěti členy v kruhu reprezentované symbolem Rg vzorce I zahrnuje například 1 , 3, 4-thiadiazol, triazol a tetrazol, které popřípadě mohou být substituované jednou nebo více alkylskuplnami β 1 až 4 atomy uhlíku. Alkyl je skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, které mohou být popřípadě rozvětvené a které zahrnují například methyl, ethyl, n-propyl a isopropyl. Výhodným alkylem je methyl.

Protože deriváty cefalosporinu podle vynálezu mají karboxylovou skupinu, jsou schopné tvořit soli s různými alkalickými sloučeninami. VeSkeré tyto soli spadají rovněž do rozsahu vynálezu. Příklady solí sloučenin podle vynálezu jsou anorganické alkalické soli, například soli akalických kovů, jako soli sodné a draselné, soli s kovy alkalických zemin, jako jsou vápenaté soli a soli s organickými bázemi, jako například soli s prokainem nebo dibenzylethylendiaminem. Tyto soli se mohou připravit běžným způsobem, to jest reakcí volné karboxylové skupiny derivátů cefalosporinu s výSe popsanou anorganickou nebo organickou bází.

Vzhledem k asymetrickému uhlíku v 7-acetamidoskupině jsou konečné produkty podle vynálezu optickými isomery, to jest DL-, D- a L-isomery. VeSkeré tyto isomery spadají rovněž do rozsahu vynálezu.

Předmětem vynálezu je způsob přípravy derivátů cefalosporinu vzorce 1 a jejich solí, který se vyznačuje tím, že se 3-acetoxymethylcefalosporin obecného vzorce II,

R.

'1

R.

CON-CONH

S

ch₂-o-coch_3(W kde R,, Rg, Rp R^ a n mají význam uvedený výše a X je atom vodíku, nebo chránící skupina, nechá reagovat s thiolem nebo jeho solí obecného vzorce III,

(III) kde Rg má význam uvedený výše, a jestliže X je chránící skupina, převede se X na atom vodíku a popřípadě se získaná sloučenina vzorce I převede na farmaceuticky vhodnou sůl.

Při této reakci se thiol obecnš používá ve formě sodné nebo draselné soli. Thiol ve volné formě se může použít v přítomnosti anorganické báze, jako je hydroxid alkalického kovu, uhličitan alkalického kovu, hydrogenuhličitan alkalického kovu apod., nebo v přítomnosti organické báze, jako je trialkylamin apod.

Reakce se běžně provádí v rozpouštědle, například se běžně používá aceton, methanol, ethanol, tetrahydrofuran apod., a mohou se také použít jejich vodné roztoky.

Reakce se obecně provádí za zahřívání nebo při teplotě místnosti. To znamená, že re-? akční teplota se běžně pohybuje v rozmezí 20 až 70 °C, s výhodou 45 až 55 °C. Reakční doba se pohybuje od 5 do 60 hodin, s výhodou od ,5 do 30 hodin.

Izolace sloučenin z reakční směsi se provádí jakoukoli běžnou metodou. Tak například se 'provede extrakce organickým rozpouštědlem, jako je dichlormethan, chloroform nebo ethylacetát, a chromatogrefie na silikagelu, iontoměničové pryskyřici, sílovaném dextraňu, vysokoporéáním polymeru styrenu nebo esteru akrylové kyseliny nebo podobných materiálech.

Optické isomery, jako jsou D- nebo L-isomery sloučenin podle vynálezu, se mohou připravit použitím opticky aktivní výchozí sloučeniny, jako je alfa-aminofenyloctová kyselina nebo substituovaná ureidofenyloctová kyselina, která se připravuje běžným způsobem rezolucí, například způsobem popsaným v J. P. Greenstein a M. Winitz v Chemistry of the Amino Acids, sv. 1, str. 715 až 760, John Wiley and Sons, N. Y. (1961).

Sloučeniny podle vynálezu se mohou formulovat na různé farmaceutické přípravky, připravené pro různé aplikační způsoby, způsobem popsaným pro jiné cefalosporinové sloučeniny.

Vynález se týká také famraceutických směsí pro léčení lidí a zvířat. Příprava se provádí použitím běžných farmaceutických nosičů, ředidel a přísad.

Pro injekční aplikaci se mohou používat emulze, roztoky nebo suspenze ve vodném nebo olejovém nosiči. Čípky se připravují použitím běžných přísad pro čípky, jako jsou kokosový olej nebo glyceridy.

Obsah aktivní sloučeniny je různý a pohybuje se v závislosti na způsobu aplikace.

Běžně se používá nad 0,1 %, jako je například 5 až 99%, s výhodou 10 až 60 %.

Aplikované množství se pro dospělého člověka pohybuje v rozmezí 100 až 3 000 mg za den. S výhodou se používá množství v rozmezí 500 až 2 000 mg za den a závisí na tělesné hmotnosti, věku, druhu onemocnění a způsobu aplikace a četnosti aplikace.

Způsob pro přípravu sloučenin podle vynálezu je dále blíže objasněn v příkladech.

Chromatografie na tenké vrstvě se v příkladech provádí na silikagelu 60 ?254 (h°tové desky vyráběné firmou E. Merck, Darmstadt) v následujících směsích:

I. ethylacetát-ethanol-kyselina octová (25:5:1, objemově),

II. ethylacetát-ethanol-kyselina octová-voda (10:4:2:1, objemově).

Příklad 1

1. Roztok triethylaminu (6,04 g) v bezvodém diehlormethanu (20 ml) se při teplotě místnosti přikape k roztoku N-methyl-3,4-diacetoxybenzamidu (15,0 g) a triethylsilylohloridu (6,49 g) v bezvodém diehlormethanu (70 ml), Po třicetiminutovém zahřívání směsi k varu se při teplotě -5 až +5 °C přidá roztok (82 ml) fosgenu (42 ml) v bezvodém dichlormethenu e teplota se nechá postupně vystoupit na teplotu místnosti. Přebytek fosgenu a rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku a získá se surový N-(3,4-diacetoxybenzoyl)-N-methylkarbamoylchlorid. Produkt se rozpustí ve studeném bezvodém diehlormethanu (50 ml) a po odstranění nerozpustných podílů filtrací je použitelný pro následující reakci.

2. N,O-bis(trimethylsilyDacetamid (44,3 ml) se přidá k suspenzi D-(-)-fenylglycinu (14,0 g) v bezvodém diehlormethanu (150 ml) při teplotě místnosti a reakSní směs se míchá až do úplného rozpuštění. Ke směsi se přikape za míchání roztok N-(3,4-dieoetoxybenzoyD-N-methylkarbamoylohloridu v bezvodém diehlormethanu, získaném ve stupni 1.

Po míchání 1,5 hodin při 5 až 10 °C se směs odpaří k suchu při teplotě místnosti s po přidání methanolu ke zbytku se směs odpaří znovu k suchu za sníženého tlaku při teplotě místnosti.

Ke zbytku se přidá ethylecetát (500 ml) a studená 1H kyselina chlorovodíková a organická fáze se oddělí. Organická fáze se promyje studeným nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (500 ml) a třikrát se extrahuje studeným nasyceným vodným roztokem hydrogenuhliSitanu sodného v celkovém množství 700 ml.

Vodná fáze se oddělí a promyje ethylacetátem (100 ml). Hodnota pH vodné fáze ae 2N kyselinou chlorovodíkovou upraví na 2,5 a extrahuje se ethylacetátem (500 ml).

Organická fáze se oddělí a promyje studeným nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší bezvodým síranem sodným a odpaří k suchu. Získá se 15,0 g D(-)-alfa-£3-(3,4-diacetoxybenzoyD-3-methyl-l-ureidoJ-elfa-fenyloctové kyseliny ve formě bílého prášku. Chromatografie na tenké vrstvě: v soustavě I: Rf 0,52

IČ spektrum: v cm^-1 3 700 až 2 400, 1 775, 1 740, 1 700, 1 510.

NMR spektrum: (DMSO-dg, 60 MHz) δ(ppm) 2,29 (6H, s), 3,12 (3H, s), 5,35 (1H, d, J = 7 Hz),

7,2 až 7,6 (8H, a), 9,65 (1H, d, J = 7 Hz).

Výše uvedená sloučenina se také připraví následujícím způsobem. Ke směsi tetrahydrofuranu (50 ml), trimethylsilylchloridu (7 g) a D(-)-alfa-(3-methyl-1-ureido)fenyloctové kyseliny (6,4 g) připravené reakcí D(-)-fenylglycinu s methylisokyanátem se přikape ze míchání triethylamin (6,4 g) při teplotě pod 10 °C. Po skončení přidávání se směs míchá při 40 až 50 °C jednu hodinu, načež se ochladí na teplotu pod 10 °C. Ke směsi ee přikape roztok 3,4-dieoetoxybenzoylchloridu (7,9 g) v tetrahydrofuranu (20 ml), načež se směs míchá dvě hodiny při 50 °C.

Po ochlazení na teplotu pod 10 °C se malé množství methanolu přidá ke směsi a nerozpustný podíl ss odfiltruje. Filtrát se odpaří k suchu při teplotě místnosti za sníženého tlaku a odparek se čistí chrometografií na koloně silikagelu, (Wakogel C-200, výrobce Wako Junyeku K. K. Japonsko), za použití 3 až 4 % methanolu v chloroformu. Získá se tak 5 g produktu ve formě bílého prášku.

3. K roztoku D-(-)-alfa-[3-(3,4-diacetoxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido]fenyloetové kyseliny (2,0 g) v methanolu (20 ml) se přikape za chlazeni ledovou vodou 29% vodný roztok amoniaku (4 ml). Směs se míchá 30 minut, a teplota se pomalu nechá vystoupit na teplotu místnostnosti, načež se reakční směs zahustí při teplotč místnosti za sníženého tlaku. Ke zbytku se přidá ethylacetát (100 ml) a studený nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (70 ml) a pH vodného roztoku se upraví na 8,5.

Vodné fáze se oddělí a po upravení pH na 2,5 studenou 2N kyselinou chlorovodíkovou se provede extrakce ethylacetátem (200 ml). Organická fáze se oddělí, promyje studeným nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuěí se bezvodým síranem sodným a odpařením k suchu za sníženého tlaku se získá 1,3 g D(-)-alfe-[3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido] fenyloctové kyseliny ve formě bílého prášku.

4. D(-)-elfa- [3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido]-alfa-fenyloctová kyselina (4,0 g) vysušená nad kysličníkem fosforečným, se rozpustí v bezvodém tetrahydrofuranu (60 mililitrů), obsahujícím 1-hydroxybenzotriazol (1,56 g). K roztoku se přikape 20 ml roztoku Ν,Ν'-diByklohexylkarbodiimidu (2,87 g) v bezvodém tetrahydrofuranu při 0 °C za chlazení lázní s ledem a v atmosféře dusíku. V míchání se pokračuje a teplota se pomalu nechá vystoupit během 2 hodin na teplotu místnosti a vzniklá sraženina, Ν,Ν'-dicyklohexylmočovina se odfiltruje. Filtrát obsahující 1-benzotriazolylester D(-)-alfa- [3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido] fenyloctové kyseliny je použitelný pro následující reakci.

5. N,O-bis(trimethylsilyl)acetemid (11,5 ml) se přidá v atmosféře dusíku při teplotě místnoti k suspenzi 7-amino-3-acetoxymethyl-3-oefem-4-karboxylové kyseliny (6,32 g) v bezvodém dichlormethanu (100 ml), načež se reakční směs míchá až do úplného rozpuštění. K rozto ku sa přikape roztok připravený v odstavci 4 v tetrahydrofuranu, přičemž teplota během přidávání se udržuje qiezi 5 až 10 °C, načež se reakční směs míchá 8 hodin. Směs se pak ' odpaří k suchu při teplotě místnosti a po přidání bezvodého methanolu ke zbytku se provede nové odpaření za sníženého tlaku.

Ke zbytku se přidá ethylacetát (100 ml) a studený nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (150 ml) se přidá ke zbytku a směs se dokonale promíchá. Po odstranění nerozpuštěných látek filtrací se pH filtrátu upraví na 1,0 2N kyselinou chlorovodíkovou. Sraženina se odfiltruje, promyje vodou (100 ml) a rozpustí v acetonu (70 ml). Roztok se zpracuje s aktivním uhlím a odpaří k suchu ve vakuu za teploty místnosti.

Ke zbytku se přidá aceton (5 ml) a směs se Zpracuje diethyletherem (50 ml).

Získá se 3,5 g 7-[D-(-)-alfa-{3- (3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-l-ureidoJ-alfe-fenylacetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny (uváděné jako sloučenina A níže) ve formě světle žluté amorfní pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,45, soustava II.

IČ spektrum: v _{3 700 až 2} 300, 1 775, 1 675, 1 520.

NMR spektrum: (DMSO-dg, 60 MHz) S (ppm) 2,02 (3H, s), 3,12 (3H, s), 3,47 (2H, brs), 4,7 až 5,2 (3H, m), 5,5 až 5,9 (2H, m), 6,8 až 7,6 (8H, m).

UV spektrum: (EtOH) A max (nm) 265, 290 (inflex).

Barevná reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

(a) Postup popsaný výše se opakuje s tou výjimkou, že meziprodukt D(-)-alfe-[3-(3,4-diaoetoxybenzoyl)-3-methy1-1-ureido]-alfa-(4-hydroxyfenyl)octová kyselina má následující charakteristiky:

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,51, soustava I.

IČ spektrum: v (cm^-1) 3 700 až 2 300, 1 770, 1 740, 1 700 až 1 680, 1 510.

NMR spektrum: (DMSO-dg, 60 MHz) á (ppm) 2,2 (6H, s), 3,12 (3H, s), 5,23 (1H, d, J = 7 Hz), 6,6 až 7,6 (7H, m), 9,50 (1H, d, J = 7 Hz), a získá se 7-[D-(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureidoJ -alfě-(4-hydroXyfenyl)acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina B níže), ve formě světle žluté amorfní pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,42 , soustava II.

Ιδ spektrum: v (cm’) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 675, 1 510.

NMR spektrum: (DMSO-dg, 60 MHz), <5 (ppm) 2,01 (3H, s), 3,19 (3H, s), 3,5 (2H, bre), 4,80 až 5,15 (3H, m), 5,5 až 6,1 (2H, m), 6,7 až 7,6 (7H, a),

UV spektrum: (EtOHi) A max (nm) 267, 292 (inflex).

Barevná reakce s chloridem železitým pozitivní (temně zelená).

Příklad 2

7-[D-(-)-alfa-{3- (3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido}-afla-řenylecetamido] -3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylová kyselina (sloučenina A) (0,57 g) připravená podle příkladu 1, odstavce 5, se suspenduje v pufrovaném roztoku kyseliny fosforečná pH 6,3 (10 ml). V suspenzi se rozpustí hydrogenuhličitan sodný (0,70 g) a pak se přidá 5-methyl-2-merkapto-1,3,4-thiadiazol (0,13 g). Roztok se nechá 24 hodiny, přičemž pH se udržuje mezi 6,0 až 6,5 zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a hydrogenuhličitaném sodným a teplota se udržuje mezi 45 a 55 °C .

Reakční směs se ochladl, promyje ethylacetátem a vodná fáze se oddělí. Zředěnou kyselinou chlorovodíkovou se pH vodné fáze upraví ná 1,0 a sraženina se odfiltruje. Sraženina se promyje vodou (50 ml) a rozpustí se v acetonu (20 ml). Roztok se zpracuje aktivním uhlím a destilací za sníženého tlaku při teplotě místnosti se odpaří k suchu.

Odparek se zpracuje dlethyletherem (10 ml) a získá se 7-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl ) -3-me thyl- 1-ureido}-alfa-fenylecetamido]-3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina C níže) ve formě světle žlutá amorfní pevná látky.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,40 (soustava II).

Ιδ spektrum: (cm’) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 680, 1 515.

NMR-spektrum: (DMSO-dg, 60 MHz) δ (ppm) 2,69 (3H, s), 3,19 (3H, s), 3,68 (2H, bre), 4,4 (2H, br), 5,04 (1H, d, J = 5 Hz), 5,6 až 6,1 (2H, m), 6,9 až 7,7 (8H, m).

UV spektrum: (EtOH) λ max (nm) 272.

Barevná reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

(a) Postupem popsaným výěe se z 7-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-I-urei do} -alfa-(4-hydroxyfenyl)acetamido] -3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny získá 7-[D(-)-alfa-{3-( 3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido} -alfa-(4-hydroxyfenyl)acetamido] -3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina D níže) ve formě světle žlutá amorfní pevná látky.

Chromatografie na tenká vrstvě: Rf 0,39, soustava II.

Ιδ spektrum: v (cm’) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 680, 1 510.

NMR spektrum (DMSO-dg, 60 MHz) δ (ppm) 2,70 (3H, a), 3,18 (3H, a), 3,7 (2H, bre), 4,4 (2H, br), 5,05 (1H, d, J » 5 Hz), 5,5 až 6,0 (2H, m), 6,7 až 7,5 (7H, m).

UV spektrum: (EtOH) A max (nm) 270, 280 (inflex).

Barevná reakce s chloridem železitým*. pozitivní (temně zelená).

(to) Postupem popsaným výše se z 7-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido}-alfa-fenylacetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny získá 7-[D(-)-alfa-[3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido}-alfa-fenylecetamido]-3-(1-methyl-1H-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina E níže) ve formě světle žlutá amorfní látky.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,40, soustava II.

Ιδ spektrum: v (cm’) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 680, 1 515.

NMR spektrum: (DMSO-dg, 60 MHz) 6 (ppm) 3,10 (3H, s), 3,6 (2H, br), 3,93 <3H, s), 4,31 (2H, brs), 5,1 (1H, d, J = 5 Hz), 5,4 až 5,8 (2H, m), 6,8 až 7,6 (8H, m).

OT spektrum: (EtOH) λ max (nm) 265, 285 (inflex).

Barevná reakce s chloridem železítým: pozitivní, (temně zelená) t

(c) Postupem popsaným výěe se z 7-[D(-)- alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido}-alfa-(4-hydroxyfenyl)acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny získá 7- |.D( -)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureidoj-alfa-(4-hydroxyfenyl)acetami do]-3-(1-methyl-1H-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina F níže) ve formě světle žluté amorfní pevné látky.

Chromatografie ná tenké vrstvě: Rf 0,39, soustava II.

IČ spektrum: v (cm’) 3 700 až 2 300, 1 770, 1 675, 1 510.'

NMR spektrum: (DMSO-dg, 60 MHz), s (ppm) 3,11 (3H, s), 3,6 (2H, br), 3,95 (3H, s), 4,31 (2H, brs), 5,1 <1H, d, J » 5 Hz), 5,3 až 5,9 (2H, m), 6,5 až 7,5 (7H, m).

OT spektrum* (EtOH) λ max (nm) 265, 280 (inflex), 290 (itďlex).

Barevná reakce s chloridem želez!tým: pozitivní (temně zelená).

(d) Postupem popsaným výěe se z 7-[D-(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido-j-alfa-fenylaeetamidoJ-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny získá 7-[D(-)-elfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido} -alfa-fenylacetamido]-3-(1,3,4-thiadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina G níže) ve formě světle žluté amorfní pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,40, soustava II.

IČ spektrum: (cm’) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 680, 1 520.

NMR spektrum: (DMSO-dg, 60 MHz) δ (ppm) 3,17 (3H, s), 3,7 (2H, br), 4,5 (2H, br), 5,04 (1H, d, J = 5 Hz), 5,6 až 6,0 (2H, m), 6,9 až 7,7 (8H, m), 9,36 (1H, s).

OT spektrum: (EtOH) λ max (nm) 268.

Barevná reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

(e) Postupem popsaným výěe se z 7-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido}-elfa-(4^J!hydroxyfenyl)acetamido]-3vacetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny získá 7-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido}-alfa-(4-hydroxyfenyl)acetamldo]-3-(1,3,4-thiediezol-2-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina H níže) ve formě světle žluté amorfní pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,38, soustava II.

IČ spektrum: (cm^-1) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 680, 1 510.

NMR spektrum: (DMSO-dg, 60 MHz), s (ppm) 3,18 (3H, s), 3,7 (2H, brs), 4,5 (2H, tSr), 5,05 (1H, d, J = 5 Hz), 5,5 až 6,0 (2H, m), 6,7 až 7,5 (7H, m), 9,37 (1H, s).“

OT spektrum: IStOH) A max (nm) 270, 280 (inflex).

Barevná reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

(f) Postupem popsaným výěe se z 7-[D-(D-(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido}-alfa-(4-hydroxyfenylacetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny získá 7-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido} -alfa-(4-hydroxyfenyl)acetamidoJ-3-(1,2,3-triazol-5-ylthiomethyl)3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina I níže) ve formě světle žlutého prážku.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,39, soustava II.

ifi spektrum: (cm“’) 3 700 až 2 300, 1 770, 1 680, 1 515.

NMR spektrum: (DMSO-dg, 60MHz), δ (ppm) 3,11 (3H, s), 3,6 (2H, brs), 3,95 (2H, brs),

5,03 (1H, d, J = 5 Hz), 5,4 až 5,9 (2H, m), 6,6 až 7,5 (7H, m), 7,95 (1H, s).

OT spektrum: (EtOH) λ max (nm) 272, 280 (inflex).

Barevná reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

(g) Postupem popsaným výše se z 7-[D-(-)-elfa-{3-(2,3-dihydroxybenzoyl)-1-ureidoJ-alfa

-fenylaeetmido]-3-acetoxymethyl-3-eefem-4-karboxylové kyseliny a 1-methyl-5-merkapto-1H-tettazolu získá 7-[D-(-)-alfa-{3-(2,3-dihydroxybenzoyl)-1-ureido}-alfa-fenylacetamidoJ -3-(1-methyl-1H-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina K níže) ve formě světle žlutého práěku.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,38, soustava II.

IČ spektrum: v (cm“’) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 680, 1 530, 1 490.

NMR spektrum: (aceton-dg, 60 MHz) δ (ppm) 3,7 (2H, br), 3,96 (3H s), 4,37 (2H, brs),

5,05 (1H, d, J = 5 Hz), 5,6 až 6,0 (2H, m), 6,8 až 7,7 (8H, m).

UV spektrum: (EtOH) A max (nm) 256, 280 (inflex).

Barevná reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

(h) Postupem popsaným výSe se z 7-[D-(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-1-ureldo}-alfa

-fenylacetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny a 5-methyl-2-merkapto-1,3,4 -thiadiazolu získá 7-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-1-ureidoj-alfe-fenylacetamido -3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina L níže) ve formě světle žlutého prážku.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,36, soustava II.

IČ spektrum: v (cm^-1 ) 3 700 až 2 200, 1 770, 1 675, 1 525.

NMR spektrum: (aceton-dg, 60 MHz) S (ppm) 2,69 (3H, s), 3,72 (2H, brs), 4,4 (2H, br),

5,13 (1H, d, J = 6 Hz), 5,5 až 5,9 (2H, m), 6,8 až 7,7 (8H, m).

UV spektrum: (EtOH) A max (nm) 268, 290 (inflex).

Barevná reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

(i) Postupem popsaným výěe se z 7béta-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureidoJ -alfa-fenylacetamido] -7alfa-methoxy-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxýlové kyseliny a 1-methyl-5-merkapto-1H-tetrazolu získá 7beta-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureidoj-alfa-fenylacetamido] -7-alfa-methoxy-3-(1-methyl-1H-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina T níže) ve formě světle žlutého práěku.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,51, soustava II.

IČ spektrum: (cm^-1) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 680, 1 515.

NMR spektrum: (aceton-dg, 60 MHz) δ (ppm) 3,18 (3H, s), 3,49 (3H, s), 3,5 (2H, brs),

3,94 (3H, s), 4,37 (2H, ABq), 5,03 (1H, s), 5,70 (1H, d, J = 7 Hz), 6,9 až 7,7 (8H, m), 8,6 (1H, s), 9,90 (1H, d, J = 7 Hz).

UV spektrum: (EtOH) A max (nm) 272, 290 (inflex).

Barevné reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

(j) Postupem popsaným výše se z 7beta-[D-(»0-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureidoj -alfa-fenylacetamido]-7alfa-methoxy-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny a 5-methyl-2-merkapto-1,3,4-thiadiazolu získá 7beta-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1 -ureidoj -alfa-fenylacetamido]-7alfa-methpxy-3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděné jako sloučenina U níže) ve formě světle žlutého prášku.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,52, soustava II.

IČ spektrum: v (cm^-1 ) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 680, 1 515.

Barevná reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

(k) Postupem popsaným výše se z 7beta-[D(-)-alfa-{3-(3,4-hydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido]-alfa-fenylacetamido]-7alfa-methoxy-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny a 2-merkapto-1,3,4-thiadiazolu získá 7beta-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1 -ureidoj -alfa-fenylacetamido]-7alfa-methoxy-3-(1,3,4-thiadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina V) ve formě světle žlutého práěku.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,52, soustava II.

IČ spektrum: ^v (cm^-1) 3 700 až 2300, 1 775, 1 680, 1 520.

Barevné reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelené).

(,) Postupem popsaným výše se z 7beta-rD-(-)-alfa-Í3-(3,4-dihydlroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureidoj-alfa-(4-hydroxyfenylacetamidoj-7alfa-methoxy-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny a 1-methyl-5-merkapto-1H-tetrazolu získá 7beta-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzojtl)-3-methyl-,-ureido}-alfa-(4-hydraxyfenyl)-acetamidoJ-7alfβ-methoxy-3-(1-methyl-1H-tatrazol-5-ylthiomethyl)-3-oefem-4-karboxylové kyselina (uváděná jako sloučenina W níže) ve formě světle žlutého prášku.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,49, soustava II.

IČ spektrum: v (cm^-1) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 675, 1 510.

Barevná reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

(m) Postupem popsaným výše se z 7beta-[D(-)-alfe-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido}-alfa-(4-hydroxyfenylacetamidoj-7alfa-methoxy-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny a 5 methyl-2-merkapto-1,3,4-thiadiazolu získá 7beta-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureidoj-alfa-(4-hydroxyfenyl)acetamidoj -7-alfa-methoxy-3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina X níže) ve formě žlutého prášku.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,50, soustava IT.

IČ spektrum;: v (cm^-1 ) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 680, 1 510.

Barevná reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

(n) Postupem posaným výše se z 7beta-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3-methyl-1-ureido}-alfa-(4-hydroxyfenylacetamidoj-7alfa-methoxy-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-karboxylové kyseliny a 2-merkapto-l,3,4-thiadiazolu získá 7beta-[D(-)-alfa-{3-(3,4-dihydroxybenzoyl)-3*methyl-1-ureido}-alfa-(4-hydroxyfenyl)acetamidoJ-7-alfe-methoxy-3-(1,3,4-thiadia zol-2-ylthiomethyl)-3-cefem-4-karboxylová kyselina (uváděná jako sloučenina Y níže) ve formě žlutého prášku.

Chromatografie na tenké vrstvě: Rf 0,50, soustava II.

IČ spektrum: v (cm^-1) 3 700 až 2 300, 1 775, 1 680, 1 510.

Barevná reakce s chloridem železitým: pozitivní (temně zelená).

Minimální inhibiční koncentrace (MIC v/ig/ml) pro některé druhy bakterií je stannvena pro sloučeniny podle vynálezu připravené podle příkladů 1 a 2 a výsledky jsou shrnuty v následující tabulce. V tabulce jsou bakterie očíslovány podle následujících údajů.

1. Bacilus subtilis PCI-219

2. Staphylococous aureus 209 P

3. Staphylococcus aureus JU-5

4. Sarcina lutea B

5. Escherichia coli NIHJ 6..Shigella flexneri 2b

7. Salmonella paratyphi A

8. Klebsiella pneumonise 15C

9. Próteus mirabilis 1287

10. Próteus morgani JU-244

11. Pseudomonas aeruginosa J-272

12. Pseudomonas aeruginosa J-169

13. Pseudomonas aeruginosa J-169 CM222

14. Pseudomonas aeruginosa GNB-75

15. Pseudomonas aeruginosa GNB-75-M57740

16. Pseudomonas aeruginosa ΚΑΝ-2

17. Pseudomonas aeruginosa Ps-6

18. Serratia marcescens Ser-25b

19. Serratia marcescens FU-104

20. Enterobacter cloacae FU-250.

Testovaná sloučenina bakterie	C	D	E	F	O	H	1
1	0,4	0,78	0,4	0,78	0,4	0,78	0,78
2	0,4	0,78	0 4	0,78	0,2	0,4	0,78
3	3,12	3,12	3,13	3,13	1,56	3,12	3,12
4	0,4	0,4	0,2	0,2	0,2	0,4	0,4
5	<0,1	£ 0,1	0,1	£.0,1	£0,1	0,39	£0,1
6	< 0,1	£0,1	£0,1	40,1	£0,1	40,1	£0,1
7	Ě 0,1	<0,1	<0,1	£0,1	so, 1	< o, 1	£0,1
8	< 0,1	0,4	0,1	0,1	£°»i	0,2	£0,1
9	0,4	0,78	0,4	0,78	0,4	0,78	£0,1
10	0,4	0,78	0,4	0,4	0,4	0,4	0,2
11	0,4	6,25	0,78	0,78	0,78	1,56	3,12
12	1,56	1,56	1,56	1,56	1,56	0,78	24
13	3,12	6,25	3,12	3,12	6,25	6,25	50
14	0,2	0,78	0,39	0,78	0,4	0,4	0,78’
15	< OJ	0,4	£0,1	£0,1	£0,1	0,2	£0,1
16	0,4	0,78	0,78	0,78	0,78	0,78	1,56
17	0,78	1,56	0,78	1,56	0,78	0,78	6,25
18	0,4	0,78	0,4	0,78	0,4	0,78	0,4
19	0,78	1,56	0,78	1,56	0,78	1,56	0,78
20	0,4	1,56	0,78	1,56	0,78	3,13	0,4

Testovaná sloučenina

bakterie	K	L	T	W	Z	AA	oefa- loridin	cefa- zorin
1	3,12	1,56	3,12	3,12	6,25	3,12	=0,025	0,20
2	1,56	0,78	1,56	3,12	6,25	1,56	=0,013	0,10
3	6,25	3,12	1,56	1,56	6,25	3,12	0,2	0,78
4	0,78	0,4	0,4	0,4	1,56	0,4	0,025	0,40
5 ·	0,78	0,78	< 0,05	£ 0,05	0,1	0,1	6,25	1,56
6	1,56	1,56	£0,05	£0,05	0,2	£0,05	1,56	1,56
7	1,56	0,78	£0,05	£ 0,05	0,2	0,1	3,13	1,56
8	6,25	6,25	0,1	0,1	0,4	0,2	3,13	1,56
9	6,25	25	1,56	3,12	3,12	1,56	6,25	3,12
10	12,5	25	0,39	0,39	1,56	0,78	>400	100
11	0,2	1,56	0,4	0,4	1,56	0,4	>400	>400
12	0,2	6,25	0,78	0,78	3,12	0,78	>400	>400
,3	OJ	6,25	0,78	0,78	6,25	1,56	>400	>400
14	6,25	1,56	0,1	0,2	0,4	0,1	800	>800
15	12,5	0,1	=0,05	=0,05	0,78	0,1	1,56	3,12
16	0,2	1,56	0,4	0,4	1,56	0,4	>400	>400
17	0,78	6,25	0,78	1,56	6,25	1 ,56	>400	>400

242226 pokračování tabulky

Testovaná součenina bakterie	K	L	T	W	Z	AA	cefa- loridin	cefa- zorin
18	6,25	50	0,20	0,4	1,56	0,39	50	400
19	200	200	0,39	0,39	3,13	0,78	>400	>400
20	6,25	50	0,20	0,4	0,78	0,20	>400	400

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

Claims (4)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   1. Způsob přípravy 7-(alfa-substituovaných benzoylureido)fenylacetamidoderivátů oefalosporinu obecného vzorce I, (I) kde je

   R₁ atom vodíku nebo alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, R₂ atom vodíku nebo hydroxyskupina,

   Rj hydroxyskupina, n číslo 2 nebo 3, přičemž alespoň dva ze substituentů R^ jsou vázané na sousední atomy uhlíku a poloha substituentu R^ je vybrána z poloh 3 až 5, jestliže R, je alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, a s poloh 2 až 6 jestliže R^ je atom vodíku,

   R^ je atom vodíku nebo methoxylskupina a

   Řg je pětičlenný heterocyklický kruh mahrnující jeden nebo více atomů dusíku a popřípadě atom síry, popřípadě substituovaný alkylem s 1 až 4 atomy uhlíku, a jejich farmaceuticky vhodných solí, vyznačený tím, že se 3-acetoxymethylcefalosporin obecného vzorce II, kde R₁, R₂, R-j, R^ a n mají význam uvedený výáe a Y je atom vodíku nebo chránící skupina, nechá reagovat s thiolem nebo jeho solí obecného vzorce III,

   HS-Rg (III) kde Rg má význam uvedený výáe, a jestliže Y je chránící skupina, převede se Y na atom vodíku a popřípadě se získané sloučenina vzorce I převede na farmaceuticky vhodnou sůl.
2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se reakce provádí při teplotě 20 až 70 °C po dobu 5 až 6 hodin v rozpouštědle, vybraném ze skupiny zahrnující aceton, methanol, ethanol a tetrahydrofuran.
3. 3. Způsob podle bodů 1 a 2, pro přípravu 7-(alfa-substituovaných benzoylureido)fenylacetamidoderivátů cefalosporinu obecného vzorce 1, uvedeného v bodě 1, kde R,, Rg, R^ a n mají význam uvedený v bodě 1 a R^ je atom vodíku a Rg je triazol, thiadiazol, popřípadě substituovaný alkylem s 1 až 4 atomy uhlíku, a tetrazol substituovaný alkylem a I až 4 atomy uhlíku a jejich farmaceuticky vhodných sáli, vyznačený tím, že se 3-acetoxymethylcefalosporin obecného vzorce II, uvedeného v bodě 1, kde R,, Rg, Rj, Y a n mají význam uvedený v bodě 1 a R^ má výěe uvedený význam, nechá reagovat s thiolem nebo jeho solí obecného vzorce III, uvedeného v bodě t, kde Rg stá výěe uvedený význam, a jestliže Y je chrénicl skupina, převede se Y na atom vodíku a popřípadě se získané sloučenina vzorce I převede na farmaceuticky vhodnou sůl.
4. 4. Způsob podle bodů 1 a 2 pro přípravu 7-(alfa-substituovaných benzoylureido) fenylacetamidoderivátů cefalosporinu obecného vzorce I, uvedeného v bodě 1, kde R,, Rg, R^ a n mají význam uvedený v bodě 1 a Rj je atom vodíku a R6 je triazol, thiadiazol, popřípadě substituovaný alkylem s 1 až 4 atomy uhlíku, nebo tetrazol substituovaný alkylem a 1 až 4 atomy uhlíku, a jejich farmaceuticky vhodných solí, vyznačený tím, že se 3-acetoxymethylcefalosporin obecného vzorce II, uvedeného v bodě 1ji kde R₁, Rg, R^, Y a n mají význam uvedený v bodě 1 a R^ má výěe uvedený význam, nechá reagovat s thiolem nebo jeho solí obecné ho vzorce III, uvedeného v bodě 1, kde Rg má výěe uvedený význam, a jestliže Y je chránící skupina, převede se Y na atom vodíku a popřípadě se získaná sloučenina vzorce I převede na farmaceuticky vhodnou sůl.